CN114558075B - 一种治疗类风湿关节炎的中药组合物及其制备方法和应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种治疗类风湿关节炎的中药组合物及其制备方法和应用，属于中药领域。其中，以牛膝和穿山龙为君药，青风藤、海风藤、桂枝、杜仲、五加皮、地枫皮和千年健为配伍。该中药组合物能够有效减少肿瘤坏死因子(TNF‑α)诱导的类风湿关节炎滑膜成纤维细胞(MH7A)细胞上清液中的炎症因子，白介素6(IL‑6)和白介素1β(IL‑1β)的分泌，同时能够有效上调促凋亡蛋白(Bax)/抑凋亡蛋白(Bcl‑2)的表达，从而促进MH7A细胞的凋亡，具有良好的治疗类风湿关节炎的作用。

Description

一种治疗类风湿关节炎的中药组合物及其制备方法和应用

技术领域

本发明属于中药领域，涉及到一种治疗类风湿关节炎的中药组合物及其制备方法和应用。

背景技术

类风湿关节炎(Rheumatoid Arthritis，RA)是一种慢性、炎症、自身免疫性疾病。RA呈对称性发作，常表现为关节肿胀疼痛，活动不利等；其主要的病理变化是关节滑膜炎性细胞浸润、血管翳形成，晚期关节软骨及骨组织破坏导致关节强直、畸形，活动功能严重障碍，甚至劳动力完全丧失等。RA可发于任何年龄，但多发于30-50岁的女性，其中男女发病比例约为1:3，我国类风湿关节炎的发病率约为0.2-0.4％。RA的发病原因至今尚不明确，临床症状多样且致残率非常高，严重影响患者的生存质量和预期寿命，同时给患者本人、患者家庭和国家医疗保障带来巨大的经济负担和社会负担，因此WHO将其列为全世界公认的五大疑难杂症之一[Rheumatoid arthritis.Nat Rev Dis Primers,2018.4:p. 18002；Littlejohn,E.A.and S.U.Monrad,Early Diagnosis and Treatment of RheumatoidArthritis.Prim Care,2018.45(2):p.237-255]。

RA发病初期隐匿，临床表现复杂多样，发病原因和发病机制尚不明确，是遗传因素、环境因素、微生物感染、基因突变和自身免疫介导等多种因素共同作用打破了机体的免疫平衡和免疫耐受，引起了自身免疫性反应和炎症反应，最终导致了RA的发生和发展。

目前尚不能根治类风湿关节炎，只能通过早期控制病情，延缓疾病发展和自然病程，来达到改善关节功能和改善疾病预后的目的。现阶段治疗RA的西药包括传统DMARDs药物、非甾体类抗炎药(NSARDs)、糖皮质激素、植物药制剂及生物合成类DMARDs制剂等。传统DMARDs包括甲氨蝶呤、来氟米特等，可以控制和延缓病情的进展，但是发挥作用较慢不具有明显的止痛和抗炎作用；非甾体类抗炎药(NSARDs)是临床上最常用的RA治疗药物，包括塞来昔布、依托考昔等，能够缓解疼痛和急性炎症，其主要的不良反应包括心血管不良事件，胃肠道不适症状以及血液系统和肝肾功能损害等；糖皮质激素类药物例如乙酸丙炎松能够迅速缓解关节肿痛和全身反应，具有强大的抗炎作用，但是激素类药物具有严重的副作用包括血压升高、糖脂代谢紊乱、肥胖、骨质疏松和股骨头坏死等；现有的植物制剂有雷公藤、青藤碱和白芍总苷等，能够有效缓解关节肿痛，但是其潜在的不良反应如肝脏损坏、肾功能损伤值得重视。随着近年来分子生物学和免疫技术的发展，生物制剂的出现为RA的治疗带来了新的方法，显著提高了RA的治疗效果，但是价格昂贵，远远超过了一般人的经济能力，并且生物制剂有加重或诱发结核菌和乙型肝炎感染的风险，并有诱发肿瘤的风险。以上治疗 RA的药物各有利弊，无论是哪种药物都有严格的适应症、禁忌症和不良反应，即使是价格昂贵的生物制剂也有增加感染和诱发肿瘤的风险。因此开发疗效好、副作用低且价格低廉的抗RA药物是十分必要的[陆清怡,汉防己甲素通过调节中性粒细胞活性治疗类风湿关节炎的机制研究.2020,北京中医药大学]。

