CN114588155B - 一种蜈蚣喹啉类化合物的用途 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种从蜈蚣中分离得到的两个喹啉类新化合物及其制备方法、用途，以蜈蚣药材为原料，通过提取，浓缩，再经萃取、柱色谱等步骤分离得到3‑羟基‑8‑喹啉硫酸酯、3‑羟基‑4‑甲氧基‑8‑喹啉硫酸酯的两个喹啉类新化合物。体外抗肿瘤细胞活性研究证明，本发明化合物对所选肿瘤细胞增殖具有较强的抑制作用，具有显著的抗肿瘤活性，可用于抗肿瘤药物的开发与临床肿瘤的治疗。

Description

一种蜈蚣喹啉类化合物的用途
技术领域
本发明属于中药化学和医药领域，具体公开了一种从蜈蚣中分离得到的新化合物，尤其涉及一种从蜈蚣中分离得到的两个喹啉类新化合物及其制备方法、用途。
背景技术
蜈蚣是我国传统中药，首载于《神农本草经》，其味辛，性温，有毒，归肝经，具有息风镇痉，通络止痛，攻毒散结之功效，用于肝风内动，痉挛抽搐，小儿惊风，中风口嗝，半身不遂，破伤风，风湿顽痹，偏正头痛，疮疡，瘰疬，蛇虫咬伤等。因蜈蚣具有较强的通络散结攻毒之效，历代医家亦多用来治疗癥、积、恶疮等陈疴顽疾。近现代以来，多医家用其治疗恶性肿瘤，取得良好疗效。
现代研究表明，蜈蚣具有抗肿瘤、抗血栓、镇痛、抗凝、抗菌、抗惊厥、抗衰老等药理活性，主要化学成分有蛋白质、多肽、多糖、脂肪酸、氨基酸、微量元素以及特殊小分子化合物等。在众多的小分子化合物中，喹啉类因具有抗肿瘤、抗菌、防治心血管疾病等多方面的药理活性，较为受人关注。
1996年，韩国学者Surk-Sik Moon等发表文章Jineol，acytotoxic Alkaloid fromthe Centipede Scolopendra subspinipes(J.Nat.Prod)首次报道从少棘蜈蚣中分离出喹啉类生物碱3，8-二羟基喹啉(Jineol)，并通过试验证明其对人类肿瘤细胞系—肺癌细胞(A-549)、卵巢癌细胞(SKOV-3)、人结肠癌细胞(HCT-15)、人恶性黑色素瘤细胞(SK-MEL-2)等均有适度的抑制作用。Naoki等报道(A Novel Quinoline Alkaloid Possessing a 7-Benzyl Group from the Centipede，Scolopendra subspinipes.Chem.Pharm.Bull.2001)从少棘蜈蚣中分离出一种新的喹啉类生物碱2-羟基-7-[(4-羟基-3-甲氧苯基)甲基]-3-甲氧基-8-喹啉硫酸盐，命名为蜈蚣素(Scolopendrine)。CN101370781A公开了一种用于预防和治疗心血管疾病的新型喹啉类化合物，该化合物是从蜈蚣中提取和纯化的。CN104529891A公开了从少棘蜈蚣中分离出的3，5-二羟基喹啉以及其抗肝癌、肺癌和结肠癌的活性。
发明内容
本发明人对蜈蚣进行了深入研究，发现两个蜈蚣喹啉类新化合物及其抗肿瘤活性。
本发明的目的在于提供制备上述两个蜈蚣喹啉类新化合物的方法。
本发明的另一目的在于提供一种具有抗肿瘤活性的蜈蚣喹啉类化合物及其该化合物在制备抗肿瘤药物中的应用。
本发明的上述目的由以下的技术方案得以实现，所述技术方案具体包括两个蜈蚣喹啉类新化合物的提取分离，结构鉴定，抗肿瘤活性研究等。
具有下述结构式的蜈蚣喹啉类化合物：
化合物I R1＝H
化合物II R1＝OCH3。
所述两个蜈蚣喹啉类新化合物的制备步骤为：
1)提取：以蜈蚣为原料，以6-12倍量水、甲醇溶液或乙醇溶液提取1-5次，过滤，合并过滤液，浓缩至1倍量，得提取浓缩液；
