CN114601956A - 一种医疗用止血敷料及其制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了一种医疗用止血敷料及其制备方法，先利用2‑甲基丙烯酸乙酯对几丁聚糖进行改性处理，得到改性几丁聚糖；再将改性几丁聚糖、硫酸软骨素超声波分散于丝素蛋白溶液中，接着利用缩水甘油进行改性处理制得纺丝液，静电纺丝，得到复合纤维；然后将复合纤维加入胶原蛋白溶液中，最后加入谷氨酰胺转氨酶，交联反应，真空冷冻干燥，灭菌，即得。该止血敷料的生物相容性好，止血效果好，具有很好的临床推广价值。

Description

一种医疗用止血敷料及其制备方法
技术领域
本发明涉及技术领域，特别是涉及一种医疗用止血敷料及其制备方法。
背景技术
医学临床上指出，人体因急性出血而不采取有效的急救措施，则患者在6～20分钟内就会死亡。人体失血若超过全身血量的20％即发生休克；失血若超过全身血量的40％即濒临死亡。据统计，创伤死亡人数占总死亡人数的10％，而其中大量出血造成死亡占其中的30～40％，因此，早期控制出血是降低死亡率的主要方法。
另外，在医院中对各种动脉、静脉进行穿刺拔管手术后，需要对伤口进行压迫止血。在医院中应用最广泛的压迫止血方式还是医务人员采用纱布加压止血。医务人员把纱布叠合在伤口上，然后采用绷带或缚带进行固定。此类的操作方式存在缺陷：一是，由于绷带或缚带不具有延展性和粘性，不能自动给予压迫力，所以固定好后，绷带或缚带绑得不紧会失去压迫力，如果病人移动有可能会使纱布发生位移；二是，纱布的吸血性能差，容易对伤口照成感染，而且其只是依靠绷带或缚带给予的压迫力来实现对伤口的压迫。
专利CN101104080B公开了一种沸石止血敷料，是由4A沸石、木质素、粘结剂以及分子筛活化粉制备得到。该专利采用一定粒径的具有一定表面吸附作用的颗粒作用于伤口，物理性吸收血液中的水分，而不吸收直径为8-9μm的白细胞和直径为6-8μm的红细胞，从而导致血小板和凝血酶浓缩，增强血小板凝聚速度和凝聚能力，从而达到止血的目的。但是该专利所使用原料的生物相容性差，沸石止血时可放出大量水合热使创面局部温度升高,造成局部组织热损伤，而且止血后沸石形成血凝块强度不大易破裂导致二次出血，因此FDA在沸石适用症上有严格规定,沸石只有在致命性出血并且其它止血方法无法控制的情况下才能应用。
因此，目前急需一种生物相容性好的医疗用止血敷料。
发明内容
本发明的目的就是要提供一种医疗用止血敷料及其制备方法，生物相容性好，止血效果好。
为实现上述目的，本发明是通过如下方案实现的：
一种医疗用止血敷料的制备方法，具体步骤如下：
(1)先利用2-甲基丙烯酸乙酯对几丁聚糖进行改性处理，得到改性几丁聚糖；
(2)再将改性几丁聚糖、硫酸软骨素超声波分散于丝素蛋白溶液中，接着利用缩水甘油进行改性处理制得纺丝液，静电纺丝，得到复合纤维；
(3)然后将复合纤维加入胶原蛋白溶液中，最后加入谷氨酰胺转氨酶，交联反应，真空冷冻干燥，灭菌，即得所述的一种医疗用止血敷料。
优选的，以重量份计，步骤(1)的具体方法为：先将1份几丁聚糖溶于5～7份质量浓度1～2％醋酸溶液中制成几丁聚糖溶液，流延成膜，得到几丁聚糖膜；然后将几丁聚糖膜经等离子体处理，接着浸没于12～15份2-甲基丙烯酸乙酯中进行接枝反应，得到接枝几丁聚糖膜，水洗，即得所述的改性几丁聚糖。