在中医古籍中没有对类风湿关节炎的记载，在中医中，RA属于“痹症”的范畴。《素问·痹症》指出，“所谓痹者，各以其时重感于风寒湿之气也。”明确指出了痹症的病因以风、寒、湿三气为主。经过几千年的临床实践积累，中医药疗法在治疗痹病上有丰富的经验，在临床上有着较好的疗效。牛膝是苋科植物牛膝的干燥根，味苦、甘且酸，《本经》中记载，“寒湿痿痹，四肢拘挛，膝痛不可屈伸逐血气，伤热火烂，堕胎，久服轻身耐老”。穿山龙是薯蓣植物穿龙薯蓣的干燥根茎，味甘，苦，性温，具有祛风除湿，舒筋通络，活血止痛的作用，常用于治疗风寒湿痹。牛膝和穿山龙是本发明中的中药组合物中的君药，能够起到主治类风湿关节炎的作用。酒素有“百药之长”之称，性温，味辛而苦甘，有温通血脉，宣散药力，温暖肠胃，祛风散寒的作用，也可以直接当药，治疗关节酸痛，行动不利，肢寒体冷等症。同时酒精还是一种良好的半极性有机溶剂，与传统中药材的水煎法相比，溶解性能更好，不仅能够溶解中药材中的大部分亲水性成分，难溶于水的亲脂性成分在乙醇中的溶解度也比较大。传统的水煎法往往需要高温加热，会引起一些热敏性有效成分的大量分解，而乙醇浸泡法则避免了这一缺点。药酒又名“酒剂”，用药酒治疗疾病是中医中一种历史悠久且独特的疗法。药酒味甘辛，性温，有治疗风寒湿痹，散瘀止痛，祛风活血的功效，在临床上主要用于治疗类风湿关节炎，具有抗炎镇痛的作用[刘志萍,et al.,中药药酒的控制技术及临床应用研究进展.中国民族民间医药,2015.24(19):p.19-21].本发明提供了一种以牛膝和穿山龙为君药的配伍中药组合物，用60％酒精浸泡后，用于治疗类风湿关节炎，目前尚无文献报道。

发明内容

针对上述问题，本发明提供了一种治疗类风湿关节炎的中药组合物以及该中药组合物的制备方法，本发明提供的中药组合物的制备物能够有效地抑制类风湿关节炎滑膜成纤维细胞(MH7A)的炎症。

为了达到上述目的，本发明采用的技术方案为：

一种治疗类风湿关节炎的中药组合物，按照中药组合物总重量100％计算，各成分的重量份数如下：牛膝10-12％、穿山龙10-12％、青风藤10-12％、海风藤10-12％、桂枝10-12％、杜仲10-12％、五加皮11-12％、地枫皮11-12％和千年健10-12％。

优选的，中药组合物中各原料药组分的质量相同。

一种治疗类风湿关节炎的中药组合物，所述的中药组合物的剂型为药酒或冻干粉。

所述药酒的制备方法包含如下步骤：

步骤1，按配比称取各原料药，切碎或粉碎成粗粉，置于封闭的容器中。

步骤2，在步骤1所得粗粉中加入中药组合物总重量5-10倍重量份白酒后浸泡，并在浸泡期间经常晃动酒器；其中，白酒的度数为50-60°，浸泡时间夏季为 5-7天，冬季为7-14天。

