CN114606162A

CN114606162A - 一种枯草芽孢杆菌及应用

Info

Publication number: CN114606162A
Application number: CN202210250497.7A
Authority: CN
Inventors: 王璋倩; 段玉桦; 高超
Original assignee: Wuhan Polytechnic University
Current assignee: Wuhan Polytechnic University
Priority date: 2022-03-10
Filing date: 2022-03-10
Publication date: 2022-06-10
Anticipated expiration: 2042-03-10
Also published as: CN114606162B

Abstract

本发明提供一种枯草芽孢杆菌及应用，所述枯草芽孢杆菌的分类命名为枯草芽孢杆菌菌株Bacillus subtilis T5，保藏号为CCTCC No:M 20211386，保藏时间为2021年11月08日。本发明提供的多功能枯草芽孢杆菌，通过发酵转化可产生纳米硒、硒多糖、淀粉酶以及生产抗氧化的代谢产物；同时，由于该枯草芽孢杆菌对肠道有很好的定植作用，也可应用制备改善肠道的制剂。

Description

一种枯草芽孢杆菌及应用

技术领域

本发明涉微生物领域，特别涉及一种枯草芽孢杆菌及应用。

背景技术

硒是生物体必需的一种重要微量元素，与机体正常生理功能的维持以及多种疾病的发生发展密切相关。一旦缺硒，就会引发许多症状，同时会影响基因的表达和正常生理代谢的紊乱；缺硒会使幼畜出现白肌病。现如今，部分地区的补硒主要手段仍是利用无机硒化合物制成补充剂，但是其利用率低和高剂量的毒副作用等弊端越来越被放大，因此需要改变补硒方式。而生物法制备的纳米硒和硒多糖，作为较为安全的硒源被广泛推广应用。益生菌作为一种无毒、无抗药性、无副作用、无残留且无污染的添加剂而受人们重视，将其广泛应用于肠道改善的制剂以便提高消化系统的消化等功能，然而，对于该类应用性益生菌需要产生较高活性的碳水消化酶，并同时对于肠道有良好的附着性时，才能达到较好的益生效果。抗氧化和自由基清除是迄今抗衰、抗癌等健康领域的热议话题，有关与抗氧化和抗自由基的产品开发日益受到重视。

微生物因为其安全性以及成本低廉，被广泛的应用于工业生产中，可多功能利用硒能源的菌株由于其较高的应用价值，更是作为重点研究方向。而现阶段已发现的硒转化利用菌株，由于其功能性的不够多样化，导致其应用受到限制。

发明内容

本发明的主要目的是提出一种枯草芽孢杆菌及应用，旨在提供一种多功能枯草芽孢杆菌，可同时生产纳米硒、将无机硒转化为硒多糖、可产生高活性的淀粉酶和抗氧化性代谢物，同时该枯草芽孢杆菌还具有良好的肠道附着性。

为达到上述目的，本发明提供一种枯草芽孢杆菌，所述枯草芽孢杆菌的分类命名为枯草芽孢杆菌菌株Bacillus subtilis T5，保藏号为CCTCC No:M 20211386，保藏时间为2021年11月08日。

可选地，所述枯草芽孢杆菌的16S rDNA序列如SEQ ID NO.1所示。

此外，本发明还提供一种制备纳米硒的方法，所述制备纳米硒的方法包括以下步骤：

以无机硒化合物为底物，将上述枯草芽孢杆菌接种于纳米硒培养基将所述无机硒化合物进行发酵转化，获得纳米硒。

此外，本发明还提供一种制备硒多糖的方法，所述制备硒多糖的方法包括以下步骤：以无机硒为底物，将上述枯草芽孢杆菌与硒源加入硒多糖培养基将所述硒源进行发酵转化，获得硒多糖。