2)萃取：步骤1)提取浓缩液以1倍量的乙酸乙酯、氯仿、二氯甲烷、乙醚或丙酮萃取1-6次，得水部分；
3)柱色谱层析：步骤2)所述水部分经柱色谱层析，得目标洗脱液，浓缩，得浓缩目标洗脱液；
4)精制：步骤3)所述浓缩目标洗脱液经色谱法纯化，干燥，得化合物I和化合物II。
所述蜈蚣为蜈蚣科动物少棘蜈蚣S.subspinipes mutilans L.Koch、多棘蜈蚣S.mutidens Newport、黑头蜈蚣S.negrocapitis Zhang et Wang、哈氏蜈蚣S.dohaaniBrandt或墨江蜈蚣S.mojiangica C.Z.Zhang的干燥体。
步骤2)所述水部分通过大孔树脂色谱柱，先用水洗脱1-10BV，再用30％-90％乙醇洗脱1-6BV，收集乙醇洗脱液，浓缩至1倍量，经聚酰胺色谱柱，先用水洗脱1-10BV，再用浓度为0.001mol/L-0.1mol/L氢氧化钠溶液洗脱1-6BV，收集氢氧化钠溶液洗脱液，调pH＝7.0，浓缩至0.1倍量，得浓缩目标洗脱液。
步骤3)所述柱色谱层析为大孔吸附树脂柱色谱层析、聚酰胺柱色谱层析或两者联用。
优选地，所述大孔树脂为弱极性大孔树脂或中极性大孔树脂，优选地，所述大孔树脂的为AB-8、D101、XDA-6、XDA-8、DM130中的一种或几种，最佳为XDA-8。
步骤4)所述色谱法为中低压色谱法、高压色谱法或两者联用，所述色谱填料为反相硅胶。
步骤3)所述浓缩目标洗脱液以中低压色谱洗脱分离，以乙腈：0.1％磷酸水溶液＝5-20：95-80为流动相，检测波长为254nm，得蜈蚣喹啉类化合物I和化合物II粗品，所述粗品以高压色谱精制，以乙腈：0.1％磷酸水溶液＝5-20：95-80为流动相，检测波长为254nm，得化合物I和化合物II，调pH＝7.0，浓缩，浓缩液通过中低压色谱除盐，干燥，即得。
本发明的喹啉类新化合物Ⅰ和化合物II，经过ESI-MS(positive)，结合IR，1H-NMR，13C-NMR图谱的分析，确证了其结构。
化合物I为白色粉末，ESI-MS(positive)给出m/z：264.0[M+Na]+；ESI-MS(negative)给出m/z：240.0[M-H]-。通过ESI-MS图谱综合分析，可以确定该化合物的分子量为241.0。因分子量为奇数，推测可能含奇数氮。结合IR，1H-NMR，13C-NMR确定其分子式为C9H7NO5S。
IR(以溴化钾压片)图谱显示有3532.97cm-1，1573.72cm-1，1563.59cm-1，1350.24cm-1，1319.76cm-1，1184.73cm-1，以上信息可以推测含有羟基喹啉结构；又有1237.36cm-1，1046.55cm-1，759.89cm-1，推测含有SO2。
1H-NMR(DMSO-d6，400MHz)显示：在低场区有5个烯质子，分别为δ8.52(1H，d，J＝2.8Hz)，δ7.63(1H，dd，J＝2.0Hz)，δ7.44(1H，d，J＝2.8Hz)，δ7.42(1H，dd，J＝2.0Hz，8.4Hz)，δ7.39(1H，t，J＝7.2Hz)。
13C-NMR(DMSO-d6，400MHz)显示：共有9个碳信号在低场区，均芳香碳，结合DEPT谱显示有5个次甲基分别为δ142.90、δ127.19、δ120.73、δ115.64、δ114.63，4个季碳分别为δ151.39、δ150.04、δ135.73、δ130.73。
