CN114621123B - 多孔颗粒羟基蛋氨酸钙及其在免疫细胞无血清培养上的应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了多孔颗粒羟基蛋氨酸钙及其在免疫细胞无血清培养上的应用，得到多孔颗粒羟基蛋氨酸钙，多孔颗粒的粒径为400‑800um，多孔颗粒的孔隙率为50‑60％。所述多孔颗粒羟基蛋氨酸钙在免疫细胞无血清培养上的应用，可以提高临床免疫细胞培养的有效性。

Description

多孔颗粒羟基蛋氨酸钙及其在免疫细胞无血清培养上的应用
技术领域
本发明属于细胞生物学技术领域，具体涉及多孔颗粒羟基蛋氨酸钙及其在免疫细胞无血清培养上的应用。
背景技术
随着免疫细胞生物学及免疫分子生物学的高速发展，体细胞免疫治疗已成为肿瘤患者放、化疗后辅助治疗的重要手段之一，其对于促进患者免疫系统的重建、消除残留病灶及骨髓净化都具有良好效果。体细胞免疫治疗，是向肿瘤患者输入具有抗肿瘤活性的免疫细胞，直接杀伤肿瘤或激发机体抗肿瘤免疫反应，从而达到治疗效果的生物疗法。体外操作包括细胞在体外的传代、扩增、修饰、筛选及经药物或其他能改变细胞生物学行为的处理。经体外操作后的体细胞可用于肿瘤治疗，也可用于肿瘤预防。自体细胞免疫疗法，主要包括树突状细胞疫苗(DC)、CIK、DC刺激的CIK细胞(DCCIK)、自然杀伤细胞(NK)、NKT细胞等。具体方法是：通过提取患者体内不成熟的免疫细胞(采血)，在实验室中进行活化培养使其具有高效识别和杀灭肿瘤细胞的能力后，再回输患者体内。患者只需配合做采血与回输血两个步骤。
目前，血清仍是免疫细胞培养中最基本的的添加物，尤其是在细胞生长状况不良时，常常会先使用有血清的培养液进行培养，待细胞生长旺盛以后，再换成无血清培养液。无血清培养基和试剂被广泛的应用于培养哺乳动物和无脊椎动物细胞，以制备单克隆抗体，病毒抗原和重组蛋白等。然而，由于动物血清中含有动物成分，且成分复杂，含有很多对细胞有利的成分，同时也含有对细胞有害的成分，如多胺氧化酶等，若其用于临床细胞治疗体系中，可能会导致一些潜在的风险，而且在大规模生产中，血清来源越来越困难且价格昂贵，这些都是构成动物细胞培养对生产成本的主要部分之一。
羟基蛋氨酸又名蛋氨酸羟基类似物，是一种酸性很强的深褐色粘稠液体有机酸，含水量约为12％，有硫化物气味，易溶于水，相对密度为1.22-1.23(120℃)，pH值为1-2，存在20％的二聚体和3％的多聚体。目前，已有羟基蛋氨酸钙的制备方法的研究，例如中国专利申请号201410556877.9一种多孔颗粒羟基蛋氨酸钙生产方法，是将液体蛋氨酸加温保持至80℃左右，备用，氢氧化钙粉末先投入带加温和搅拌装置的反应罐内，边搅拌边慢慢加入温度80℃左右的液体蛋氨酸，60分钟加完，再继续搅拌10分钟，停机出料，配方不加水，不洗涤不烘干，不需后加工，成品冷却包装入库。但是这样的制备方法，由于羟基蛋氨酸中二聚体和多聚体的存在，制备羟基蛋氨酸钙时，氧化钙或氢氧化钙与羟基蛋氨酸开始时很难进行混合，反应也很难起来，但一旦两者发生反应，反应就会很剧烈，反应速度又很快，一方面会使反应容器内的压力迅速增加，且产生大量的热量，从而造成反应速度、压力和温度难以控制，而温度过高，产物羟基蛋氨酸钙会发生分解或焦化；另一方面，一部分物料(如氧化钙或氢氧化钙或中间产物等)极容易被包裹成大团或大块，无法充分参与反应，造成反应原料量相对不足，反应不充分，中间产物较多，产品纯度不高，从而影响产物得率和质量，而且物料被包裹成大团或大块后，里面的水份在干燥时很难蒸发出来，影响物料整体干燥，使物料干燥时间大大延长，导致整个生产时间比较长，影响了产量。