进一步优选的，等离子体处理的工艺条件为：氮气气氛下，几丁聚糖膜与电极之间的距离为8～10mm，处理功率为45～55W，放电频率为6～8kHz，处理时间为8～10分钟。
进一步优选的，等离子体处理完毕后将几丁聚糖膜于空气接触10～15分钟，再放入2-甲基丙烯酸乙酯中进行接枝反应。
进一步优选的，接枝反应的工艺条件为：氮气气氛下，0～4℃反应4～6小时。
进一步优选的，水洗的具体方法为：用蒸馏水冲洗20～24小时。
优选的，步骤(2)中，改性几丁聚糖、硫酸软骨素、丝素蛋白溶液的质量比为1：0.1～0.2：5～7；其中，所述丝素蛋白溶液是将蚕丝脱胶后，经溶解、透析、冷冻干燥制得丝素蛋白，接着加入水中搅拌至完全溶解而得，其质量浓度为2～3％。
优选的，步骤(2)中，以重量份计，纺丝液的制备方法如下：向100份混合液中加入1～2份缩水甘油、1～2份氯化钠，搅拌混匀，60～65℃搅拌反应2～3小时，自然冷却至室温(25℃)即得。
优选的，步骤(2)中，静电纺丝的工艺条件为：正电压13～15kV，负电压-0.1～-0.15kV，纺丝液流量为0.15～0.25mm/min，接收距离为12～15cm。
优选的，步骤(3)中，复合纤维、胶原蛋白溶液的质量比为0.1～0.2：100，其中，胶原蛋白溶液的质量浓度为2～3％，谷氨酰转氨酶的用量为4～6U每克胶原蛋白。
优选的，步骤(3)中，交联反应的工艺条件为：先于-2～-4℃搅拌反应20～24小时。
优选的，步骤(3)中，真空冷冻干燥的工艺条件为：先以5～7℃/分钟的降温速率降温至-70～-75℃，保温2～3小时，再转移至真空冷冻干燥机中冻干20～24小时即可。
优选的，步骤(3)中，灭菌采用Co60辐照灭菌，灭菌时间为22～24小时。
本发明还要求保护利用上述制备方法得到的一种医疗用止血敷料。
与现有技术相比，本发明的有益效果是：
本发明先利用2-甲基丙烯酸乙酯对几丁聚糖进行改性处理，得到改性几丁聚糖；再将改性几丁聚糖、硫酸软骨素超声波分散于丝素蛋白溶液中，接着利用缩水甘油进行改性处理制得纺丝液，静电纺丝，得到复合纤维；然后将复合纤维加入胶原蛋白溶液中，最后加入谷氨酰胺转氨酶，交联反应，真空冷冻干燥，灭菌，即得所述的一种医疗用止血敷料。该止血敷料的生物相容性好，止血效果好，具有很好的临床推广价值。
本发明的主要原料均具有较好的生物相容性，几丁聚糖带有正电荷，可以促进带负电的红血球凝聚，促进血液凝固，起到止血作用；硫酸软骨素是一种酸性黏多糖，有助于促进渗透液的吸收和炎症的消除，极易吸水且锁水能力强，增强抗菌性能；丝素蛋白、胶原蛋白都可以作为填充物，起到止血作用。本发明通过几丁聚糖、硫酸软骨素、丝素蛋白和胶原蛋白的协同作用，改善止血效果。
本发明将改性几丁聚糖、硫酸软骨素超声波分散于丝素蛋白溶液中，接着利用缩水甘油进行改性处理制得纺丝液，静电纺丝所得复合纤维具有较好的机械强度，结合后续的交联处理，进而改善敷料的机械强度。
另外，在缩水甘油改性的过程中形成更多孔隙，结合几丁聚糖的改性处理，孔隙丰富，进一步改善产品的止血性能。
具体实施方式
