CN114525224A - 一株高产抗菌活性物质macrolactinA的解淀粉芽孢杆菌及其应用 - Google Patents

一株高产抗菌活性物质macrolactinA的解淀粉芽孢杆菌及其应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一株高产抗菌活性物质macrolactinA的解淀粉芽孢杆菌及其应用，属于微生物技术领域。该菌株命名为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)CGGB 283‑1，其于2021年11月17日保藏于广东省广州市越秀区先烈中路100号大院59号楼的广东省微生物菌种保藏中心(GDMCC)，保藏编号为：GDMCC No.62069。所述解淀粉芽孢杆菌CGGB 283‑1从黑山羊瘤胃中分离筛选得到，天然产MA的能力较强，30h发酵即可获得较高产量的MA，具有重要应用潜力。

Description

一株高产抗菌活性物质macrolactinA的解淀粉芽孢杆菌及其 应用
技术领域
本发明属于微生物技术领域，涉及微生物发酵产抗菌活性物质，具体涉及一株高产抗菌活性物质macrolactinA的解淀粉芽孢杆菌及其应用。
背景技术
抗生素除了治疗感染性疾病外，还使癌症治疗、器官移植和心脏手术等现代医疗程序得以实现[1]。但是由于医疗和农业中对抗生素的过度使用，使得细菌对抗生素的耐药性逐年升高，而几十年来，由于缺乏新型抗菌药物，抗生素的研发一直受到阻碍[2]。
Macrolactins是含有24元酯环的多烯大环内酯。该家族首先是从深海海洋细菌中分离出来的次级代谢产物[3]，该家族已有30余种物质被报道，其中macrolactinA(简称MA)除被从海洋芽孢杆菌中分离出，也分离自来自马铃薯种植区的土壤中由土壤链霉菌属[4]和解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens FZB42)[5]产生。由于macrolactins的产量低，其结构独特性和巨大的治疗潜力，macrolactins已成为不对称合成研究者合成的目标[6]。
MA已有文献报道对耐万古霉素肠球菌和耐甲氧西林金黄色葡萄球菌具有拮抗作用[7,8]。MA对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的MIC为2μg/ml[7]，优于替考拉宁。MA还对小鼠肠道耐万古霉素肠球菌定殖表现出优异的拮抗作用[7]。该抑菌活性物质除具有抗菌作用还具有抗病毒与抗肿瘤的作用，MA被证明通过抑制病毒复制来保护淋巴母细胞免受HIV侵害[3]。目前，有研究者正在对MA和7-O-malonyl-macrolactinA(简称SMA)作为抗黄斑变性和抗肿瘤药物的临床前研究进行评估。上述提到产MA天然菌株的产量很低，目前有报道菌株经响应面法优化发酵条件后产量提高5倍产量达18.5μg/ml[9]以及经优化后产量达21.63μg/ml[10]，但是上述菌株能达到的产量发酵时间均长达7天，目前的研究显示MA的发酵时间较长大大增加了生产时间，因此需新的菌株来节约生产时间。
[1]Katz L,Baltz RH.Natural product discovery:past,present,andfuture.J Ind Microbiol Biotechnol.2016 Mar；43(2-3):155-76.
[2]Prescott JF.The resistance tsunami,antimicrobial stewardship,andthe golden age of microbiology.Vet Microbiol.2014 Jul 16；171(3-4):273-8.
[3]Gustafson A,Roman W,and Fenical J.1989.The macrolactins,a novelclass of antiviral and cytotoxic macrolides from a deep-sea marinebacterium.J.Am.Chem.Soc.111:7519–7524.
[4]Choi SW,Bai DH,Yu JH,Shin CS.Characteristics of the squalenesynthase inhibitors produced by a Streptomyces species isolated fromsoils.Can J Microbiol.2003 Nov；49(11)
[5]Schneider K,Chen XH,Vater J,Franke P,Nicholson G,Borriss R,Süssmuth RD.Macrolactin is the polyketide biosynthesis product of thepks2cluster of Bacillus amyloliquefaciens FZB42.J Nat Prod.2007 Sep；70(9):1417-23.
[6]Marino JP,McClure MS,Holub DP,Comasseto JV,TucciFC.Stereocontrolled synthesis of(-)-macrolactin A.J Am Chem Soc.2002 Feb 27；124(8):1664-8.
