CN114558049B - 一种用于治疗慢阻肺稳定期系列的中药方药及应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种用于治疗慢阻肺稳定期系列的中药方药及应用,所述中药方药包括参芪温肺方、参芪补中方或参芪调肾方;所述参芪温肺方、参芪补中方和参芪调肾方中均包括人参和炙黄芪。本发明中提出的参芪温肺方可明显改善慢阻肺肺气虚证;参芪补中方可明显改善慢阻肺肺脾气虚证;参芪调肾方可明显改善慢阻肺肺肾气虚证;本发明提出的治疗慢阻肺稳定期系列的中药方药能明显减轻慢阻肺稳定期患者的临床症状,减少急性加重次数,有利于慢性阻塞性肺疾病症状的稳定和恢复,改善患者生活质量,且无明显副作用。
Description
技术领域
本发明属于中药领域,特别涉及一种用于治疗慢阻肺稳定期系列的中药方药及应用。
背景技术
慢性阻塞性肺疾病简称慢阻肺(Chronic obstructive pulmonary disease,COPD),是一种常见的、可以预防和治疗的疾病,其特征是持续存在呼吸系统症状和气流受限,通常与显著暴露于有害颗粒或气体引起的气道和(或)肺泡异常有关。40岁以上的COPD患者占总的COPD患病的13.7%,中国总患病人数约9990万。世界卫生组织资料表明,2020年COPD将在全球疾病经济负担排名位于第5位。COPD有稳定期与急性加重期(AECOPD)两种状态,其中COPD稳定期患者的病情通常较为缓和,临床常以西医作为治疗COPD的常规方法,一般使用抗生素、激素等进行治疗,主要药物为支气管舒张剂、糖皮质激素等,这些药物的长期使用给家庭和社会都带来了不小的经济负担,而且不能避免患者的反复感染,治疗但效果不甚理想。
COPD临床表现为“咳、痰、喘、胀”,主要与中医的“肺胀”病相对应。肺胀是因为喘咳日久,肺脾肾心俱虚,气道滞塞,肺气胀满,出现以胸部膨满,咳逆上气,动后尤甚,痰涎壅盛,甚则面色晦暗,唇舌发绀、面目四肢浮肿等临床特征的疾病。中医认为肺胀属本虚标实之证,而疾病稳定期多属虚证,初为肺气虚,迁延不愈发展为肺脾气虚,最后可累及于肾,转为肺肾气虚。COPD稳定期的防治是延缓COPD进展的关键,现代医学抗炎药物尚不能有效中断COPD稳定期慢性炎症发展,因此,提出一种治疗COPD稳定期的药物尤为重要。
发明内容
针对上述问题,本发明提出了一种用于治疗慢阻肺稳定期系列的中药方药,所述中药方药包括参芪温肺方、参芪补中方或参芪调肾方;
所述参芪温肺方、参芪补中方和参芪调肾方中均包括人参和炙黄芪。
进一步地,所述中药方药为参芪温肺方;
所述参芪温肺方用于治疗慢阻肺稳定期肺气虚证,包括以下重量份原料:人参8-12g,炙黄芪13-17g,干姜4-8g,陈皮8-12g,白术8-12g,桔梗4-8g和炙甘草4-8g。
进一步地,所述中药方药为参芪补中方;
所述参芪补中方用于治疗慢阻肺稳定期肺脾气虚证,包括以下重量份原料:人参8-12g,炙黄芪18-22g,白术8-12g,当归8-12g,半夏4-8g,金沸草7-11g,五味子4-8g和炙甘草4-8g。
进一步地,所述中药方药为参芪调肾方;
所述参芪调肾方用于治疗慢阻肺稳定期肺肾气虚证,包括以下重量份的原料:人参8-12g,炙黄芪18-22g,山萸肉10-14g,益智仁8-12g,玉竹4-8g,陈皮4-8g,肉桂1-5g,桃仁8-12g和白芥子4-8g。
进一步地,所述参芪温肺方包括以下重量份原料:人参10g,炙黄芪15g,干姜6g,陈皮10g,白术10g,桔梗6g,炙甘草6g。
进一步地,所述参芪补中方包括以下重量份原料:人参10g,炙黄芪20g,白术10g,当归10g,半夏6g,金沸草9g,五味子6g,炙甘草6g。
进一步地,所述参芪调肾方包括以下重量份原料:人参10g,炙黄芪20g,山萸肉12g,益智仁10g,玉竹6g,陈皮6g,肉桂3g,桃仁10g和白芥子6g。
本发明还公开了所述中药方药在制备治疗慢阻肺稳定期肺气虚病症药物上的应用。
本发明还公开了所述中药方药在制备治疗慢阻肺稳定期肺脾气虚病症药物上的应用。
本发明还公开了所述中药方药在制备治疗慢阻肺稳定期肺肾气虚病症药物上的应用。