下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例1
一种医疗用止血敷料的制备方法，具体步骤如下：
(1)先利用2-甲基丙烯酸乙酯对几丁聚糖进行改性处理，得到改性几丁聚糖；
(2)再将改性几丁聚糖、硫酸软骨素超声波分散于丝素蛋白溶液中，接着利用缩水甘油进行改性处理制得纺丝液，静电纺丝，得到复合纤维；
(3)然后将复合纤维加入胶原蛋白溶液中，最后加入谷氨酰胺转氨酶，交联反应，真空冷冻干燥，灭菌，即得所述的一种医疗用止血敷料。
步骤(1)的具体方法为：先将1g几丁聚糖溶于5g质量浓度2％醋酸溶液中制成几丁聚糖溶液，流延成膜，得到几丁聚糖膜；然后将几丁聚糖膜经等离子体处理，接着浸没于12g2-甲基丙烯酸乙酯中进行接枝反应，得到接枝几丁聚糖膜，水洗，即得所述的改性几丁聚糖。
等离子体处理的工艺条件为：氮气气氛下，几丁聚糖膜与电极之间的距离为10mm，处理功率为45W，放电频率为8kHz，处理时间为8分钟。
等离子体处理完毕后将几丁聚糖膜于空气接触15分钟，再放入2-甲基丙烯酸乙酯中进行接枝反应。
接枝反应的工艺条件为：氮气气氛下，0℃反应6小时。
水洗的具体方法为：用蒸馏水冲洗20小时。
步骤(2)中，改性几丁聚糖、硫酸软骨素、丝素蛋白溶液的质量比为1：0.2：5其中，所述丝素蛋白溶液是将蚕丝脱胶后，经溶解、透析、冷冻干燥制得丝素蛋白，接着加入水中搅拌至完全溶解而得，其质量浓度为3％。
步骤(2)中，纺丝液的制备方法如下：向100g混合液中加入2g缩水甘油、1g氯化钠，搅拌混匀，65℃搅拌反应2小时，自然冷却至室温(25℃)即得。
步骤(2)中，静电纺丝的工艺条件为：正电压15kV，负电压-0.1kV，纺丝液流量为0.25mm/min，接收距离为12cm。
步骤(3)中，复合纤维、胶原蛋白溶液的质量比为0.2：100，其中，胶原蛋白溶液的质量浓度为2％，谷氨酰转氨酶的用量为6U每克胶原蛋白。
步骤(3)中，交联反应的工艺条件为：先于-2℃搅拌反应24小时。
步骤(3)中，真空冷冻干燥的工艺条件为：先以5℃/分钟的降温速率降温至-75℃，保温2小时，再转移至真空冷冻干燥机中冻干24小时即可。
步骤(3)中，灭菌采用Co60辐照灭菌，灭菌时间为22小时。
实施例2
一种医疗用止血敷料的制备方法，具体步骤如下：
(1)先利用2-甲基丙烯酸乙酯对几丁聚糖进行改性处理，得到改性几丁聚糖；
(2)再将改性几丁聚糖、硫酸软骨素超声波分散于丝素蛋白溶液中，接着利用缩水甘油进行改性处理制得纺丝液，静电纺丝，得到复合纤维；
(3)然后将复合纤维加入胶原蛋白溶液中，最后加入谷氨酰胺转氨酶，交联反应，真空冷冻干燥，灭菌，即得所述的一种医疗用止血敷料。
步骤(1)的具体方法为：先将1g几丁聚糖溶于7g质量浓度1％醋酸溶液中制成几丁聚糖溶液，流延成膜，得到几丁聚糖膜；然后将几丁聚糖膜经等离子体处理，接着浸没于15g2-甲基丙烯酸乙酯中进行接枝反应，得到接枝几丁聚糖膜，水洗，即得所述的改性几丁聚糖。
等离子体处理的工艺条件为：氮气气氛下，几丁聚糖膜与电极之间的距离为8mm，处理功率为55W，放电频率为6kHz，处理时间为10分钟。