目前，使用最广泛的无血清培养基主要是LONZA的X VIVO无血清培养基和GIBCO的AIM无血清培养基，但是上述两种培养基均需在细胞培养前期补充自体血浆，否则培养免疫细胞时，难以达到临床的回输标准，且培养时间均较长。因此，研发安全有效的免疫细胞无血清培养基来提高临床免疫细胞培养的安全性及有效性，具有很好的市场前景。
发明内容
针对现有免疫细胞无血清培养基在临床免疫细胞培养的有效性不足，本发明提供了多孔颗粒羟基蛋氨酸钙及其在免疫细胞无血清培养上的应用，得到一种多孔颗粒状的羟基蛋氨酸钙，应用到免疫细胞无血清培养基，可以提高临床免疫细胞培养的有效性。
本发明的目的通过以下技术方案来实现：
一种多孔颗粒羟基蛋氨酸钙的制备方法，包括如下步骤：
1)将羟基蛋氨酸、碳酸钙和水混合于密闭容器中，再加入相当于水质量0.3-0.5％的甘油硬脂酸酯，进行高压反应，所述的羟基蛋氨酸与碳酸钙的摩尔比为2:(1.1-1.2)，水的添加量为羟基蛋氨酸和碳酸钙总质量的5-10％；高压反应的压力控制在0.3-0.7MPa，反应温度控制在110-150℃，反应时间为0.5-1.0h；
2)上步骤的高压反应完成后，将高压反应的密闭容器瞬间卸压，时间为1-3s；
3)上步骤的卸压后，将得到的物料进行真空干燥，得到多孔颗粒羟基蛋氨酸钙，多孔颗粒的粒径为400-800um，多孔颗粒的孔隙率为50-60％。
本发明中：
步骤1)中所述的羟基蛋氨酸与碳酸钙的摩尔比为2:(1.1-1.2)，碳酸钙过量，目的是促使羟基蛋氨酸酸反应更彻底，提高羟基蛋氨酸的利用率，降低羟基蛋氨酸钙的生产成本，同时，由于羟基蛋氨酸粘度高，碳酸钙适当过量也可降低产物的粘度。
步骤1)中所述水的添加量为羟基蛋氨酸和碳酸钙总质量的5-10％，优选水的添加量为羟基蛋氨酸和碳酸钙总质量的8％，加入适量水，一方面，降低反应物的粘度，有利反应物混合均匀，有利于提高产率，另一方面，在密闭容器中的反应提供足够的蒸汽压，有利于的介孔的形成；如果水的添加量过低，则混合效果降低，且不能提供足够的蒸汽，水的添加量过高，降低了反应物的浓度，会降低反应速度，而且，水量过多，产生的蒸汽多，不利于反应压力的控制，更不利于后续的瞬间卸压。
步骤1)中所述高压反应的压力控制在0.3-0.7MPa，控制适当的压力提高反应速度，同时，有利于容器中的水形成蒸汽并进入到产物颗粒中，压力太低，蒸汽不能顺利进入颗粒内部，压力太高，不利于形成颗粒，产物颗粒的粒径减少，降低了产物的性能，优选地，压力控制在0.3、0.4、0.5、0.6或0.7MPa。
步骤2)中所述将高压反应的密闭容器瞬间卸压，通过将密闭反应容器中压力瞬间卸除，使反应产物颗粒中的蒸汽瞬间冲出，由于是瞬间卸压，颗粒中中蒸汽位置没有被填充，形成介孔，从而得到多孔颗粒，如果卸压时间太长，颗粒中蒸汽不能瞬间溢出，随着反应容器中压力和温度缓慢降低，颗粒中孔洞结构坍塌，得不到多孔颗粒。
