CN114563369A - 一种用于盐酸环苯扎林缓释胶囊的质量检测方法 - Google Patents

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Abstract

本发明提供一种用于盐酸环苯扎林缓释胶囊的质量检测方法，包括以下步骤：步骤一，样品来源选择：选择盐酸环苯扎林缓释胶囊；步骤二，紫外‑可见分光光度法的鉴别：盐酸环苯扎林有紫外特征吸收峰，可以用来鉴别本品中的盐酸环苯扎林。本发明内容物为类白色或微黄色小丸；可分别通过HPLC法和UV法进行鉴别，辅料无干扰，专属性好；采用高效液相色谱法测定本品的有关物质、含量及释放度，方法学验证表明，用本法测定有关物质、释放度及含量，测定方法线性良好。

Description

一种用于盐酸环苯扎林缓释胶囊的质量检测方法
技术领域
本发明涉及质量检测技术领域，具体涉及一种用于盐酸环苯扎林缓释胶囊的质量检测方法。
背景技术
盐酸环苯扎林缓释胶囊，本品的活性成份为盐酸环苯扎林；化学名称： 5-(3-二甲胺基亚丙基)二苯并[a,d]环庚烯盐酸盐
化学结构式：
Figure RE-GDA0003628722230000011
分子式：C20H21N·HCl；分子量：311.85理化性质：盐酸环苯扎林为白色或类白色结晶性粉末。在水、乙醇、甲醇或三氯甲烷中易溶，在二氯甲烷中溶解。本品的熔点为215～219℃。药理类型：中枢性肌松药。剂型：缓释胶囊；规格：(1)15mg(2)30mg；适应症：本品作为休息和理疗的辅助治疗，用于缓解急性、疼痛性肌肉骨骼疾病相关的肌肉痉挛及其伴随的疼痛、触痛和活动受限等症状或体征。用法用量：口服。大多数成年患者，推荐用量为一次15mg(15mg胶囊1粒)，一日1次。部分患者，剂量可以增加为一次30mg(30mg胶囊1粒或15mg胶囊2粒)，一日1次。治疗周期一般2～ 3周。
本品的性状、鉴别、有关物质、含量均匀度、释放度、微生物限度及含量等质量指标进行了系统研究，最终确定了质量标准中各相应的质量指标，为今后有效控制产品质量提供了科学依据，因此需要对其进行质量检测处理。
基于此，本发明提供一种用于盐酸环苯扎林缓释胶囊的质量检测方法。
发明内容
针对现有技术的缺陷，本发明的目的是提供一种用于盐酸环苯扎林缓释胶囊的质量检测方法。
本发明解决技术问题采用如下技术方案：
本发明提供了一种用于盐酸环苯扎林缓释胶囊的质量检测方法，包括以下步骤：
步骤一，样品来源选择：选择盐酸环苯扎林缓释胶囊；
步骤二，紫外-可见分光光度法的鉴别：盐酸环苯扎林有紫外特征吸收峰，可以用来鉴别本品中的盐酸环苯扎林；
取本品1粒，将内容物全部倾入50ml(15mg规格)或100ml(30mg规格)量瓶中，加甲醇2ml，振摇5分钟，再加水10ml，超声处理使盐酸环苯扎林溶解，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，量取滤液适量，用甲醇稀释制成每 1ml中约含盐酸环苯扎林15μg的溶液，照紫外-可见分光光度法，在200～400nm 的波长范围内测定；
步骤三，释放试验测试：
步骤四，微生物的检测：
首先菌悬液的制备，再对供试液制备，最后进行验证；具体验证方法为：
分别取1∶10供试液10ml，加入至100ml无菌胆盐乳糖，后在上述胆盐乳糖培养基中加入1ml大肠埃希菌菌液，35～37℃培养18～24小时，按大肠埃希菌检查法进行检查；
空白对照组：分别取pH7.0的无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液10ml，加入至 100ml无菌胆盐乳糖培养基中，35～37℃培养18～24小时；
供试品阴性菌对照组：取1∶10供试液10ml，加入至100ml无菌营养肉汤培养基中，并加入金黄色葡萄球菌1ml，35～37℃培养18～24小时；
稀释剂对照组：取灭菌pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液10ml，加入试验菌，使菌液浓度在50～100cfu/ml，加入至100ml无菌胆盐乳糖培养基中，35～37℃培养18～24小时；
菌液组：在100ml无菌胆盐乳糖培养基中加入1ml大肠埃希菌菌液， 35～37℃培养18～24小时。
优选地，所述释放试验测定方法取本品，照释放度测定法，采用溶出度测定法装置，分别以0.1mol/L盐酸、pH4.5醋酸-醋酸钠缓冲液、pH6.8磷酸盐缓冲液、水各900ml为释放介质，转速为每分钟50转，依法操作，分别在 1、2、4、6、8、12、16、20、24小时，各取溶液5ml，滤过，并即时补充相同温度的释放介质5ml，精密量取续滤液20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图；另取盐酸环苯扎林对照品适量，精密称定，加释放介质溶解并定量稀释制成每1ml约含盐酸环苯扎林17μg(15mg规格)或33μg(30mg规格)的溶液，同法测定，按外标法以峰面积计算每粒在不同时间的释放量，以时间 (小时)对6粒的累积释放量(％)作曲线，即得各批样品的释放曲线。
优选地，所述释药曲线相似性判断标准：
Figure RE-GDA0003628722230000031
其中，Rt为在t时参照品的释药百分率；Tt为在t时试验品的释药百分率；n为试验点数；f2取值范围在0～100之间，随着释放百分率差异增大， f2值显著减小；f2值大表示两曲线间差异小，即相似性大。当两释药曲线完全相同时，f2＝100；当两曲线平均相差10％时，f2＝50。当f2值在50～100 范围内时，表明两释药曲线相似；当f2小于50时，则表明两释药曲线有显著性差异。
优选地，所述菌液的制备：接种大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌的新鲜培养物至10ml营养肉汤培养基中，35～37℃培养18～24小时；取此培养物1ml至0.9％无菌氯化钠溶液9ml中，采用10倍递增稀释法稀释至10-5～10-7，使菌液浓度为50～100cfu/ml；
接种白色念珠菌的新鲜培养基物至10ml改良马丁培养基中，23～28℃培养24～48小时；取上述培养物1ml至0.9％无菌氯化钠溶液9ml中，采用10 倍递增稀释法稀释至10-5～10-7，使菌液浓度为50～100cfu/ml；
接种黑曲霉的新鲜培养物至改良马丁琼脂斜面培养基上，23～28℃培养 5～7天，加入3～5ml含聚山梨酯80的0.9％无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱，然后，吸出孢子悬液1ml至0.9％无菌氯化钠溶液9ml中，采用10倍递增稀释法稀释至10-4～10-6，使菌液浓度为50～100cfu/ml。
优选地，所述供试液制备采用盐酸环苯扎林缓释胶囊10g，置100ml灭菌 pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液中，振摇，使溶解，作为1∶10供试液。
优选地，所述盐酸环苯扎林在浓度为14.85μg/ml～34.65μg/ml的范围内，峰面积对浓度呈良好的线性关系；同一溶液连续测定六次，峰面积的 RSD＝0.18％；含量平均回收率为99.43％，各回收率测定值的相对标准偏差为 0.88％；由两个分析人员使用不同仪器测得的12次测定值的RSD为0.81％，且溶液在8小时内稳定，故选用高效液相色谱法测定本品的含量。
与现有技术相比，本发明具有如下的有益效果：
