CN114609263A

CN114609263A - 一种(r)-2,4-二碘-3-甲基-1-烯及其对映异构体的检测方法

Info

Publication number: CN114609263A
Application number: CN202111446686.3A
Authority: CN
Inventors: 郭辉; 罗林; 张伟伟; 邹晓东; 祁智
Original assignee: Suzhou Zhengji Pharmaceutical Co ltd
Current assignee: Suzhou Zhengji Pharmaceutical Co ltd
Priority date: 2021-11-30
Filing date: 2021-11-30
Publication date: 2022-06-10

Abstract

本发明公开了一种（R）‑2,4‑二碘‑3‑甲基‑1‑烯及其对映异构体的检测方法，属于分析化学领域，使用衍生化试剂进行柱前衍生化，采用硅胶表面涂敷有纤维素‑三（4‑甲基苯甲酸酯）为填充剂的色谱柱，以乙腈‑甲醇‑水为流动相，通过本发明方法能实现（R）‑2,4‑二碘‑3‑甲基‑1‑烯及其对映异构体测定无干扰，且检测灵敏度高，结果准确、可靠，分析时间短，为（R）‑2,4‑二碘‑3‑甲基‑1‑烯的对映异构体测定的质量研究提供了方便可靠的参考方法。

Description

一种(R)-2,4-二碘-3-甲基-1-烯及其对映异构体的检测方法

技术领域

本发明属于分析化学领域，具体涉及采用反相高效液相色谱法进行(R)-2，4- 二碘-3-甲基-1-烯对映异构体测定的分析方法。

背景技术

(R)-2，4-二碘-3-甲基-1-烯的化学名称为：(R)-2，4-二碘-3-甲基-1-烯；分子式为：C₅H₈I₂；分子量为：321.93；CAS号为481048-22-0：结构式如下所示：

(R)-2，4-二碘-3-甲基-1-烯

(R)-2，4-二碘-3-甲基-1-烯存在对映异构体杂质

其对映异构体：(S)-2，4-二碘-3-甲基-1-烯，分子式为C₅H₈I₂，分子量为321.93，结构式如下所示：

(S)-2，4-二碘-3-甲基-1-烯

(R)-2，4-二碘-3-甲基-1-烯及其对映异构体，结构性质相近，分子量小，常规的分析手段不能对两者进行有效分离，现有技术中也未见对分离检测(R)-2，4- 二碘-3-甲基-1-烯及其对映异构体的任何报道。

发明内容

为解决上述问题，本发明提供了一种可以拆分(R)-2，4-二碘-3-甲基-1-烯及其对映异构体的检测方法，使用苯酚或苯硫酚或取代的苯酚或取代的苯硫酚作为衍生试剂进行柱前衍生化，采用硅胶表面涂敷有纤维素-三(4-甲基苯甲酸酯) 为填充剂的色谱柱，以乙腈-甲醇-水为流动相。

所述的衍生试剂如下所示

R₁为甲基、甲氧基、甲硫基；R₂为苯基、甲氧基、氯或甲基，R₃为氢、氯或甲基；

使用如式I或如式II所示的衍生化试剂进行柱前衍生化，采用硅胶表面涂敷有纤维素-三(4-甲基苯甲酸酯)为填充剂的色谱柱，以乙腈-甲醇-水为流动相。

该检测方法具体包括以下步骤：

a、使用衍生试剂进行柱前衍生方式制备系统测试液；

b、采用反相高效液相色谱对系统测试液进行检测，具体检测条件如下：

色谱柱固定相：用硅胶表面涂敷有纤维素-三(4-甲基苯甲酸酯)为填充剂；所述流动相为乙腈-甲醇-水。

进一步的，衍生试剂选自R₂为氢，R₃为苯基、甲氧基、氯或甲基；R₃为氢， R₂为甲氧基、苯基；R₂为甲基，R₃为氯。

进一步的，衍生试剂选自邻甲苯硫酚、4-苯基苯酚、3-甲基苯硫酚、4-甲硫基苯硫酚、对甲氧基苯酚、对甲基苯硫酚、4-氯-2-甲基苯酚、2-甲氧基苯硫酚，优选对甲苯硫酚；