此外，本发明还提供一种上述制备淀粉酶的方法，所述制备淀粉酶的方法包括：将上述枯草芽孢杆菌接种到培养基中进行发酵后，获得淀粉酶。

可选地，所述培养基包括淀粉。

可选地，所述培养基包括硒源。

此外，本发明还提供一种上述枯草芽孢杆菌在制备抗氧化和/或自由基清除制剂中的应用。

此外，本发明还提供一种上述枯草芽孢杆菌在制备改善肠道制剂中的应用。

此外，本发明还提供一种发酵液，所述发酵液由上述的枯草芽孢杆菌接种在培养基上发酵而得。

本发明提供的多功能枯草芽孢杆菌，通过发酵转化可产生纳米硒、硒多糖、淀粉酶以及生产抗氧化的代谢产物；同时，由于该枯草芽孢杆菌对肠道有很好的定植作用，对于开发改善肠道的制剂有很大的应用潜力。

附图说明

为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅为本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他相关的附图。

图1为单独分离出的菌落图；

图2为发育树的构建图；

图3为DNA条带检测图；

图4为实施例3T5菌株在制备纳米硒的状态电镜图；

图5为实施例8自由基清除测试实验图。

本发明目的的实现、功能特点及优点将结合实施例，参照附图做进一步说明。

具体实施方式

为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。显然，所描述的实施例仅仅是本发明的一部分实施例，而不是全部的实施例。

需要说明的是，实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。另外，全文中出现的“和/或”的含义，包括三个并列的方案，以“A和/或B”为例，包括A方案、或B方案、或A和B同时满足的方案。此外，各个实施例之间的技术方案可以相互结合，但是必须是以本领域普通技术人员能够实现为基础，当技术方案的结合出现相互矛盾或无法实现时应当认为这种技术方案的结合不存在，也不在本发明要求的保护范围之内。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

鉴于背景技术中提出的现有硒能源利用的菌株其功能不够多样化的技术问题，本发明提供一种枯草芽孢杆菌，所述枯草芽孢杆菌的分类命名为枯草芽孢杆菌菌株Bacillussubtilis T5，于2021年11月08日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏中心地点为武汉大学，保藏号为CCTCC No:M 20211386。

可选地，将上述枯草芽孢杆菌进行测序后其16S rDNA序列如SEQ ID NO.1所示。

此外，本发明还提供一种制备纳米硒的方法，所述制备纳米硒的方法包括：以无机硒化合物为底物，将上述枯草芽孢杆菌接种于纳米硒培养基将所述无机硒化合物进行发酵转化，获得纳米硒。

本发明通过将枯草芽孢杆菌和无机硒化合物加入培养基一起发酵，通过生物转化将硒源转化为纳米硒。

可选地，所述无机硒化合物包括亚硒酸盐、硒酸盐和单质硒中的至少一种。

需要说明的是，在为枯草芽孢杆菌提供碳氮源等营养物质的前提下不做限定，可选地，所述纳米硒培养基用LB液体培养基、营养肉汤培养基或其他含有碳氮源的培养基。一些实施例中，培养基采用LB液体培养基。

可选地，发酵时间为10小时～24小时。

将发酵时间控制在10小时～24小时，上述发酵时间符合T5菌株生长规律，保证菌株在生长对数期之后达到最佳状态。

可选地，将上述枯草芽孢杆菌及无机硒化合物加入纳米硒培养基进行发酵后，收集纳米硒发酵液。

采取上述进一步技术方案的有益效果在于：通过收集纳米硒发酵液，获得含纳米硒的悬浮液。

可选地，将所述纳米硒发酵液去除菌体和培养基杂质后，得到纳米硒分散液；往所述纳米硒分散液加入有机溶剂进行萃取，收集其析出物并干燥，得到所述纳米硒。通过上述处理方法，可以收集到纳米硒纯化物。

此外，本发明还提供一种制备硒多糖的方法，所述制备硒多糖的方法包括：以无机硒为底物，将上述枯草芽孢杆菌与所述无机硒加入硒多糖培养基将所述硒源进行发酵转化，获得硒多糖。本发明通过将枯草芽孢杆菌和无机硒加入硒多糖培养基一起发酵，通过生物转化将硒源转化硒多糖。

可选地，所述无机硒为含硒的无机物，例如亚硒酸盐、硒酸盐等中的至少一种。采取上述进一步技术方案的有益效果在于，可以将无机硒源利用，转化为无毒无害的硒多糖。

可选地，无机硒加入后，所述无机硒在整个发酵体系中的浓度为3mmol/L～6mmol/L。将无机硒的浓度控制在3mmol/L～6mmol/L可以进一步提高硒源转化成硒多糖的效率。