等离子体处理完毕后将几丁聚糖膜于空气接触10分钟，再放入2-甲基丙烯酸乙酯中进行接枝反应。
接枝反应的工艺条件为：氮气气氛下，4℃反应4小时。
水洗的具体方法为：用蒸馏水冲洗24小时。
步骤(2)中，改性几丁聚糖、硫酸软骨素、丝素蛋白溶液的质量比为1：0.1：7；其中，所述丝素蛋白溶液是将蚕丝脱胶后，经溶解、透析、冷冻干燥制得丝素蛋白，接着加入水中搅拌至完全溶解而得，其质量浓度为3％。
步骤(2)中，纺丝液的制备方法如下：向100g混合液中加入1g缩水甘油、2g氯化钠，搅拌混匀，60℃搅拌反应3小时，自然冷却至室温(25℃)即得。
步骤(2)中，静电纺丝的工艺条件为：正电压13kV，负电压-0.15kV，纺丝液流量为0.15mm/min，接收距离为15cm。
步骤(3)中，复合纤维、胶原蛋白溶液的质量比为0.1：100，其中，胶原蛋白溶液的质量浓度为3％，谷氨酰转氨酶的用量为4U每克胶原蛋白。
步骤(3)中，交联反应的工艺条件为：先于-4℃搅拌反应20小时。
步骤(3)中，真空冷冻干燥的工艺条件为：先以7℃/分钟的降温速率降温至-70℃，保温3小时，再转移至真空冷冻干燥机中冻干20小时即可。
步骤(3)中，灭菌采用Co60辐照灭菌，灭菌时间为24小时。
实施例3
一种医疗用止血敷料的制备方法，具体步骤如下：
(1)先利用2-甲基丙烯酸乙酯对几丁聚糖进行改性处理，得到改性几丁聚糖；
(2)再将改性几丁聚糖、硫酸软骨素超声波分散于丝素蛋白溶液中，接着利用缩水甘油进行改性处理制得纺丝液，静电纺丝，得到复合纤维；
(3)然后将复合纤维加入胶原蛋白溶液中，最后加入谷氨酰胺转氨酶，交联反应，真空冷冻干燥，灭菌，即得所述的一种医疗用止血敷料。
步骤(1)的具体方法为：先将1g几丁聚糖溶于6g质量浓度1.5％醋酸溶液中制成几丁聚糖溶液，流延成膜，得到几丁聚糖膜；然后将几丁聚糖膜经等离子体处理，接着浸没于14g2-甲基丙烯酸乙酯中进行接枝反应，得到接枝几丁聚糖膜，水洗，即得所述的改性几丁聚糖。
等离子体处理的工艺条件为：氮气气氛下，几丁聚糖膜与电极之间的距离为9mm，处理功率为50W，放电频率为7kHz，处理时间为9分钟。
等离子体处理完毕后将几丁聚糖膜于空气接触12分钟，再放入2-甲基丙烯酸乙酯中进行接枝反应。
接枝反应的工艺条件为：氮气气氛下，2℃反应5小时。
水洗的具体方法为：用蒸馏水冲洗22小时。
步骤(2)中，改性几丁聚糖、硫酸软骨素、丝素蛋白溶液的质量比为1：0.15：6；其中，所述丝素蛋白溶液是将蚕丝脱胶后，经溶解、透析、冷冻干燥制得丝素蛋白，接着加入水中搅拌至完全溶解而得，其质量浓度为2～3％。
步骤(2)中，纺丝液的制备方法如下：向100g混合液中加入1.5g缩水甘油、1.5g氯化钠，搅拌混匀，62℃搅拌反应2.5小时，自然冷却至室温(25℃)即得。
步骤(2)中，静电纺丝的工艺条件为：正电压14kV，负电压-0.12kV，纺丝液流量为0.2mm/min，接收距离为13cm。
步骤(3)中，复合纤维、胶原蛋白溶液的质量比为0.15：100，其中，胶原蛋白溶液的质量浓度为2.5％，谷氨酰转氨酶的用量为5U每克胶原蛋白。
步骤(3)中，交联反应的工艺条件为：先于-3℃搅拌反应22小时。
