CN114588167B - 过氧麦角甾醇在制备抑制猪δ冠状病毒药物中的应用 - Google Patents

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Abstract

本发明属于抗病毒的药物制备领域，具体涉及过氧麦角甾醇在制备抑制猪δ冠状病毒药物中的应用，还涉及猪δ冠状病毒引起的仔猪腹泻的药物中的应用。本发明发现了过氧麦角甾醇的新作用，并且为猪δ冠状病毒病引起的疾病的治疗提供了一种全新的药物治疗方法。

Description

过氧麦角甾醇在制备抑制猪δ冠状病毒药物中的应用
技术领域
本发明属于抗病毒的药物制备领域，具体涉及过氧麦角甾醇在制备抑制猪δ冠状病毒药物中的应用。
背景技术
隐孔菌(Cryptoporus volvatus)是一种腐生真菌，属于多孔菌科(Polyporaceae)。这种真菌在中国，朝鲜，日本，欧洲和美洲都有发现。这种真菌的子实体自公元15世纪以来在中国被用于治疗哮喘和支气管炎(Wu ZY(1990)Xin-Hua compendium ofmateria medica.Shanghai Science and Technology Publishing House,Shanghai)。
隐孔菌中含有大量的甾醇类物质，而过氧麦角甾醇(5a,8a-epidioxy-22E-ergosta-6,22-dien-3b-ol，Ergosterol peroxide，EP，)是其中一种。传统意义上这些甾醇类物质在体外具有一定的抗肿瘤作用(麦角甾醇对肝癌细胞HepG2增值及p21表达的影响2011中药药理与临床)。但目前还没有关于过氧麦角甾醇其他用途的更多报道。
发明内容
本发明的目的是提供一种过氧麦角甾醇的新用途，具体的，提供制备抑制猪δ冠状病毒(porcine deltacoronavirus，PDCoV)药物中的应用。
本发明首次发现过氧麦角甾醇对于猪δ冠状病毒(porcine deltacoronavirus，PDCoV)具有一定的抑制作用，特提出本发明。
本发明还保护过氧麦角甾醇在制备由猪δ冠状病毒(porcine deltacoronavirus，PDCoV)引起的疾病的药物中的应用。
本发明还保护氧麦角甾醇在制备由猪δ冠状病毒(porcine deltacoronavirus，PDCoV)引起的仔猪腹泻的药物中的应用。
本发明还保护过氧麦角甾醇在制备预防由猪δ冠状病毒(porcinedeltacoronavirus，PDCoV)引起的疾病的药物中的应用。
本发明还保护过氧麦角甾醇在制备预防由猪δ冠状病毒(porcinedeltacoronavirus，PDCoV)引起的仔猪腹泻的药物中的应用。
本发明还保护过氧麦角甾醇在制备由猪δ冠状病毒(porcine deltacoronavirus，PDCoV)引起的仔猪腹泻的饲料中的应用。
本发明还保护一种用于防治由猪δ冠状病毒(porcine deltacoronavirus，PDCoV)引起的仔猪腹泻的药物，所述药物中含有过氧麦角甾醇。
优选的，所述麦角甾醇的施用量为2～3mg/kg/天。
本发明还保护一种用于防治由猪δ冠状病毒(porcine deltacoronavirus，PDCoV)引起的仔猪腹泻的饲料，所述饲料中含有过氧麦角甾醇。
优选的，所述麦角甾醇的饲喂量为2～3mg/kg/天。
本发明具有如下有益效果：
本发明首次发现过氧麦角甾醇对于猪δ冠状病毒(porcine deltacoronavirus，PDCoV)具有一定的的抑制作用，可应用于制备与上述病毒相关的药物的制备，还可在猪饲料中添加上述药物用于相关疾病的防治。本发明这不仅是发现了过氧麦角甾醇的新作用，并且为本没有治疗方案的猪δ冠状病毒病引起的疾病的治疗提供了一种全新的药物治疗方法。并且在细胞实验上本物质在有效浓度上不存在细胞毒性。
附图说明
图1为过氧麦角甾醇对LLC-PK1细胞毒性检测；
图2为过氧麦角甾醇抑制猪δ冠状病毒在LLC-PK1细胞上复制的实验；
图3为过氧麦角甾醇缓解猪δ冠状病毒引起的仔猪腹泻图；
图4为过氧麦角甾醇缓解猪δ冠状病毒引起的仔猪发热图；