需要说明的是，在为枯草芽孢杆菌提供碳氮源等营养物质的前提下，可选地，所述培养基用LB液体培养基、营养肉汤培养基或其他含有碳氮源的培养基。一些是实施例中，培养基采用LB液体培养基。

可选地，发酵时间为10小时～24小时。

在一些实施例中，将上述枯草芽孢杆菌及无机硒加入硒多糖培养基进行发酵后，收集硒多糖发酵液，以此可得到含有硒多糖的原料。

在一些实施例中，将所述硒多糖发酵液中的蛋白质去除，得到所述硒多糖。在此前提下，可将硒多糖发酵液采用三氯乙酸和无水乙醇等蛋白质变性剂，将所述硒多糖发酵液中的蛋白质变性后再采用离心等物理方式将蛋白质去除。如要进一步提高硒多糖纯度，可采用透析方法进行进一步的提纯。其提纯方法根据纯度需要进行调节，具体不一一阐述。

此外，本发明还提供一种制备淀粉酶的方法，将上述枯草芽孢杆菌接种在培养基上，进行发酵后，得到所述淀粉酶。进一步，本发明通过将所述枯草芽孢杆菌接种在含淀粉的培养基上进行发酵，得到具有高活性的淀粉酶。

在为所述提供足够碳氮源的基础上对于培养基的不做限定，在一些实施例中，所述培养基包括可溶性淀粉、酵母、蛋白胨、MgSO₄.7H₂O、K₂HPO₄以及NaCl。

一般菌株在加入无机硒化合物时，其碳水利用率会降低，而本发明研究团队发现，在一些实施例中，在所述培养基中加入无机硒化合物时，枯草芽孢杆菌产淀粉酶的能力进一步提高。

此外，本发明还提供上述枯草芽孢杆菌在抗氧化功能制剂或在自由基清除制剂中的应用。经验证，枯草芽孢杆菌的代谢产物具有抗氧化功能，本发明中，通过将上述枯草芽孢杆菌发酵收集抗氧化代谢产物或直接进行加工成制剂进行在发酵环境进行抗氧化功能化的利用。

此外，本发明还提供上述枯草芽孢杆菌在改善肠道功能制剂中的应用。经验证，所述枯草芽孢杆菌在具有耐酸性、表面疏水活性以及自凝聚能力，符合附着在肠道的必要条件，由于枯草芽孢杆菌的代谢产物具有高活性的淀粉酶，因此能在改善肠道上发挥作用。在本发明中，通过收集上述枯草芽孢杆菌的代谢产物或直接加工成制剂直接进入肠道。

此外，本发明还提供一种发酵液，所述发酵液由上述枯草芽孢杆菌接种在培养基上发酵而得。

进一步，所述硒培养基用LB液体培养基、营养肉汤培养基或其他含有碳氮源的培养基。在一些实施例中，所述硒培养基用LB液体培养基。

通过将上述枯草芽孢杆菌接种于上述培养基，可以获得具备抗氧化性或清除自由基的发酵液。

可选地，所述培养基中包括淀粉。

在培养基中加入淀粉后，进行发酵后，可以获得具有高活性淀粉酶的发酵液。

可选地，所述培养基中包含硒源。

将菌株接种于含硒源的培养基，可以获得包含纳米硒以及硒多糖中至少一种的发酵液。

可选地，所述培养基包含淀粉和硒源。

将菌株接种于上述培养基时，可以进一步提高淀粉酶的活性。

以下结合具体实施例和附图对本发明的技术方案作进一步详细说明，应当理解，以下实施例仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。

实施例1

本实施例提供保藏号为CCTCC No:M 20211386菌株的筛选、分离及检测，具体操作如下：

(1)从湖北恩施富硒土壤中分离得到85株菌株，菌株分离：将采集土样颗粒均匀分散到LB固体培养基上，37℃培养。次日将单菌落转接。初筛：从上述分离的单菌落分别接种到含9、17、26、35、43、52mg/mL亚硒酸钠的LB平板中。根据平板是否出现微红至深红色菌落，挑选能产生深红色菌落的菌株进行复筛。

