CN114573682A - 一种弹性蛋白肽及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种弹性蛋白肽及其制备方法。以弹性蛋白为原料，添加水和胰酶，低温混合处理一定时间后，去除上清液得到沉淀；将沉淀与水混合，调节溶液pH值，升温，酶解，灭酶，离心，浓缩，干燥，即得到弹性蛋白肽。本发明方法所制备的弹性蛋白肽具有较高的蛋白回收率和弹性蛋白酶抑制活性，且能回收部分蛋白酶。
Description
技术领域
本发明属于畜禽及水产加工副产物的高值化利用领域，具体涉及一种弹性蛋白肽及其制备方法。
背景技术
弹性蛋白是一种存在于多个结缔组织(皮肤、心脏动脉、肺、软骨)中的重要结构，由成纤维细胞和角质形成细胞合成分泌，具有良好的弹性和独特的生理功能。虽然弹性蛋白仅占皮肤总蛋白含量的2～4％，但它对皮肤结构和功能的维持至关重要，可提供皮肤抗拉强度和持久弹性。弹性蛋白不溶于水、弱酸或弱碱溶液。从氨基酸组成来看，弹性蛋白富含甘氨酸、脯氨酸、丙氨酸、亮氨酸和缬氨酸等非极性氨基酸，通常以含有大量的3-9个氨基酸组成的重复序列，形成灵活且稳定的结构。
在皮肤老化过程中，基质金属蛋白酶的上调导致了明显的弹性蛋白或胶原蛋白的降解，加速皮肤弹性劣变，加速皮肤老化。弹性蛋白酶是基质金属蛋白酶的一种，可通过降解各种细胞外基质成分并激活其他MMP来加速皮肤细胞基质蛋白水解，从而造成皮肤老化。因此，抑制弹性蛋白酶活性是弹性蛋白肽的重要生理活性。刘洋利用Alcalase水解牛弹性蛋白，得到得到了其序列分别为PY,GLPY,GLGPGV和GPGGVGAL四种多肽。通过对以上肽段分子化学合成，进一步发现四条肽段中GLPY的弹性蛋白酶抑制活性最强，在10mM浓度下抑制率为58.77％，其次为GPGGVGAL和GLGPGVG，PY的弹性蛋白酶抑制活性最弱。除GLGPGVG对弹性蛋白酶的抑制类型属于竞争性抑制外，其他三个多肽均为混合抑制类型。GLPY对弹性蛋白酶具有最强的亲和力(6.4kcal/mol)，其与弹性蛋白酶之间可形成5个键长较短的氢键，这可能是其具有最佳弹性蛋白酶抑制活性的主要原因。此外，在GLGPGVG、GPGGVGAL及PY和弹性蛋白酶的之间可分别观察到5个、3个及1个氢键，说明这四种多肽可以通过与弹性蛋白酶发生分子相互作用以抑制其活性。该工艺酶制剂的添加量为2％，酶解时间达24h的蛋白回收率也不到50％，水解度不到3％。(刘洋.弹性蛋白肽的抗皮肤光老化功效及其作用机制研究[D].华南理工大学,2019.)。
一种从牛软骨中提取弹性蛋白肽的方法公开了一种从牛软骨中提取弹性蛋白肽的方法，包括以下步骤：将牛软骨研磨成粉；将粉末转移至提取罐，加入粉末重量3-4倍的纯净水，升温至95℃，搅拌并持续2小时；降温至50℃-55℃后加入复配蛋白酶，反应结束后灭酶得到酶剪切液；降温至50-60℃，进行脱色脱味处理；采用渗透膜进行溶质和溶剂分离；采用纳滤膜进行150-1000Dal有机小分子的分离；浓缩、喷雾干燥。其利用蛋白肽以及非肽物质对热的稳定性不同，对牛软骨粉末进行高温提取，提取液经复配蛋白酶剪切再经不同的渗透膜浓缩过滤，得到分子量在150-1000Da范围内的小肽，且该分子量范围的肽占肽的85％以上，可以大大增加吸收效率。该发明未提及牛软骨酶解的蛋白回收率，也未提及酶解产物的弹性蛋白酶抑制活性。