[7]Kim DH,Kim HK,Kim KM,Kim CK,Jeong MH,Ko CY,Moon KH,KangJS.Antibacterial activities of macrolactin A and 7-O-succinyl macrolactin Afrom Bacillus polyfermenticus KJS-2 against vancomycin-resistant enterococciand methicillin-resistant Staphylococcus aureus.Arch Pharm Res.2011 Jan；34(1):147-52.
[8]Romero-Tabarez M,Jansen R,Sylla M,Lünsdorf H,
Figure BDA0003527970240000021
S,Santosa DA,Timmis KN,Molinari G.7-O-malonyl macrolactin A,a new macrolactin antibioticfrom Bacillus subtilis active against methicillin-resistant Staphylococcusaureus,vancomycin-resistant enterococci,and a small-colony variant ofBurkholderiacepacia.Antimicrob Agents Chemother.2006 May；50(5):1701-9.
[9]杨桥,韩文菊,张文俊,卢小玲,刘小宇,许强芝,焦炳华.产Macrolactin A抗生素海洋解淀粉芽孢杆菌的鉴定及发酵条件优化[J].药物生物技术,2009,16(04):311-315+346.
[10]He S,Wang H,Wu B,Zhou H,Zhu P,Yang R,Yan X.Response surfacemethodology optimization of fermentation conditions for rapid and efficientaccumulation of macrolactin A by marine Bacillus amyloliquefaciens ESB-2.Molecules.2012 Dec 28；18(1):408-17.
发明内容
为解决相关问题，本发明的首要目的在于提供一株高产抗菌活性物质macrolactinA的解淀粉芽孢杆菌。
本发明的另一目的在于提供上述解淀粉芽孢杆菌的应用。
为了实现上述发明目的，本发明采用以下技术方案：
一株高产抗菌活性物质macrolactinA的解淀粉芽孢杆菌，命名为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)CGGB 283-1，其于2021年11月17日保藏于广东省广州市越秀区先烈中路100号大院59号楼的广东省微生物菌种保藏中心(GDMCC)，保藏编号为：GDMCCNo.62069。
所述解淀粉芽孢杆菌CGGB 283-1从黑山羊瘤胃中分离筛选得到，具有以下特征：
1.形态特征：革兰氏阳性菌，LB培养基上37℃培养24h，菌落呈淡黄色、边缘不规则、，表面粗糙，菌落直径大小4～5mm。细胞呈杆状，大小为0.7～0.8×2～3μm，具有内生芽孢，呈椭圆形，两端钝圆，芽孢囊不膨大，中生到次端生，有运动性；
2.生理生化特征：水解淀粉与明胶，乙酰甲基甲醇(V-P)试验阴性，硝酸盐还原试验阴性，苯丙氨酸脱氨酶试验、吲哚试验、甲基红试验、硫化氢试验均为阴性；
3.16S rRNA和基因组序列分析：提取基因组DNA，对其16S rRNA序列进行扩增测定，16S rRNA序列如SEQ ID NO.1所示。经BLAST比对分析，与Bacillus amyloliquefaciensstrain Z17-2相似性最高，为100％。
16S rRNA序列如下(SEQ.ID NO.1)：
GGGGGGATGCTATACATGCAAGTCGAGCGGACAGATGGGAGCTTGCTCCCTGATGTTAGCGGCGGACGGGTGAGTAACACGTGGGTAACCTGCCTGTAAGACTGGGATAACTCCGGGAAACCGGGGCTAATACCGGATGGTTGTTTGAACCGCATGGTTCAGACATAAAAGGTGGCTTCGGCTACCACTTACAGATGGACCCGCGGCGCATTAGCTAGTTGGTGAGGTAACGGCTCACCAAGGCGACGATGCGTAGCCGACCTGAGAGGGTGATCGGCCACACTGGGACTGAGACACGGCCCAGACTCCTACGGGAGGCAGCAGTAGGGAATCTTCCGCAATGGACGAAAGTCTGACGGAGCAACGCCGCGTGAGTGATGAAGGTTTTCGGATCGTAAAGCTCTGTTGTTAGGGAAGAACAAGTGCCGTTCAAATAGGGCGGCACCTTGACGGTACCTAACCAGAAAGCCACGGCTAACTACGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGTAGGTGGCAAGCGTTGTCCGGAATTATTGGGCGTAAAGGGCTCGCAGGCGGTTTCTTAAGTCTGATGTGAAAGCCCCCGGCTCAACCGGGGAGGGTCATTGGAAACTGGGGAACTTGAGTGCAGAAGAGGAGAGTGGAATTCCACGTGTAGCGGTGAAATGCGTAGAGATGTGGAGGAACACCAGTGGCGAAGGCGACTCTCTGGTCTGTAACTGACGCTGAGGAGCGAAAGCGTGGGGAGCGAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGATGAGTGCTAAGTGTTAGGGGGTTTCCGCCCCTTAGTGCTGCAGCTAACGCATTAAGCACTCCGCCTGGGGAGTACGGTCGCAAGACTGAAACTCAAAGGAATTGACGGGGGCCCGCACAAGCGGTGGAGCATGTGGTTTAATTCGAAGCAACGCGAAGAACCTTACCAGGTCTTGACATCCTCTGACAATCCTAGAGATAGGACGTCCCCTTCGGGGGCAGAGTGACAGGTGGTGCATGGTTGTCGTCAGCTCGTGTCGTGAGATGTTGGGTTAAGTCCCGCAACGAGCGCAACCCTTGATCTTAGTTGCCAGCATTCAGTTGGGCACTCTAAGGTGACTGCCGGTGACAAACCGGAGGAAGGTGGGGATGACGTCAAATCATCATGCCCCTTATGACCTGGGCTACACACGTGCTACAATGGACAGAACAAAGGGCAGCGAAACCGCGAGGTTAAGCCAATCCCACAAATCTGTTCTCAGTTCGGATCGCAGTCTGCAACTCGACTGCGTGAAGCTGGAATCGCTAGTAATCGCGGATCAGCATGCCGCGGTGAATACGTTCCCGGGCCTTGTACACACCGCCCGTCACACCACGAGAGTTTGTAACACCCGAAGTCGGTGAGGTAACCTTTATGGAGCCAGCCGCCGAAGGGATCA。
综合菌株的形态特征、生理生化特征、16S rRNA序列和基因组序列分析结果，本发明菌株CGGB 283-1属于解淀粉芽孢杆菌。
所述的解淀粉芽孢杆菌CGGB 283-1在制备抗菌活性物质macrolactinA中的应用。
进一步地，所述的应用为：将解淀粉芽孢杆菌CGGB 283-1的种子液接入发酵培养基进行发酵，然后用乙酸乙酯进行萃取，最后用高效液相色谱进行分离纯化，得到macrolactinA；具体包括如下步骤：
S1.将解淀粉芽孢杆菌CGGB 283-1接种于LB培养基中37℃培养24h，按1％接种于LB培养基中30℃、150rpm发酵30h，8000rpm离心30min，取上清；
S2.用乙酸乙酯对步骤S1所得上清以体积比1：1的比例进行萃取，旋蒸除去乙酸乙酯，以凝缩40倍体积的甲醇重溶，得到粗提液；
S3.用高效液相色谱对步骤S2所得粗提液进行分离纯化，得到macrolactinA。
一种具有抗菌活性的生物菌剂，包含所述的解淀粉芽孢杆菌CGGB 283-1的菌体或发酵上清液。
所述的发酵上清液通过如下步骤制备得到：将解淀粉芽孢杆菌CGGB 283-1的种子液接入发酵培养基进行发酵，离心，取上清，即获得所述的发酵上清液；优选步骤为：将解淀粉芽孢杆菌CGGB 283-1接种于LB培养基中37℃培养24h，按1％接种于LB培养基中30℃、150rpm发酵30h，8000rpm离心30min，即获得所述的发酵上清液。
上述具有抗菌活性的生物菌剂在制备抑菌剂中的应用。
进一步地，所述的菌包括但不限于金黄色葡萄球菌和粪肠球菌。
本发明相对于现有技术具有如下的优点及效果：
目前报道的菌株MA产量虽然较高，但是发酵时间均较长，对于开发该物质的周期较长，影响该物质的开发与利用。
本发明分离的解淀粉芽孢杆菌发酵30h即可达到较高的产量，大大缩短了发酵的时间，为天然MA的纯化较少了时间成本。
附图说明
图1为LH-20分子筛粗分离峰图。
图2为样品高效液相色谱图。
图3为活性组分高效液相色谱纯度检测结果图。
图4为活性组分稀释抑菌活性比较图。
图5为活性组分ESI-MS(positive)谱图。
图6为MA浓度高效液相检测图。
图7为MA高效液相浓度-峰面积标曲图。
具体实施方式
下面结合实施例和附图对本发明作进一步详细的描述，但本发明的实施方式不限于此。
实施例1：芽孢杆菌亚属CGGB 283-1菌株的分离及鉴定
(1)从广东省阳江市黑山羊繁育基地的黑山羊瘤胃中采集内容物，取10μl于1mlBHI肉汤中，37℃，180rpm，培养24h；
(2)将培养的菌液于蜡样芽孢杆菌选择培养基上划线挑取单克隆，于LB肉汤，37℃培养24h；