步骤(3)中，真空冷冻干燥的工艺条件为：先以6℃/分钟的降温速率降温至-72℃，保温2.5小时，再转移至真空冷冻干燥机中冻干22小时即可。
步骤(3)中，灭菌采用Co60辐照灭菌，灭菌时间为23小时。
对比例1
一种医疗用止血敷料的制备方法，具体步骤如下：
(1)先将几丁聚糖、硫酸软骨素超声波分散于丝素蛋白溶液中，接着利用缩水甘油进行改性处理制得纺丝液，静电纺丝，得到复合纤维；
(2)然后将复合纤维加入胶原蛋白溶液中，最后加入谷氨酰胺转氨酶，交联反应，真空冷冻干燥，灭菌，即得所述的一种医疗用止血敷料。
步骤(1)中，几丁聚糖、硫酸软骨素、丝素蛋白溶液的质量比为1：0.2：5其中，所述丝素蛋白溶液是将蚕丝脱胶后，经溶解、透析、冷冻干燥制得丝素蛋白，接着加入水中搅拌至完全溶解而得，其质量浓度为3％。
步骤(1)中，纺丝液的制备方法如下：向100g混合液中加入2g缩水甘油、1g氯化钠，搅拌混匀，65℃搅拌反应2小时，自然冷却至室温(25℃)即得。
步骤(1)中，静电纺丝的工艺条件为：正电压15kV，负电压-0.1kV，纺丝液流量为0.25mm/min，接收距离为12cm。
步骤(2)中，复合纤维、胶原蛋白溶液的质量比为0.2：100，其中，胶原蛋白溶液的质量浓度为2％，谷氨酰转氨酶的用量为6U每克胶原蛋白。
步骤(2)中，交联反应的工艺条件为：先于-2℃搅拌反应24小时。
步骤(2)中，真空冷冻干燥的工艺条件为：先以5℃/分钟的降温速率降温至-75℃，保温2小时，再转移至真空冷冻干燥机中冻干24小时即可。
步骤(2)中，灭菌采用Co60辐照灭菌，灭菌时间为22小时。
对比例2
一种医疗用止血敷料的制备方法，具体步骤如下：
(1)先利用2-甲基丙烯酸乙酯对几丁聚糖进行改性处理，得到改性几丁聚糖；
(2)再将改性几丁聚糖超声波分散于丝素蛋白溶液中，接着利用缩水甘油进行改性处理制得纺丝液，静电纺丝，得到复合纤维；
(3)然后将复合纤维加入胶原蛋白溶液中，最后加入谷氨酰胺转氨酶，交联反应，真空冷冻干燥，灭菌，即得所述的一种医疗用止血敷料。
步骤(1)的具体方法为：先将1g几丁聚糖溶于5g质量浓度2％醋酸溶液中制成几丁聚糖溶液，流延成膜，得到几丁聚糖膜；然后将几丁聚糖膜经等离子体处理，接着浸没于12g2-甲基丙烯酸乙酯中进行接枝反应，得到接枝几丁聚糖膜，水洗，即得所述的改性几丁聚糖。
等离子体处理的工艺条件为：氮气气氛下，几丁聚糖膜与电极之间的距离为10mm，处理功率为45W，放电频率为8kHz，处理时间为8分钟。
等离子体处理完毕后将几丁聚糖膜于空气接触15分钟，再放入2-甲基丙烯酸乙酯中进行接枝反应。
接枝反应的工艺条件为：氮气气氛下，0℃反应6小时。
水洗的具体方法为：用蒸馏水冲洗20小时。
步骤(2)中，改性几丁聚糖、丝素蛋白溶液的质量比为1：5其中，所述丝素蛋白溶液是将蚕丝脱胶后，经溶解、透析、冷冻干燥制得丝素蛋白，接着加入水中搅拌至完全溶解而得，其质量浓度为3％。
步骤(2)中，纺丝液的制备方法如下：向100g混合液中加入2g缩水甘油、1g氯化钠，搅拌混匀，65℃搅拌反应2小时，自然冷却至室温(25℃)即得。
步骤(2)中，静电纺丝的工艺条件为：正电压15kV，负电压-0.1kV，纺丝液流量为0.25mm/min，接收距离为12cm。