1H-1HCOSY谱显示H(δ8.52)与H(δ7.44)相偶合，H(δ7.63)与H(δ7.39)相偶合，H(δ7.39)与H(δ7.42)、H(δ7.63)相偶合。
由HSQC谱可知H(δ8.52)与C(δ142.90)相关，H(δ7.63)与C(δ114.63)相关，H(δ7.44)与C(δ115.64)相关，H(δ7.42)与C(δ120.73)相关，H(δ7.39)与C(δ127.19)相关。
由HMBC谱可知：季碳C(δ151.39，C-3)与H(δ8.52，H-2)、H(δ7.44，H-4)有远程偶合；C(δ150.04，C-8)与H(δ7.63，H-7)、H(δ7.39，H-6)有远程偶合；C(δ135.73，C-8a)与H(δ8.52，H-2)、H(δ7.63，H-7)、H(δ7.44，H-4)、H(δ7.42，H-5)均有远程偶合；C(δ130.73，C-4a)与H(δ7.42，H-5)、H(δ7.39，H-6)有远程偶合。另外次甲基碳C(δ142.90，C-2)与H(δ7.44，H-4)有远程偶合；C(δ120.73，C-5)与H(δ7.44，H-4)有远程偶合；C(δ120.73，C-4)与H(δ7.42，H-5)有远程偶合。在NOESY谱中：H-4和H-5之间存在NOE信号。根据以上分析可确认化合物I的分子结构。经检索，未见与之重复的化合物，证明该化合物为全新化合物，命名为3-羟基-8-喹啉硫酸酯。化合物Ⅰ的NMR数据见表1。
表1 NMR Data for compound I(in DMSO-d6)
化合物II为淡黄色粉末状固体，ESI-MS(positive)给出m/z：272.0[M+H]+；通过ESI-MS图谱综合分析，可以确定该化合物的分子量为271.0。因分子量为奇数，推测可能含奇数氮。结合IR，1H-NMR，13C-NMR确定其分子式为C10H9NO6S。
IR(以溴化钾压片)图谱显示有3221.80cm-1，1598.23cm-1，1568.36cm-1，1344.45cm-1，1313.00cm-1，1174.89cm-1，以上信息可以推测含有羟基喹啉结构；又有1213.00cm-1，1036.05cm-1，702.10cm-1，推测含有SO2；1246.83cm-1，1010.81cm-1，推测含有C-O-C。
1H-NMR(DMSO-d6，400MHz)显示：在低场区有1个活泼氢为δ11.02(1H，br.s，OH)和4个烯质子，分别为δ8.60(1H，s)，δ7.88(1H，d，J＝8.8Hz)，δ7.85(1H，d，J＝7.6Hz)，δ7.68(1H，t，J＝8.4Hz)；在高场区有3个H信号为δ4.38(3H，s，O-CH3)。
13C-NMR(DMSO-d6，400MHz)显示：共有9个碳信号在低场区，均芳香碳，1个碳信号在高场区。结合DEPT谱显示有4个次甲基分别为δ138.66，δ128.70，δ119.65，δ116.45；1个甲基为δ62.21；5个季碳信号分别为δ153.87，δ145.48，δ141.36，δ130.34，δ124.70。
1H-1HCOSY谱显示H(δ7.68)与H(δ7.88)、H(δ7.85)相偶合。
由HSQC谱可知H(δ8.60)与C(δ138.66)相关，H(δ7.68)与C(δ128.70)相关，H(δ7.85)与C(δ119.65)相关，H(δ7.88)与C(δ116.45)相关，H(δ4.38)与C(δ62.21)相关。