(3)以MRSA临床株Staphylococcus aureus S34为靶标菌进行拮抗菌的筛选，将点上芽孢杆菌的平板于30℃培养，于8h、12h、24h分别观察抑菌圈出现的时间；
(4)从中选择抑菌活性最强的菌株，进行后续抑菌谱与物质分离纯化。
(5)综合菌株的形态特征、生理生化特征及MLST比对结果，该菌为解淀粉芽孢杆菌，将其命名为解淀粉芽孢杆菌CGGB 283-1，并于2021年11月18日保藏于广东省广州市越秀区先烈中路100号大院59号楼的广东省微生物菌种保藏中心(GDMCC)，保藏编号为：GDMCCNo.62069。
实施例2：解淀粉芽孢杆菌CGGB 283-1抑菌活性物质的分离纯化
(1)发酵种子液与发酵液的制备：将解淀粉芽孢杆菌CGGB 283-1从平板挑单克隆于LB培养基中37℃培养24h，按1％接种于LB培养基中30℃，150rpm发酵30h，8000rpm离心30min，取上清进行后续实验；
(2)用乙酸乙酯对(1)中的上清以1：1的比例萃取3次，合并萃取出的乙酸乙酯，用旋蒸仪蒸干乙酸乙酯，以凝缩40倍体积的甲醇重溶。
(3)浓缩的抑菌活性物质经LH-20分子筛粗分离，以100％甲醇等度对抑菌活性物质进行洗脱，收集洗脱出的各个峰，分别采用杯碟法验证其活性；图1为LH-20分子筛粗分离峰图；
(4)将粗分离的抑菌活性物质用HPLC进行精分离，收集响应值较高的峰，分别进行活性检测，确定活性峰；图2为高效液相色谱图；HPLC方法为(如表1所示)。图4为活性组分稀释抑菌活性比较图；
表1 macrolactinA HPLC纯化方法
Figure BDA0003527970240000061
(5)纯化出的抑菌活性物质纯度检测，经液相检测纯度为98％，该抑菌活性物质的纯度较高，足够进行后续结构的鉴定；图3为活性组分高效液相色谱纯度检测结果。
实施例3：解淀粉芽孢杆菌CGGB 283-1抑菌活性物质的结构分析鉴定
(1)将纯化后的抑菌活性物质经质谱鉴定后，分析其分子量为402.5Da；图5为活性组分ESI-MS(positive)谱图；
(2)纯化后的抑菌活性物质经13C-NMR鉴定，与MA 100％一致，因此该物质可以确定为MA。13C-NMR(150MHz,methanol-d4):δ(ppm)＝166.34(C-1),117.8(C-2),143.7(C-3),130.6(C-4),142.7(C-5),42.8(C-6),71.2(C-7),131.2(C-8),128.6(C-9),129.6(C-10),129.4(C-11),36.7(C-12),69.2(C-13),43.9(C-14),68.8(C-15),136.6(C-16),133.7(C-17),128.6(C-18),138.3(C-19),35.3(C-20),25(C-21),36.7(C-22),71.2(C-23),19.9(C-24)
实施例4：解淀粉芽孢杆菌CGGB283-1产MA产量的测定
(1)发酵与浓缩方法如实施例2所述；
(2)浓缩后甲醇溶液用HPLC检测浓度，以本发明中纯化的物质为标品进行梯度稀释成浓度9ng/ml，18ng/ml，36ng/ml，145ng/ml，580ng/ml，经分析型HPLC确定其峰面积，获得直线方程为y＝0.0155x-2.4563。并测出浓缩后的粗提液中macrolactinA对应的峰面积为49835.89，根据方程式计算对应的浓度，再根据浓缩的倍数50计算出实际浓度，经计算最终的产量为15.4μg/ml。图6为MA浓度高效液相检测图，图7为MA高效液相浓度-峰面积标曲。
实施例5：MA抑菌谱测定
(1)将选定的靶标菌菌株从-80℃取出，复苏；
(2)复苏后的菌液挑取单克隆与1ml的LB肉汤中，于37℃培养过夜；
(3)以1：10000的稀释度接种于液体琼脂中，并放置容积为200μl的牛津杯；
(4)将纯化后的MA溶解于甲醇溶液中，并取200μl体积加入牛津杯中，再将平板置于30℃培养箱中培养12h后观察抑菌圈大小，确定MA所拮抗的菌株。结果如表2所示。
表2MA抑菌谱测定结果
Figure BDA0003527970240000071
上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受所述的实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。
序列表
<110> 华南农业大学
<120> 一株高产抗菌活性物质macrolactinA的解淀粉芽孢杆菌及其应用
<160> 1
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 1445
<212> DNA
<213> 解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)
<400> 1
ggggggatgc tatacatgca agtcgagcgg acagatggga gcttgctccc tgatgttagc 60
ggcggacggg tgagtaacac gtgggtaacc tgcctgtaag actgggataa ctccgggaaa 120