本发明通过试验对本品的性状、鉴别、有关物质、含量均匀度、释放度、微生物限度及含量测定等质量指标进行了详细的研究。
结果表明：本品内容物为类白色或微黄色小丸；可分别通过HPLC法和 UV法进行鉴别，辅料无干扰，专属性好；采用高效液相色谱法测定本品的有关物质、含量及释放度，方法学验证表明，用本法测定有关物质、释放度及含量，测定方法线性良好，准确度、精密度高，溶液稳定；且有关物质测定的中间精密度良好；可以满足控制本品质量的要求。
采用溶出度测定法第二法的装置，以0.1mol/L盐酸溶液900ml为释放介质，转速为每分钟50转，用高效液相色谱法测定本品的释放量，两种规格各三批样品在2小时、4小时、8小时与16小时的释放量均分别在15％～35％、 40％～60％、60％～85％和75％以上，每批样品6粒间的释放均一性及同规格三批样品间释放重现性均良好；两种规格的自制胶囊与美国上市制剂在0.1mol/L 盐酸溶液、pH4.5醋酸-醋酸钠缓冲液、pH6.8磷酸盐缓冲液、水四种介质中，释放曲线间的f2值均>50，说明它们的释放曲线相似，即自制盐酸环苯扎林缓释胶囊与美国上市制剂的体外释放行为基本一致。
另外，还对本品的含量均匀度、微生物限度进行了检测，并对微生物限度的检查方法进行了验证。
附图说明
图1是本发明20100504批盐酸环苯扎林缓释胶囊释放曲线；
图2是本发明20100510批盐酸环苯扎林缓释胶囊释放曲线；
图3是本发明三批盐酸环苯扎林缓释胶囊(30mg规格)释放曲线；
图4是本发明三批盐酸环苯扎林缓释胶囊(30mg规格)释放曲线；
图5是本发明自制胶囊与美国上市制剂(30mg规格)在0.1mol/L盐酸溶液中的释放曲线；
图6是本发明自制胶囊与美国上市制剂(15mg规格)在0.1mol/L盐酸溶液中的释放曲线；
图7是本发明自制胶囊与美国上市制剂(30mg规格)在pH4.5醋酸-醋酸钠缓冲液中的释放曲线；
图8是本发明自制胶囊与美国上市制剂(15mg规格)在pH4.5醋酸-醋酸钠缓冲液中的释放曲线；
图9是本发明自制胶囊与美国上市制剂(30mg规格)在pH6.8磷酸盐缓冲液中的释放曲线；
图10是本发明自制胶囊与美国上市制剂(15mg规格)在pH6.8磷酸盐缓冲液中的释放曲线；
图11是本发明自制胶囊与美国上市制剂(15mg规格)在pH6.8磷酸盐缓冲液中的释放曲线；
图12是本发明自制胶囊与美国上市制剂(15mg规格)在水中的释放曲线。
具体实施方式
下面结合具体实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
(一)实施例1
本实施例中，
本实施例的一种用于盐酸环苯扎林缓释胶囊的质量检测方法，包括以下步骤：
步骤一，样品来源选择：选择盐酸环苯扎林缓释胶囊；
步骤二，紫外-可见分光光度法的鉴别：盐酸环苯扎林有紫外特征吸收峰，可以用来鉴别本品中的盐酸环苯扎林；
取本品1粒，将内容物全部倾入50ml(15mg规格)或100ml(30mg规格)量瓶中，加甲醇2ml，振摇5分钟，再加水10ml，超声处理使盐酸环苯扎林溶解，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，量取滤液适量，用甲醇稀释制成每 1ml中约含盐酸环苯扎林15μg的溶液，照紫外-可见分光光度法，在200～400nm 的波长范围内测定；
步骤三，释放试验测试：
步骤四，微生物的检测：
首先菌悬液的制备，再对供试液制备，最后进行验证；具体验证方法为：
分别取1∶10供试液10ml，加入至100ml无菌胆盐乳糖，后在上述胆盐乳糖培养基中加入1ml大肠埃希菌菌液，35～37℃培养18～24小时，按大肠埃希菌检查法进行检查；
空白对照组：分别取pH7.0的无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液10ml，加入至 100ml无菌胆盐乳糖培养基中，35～37℃培养18～24小时；
供试品阴性菌对照组：取1∶10供试液10ml，加入至100ml无菌营养肉汤培养基中，并加入金黄色葡萄球菌1ml，35～37℃培养18～24小时；
稀释剂对照组：取灭菌pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液10ml，加入试验菌，使菌液浓度在50～100cfu/ml，加入至100ml无菌胆盐乳糖培养基中，35～37℃培养18～24小时；
菌液组：在100ml无菌胆盐乳糖培养基中加入1ml大肠埃希菌菌液， 35～37℃培养18～24小时。
本实施例的释放试验测定方法取本品，照释放度测定法，采用溶出度测定法装置，分别以0.1mol/L盐酸、pH4.5醋酸-醋酸钠缓冲液、pH6.8磷酸盐缓冲液、水各900ml为释放介质，转速为每分钟50转，依法操作，分别在1、 2、4、6、8、12、16、20、24小时，各取溶液5ml，滤过，并即时补充相同温度的释放介质5ml，精密量取续滤液20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图；另取盐酸环苯扎林对照品适量，精密称定，加释放介质溶解并定量稀释制成每1ml约含盐酸环苯扎林17μg(15mg规格)或33μg(30mg规格)的溶液，同法测定，按外标法以峰面积计算每粒在不同时间的释放量，以时间(小时) 对6粒的累积释放量(％)作曲线，即得各批样品的释放曲线。
本实施例的释药曲线相似性判断标准：
Figure RE-GDA0003628722230000071
其中，Rt为在t时参照品的释药百分率；Tt为在t时试验品的释药百分率；n为试验点数；f2取值范围在0～100之间，随着释放百分率差异增大， f2值显著减小；f2值大表示两曲线间差异小，即相似性大。当两释药曲线完全相同时，f2＝100；当两曲线平均相差10％时，f2＝50。当f2值在50～100 范围内时，表明两释药曲线相似；当f2小于50时，则表明两释药曲线有显著性差异。
本实施例的菌液的制备：接种大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌的新鲜培养物至10ml营养肉汤培养基中，35～37℃培养18～24小时；取此培养物1ml至0.9％无菌氯化钠溶液9ml中，采用10倍递增稀释法稀释至 10-5～10-7，使菌液浓度为50～100cfu/ml；
接种白色念珠菌的新鲜培养基物至10ml改良马丁培养基中，23～28℃培养24～48小时；取上述培养物1ml至0.9％无菌氯化钠溶液9ml中，采用10 倍递增稀释法稀释至10-5～10-7，使菌液浓度为50～100cfu/ml；
接种黑曲霉的新鲜培养物至改良马丁琼脂斜面培养基上，23～28℃培养 5～7天，加入3～5ml含聚山梨酯80的0.9％无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱，然后，吸出孢子悬液1ml至0.9％无菌氯化钠溶液9ml中，采用10倍递增稀释法稀释至10-4～10-6，使菌液浓度为50～100cfu/ml。
本实施例的供试液制备采用盐酸环苯扎林缓释胶囊10g，置100ml灭菌 pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液中，振摇，使溶解，作为1∶10供试液。
本实施例的盐酸环苯扎林在浓度为14.85μg/ml～34.65μg/ml的范围内，峰面积对浓度呈良好的线性关系；同一溶液连续测定六次，峰面积的 RSD＝0.18％；含量平均回收率为99.43％，各回收率测定值的相对标准偏差为 0.88％；由两个分析人员使用不同仪器测得的12次测定值的RSD为0.81％，且溶液在8小时内稳定，故选用高效液相色谱法测定本品的含量。