进一步的，步骤a制备系统测试液还加入碱试剂，优选碳酸钾、碳酸镧、氢氧化钠、氢氧化钾，更优选碳酸钾；

进一步的，步骤a制备系统测试液具体步骤：取(R)-2，4-二碘-3-甲基-1-烯与(S)-2，4-二碘-3-甲基-1-烯各10mg，置10ml容量瓶，加入3～10倍当量(摩尔比)的衍生试剂，加入乙腈5ml超声30min，用水稀释至刻度线；

进一步的，步骤b中，乙腈-甲醇-水流动相比例为：20～50∶50～20∶10～40，优选40∶30∶30；

进一步的，步骤b中，采用等度洗脱，流动相：乙腈-甲醇-水(40∶30∶30)，运行时间：40min；

进一步的，步骤b中，所述水溶液为：10mmol/L磷酸二氢钾水溶液。

进一步的，步骤b中，色谱柱的规格：内径为4.0～5.0mm长度为100～250mm，填料粒径为2～10μm。优选的，步骤b中，色谱柱的规格：内径4.6mm，长度150mm，填料粒径为5μm。

进一步的，步骤b中，色谱柱以硅胶表面涂敷有纤维素-三(4-甲基苯甲酸酯) 为填充剂，优选CHIRALCEL OJ-RH。

进一步的，步骤b中，检测波长为250～265nm，优选258nm。

进一步的，步骤b中，进样量为1～100μl，优选10μl。

进一步的，步骤b中，流速为1～1.5ml/min，优选1.0ml/min。

进一步的，步骤b中，柱温为20～50℃，优选30℃。

进一步的，步骤b中，采用带二极管阵列检测器(DAD)；

衍生化分离原理：以使用对甲苯硫酚为例：

使用对甲苯硫酚对(R)-2，4-二碘-3-甲基-1-烯进行衍生处理，其产物为(R) -(3-碘-2-甲基-3-烯-1-基)(对甲苯基)硫醚，若存在对映体(S)-2，4-二碘-3- 甲基-1-烯则还会生成(S)-(3-碘-2-甲基-3-烯-1-基)(对甲苯基)硫醚，两者在本发明的条件下可实现有效分离。

有益效果：

本发明采用柱前衍生反向手性拆分体系，以对甲苯硫酚柱前衍生的反相手性高效液相色谱法进行(R)-2，4-二碘-3-甲基-1-烯及其对映异构体测定，能有效分离(R)-2，4-二碘-3-甲基-1-烯与(S)-2，4-二碘-3-甲基-1-烯，检测专属性、准确度和灵敏度高，并且运行时间短，不需要增加内标物进行测定，方便快捷。

附图说明

图1为实施例1中对样品溶液的检测图谱；

图2为实施例2中对样品溶液的检测图谱；

图3为实施例3中对样品溶液的检测图谱；

图4为实施例5中对系统测试液的检测图谱；

图5为实施例6中对样品的检测图谱；

具体实施方式

以下通过实施例对本发明的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。

本发明具体实施方式中使用的原料、设备均为已知产品，通过购买市售产品获得，应说明的是，下述说明仅是为了解释本发明，并不对其内容进行限定。

下述实施例中使用的主要仪器有：高效液相色谱仪(型号：Agilent 1100，生产厂家：Agilent)，电子天平(型号：MSA125P-1CE-DU，生产厂家：赛多利斯)

下述实施例中使用的主要试剂有：对甲苯硫酚(阿拉丁)、色谱纯乙腈(CINC)、色谱纯甲醇(CINC)、分析纯碳酸钾(国药)、分析纯磷酸二氢钾(国药)、超纯水 (娃哈哈)。

实施例1

制备样品溶液：取(R)-2，4-二碘-3-甲基-1-烯20mg、(S)-2，4-二碘-3-甲基 -1-烯20mg，置10ml容量瓶，加入甲醇5ml溶解，用甲醇稀释至刻度线；