由HMBC谱可知：季碳C(δ153.87，C-4)与H(δ8.60，H-2)、H(δ7.88，H-5)、H(δ4.38，OCH3)有远程偶合；C(δ145.48，C-8)与H(δ7.85，H-7)、H(δ7.68，H-6)有远程偶合；C(δ141.36，C-3)与H(δ8.60，H-2)有远程偶合；C(δ130.34，C-8a)与H(δ8.60，H-2)、H(δ7.88，H-5)、H(δ7.85，H-7)均有远程偶合；C(δ124.70，C-4a)与H(δ7.88，H-5)、H(δ7.68，H-6)有远程偶合。另外次甲基碳C(δ128.70，C-6)与H(δ7.88，H-5)、H(δ7.85，H-7)有远程偶合；C(δ119.65，C-7)与H(δ7.88，H-5)、H(δ7.68，H-6)有远程偶合；C(δ116.45，C-5)与H(δ7.85，H-7)、H(δ7.68，H-6)有远程偶合。在NOESY谱中：H-6和H-5、H-7之间存在NOE信号。以上信息可确认化合物II的结构。经检索，未见与之重复的化合物，证明该化合物为全新化合物，命名为3-羟基-4-甲氧基-8-喹啉硫酸酯。化合物II的NMR数据见表2。
表2 NMR Data for compound II(in DMSO-d6)
通过化合物体外抗肿瘤细胞活性试验，进一步验证本发明蜈蚣喹啉类化合物Ⅰ和化合物II的抗肿瘤活性，试验材料、方法及结果如下：
1)试验材料
采用MTT法测定两个新化合物的作用强度和对不同类型肿瘤细胞的敏感性，以五氟尿嘧啶(5-Fu，上海旭东海普制药厂，25mg/mL，150511)作为阳性对照药物，试验药物(化合物Ⅰ、II)用培养液溶解并稀释至浓度分别为：100mg/mL、50mg/mL、25mg/mL、12.5mg/mL、6.25mg/mL、3.125mg/mL和阳性药物(5-Fu)用培养基溶液稀释至浓度为25mg/mL；另设空白对照组。
癌症细胞采用乳腺癌细胞(MCF-7)、肺癌细胞(Calu-3)、结肠癌细胞(HCT-8)、肝癌细胞(HepG2)、胃癌细胞(SGC-7901)、宫颈癌细胞(Hela)，以上细胞均来自鲁南制药集团股份有限公司新药药理中心细胞培养室。
主要试剂包括：RPMI-1640培养基、胰蛋白酶、MTT、DMSO均为Sigma公司产品；小牛血清为杭州四季青生物工程材料有限公司产品；其余试剂均为生化试剂或分析纯级试剂。
主要设备包括：Multiskan FC酶标仪(赛默飞世尔)、CO2培养箱(德国Herseus公司)。
2)试验方法
①接种细胞：收集对数期细胞，根据不同细胞的生长速度确定每孔细胞数目，调整细胞悬液浓度，每孔加入100μl边缘孔用无菌PBS填充，接种完毕后将培养板移入CO2培养箱中，培养48h；
②显色：培养结束后，每孔加MTT溶液20μl。继续培养4h，终止培养，小心吸弃孔内培养上清液，对于悬浮细胞需要离心后再吸弃孔内上清液。每孔加150μlDMSO，震荡10min；
③比色：波长570nm(参比630nm)下(空白调零)，在酶标仪上测定各孔的紫外吸收值(OD)，记录结果，计算肿瘤细胞抑制率，并采用SPSS20软件计算IC50。
3)试验结果及结论见表3。
表3化合物I、II抗肿瘤细胞活性结果
由试验结果可知，化合物I、II对试验所选的乳腺癌细胞(MCF-7)、肺癌细胞(Calu-3)、结肠癌细胞(HCT-8)、肝癌细胞(HepG2)、胃癌细胞(SGC-7901)、宫颈癌细胞(Hela)等肿瘤细胞株均有较强的抑制作用，除宫颈癌细胞(Hela)外，对其他肿瘤细胞的IC50均在10μg/mL以下，表明化合物I、II对试验对象的肿瘤细胞增殖具有较强的抑制作用，可用于抗肿瘤药物的开发及临床肿瘤的预防与治疗。
