CN114522218A - 一种快速解酒护肝保肝的组合物及其制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明提出了一种快速解酒护肝保肝的组合物及其制备方法，属于发酵技术领域，将葛根、柴胡、水飞蓟、北枳椇、叶下珠经过粉碎后进行酶解、水提取、醇提取后，加入活化后的醋酸杆菌和氧化葡糖酸杆菌进行有氧发酵，将得到的产物和岩藻聚糖硫酸酯、玉米低聚肽混合，加入活化后的副干酪乳杆菌和鼠李糖乳杆菌进行无氧发酵，产物与人参皂苷rh2、黄芩苷、牛磺酸混合均匀，得到快速解酒护肝保肝的组合物。本发明能够明显促进乙醇代谢，降低肝脏负担，快速解酒醒酒，增强机体抵抗能力，提高肝脏活力，抑制炎症反应，提高抗氧化效果，起到明显的保肝护肝的作用，具有广阔的应用前景。

Description

一种快速解酒护肝保肝的组合物及其制备方法
技术领域
本发明涉及发酵技术领域，具体涉及一种快速解酒护肝保肝的组合物及其制备方法。
背景技术
肝脏是人体糖类代谢、脂质代谢和蛋白质代谢的中心枢纽，具有排毒解毒、分泌胆汁等重要功能。酒精具有细胞毒性，使肝细胞膜表面的脂质过氧化，破坏肝细胞膜，进一步发展会使肝细胞内的微管和线粒体等结构受到破坏，使细胞内的代谢紊乱，导致具有细胞毒性的代谢产物产生，从而导致肝细胞肿胀、坏死。
熬夜、加班、饮食不当等等，都直接危害着肝脏的健康，近年来病毒性肝炎、肝纤维化、脂肪肝、酒精性肝病变、药物性肝损害及肝癌等肝病越来越成为威胁国人健康的疾病。各种肝病及肝病前期患者呈现持续增长及年轻化的特点，市场需求一种使用方便、无毒副作用且疗效好的保健护肝品。
保健功能食品的本质是食品，其含有一定量的功效成分，能够调节人体的机能，维护健康或预防某种疾病，安全无毒，受益人群广；随着消费者健康和安全意识的逐渐增强，保健品具有广阔的市场前景。
CN101716001A公开了一种解酒护肝饮料及生产方法，按以下重量配比的原料组成：葛根15％、叶下珠10％、葛花10％、罗汉果10％、罗望子10％、积壳 10％、积棋子10％，甘草10％、陈皮15％、果胶5％、薄荷3％，原料经过清洗、破碎、浸泡、加热、过滤、澄清、调味调香、下胶过滤、灭菌灌装制成成品；具有利胆保肝、利尿、抑制胃肠吸收，解酒毒等作用。
CN101972462A公开了一种解酒化湿、益气健脾、行气利水的解酒保健品，由以下成分和比例的药用植物：枳椇子20-60份，葛花(或葛根)20-50份，菊花 10-30份，白茅根5-20份，赤小豆5-20份，乌梅5-10份，干姜5-10份，山楂5-20 份，炒麦芽5-20份；还可以添加有：白术5-10份；该配方是通过配伍，综合运用行气、利水、补虚、和胃、醒脾等方法，调节脏腑功能，解酒作用迅速，效果明显。
发明内容
本发明的目的在于提出一种快速解酒护肝保肝的组合物及其制备方法，通过其含有的丰富的醋酸杆菌、氧化葡糖酸杆菌、玉米低聚肽以及中药酶解提取物和发酵代写产物，能够明显促进乙醇代谢，降低肝脏负担，快速解酒醒酒，同时，通过加入黄芩苷、人参皂苷rh2等保肝护肝成分，增强机体抵抗能力，提高肝脏活力，抑制炎症反应，提高抗氧化效果，起到明显的保肝护肝的作用，具有广阔的应用前景。
本发明的技术方案是这样实现的：
本发明提供一种快速解酒护肝保肝的组合物的制备方法，将葛根、柴胡、水飞蓟、北枳椇、叶下珠经过粉碎后进行酶解、水提取、醇提取后，加入活化后的醋酸杆菌和氧化葡糖酸杆菌进行有氧发酵，将得到的第一次发酵提取物和岩藻聚糖硫酸酯、玉米低聚肽混合，加入活化后的副干酪乳杆菌和鼠李糖乳杆菌进行无氧发酵，得到第二次发酵提取物，与人参皂苷rh2、黄芩苷、牛磺酸混合均匀，得到快速解酒护肝保肝的组合物。
作为本发明的进一步改进，包括以下步骤：
S1.中药组合物的制备：将葛根、柴胡、水飞蓟、北枳椇、叶下珠分别洗净，干燥，粉碎后过筛，混合均匀，得到中药组合物；
S2.酶解：将步骤S1制得的中药组合物加入水中，加入酶制剂，酶解，灭酶，过滤，滤渣留用，滤液干燥，得到酶提取物；
S3.水提：将步骤S2得到的滤渣加入水中，加热回流，提取后，过滤，重复 1次，合并滤液，滤渣留用，滤液干燥，得到水提取物；