本发明还公开了所述中药方药在药物制剂或消毒用品中的应用。
本发明的有益效果:
本发明中提出的参芪温肺方可明显改善慢阻肺肺气虚证;参芪补中方可明显改善慢阻肺肺脾气虚证;参芪调肾方可明显改善慢阻肺肺肾气虚证;本发明提出的治疗慢阻肺稳定期系列的中药方药能明显减轻慢阻肺稳定期患者的临床症状,减少急性加重次数,有利于慢性阻塞性肺疾病症状的稳定和恢复,改善患者生活质量,且无明显副作用。
本发明的其它特征和优点将在随后的说明书中阐述,并且,部分地从说明书中变得显而易见,或者通过实施本发明而了解。本发明的目的和其他优点可通过在说明书、权利要求书以及附图中所指出的结构来实现和获得。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案,下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作一简单地介绍,显而易见地,下面描述中的附图是本发明的一些实施例,对于本领域普通技术人员来讲,在不付出创造性劳动的前提下,还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1示出了本发明实施例4中各实验组大鼠肺组织病理形态图;
图2a示出了本发明实施例5中正常组大鼠肺组织病理形态图;
图2b示出了本发明实施例5中模型组大鼠肺组织病理形态图;
图2c示出了本发明实施例5中参芪补中方组大鼠肺组织病理形态图;
图3示出了本发明实施例6中各实验组大鼠肺组织病理形态图。
具体实施方式
为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚,下面将结合本发明实施例中的附图,对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地说明,显然,所描述的实施例是本发明一部分实施例,而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例,本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例,都属于本发明保护的范围。
本实施例提出的系列方药根据慢阻肺稳定期患者脏腑本虚的生理特点,依据固本培元法的指导理念,温养气血的思想高度契合COPD稳定期肺、脾、肾的亏虚的病机发展和慢性炎症、免疫失衡、代谢紊乱的病理机制。从COPD稳定期常见的三种症型肺气虚证、肺脾气虚证、肺肾气虚证出发,提出系列方药。中医学在COPD稳定期的防治方面特色鲜明,疗效可靠。
本发明实施例所提出的系列方药主要包括以下三种:参芪温肺方、参芪补中方和参芪调肾方。所述药方均可直接水煎或混合成粉末或制成药片和药丸后服用。
当COPD稳定期的症型为肺气虚证时,系列方药为参芪温肺方;当COPD稳定期的症型为肺脾气虚证时,系列方药为参芪补中方;当COPD稳定期的症型为肺肾气虚证时,系列方药为参芪调肾方。
其中,参芪温肺方包括以下重量份原料:人参8-12g,炙黄芪13-17g,干姜4-8g,陈皮8-12g,白术8-12g,桔梗4-8g和炙甘草4-8g。优选各原料的重量份为:人参10g,炙黄芪15g,干姜6g,陈皮10g,白术10g,桔梗6g,炙甘草6g。上述原料中,人参性甘、平,归脾、肺、心经,功善补脾益肺、大补元气,复脉固脱;炙黄芪甘,微温;归脾、肺经,功善益卫固表,补气升阳,两药配伍,补肺气、固表气,共为君药。干姜辛热,既能温肺散寒以化饮止咳,又能温运脾阳以除湿,白术燥湿化痰,使参芪补而不滞,二者共为臣药。陈皮理气化痰以畅中,治痰则治气,气顺则痰消,佐白术健脾燥湿以杜生痰之源,桔梗宣利肺气,调畅气机,又能载药上行,具有补肺之功,为佐药。炙甘草化痰止咳、益气和中、调和诸药,为使药。诸药配合,有温肺化痰,益气平喘功效。