(二)实施例2
本实施例中，溶液稳定性试验
对照溶液稳定性试验
照有关物质测定项下配制对照溶液，分别于0、2、4、6、8小时进样，记录色谱图，计算主峰面积的相对标准偏差
盐酸环苯扎林缓释胶囊有关物质测定对照溶液稳定性试验结果
Figure RE-GDA0003628722230000091
结果表明：盐酸环苯扎林缓释胶囊有关物质测定对照溶液在8小时内稳定。
供试品溶液稳定性试验
取20100504批盐酸环苯扎林缓释胶囊内容物适量，照有关物质测定项下配制供试品溶液，分别于0、2、4、6、8小时进样，记录色谱图至主峰保留时间的5倍，计算有关物质的相对标准偏差
盐酸环苯扎林缓释胶囊有关物质测定供试品溶液稳定性试验结果
Figure RE-GDA0003628722230000092
结果表明：盐酸环苯扎林缓释胶囊的有关物质测定供试品溶液在8小时内稳定。
在既定色谱条件的基础上，分别采用不同品牌的色谱柱、不同比例及不同pH值的流动相，测定本品的有关物质及与最近杂质的分离度，考察耐用性。
供试品溶液：取20100504批样品内容物适量(约相当于盐酸环苯扎林30mg)，置25ml量瓶中，加甲醇2ml，振摇5分钟，再加水10ml，超声使盐酸环苯扎林溶解，加流动相稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液2ml，置10ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，即得。
不同的色谱柱对测定结果的影响
分别采用Agela Venusil MP C18 150×4.6mm 5μm、Phenomenex Gemini C18 5μm150×4.6mm、Waters Symmetry Shield RP18 250×4.6mm 5μm色谱柱，其他条件不变，分别测定本品的有关物质及与最近杂质的分离度
不同的流动相比例对测定结果的影响
采用Agela Venusil MP C18 150×4.6mm 5μm色谱柱，将原有流动相[水- 乙腈-甲醇-甲磺酸(48∶28∶24∶0.2)，用二乙胺调节pH值至3.6]中水比例调整为43％、53％，采用三个比例的流动相，其他条件不变，分别测定本品的有关物质及主峰与最近杂质的分离度
不同的流动相pH值对测定结果的影响
采用Agela Venusil MP C18 150×4.6mm 5μm色谱柱，将流动相的pH值分别调整为3.1、3.6、4.1，其他条件不变，测定本品的有关物质及主峰与最近杂质的分离度
盐酸环苯扎林缓释胶囊有关物质耐用性试验结果
Figure RE-GDA0003628722230000111
注：*为同一张色谱图。
结果表明：采用三种不同品牌的色谱柱，流动相中水的比例在43％～53％范围内，流动相的pH值在3.1～4.1范围内，本品主峰与最近杂质的分离度均良好，并且有关物质测定结果基本一致，表明方法的耐用性良好。
供试品的有关物质测定及与美国上市制剂的对比研究
取本品内容物适量(约相当于盐酸环苯扎林30mg)，置25ml量瓶中，加甲醇2ml，振摇5分钟，再加水10ml，超声使盐酸环苯扎林溶解，加流动相稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液2ml，置10ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液；精密量取0.5ml，置100ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液。取对照溶液20μl，注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使主成分色谱峰的峰高约为满量程的20％，再精密量取供试品溶液与对照溶液各20μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图至主成分色谱峰保留时间的5倍。供试品溶液的色谱图中如有杂质峰(辅料峰除外)，单个杂质峰面积与对照溶液的峰面积之比即得单个杂质的含量，量取各杂质峰面积的和与对照溶液主峰面积之比即得总杂质含量。
取两种规格各三批盐酸环苯扎林缓释胶囊供试品及美国上市制剂(商品名：
Figure RE-GDA0003628722230000121
规格30mg胶囊的批号为XB30208，有效期至2012.07；规格 15mg胶囊的批号为XA31708，有效期至2012.09；生产企业：美国Cephalon 公司)，照上述方法测定有关物质
盐酸环苯扎林缓释胶囊(30mg规格)有关物质测定结果(％)
Figure RE-GDA0003628722230000131
盐酸环苯扎林缓释胶囊(15mg规格)有关物质测定结果(％)
Figure RE-GDA0003628722230000141
结果表明：两种规格各三批盐酸环苯扎林缓释胶囊自制品与两批美国上市制剂的单个最大杂质均小于0.5％，总杂质均小于1.0％。在自制胶囊中检出的杂质均在美国上市制剂中出现，即自制胶囊与美国上市制剂的杂质谱基本一致，但自制胶囊中检出的杂质个数少于美国上市制剂(自制胶囊中共检出5 个杂质，美国上市制剂中共检出8个杂质)，且单个杂质及总杂质的含量均小于美国上市制剂，表明自制胶囊在安全性方面优于美国上市制剂。
自制胶囊中相对保留时间分别为0.37、0.45、0.60、0.92、1.20的杂质均在美国上市制剂中检出，其中相对保留时间为0.92的杂质在自制胶囊中的含量最高为0.03％(20100506批)，明显低于美国上市制剂(0.09％)，自制胶囊中的其他4个杂质含量均不大于0.02％，与美国上市制剂相当。
在美国上市制剂中检出一相对保留时间为1.95的较大杂质，其含量为 0.17％，该杂质在自制胶囊中未检出。
本品的最大日剂量为30mg，根据《化学药物杂质研究的技术指导原则》附件2制剂的杂质限度的规定，本品的报告限度为0.1％，鉴定限度为0.2％，质控限度为0.5％。经检查，两种规格各三批盐酸环苯扎林缓释胶囊供试品的单个最大杂质均不超过鉴定限度0.2％，符合《化学药物杂质研究的技术指导原则》的有关规定。
释放方法的选择
参照美国FDA溶出度方法数据库中盐酸环苯扎林缓释胶囊的释放度测定方法，照释放度测定法(中国药典2010年版二部附录ⅩD第一法)，采用溶出度测定法(中国药典2010年版二部附录ⅩC第二法)装置测定。
释放介质的选择
参照美国FDA溶出度方法数据库中盐酸环苯扎林缓释胶囊的释放度测定方法，确定释放介质为0.1mol/L盐酸900ml。
转速的选择
参照美国FDA溶出度方法数据库中盐酸环苯扎林缓释胶囊的释放度测定方法[1]，确定本品释放度测定转速为每分钟50转。
释放度测定方法的验证
释放度定量方法的选择
紫外-可见分光光度法测定释放度方便、快捷，是释放度测定的首选方法。
取盐酸环苯扎林对照品适量，精密称定，加0.1mol/L盐酸溶解并定量稀释制成每1ml中约含盐酸环苯扎林16μg的溶液，照紫外-可见分光光度法(中国药典2010年版二部附录ⅣA)，在200nm～400nm的波长范围内扫描，结果盐酸环苯扎林在290.00nm的波长处有最大吸收，吸光度值为0.5262
结果表明：紫外-可见分光光度法测定本品的释放度，当盐酸环苯扎林释放完全时，吸光度值适中，但在第1个取样点释放量约为20％时，吸光度值约为0.1，此时吸光度值太小，不适合作为本品的释放度定量方法。故参照有关物质测定方法，采用高效液相色谱法(中国药典2010年版二部附录ⅤD) 测定本品的释放度，色谱条件同有关物质测定项下。