复筛：将初筛后的不同菌株种子液分别接种于含9、17、26、35、43、52mg/mL亚硒酸钠的LB液体培养基中。37℃恒温振荡培养，观察液体颜色是否转变为微红至深红色，挑选能转变为深红色时亚硒酸钠浓度最高的菌株。将其接种到LB平板上，37℃培养24h后观察并记录菌落形态，其具体形态如图1所示，图1中，a为未接种亚硒酸钠的菌种，b为复筛的菌种，本研究筛选出的菌株在LA琼脂培养基上呈杆状革兰氏阳性菌，菌落呈微黄色，表面粗糙不透明。

将筛选出的菌株，将T5菌株进行保藏，命名为Bacillus subtilis T5(在本申请中，后简称T5)，于2021年11月08日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏中心地点为(武汉大学保藏中心)，保藏号为CCTCC No:M 20211386。

(2)将菌株接种在LA平板培养基(LB液体培养基：蛋白胨10g/L，酵母提取物5g/L，NaCl 10g/L，琼脂16g/L)上培养48h后，观察菌落形态和颜色等特征，并挑取培养24h后的新鲜菌体进行革兰氏染色，在扫描电镜下观察菌体形态。提取T5菌株的DNA送至上海生工生物工程股份有限公司进行16S rDNA序列测定，序列如SEQ.ID.NO.1所示，将测序所得序列通过BLAST软件在GenBank基因库中进行同源性比较，应用Clustal X和MEGA软件进行多重比较后构建系统发育树，其发育树如图2所示。

基于16S rDNA基因序列的分子鉴定结果表明，T5菌株与Bacillus subtilis NCIB3610(ABQL 01000001)的16S rDNA基因序列有98.97％的相似性。系统发育和进化分析还表明，T5菌株与Bacillus subtilis NCIB 3610(ABQL 01000001)亲缘关系较近。

对T5菌株进行补充鉴定。以T5菌株DNA为模版，用枯草芽孢杆菌特异引物PrimersENIF、EN1R进行PCR反应。PCR扩增产物用1％琼脂糖凝胶电泳检测，结果有目标条带产生，如图3所示。综合所得，该枯草芽孢杆菌为枯草芽孢杆菌。

(3)对于T5菌株的生理生化实验分别从细菌的氧化酶实验、V-P实验、吲哚实验、明胶液化实验、碳源利用情况等几个方面进行。该实验参考《常用细菌系统鉴定手册》。根据生理生化试验(表1)，T5菌株符合表S1所示的Bacillus subtilis的典型特征。

表1菌株T5生理生化鉴定结果

实施例2

本实施例对实施例1筛选出的枯草芽孢杆菌进行性能检测，具体操作如下：

(1)将约1ml过夜生长的菌液转移到用盐酸调节至pH 2.5和3.5的9ml新鲜LB培养基(LB液体培养基：蛋白胨10g/L，酵母提取物5g/L，NaCl 10g/L)中，并在37℃孵育4h。类似地，为了胆盐耐受性，将T5菌株转移到含有0.3w/v％和0.6w/v％牛胆盐的LB培养基中并在37℃孵育4h。在孵育0小时和4小时时，通过连续稀释培养物，然后将其置于LA平板上来测定活细胞的数量。存活率由琼脂上存在的活细胞数量决定，并以每毫升样品的集落形成单位(CFU)计算。结果可知，T5在pH 3.5的环境时存活率可达到70.63％。

(2)取OD600调节至0.8(在600nm波长的吸光值为0.8)的T5菌悬液，按体积比1:1配置菌悬液与二甲苯的第一混合液，按体积比1:1配置菌悬液与氯仿的第二混合液，按体积比1:1配置菌悬液与二甲苯的第三混合液，并充分涡旋2分钟。混合物在37℃孵育1h进行相分离，测水相OD600(A1)，每个样品三次重复。使用三种溶剂，即二甲苯(非极性溶剂)、氯仿(极性酸性溶剂)和乙酸乙酯(极性碱性溶剂)。