步骤(3)中，复合纤维、胶原蛋白溶液的质量比为0.2：100，其中，胶原蛋白溶液的质量浓度为2％，谷氨酰转氨酶的用量为6U每克胶原蛋白。
步骤(3)中，交联反应的工艺条件为：先于-2℃搅拌反应24小时。
步骤(3)中，真空冷冻干燥的工艺条件为：先以5℃/分钟的降温速率降温至-75℃，保温2小时，再转移至真空冷冻干燥机中冻干24小时即可。
步骤(3)中，灭菌采用Co60辐照灭菌，灭菌时间为22小时。
对比例3
一种医疗用止血敷料的制备方法，具体步骤如下：
(1)先利用2-甲基丙烯酸乙酯对几丁聚糖进行改性处理，得到改性几丁聚糖；
(2)再将改性几丁聚糖、硫酸软骨素超声波分散于丝素蛋白溶液中，制成纺丝液，静电纺丝，得到复合纤维；
(3)然后将复合纤维加入胶原蛋白溶液中，最后加入谷氨酰胺转氨酶，交联反应，真空冷冻干燥，灭菌，即得所述的一种医疗用止血敷料。
步骤(1)的具体方法为：先将1g几丁聚糖溶于5g质量浓度2％醋酸溶液中制成几丁聚糖溶液，流延成膜，得到几丁聚糖膜；然后将几丁聚糖膜经等离子体处理，接着浸没于12g2-甲基丙烯酸乙酯中进行接枝反应，得到接枝几丁聚糖膜，水洗，即得所述的改性几丁聚糖。
等离子体处理的工艺条件为：氮气气氛下，几丁聚糖膜与电极之间的距离为10mm，处理功率为45W，放电频率为8kHz，处理时间为8分钟。
等离子体处理完毕后将几丁聚糖膜于空气接触15分钟，再放入2-甲基丙烯酸乙酯中进行接枝反应。
接枝反应的工艺条件为：氮气气氛下，0℃反应6小时。
水洗的具体方法为：用蒸馏水冲洗20小时。
步骤(2)中，改性几丁聚糖、硫酸软骨素、丝素蛋白溶液的质量比为1：0.2：5其中，所述丝素蛋白溶液是将蚕丝脱胶后，经溶解、透析、冷冻干燥制得丝素蛋白，接着加入水中搅拌至完全溶解而得，其质量浓度为3％。
步骤(2)中，静电纺丝的工艺条件为：正电压15kV，负电压-0.1kV，纺丝液流量为0.25mm/min，接收距离为12cm。
步骤(3)中，复合纤维、胶原蛋白溶液的质量比为0.2：100，其中，胶原蛋白溶液的质量浓度为2％，谷氨酰转氨酶的用量为6U每克胶原蛋白。
步骤(3)中，交联反应的工艺条件为：先于-2℃搅拌反应24小时。
步骤(3)中，真空冷冻干燥的工艺条件为：先以5℃/分钟的降温速率降温至-75℃，保温2小时，再转移至真空冷冻干燥机中冻干24小时即可。
步骤(3)中，灭菌采用Co60辐照灭菌，灭菌时间为22小时。
对比例4
一种医疗用止血敷料的制备方法，具体步骤如下：
(1)先利用2-甲基丙烯酸乙酯对几丁聚糖进行改性处理，得到改性几丁聚糖；
(2)再将改性几丁聚糖、硫酸软骨素超声波分散于丝素蛋白溶液中，接着利用缩水甘油进行改性处理，得到预混液；
(3)然后将预混液加入胶原蛋白溶液中，最后加入谷氨酰胺转氨酶，交联反应，真空冷冻干燥，灭菌，即得所述的一种医疗用止血敷料。
步骤(1)的具体方法为：先将1g几丁聚糖溶于5g质量浓度2％醋酸溶液中制成几丁聚糖溶液，流延成膜，得到几丁聚糖膜；然后将几丁聚糖膜经等离子体处理，接着浸没于12g2-甲基丙烯酸乙酯中进行接枝反应，得到接枝几丁聚糖膜，水洗，即得所述的改性几丁聚糖。