S4.醇提：将步骤S3得到的滤渣加入乙醇溶液中，加热回流，提取后，过滤，重复1次，合并滤液，滤渣弃除，滤液干燥，得到醇提取物；
S5.培养基的制备：将碳源、氮源、维生素和无机盐用无菌水溶解，用PBS 溶液调节培养基pH值为6.8-7.2，分成两份，紫外线灭菌备用；
S6.有氧发酵菌液的制备：将醋酸杆菌和氧化葡糖酸杆菌分别接种到高氏培养基中，第一次有氧培养，分别培养成菌种种子液，接种于步骤S5制得的其中一份的液体培养基中，第二次有氧培养，将培养基等体积混合并稀释得到有氧发酵菌液；
S7.有氧发酵：将步骤S2制得的酶提取物、S3制得的水提取物、S4制得的醇提取物混合后，加入步骤S6得到的有氧发酵菌液中，恒温有氧发酵，过滤，洗涤，冷冻干燥，得到第一次发酵提取物；
S8.无氧发酵菌液的制备：将副干酪乳杆菌和鼠李糖乳杆菌分别接种到高氏培养基中，第一次无氧培养，分别培养成菌种种子液，接种于步骤S5制得的另一份的液体培养基中，第二次无氧培养，将培养基等体积混合并稀释得到无氧发酵菌液；
S9.无氧发酵：将步骤S7制得的第一次发酵提取物、岩藻聚糖硫酸酯、玉米低聚肽混合均匀后，加入步骤S8得到的无氧发酵菌液中，恒温无氧发酵，过滤，洗涤，冷冻干燥，得到第二次发酵提取物；
S10.快速解酒护肝保肝的组合物的制备：将步骤S9制得的第二次发酵提取物、人参皂苷rh2、黄芩苷、牛磺酸混合均匀，得到快速解酒护肝保肝的组合物。
作为本发明的进一步改进，步骤S1中所述葛根、柴胡、水飞蓟、北枳椇、叶下珠的质量比为(5-15)：(2-5)：(3-7)：(2-5)：(1-3)；所述过筛的筛网目数为200-500目。
作为本发明的进一步改进，步骤S2中所述酶制剂包括菠萝蛋白酶、纤维素酶、果胶酶，质量比为(3-7)：(3-5)：(1-2)；所述酶解条件为35-40℃， pH值为6-8，酶解时间为3-5h；所述灭酶条件为105-110℃灭酶10-20min；所述中药组合物、水和酶制剂的质量比为10：(50-100)：(2-4)。
作为本发明的进一步改进，步骤S3中所述滤渣和水的固液比为1：(3-5) g/mL；步骤S4中所述乙醇溶液为70-80wt％的乙醇水溶液；所述滤渣和水的固液比为1：(2-4)g/mL。
作为本发明的进一步改进，步骤S5中所述碳源选自阿拉伯糖、葡萄糖、麦芽糖、乳糖、蔗糖、果糖、淀粉中的至少一种；所述氮源选自酵母膏、蛋白胨、氨水、尿素、铵盐、硝酸盐、氨基酸中的至少一种；所述维生素选自维生素C、维生素B1、维生素B2、维生素B6、维生素A、维生素K、维生素B12、维生素 D、维生素E中的至少一种；所述无机盐选自氯化钠、氯化钾、氯化钙、硫酸镁、氯化铁、硫酸锌、硫酸铜、硫酸锰、氯化锌、氯化铜、氯化锰中的至少一种；所述氨基酸选自甘氨酸、丝氨酸、苏氨酸、缬氨酸、色氨酸、亮氨酸、丙氨酸、半胱氨酸、甲氨酸、赖氨酸、异亮氨酸、苯丙氨酸中的一种或几种混合；所述碳源、氮源、维生素、无机盐和无菌水的质量比为(10-20)：(5-12)：(0.2-0.4)： (0.2-0.7)：100。
作为本发明的进一步改进，步骤S6中所述醋酸杆菌和氧化葡糖酸杆菌的质量比为(2-5)：(1-3)；所述第一次有氧培养条件为35-40℃，氧含量为20-35％，湿度为70-80％，培养时间为12-24h；所述第二次有氧培养条件为35-40℃，氧含量为20-35％，湿度为70-80％，培养时间为24-36h；所述菌种种子液的含菌量为 107-108cfu/mL；所述醋酸杆菌和氧化葡糖酸杆菌的接种量分别为2-4％和1-3％；所述稀释倍数为100-200倍；步骤S7中所述酶提取物、水提取物、醇提取物和有氧发酵菌液的质量比为(5-10)：(3-7)：(2-5)：(10-20)；所述恒温有氧发酵条件为36-38℃，氧含量为25-30％，发酵时间为24-48h。