附图说明
附图1是化合物I、II的结构式；
附图2是化合物I的HMBC图；
附图3是化合物II的HMBC图谱；
附图4是化合物I的1H-NMR图谱；
附图5是化合物I的13C-NMR图谱；
附图6是化合物II的1H-NMR图谱；
附图7是化合物II的13C-NMR图。
具体实施方式
下通过具体实施例进一步说明本发明，但本领域相关技术人员理应知晓，所述实施例并不以任何方式限制本发明。
实施例1化合物I、II的制备
1)提取：以1.0kg少棘蜈蚣为原料，以6倍量水提取1次，过滤，合并过滤液，浓缩至1.0kg，得提取浓缩液；
2)萃取：步骤1)所述提取浓缩液用1.0kg氯仿萃取1次，得水部分；
3)柱色谱层析：步骤2)所述水部分通过AB-8大孔树脂色谱柱，先用水洗脱1BV，再用30％乙醇洗脱1BV，收集乙醇洗脱液，浓缩至1.0kg，经聚酰胺色谱柱，先用水洗脱1BV，再用浓度为0.001mol/L氢氧化钠溶液洗脱1BV，收集氢氧化钠溶液洗脱液，调pH＝7.0，浓缩至0.1kg，得浓缩目标洗脱液；
4)精制：步骤3)所述浓缩目标洗脱液以反相硅胶中低压色谱洗脱分离，以乙腈：0.1％磷酸水溶液＝5：95为流动相，检测波长为254nm，得蜈蚣喹啉类化合物I和化合物II粗品，所述粗品以反相硅胶高压色谱精制，以乙腈：0.1％磷酸水溶液＝5：95为流动相，检测波长为254nm，得化合物I和化合物II，调pH＝7.0，浓缩，浓缩液通过反相硅胶中低压色谱除盐，干燥，得化合物I 146mg、化合物II 43mg。
实施例2化合物I、II的制备
1)提取：以1.0kg多棘蜈蚣为原料，以11倍量20％乙醇提取4次，过滤，合并过滤液，浓缩至1.0kg，得提取浓缩液；
2)萃取：步骤1)所述提取浓缩液用1.0kg丙酮萃取3次，得水部分；
3)柱色谱层析：步骤2)所述水部分通过D101大孔树脂色谱柱，先用水洗脱7BV，再用80％乙醇洗脱5BV，收集乙醇洗脱液，浓缩至1.0kg，经聚酰胺色谱柱，先用水洗脱9BV，再用浓度为0.08mol/L氢氧化钠溶液洗脱5BV，收集氢氧化钠溶液洗脱液，调pH＝7.0，浓缩至0.1kg，得浓缩目标洗脱液；
4)精制：步骤3)所述浓缩目标洗脱液以反相硅胶中低压色谱洗脱分离，以乙腈：0.1％磷酸水溶液＝20：80为流动相，检测波长为254nm，得蜈蚣喹啉类化合物I和化合物II粗品，所述粗品以反相硅胶高压色谱精制，以乙腈：0.1％磷酸水溶液＝20：80为流动相，检测波长为254nm，得化合物I和化合物II，调pH＝7.0，浓缩，浓缩液通过反相硅胶中低压色谱除盐，干燥，得化合物I 265mg、化合物II 74mg。
实施例3化合物I、II的制备
1)提取：以1.0kg墨江蜈蚣为原料，以9倍量10％乙醇提取3次，过滤，合并过滤液，浓缩至1.0kg，得提取浓缩液；
2)萃取：步骤1)所述提取浓缩液用1.0kg乙酸乙酯萃取5次，得水部分；
3)柱色谱层析：步骤2)所述水部分通过DM130大孔树脂色谱柱，先用水洗脱5BV，再用40％乙醇洗脱4BV，收集乙醇洗脱液，浓缩至1.0kg，经聚酰胺色谱柱，先用水洗脱8BV，再用浓度为0.05mol/L氢氧化钠溶液洗脱6BV，收集氢氧化钠溶液洗脱液，调pH＝7.0，浓缩至0.1kg，得浓缩目标洗脱液；