步骤3，浸泡完成后滤出药液，将药渣进行压榨，再将浸出液与榨出液合并，静置1-2天后再过滤即成。

进一步的，所述冻干粉的制备方法包含如下步骤：

步骤1，按配比称取各原料药，切碎或粉碎成粗粉，置于封闭的容器中。

步骤2，在步骤1所得粗粉中加入中药组合物总重量5-10倍的60％(v/v) 乙醇溶液，浸泡60天。

步骤3，过滤取滤液，将滤液在40-50℃下减压蒸馏成浓缩提取液，再真空干燥后即得。

一种治疗类风湿关节炎的中药组合物，采用上述制备方法制得治疗类风湿关节炎的中药组合物在治疗类风湿关节炎中的应用。

本发明具有以下有益效果：牛膝能够逐淤通经，补肝肾，强筋骨，利尿通淋，引血下行，用于闭经，痛经，腰膝酸痛，筋骨无力等症状；穿山龙能够祛风除湿，舒筋通络，活血止痛，止咳平喘，用于治疗风湿痹病，关节麻木，跌扑损伤等症状；其中牛膝和穿山龙是该中药组合物的君药。桂枝具有发汗解表，散寒止痛，通阳化气的功效，用于治疗风寒感冒，寒凝血滞诸痛症；杜仲能够补肝肾，强筋骨，治疗腰肌酸疼，足膝瘘弱等症；青风藤具有祛风湿，通经络，利小便的功效，能够治疗风湿痹病，关节肿胀，麻痹瘙痒；海风藤具有祛风湿，通经络，止痹痛的功效，主治风湿痹痛，肢节疼痛，筋脉拘挛，屈伸不利等；千年健具有祛风湿，壮筋骨的功效，主要用于治疗风湿痹痛，腰膝冷痛，拘挛麻木，筋骨瘘软；五加皮具有祛风湿，补益肝肾，强筋壮骨，利水消肿的作用，主治风湿痹病，筋骨瘘软等症；以上药材作为辅助药不仅能够增强君药祛风湿，止痹痛的效果，还能消肿止痛，强筋壮骨。

本发明中所述的中药组合物制备物对类风湿关节炎滑膜成纤维细胞(MH7A) 具有良好的抗炎作用。通过酶联免疫吸附(ELISA)实验表明，所述的中药组合物能够有效减少肿瘤坏死因子(TNF-α)诱导的MH7A细胞上清液中炎症因子，白介素6(IL-6)、白介素1β(IL-1β)的分泌；免疫印迹(Western Blot)实验表明，所述的中药组合物能够有效上调促凋亡蛋白(Bax)/抑凋亡蛋白(Bcl-2) 的表达，从而促进MH7A细胞的凋亡，说明该中药组合物具有良好的治疗类风湿关节炎的作用。

附图说明

图1为中药组合物冻干粉复溶液给药后TNF-α诱导的MH7A细胞上清液中 IL-1β含量变化图。图1显示该中药组合物的冻干粉给药后，TNF-α诱导的MH7A 细胞上清液中IL-1β含量的变化；柱状图从左到右分别是对照组、诱导组(TNF-α诱导组不加药)以及中药组合物冻干粉复溶给药组(TNF-α诱导后加药)；其中中药组合物冻干粉复溶液的浓度为10μg/mL。

图2为中药组合物冻干粉复溶液给药后TNF-α诱导的MH7A细胞上清液中 IL-6含量变化图。图2显示该中药组合物的冻干粉给药后，TNF-α诱导的MH7A 细胞上清液中IL-6含量的变化；柱状图从左到右分别是对照组、诱导组(TNF-α诱导组不加药)以及中药组合物冻干粉复溶给药组(TNF-α诱导后加药)；其中中药组合物冻干粉复溶液的浓度为10μg/mL。

图3为中药组合物冻干粉复溶液给药后TNF-α诱导的MH7A细胞中Bax和 Bcl-2表达量变化图。图3显示该中药组合物冻干粉复溶液给药后，TNF-α诱导的MH7A细胞中Bax和Bcl-2蛋白表达量的变化；蛋白条带从左到右分别是对照组、诱导组(TNF-α诱导组不加药)以及中药组合物冻干粉复溶给药组(TNF-α诱导后加药)；GAPDH蛋白作为内参蛋白用于矫正蛋白定量；其中中药冻干粉的给药浓度是2.5、5和10μg/mL。

图4为中药组合物冻干粉复溶液给药后TNF-α诱导的MH7A细胞中Bax和 Bcl-2表达量变化统计图。图4为图3的免疫印迹实验蛋白表达量的统计图，用于表示中药组合物冻干粉给药后TNF-α诱导的MH7A细胞中Bax和Bcl-2蛋白具体表达量的变化，柱状图从左到右分别是对照组、诱导组(TNF-α诱导组不加药)以及中药组合物冻干粉复溶给药组(TNF-α诱导后加药)。

其中p代表统计学差异，p<0.05,用*或#表示；p<0.01，用**或##表示；p<0.001，用***或###表示。

具体实施方式

以下结合附图，通过实施例进一步说明本发明，但不作为对本发明的限制。以下所描述的具体实施方案仅仅是示例性的，并不意图限制本发明，与如下试剂和仪器的类型、型号、品质、性质或功能相同或相似的材料均可以用于实施本发明。下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。