参芪补中方包括以下重量份原料:人参8-12g,炙黄芪18-22g,白术8-12g,当归8-12g,半夏4-8g,金沸草7-11g,五味子4-8g和炙甘草4-8g。优选各原料的重量份为:人参10g,炙黄芪20g,白术10g,当归10g,半夏6g,金沸草9g,五味子6g,炙甘草6g。上述原料中,重用黄芪为君,补中气,固表气,且升阳举陷。臣以人参,大补元气;炙甘草健脾和中。君臣相伍,如《医宗金鉴》谓“黄芪补表气,人参补里气,炙甘草和中气”,可大补一身之气。佐以白术补气健脾,助脾运化,以资气血生化之源;当归补养营血,且“血为气之母”,可使所补之气有所依附。脾为生痰之源,脾喜燥恶湿,而肺为贮痰之器,故肺脾两虚之人,易见痰湿壅滞之象,另外,湿邪也可成为致病因素,进一步加重肺脾虚。故方中佐以半夏燥湿化痰,同时可兼顾肺气上逆,联合金沸草降气化痰、行水,使湿痰无所生无所存。肺虚肺卫不固,佐以五味子收敛固摄,还具有益气之效,有助于人参、黄芪、炙甘草健脾补肺。诸药配合,有补肺益气,健脾化痰功效。
参芪调肾方包括以下重量份的原料药组成:人参8-12g,炙黄芪18-22g,山萸肉10-14g,益智仁8-12g,玉竹4-8g,陈皮4-8g,肉桂1-5g,桃仁8-12g和白芥子4-8g。优选各原料药的重量份为:人参10g,炙黄芪20g,山萸肉12g,益智仁10g,玉竹6g,陈皮6g,肉桂3g,桃仁10g和白芥子6g。上述原料中,以参、芪为君,人参大补元气、补脾益肺,黄芪补脾益气固表,为补肺要药,两者合用,取培土生金之意,调补人体正气,升培元气。山萸肉酸温滋肾,涩精补气;益智仁暖肾固精缩尿,加山萸肉酸温滋肾,涩精补气,二药相配,共为臣药,均能温涩补肾,补肾助肺得金水相生,且补益之中兼有收涩作用,助参、芪补气,共成补肾治本之功。白芥子,逐膜膈之痰,是有痰之处无不尽消,消痰而不耗气,能安五脏,能消能降,能补能升。桃仁宣肺止咳平喘,主上气咳嗽,喘急,胸膈痞满,又能逐久病之瘀浊。玉竹润肺止咳,滋阴生津,使补而燥;陈皮化痰理气,行肺气之壅遏,燥湿浊而化痰;肉桂温补一身之阳气,引火归元,又助温通血脉散瘀。又加白芥子,逐膜膈之痰,是有痰之处无不尽消,消痰而不耗气,能安五脏,能消能降,能补能升。桃仁宣肺止咳平喘,主上气咳嗽,喘急,胸膈痞满,又能逐久病之瘀浊。诸药配合,有补肺益肾、化痰袪瘀功效。
上述原料中,如不作特殊说明,所述原料均符合现行版《中国药典》各单项下的质量要求。
实施例1:参芪温肺方的组成
1.1人参8g,炙黄芪13g,干姜4g,陈皮8g,白术8g,桔梗4g和炙甘草4g;
1.2人参10g,炙黄芪15g,干姜6g,陈皮10g,白术10g,桔梗6g和炙甘草6g;
1.3人参12g,炙黄芪17g,干姜8g,陈皮12g,白术10g,桔梗8g和炙甘草8g。
实施例2:参芪补中方的组成
2.1人参8g,炙黄芪18g,白术8g,当归8g,半夏4g,金沸草7g,五味子4g和炙甘草4g;
2.2人参10g,炙黄芪22g,白术8g,当归10g,半夏6g,金沸草9g,五味子6g和炙甘草6g;
2.3人参12g,炙黄芪22g,白术12g,当归128g,半夏8g,金沸草11g,五味子8g和炙甘草8g。
实施例3:参芪调肾方的组成
3.1人参8g,炙黄芪18g,山萸肉10g,益智仁8g,玉竹4g,陈皮4g,肉桂1g,桃仁8g和白芥子4g;
3.2人参10g,炙黄芪20g,山萸肉12g,益智仁10g,玉竹6g,陈皮6g,肉桂3g,桃仁10g和白芥子6g;
3.3人参12g,炙黄芪22g,山萸肉14g,益智仁12g,玉竹8g,陈皮8g,肉桂5g,桃仁12g和白芥子8g。
按实施例1-3中的组成分别水煎或制成颗粒剂给对应患者使用,给上诉系列药疗效好,治愈率高,副作用少;可达到临床明显改善临床症状,减少慢阻肺急性发作次数的效果。
所述制剂可以是片剂、胶囊剂、颗粒剂、丸剂或散剂等。
实施例4:实施例1中系列方药的动物药效实验
参芪温肺方对慢阻肺气虚证大鼠的疗效评价
4.1受试药-参芪温肺方
本实施例中受试药参芪补中方选用实施例2中2.2项下的配比制成,其中人参10g,炙黄芪15g,干姜6g,陈皮10g,白术10g,桔梗6g、炙甘草6g,由安徽中医药大学第一附属医院中药房提供。
4.2对照药
根据不同试验选择了不同的阳性药物
玉屏风颗粒:国药集团广东环球制药有限公司,批号:国药准字Z10930036。
4.3实验动物
种属:SD大鼠,体重范围:180g-200g,动物数量:32只,性别:雄,级别:SPF级。