鲣鱼弹性蛋白肽与胶原蛋白低聚肽的组合物及其制备方法公开了鲣鱼弹性蛋白肽与胶原蛋白低聚肽的组合物及其制备方法，所述鲣鱼弹性蛋白肽与胶原蛋白低聚肽的组合物的制备原料以重量份计，包括胶原蛋白低聚肽750～870、弹性蛋白肽5～12，本发明不仅能够抵御肌肤衰老，激活人体真皮层纤维细胞、显著促进人体胶原蛋白和弹性蛋白合成，具有保持肌肤弹性的作用；而且，还能改善肌肤的弹性和柔软度、增强血管弹性，缓解血管衰老、促进韧带细胞增殖，提高韧带功能以及增加关节稳定效果，巩固和恢复运动机能，抑制韧带骨化。该发明未提及酶解产物的蛋白回收率，也未提及酶解产物的弹性蛋白酶抑制活性。
一种弹性蛋白肽的提取方法公开了一种弹性蛋白肽的提取方法，属于生物活性物质提取技术领域。该方法为：鱼软骨剔除鱼肉等杂质，洗净绞碎后，乙醇溶液浸泡；加入Tris-HCl缓冲液，超声波处理；加入弹性蛋白酶，恒温水浴振荡培养；灭酶后将酶解液抽滤，弃滤渣，收集滤液；滤液进行第一次超滤，收集透过液；透过液，进行第二次超滤，收集超滤液；所得超滤液，透析除盐，旋转蒸发，冷冻干燥后的弹性蛋白多肽。本发明的提取方法简单快速，提取效率高，成本低。制备的弹性蛋白多肽，还原力强，能有效清除自由基，抗氧化效果佳，能够显著提高皮肤中胶原蛋白肽的含量。在食品、化妆品、医药行业具有的应用价值。
一种制备含多种特有氨基酸的弹性蛋白肽的方法公开了一种制备含多种特有氨基酸的弹性蛋白肽的方法，弹性蛋白原料来源于牛筋然后用碱性蛋白酶进行水解，再通过高温灭酶、超滤浓缩、离子交换树脂吸附、超声波辅助亲和反胶束提纯得到含多种特有氨基酸的弹性蛋白肽。本发明制备条件温和、提取选择性高、产品纯度高、易于连续化生产。上述发明未提及酶解产物的蛋白回收率，也未对酶解产物的活性进行评价。
一种弹性蛋白肽及其制备方法、应用公开了一种具有美容作用的弹性蛋白肽及其制备方法和用途，其制备方法包括以下步骤：取牛颈韧带预处理后，与水混合，调节pH值后，与蛋白酶混合后酶解，灭酶，离心、过滤收集滤液；取滤液，浓缩，干燥，制得所述弹性蛋白肽。本发明方法利用生物酶解技术，从牛颈韧带弹性蛋白中释放出具有美容功效的生物活性肽。采用本发明方法制得的牛颈韧带弹性蛋白肽的抗皱补水功效明显，可显著提高皮肤中的含水量和血清中透明质酸的含量，并能显著增加皮肤中胶原蛋白及弹性蛋白的含量。上述发明未提及酶解产物的蛋白回收率，也未提及如何从酶解产物中回收蛋白酶。
弹性蛋白肽具有促进成纤维细胞合成分泌胶原蛋白和弹性蛋白的功效，随着市场对弹性蛋白肽需求的日益提高，现有的弹性蛋白肽制备工艺因制备工艺复杂、制备成本高、产率低等问题远不能满足需求，因此，需要一种更高效且低成本的弹性蛋白肽制备工艺。
发明内容
本发明的目的是提供一种弹性蛋白肽及其制备方法，该制备方法的要点在于采用独特的酶解技术释放弹性蛋白中的弹性蛋白肽，获得较高的蛋白回收率和弹性蛋白酶抑制活性。此外，该制备方法还能回收部分蛋白酶活力。
为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：
本发明提供了一种弹性蛋白肽的制备方法，包括如下步骤：
步骤(1)：将弹性蛋白与水混合，加入胰酶，在0～25℃混合30～120min，离心，去除上清液得到沉淀；
步骤(2)：将沉淀与水混合，调节溶液pH值，升温，水解，灭酶，离心，浓缩，干燥，得弹性蛋白肽。
进一步地，步骤(1)中所述弹性蛋白来源于牛动脉、金枪鱼心脏动脉球、牛肺部、猪肺部、牛软骨、猪软骨、牛筋、猪动脉、牛颈韧带中任意一种。
进一步地，步骤(1)中所述弹性蛋白的制备方法为牛动脉、金枪鱼心脏动脉球、牛肺部、猪肺部、牛软骨、猪软骨、牛筋、猪动脉、牛颈韧带中任意一种与5～10倍质量的0.05～0.1mol/L氢氧化钠溶液混合，85～95℃加热30～60min，取沉淀水洗至中性，干燥，即为弹性蛋白。
进一步地，步骤(1)中，所述弹性蛋白与水的质量比为1:8～1:15；所述加入胰酶为弹性蛋白质量的0.1％～2％。