步骤3)所述的真空干燥，真空度为0.04-0.08MPa，温度为80-120℃，真空干燥时间为1-2h。
步骤3)所述的多孔颗粒羟基蛋氨酸钙，通过控制多孔颗粒的粒径为400-800um，提高产物颗粒的粒径，有利于提高产物流动性，减少产物粘壁性，同时，能有效降低生产和使用过程中粉尘量，提供干净的劳动环境；进一步优选地，所述粒径为400-600um。
本发明还涉及采用上述一种多孔颗粒羟基蛋氨酸钙的制备方法得到的多孔颗粒羟基蛋氨酸钙，多孔颗粒的粒径为400-800um，多孔颗粒的孔隙率为50-60％。
同时，本发明还涉及上述一种多孔颗粒羟基蛋氨酸钙在免疫细胞无血清培养上的应用。
与现有技术相比，本发明具有以下优点：
1、本发明所述的一种多孔颗粒羟基蛋氨酸钙的制备方法，通过将密闭反应容器中压力瞬间卸除，使反应产物颗粒中的蒸汽瞬间冲出，由于是瞬间卸压，颗粒中中蒸汽位置没有被填充，形成介孔，从而得到多孔颗粒，如果卸压时间太长，颗粒中蒸汽不能瞬间溢出，随着反应容器中压力和温度缓慢降低，颗粒中孔洞结构坍塌，得不到多孔颗粒。
2、本发明所述的一种多孔颗粒羟基蛋氨酸钙的制备方法，通过在高压反应过程中加入甘油硬脂酸酯，会随着水形成蒸汽并进入到产物颗粒中，在后续瞬间卸压的过程中，甘油硬脂酸酯会进入到颗粒中，利用甘油硬脂酸酯在耐热性好、粘度高、耐水解好的特点，具有很强的乳化性能和特殊的稳定性，可以支撑产物颗粒介孔的形成，防止颗粒中孔洞结构坍塌，从而得到多孔颗粒。
3、本发明得到的的多孔颗粒羟基蛋氨酸钙，使羟基蛋氨酸钙产物与溶液的接触面积增加，促进了羟基蛋氨酸钙溶解速度，有效提高了羟基蛋氨酸钙的吸收利用率；但当孔隙率过高，产物的溶解速度过快，产物在短时间内被大量吸收，然而，有机体在短时间对羟基蛋氨酸钙的利用率有限，羟基蛋氨酸钙得不到利用而浪费，同时，给细胞造成了巨大负担。因此，保持一定孔隙率，通过控制多孔颗粒的孔隙率为50-60％适合在免疫细胞无血清培养上的应用。
附图说明
图1是本发明实施例1制备得到的羟基蛋氨酸钙颗粒的介孔的放大图；
图2是本发明实施例2制备得到的羟基蛋氨酸钙颗粒的介孔的放大图。
具体实施方式
以下通过实施例进一步详细描述本发明，但这些实施例不应认为是对本发明的限制。
实施例1：
一种多孔颗粒羟基蛋氨酸钙的制备方法，包括如下步骤：
1)将羟基蛋氨酸、碳酸钙和水混合于密闭容器中，再加入相当于水质量0.4％的甘油硬脂酸酯，进行高压反应，所述的羟基蛋氨酸与碳酸钙的摩尔比为2:1.1，水的添加量为羟基蛋氨酸和碳酸钙总质量的8％；高压反应的压力控制在0.5MPa，反应温度控制在120℃，反应时间为1.0h；
2)上步骤的高压反应完成后，将高压反应的密闭容器瞬间卸压，时间为1-3s；
3)上步骤的卸压后，将得到的物料进行真空干燥，真空度为0.6MPa，温度为100℃，真空干燥时间为1.5h，得到多孔颗粒羟基蛋氨酸钙，多孔颗粒的粒径为400-600um，多孔颗粒的孔隙率为60.53％。
实施例2：
一种多孔颗粒羟基蛋氨酸钙的制备方法，包括如下步骤：
1)将羟基蛋氨酸、碳酸钙和水混合于密闭容器中，再加入相当于水质量0.3％的甘油硬脂酸酯，进行高压反应，所述的羟基蛋氨酸与碳酸钙的摩尔比为2:1.2，水的添加量为羟基蛋氨酸和碳酸钙总质量的5％；高压反应的压力控制在0.3MPa，反应温度控制在110℃，反应时间为1.0h；