所有动物饲养及实验均按《实验动物饲养及使用指南》(安徽中医药大学实验动物中心)进行。
4.4实验方法
COPD病证结合动物模型的建立
SPF级SD大鼠经适应性喂养后,随机分为正常组、模型组、肺气虚证模型组、玉屏风组,每组大鼠8只。除正常组外,延续文献造模方法,制备肺气虚证COPD大鼠模型。
肺气虚证COPD大鼠模型的构建:
采用烟熏联合LPS(脂多糖)气管滴注及强迫游泳法复制COPD肺气虚证大鼠模型。依据“劳则气耗”原则,大鼠每天烟熏前置于恒温水槽(43±1)℃中强迫游泳30分钟,以耗伤其肺气,后置于自制的烟熏箱内,燃烧50g锯末和10支香烟进行烟熏,每天烟熏1次,每次烟熏30min,共烟熏28天,第1天、14天通过手术暴露气管,每只大鼠气管滴入200μL LPS(1mg/mL),当天不烟熏,于第22天开始,改用每天烟熏3次。
给药:
于造模28天后开始给药,每日造模后,参芪温肺方组和玉屏风组分别按5.67g/kg、1.35g/kg剂量灌胃给药,每日1次,其给药剂量依据各方的临床等效剂量换算而来,给药两周结束;正常组大鼠及模型组大鼠给予等体积的生理盐水灌胃。
4.5实验结果
(1)大鼠一般情况
正常组大鼠动作敏捷,皮毛润泽,饮食正常,呼吸节律整齐,无异常分泌物,未闻及痰鸣音。
模型组大鼠逐渐出现精神不振,反应迟钝,蜷伏少动,呼吸急促,口鼻可见白色黏性分泌物及痰鸣音,皮毛枯槁,易脱落,食量减少,形体偏瘦,随着造模时间延长,上述症状加重;模型组大鼠运动量减少,毛发枯萎,呼吸功能降低,符合中医肺气虚模型证候特征。
药物干预后,参芪温肺方组和玉屏风组大鼠症状较模型组均有不同程度改善。
(2)大鼠体重测量结果
如表1所示,至实验第5周,与正常组相比,其余3组体重均显著降低(P<0.01),3组间体重均无显著性差异(P>0.05);灌胃1周起,与模型组比较,参芪温肺方组和玉屏风组大鼠体质量明显升高(P<0.05),并且持续到灌胃结束,而两组间比较,差异无统计学意义(P>0.05)。
表1各组大鼠体重变化g(n=8)
注:与正常组相比*P<0.01,与模型组相比△P<0.05。
(3)抓力测量结果
造模第0-4周,模型组、参芪温肺方组、玉屏风组三组之间抓力平均值无显著性差异;第7周,模型组较参芪温肺方组和玉屏风组显著降低(P<0.01),结果见表2;
表2各组大鼠抓力变化(n=8)
注:与正常组相比*P<0.01,与模型组相比△P<0.01。
(4)大鼠肺组织形态学
对各实验组进行形态学观察,结果如图1所示:
图中A为正常组,B为模型组,C为参芪温肺方组,D为玉屏风组。从图中可以看出,正常组大鼠肺组织结构完整,粘膜上皮及细胞未见增生,肺泡间隔无水肿。模型组大鼠肺泡间隔断裂扩张、融合、呈肺大疱型肺气肿,肺泡上皮细胞排列紊乱、局部上皮细胞增生、管壁粗厚、周围伴有炎症细胞浸润。与模型组相比,参芪温肺方组和玉屏风组大鼠肺组织均有不同程度改善,肺泡腔扩大程度明显好转,肺泡间隔增宽减少,少量炎性细胞浸润,参芪温肺方组和玉屏风组改善程度相当。
本实施例中参芪温肺方具有改善慢阻肺肺气虚证大鼠一般情况,改善体重及抓力,改善肺气肿及肺组织炎症的作用,均有利于慢性阻塞性肺疾病症状的稳定和恢复。
实施例5:实施例2中系列方药的动物药效实验
参芪补中方对慢阻肺肺脾气虚证大鼠的疗效评价
5.1受试药-参芪补中方
本实施例中受试药参芪补中方选用实施例2中2.2项下的配比制成,其中人参10g,炙黄芪20g,白术10g,当归10g,半夏6g,金沸草9g,五味子6g,炙甘草6g。
5.2试剂
香烟:安徽中烟工业有限责任公司生产的红三环(渡江)牌香烟,焦油量13mg,尼古丁1.1mg,一氧化碳量14mg;
脂多糖(LPSSIGMA,#0000114326);
5.3仪器
抓力检测仪,型号:SH-Ⅲ-50N,南京苏测计量仪器有限公司。
5.4实验动物
大鼠种属:SD大鼠,体重范围:180g-200g,动物数量:24只,性别:雄性,级别:SPF级。
所有动物饲养及实验均按《实验动物饲养及使用指南》(安徽中医药大学实验动物中心)进行。
给药途径、方法、剂量、频率和用药期限以及选择理由如下:
给药途径:灌胃给药(ig)。