空白辅料及胶囊壳干扰试验
按处方量称取空白辅料0.1733g与胶囊壳1粒，置100ml量瓶中，加释放介质溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，量取1ml，置10ml量瓶中，加释放介质稀释至刻度，摇匀，精密量取20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，结果见附图1-12。结果表明：空白辅料及胶囊壳不干扰本品释放度的测定。
滤膜吸附试验
精密称取盐酸环苯扎林21.01mg，置100ml量瓶中，加释放介质溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取6ml，置50ml量瓶中，加释放介质稀释至刻度，摇匀，取上述溶液适量，分别采用两个不同厂家(上海半岛实业有限公司、上海市新亚净化器件厂)生产的孔径为0.45μm的滤膜，分别进行浸泡和煮沸处理后，过滤，舍去1ml的初滤液后，测定过滤前后溶液中盐酸环苯扎林峰面积的变化情况。
盐酸环苯扎林滤膜吸附试验结果
Figure RE-GDA0003628722230000171
结果表明：上海半岛实业有限公司与上海市新亚净化器件厂两个厂家生产的滤膜，经浸泡过夜后，对盐酸环苯扎林的吸附量均大于2％，而在沸水中煮1小时后，对盐酸环苯扎林的吸附量均小于2％，可以忽略不计。因此在本品的释放度测定时应对滤膜采取煮沸1小时以上的处理方法。
线性范围及回归方程
精密称取盐酸环苯扎林21.01mg，置100ml量瓶中，加释放介质溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取0.1、0.8、1.2、1.7、2.3ml，分别置5个10ml量瓶中，加释放介质稀释至刻度，摇匀，分别精密量取上述系列溶液20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，以峰面积对浓度作曲线，按最小二乘法计算回归方程及相关系数
盐酸环苯扎林不同浓度与其相应的峰面积
Figure RE-GDA0003628722230000172
回归方程：Amount＝2.504e-005×Area-3.309e-002
相关系数：r＝0.9999
结果表明：盐酸环苯扎林在浓度为2.10μg/ml～48.32μg/ml的范围内，峰面积对浓度呈良好的线性关系。
回收率试验
取盐酸环苯扎林约33mg，精密称定，按15mg规格的处方中原料药与辅料的比例各加入一定量的辅料，加释放介质溶解并定量稀释制成每1ml中含3μg、7μg、16μg、26μg、33μg的溶液，各3份，摇匀，滤过，分别精密量取续滤液20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图。另精密称取盐酸环苯扎林适量，加释放介质溶解并定量稀释制成每1ml约含33μg的溶液，同法测定。按外标法以峰面积计算检出量和回收率
盐酸环苯扎林缓释胶囊释放度测定回收率试验结果
Figure RE-GDA0003628722230000191
结果表明：盐酸环苯扎林缓释胶囊释放度测定回收率试验结果良好。
重复性试验
取释放度回收率项下的13#溶液，分别重复测定6次，计算峰面积的相对标准偏差
盐酸环苯扎林缓释胶囊释放度测定重复性试验结果
Figure RE-GDA0003628722230000201
结果表明：盐酸环苯扎林缓释胶囊释放度测定重复性试验结果良好。
溶液的稳定性试验
取重复性试验项下的溶液，分别于0、4、6、8及24小时进样，记录色谱图，计算主峰面积的相对标准偏差
盐酸环苯扎林缓释胶囊释放度测定溶液的稳定性结果
Figure RE-GDA0003628722230000202
结果表明：盐酸环苯扎林缓释胶囊释放度测定溶液在24小时内稳定。
综上所述，盐酸环苯扎林在浓度为2.10μg/ml～48.32μg/ml范围内，峰面积对浓度呈良好的线性关系，释放度平均回收率为99.74％，RSD为1.89％，且溶液在24小时内稳定，空白辅料及胶囊壳无干扰，故选择高效液相色谱法作为本品的释放度定量方法。
释放曲线
仪器：L-2130泵，L-2400紫外检测器；L-7110泵，L-7420紫外检测器；
RCZ-8M释放试验仪(天津市天大天发科技有限公司)；
RCZ-8B释放试验仪(天津市天大天发科技有限公司)
测定方法：照释放度测定法(中国药典2010年版二部附录ⅩD第一法) 测定，采用溶出度测定法(中国药典2010年版二部附录ⅩC第二法)装置，以0.1mol/L盐酸溶液900ml为释放介质，转速为每分钟50转，依法操作，分别在1、2、4、6、8、12、16、20、24小时时，各取溶液5ml，滤过，并即时补充相同温度的释放介质5ml，精密量取续滤液20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图；另取盐酸环苯扎林对照品适量，精密称定，加释放介质溶解并定量稀释制成每1ml约含盐酸环苯扎林17μg(15mg规格)或33μg(30mg规格) 的溶液，同法测定。按外标法以峰面积计算每粒在不同时间点的释放量。以时间(小时)对6粒的累积释放量(％)作曲线，即得各批样品的释放曲线。
同一批样品六粒间的释放均一性
取20100504批(30mg规格)、20100510批(15mg规格)盐酸环苯扎林缓释胶囊，测定其释放曲线
20100504批盐酸环苯扎林缓释胶囊(30mg规格)释放均一性试验(％)
Figure RE-GDA0003628722230000211
20100510批盐酸环苯扎林缓释胶囊(15mg规格)释放均一性试验(％)
Figure RE-GDA0003628722230000221
结果表明：两种规格的盐酸环苯扎林缓释胶囊同一批样品六粒间的释放均一性均良好。
同一工艺条件下生产的三批样品间的释放重现性
取30mg规格的两批盐酸环苯扎林缓释胶囊(批号：20100506、20100508) 及15mg规格的两批盐酸环苯扎林缓释胶囊(批号：20100512、20100514)，分别测定释放曲线
20100506批盐酸环苯扎林缓释胶囊(30mg规格)释放均一性试验(％)
Figure RE-GDA0003628722230000222
Figure RE-GDA0003628722230000231
20100508批盐酸环苯扎林缓释胶囊(30mg规格)释放均一性试验(％)
Figure RE-GDA0003628722230000232
20100512批盐酸环苯扎林缓释胶囊(15mg规格)释放均一性试验(％)
Figure RE-GDA0003628722230000233
Figure RE-GDA0003628722230000241
20100514批盐酸环苯扎林缓释胶囊(15mg规格)释放均一性试验(％)
Figure 1
三批盐酸环苯扎林缓释胶囊(30mg规格)释放重现性试验(％)
Figure RE-GDA0003628722230000243
Figure RE-GDA0003628722230000251
三批盐酸环苯扎林缓释胶囊(15mg规格)释放重现性试验(％)
Figure RE-GDA0003628722230000252
结果表明：同一工艺条件下生产的两种规格各三批盐酸环苯扎林缓释胶囊，每批样品6粒间的释放均一性及三批样品间的释放重现性均良好。
取样时间和限度的确定