2)上步骤的高压反应完成后，将高压反应的密闭容器瞬间卸压，时间为1-3s；
3)上步骤的卸压后，将得到的物料进行真空干燥，真空度为0.04MPa，温度为120℃，真空干燥时间为2h，得到多孔颗粒羟基蛋氨酸钙，多孔颗粒的粒径为400-600um，多孔颗粒的孔隙率为58.82％。
实施例3：
一种多孔颗粒羟基蛋氨酸钙的制备方法，包括如下步骤：
1)将羟基蛋氨酸、碳酸钙和水混合于密闭容器中，再加入相当于水质量0.5％的甘油硬脂酸酯，进行高压反应，所述的羟基蛋氨酸与碳酸钙的摩尔比为2:1.15，水的添加量为羟基蛋氨酸和碳酸钙总质量的10％；高压反应的压力控制在0.7MPa，反应温度控制在150℃，反应时间为0.5h；
2)上步骤的高压反应完成后，将高压反应的密闭容器瞬间卸压，时间为1-3s；
3)上步骤的卸压后，将得到的物料进行真空干燥，真空度为0.08MPa，温度为80℃，真空干燥时间为1h，得到多孔颗粒羟基蛋氨酸钙，多孔颗粒的粒径为400-800um，多孔颗粒的孔隙率为55.19％。
实施例4：
一种多孔颗粒羟基蛋氨酸钙的制备方法，包括如下步骤：
1)将羟基蛋氨酸、碳酸钙和水混合于密闭容器中，再加入相当于水质量0.45％的甘油硬脂酸酯，进行高压反应，所述的羟基蛋氨酸与碳酸钙的摩尔比为2:1.1，水的添加量为羟基蛋氨酸和碳酸钙总质量的6％；高压反应的压力控制在0.4MPa，反应温度控制在130℃，反应时间为0.6h；
2)上步骤的高压反应完成后，将高压反应的密闭容器瞬间卸压，时间为1-3s；
3)上步骤的卸压后，将得到的物料进行真空干燥，真空度为0.05MPa，温度为90℃，真空干燥时间为1.2h，得到多孔颗粒羟基蛋氨酸钙，多孔颗粒的粒径为400-800um，多孔颗粒的孔隙率为50.89％。
对比例1：
现有常规羟基蛋氨酸钙(粒径400-700um的实心颗粒)。
对比例2：
和实施例1相比，步骤1)中没有加入甘油硬脂酸酯，其他同实施例1。
实验例：免疫细胞大规模培养
1)含有实施例1的多孔颗粒羟基蛋氨酸钙的无血清培养基，以实施例1的多孔颗粒羟基蛋氨酸钙替换对比例3的无血清培养基中的四水二硝酸钙和L-甲硫氨酸，其他同对比例3。
2)含有对比例1的常规羟基蛋氨酸钙的无血清培养基，以对比例1的常规羟基蛋氨酸钙替换对比例3的无血清培养基中的四水二硝酸钙，其他同对比例3。
3)含有对比例2的羟基蛋氨酸钙的无血清培养基，以对比例2的羟基蛋氨酸钙替换对比例3的无血清培养基中的四水二硝酸钙，其他同对比例3。
4)对比例3的无血清培养基，以RPMI 1640培养基为基础，还含有添加成分，所述添加成分的浓度为：羟乙基哌嗪硫磺酸3/L、酚红·钠0.0001g/L、L-谷氨酸盐0.1g/L、碳酸氢钠0.5g/L。所述添加成分还包括胰岛素0.001g/L、转铁蛋白0.001g/L、硒0.0001g/L、人血白蛋白2g/L、白介素-240IU/mL；
所述RPMI 1640培养基包括无机盐、氨基酸、维生素、糖；
所述无机盐的浓度为：
四水二硝酸钙0.01g/L、 无水硫酸镁0.04g/L、 氯化钾0.04g/L、