给药途径选择理由:本供试品临床给药途径为口服,为保持和临床给药途径一致,采用灌胃给药方式进行研究。
给药体积:10mL/kg。
药物加工:按5.1中重量称取以上九味药,在八倍蒸馏水中浸泡1h,大火煮沸后,慢火煎煮90min。后将提取液通过四层纱布过滤,残渣浸泡于十倍蒸馏水中,大火煮沸后,慢火煎煮40min,通过四层纱布再次过滤。合并两次煎煮液浓缩,制得生药含量为13.75g/mL的水煮液。4℃冰箱保存备用,保存期限一周,用时用生理盐水稀释。
剂量设计及理由:该药临床用量为77g生药/人/天,人体重以70kg计算,按体表面积折算大鼠(200g计)等效剂量为6.875g生药/kg,同时根据预实验结果,慢性阻塞性肺疾病试验剂量设计为13.75g生药/kg。
数据处理:
采使用SPSS26.0统计软件(SPSSInc,USA)和GraphPadPrism9.0.0软件(GraphPadSoftwareInc.,USA)进行统计学分析和图片制作。计量资料符合正态分布用均值±标准差(±s)表示,组间比较采用单因素方差分析进行显著性检验,P<0.05为差异有统计学意义。统计标注为*与正常组比较P<0.05,**与模型组比较P<0.05。
5.5试验方法
本实施例设计参芪补中方对香烟烟雾提取物(CSE)、脂多糖(LPS)和番泻叶灌胃诱导的大鼠慢阻肺肺脾气虚证的治疗作用研究。
慢性阻塞性肺疾病是一种以持续性、进行性气流受限为特征的疾病;慢性全身炎症、小气道破环、肺气肿为主要病理改变;以气短、慢性咳嗽、咳痰、喘息及胸闷为主要临床表现,通常与吸烟密切相关。慢阻肺属于中医“肺胀”“喘证”等范畴,是中医药治疗的临床优势病种。肺脾两虚证为慢阻肺稳定期的主要证型之一。本实施例为了观察参芪补中方对慢阻肺肺脾气虚证的治疗作用,建立了由香烟烟雾提取物、脂多糖气道内滴入联合番泻叶灌胃引起的大鼠慢阻肺肺脾气虚证模型,观察本实施例参芪补中方对大鼠一般情况、体重改变、拉力测试及肺组织病理变化的影响。
(1)动物模型制备
取大鼠24只,雄性,体重范围:180g-200g。
模型的制备:SPF级SD大鼠经适应性喂养后,随机分为3组:空白对照组、模型组、参芪补中方组,每组大鼠8只。除正常组外,延续文献造模方法,制备肺脾气虚证COPD大鼠模型。
采用烟熏+脂多糖气管内滴注经典造模方法复制COPD疾病模型,于造模第1天、第14天,麻醉后固定大鼠,暴露喉头后行气管插管,向大鼠气管内注入LPS(1mg/mL由0.9%氯化钠注射液配置,按照1mg/kg体质量给药),注入后立即将大鼠垂直旋转摇晃,使LPS在肺部均匀分布。除滴注日外,将大鼠放入自制烟熏箱内被动吸烟烟熏,2次/d,30min/次,每次点燃20根香烟,2次烟熏间隔3h,共计49天。正常组置于正常无烟环境中饲养,烟熏期间放入无烟烟熏箱中处理。在COPD疾病模型复制的基础上,于造模第28-49天,于晨起8点给予番泻叶浸液灌胃,按1mL/100g体重的剂量给大鼠灌胃连续灌胃21d。正常组予以灌胃等计量生理盐水。
给药:于造模28天后开始给药,每日造模后,参芪补中方组按13.75g/kg剂量灌胃给药,每日晚6点1次,其给药剂量依据各方的临床等效剂量换算而来,给药3周结束;正常组大鼠及模型组大鼠给予等体积的生理盐水灌胃。
观察指标
外观行为评价:从动物精神状态、眼神、毛发色泽、自主行为、活跃度、口鼻分泌物等症状进行观察和评价。
体质量:每周测量,于上午8h开始用电子天平称量每只大鼠的体质量,取三次测试的平均值。
抓力测试:每周1次,采用YLS-13A大小鼠抓力测定仪检测前肢抓力。先用右手将大鼠按放在抓力板上,左手向前推抓力板,然后右手向后滑至鼠尾部,左手轻轻松开抓力板,待大鼠用力抓住抓力板时,及时加力后拉,以得到最大抓力。专人连续测量3次,取平均值。
肺组织形态学检测:麻醉后迅速剥离右肺,经4%甲醛固定,常规脱水,石蜡包埋,切片,行苏木精-伊红染色(HE),光镜下观察评价肺组织病理形态学变化。
5.6实验结果
(1)大鼠一般情况
