CN114591838A - 一种dc细胞诱导试剂盒及dc细胞诱导培养方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种DC细胞诱导试剂盒及DC细胞诱导培养方法，涉及生物领域，针对现有DC细胞诱导数量和质量低以及DC细胞的储存等问题，现提出如下方案，包括有诱导试剂盒盒体和试剂盒盒盖，所述诱导试剂盒盒体的内壁四周设置有两片试剂放置架，所述试剂放置架的顶部军开设有通孔。本发明通过安装试剂管管身和试剂外仓等结构，实现在将试剂管管身放入到试剂外仓的内部，而试剂管管身与试剂外仓内壁形成的空间保护试剂管管身内部的细胞溶液不会受到碰撞损坏，同时本发明提供的DC细胞诱导培养的方法相较与原有手段培养出的DC细胞更加的成熟，通过调整细胞浓度和二次重培的手段提升DC细胞诱导分化的成功率。

Description

一种DC细胞诱导试剂盒及DC细胞诱导培养方法

技术领域

本发明涉及生物领域，尤其涉及一种DC细胞诱导试剂盒及DC细胞诱导培养方法。

背景技术

DC细胞又称树突状细胞因其表面具有星状多形性或树枝状突起而得名,DC细胞尚无特异性细胞表面分子标志,主要通过形态学、组合性细胞表面标志、在混合淋巴细胞反应中能激活初始T细胞等特征进行鉴定，DC细胞广泛分布于皮肤、气道、淋巴器官等部位,具有高度异质性,故不同组织中的DC细胞有不同的名称，树突状细胞也是机体功能最强的专职抗原递呈细胞，它能高效地摄取、加工处理和递呈抗原，未成熟DC细胞具有较强的迁移能力，成熟DC能有效激活初始T细胞，处于启动、调控、并维持免疫应答的中心环节。

而对于人，最常用的方法是从人外周血单个核细胞诱导DC细胞的产生，而对于其他的哺乳动物，最常见的方法是从骨髓细胞中诱导产生DC细胞，而对于功能分析和分子生物学研究的需要，更需要更高数量和更高纯度的DC细胞，而现有的手段无法提供更高数量和更高纯度的DC细胞，为此现提出一种DC细胞诱导试剂盒及DC细胞诱导培养方法。

发明内容

（一）发明目的

为解决背景技术中存在的技术问题，本发明提出一种DC细胞诱导试剂盒及DC细胞诱导培养方法，本发明通过安装试剂管管身和试剂外仓等结构，实现在将试剂管管身放入到试剂外仓的内部，而试剂管管身与试剂外仓内壁形成的空间保护试剂管管身内部的细胞溶液不会受到碰撞损坏，同时旋转固定块使第一螺纹环与第二螺纹环相互啮合，进而将密封塞塞在试剂管管身的开口处对试剂管管身施行密封措施，同时本发明提供的DC细胞诱导培养的方法相较与原有手段培养出的DC细胞更加的成熟，通过调整细胞浓度和二次重培的手段提升DC细胞诱导分化的成功率。

（二）技术方案

本发明提供了一种DC细胞诱导试剂盒及DC细胞诱导培养方法，包括有诱导试剂盒盒体和试剂盒盒盖，所述诱导试剂盒盒体的内壁四周设置有两片试剂放置架，所述试剂放置架的顶部军开设有通孔，通孔的内部放置有试剂外仓，所述诱导试剂盒盒体的顶部一侧焊接有两个连接柱，所述连接柱相互靠近的一侧均转动连接有固定柱，所述固定柱相互靠近的一侧焊接有转轴，所述转轴远离诱导试剂盒盒体的一侧焊接有连接块，所述连接块远离转轴的一侧与试剂盒盒盖的一侧侧边焊接。

作为本发明一种优选的方案，所述诱导试剂盒盒体的顶部四周边缘均设置有密封条，所述试剂盒盒盖靠近诱导试剂盒盒体的一侧四周边缘均设置有密封槽,通过试剂盒盒盖的一侧四周边缘设置密封槽与盒体上的密封条相互契合而能够组成较为紧密的密封关系。