根据释放曲线测定结果并参考美国FDA公开的盐酸环苯扎林缓释胶囊 (NDA21-777)的申报资料[2]，确定本品释放度测定的取样时间为2、4、8、 16小时，限度为：在2小时、4小时、8小时与16小时的释放量应分别为标示量的15％～35％、40％～60％、60％～85％和75％以上。
自制胶囊与美国上市制剂在四种释放介质中的释放曲线对比研究
比较自制胶囊与美国上市制剂在四种释放介质中的释放曲线，采用相似因子法，判断自制胶囊与原研产品在上述四种介质中的释放曲线是否一致。
释放介质分别为：
①0.1mol/L盐酸溶液
②pH 4.5醋酸-醋酸钠缓冲液
③pH 6.8磷酸盐缓冲液
④水
10.5.2.7.1仪器及测定方法
仪器：L-2130泵，L-2400紫外检测器；L-7110泵，L-7420紫外检测器；
RCZ-8M释放试验仪(天津市天大天发科技有限公司)；
RCZ-8B释放试验仪(天津市天大天发科技有限公司)
色谱柱：Agela Venusil Mp C18 150mm×4.6mm 5μm；
流动相：水-乙腈-甲醇-甲磺酸(48∶28∶24∶0.2)，用二乙胺调节pH 值至3.6；
检测波长：290nm；
流速：1.0ml/min。
测定方法：取本品，照释放度测定法(中国药典2010年版二部附录ⅩD 第一法)，采用溶出度测定法(中国药典2010年版二部附录ⅩC第二法)装置，分别以0.1mol/L盐酸、pH4.5醋酸-醋酸钠缓冲液、pH6.8磷酸盐缓冲液、水各900ml为释放介质，转速为每分钟50转，依法操作，分别在1、2、4、6、 8、12、16、20、24小时时，各取溶液5ml，滤过，并即时补充相同温度的释放介质5ml，精密量取续滤液20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图；另取盐酸环苯扎林对照品适量，精密称定，加释放介质溶解并定量稀释制成每1ml 约含盐酸环苯扎林17μg(15mg规格)或33μg(30mg规格)的溶液，同法测定。按外标法以峰面积计算每粒在不同时间的释放量。以时间(小时)对6 粒的累积释放量(％)作曲线，即得各批样品的释放曲线。
释药曲线相似性判断标准：
Figure RE-GDA0003628722230000271
其中，Rt为在t时参照品的释药百分率；Tt为在t时试验品的释药百分率；n为试验点数。f2取值范围在0～100之间，随着释放百分率差异增大， f2值显著减小；f2值大表示两曲线间差异小，即相似性大。当两释药曲线完全相同时，f2＝100；当两曲线平均相差10％时，f2＝50。当f2值在50～100 范围内时，表明两释药曲线相似；当f2小于50时，则表明两释药曲线有显著性差异。
释放曲线对比结果
取自制20100504批(30mg规格)及20100510批(15mg规格)盐酸环苯扎林缓释胶囊和美国上市制剂(商品名：
Figure RE-GDA0003628722230000273
规格30mg胶囊的批号为XB30208，有效期至：2012.07；规格15mg胶囊的批号为XA31708，有效期至：2012.09；生产企业：美国Cephalon公司)，照上述方法分别测定其在 0.1mol/L盐酸、pH4.5醋酸-醋酸钠缓冲液、pH6.8磷酸盐缓冲液、水四种释放介质中的释放曲线
自制胶囊与美国上市制剂(30mg规格)在0.1mol/L盐酸中的释放曲线比较(％)
Figure RE-GDA0003628722230000272
自制胶囊与美国上市制剂(15mg规格)在0.1mol/L盐酸中的释放曲线比较(％)
Figure RE-GDA0003628722230000281
注：15mg规格自制胶囊的含量为100.72％，
Figure RE-GDA0003628722230000284
的含量为95.44％
自制胶囊与美国上市制剂(30mg规格)在pH4.5醋酸-醋酸钠缓冲液中的释放曲线比较(％)
Figure RE-GDA0003628722230000282
自制胶囊与美国上市制剂(15mg规格)在pH4.5醋酸-醋酸钠缓冲液中的释放曲线比较(％)
Figure RE-GDA0003628722230000283
自制胶囊与美国上市制剂(15mg规格)在pH4.5醋酸-醋酸钠缓冲液中的释放曲线
表10-34自制胶囊与美国上市制剂(30mg规格)在pH6.8磷酸盐缓冲液中的释放曲线比较(％)
Figure RE-GDA0003628722230000291
自制胶囊与美国上市制剂(30mg规格)在pH6.8磷酸盐缓冲液中的释放曲线
自制样品与美国上市制剂(15mg规格)在pH6.8磷酸盐缓冲液中的释放曲线比较(％)
Figure RE-GDA0003628722230000292
自制胶囊与美国上市制剂(15mg规格)在pH6.8磷酸盐缓冲液中的释放曲线
自制胶囊与美国上市制剂(30mg规格)在水中的释放曲线比较(％)
Figure RE-GDA0003628722230000293
自制胶囊与美国上市制剂(30mg规格)在水中的释放曲线
自制胶囊与美国上市制剂(15mg规格)在水中的释放曲线比较(％)
Figure RE-GDA0003628722230000301
自制胶囊与美国上市制剂(15mg规格)在水中的释放曲线
结果表明：两种规格的自制盐酸环苯扎林缓释胶囊与美国上市制剂在 0.1mol/L盐酸溶液、pH4.5醋酸-醋酸钠缓冲液、pH6.8磷酸盐缓冲液、水四种介质中的释放曲线间的f2值均>50，说明它们的释放曲线相似，即自制盐酸环苯扎林缓释胶囊与美国上市制剂的体外释放行为基本一致。
供试品的释放度测定
仪器：L-2130泵，L-2400紫外检测器
RCZ-8M溶出试验仪(天津市天大天发科技有限公司)
RCZ-8B溶出试验仪(天津市天大天发科技有限公司)
测定法：取本品，照释放度测定法(中国药典2010年版二部附录ⅩD第一法)，采用溶出度测定法(中国药典2010年版二部附录ⅩC第二法)装置，以0.1mol/L盐酸溶液900ml为释放介质，转速为每分钟50转，依法操作，在 2、4、8、16小时时，分别取溶液5ml，滤过，并即时补充相同温度的释放介质5ml，精密量取续滤液20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图。另取盐酸环苯扎林对照品适量，精密称定，加释放介质溶解并定量稀释制成每1ml约含盐酸环苯扎林17μg(15mg规格)或33μg(30mg规格)的溶液，作为对照品溶液，同法测定。按外标法以峰面积分别计算每粒在不同时间的释放量。
取规格30mg的三批盐酸环苯扎林缓释胶囊(批号为20100504、20100506、20100508)及规格15mg的三批盐酸环苯扎林缓释胶囊(批号为20100510、 20100512、20100514)，照上述方法测定
三批盐酸环苯扎林缓释胶囊(30mg规格)释放度测定结果
Figure RE-GDA0003628722230000311
三批盐酸环苯扎林缓释胶囊(15mg规格)释放度测定结果
Figure RE-GDA0003628722230000321
结果表明，两种规格各三批盐酸环苯扎林缓释胶囊在2小时、4小时、8 小时与16小时的释放量均分别在标示量的20％～40％、40％～60％、60％～85％和75％以上。
含量均匀度
因本品规格为15mg、30mg，主药含量均小于每粒重量的25％，按中国药典2010年版二部附录ⅩE规定，应进行含量均匀度检查。
以含量测定项下测得的每粒含量计算A+1.8S
盐酸环苯扎林缓释胶囊(30mg规格)含量均匀度检查结果
Figure RE-GDA0003628722230000331
盐酸环苯扎林缓释胶囊(15mg规格)含量均匀度检查结果