造模期间,正常对照组大鼠活泼好动、精神正常、食量逐渐增加、体质量逐渐增加、毛发顺泽、大小便无异常。模型组的大鼠造模后出现精神倦怠,毛发稀疏,光泽度减弱,拱背蜷卧,明显扎堆嗜睡,活动量、食量减少,体质量增加速度下降予以番泻叶灌胃后出现稀便便溏,体重逐渐降低,抓拿时抵抗力减弱,不同程度的喘息、鼻腔黏液分泌等。药物干预后大鼠毛发逐渐变密,毛有光泽,食量和体质量增加,腹泻便溏得到缓解,整体活动状态得到逐渐改善。说明本发明中药方剂参芪补中方对肺脾气虚的常见症候:神疲、乏力、纳差、便溏等具有一定改善作用。
(2)体重测量结果
正常组体重增幅明显增长,模型组予以LPS滴注及烟熏后体重增幅相较于正常组体重增幅明显减少(P<0.05),第4周予以番泻叶灌胃后大鼠体重逐渐下降。参芪补中方组治疗后体重较模型组明显改善(P<0.05)。说明本实施例中参芪补中方能够改善慢阻肺肺脾气虚证大鼠体重,改善肺脾气虚消瘦症候。
表3各组大鼠体重变化g(n=8)
(注:*与正常组比较P<0.05,**与模型组比较P<0.05)
(3)抓力测量结果
造模处理前三组抓力无明显差异,正常组抓力造模后较造模前增长,模型组造模处理后抓力较正常组抓力明显降低(P<0.05)。参芪补中方组治疗后抓力较模型组明显改善(P<0.05),结果见表4;说明本实施例中药方剂参芪补中方药能够改善慢阻肺肺脾气虚证大鼠抓力,改善肺脾气虚乏力症候。
表4 各组大鼠抓力变化(n=8)
注:*与正常组比较P<0.05,**与模型组比较P<0.05)
(4)大鼠肺组织形态学
对各实验组进行形态学观察,结果如图2a、2b、2c所示,图2a表示正常组,2b表示模型组,2c表示参芪补中方组。正常组大鼠肺组织形态基本正常,肺组织结构完整,管腔周围无明显炎症细胞浸润、气腔无狭窄;模型组大鼠肺组织可见明显炎症细胞浸润、气腔狭窄,肺泡壁破坏、肺泡融合等病理变化。参芪补中方组肺组织病理均有不同程度的减轻,肺泡腔扩大程度明显好转,气腔狭窄有改善,少量炎性细胞浸润。
从上述试验可知,本实施例参芪补中方具有改善慢阻肺肺脾气虚证大鼠一般情况,改善体重及抓力,改善肺气肿及肺部气道炎症的作用,均有利于慢性阻塞性肺疾病症状的稳定和恢复。
实施例6:实施例3中系列方药的动物药效实验
参芪调肾方对慢阻肺肺肾气虚证大鼠的干预作用评价
6.1受试药-参芪调肾方
本实施例中受试药参芪调肾方选用实施例2中2.2项下的配比制成,其中人参10g、炙黄芪20g、益智仁10g、山萸肉12g、陈皮6g、白芥子6g、桃仁10g、肉桂3g、玉竹6g。
6.2材料
香烟:安徽中烟工业有限责任公司生产的红三环(渡江)牌香烟,焦油量13mg,尼古丁1.1mg,一氧化碳量14mg;
脂多糖(LPS):SIGMA,#0000114326
6.3仪器
抓力检测仪,型号:SH-Ⅲ-50N,南京苏测计量仪器有限公司。
6.4实验动物
大鼠种属:SD大鼠,体重范围:180g-200g,动物数量:24只,性别:雄性,级别:SPF级,购自常州卡文斯实验动物有限公司(实验动物许可证号:SCXK(苏)2017-0003)。
所有动物饲养及实验均按《实验动物饲养及使用指南》(安徽中医药大学实验动物中心)进行。
给药途径、方法、剂量、频率和用药期限以及选择理由如下:
给药途径:灌胃给药(ig)。
给药途径选择理由:本供试品临床给药途径为口服,为保持和临床给药途径一致,采用灌胃给药方式进行研究。
给药体积:10ml/kg。
药物加工:按6.1中重量份数称取以上九味药,在八倍蒸馏水中浸泡1h,大火煮沸后,慢火煎煮90min。后将提取液通过四层纱布过滤,残渣浸泡于十倍蒸馏水中,大火煮沸后,慢火煎煮40min,通过四层纱布再次过滤。合并两次煎煮液浓缩,制得生药含量为1.494g/mL的水煮液。4℃冰箱保存备用,保存期限一周,用时用生理盐水稀释。
剂量设计及理由:该药临床用量为83g生药/人/天,人体重以70kg计算,按体表面积折算大鼠(250g计)等效剂量为7.47g生药/kg,同时根据预实验结果,慢性阻塞性肺疾病试验剂量设计为14.94g生药/kg。
数据处理:
采使用SPSS26.0统计软件(SPSSInc,USA)和GraphPadPrism9.0.0软件(GraphPadSoftwareInc.,USA)进行统计学分析和图片制作。计量资料符合正态分布用均值±标准差(±s)表示,组间比较采用单因素方差分析进行显著性检验,P<0.05为差异有统计学意义。统计标注为*与正常组比较P<0.05,**与模型组比较P<0.05。