作为本发明一种优选的方案，所述试剂外仓的外圈顶部焊接有固定套管，所述固定套管的一侧焊接有连接条，所述连接条和固定套管均为塑料或树脂材质。

作为本发明一种优选的方案，所述固定套管的顶部边缘焊接有第二螺纹环，所述第二螺纹环的内圈开设有螺纹，所述固定套管的内圈焊接有承托环。

作为本发明一种优选的方案，所述固定套管内部焊接的承托环的顶部放置有凸环，所述凸环的底部焊接有贯穿延伸至固定套管内部的试剂管管身。

作为本发明一种优选的方案，所述凸环的内圈设置有延伸至凸环内部的密封塞，所述密封塞的顶部焊接有固定块，所述固定块的外圈套设有活动环，所述固定块靠近凸环的一侧设置有第一螺纹环，所述第一螺纹环的外圈设置有螺纹，所述第一螺纹环外圈的螺纹与第二螺纹环的内圈螺纹相互啮合，所述连接条远离固定套管的一端与固定块外圈的活动环外圈固定连接。

作为本发明一种优选的方案，还包括DC细胞诱导培养方法，诱导步骤如下：

S1：取得哺乳动物的股骨和胫骨，去除肌肉组织后，酒精浸泡消毒灭菌，取出骨髓至培养皿中，收集骨髓悬液，离心处理骨髓悬液后重悬细胞，配制贮存液对骨髓悬液溶血处理，随后配制培养液重悬细胞，获得骨髓细胞；

S2：调整骨髓细胞浓度，放入培养箱培养，更换新鲜培养液，并补足细胞因子，吸出培养液，收集DC细胞，继续培养，收集悬浮细胞，获得成熟的DC细胞。

与现有技术相比，本发明的上述技术方案具有如下有益的技术效果：

本发明通过安装试剂管管身和试剂外仓等结构，实现在将试剂管管身放入到试剂外仓的内部，而试剂管管身与试剂外仓内壁形成的空间保护试剂管管身内部的细胞溶液不会受到碰撞损坏，同时旋转固定块使第一螺纹环与第二螺纹环相互啮合，进而将密封塞塞在试剂管管身的开口处对试剂管管身施行密封措施，同时本发明提供的DC细胞诱导培养的方法相较与原有手段培养出的DC细胞更加的成熟，通过调整细胞浓度和二次重培的手段提升DC细胞诱导分化的成功率。

附图说明

为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据提供的附图获得其他的附图。

图1为本发明提出的一种DC细胞诱导试剂盒及DC细胞诱导培养方法的结构示意图。

图2为本发明提出的一种DC细胞诱导试剂盒及DC细胞诱导培养方法的盒盖结构示意图。

图3为本发明提出的一种DC细胞诱导试剂盒及DC细胞诱导培养方法的盒体结构示意图。

图4为本发明提出的一种DC细胞诱导试剂盒及DC细胞诱导培养方法的试剂放置架结构示意图。

图5为本发明提出的一种DC细胞诱导试剂盒及DC细胞诱导培养方法的试剂管结构示意图。

附图标记：1、诱导试剂盒盒体；2、试剂盒盒盖；3、连接块；4、转轴；5、固定柱；6、连接柱；7、试剂放置架；8、试剂外仓；9、连接条；10、固定套管；11、密封塞；12、第一螺纹环；13、固定块；14、凸环；15、试剂管管身；16、第二螺纹环。

具体实施方式

下文的描述本质上仅是示例性的而并非意图限制本公开、应用及用途。应当理解，在所有这些附图中，相同或相似的附图标记指示相同的或相似的零件及特征。各个附图仅示意性地表示了本公开的实施方式的构思和原理，并不一定示出了本公开各个实施方式的具体尺寸及其比例。在特定的附图中的特定部分可能采用夸张的方式来图示本公开的实施方式的相关细节或结构。