4)精制：步骤3)所述浓缩目标洗脱液以反相硅胶中低压色谱洗脱分离，以乙腈：0.1％磷酸水溶液＝15：85为流动相，检测波长为254nm，得蜈蚣喹啉类化合物I和化合物II粗品，所述粗品以反相硅胶高压色谱精制，以乙腈：0.1％磷酸水溶液＝15：85为流动相，检测波长为254nm，得化合物I和化合物II，调pH＝7.0，浓缩，浓缩液通过反相硅胶中低压色谱除盐，干燥，得化合物I 231mg、化合物II 82mg。
实施例4化合物I、II的制备
1)提取：以1.0kg哈式蜈蚣为原料，以8倍量50％乙醇提取5次，过滤，合并过滤液，浓缩至1.0kg，得提取浓缩液；
2)萃取：步骤1)所述提取浓缩液用1.0kg乙醚萃取4次，得水部分；
3)柱色谱层析：步骤2)所述水部分通过XDA-8大孔树脂色谱柱，先用水洗脱3BV，再用20％乙醇洗脱6BV，收集乙醇洗脱液，浓缩至1.0kg，经聚酰胺色谱柱，先用水洗脱2BV，再用浓度为0.01mol/L氢氧化钠溶液洗脱2BV，收集氢氧化钠溶液洗脱液，调pH＝7.0，浓缩至0.1kg，得浓缩目标洗脱液；
4)精制：步骤3)所述浓缩目标洗脱液以反相硅胶中低压色谱洗脱分离，以乙腈：0.1％磷酸水溶液＝11：89为流动相，检测波长为254nm，得蜈蚣喹啉类化合物I和化合物II粗品，所述粗品以反相硅胶高压色谱精制，以乙腈：0.1％磷酸水溶液＝11：89为流动相，检测波长为254nm，得化合物I和化合物II，调pH＝7.0，浓缩，浓缩液通过反相硅胶中低压色谱除盐，干燥，得化合物I 193mg、化合物II 51mg。
实施例5化合物I、II的制备
1)提取：以1.0kg少棘蜈蚣为原料，以10倍量70％乙醇提取2次，过滤，合并过滤液，浓缩至1.0kg，得提取浓缩液；
2)萃取：步骤1)所述提取浓缩液用1.0kg乙酸乙酯萃取4次，得水部分；
3)柱色谱层析：步骤2)所述水部分通过AB-8大孔树脂色谱柱，先用水洗脱6BV，再用50％乙醇洗脱3BV，收集乙醇洗脱液，浓缩至1.0kg，经聚酰胺色谱柱，先用水洗脱6BV，再用浓度为0.005mol/L氢氧化钠溶液洗脱3BV，收集氢氧化钠溶液洗脱液，调pH＝7.0，浓缩至0.1kg，得浓缩目标洗脱液；
4)精制：步骤3)所述浓缩目标洗脱液以反相硅胶中低压色谱洗脱分离，以乙腈：0.1％磷酸水溶液＝20：80为流动相，检测波长为254nm，得蜈蚣喹啉类化合物I和化合物II粗品，所述粗品以反相硅胶高压色谱精制，以乙腈：0.1％磷酸水溶液＝20：80为流动相，检测波长为254nm，得化合物I和化合物II，调pH＝7.0，浓缩，浓缩液通过反相硅胶中低压色谱除盐，干燥，得化合物I 209mg、化合物II 84mg。
实施例6化合物I、II的制备
1)提取：以1.0kg黑头蜈蚣为原料，以7倍量水提取4次，过滤，合并过滤液，浓缩至1.0kg，得提取浓缩液；
2)萃取：步骤1)所述提取浓缩液用1.0kg二氯甲烷萃取2次，得水部分；
3)柱色谱层析：步骤2)所述水部分通过D101大孔树脂色谱柱，先用水洗脱10BV，再用50％乙醇洗脱2BV，收集乙醇洗脱液，浓缩至1.0kg，经聚酰胺色谱柱，先用水洗脱3BV，再用浓度为0.09mol/L氢氧化钠溶液洗脱3BV，收集氢氧化钠溶液洗脱液，调pH＝7.0，浓缩至0.1kg，得浓缩目标洗脱液；
4)精制：步骤3)所述浓缩目标洗脱液以反相硅胶中低压色谱洗脱分离，以乙腈：0.1％磷酸水溶液＝16：84为流动相，检测波长为254nm，得蜈蚣喹啉类化合物I和化合物II粗品，所述粗品以反相硅胶高压色谱精制，以乙腈：0.1％磷酸水溶液＝16：84为流动相，检测波长为254nm，得化合物I和化合物II，调pH＝7.0，浓缩，浓缩液通过反相硅胶中低压色谱除盐，干燥，得化合物I 214mg、化合物II 73mg。