实施例1治疗类风湿关节炎的中药组合物药酒的制备：

步骤1，按照中药组合物100％计算，称取以下重量份的原料药：牛膝10％、穿山龙10％、青风藤12％、海风藤12％、桂枝12％、杜仲12％、五加皮11％、地枫皮11％和千年健10％，切碎或粉碎成粗粉，置于封闭的容器中。

步骤2，在步骤1所得粗粉中加入中药组合物总重量5倍重量份白酒后浸泡，并在浸泡期间经常晃动酒器；其中，白酒的度数为60°，浸泡5天。

步骤3，浸泡完成后滤出药液，将药渣进行压榨，再将浸出液与榨出液合并，静置1天后再过滤即成。

实施例2治疗类风湿关节炎的中药组合物药酒的制备：

步骤1，按照中药组合物100％计算，称取以下重量份的原料药：牛膝11.5％、穿山龙10.5％、青风藤10.5％、海风藤10.5％、桂枝11.5％、杜仲11.5％、五加皮11.5％、地枫皮11.5％和千年健11％，切碎或粉碎成粗粉，置于封闭的容器中。

步骤2，在步骤1所得粗粉中加入中药组合物总重量7.5倍重量份白酒后浸泡，并在浸泡期间经常晃动酒器；其中，白酒的度数为55°，浸泡10天。

步骤3，浸泡完成后滤出药液，将药渣进行压榨，再将浸出液与榨出液合并，静置1.5天后再过滤即成。

实施例3治疗类风湿关节炎的中药组合物药酒的制备：

步骤1，按照中药组合物100％计算，称取以下重量份的原料药：牛膝12％、穿山龙12％、青风藤10％、海风藤10％、桂枝10％、杜仲10％、五加皮12％、地枫皮12％和千年健12％，切碎或粉碎成粗粉，置于封闭的容器中。

步骤2，在步骤1所得粗粉中加入中药组合物总重量10倍重量份白酒后浸泡，并在浸泡期间经常晃动酒器；其中，白酒的度数为50°，浸泡14天。

步骤3，浸泡完成后滤出药液，将药渣进行压榨，再将浸出液与榨出液合并，静置2天后再过滤即成。

实施例4治疗类风湿关节炎的中药组合物冻干粉的制备：

步骤1，按照中药组合物100％计算，称取以下重量份的原料药：牛膝10％、穿山龙10％、青风藤12％、海风藤12％、桂枝12％、杜仲12％、五加皮11％、地枫皮11％和千年健10％，粉碎成粗粉，置于封闭的容器中。

步骤2，在步骤1所得粗粉中加入5倍重量的60％(v/v)乙醇溶液，浸泡 60天。

步骤3，过滤取滤液，将滤液在40℃下减压蒸馏成浓缩提取液，真空干燥后即得。

实施例5治疗类风湿关节炎的中药组合物冻干粉的制备：

步骤1，按照中药组合物100％计算，称取以下重量份的原料药：牛膝11.5％、穿山龙10.5％、青风藤10.5％、海风藤10.5％、桂枝11.5％、杜仲11.5％、五加皮11.5％、地枫皮11.5％和千年健11％，粉碎成粗粉，置于封闭的容器中。

步骤2，在步骤1所得粗粉中加入10倍重量的60％(v/v)乙醇溶液，浸泡 60天。

步骤3，过滤取滤液，将滤液在45℃下减压蒸馏成浓缩提取液，真空干燥后即得。

实施例6治疗类风湿关节炎的中药组合物冻干粉的制备：

步骤1，按照中药组合物100％计算，称取以下重量份的原料药：牛膝12％、穿山龙12％、青风藤10％、海风藤10％、桂枝10％、杜仲10％、五加皮12％、地枫皮12％和千年健12％，粉碎成粗粉，置于封闭的容器中。