Figure RE-GDA0003628722230000332
结果表明：两种规格各三批盐酸环苯扎林缓释胶囊的A+1.8S均小于15.0，即含量均匀度均符合规定。
微生物限度
根据微生物限度检查(中国药典2005年版二部附录ⅪJ)的要求，需要对细菌、霉菌、酵母菌计数方法和控制菌检查方法进行验证，其意义是保证检验结果的准确、可靠及检验方法的完整性。
验证的目的
验证所采用的方法和条件是否适合于供试品的细菌、霉菌、酵母菌及控制菌的测定。
验证用菌种
根据菌株选择“代表性，普遍性，易存活，低或非致病性，标准菌株”的原则选择以下菌株为验证用菌株(要求菌种不得超过5代，采用适宜的方法保存)：
大肠埃希菌(Escherichia coli)[CMCC(B)44 102]
金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)[CMCC(B)26 003]
枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)[CMCC(B)63 501]
白色念珠菌(Candida albicans)[CMCC(F)98 001]
黑曲霉(Aspergillus niger)[CMCC(F)98 003]
细菌、霉菌及酵母菌计数方法的验证
菌悬液的制备(50～100cfu/ml)
(1)接种大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌的新鲜培养物至 10ml营养肉汤培养基中，35～37℃培养18～24小时；取此培养物1ml至0.9％无菌氯化钠溶液9ml中，采用10倍递增稀释法稀释至10-5～10-7，使菌液浓度为50～100cfu/ml。
(2)接种白色念珠菌的新鲜培养基物至10ml改良马丁培养基中，23～28℃培养24～48小时；取上述培养物1ml至0.9％无菌氯化钠溶液9ml中，采用10 倍递增稀释法稀释至10-5～10-7，使菌液浓度为50～100cfu/ml。
(3)接种黑曲霉的新鲜培养物至改良马丁琼脂斜面培养基上，23～28℃培养5～7天，加入3～5ml含聚山梨酯80的0.9％无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱，然后，吸出孢子悬液(用管口带有薄的无菌棉花或纱布能过滤菌丝的无菌毛细吸管)1ml至0.9％无菌氯化钠溶液9ml中，采用10倍递增稀释法稀释至10-4～10-6，使菌液浓度为50～100cfu/ml。
供试液的制备
取本品10g，置100ml灭菌pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液中，振摇，使溶解，作为1∶10供试液。
验证过程
验证试验进行了3次独立的平行试验，并分别计算各试验菌每次试验的回收率。
①试验组：平皿法计数，取1∶10供试液1ml和上述试验菌液1ml (50～100cfu/ml试验菌)，分别注入平皿中，分别倾注琼脂培养基，混匀凝固，培养计数，每株试验菌分别制备2个平皿。进行3次独立平行试验。
②菌液组：分别取菌液1ml，采用平皿计数法，测定上述制备好的菌液中每毫升的活菌数，每株试验菌平行制备2个平皿。进行3次独立平行试验。
③供试品对照组：各取1∶10的供试液1ml，按试验组操作不加菌液，分别倾注琼脂培养基，混匀凝固，培养计数。进行3次独立平行试验。
Figure RE-GDA0003628722230000351
验证结果
细菌、霉菌及酵母菌计数的验证结果
盐酸环苯扎林缓释胶囊细菌、霉菌及酵母菌计数的验证结果
Figure RE-GDA0003628722230000361
结果表明：各试验组的菌数回收率均大于70％，可用常规法对本品进行细菌、霉菌、酵母菌的检验。
控制菌(大肠埃希菌)检查方法的验证
菌液的制备(10～100cfu/ml)
接种大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌的新鲜培养物至10ml营养肉汤培养基中，30～35℃培养18～24小时；取上述培养物1ml至0.9％无菌氯化钠溶液 9ml中，采用10倍递增稀释法稀释至10-5～10-7，使菌液浓度为10～100cfu/ml。
供试液的制备
取本品10g，置100ml灭菌pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液中，振摇，使溶解，作为1∶10供试液。
验证过程
①试验组：分别取1∶10供试液10ml，加入至100ml无菌胆盐乳糖，后在上述胆盐乳糖培养基中加入1ml大肠埃希菌菌液，35～37℃培养18～24小时。按大肠埃希菌检查法进行检查。
②空白对照组：分别取pH7.0的无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液10ml，加入至100ml无菌胆盐乳糖培养基中，35～37℃培养18～24小时。
③供试品阴性菌对照组：取1∶10供试液10ml，加入至100ml无菌营养肉汤培养基中，并加入金黄色葡萄球菌1ml，35～37℃培养18～24小时。
④稀释剂对照组：取灭菌pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液10ml，加入试验菌，使菌液浓度在50～100cfu/ml，加入至100ml无菌胆盐乳糖培养基中， 35～37℃培养18～24小时。
⑤菌液组：在100ml无菌胆盐乳糖培养基中加入1ml大肠埃希菌菌液， 35～37℃培养18～24小时。
验证结果
盐酸环苯扎林缓释胶囊控制菌(大肠埃希菌)的验证结果
Figure RE-GDA0003628722230000381
结果表明：控制菌试验组检出试验菌，阴性菌对照组未检出阴性对照菌，表明该本品可以采用常规法进行控制菌的微生物检查。
验证结论
本品按微生物限度检查法(中国药典2010年版二部附录ⅪJ)的方法验证要求，经方法学验证试验，结果可用常规法进行细菌、霉菌、酵母菌及控制菌的微生物检查。
供试品检查
取本品10g，置100ml灭菌pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液中，振摇，使溶解，作为1∶10供试液，取1∶10供试液2ml，分注2个平皿中。倾注琼脂培养基混匀，凝固，培养计数，进行细菌、霉菌和酵母菌检查。
取1∶10供试液10ml，注入100ml无菌胆盐乳糖培养基，进行控制菌检查。
盐酸环苯扎林缓释胶囊(30mg规格)微生物限度检查结果
Figure RE-GDA0003628722230000391
盐酸环苯扎林缓释胶囊(15mg规格)微生物限度检查结果
Figure RE-GDA0003628722230000392
结果表明：两种规格各三批盐酸环苯扎林缓释胶囊供试品的微生物限度均符合规定。
含量测定
参照盐酸环苯扎林原料的有关物质测定方法，采用高效液相色谱法(中国药典2010年版二部附录ⅤD)测定本品的含量，色谱条件同有关物质测定项下。
仪器：LC-10AT泵，SPD-10A紫外检测器；
色谱柱：Agela Venusil Mp C18 150mm×4.6mm 5μm；
检测波长：290nm；
流动相：水-乙腈-甲醇-甲磺酸(48∶28∶24∶0.2)，用二乙胺调节pH 值至3.6；
理论板数按盐酸环苯扎林峰计算不低于3000。
供试品溶液配制方法的选择
取20100408批盐酸环苯扎林缓释胶囊(30mg规格)，分别用表10-50 中所述的方法配制相同浓度的供试品溶液，配制对照品溶液所用的溶剂与相应的供试品溶液一致，依法测定含量