图5为过氧麦角甾醇抑制猪δ冠状病毒在仔猪肠道内的复制的情况示意图。
具体实施方式
以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。
实施例中涉及的麦角甾醇参考文献进行过氧麦角甾醇的制备。得到纯度为97％的样品(J.Wang,G.Li,N.Lv,L.Cao,L.Shen,J.Si.Chemical constituents from thefruiting bodies of Cryptoporus volvatus.Arch Pharm Res 39(2016)747-754)。
实施例1
本实施例涉及过氧麦角甾醇在有效抗病毒的浓度下对LLC-PK1细胞的毒性的测试。
将不同浓度的(3.9-248μM)的过氧麦角甾醇加入到已经铺满96孔板的LLC-PK1细胞中培养36h小时。完成后，使用PBS对细胞进行清洗3次，然后加入100μLMEM培养液和10μLCCK-8溶液(Cell Counting Kit-8，DOJINDO,Japan)，孵育2小时，在450nm下读取吸光度值数。吸光度越高说明加入的药物对细胞的毒性越小。结果表明在实验浓度下过氧麦角甾醇对LLC-PK1没有细胞毒性(结果如图1)。
实施例2
本实施例涉及过氧麦角甾醇在体外抑制猪δ冠状病毒的复制的试验。
将猪δ冠状病毒接种于LLC-PK1细胞，之后加入124μM过氧麦角甾醇，同时将利巴韦林(50μM)，姜黄素(31.2μM)和黄芪甲苷(100μM)作为对照药物加入到相应的细胞组别中。在5％二氧化碳，37℃培养条件下培养24小时。完成操作后将细胞取出固定，进行免疫荧光测定(抗体由中国农业大学刘平黄教授赠送)。结果表明过氧麦角甾醇可以在体外抑制猪δ冠状病毒的复制(如图2)，由图2可知：与感染病毒组，添加利巴韦林、姜黄素、黄芪甲苷组相比，过氧麦角甾醇保护组的标记病毒的荧光(Anti-PDCoV)明显减少，说明病毒的复制被抑制。
实施例3
本实施例涉及过氧麦角甾醇对猪δ冠状病毒感染的仔猪的保护作用的试验。
将15头7日龄的仔猪随机分为三组。其中空白对照组(n＝5)，攻毒组(n＝5)，过氧麦角甾醇保护组(n＝5)，试验期5天。第一天，攻毒组与保护组均口服猪δ冠状病毒(106TCID50/mL每头)；第一天至第三天，保护组每天饲喂过氧麦角甾醇(2.5mg/kg每头)。第五天屠宰。实验过程中每天对仔猪进行体温测量与粪便评分。屠宰后，收集仔猪肠道组织样品，并通过Western blotting方法对仔猪回肠的病毒量进行测定。实验结果表明过氧麦角甾醇可以减轻猪δ冠状病毒感染引起的仔猪腹泻(图3)和体温升高(图4)，由图3可知过氧麦角甾醇保护组的仔猪粪便评分接近健康组，而攻毒组的仔猪粪便评分明显高于健康组；由图4可知过氧麦角甾醇保护组的仔猪体温显著低于攻毒组，与健康组接近；由图5可知攻毒组的仔猪肠道组织中的病毒蛋白形成的免疫印迹灰度显著高于过氧麦角甾醇保护组，表明过氧麦角甾醇抑制了猪δ冠状病毒在仔猪肠道内的复制。因此我们可以判定，服用过氧麦角甾醇缓解了猪δ冠状病毒感染引起的仔猪腹泻及发热，并且能够抑制猪δ冠状病毒在体内的复制。
粪便评级标准：
1分：固态，但不坚硬；能弯曲，有分段；捡拾粪便后地面无或少量粘黏粪便；
2分：圆木状的，没有或很少有可见的分段；表面湿润；捡拾后地面有残留，但粪便维持形状；
3分：非常潮湿；明显可见的圆木状粪便，捡拾后地面有残留且粪便不能维持形状；
4分：非常潮湿但有明显形状；呈堆状而不是明显的圆木样；捡拾后地面有残留且粪便不能维持形状；
5分：有纹理但没有一定的形状，呈堆状或斑点状；捡拾后地面有残留；
6分：水样，无纹理，扁平摊开，呈胶状
虽然，上文中已经用一般性说明、具体实施方式及试验，对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。

Claims (1)

1.过氧麦角甾醇在制备用于体外抑制猪δ冠状病毒(porcine deltacoronavirus，PDCoV)的药物中的应用，所述过氧麦角甾醇的浓度为124μM。
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