进一步地，步骤(2)中所述灭酶的条件为：80～100℃加热10～30min。
进一步地，步骤(2)中所述离心的条件为：5000-10000g离心10～30min。
进一步地，步骤(2)中，所述沉淀与水的质量比为1:5～1:15；所述调节溶液pH值至7.0～9.0；所述升温至37～55℃；所述水解的时间为3～24h。
本发明提供所述一种弹性蛋白肽的制备方法制备得到的一种弹性蛋白肽。
本发明相对于现有技术具有如下的优点及效果：
(1)与直接添加蛋白酶进行酶解相比，本发明利用弹性蛋白对胰酶中特定蛋白酶进行吸附，实现了弹性蛋白肽的蛋白回收率更高，而且具有更强的弹性蛋白酶抑制活性。
(2)本发明的制备方法还可以回收胰酶50％左右的蛋白酶活力，因此酶添加量更低。
(3)本发明工艺操作简单、蛋白回收率高、生产成本低、没有任何污染，所得弹性蛋白肽的具有较高的弹性蛋白酶抑制活性，具有潜在的抗皮肤衰老作用。
附图说明
图1为本发明制备弹性蛋白肽的控制酶解流程图。
图2为实施例1-2和对比例1的弹性蛋白肽分子量分布柱状图。
具体实施方式
以下结合附图和实施例对本发明的具体实施作进一步说明，但本发明的实施和保护不限于此。需指出的是，以下若有未特别详细说明之过程，均是本领域技术人员可参照现有技术实现或理解的。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，视为可以通过市售购买得到的常规产品。
本发明的目的在于提供一种弹性蛋白肽的制备方法。
本发明的另一目的在于提供由上述制备方法制得的具有潜在美容功效的弹性蛋白肽。
本发明的目的通过下述技术方案实现：
本发明实施例和对比例中所涉及到的试验指标其实验方法如下：
α-氨基氮含量的测定：采用甲醛滴定法。
总氮含量的测定：采用凯氏定氮法。
总蛋白酶活力测定：按照GB/T 23527-2009蛋白酶制剂中附录B蛋白酶活力的方法测定。
弹性蛋白酶酶活力测定：取100μLN-succinyl-Ala-Ala-Ala-pNA(N-琥珀酰-丙氨酸-丙氨酸-丙氨酸-p-硝基苯胺)(1mmol/L)，100μL样品溶液在96孔板的孔中混合，在410nm测定反应前反应物的吸光值A1，将板在全波长扫描仪中于25℃温育10min后于410nm测定反应后产物的吸光值A2。
酶活定义：在25℃，pH为8.0条件下，每分钟水解生成1ug对硝基苯胺所需的酶量定义为一个酶活单位。
标准曲线测定：用无水乙醇将对硝基苯胺称量配置一系列浓度(2ug/mL、4ug/mL、6ug/mL、8ug/mL、10ug/mL、12ug/mL、14ug/mL)，在410nm测定吸光值，制备标准曲线。
酶活计算公式：
X——样品的酶活力，u/g
A——由标准曲线得到的样品最终稀释液的对硝基苯浓度(ug/mL)
V——溶解样品所使用的容量瓶的体积，单位为毫升(mL)
0.2——反应试剂的总体积，单位为毫升(mL)
N——样品的稀释倍数
M——酶的质量，单位克(g)
10——反应时间，单位为分钟(min)
弹性蛋白酶抑制活性测定：将实施例和对比例所得的弹性蛋白肽样品溶解成蛋白浓度为10mg/mL的溶液，按照以下方法测定弹性蛋白酶抑制活性。根据刘洋(刘洋.弹性蛋白肽的抗皮肤光老化功效及其作用机制研究[D].华南理工大学,2019.)的方法作稍微修改，按照顺序在96孔板的孔中加入200μL样品溶液、50μL弹性蛋白酶(60mU/mL)和50μL LN-succinyl-Ala-Ala-Ala-pNA(1mmol/L)，充分混合。所有物质均溶于pH为8.0的50mM Tris-HCl缓冲液中。每个样品一式三份进行分析。将板在全波长扫描仪中于25℃温育10min。在410nm记录反应产物(对硝基苯胺)的吸光度。Tris-HCl缓冲液用作空白对照。弹性蛋白酶抑制活性计算公式如下：