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tgacatcctc tgacaatcct agagatagga cgtccccttc gggggcagag tgacaggtgg 1020
tgcatggttg tcgtcagctc gtgtcgtgag atgttgggtt aagtcccgca acgagcgcaa 1080
cccttgatct tagttgccag cattcagttg ggcactctaa ggtgactgcc ggtgacaaac 1140
cggaggaagg tggggatgac gtcaaatcat catgcccctt atgacctggg ctacacacgt 1200
gctacaatgg acagaacaaa gggcagcgaa accgcgaggt taagccaatc ccacaaatct 1260
gttctcagtt cggatcgcag tctgcaactc gactgcgtga agctggaatc gctagtaatc 1320
gcggatcagc atgccgcggt gaatacgttc ccgggccttg tacacaccgc ccgtcacacc 1380
acgagagttt gtaacacccg aagtcggtga ggtaaccttt atggagccag ccgccgaagg 1440
gatca 1445

Claims (9)

1.一株高产抗菌活性物质macrolactinA的解淀粉芽孢杆菌，其特征在于：命名为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)CGGB 283-1，其于2021年11月17日保藏于广东省广州市越秀区先烈中路100号大院59号楼的广东省微生物菌种保藏中心(GDMCC)，保藏编号为：GDMCC No.62069。
2.权利要求1中所述的解淀粉芽孢杆菌CGGB 283-1在制备抗菌活性物质macrolactinA中的应用。
3.根据权利要求2所述的解淀粉芽孢杆菌CGGB 283-1在制备抗菌活性物质macrolactinA中的应用，其特征在于：
将解淀粉芽孢杆菌CGGB 283-1的种子液接入发酵培养基进行发酵，然后用乙酸乙酯进行萃取，最后用高效液相色谱进行分离纯化，得到macrolactinA。
4.根据权利要求2或3所述的解淀粉芽孢杆菌CGGB 283-1在制备抗菌活性物质macrolactinA中的应用，其特征在于：
S1.将解淀粉芽孢杆菌CGGB 283-1接种于LB培养基中37℃培养24h，按1％接种于LB培养基中30℃、150rpm发酵30h，8000rpm离心30min，取上清；
S2.用乙酸乙酯对步骤S1所得上清以体积比1：1的比例进行萃取，旋蒸除去乙酸乙酯，以凝缩40倍体积的甲醇重溶，得到粗提液；
S3.用高效液相色谱对步骤S2所得粗提液进行分离纯化，得到macrolactinA。
5.一种具有抗菌活性的生物菌剂，其特征在于：包含权利要求1中所述的解淀粉芽孢杆菌CGGB 283-1的菌体或发酵上清液。
6.根据权利要求5所述的具有抗菌活性的生物菌剂，其特征在于：
所述的发酵上清液通过如下步骤制备得到：将解淀粉芽孢杆菌CGGB 283-1的种子液接入发酵培养基进行发酵，离心，取上清，即获得所述的发酵上清液。
7.根据权利要求5所述的具有抗菌活性的生物菌剂，其特征在于：
所述的发酵上清液通过如下步骤制备得到：将解淀粉芽孢杆菌CGGB 283-1接种于LB培养基中37℃培养24h，按1％接种于LB培养基中30℃、150rpm发酵30h，8000rpm离心30min，即获得所述的发酵上清液。
8.权利要求5～7任一项中所述的具有抗菌活性的生物菌剂在制备抑菌剂中的应用。
9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于：
所述的菌包括金黄色葡萄球菌和粪肠球菌。
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* Cited by examiner, † Cited by third party
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侯东园等: "海洋解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefacien)产抗生素Macrolactin A的碳源优化", 《海洋与湖沼》 *
杨桥等: "产MACROLACTIN A抗生素海洋解淀粉芽孢杆菌的鉴定及发酵条件优化", 《药物生物技术》 *
王洪强等: "一株海洋解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)生产Macrolactin B的发酵条件优化", 《海洋与湖沼》 *

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