碳酸氢钠0.2g/L、 氯化钠2g/L、 磷酸氢二钠0.08g/L；
所述氨基酸的浓度为：
L-精氨酸0.02g/L、 L-缬氨酸0.002g/L、 L-天冬氨酸0.002g/L、
L-天冬酰胺0.005g/L、 L-谷氨酸0.002g/L、 L-半胱氨酸盐酸0.006g/L、
L-谷氨酰胺0.03g/L、 L-组氨酸0.0015g/L、 L-苯丙氨酸0.0015g/L、
L-异亮氨酸0.005g/L、 L-羟脯氨酸0.002g/L、 L-赖氨酸盐酸0.004g/L、
L-亮氨酸0.005g/L、 L-脯氨酸0.002g/L、 L-甲硫氨酸0.0015g/L、
L-丝氨酸0.003g/L、 甘氨酸0.001g/L、 L-酪氨酸二钠盐0.002g/L、
L-色氨酸0.0005g/L、 L-苏氨酸0.002g/L；
所述维生素的浓度为：
p-氨基苯酸0.0001g/L、 D-生物素0.00002g/L、 氯化胆碱0.0003g/L、
还原性谷胱甘肽0.0001g/L、 叶酸0.0001g/L、 肌醇0.0035g/L、
D-泛酸钙0.000025g/L、 烟酰胺0.0001g/L、 盐酸吡哆醇0.0001g/L、
维生素B12 0.0000005g/L、 核黄素0.00002g/L、 盐酸硫胺素0.01g/L；
所述糖的浓度为：D-葡萄糖0.2g/L。
制备该所述适用于免疫细胞大规模培养的无血清培养基的方法，包括如下步骤：
1)称取无机盐、氨基酸、维生素、糖以及添加成分的含量；
2)将无机盐、氨基酸、维生素、糖以及添加成分溶解在水中，优选三蒸水；
3)用水将无机盐、氨基酸、维生素、糖以及添加成分的溶解混合物定容到1L，即制得无血清培养基。
1：NKT细胞培养：
对比含有实施例1的多孔颗粒羟基蛋氨酸钙的无血清培养基、含有对比例1的常规羟基蛋氨酸钙的无血清培养基、含有对比例2的羟基蛋氨酸钙的无血清培养基、对比例3的无血清培养基。
(1)采集健康人30ml全血，将外周血转移到50mL离心管中，450-550g离心，取血浆；
(2)将下层血细胞用生理盐水稀释，混合均匀后转移到已加有淋巴分离液的sepmate离心管(从STEM CELL公司采购)中，600-800g离心；
(3)将离心后的上层液体倒入另一干净的离心管中，采用普通的RPMI1640培养基(GIBCO)洗涤两次，即得到外周血单个核细胞(PBMC)悬液；
(4)将上述得到的细胞悬液分为4组(下表1)，分别按照40:1、20:1、10:1的接种密度接种于培养瓶中，添加10-100IU/mL IL-2、10-100ng/ml IL-21和10-100ng/ml OKT-3，培养NKT细胞，分别采用含有实施例1、对比例1、对比例2和对比例3的无血清培养基进行培养；
(5)定期对细胞进行计数，补液，补加细胞因子，并进行观察，培养14天后，将NKT细胞收集后，进行流式检测和杀伤活性检测，杀伤活性结果见下表1；
表1几种无血清培养基培养14天后NKT细胞的杀伤活性检测结果
组别 40:1 20:1 10:1
NKT 1(实施例1) 63.1％ 51.3％ 34.1％
NKT 2(对比例1) 58.2％ 46.1％ 29.0％
NKT 3(对比例2) 58.6％ 47.5％ 31.4％