其中As0是反应前样品组的吸光度，As是反应后样品组的吸光度；Ac0是反应前空白对照组的吸光度，Ac是反应后空白对照组的吸光度。
酶解产物分子量分布测定：采用高效液相色谱法测定肽分子量分布。检测条件：TSK gel G2000SWXL色谱分析柱，检测波长220nm；检测时间为30min；流动相(水∶乙腈的体积比例为80∶20，加入体积百分浓度0.1％的TFA(三氟乙酸))，流速为0.5mL/min。样品过0.22μm滤膜，进样体积为10μL，进行分析。
相对分子量标准曲线的制作：分别用超纯水配制浓度为1mg/mL的牛血清蛋白、细胞色素C、抑肽酶、杆菌肽、谷胱甘肽(还原型)、双甘肽标准品溶液，在上述测定条件下进行分析。以相对分子量的对数对保留时间作图得相对分子质量标准曲线。
图1为本发明公开的制备弹性蛋白肽的控制酶解流程图。
下面结合实施例，进一步阐述本发明。
实施例1：
一种弹性蛋白肽的制备方法，包括以下步骤：
(1)牛动脉搅碎后，加入10倍质量的0.1mol/L氢氧化钠溶液，在95℃下搅拌30min，水洗至中性，弃上清液，干燥，即为弹性蛋白。
(2)将弹性蛋白与水按照质量比1:10混合，加入弹性蛋白质量1.0％的胰酶(南宁东恒华道生物科技有限责任公司，下同)，在4℃的条件下分别充分混合30min、60min、90min、120min，随后在4℃，10000g条件下离心10min，得到沉淀和上清液(上清液命名为IS-30min、IS-60min、IS-90min、IS-120min)。
(3)将沉淀与10倍质量的水混合，调节溶液pH至8.0，升温至55℃水解15h，酶促反应结束后在100℃下灭酶10min，在10000g条件下离心10min，得酶解产物上清液，即为弹性蛋白肽(弹性蛋白肽分别命名为IP-30min、IP-60min、IP-90min、IP-120min)。
测定实施例1制备的弹性蛋白肽的蛋白回收率、水解度、弹性蛋白酶的抑制活性和分子量分布，并测定上清液(IS-30min、IS-60min、IS-90min、IS-120min)的总蛋白酶活力和弹性蛋白酶活力。
实施例2：
一种弹性蛋白肽的制备方法，包括以下步骤：
(1)牛动脉搅碎后，加入8倍质量的0.08mol/L氢氧化钠溶液，在90℃下搅拌45min，水洗至中性，弃上清液，干燥，即为弹性蛋白。
(2)将弹性蛋白与水按照质量比1:10混合，加入弹性蛋白质量1.0％的胰酶(南宁东恒华道生物科技有限责任公司，下同)，在25℃的条件下分别充分混合30min、60min、90min、120min，随后在25℃，10000g条件下离心10min，得到沉淀和上清液(上清液命名为CS-30min、CS-60min、CS-90min、CS-120min)。
(3)将沉淀与8倍质量的水混合，调节溶液pH至8.0，升温至55℃水解15h，酶促反应结束后在90℃下灭酶20min，在8000g条件下离心20min，得酶解产物上清液，即为弹性蛋白肽(弹性蛋白肽分别命名为CP-30min、CP-60min、CP-90min、CP-120min)。
测定实施例2制备的弹性蛋白肽的蛋白回收率、水解度、弹性蛋白酶的抑制活性和分子量分布，并测定上清液(CS-30min、CS-60min、CS-90min、CS-120min)的总蛋白酶活力和弹性蛋白酶活力。
实施例3：
一种弹性蛋白肽的制备方法，包括以下步骤：