盐酸环苯扎林缓释胶囊含量测定供试品溶液配制方法选择结果
Figure RE-GDA0003628722230000401
Figure RE-GDA0003628722230000411
Figure RE-GDA0003628722230000421
注：*第一步指取内容物置量瓶中，加溶剂溶解稀释的过程；
*第二步指精密量取续滤液2ml，置50ml量瓶中，加溶剂稀释至刻度的过程。
根据以上试验结果，确定供试品溶液的配制方法为：取本品1粒，将内容物全部倾入50ml(30mg规格)或25ml(15mg规格)量瓶中，加甲醇2ml，振摇5分钟，再加水适量，超声使盐酸环苯扎林溶解，加水稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液2ml，置50ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。
线性范围及回归方程
精密称取盐酸环苯扎林对照品30.94mg，置50ml量瓶中，加甲醇2ml，再加水适量使溶解，加水稀释至刻度，摇匀，精密量取1.2、1.6、2.0、2.4、 2.8ml，分别置5个50ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，分别精密量取上述系列溶液20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，以峰面积对浓度作曲线，按最小二乘法计算回归方程及相关系数
盐酸环苯扎林的浓度与相应的峰面积
Figure RE-GDA0003628722230000431
回归方程：Amount＝2.650e-005×Area－2.922e-001
相关系数：r＝0.9998
结果表明：盐酸环苯扎林在浓度为14.85μg/ml～34.65μg/ml的范围内，峰面积对浓度呈良好的线性关系。
重复性试验
取含量线性项下中间浓度的溶液，重复进样6次，记录色谱图，计算主峰面积的相对标准偏差
酸环苯扎林缓释胶囊含量测定重复性试验结果
Figure RE-GDA0003628722230000432
结果表明：盐酸环苯扎林缓释胶囊含量测定重复性试验结果良好。
回收率试验
取盐酸环苯扎林约24mg、30mg、36mg各3份，精密称定，分别置50ml 量瓶中，分别按15mg规格的处方中原料药与辅料的比例加入一定量的辅料，加甲醇2ml，振摇5分钟，再加水适量，超声使溶解，加水稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液2ml，置50ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，精密量取20μl注入液相色谱仪，记录色谱图；另取盐酸环苯扎林约30mg，精密称定，置50ml量瓶中，加甲醇2ml，再加水适量使溶解，加水稀释至刻度，摇匀，精密量取2ml，置50ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，同法测定。按外标法以峰面积计算检出量和回收率
盐酸环苯扎林缓释胶囊含量测定回收率试验结果
Figure RE-GDA0003628722230000441
结果表明：盐酸环苯扎林缓释胶囊的含量回收率试验结果良好。
溶液的稳定性试验
取含量回收率试验项下100％浓度的溶液，分别于0、2、4、6、8小时依法进样，记录色谱图，计算主峰面积的相对标准偏差
盐酸环苯扎林缓释胶囊含量测定溶液稳定性试验结果
Figure RE-GDA0003628722230000451
结果表明：盐酸环苯扎林缓释胶囊含量测定溶液在8小时内稳定。
中间精密度试验
取20100504批盐酸环苯扎林缓释胶囊，由两个分析人员使用不同的仪器，照含量测定法，分别连续测定6次含量，计算含量的相对标准偏差
盐酸环苯扎林缓释胶囊含量测定中间精密度试验结果
Figure RE-GDA0003628722230000452
结果表明：盐酸环苯扎林缓释胶囊含量测定中间精密度试验结果良好。
供试品及美国上市胶囊的含量测定
取本品10粒，分别将内容物全部倾入25ml(15mg规格)或50ml(30mg 规格)量瓶中，加甲醇2ml，振摇5分钟，再加水适量，超声使盐酸环苯扎林溶解，加水稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液2ml，置50ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，精密量取20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图；另取盐酸环苯扎林对照品约30mg，精密称定，置50ml量瓶中，加甲醇2ml，再加水适量使溶解，加水稀释至刻度，摇匀，精密量取2ml，置50ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，同法测定。按外标法以峰面积计算每粒的含量，求出平均含量，即得。
盐酸环苯扎林缓释胶囊(30mg规格)含量测定结果
Figure RE-GDA0003628722230000461
盐酸环苯扎林缓释胶囊(15mg规格)含量测定结果
Figure RE-GDA0003628722230000462
结果表明：盐酸环苯扎林在浓度为14.85μg/ml～34.65μg/ml的范围内，峰面积对浓度呈良好的线性关系；同一溶液连续测定六次，峰面积的 RSD＝0.18％；含量平均回收率为99.43％，各回收率测定值的相对标准偏差为 0.88％；由两个分析人员使用不同仪器测得的12次测定值的RSD为0.81％，且溶液在8小时内稳定，故选用高效液相色谱法测定本品的含量。
对于本领域技术人员而言，显然本发明不限于上述示范性实施例的细节，而且在不背离本发明的精神或基本特征的情况下，能够以其他的具体形式实现本发明。因此，无论从哪一点来看，均应将实施例看作是示范性的，而且是非限制性的，本发明的范围由所附权利要求而不是上述说明限定，因此旨在将落在权利要求的等同要件的含义和范围内的所有变化囊括在本发明内。
此外，应当理解，虽然本说明书按照实施方式加以描述，但并非每个实施方式仅包含一个独立的技术方案，说明书的这种叙述方式仅仅是为清楚起见，本领域技术人员应当将说明书作为一个整体，各实施例中的技术方案也可以经适当组合，形成本领域技术人员可以理解的其他实施方式。

Claims (6)

1.一种用于盐酸环苯扎林缓释胶囊的质量检测方法，其特征在于：包括以下步骤：
步骤一，样品来源选择：选择盐酸环苯扎林缓释胶囊；
步骤二，紫外-可见分光光度法的鉴别：盐酸环苯扎林有紫外特征吸收峰，可以用来鉴别本品中的盐酸环苯扎林；
取本品1粒，将内容物全部倾入50ml(15mg规格)或100ml(30mg规格)量瓶中，加甲醇2ml，振摇5分钟，再加水10ml，超声处理使盐酸环苯扎林溶解，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，量取滤液适量，用甲醇稀释制成每1ml中约含盐酸环苯扎林15μg的溶液，照紫外-可见分光光度法，在200～400nm的波长范围内测定；
步骤三，释放试验测试：
步骤四，微生物的检测：
首先菌悬液的制备，再对供试液制备，最后进行验证；具体验证方法为：
分别取1∶10供试液10ml，加入至100ml无菌胆盐乳糖，后在上述胆盐乳糖培养基中加入1ml大肠埃希菌菌液，35～37℃培养18～24小时，按大肠埃希菌检查法进行检查；