实施例一：参照图1-5，一种DC细胞诱导试剂盒，包括有诱导试剂盒盒体1和试剂盒盒盖2，其特征在于，诱导试剂盒盒体1的内壁四周设置有两片试剂放置架7，试剂放置架7的顶部军开设有通孔，通孔的内部放置有试剂外仓8，诱导试剂盒盒体1的顶部一侧焊接有两个连接柱6，连接柱6相互靠近的一侧均转动连接有固定柱5，固定柱5相互靠近的一侧焊接有转轴4，转轴4远离诱导试剂盒盒体1的一侧焊接有连接块3，连接块3远离转轴4的一侧与试剂盒盒盖2的一侧侧边焊接。

实施例二：参照图1-5，其在实施例一的基础上，一种DC细胞诱导试剂盒，诱导试剂盒盒体1的顶部四周边缘均设置有密封条，试剂盒盒盖2靠近诱导试剂盒盒体1的一侧四周边缘均设置有密封槽，试剂外仓8的外圈顶部焊接有固定套管10，固定套管10的一侧焊接有连接条9，连接条9和固定套管10均为塑料或树脂材质，固定套管10的顶部边缘焊接有第二螺纹环16，第二螺纹环16的内圈开设有螺纹，固定套管10的内圈焊接有承托环，固定套管10内部焊接的承托环的顶部放置有凸环14，凸环14的底部焊接有贯穿延伸至固定套管10内部的试剂管管身15，将试剂管管身15放入到试剂外仓8的内部，而试剂管管身15与试剂外仓8内壁形成的空间保护试剂管管身15内部的细胞溶液不会受到碰撞损坏，凸环14的内圈设置有延伸至凸环14内部的密封塞11，密封塞11的顶部焊接有固定块13，固定块13的外圈套设有活动环，固定块13靠近凸环14的一侧设置有第一螺纹环12，第一螺纹环12的外圈设置有螺纹，第一螺纹环12外圈的螺纹与第二螺纹环16的内圈螺纹相互啮合，旋转固定块13使第一螺纹环12与第二螺纹环16相互啮合，进而将密封塞11塞在试剂管管身15的开口处对试剂管管身15施行密封措施，连接条9远离固定套管10的一端与固定块13外圈的活动环外圈固定连接。

实施例三：参照图1-5，DC细胞诱导培养方法，取得哺乳动物的股骨和胫骨，去除肌肉组织后，酒精浸泡消毒灭菌，取出骨髓至培养皿中，收集骨髓悬液，离心处理骨髓悬液后重悬细胞，配制贮存液对骨髓悬液溶血处理，随后配制培养液重悬细胞，获得骨髓细胞，调整骨髓细胞浓度，放入培养箱培养，更换新鲜培养液，并补足细胞因子，吸出培养液，收集DC细胞，继续培养，收集悬浮细胞，获得成熟的DC细胞。

本发明的工作原理和具体阐述：

取得哺乳动物的股骨和胫骨，去除肌肉组织后，用盛有70%酒精的无菌培养皿浸泡消毒灭菌，利用无菌的PBS清洗后，再用注射器冲洗出骨髓至培养皿中，收集骨髓悬液，滤去肌肉组织，离心过滤，加入氯化铵红细胞裂解液重悬细胞进行溶血处理，随后室温孵育，配制贮存液加入骨髓悬液，获得骨髓细胞；

将获得的骨髓细胞铺至盛有培养液的24孔培养板内，并加入到培养箱培养，每1-2天轻轻摇晃培养板，并在此期间更换新鲜培养液，补足骨髓细胞，利用光学显微镜观察骨髓细胞的生长情况，若发现损失的DC细胞过多，继续补充骨髓细胞，在2-5天后收集悬浮细胞及巯松贴壁生长的细胞，吸出含DC细胞的培养液，补充新鲜的RPMI完全培养液，继续培养，后离心弃上清；调整细胞浓度后，细胞铺板至培养皿并在恒温正常二氧化碳含量的培养箱继续培养1-2天；收集悬浮细胞，获得更加成熟的DC细胞。