NKT 4(对比例3) 58.0％ 46.1％ 29.2％
根据以上实验结果可知，采用本发明实施例1配制的无血清培养基培养的NKT细胞，其增殖能力更强，标志表示物表达率更高，杀伤活性更好。
2：CIK细胞培养：
对比含有实施例1的多孔颗粒羟基蛋氨酸钙的无血清培养基、含有对比例1的常规羟基蛋氨酸钙的无血清培养基、含有对比例2的羟基蛋氨酸钙的无血清培养基、对比例3的无血清培养基。
(1)采集健康人30ml全血，将外周血转移到50mL离心管中，450-550g离心，取血浆；
(2)将下层血细胞用生理盐水稀释，混合均匀后转移到已加有淋巴分离液的sepmate离心管(从STEM CELL公司采购)中，600-800g离心；
(3)将离心后的上层液体倒入另一干净的离心管中，采用普通的RPMI1640培养基(GIBCO)洗涤两次，即得到外周血单个核细胞(PBMC)悬液；
(4)将上述得到的细胞悬液分为4组(下表1)，分别按照40:1、20:1、10:1的接种密度接种于培养瓶中，添加10-100IU/mL IL-2、10-100ng/ml IL-21和10-100ng/ml OKT-3，培养CIK细胞，分别采用含有实施例1、对比例1、对比例2和对比例3的无血清培养基进行培养；
(5)定期对细胞进行计数，补液，补加细胞因子，并进行观察，培养14天后，将CIK细胞收集后，进行流式检测和杀伤活性检测，杀伤活性结果见下表2；
表2几种无血清培养基培养14天后CIK细胞的杀伤活性检测结果
组别 40:1 20:1 10:1
CIK 1(实施例1) 65.3％ 45.7％ 38.2％
CIK 2(对比例1) 61.2％ 38.3％ 31.3％
CIK 3(对比例2) 62.6％ 42.5％ 34.0％
CIK 4(对比例3) 59.9％ 28.6％ 19.9％
根据以上实验结果可知，采用本发明实施例1配制的无血清培养基培养的CIK细胞，其增殖能力更强，标志表示物表达率更高，杀伤活性更好。
3：NK细胞培养：
对比含有实施例1的多孔颗粒羟基蛋氨酸钙的无血清培养基、含有对比例1的常规羟基蛋氨酸钙的无血清培养基、含有对比例2的羟基蛋氨酸钙的无血清培养基、对比例3的无血清培养基。
(1)采集健康人45ml全血，将外周血转移到50mL离心管中，450-550g离心，取血浆；
(2)将下层血细胞用生理盐水稀释，混合均匀后转移到已加有淋巴分离液的sepmate离心管(从STEM CELL公司采购)中，600-800g离心；
(3)将离心后的上层液体倒入另一干净的离心管中，采用普通的RPMI1640培养基(GIBCO)洗涤两次，即得到外周血单个核细胞(PBMC)悬液；
(4)采用NK分选试剂盒(购至STEM CELL公司)将NK细胞从上述PBMC悬液中分选出来；
(5)将上述得到的细胞悬液分为4组(下表3)，分别按照40:1、20:1、10:1的接种密度接种于培养瓶中，添加10-100IU/mL IL-2、10-100ng/ml IL-21和10-100ng/ml OKT-3，培养CIK细胞，分别采用含有实施例1、对比例1、对比例2和对比例3的无血清培养基进行培养；
(6)定期对细胞进行计数，补液，补加细胞因子，并进行观察，培养14天后，将NK细胞收集后，进行流式检测和杀伤活性检测，杀伤活性结果见下表3；