实施例7化合物I、II的制备
1)提取：以1.0kg多棘蜈蚣为原料，以10倍量60％乙醇提取3次，过滤，合并过滤液，浓缩至1.0kg，得提取浓缩液；
2)萃取：步骤1)所述提取浓缩液用1.0kg乙醚萃取1次，得水部分；
3)柱色谱层析：步骤2)所述水部分通过DM130大孔树脂色谱柱，先用水洗脱2BV，再用80％乙醇洗脱4BV，收集乙醇洗脱液，浓缩至1.0kg，经聚酰胺色谱柱，先用水洗脱2BV，再用浓度为0.003mol/L氢氧化钠溶液洗脱6BV，收集氢氧化钠溶液洗脱液，调pH＝7.0，浓缩至0.1kg，得浓缩目标洗脱液；
4)精制：步骤3)所述浓缩目标洗脱液以反相硅胶中低压色谱洗脱分离，以乙腈：0.1％磷酸水溶液＝8：92为流动相，检测波长为254nm，得蜈蚣喹啉类化合物I和化合物II粗品，所述粗品以反相硅胶高压色谱精制，以乙腈：0.1％磷酸水溶液＝8：92为流动相，检测波长为254nm，得化合物I和化合物II，调pH＝7.0，浓缩，浓缩液通过反相硅胶中低压色谱除盐，干燥，得化合物I 230mg、化合物II 81mg。
实施例8化合物I、II的制备
1)提取：以1.0kg多棘蜈蚣为原料，以8倍量50％乙醇提取3次，过滤，合并过滤液，浓缩至1.0kg，得提取浓缩液；
2)萃取：步骤1)所述提取浓缩液用1.0kg乙酸乙酯萃取3次，得水部分；
3)柱色谱层析：步骤2)所述水部分通过XDA-8大孔树脂色谱柱，先用水洗脱5BV，再用50％乙醇洗脱3BV，收集乙醇洗脱液，浓缩至1.0kg，经聚酰胺色谱柱，先用水洗脱5BV，再用浓度为0.01mol/L氢氧化钠溶液洗脱3BV，收集氢氧化钠溶液洗脱液，调pH＝7.0，浓缩至0.1kg，得浓缩目标洗脱液；
4)精制：步骤3)所述浓缩目标洗脱液以反相硅胶中低压色谱洗脱分离，以乙腈：0.1％磷酸水溶液＝10：90为流动相，检测波长为254nm，得蜈蚣喹啉类化合物I和化合物II粗品，所述粗品以反相硅胶高压色谱精制，以乙腈：0.1％磷酸水溶液＝10：90为流动相，检测波长为254nm，得化合物I和化合物II，调pH＝7.0，浓缩，浓缩液通过反相硅胶中低压色谱除盐，干燥，得化合物I 297mg、化合物II 86mg。
实施例9化合物I、II的制备
1)提取：以1.0kg少棘蜈蚣为原料，以10倍量30％乙醇提取1次，过滤，合并过滤液，浓缩至1.0kg，得提取浓缩液；
2)萃取：步骤1)所述提取浓缩液用1.0kg乙酸乙酯萃取6次，得水部分；
3)柱色谱层析：步骤2)所述水部分通过XDA-6大孔树脂色谱柱，先用水洗脱9BV，再用90％乙醇洗脱6BV，收集乙醇洗脱液，浓缩至1.0kg，经聚酰胺色谱柱，先用水洗脱4BV，再用浓度为0.1mol/L氢氧化钠溶液洗脱5BV，收集氢氧化钠溶液洗脱液，调pH＝7.0，浓缩至0.1kg，得浓缩目标洗脱液；
4)精制：步骤3)所述浓缩目标洗脱液以反相硅胶中低压色谱洗脱分离，以乙腈：0.1％磷酸水溶液＝12：8为流动相，检测波长为254nm，得蜈蚣喹啉类化合物I和化合物II粗品，所述粗品以反相硅胶高压色谱精制，以乙腈：0.1％磷酸水溶液＝12：8为流动相，检测波长为254nm，得化合物I和化合物II，调pH＝7.0，浓缩，浓缩液通过反相硅胶中低压色谱除盐，干燥，得化合物I 202mg、化合物II 67mg。
实施例10化合物I、II的制备
1)提取：以1.0kg哈氏蜈蚣为原料，以9倍量水提取2次，过滤，合并过滤液，浓缩至1.0kg，得提取浓缩液；