表面疏水活性(％)＝(A0-A1)/A0×100％；(式中：A0为初始菌液的OD600；A1为静置1h后水相的OD600)，结果可知T5菌株对氯仿溶剂疏水活性为37.99％。

(3)过夜活化的T5菌株发酵液以6000rmp/min离心10分钟，沉淀用PBS洗涤三次，并重新悬浮在PBS(pH 7.4)中，在600nm(A0)处吸光度调节为0.8，涡旋30秒，并在静态条件下于37℃孵育。悬浮液在24h(A1)在600纳米下测量其OD值，每个样品三次重复。自凝集率(％)＝(A0-A1)/A0×100％，(式中：A0为初始菌液的OD600；A1为静置24h后上清液的OD600)，结果可知T5菌株的自凝聚力为80.47％。

从上述性能检测可以看出，实施例1筛选出的菌株具有良好耐酸性、疏水活性以及自凝聚能力，耐酸性可以确保其适应消化系统中的酸性环境，良好的疏水活性以及自凝聚能力可以确保其在肠道中附着，为改善肠道功能提供先决条件。

实施例3

实施例3利用实施例1分离所得的T5菌株制备纳米硒，具体操作如下：

将活化好的T5菌株接种于亚硒酸钠的LB培养基中，接种量为1v/v％，37℃恒温振荡培养，收集红色菌液，9000rpm，离心20min，收集沉淀。沉淀用液氮研磨，超声，将红色悬液分别过20、10、5、3、1.2、0.8μm的滤膜，将过滤后红色悬液用正己烷充分萃取，收集下层，10000rpm离心10min，收集沉淀即为产品，冻干称重。实施例3的亚硒酸钠的浓度以及培养时间如表2所示，将实施例3的纳米硒产物中加入预冷的电镜固定液4℃固定过夜。将固定物用HITACHI SU8010进行SEM电镜观察，实施例3中的培养基中均产生红色的纳米硒点，并用动态光散射法(DLS)测定产生纳米硒粒径，结果如表2所示，其中实施例3的纳米硒制备状态下的T5菌株图如图4所示，如图所示，大多数SeNPs呈球形。

表2实施例3～实施例4培养基中亚硒酸钠的浓度以及纳米硒粒径

从表2可以看出，T5菌株利用发酵可将亚硒酸钠转化成纳米硒，并且其粒径较小。

实施例4

实施例4利用实施例1的分离所得的T5菌株制备硒多糖，具体操作如下：

将T5菌株接种于含亚硒酸钠的LB液体培养基中，其中，接种量为1v/v％，37℃恒温振荡培养24小时，取10mL发酵液,沸水浴10min,冷却到室温,10000rpm 4℃离心15min,_上清液取4.75mL加入80％质量分数为三氯乙酸(TCA)250μL至终浓度4℃％(m/v),震荡混匀后,4℃静置6h,10000r pm离心20min,取上清2mL至干净干燥的50mL离心管,加入3倍体积的无水乙醇，4℃静置过夜,10000rpm 4℃离心20min,去上清,沉淀用4mL去离子水复溶，装入透析袋(截留分子量8000-14000Da),去离子水4℃，透析24h，中间换水3次，得到粗多糖样品,胞外多糖产量用苯酚硫酸法测定。亚硒酸钠的浓度及硒多糖的产量为表3所示，采用经AFS原子荧光光度计测定硒多糖的含硒量，结果如表3所示。

表3实施例4培养基中亚硒酸钠的浓度、硒多糖含量以及硒多糖含硒量检测结果

从表3可以看出，采用T5菌株可以将培养基中的每克亚硒酸钠转化成2000μg以上硒多糖。

实施例5

本实施例利用实施例1分离所得的T5菌株制备具有抗氧化功能的发酵液，具体操作如下：

将T5菌株接种于含浓度为5mmol/L的亚硒酸钠的LB培养基中，接种量为1v/v％，连续摇培48h。将上述培养液以8 000rpm的速度离心10min，收集上清。