等离子体处理的工艺条件为：氮气气氛下，几丁聚糖膜与电极之间的距离为10mm，处理功率为45W，放电频率为8kHz，处理时间为8分钟。
等离子体处理完毕后将几丁聚糖膜于空气接触15分钟，再放入2-甲基丙烯酸乙酯中进行接枝反应。
接枝反应的工艺条件为：氮气气氛下，0℃反应6小时。
水洗的具体方法为：用蒸馏水冲洗20小时。
步骤(2)中，改性几丁聚糖、硫酸软骨素、丝素蛋白溶液的质量比为1：0.2：5其中，所述丝素蛋白溶液是将蚕丝脱胶后，经溶解、透析、冷冻干燥制得丝素蛋白，接着加入水中搅拌至完全溶解而得，其质量浓度为3％。
步骤(3)中，预混液、胶原蛋白溶液的质量比为2：100，其中，胶原蛋白溶液的质量浓度为2％，谷氨酰转氨酶的用量为6U每克胶原蛋白。
步骤(3)中，交联反应的工艺条件为：先于-2℃搅拌反应24小时。
步骤(3)中，真空冷冻干燥的工艺条件为：先以5℃/分钟的降温速率降温至-75℃，保温2小时，再转移至真空冷冻干燥机中冻干24小时即可。
步骤(3)中，灭菌采用Co60辐照灭菌，灭菌时间为22小时。
试验例
1、机械性能：
用拉伸流变仪测定实施例1～3和对比例3、4所得敷料的拉伸强度，结果见表1。
拉伸强度σt＝p/(b×d)，其中，σt为拉伸强度(MPa)；p为最大负荷(N)；b为试样宽度(mm)；d为试样厚度(mm)。
表1.拉伸强度比较
拉伸强度(MPa)
实施例1 5.07
实施例2 5.03
实施例3 5.11
对比例3 3.22
对比例4 2.74
由表1可知，实施例1～3所得敷料的拉伸强度大，具有优异的机械性能。对比例3在步骤(2)中，略去缩水甘油改性处理，对比例4未经纺丝处理，各原料直接混合，所得敷料的机械性能均明显变差，说明缩水甘油改性和纺丝处理有助于机械性能的改善。
2、70只新西兰白兔，随机分为7组，耳缘静脉注射3％戊巴比妥钠30mg/kg，麻醉成功后，逐层开腹，暴露肝脏。在肝表面作lcm×lcm×0.5cm出血创面，每组分别将合适大小的实施例1～5和对比例1～3的敷料置于创口，用50g砝码在止血材料上加压，每隔30s观察一次出血情况，以移去砝码后l0min不再出血为“止血”，记录止血时间。用分析天平精确称量止血前后止血材料的质量，计算出血量。出血量(mL)＝(止血后重量-止血前重量)/血液比重(1.050g/mL)。计算出血量。结果见表2。
表2.止血效果比较
止血时间(s) 出血量(mL)
实施例1 28 0.52
实施例2 29 0.55
实施例3 24 0.49
对比例1 45 1.55
对比例2 48 1.67
对比例3 38 1.01
对比例4 55 2.12
由表2可知，实施例1～3的敷料具有非常好的止血效果。
对比例1用几丁聚糖替换改性几丁聚糖，对比例2在步骤(2)中略去硫酸软骨素，对比例3在步骤(2)中，略去缩水甘油改性处理，对比例4未经纺丝处理，各原料直接混合，所得敷料的止血效果均明显变差，说明本发明的原料组成以及纺丝交联处理等有助于协同改善止血效果。
对于本领域技术人员而言，显然本发明不限于上述示范性实施例的细节，而且在不背离本发明的精神或基本特征的情况下，能够以其他的具体形式实现本发明。因此，无论从哪一点来看，均应将实施例看作是示范性的，而且是非限制性的，本发明的范围由所附权利要求而不是上述说明限定，因此旨在将落在权利要求的等同要件的含义和范围内的所有变化囊括在本发明内。