空白对照组：分别取pH7.0的无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液10ml，加入至100ml无菌胆盐乳糖培养基中，35～37℃培养18～24小时；
供试品阴性菌对照组：取1∶10供试液10ml，加入至100ml无菌营养肉汤培养基中，并加入金黄色葡萄球菌1ml，35～37℃培养18～24小时；
稀释剂对照组：取灭菌pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液10ml，加入试验菌，使菌液浓度在50～100cfu/ml，加入至100ml无菌胆盐乳糖培养基中，35～37℃培养18～24小时；
菌液组：在100ml无菌胆盐乳糖培养基中加入1ml大肠埃希菌菌液，35～37℃培养18～24小时。
2.根据权利要求1所述的一种用于盐酸环苯扎林缓释胶囊的质量检测方法，其特征在于，所述释放试验测定方法取本品，照释放度测定法，采用溶出度测定法装置，分别以0.1mol/L盐酸、pH4.5醋酸-醋酸钠缓冲液、pH6.8磷酸盐缓冲液、水各900ml为释放介质，转速为每分钟50转，依法操作，分别在1、2、4、6、8、12、16、20、24小时，各取溶液5ml，滤过，并即时补充相同温度的释放介质5ml，精密量取续滤液20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图；另取盐酸环苯扎林对照品适量，精密称定，加释放介质溶解并定量稀释制成每1ml约含盐酸环苯扎林17μg(15mg规格)或33μg(30mg规格)的溶液，同法测定，按外标法以峰面积计算每粒在不同时间的释放量，以时间(小时)对6粒的累积释放量(％)作曲线，即得各批样品的释放曲线。
3.根据权利要求2所述的一种用于盐酸环苯扎林缓释胶囊的质量检测方法，其特征在于，所述释药曲线相似性判断标准：
Figure FDA0003535993080000021
其中，Rt为在t时参照品的释药百分率；Tt为在t时试验品的释药百分率；n为试验点数；f2取值范围在0～100之间，随着释放百分率差异增大，f2值显著减小；f2值大表示两曲线间差异小，即相似性大。当两释药曲线完全相同时，f2＝100；当两曲线平均相差10％时，f2＝50。当f2值在50～100范围内时，表明两释药曲线相似；当f2小于50时，则表明两释药曲线有显著性差异。
4.根据权利要求1所述的一种用于盐酸环苯扎林缓释胶囊的质量检测方法，其特征在于，所述菌液的制备：接种大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌的新鲜培养物至10ml营养肉汤培养基中，35～37℃培养18～24小时；取此培养物1ml至0.9％无菌氯化钠溶液9ml中，采用10倍递增稀释法稀释至10-5～10-7，使菌液浓度为50～100cfu/ml；
接种白色念珠菌的新鲜培养基物至10ml改良马丁培养基中，23～28℃培养24～48小时；取上述培养物1ml至0.9％无菌氯化钠溶液9ml中，采用10倍递增稀释法稀释至10-5～10-7，使菌液浓度为50～100cfu/ml；
接种黑曲霉的新鲜培养物至改良马丁琼脂斜面培养基上，23～28℃培养5～7天，加入3～5ml含聚山梨酯80的0.9％无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱，然后，吸出孢子悬液1ml至0.9％无菌氯化钠溶液9ml中，采用10倍递增稀释法稀释至10-4～10-6，使菌液浓度为50～100cfu/ml。
5.根据权利要求1所述的一种用于盐酸环苯扎林缓释胶囊的质量检测方法，其特征在于，所述供试液制备采用盐酸环苯扎林缓释胶囊10g，置100ml灭菌pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液中，振摇，使溶解，作为1∶10供试液。
6.根据权利要求1所述的一种用于盐酸环苯扎林缓释胶囊的质量检测方法，其特征在于，所述盐酸环苯扎林在浓度为14.85μg/ml～34.65μg/ml的范围内，峰面积对浓度呈良好的线性关系；同一溶液连续测定六次，峰面积的RSD＝0.18％；含量平均回收率为99.43％，各回收率测定值的相对标准偏差为0.88％；由两个分析人员使用不同仪器测得的12次测定值的RSD为0.81％，且溶液在8小时内稳定，故选用高效液相色谱法测定本品的含量。
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Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN116660430A (zh) * 2023-05-16 2023-08-29 正大制药（青岛）有限公司 一种盐酸环苯扎林缓释胶囊的检测方法

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20110003300A1 (en) * 2009-05-04 2011-01-06 Novartis Ag Rapid sterility microassay
CN102586393A (zh) * 2012-02-24 2012-07-18 陕西省食品药品检验所 一种硝酸咪康唑栓的微生物限度检查方法
CN107022597A (zh) * 2017-04-01 2017-08-08 广西壮族自治区梧州食品药品检验所 抗炎胶囊中微生物限度检查方法
CN111707764A (zh) * 2020-06-30 2020-09-25 正大制药（青岛）有限公司 一种盐酸环苯扎林缓释胶囊的检测方法

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20110003300A1 (en) * 2009-05-04 2011-01-06 Novartis Ag Rapid sterility microassay
CN102586393A (zh) * 2012-02-24 2012-07-18 陕西省食品药品检验所 一种硝酸咪康唑栓的微生物限度检查方法
CN107022597A (zh) * 2017-04-01 2017-08-08 广西壮族自治区梧州食品药品检验所 抗炎胶囊中微生物限度检查方法
CN111707764A (zh) * 2020-06-30 2020-09-25 正大制药（青岛）有限公司 一种盐酸环苯扎林缓释胶囊的检测方法

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
中国食品药品检定研究院: "《中国食品药品检验检测技术系列丛书 中国药品检验标准操作规范 2019版》", 31 August 2019, 中国医药科技出版社 *
汪六英等: ""高效液相色谱法检测大鼠血浆中盐酸环苯扎林浓度的方法研究"", 《现代医药卫生》 *
胡海燕等主编: "《药剂学实验教程》", 31 January 2020, 中山大学出版社 *

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN116660430A (zh) * 2023-05-16 2023-08-29 正大制药（青岛）有限公司 一种盐酸环苯扎林缓释胶囊的检测方法
CN116660430B (zh) * 2023-05-16 2023-11-17 正大制药（青岛）有限公司 一种盐酸环苯扎林缓释胶囊的检测方法

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