(1)猪动脉搅碎后，加入10倍质量的0.05mol/L氢氧化钠溶液，在85℃下搅拌60min，水洗至中性，弃上清液，干燥，即为弹性蛋白。
(2)将弹性蛋白与水按照质量比1:8混合，加入弹性蛋白质量0.1％的胰酶，在0℃的条件下充分混合30min，随后在4℃，10000g离心10min，得到沉淀和上清液(AS-30min)。
(3)将沉淀与5倍质量的水混合，调节溶液pH至9.0，升温至37℃水解24h，酶促反应结束后在80℃下灭酶30min，在5000g条件下离心30min，得酶解产物上清液，即为弹性蛋白肽(弹性蛋白肽分别命名为AP-30min)。
测定它们实施例3制备的弹性蛋白肽的蛋白回收率、水解度、弹性蛋白酶的抑制活性，并测定上清液(AS-120min)的总蛋白酶活力和弹性蛋白酶活力。
实施例4：
一种弹性蛋白肽的制备方法，包括以下步骤：
(1)牛筋搅碎后，加入5倍质量的0.1mol/L氢氧化钠溶液，在90℃下搅拌45min，水洗至中性，弃上清液，干燥，即为弹性蛋白。
(2)将弹性蛋白与水按照质量比1:15混合，加入弹性蛋白质量2％的胰酶，在10℃的条件下充分混合90min，随后在10℃，10000g离心10min，得到沉淀和上清液(上清液命名为BS-90min)。
(3)将沉淀与15倍质量的水混合，调节溶液pH至7.0，升温至45℃水解3h，酶促反应结束后在90℃下灭酶15min，在8000g条件下离心20min，得酶解产物上清液，即为弹性蛋白肽(弹性蛋白肽分别命名为BP-90min)。
测定实施例4制备的弹性蛋白肽的蛋白回收率、水解度、弹性蛋白酶的抑制活性，并测定上清液(BS-90min)的总蛋白酶活力和弹性蛋白酶活力。
对比例1：
(1)牛动脉搅碎后，加入10倍质量的0.1mol/L氢氧化钠溶液，在95℃下搅拌30min，水洗至中性，弃上清液，干燥，即为弹性蛋白。
(2)将弹性蛋白与水按照质量比1:10混合，调节溶液pH至8.0，加入弹性蛋白质量1.0％的胰酶，升温至55℃水解15h，酶促反应结束后在100℃下灭酶10min，在10000g条件下离心10min，取得酶解物上清液，即为弹性蛋白肽(对比例1)。
测定对比例1制备的弹性蛋白肽(对比例1)的蛋白回收率、水解度、弹性蛋白酶的抑制活性和分子量分布。
表1实施例1-4和对比例1的弹性蛋白肽的蛋白回收率和水解度
蛋白回收率是工业生中的一个重要经济效益评价指标，水解度影响水解产物的分子量大小和氨基酸组成，从而影响产物的生物学活性。与对比例1比较，实施例1-2的弹性蛋白肽的蛋白回收率和水解度并未因在酶解前弹性蛋白和胰酶低温混合后去掉含蛋白酶的上清液而降低最终酶解液的蛋白回收率和水解度，说明本发明的处理方法，可使对弹性蛋白起主要水解作用的蛋白酶有效吸附到弹性蛋白。
表2实施例1-4和对对照组的上清液的总蛋白酶活力和弹性蛋白酶活力
表2中的对照组为配制的质量百分浓度为0.1％的胰酶溶液。质量百分浓度为0.1％的胰酶溶液是通过在磷酸缓冲液(pH＝7.5)(分别称取磷酸氢二钠(Na2HPO4·12H2O)6.02g和磷酸二氢钠(NaH2PO4·2H2O)0.5g，加水溶解并定容至1000mL)中加入胰酶配制而成的。
胰酶中主要蛋白酶是由胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶、弹性蛋白酶和羧肽酶组成，其中弹性蛋白酶对弹性蛋白有较强的水解作用，可有效破坏结构极其稳定的弹性蛋白，使得具有生物学活性的弹性蛋白肽释放出来。由表2数据可见，弹性蛋白与胰酶低温混合的过程中，胰酶溶液中50％左右的蛋白酶被吸附到弹性蛋白的网络结构中，且胰酶溶液中85％左右的弹性蛋白酶被吸附到弹性蛋白中，这部分的弹性蛋白酶对弹性蛋白的降解发挥重要作用，说明本发明的处理方法可充分利用胰酶中的蛋白酶尤其是弹性蛋白酶，降低使用高纯度弹性蛋白酶的成本。此外，上清液剩余胰酶溶液近50％的蛋白酶活力，还可回收利用，即实际酶解的胰酶用量更低。