6.5试验方法
本实施例设计参芪调肾方对烟熏联合LPS气管滴注再施加强迫游泳及背部注射氢化可的松法复制COPD肺肾气虚证大鼠模型的治疗作用研究。
慢性阻塞性肺疾病(ChronicObstructivePulmonaryDisease,COPD),简称慢阻肺,是一种以持续性、进行性气流受限为特征的疾病;慢性全身炎症、小气道破环、肺气肿为主要病理改变;以气短、慢性咳嗽、咳痰、喘息及胸闷为主要临床表现,通常与吸烟密切相。COPD属于中医“肺胀”“咳嗽”“喘证”等范畴,是中医药治疗的临床优势病种。肺肾气虚证为慢阻肺稳定期的主要证型之一。本实施例为了观察参芪调肾方对慢阻肺肺肾气虚证的治疗作用,建立了由烟熏联合LPS气管滴注再施加强迫游泳及背部注射氢化可的松法构建的大鼠慢阻肺肺肾气虚证模型,观察了参芪调肾方对大鼠一般情况、体重改变、拉力测试及肺组织病理变化的影响。
(1)动物模型制备
取大鼠24只,雄性,体重范围:180g-200g。
模型的制备与分组给药:
SPF级SD大鼠经适应性喂养后,随机分为3组:空白对照组、模型组、治疗组,每组大鼠8只。除正常组外,延续文献造模方法,制备COPD肺肾气虚证大鼠模型。
除正常组外,其余大鼠采用烟熏联合LPS气管滴注再施加强迫游泳及背部注射氢化可的松法复制COPD肺肾气虚证大鼠模型。具体方法如下:
COPD肺气虚模型构建:依据“劳则气耗”原则,采用强迫游泳疲劳法构建肺气虚模型,大鼠每天烟熏前置于(43±1)℃、水深35cm,内壁光滑的恒温水槽中强迫游泳,当大鼠出现自然下沉时,从水槽取出,60%大鼠出现下沉后,动物全部取出,1次/d,持续21d;游泳结束后,用干毛巾擦拭干水分,置于烟熏箱内,燃烧50g锯末和10支香烟进行烟熏,1次/d,每次烟熏45min,共烟熏48d,其中第1、14d在乙醚麻醉的状态下通过改良的长针头往每只大鼠气管滴入200μlLPS(1mg/mL),当天不烟熏。
COPD肾气虚模型构建:采用氢化可的松抑制肾上腺皮质功能法,于第22天在大鼠背部皮下连续注射氢化可的松琥珀酸钠0.3ml/只·d-1(25mg/mL),1次/d,共给予8d。
以上模型复合构建COPD肺肾气虚证病证结合大鼠模型。补益肺肾药物治疗的治疗组大鼠第30d开始给予14.94g/kg剂量的参芪调肾方药液灌胃给药,1次/d,灌胃21d。
观察指标
外观行为评价:从动物精神状态、眼神、毛发色泽、自主行为、活跃度、口鼻分泌物等症状进行观察和评价。
体质量:每周测量,取三次测试的平均值。
抓力测试:测量造模期间(第2周、4周)和给药期间(第5周、6周、7周)大鼠的抓力。抓力检测仪水平放置,将大鼠前肢放于抓力仪横杠,抓稳后抓住大鼠尾部轻轻向后牵拉,均匀用力后拉至大鼠松爪,仪器记录大鼠最大抓力。每次大鼠重复测量3次,每次测量间隔1敏,取3次测量数据的平均值作为本次测量的最大抓力值。若过程中大鼠出现抓不稳、回头、左右挣扎等情况,则重复测量数据。
肺组织形态学检测:麻醉后迅速剥离右肺,经4%甲醛固定,常规脱水,石蜡包埋,切片,行苏木精-伊红染色(HE),光镜下观察评价肺组织病理形态学变化。
6.6实验结果
(1)大鼠一般情况
与对照组比较,模型组大鼠可见形体消瘦,体重增长缓慢,有口腔、鼻分泌物增多,气促,毛色暗淡、枯黄脱落,背部皮肤松弛,打喷嚏,精神萎顿、嗜睡,对刺激反应迟钝,蜷缩拱背,喜聚成堆闭目静卧,进食、进水减少,大便稀溏,舌暗淡斑等气虚疲劳表现。与模型组比较,治疗组大鼠体重增长明显,口腔、鼻分泌物减少,气促好转,毛发枯黄好转,仍暗淡,打喷嚏减少,饮食量、饮水量增加,活动量增加,对刺激反应增加。
(2)体重测量结果
正常组体重增幅明显增长,模型组大鼠体质量增幅随着造模时间的延长较正常组增幅明显下降(P<0.05)。治疗组治疗后体重较模型组明显改善(P<0.05)具体数据见表5。说明本发明中药方剂参芪调肾方能够改善慢阻肺肺肾气虚证大鼠体重,改善肺肾气虚消瘦症候。
表5各组大鼠体重变化g(n=8)