采用正相高效液相色谱进行检测，具体条件：

色谱柱：色谱柱型号：CHIRALCEL AD-H、OH-H、IC等色谱柱；色谱柱的规格：内径为4.6mm，长度为150mm，填料粒径为5μm；

流动相：正己烷-异丙醇(70∶30)；

采用等度洗脱，运行时间20min；

检测波长：210nm；

柱温：30℃；

流速：1.0ml/min；

进样量：10μl；

检测结果见附图1，所选择的三根正相手性色谱柱为实验室常用手性拆分柱，从色谱图中可以看出，常规正相手性色谱柱对(R)-2，4-二碘-3-甲基-1-烯与(S) -2，4-二碘-3-甲基-1-烯完全没有构型选择差异。

附图1是采用CHIRALCEL AY-RH色谱柱，色谱柱的规格：内径为4.6mm，长度为150mm，填料粒径为5μm；(R)-2，4-二碘-3-甲基-1-烯与(S)-2，4-二碘-3- 甲基-1-烯未分离，其他的色谱柱检测出来的结果也是未能完全分离。

实施例2

采用正相高效液相色谱进行检测，具体条件：

色谱柱：色谱柱型号：CHIRALCEL AY-RH；色谱柱的规格：内径为4.6mm，长度为150mm，填料粒径为5μm；

流动相：乙腈-水(60∶40)；

采用等度洗脱，运行时间60min；

检测波长：210nm；

柱温：30℃；

流速：1.0ml/min；

进样量：10μl；

检测结果见附图2，所选择的反相手性色谱柱对(R)-2，4-二碘-3-甲基-1-烯与(S)-2，4-二碘-3-甲基-1-烯完全没有构型选择差异。

实施例3

采用气相色谱进行检测，具体条件：

色谱柱：色谱柱型号：HP-CHIRAK-20β与Sigma-G-TA色谱柱；

进样口温度：200℃；

柱压：20bar；

柱温：220℃；

FID：240℃；

进样量：1μl；

检测结果见附图3，所选择的两根气相手性色谱柱对(R)-2，4-二碘-3-甲基-1- 烯与(S)-2，4-二碘-3-甲基-1-烯完全没有构型选择差异。

附图3是采用HP-CHIRAK-20β色谱柱没有完全分离(R)-2，4-二碘-3-甲基-1- 烯与(S)-2，4-二碘-3-甲基-1-烯，其他的色谱柱检测出来的结果也是未能完全分离。

实施例4氢氧化钠为衍生试剂

制备样品溶液：取(R)-2，4-二碘-3-甲基-1-烯20mg置10ml容量瓶，加入 1mol/L的氢氧化钠5ml溶解，放置30分钟；以期获得引入羟基后的产物。结构式为：

30分钟后对衍生后样品进行检测，结果显示衍生失败，此反应未能进行。此后又进行加热操作，均未得到理想产物。

实施例5对甲苯硫酚为衍生试剂

制备系统测试液：取(R)-2，4-二碘-3-甲基-1-烯与(S)-2，4-二碘-3-甲基-1- 烯各10mg、对甲苯硫酚30mg、碳酸钾50mg，置10ml容量瓶，加入乙腈5ml 超声30min，用水稀释至刻度线；

制备定位溶液：取(R)-2，4-二碘-3-甲基-1-烯与(S)-2，4-二碘-3-甲基-1-烯各10mg，分别置两个容量瓶中，分别加入对甲苯硫酚30mg、碳酸钾50mg，加入乙腈5ml超声30min，用水稀释至刻度线，作为(R)-2，4-二碘-3-甲基-1-烯与 (S)-2，4-二碘-3-甲基-1-烯；