此外，应当理解，虽然本说明书按照实施方式加以描述，但并非每个实施方式仅包含一个独立的技术方案，说明书的这种叙述方式仅仅是为清楚起见，本领域技术人员应当将说明书作为一个整体，各实施例中的技术方案也可以经适当组合，形成本领域技术人员可以理解的其他实施方式。

Claims (10)

1.一种医疗用止血敷料的制备方法，其特征在于，具体步骤如下：
(1)先利用2-甲基丙烯酸乙酯对几丁聚糖进行改性处理，得到改性几丁聚糖；
(2)再将改性几丁聚糖、硫酸软骨素超声波分散于丝素蛋白溶液中，接着利用缩水甘油进行改性处理制得纺丝液，静电纺丝，得到复合纤维；
(3)然后将复合纤维加入胶原蛋白溶液中，最后加入谷氨酰胺转氨酶，交联反应，真空冷冻干燥，灭菌，即得所述的一种医疗用止血敷料。
2.根据权利要求1所述的一种医疗用止血敷料的制备方法，其特征在于，以重量份计，步骤(1)的具体方法为：先将1份几丁聚糖溶于5～7份质量浓度1～2％醋酸溶液中制成几丁聚糖溶液，流延成膜，得到几丁聚糖膜；然后将几丁聚糖膜经等离子体处理，接着浸没于12～15份2-甲基丙烯酸乙酯中进行接枝反应，得到接枝几丁聚糖膜，水洗，即得所述的改性几丁聚糖。
3.根据权利要求1所述的一种医疗用止血敷料的制备方法，其特征在于，步骤(2)中，改性几丁聚糖、硫酸软骨素、丝素蛋白溶液的质量比为1：0.1～0.2：5～7；其中，所述丝素蛋白溶液是将蚕丝脱胶后，经溶解、透析、冷冻干燥制得丝素蛋白，接着加入水中搅拌至完全溶解而得，其质量浓度为2～3％。
4.根据权利要求1所述的一种医疗用止血敷料的制备方法，其特征在于，步骤(2)中，以重量份计，纺丝液的制备方法如下：向100份混合液中加入1～2份缩水甘油、1～2份氯化钠，搅拌混匀，60～65℃搅拌反应2～3小时，自然冷却至室温即得。
5.根据权利要求1所述的一种医疗用止血敷料的制备方法，其特征在于，步骤(2)中，静电纺丝的工艺条件为：正电压13～15kV，负电压-0.1～-0.15kV，纺丝液流量为0.15～0.25mm/min，接收距离为12～15cm。
6.根据权利要求1所述的一种医疗用止血敷料的制备方法，其特征在于，步骤(3)中，复合纤维、胶原蛋白溶液的质量比为0.1～0.2：100，其中，胶原蛋白溶液的质量浓度为2～3％，谷氨酰转氨酶的用量为4～6U每克胶原蛋白。
7.根据权利要求1所述的一种医疗用止血敷料的制备方法，其特征在于，步骤(3)中，交联反应的工艺条件为：先于-2～-4℃搅拌反应20～24小时。
8.根据权利要求1所述的一种医疗用止血敷料的制备方法，其特征在于，步骤(3)中，真空冷冻干燥的工艺条件为：先以5～7℃/分钟的降温速率降温至-70～-75℃，保温2～3小时，再转移至真空冷冻干燥机中冻干20～24小时即可。
9.根据权利要求1所述的一种医疗用止血敷料的制备方法，其特征在于，步骤(3)中，灭菌采用Co60辐照灭菌，灭菌时间为22～24小时。
10.一种利用权利要求1～9中任一项所述制备方法得到的医疗用止血敷料。
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