(注:*与正常组比较P<0.05,**与模型组比较P<0.05)
(3)抓力测量结果
与对照组比较,模型组大鼠抓力随时间明显下降(P<0.05),与模型组比较,治疗组大鼠抓力明显上升(P<0.05),结果见表6;说明本实施例参芪调肾方能够改善慢阻肺肺肾气虚证大鼠抓力,改善肺肾气虚乏力症候。
表6各组大鼠抓力变化(n=8)
(注:*与正常组比较P<0.05,**与模型组比较P<0.05)
(4)大鼠肺组织形态学
按照本实施例中肺组织形态学检测方法进行大鼠肺组织形态学检测,检测结果如图3所示。
正常组大鼠HE染色显示肺泡结构正常,间隔未见明显水肿充血和渗出,支气管粘膜完整,纤毛排列整齐,无损伤,炎性浸润少。模型组大鼠肺泡明显扩大,间隔变薄、断裂,肺泡壁多处断裂,部分肺泡互相融合形成肺大泡,肺泡壁广泛增厚,伴有大量炎性细胞浸润;支气管和血管管壁周围可见大量炎性细胞浸润,上皮细胞肿胀变性,胞质呈空泡,支气管腔有大量脱落坏死的上皮细胞和炎性渗出物。以上病理表现均符合COPD的肺部病理改变,说明造模成功。治疗组大鼠肺组织的病理表现较模型组有明显改善。
根据病理表现程度对肺组织病理表现进行半定量评价,结果如表7所示,与正常组比较,模型组大鼠支气管、血管周围和肺泡炎症评分明显升高(P<0.05),与模型组比较,治疗组大鼠支气管、血管周围和肺泡炎症评分明显下降(P<0.05)。
表7大鼠气道炎症评分
从上述试验结果可知,本实施例中治疗组具有改善慢阻肺肺肾气虚证大鼠一般情况,改善体重及抓力,改善肺气肿及肺部气道炎症的作用,均有利于慢性阻塞性肺疾病症状的稳定和恢复。
尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明,本领域的普通技术人员应当理解:其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改,或者对其中部分技术特征进行等同替换;而这些修改或者替换,并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的精神和范围。
Claims (7)
1.一种用于治疗慢阻肺稳定期系列的中药,其特征在于,所述中药为参芪温肺方、参芪补中方或参芪调肾方;
所述参芪温肺方用于治疗慢阻肺稳定期肺气虚证,由以下重量份原料组成:人参8-12g,炙黄芪13-17g,干姜4-8g,陈皮8-12g,白术8-12g,桔梗4-8g和炙甘草4-8g;
所述参芪补中方用于治疗慢阻肺稳定期肺脾气虚证,由以下重量份原料组成:人参8-12g,炙黄芪18-22g,白术8-12g,当归8-12g,半夏4-8g,金沸草7-11g,五味子4-8g和炙甘草4-8g;
所述参芪调肾方用于治疗慢阻肺稳定期肺肾气虚证,由以下重量份原料组成:人参8-12g,炙黄芪18-22g,山萸肉10-14g,益智仁8-12g,玉竹4-8g,陈皮4-8g,肉桂1-5g,桃仁8-12g和白芥子4-8g。
2.根据权利要求1所述的中药,其特征在于,所述参芪温肺方由以下重量份原料组成:人参10g,炙黄芪15g,干姜6g,陈皮10g,白术10g,桔梗6g,炙甘草6g。
3.根据权利要求1所述的中药,其特征在于,所述参芪补中方由以下重量份原料组成:人参10g,炙黄芪20g,白术10g,当归10g,半夏6g,金沸草9g,五味子6g,炙甘草6g。
4.根据权利要求1所述的中药,其特征在于,所述参芪调肾方由以下重量份原料组成:人参10g,炙黄芪20g,山萸肉12g,益智仁10g,玉竹6g,陈皮6g,肉桂3g,桃仁10g和白芥子6g。
5.权利要求1或2所述的参芪温肺方在制备治疗慢阻肺稳定期肺气虚病症药物上的应用。
6.权利要求1或3所述的参芪补中方在制备治疗慢阻肺稳定期肺脾气虚病症药物上的应用。
7.权利要求1或4所述的参芪调肾方在制备治疗慢阻肺稳定期肺肾气虚病症药物上的应用。
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2022
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