2)萃取：步骤1)所述提取浓缩液用1.0kg丙酮萃取5次，得水部分；
3)柱色谱层析：步骤2)所述水部分通过AB-8大孔树脂色谱柱，先用水洗脱7BV，再用60％乙醇洗脱2BV，收集乙醇洗脱液，浓缩至1.0kg，经聚酰胺色谱柱，先用水洗脱8BV，再用浓度为0.08mol/L氢氧化钠溶液洗脱4BV，收集氢氧化钠溶液洗脱液，调pH＝7.0，浓缩至0.1kg，得浓缩目标洗脱液；
4)精制：步骤3)所述浓缩目标洗脱液以反相硅胶中低压色谱洗脱分离，以乙腈：0.1％磷酸水溶液＝17：83为流动相，检测波长为254nm，得蜈蚣喹啉类化合物I和化合物II粗品，所述粗品以反相硅胶高压色谱精制，以乙腈：0.1％磷酸水溶液＝17：83为流动相，检测波长为254nm，得化合物I和化合物II，调pH＝7.0，浓缩，浓缩液通过反相硅胶中低压色谱除盐，干燥，得化合物I 198mg、化合物II 54mg。
实施例11化合物I、II的制备
1)提取：以1.0kg黑头蜈蚣为原料，以12倍量40％甲醇提取3次，过滤，合并过滤液，浓缩至1.0kg，得提取浓缩液；
2)萃取：步骤1)所述提取浓缩液用1.0kg乙酸乙酯萃取6次，得水部分；
3)柱色谱层析：步骤2)所述水部分通过XDA-8大孔树脂色谱柱，先用水洗脱6BV，再用80％乙醇洗脱1BV，收集乙醇洗脱液，浓缩至1.0kg，经聚酰胺色谱柱，先用水洗脱10BV，再用浓度为0.04mol/L氢氧化钠溶液洗脱1BV，收集氢氧化钠溶液洗脱液，调pH＝7.0，浓缩至0.1kg，得浓缩目标洗脱液；
4)精制：步骤3)所述浓缩目标洗脱液以反相硅胶中低压色谱洗脱分离，以乙腈：0.1％磷酸水溶液＝9：91为流动相，检测波长为254nm，得蜈蚣喹啉类化合物I和化合物II粗品，所述粗品以反相硅胶高压色谱精制，以乙腈：0.1％磷酸水溶液＝9：91为流动相，检测波长为254nm，得化合物I和化合物II，调pH＝7.0，浓缩，浓缩液通过反相硅胶中低压色谱除盐，干燥，得化合物I 263mg、化合物II 61mg。
实施例12化合物I、II的制备
1)提取：以1.0kg多棘蜈蚣为原料，以6倍量80％甲醇提取5次，过滤，合并过滤液，浓缩至1.0kg，得提取浓缩液；
2)萃取：步骤1)所述提取浓缩液用1.0kg乙酸乙酯萃取3次，得水部分；
3)柱色谱层析：步骤2)所述水部分通过DM130大孔树脂色谱柱，先用水洗脱4BV，再用70％乙醇洗脱5BV，收集乙醇洗脱液，浓缩至1.0kg，经聚酰胺色谱柱，先用水洗脱7BV，再用浓度为0.09mol/L氢氧化钠溶液洗脱2BV，收集氢氧化钠溶液洗脱液，调pH＝7.0，浓缩至0.1kg，得浓缩目标洗脱液；
4)精制：步骤3)所述浓缩目标洗脱液以反相硅胶中低压色谱洗脱分离，以乙腈：0.1％磷酸水溶液＝15：85为流动相，检测波长为254nm，得蜈蚣喹啉类化合物I和化合物II粗品，所述粗品以反相硅胶高压色谱精制，以乙腈：0.1％磷酸水溶液＝15：85为流动相，检测波长为254nm，得化合物I和化合物II，调pH＝7.0，浓缩，浓缩液通过反相硅胶中低压色谱除盐，干燥，得化合物I 270mg、化合物II 58mg。

Claims (1)

1.一种蜈蚣喹啉类化合物在制备抗肿瘤药物中的用途；
所述的蜈蚣喹啉类化合物结构式如下：
化合物I R1=H；
所述肿瘤为乳腺癌、肺癌、肝癌、胃癌、结肠癌和宫颈癌。
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