采用ABTS清除自由基法提取的T5菌株次生代谢产物的总抗氧化能力，评价杜氏乳杆菌培养液和胞内提取物的抗氧化活性，具体操作如下：

配制7.4mol/L ABTS溶液以及2.6mmol/L过硫酸钾溶液，等比混合，室温避光反应12h，用无水乙醇溶液稀释至OD734 nm值为0.75，即为ABTS工作液。吸取ABTS工作液600μL，加入不同浓度的纳米硒及次生代谢物样品溶液70μL，于37℃恒温反应30min，测定OD734 nm值。

式中:DC，ABTS阳离子自由基清除率，％；As，样品与ABTS工作液混合后的吸光值；Ac样品与水混合后的吸光值；Ab，ABTS工作液与水混合后的吸光值。

如图5所示，T5菌株次生代谢产物总抗氧化能力且对自由基的清除率较强，其EC50值(半最大效应浓度(concentration for 50％of maximal effect，EC50)是指能引起50％最大效应的浓度)为5.729μg/mL。

研究结果表明，T5菌株次生代谢产物对自由基的有较高的清除能力，具有良好的抗氧化性。

实施例6～实施例7

实施例6～实施例7利用实施例1分离所得的T5菌株制备淀粉酶，具体步骤如下，

可溶性淀粉(购于上海沪试)20g、酵母抽提物(购于OXIOD)3g、蛋白胨(购于OXIOD)3g、MgSO₄.7H₂O 0.2g、K₂HPO₄ 1g、NaCl 1g以及亚硒酸钠混合后并将其pH调至7。将T5菌株种子液2％加入至液体发酵培养基中，37℃，200rpm条件下在摇瓶中震荡培养50mL(250mL)锥形瓶，取不同时间段的发酵液(0～72h)，离心8000g，20min，取上清为粗酶液。

测定方法：3，5-二硝基水杨酸比色法，具体操作如下：

(1)取试管4支，注明两支为测定管。

(2)于每管中各加酶提取液1毫升，在70℃恒温水浴中(水温度的变化不应超过±0.5℃)准确加热15分钟，在此期间β-淀粉酶受热而钝化，取出后迅速在自来水中冷却。

(3)在试管中各加入1毫升pH5.6柠檬酸缓冲液。

(4)向对照管中加入4毫升0.4N氢氧化钠，以钝化酶的活性。

(5)将测定管和对照管置40℃(±0.5℃)恒温水浴中保温15分钟，再向各管分别加入40℃下预热的淀粉溶液2毫升，摇匀，立即放入40℃水浴中准确保温5分钟后取出，向各测定管迅速加入4毫升0.4N氢氧化钠，以终止酶的活动，然后准备下步糖的测定。

(6)取25毫升刻度试管7个，编号，分别加入麦芽糖标准液(1毫克/毫升)0、0.2、0.6、1.0、1.4、1.8、2.0毫升，置沸水浴中准确煮沸5分钟，取出冷却，用蒸馏水稀释至25毫升，用分光光度计在520nm波长下进行比色，记录吸光度值，以吸光值为纵坐标，以麦芽糖含量为横坐标绘制标准曲线。

样品的测定：取以上各管中酶作用后的溶液及对照管中的溶液各2毫升，分别放入25毫升具塞刻度试管中，再加入2毫升3,5-二硝基水杨酸试剂，混匀，置沸水中准确煮沸5分钟，取出冷却，用蒸馏水稀释至25毫升，混匀。用分光光度计在520nm波长下进行比色，记录消光值，从麦芽糖标准曲线中查出麦芽糖含量，然后进行结果计算。

在本发明中，酶活力单位定义为40℃，1min从2％的可溶性淀粉中释放出1μmol麦芽糖所需的酶量为一个酶活力单位(U)，实施例6～实施例7中的亚硒酸钠的浓度以及酶活力测试结果如表4所示。

表4实施例6～实施例7培养基中亚硒酸钠的浓度及酶活力测试结果

从表4可以看出，加入T5菌株在含有淀粉的环境下进行发酵后，可产生具有高活性的淀粉酶；同时，若在培养基中加入亚硒酸钠后，可以显著提高产淀粉酶的活性。

以上仅为本发明的优选实施例，并非因此限制本发明的专利范围，对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包括在本发明的专利保护范围内。