并且将获得成熟DC细胞放入到培养液的试剂管管身15内部，同时将试剂管管身15放入到试剂外仓8的内部，而试剂管管身15与试剂外仓8内壁形成的空间保护试剂管管身15内部的细胞溶液不会受到碰撞损坏，同时旋转固定块13使第一螺纹环12与第二螺纹环16相互啮合，进而将密封塞11塞在试剂管管身15的开口处对试剂管管身15施行密封措施，并将试剂外仓8整齐摆放插入试剂放置架7上的通孔内部，并关闭试剂盒盒盖2，使试剂盒盒盖2与诱导试剂盒盒体1的顶部边缘闭合。

最后应说明的是：以上实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的精神和范围。

Claims (7)

1.一种DC细胞诱导试剂盒，包括有诱导试剂盒盒体（1）和试剂盒盒盖（2），其特征在于，所述诱导试剂盒盒体（1）的内壁四周设置有两片试剂放置架（7），所述试剂放置架（7）的顶部军开设有通孔，通孔的内部放置有试剂外仓（8），所述诱导试剂盒盒体（1）的顶部一侧焊接有两个连接柱（6），所述连接柱（6）相互靠近的一侧均转动连接有固定柱（5），所述固定柱（5）相互靠近的一侧焊接有转轴（4），所述转轴（4）远离诱导试剂盒盒体（1）的一侧焊接有连接块（3），所述连接块（3）远离转轴（4）的一侧与试剂盒盒盖（2）的一侧侧边焊接。

2.根据权利要求1所述的一种DC细胞诱导试剂盒，其特征在于，所述诱导试剂盒盒体（1）的顶部四周边缘均设置有密封条，所述试剂盒盒盖（2）靠近诱导试剂盒盒体（1）的一侧四周边缘均设置有密封槽。

3.根据权利要求1所述的一种DC细胞诱导试剂盒，其特征在于，所述试剂外仓（8）的外圈顶部焊接有固定套管（10），所述固定套管（10）的一侧焊接有连接条（9），所述连接条（9）和固定套管（10）均为塑料或树脂材质。

4.根据权利要求3所述的一种DC细胞诱导试剂盒，其特征在于，所述固定套管（10）的顶部边缘焊接有第二螺纹环（16），所述第二螺纹环（16）的内圈开设有螺纹，所述固定套管（10）的内圈焊接有承托环。

5.根据权利要求3-4任一项所述的一种DC细胞诱导试剂盒，其特征在于，所述固定套管（10）内部焊接的承托环的顶部放置有凸环（14），所述凸环（14）的底部焊接有贯穿延伸至固定套管（10）内部的试剂管管身（15）。

6.根据权利要求3、4和5所述的一种DC细胞诱导试剂盒，其特征在于，所述凸环（14）的内圈设置有延伸至凸环（14）内部的密封塞（11），所述密封塞（11）的顶部焊接有固定块（13），所述固定块（13）的外圈套设有活动环，所述固定块（13）靠近凸环（14）的一侧设置有第一螺纹环（12），所述第一螺纹环（12）的外圈设置有螺纹，所述第一螺纹环（12）外圈的螺纹与第二螺纹环（16）的内圈螺纹相互啮合，所述连接条（9）远离固定套管（10）的一端与固定块（13）外圈的活动环外圈固定连接。

7.根据权利要求1-6任一项所述的一种DC细胞诱导试剂盒，其特征在于，还包括DC细胞诱导培养方法，诱导步骤如下：

S1：取得哺乳动物的股骨和胫骨，去除肌肉组织后，酒精浸泡消毒灭菌，取出骨髓至培养皿中，收集骨髓悬液，离心处理骨髓悬液后重悬细胞，配制贮存液对骨髓悬液溶血处理，随后配制培养液重悬细胞，获得骨髓细胞；

S2：调整骨髓细胞浓度，放入培养箱培养，更换新鲜培养液，并补足细胞因子，吸出培养液，收集DC细胞，继续培养，收集悬浮细胞，获得成熟的DC细胞。

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