表3几种无血清培养基培养14天后CIK细胞的杀伤活性检测结果
组别 40:1 20:1 10:1
CIK 1(实施例1) 98.3％ 75.4％ 66.6％
CIK 2(对比例1) 96.4％ 73.8％ 61.0％
CIK 3(对比例2) 97.5％ 72.2％ 62.9％
CIK 4(对比例3) 97.5％ 68.0％ 58.1％
根据以上实验结果可知，采用本发明实施例1配制的无血清培养基培养的NK细胞，其增殖能力更强，标志表示物表达率更高，杀伤活性更好。
结果：
1、通过实施例1和对比例1的比较，说明本发明得到的羟基蛋氨酸钙，是多孔颗粒羟基蛋氨酸钙，在应用于免疫细胞大规模培养时，使羟基蛋氨酸钙产物与溶液的接触面积增加，促进了羟基蛋氨酸钙溶解速度，有效提高了羟基蛋氨酸钙的吸收利用率，配制的无血清培养基培养的NKT细胞、CIK细胞、NK细胞，其增殖能力更强，标志表示物表达率更高，杀伤活性更好。
2、通过实施例1和对比例2的比较，说明本发明在制备羟基蛋氨酸钙的过程中，通过在高压反应过程中加入甘油硬脂酸酯，会随着水形成蒸汽并进入到产物颗粒中，在后续瞬间卸压的过程中，甘油硬脂酸酯会进入到颗粒中，利用甘油硬脂酸酯在耐热性好、粘度高、耐水解好的特点，具有很强的乳化性能和特殊的稳定性，可以支撑产物颗粒介孔的形成，防止颗粒中孔洞结构坍塌，从而得到多孔颗粒，将得到羟基蛋氨酸钙作为原料应用于无血清培养基培养的NKT细胞、CIK细胞、NK细胞，其增殖能力更强，标志表示物表达率更高，杀伤活性更好。
通过实施例和对比例的基本性能的比较，说明实施例的制备方法明显优于对比例。

Claims (5)

1.一种多孔颗粒羟基蛋氨酸钙的制备方法，其特征在于：包括如下步骤：
1)将羟基蛋氨酸、碳酸钙和水混合于密闭容器中，再加入相当于水质量0.3-0.5％的甘油硬脂酸酯，进行高压反应，所述的羟基蛋氨酸与碳酸钙的摩尔比为2:(1.1-1.2)，水的添加量为羟基蛋氨酸和碳酸钙总质量的5-10％；高压反应的压力控制在0.3-0.7MPa，反应温度控制在110-150℃，反应时间为0.5-1.0h；
2)上步骤的高压反应完成后，将高压反应的密闭容器瞬间卸压，时间为1-3s；
3)上步骤的卸压后，将得到的物料进行真空干燥，得到多孔颗粒羟基蛋氨酸钙，多孔颗粒的粒径为400-800um，多孔颗粒的孔隙率为50-60％。
2.根据权利要求1所述的一种多孔颗粒羟基蛋氨酸钙的制备方法，其特征在于：步骤1)中所述水的添加量为羟基蛋氨酸和碳酸钙总质量的8％。
3.根据权利要求1所述的一种多孔颗粒羟基蛋氨酸钙的制备方法，其特征在于：步骤1)中所述高压反应，压力控制在0.3、0.4、0.5、0.6或0.7MPa。
4.根据权利要求1所述的一种多孔颗粒羟基蛋氨酸钙的制备方法，其特征在于：步骤3)所述的真空干燥，真空度为0.04-0.08MPa，温度为80-120℃，真空干燥时间为1-2h。
5.根据权利要求1所述的一种多孔颗粒羟基蛋氨酸钙的制备方法，其特征在于：步骤3)所述的多孔颗粒羟基蛋氨酸钙，粒径为400-600um。
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