表3实施例1-4和对比例1的弹性蛋白肽的弹性蛋白酶抑制活性
弹性蛋白酶抑制活性是评价皮肤抗衰老活性的一个重要体外活性指标，它可减缓皮肤中的弹性蛋白和胶原蛋白被降解。与对比例1相比，实施例1和实施例2制备的弹性蛋白肽对弹性蛋白酶的抑制活性有所提高，实施例3和实施例4也具有弹性蛋白酶抑制活性，说明本发明方法制备的弹性蛋白肽具有潜在的抗皮肤衰老活性。
酶的种类和反应条件决定着其相对分子量大小，而相对分子量大小对生物学活性有重要影响。图2为实施例1-2和对比例1的弹性蛋白肽分子量分布柱状图，由图2的弹性蛋白肽分子量分布图可见，对比例1和实施例1-2所获得的弹性蛋白肽的分子量均小于4000Da，且在弹性蛋白肽分子量＞3000Da、1000-3000Da、500-1000Da和＜500Da的范围内分布比例相近，说明在相同的酶解条件下，本发明的处理方法对酶解产物的弹性蛋白肽分子量分布影响不大。
上述实施例为本发明较佳的实施方式，仅用于解释本发明，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其它的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。
Claims (10)
1.一种弹性蛋白肽的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
步骤(1)：将弹性蛋白与水混合，加入胰酶，在0～25℃混合30～120min，离心，去除上清液得到沉淀；
步骤(2)：将沉淀与水混合，调节溶液pH值，升温，水解，灭酶，离心，浓缩，干燥，得弹性蛋白肽。
2.根据权利要求1所述一种弹性蛋白肽的制备方法，其特征在于，步骤(1)中所述弹性蛋白来源于牛动脉、金枪鱼心脏动脉球、牛肺部、猪肺部、牛软骨、猪软骨、牛筋、猪动脉、牛颈韧带中任意一种。
3.根据权利要求1所述一种弹性蛋白肽的制备方法，其特征在于，步骤(1)中所述弹性蛋白的制备方法为牛动脉、金枪鱼心脏动脉球、牛肺部、猪肺部、牛软骨、猪软骨、牛筋、猪动脉、牛颈韧带中任意一种与5～10倍质量的0.05～0.1mol/L氢氧化钠溶液混合，85～95℃加热30～60min，取沉淀水洗至中性，干燥，即为弹性蛋白。
4.根据权利要求1所述一种弹性蛋白肽的制备方法，其特征在于，步骤(1)所述弹性蛋白与水的质量比为1:8～1:15。
5.根据权利要求1所述一种弹性蛋白肽的制备方法，其特征在于，步骤(1)所述加入胰酶为弹性蛋白质量的0.1％～2％。
6.根据权利要求1所述一种弹性蛋白肽的制备方法，其特征在于，步骤(2)中所述灭酶的条件为：80～100℃加热10～30min。
7.根据权利要求1所述一种弹性蛋白肽的制备方法，其特征在于，步骤(2)中所述离心的条件为：5000～10000g离心10～30min。
8.根据权利要求1所述一种弹性蛋白肽的制备方法，其特征在于，步骤(2)中，所述沉淀与水的质量比为1:5～1:15；所述调节溶液pH值至7.0～9.0。
9.根据权利要求1所述一种弹性蛋白肽的制备方法，其特征在于，步骤(2)中，所述升温至37～55℃；所述水解的时间为3～24h。
10.权利要求1～9任一项所述一种弹性蛋白肽的制备方法制备得到的一种弹性蛋白肽。
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