序列表

<110> 武汉轻工大学

<120> 一种枯草芽孢杆菌及应用

<160> 1

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 1174

<212> DNA

<213> 枯草芽孢杆菌菌株(Bacillus subtilis )

<400> 1

atgttccccc ttcggcggct ggctcctaaa aggttacctc accgacttcg ggtgttacaa 60

actctcgtgg tgtgacgggc ggtgtgtaca aggcccggga acgtattcac cgcggcatgc 120

tgatccgcga ttactagcga ttccagcttc acgcagtcga gttgcagact gcgatccgaa 180

ctgagaacag atttgtggga ttggcttaac ctcgcggttt cgctgccctt tgttctgtcc 240

attgtagcac gtgtgtagcc caggtcataa ggggcatgat gatttgacgt catccccacc 300

ttcctccggt ttgtcaccgg cagtcacctt agagtgccca actgaatgct ggcaactaag 360

atcaagggtt gcgctcgttg cgggacttaa cccaacatct cacgacacga gctgacgaca 420

accatgcacc acctgtcact ctgcccccga aggggacgtc ctatctctag gattgtcaga 480

ggatgtcaag acctggtaag gttcttcgcg ttgcttcgaa ttaaaccaca tgctccaccg 540

cttgtgcggg cccccgtcaa ttcctttgag tttcagtctt gcgaccgtac tccccaggcg 600

gagtgcttaa tgcgttagct gcagcactaa ggggcggaaa ccccctaaca cttagcactc 660

atcgtttacg gcgtggacta ccagggtatc taatcctgtt cgctccccac gctttcgctc 720

ctcagcgtca gttacagacc agagagtcgc cttcgccact ggtgttcctc cacatctcta 780

cgcatttcac cgctacacgt ggaattccac tctcctcttc tgcactcaag ttccccagtt 840

tccaatgacc ctccccggtt gagccggggg ctttcacatc agacttaaga aaccgcctgc 900

gagcccttta cgcccaataa ttccggacaa cgcttgccac ctacgtatta ccgcggctgc 960

tggcacgtag ttagccgtgg ctttctggtt aggtaccgtc aagtaccgcc ctatcgaacg 1020

gtacttgtct tccctaacac agagctttac gatccgaaac ctcatcacct cacgcgcgtg 1080

ctcgtcagac tttcgtcatg cgagatccta ctgctgctcc cgtaggagtc tgggcggtgt 1140

cctcagtccc agtgtgccga tccacccttc tcca 1174

Claims

1.一种枯草芽孢杆菌，其特征在于，所述枯草芽孢杆菌的分类命名为枯草芽孢杆菌菌株Bacillus subtilis T5，保藏号为CCTCC No:M 20211386，保藏时间为2021年11月08日。

2.如权利要求1所述的枯草芽孢杆菌，其特征在于，所述枯草芽孢杆菌的16S rDNA序列如SEQ ID NO.1所示。

3.一种制备纳米硒的方法，其特征在于，所述制备纳米硒的方法包括以下步骤：

以无机硒化合物为底物，将权利要求1或2所述的枯草芽孢杆菌接种于纳米硒培养基将所述无机硒化合物进行发酵转化，获得纳米硒。

4.一种制备硒多糖的方法，其特征在于，所述制备硒多糖的方法包括以下步骤：以无机硒为底物，将权利要求1或2所述的枯草芽孢杆菌与硒源加入硒多糖培养基将所述硒源进行发酵转化，获得硒多糖。

5.一种制备淀粉酶的方法，其特征在于，所述制备淀粉酶的方法包括：将权利要求1或2所述的枯草芽孢杆菌接种到培养基中进行发酵后，获得淀粉酶。

6.如权利要求5所述的制备淀粉酶的方法，其特征在于，所述培养基包括淀粉。

7.如权利要去5或6所述的制备淀粉酶的方法，其特征在于，所述培养基包括硒源。

8.一种权利要求1或2所述的枯草芽孢杆菌在制备抗氧化和/或自由基清除制剂中的应用。

9.一种权利要求1或2所述的枯草芽孢杆菌在制备改善肠道制剂中的应用。

10.一种发酵液，其特征在于，所述发酵液由如权利要求1或2所述的枯草芽孢杆菌接种在培养基上发酵而得。