灵敏度溶液：取系统测试液，用水不断稀释，至信噪比约为10时停止稀释。

采用反相高效液相色谱法进行检测，具体条件如下：

色谱柱：色谱柱型号：CHIRALCEL OJ-RH；色谱柱的规格：内径为4.6mm，长度为150mm，填料粒径为5μm；

流动相：乙腈-甲醇-水(40∶30∶30)；

采用等度洗脱，运行时间40min；

检测波长：258nm；

柱温：30℃；

流速：1.0ml/min；

进样量：10μl；

检测结果见附图4，(R)-2，4-二碘-3-甲基-1-烯与(S)-2，4-二碘-3-甲基-1-烯能够完全分离。专属性、分离度及灵敏度结果见表1和表2。

表1：(R)-2，4-二碘-3-甲基-1-烯及其对映异构体检测的专属性、分离度

表2：(R)-2，4-二碘-3-甲基-1-烯及其对映异构体检测的灵敏度

结果表明，本方法各主要峰不受其他峰干扰，各峰的分离度大于1.5，专属性及分离度良好。定量限浓度约为0.01μg/ml，为限度浓度(灵敏度溶液浓度除以供试品溶液浓度)的0.1％，灵敏度较高。

实施例6对甲苯硫酚为衍生试剂

制备样品溶液：取(R)-2，4-二碘-3-甲基-1-烯20mg、对甲苯硫酚30mg、碳酸钾50mg，置10ml容量瓶，加入乙腈5ml超声30min，用水稀释至刻度线；

采用反相高效液相色谱进行检测，具体条件：

色谱柱：色谱柱型号：CHIRALCEL OJ-RH；色谱柱的规格：内径为4.6mm，

长度为150mm，填料粒径为5μm；

流动相：乙腈-甲醇-水(40∶30∶30)；

采用等度洗脱，运行时间40min；

检测波长：258nm；

柱温：30℃；

流速：1.0ml/min；

进样量：10μl；

检测结果见附图5，本方法能有效检测出(R)-2，4-二碘-3-甲基-1-烯中含有的少量(S)-2，4-二碘-3-甲基-1-烯，且能够完全分离。

Claims

1.一种(R)-2，4-二碘-3-甲基-1-烯及其对映异构体的检测方法，其特征在于，

R₁为甲基、甲氧基、甲硫基；R₂为氢、苯基、甲氧基、氯或甲基，R₃为氢、氯或甲基；

2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，当R₂为氢，R₃为苯基、甲氧基、氯或甲基；R₃为氢，R₂为甲氧基、苯基；R₂为甲基，R₃为氯。

3.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，柱前衍生试剂选自邻甲苯硫酚、对甲基苯硫酚、3-甲基苯硫酚、4-甲硫基苯硫酚、2-甲氧基苯硫酚、对甲氧基苯酚、4-氯-2-甲基苯酚、4-苯基苯酚。

4.根据权利要求1-3任意一项所述的检测方法，其特征在于，所述的衍生化试剂还包括碱溶液。

5.根据权利要求4所述的检测方法，其特征在于，所述的碱溶液为碳酸钾、碳酸镧、氢氧化钠、氢氧化钾。

6.根据权利要求1或2所述的检测方法，其特征在于，流动相乙腈-甲醇-水的比例为20～50∶50～20∶10～40。

7.根据权利要求1或2所述的检测方法，其特征在于，流动相所述水溶液为磷酸二氢钾水溶液。

8.根据权利要求1或2所述的检测方法，其特征在于，磷酸二氢钾水溶液浓度为10～100mmol/L，采用等度洗脱，运行时间为40min。

9.根据权利要求1或2所述的检测方法，其特征在于，色谱柱柱温为20～50℃、进样量为1～100μl、检测波长为250～265nm、流速为1～1.5ml/ml；所述的色谱柱型号为CHIRALCELOJ-RH，色谱柱的规格：内径3.0～10.0mm，长度为100～250mm，填料粒径为2～10μm。

10.根据权利要求9所述的检测方法，其特征在于，所述的色谱柱柱温为30℃、进样量为10μl、检测波长为258nm、流速为1ml/ml；所述的色谱柱的规格：内径4.6mm，长度为150mm，填料粒径为5m。