步骤2，在步骤1所得粗粉中加入7.5倍重量的60％(v/v)乙醇溶液，浸泡 60天。

步骤3，过滤取滤液，将滤液在50℃下减压蒸馏成浓缩提取液，真空干燥后即得。

实施例7体外细胞实验：

一、实验材料：

1.1、细胞系：人类风湿关节炎滑膜成纤维细胞(MH7A)。

1.2、试剂：胎牛血清、胰蛋白酶、磷酸盐缓冲液、BCA试剂盒、Bax抗体、 Bcl-2抗体、IL-6ELISA试剂盒、IL-1βELISA试剂盒、和TNF-α。

1.3、仪器：倒置荧光显微镜、超净台、CO₂培养箱、化学发光凝胶成像系统、全波长多功能酶标仪。

二、ELISA实验检测所述中药组合物对TNF-α诱导的MH7A细胞上清液IL-6 和IL-1β分泌的抑制作用：

2.1实验方法和步骤：

(1)将对数生长期的MH7A细胞调整至细胞密度为2×10⁵个/mL，置于96 孔板，于37℃、5％CO₂培养箱中培养18h。

(2)细胞贴壁后，分为3组：

所述的对照组：只含有MH7A细胞，不加TNF-α诱导，不加中药组合物冻干粉复溶液；

所述的TNF-α诱导组：含有MH7A细胞，加入TNF-α诱导，不加中药组合物冻干粉复溶液；

所述的中药组合物冻干粉复溶给药组：含有MH7A细胞，加入TNF-α诱导，加中药组合物冻干粉复溶液。

其中中药组合物冻干粉复溶液是指将实施例3制备的冻干粉用磷酸盐(PBS) 缓冲液复溶后，加入不含血清的DMEM培养基配置成的溶液。

对照组、TNF-α诱导组和中药组合物冻干粉复溶给药组，分别加入不含血清的DMEM、不含血清的DMEM以及含药浓度为10μg/mL的无血清DMEM，0.5h 后诱导组和给药组加入TNF-α，孔内TNF-α浓度为10ng/mL，孵育24h。

(3)分别收集上述三组细胞上清于1.5mL离心管，2000-3000rpm/min离心 20min后，弃沉淀，将上清转移至新EP管中。

(4)采用ELISA试剂盒检测细胞上清样本中炎症因子的含量。

2.2实验结果：

ELISA实验结果如图1和图2所示，从图1可以看出，加入TNF-α诱导后，细胞上清中的IL-6的含量有明显上升，与对照组相比有统计学差异，加入 10μg/mL的中药冻干粉复溶液后，上清中IL-6的分泌水平明显下降，与诱导组相比有统计学差异。从图2可以看出，加入TNF-α诱导后，细胞上清中的IL-1β的含量有明显上升，与对照组相比有统计学差异，加入10μg/mL的中药冻干粉复溶液后，上清中IL-1β的分泌水平明显下降，与诱导组相比有统计学差异。

综合图1和图2的结果，该中药组合物制备的冻干粉复溶液能够明显降低 TNF-α诱导的MH7A细胞上清液中两种与RA密切相关的炎症因子(IL-6和IL-1β) 的含量，表明该中药组合物能够通过抑制炎症来治疗RA。

三、免疫印迹实验检测所述中药组合物对TNF-α诱导的MH7A细胞中 Bax/Bcl-2表达的上调作用：

3.1实验方法和步骤：

(1)将对数生长期的MH7A细胞调整至细胞密度为1×10⁶个/mL以每孔2mL 接种于6孔板。于37℃、5％CO₂培养箱中培养18h。

(2)细胞贴壁后，分为3组，对照组、TNF-α诱导组和中药组合物冻干粉复溶给药组(2.5、5和10μg/mL)，分别加入不含血清的DMEM、不含血清的 DMEM以及含药浓度分别为2.5、5和10μg/mL的无血清DMEM，0.5h后诱导组和给药组加入TNF-α，孔内TNF-α浓度为10ng/mL，孵育24h。

(3)按照细胞总蛋白的一般提取方法提取细胞总蛋白。

(4)按照以下步骤检测Bax和Bcl-2的表达：

(a)验漏后，配制12.5％的分离胶和浓缩胶，按照BCA试剂盒测定的蛋白浓度上样；(b)恒压150V，电流在70-80mA跑电泳；(c)剥胶、切胶、恒压200mA转膜；(d)TBST配制5％脱脂牛奶，摇床封闭1h；(e)按照一抗说明书配制一抗，4℃过夜孵育；(f)TBST洗膜10min，3次后二抗室温摇床孵育 1h；(g)TBST洗膜10min，3次后在发光仪器显影。

3.2实验结果：

结果如图3和图4所示，从图3看出，与对照组相比，加入TNF-α诱导后，促凋亡蛋白Bax表达量下降，抑凋亡蛋白Bcl-2表达量上升，且呈浓度依赖性， Bax/Bcl-2反映了细胞中促凋亡蛋白和抑凋亡蛋白的相对含量；图4是图3的统计学结果图，TNF-α诱导后，细胞中Bax/Bcl-2明显下降，给药浓度达到10μg/mL 时，细胞中Bax/Bcl-2明显上升，说明该中药组合物能够有效上调Bax/Bcl-2表达，从而促进MH7A细胞凋亡。

四、结论：

综合实施例4的体外实验结果，该中药组合物的冻干粉复溶给药后，能够抑制TNF-α诱导的MH7A细胞上清中两种与RA相关的炎症因子IL-6和IL-1β的分泌，同时该中药组合物的冻干粉复溶液还能通过上调Bax/Bcl-2的表达从而促进MH7A细胞的凋亡。

目前对于RA的治疗主要通过两个方面，一是通过抑制炎症来减轻后续由于炎症引起的各种并发症；由于在RA发病发展的过程中，滑膜成纤维细胞由于过度增殖及凋亡不足呈现肿瘤样增殖，因此促进滑膜成纤维细胞的凋亡也是当前RA治疗研究的另一重要方面。本发明提供的中药组合物冻干粉既能通过抑制炎症因子的分泌来减轻炎症，又能通过调节凋亡相关蛋白的表达来促进滑膜成纤维细胞的凋亡，因此本发明提供的中药组合物制备方法有效，能够有效治疗类风湿关节炎。

以上示例性实施方式所呈现的描述仅用以说明本发明的技术方案，并不想要成为毫无遗漏的，也不想要把本发明限制为所描述的精确形式。显然，本领域的普通技术人员根据上述教导做出很多改变和变化都是可能的。选择示例性实施方式并进行描述是为了解释本发明的特定原理及其实际应用，从而使得本领域的其它技术人员便于理解、实现并利用本发明的各种示例性实施方式及其各种选择形式和修改形式。本发明的保护范围意在由所附权利要求书及其等效形式所限定。

Claims (5)

1.一种治疗类风湿关节炎的中药组合物，其特征在于，所述的治疗类风湿关节炎的中药组合物按照总重量100％计算，各成分的重量份数如下：牛膝10-12％、穿山龙10-12％、青风藤10-12％、海风藤10-12％、桂枝10-12％、杜仲10-12％、五加皮11-12％、地枫皮11-12％和千年健10-12％；所述的中药组合物的剂型为药酒或冻干粉。

2.根据权利要求1所述的一种治疗类风湿关节炎的中药组合物，其特征在于，所述的中药组合物中各原料药组分的质量相同。

3.根据权利要求1或2所述的一种治疗类风湿关节炎的中药组合物的制备方法，其特征在于，当中药组合物的剂型为药酒时，其制备方法包含如下步骤：

步骤1，按配比称取各原料药，切碎或粉碎成粗粉，置于封闭的容器中；

步骤2，在步骤1所得粗粉中加入中药组合物总重量5-10倍重量份白酒后浸泡，并在浸泡期间经常晃动酒器；其中，白酒的度数为50-60°，浸泡时间夏季为5-7天，冬季为7-14天；

步骤3，浸泡完成后滤出药液，将药渣进行压榨，再将浸出液与榨出液合并，静置1-2天后再过滤即成。

4.根据权利要求1或2所述的一种治疗类风湿关节炎的中药组合物的制备方法，其特征在于，当中药组合物的剂型为冻干粉时，其制备方法包含如下步骤：

步骤1，按配比称取各原料药，切碎或粉碎成粗粉，置于封闭的容器中；

步骤2，在步骤1所得粗粉中加入中药组合物总重量5-10倍的60％(v/v)乙醇溶液，浸泡60天；

步骤3，过滤取滤液，将滤液在40-50℃下减压蒸馏成浓缩提取液，再真空干燥后即得。

5.根据权利要求1或2所述的一种治疗类风湿关节炎的中药组合物在制备治疗类风湿关节炎药物中的应用。

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