作为本发明的进一步改进，步骤S8中所述副干酪乳杆菌和鼠李糖乳杆菌的质量比为(4-7)：(2-5)；所述第一次无氧培养条件为35-40℃，无氧环境，湿度为65-75％，培养时间为12-24h；所述第二次无氧培养条件为35-40℃，无氧环境，湿度为65-75％，培养时间为24-36h；所述菌种种子液的含菌量为 107-108cfu/mL；所述副干酪乳杆菌和鼠李糖乳杆菌的接种量分别为1-3％和2-5％；所述稀释倍数为100-200倍；步骤S9中所述第一次发酵提取物、岩藻聚糖硫酸酯、玉米低聚肽、无氧发酵菌液的质量比为100：(15-22)：(3-7)：(150-200)；所述恒温无氧发酵的条件为36-38℃，无氧环境，发酵时间为24-48h；步骤S10 中所述第二次发酵提取物、人参皂苷rh2、黄芩苷、牛磺酸的质量比为100：(1-3)： (2-5)：(3-7)。
作为本发明的进一步改进，具体包括以下步骤：
S1.中药组合物的制备：将5-15重量份葛根、2-5重量份柴胡、3-7重量份水飞蓟、2-5重量份北枳椇、1-3重量份叶下珠分别洗净，干燥，粉碎后过200-500 目筛，混合均匀，得到中药组合物；
S2.酶解：将10重量份步骤S1制得的中药组合物加入50-100重量份水中，加入2-4重量份酶制剂，酶制剂包括菠萝蛋白酶、纤维素酶、果胶酶，质量比为 (3-7)：(3-5)：(1-2)，酶解，酶解条件为35-40℃，pH值为6-8，酶解时间为3-5h，105-110℃灭酶10-20min，过滤，滤渣留用，滤液干燥，得到酶提取物；
S3.水提：将步骤S2得到的滤渣加入水中，所述滤渣和水的固液比为1：(3-5) g/mL，加热回流，提取后，过滤，重复1次，合并滤液，滤渣留用，滤液干燥，得到水提取物；
S4.醇提：将步骤S3得到的滤渣加入70-80wt％的乙醇水溶液中，所述滤渣和水的固液比为1：(2-4)g/mL，加热回流，提取后，过滤，重复1次，合并滤液，滤渣弃除，滤液干燥，得到醇提取物；
S5.培养基的制备：将10-20重量份碳源、5-12重量份氮源、0.2-0.4重量份维生素和0.2-0.7重量份无机盐用100重量份无菌水溶解，用PBS溶液调节培养基 pH值为6.8-7.2，分成两份，紫外线灭菌备用；
S6.有氧发酵菌液的制备：将2-5重量份醋酸杆菌和1-3重量份氧化葡糖酸杆菌分别接种到高氏培养基中，第一次有氧培养，培养条件为35-40℃，氧含量为 20-35％，湿度为70-80％，培养时间为12-24h，分别培养成菌种种子液，含菌量为107-108cfu/mL，接种于步骤S5制得的其中一份的液体培养基中，所述醋酸杆菌和氧化葡糖酸杆菌的接种量分别为2-4％和1-3％，第二次有氧培养，培养条件为35-40℃，氧含量为20-35％，湿度为70-80％，培养时间为24-36h，将培养基等体积混合并稀释100-200倍得到有氧发酵菌液；
S7.有氧发酵：将5-10重量份步骤S2制得的酶提取物、3-7重量份S3制得的水提取物、2-5重量份S4制得的醇提取物混合后，加入10-20重量份步骤S6 得到的有氧发酵菌液中，恒温有氧发酵，发酵条件为36-38℃，氧含量为25-30％，发酵时间为24-48h，过滤，洗涤，冷冻干燥，得到第一次发酵提取物；
S8.无氧发酵菌液的制备：将4-7重量份副干酪乳杆菌和2-5重量份鼠李糖乳杆菌分别接种到高氏培养基中，第一次无氧培养，培养条件为35-40℃，无氧环境，湿度为65-75％，培养时间为12-24h，分别培养成菌种种子液，含菌量为 107-108cfu/mL，接种于步骤S5制得的另一份的液体培养基中，所述副干酪乳杆菌和鼠李糖乳杆菌的接种量分别为1-3％和2-5％，第二次无氧培养，培养条件为 35-40℃，无氧环境，湿度为65-75％，培养时间为24-36h，将培养基等体积混合并稀释100-200倍得到无氧发酵菌液；
S9.无氧发酵：将100重量份步骤S7制得的第一次发酵提取物、15-22重量份岩藻聚糖硫酸酯、3-7重量份玉米低聚肽混合均匀后，加入150-200重量份步骤S8得到的无氧发酵菌液中，恒温无氧发酵，条件为36-38℃，无氧环境，发酵时间为24-48h，过滤，洗涤，冷冻干燥，得到第二次发酵提取物；
S10.快速解酒护肝保肝的组合物的制备：将100重量份步骤S9制得的第二次发酵提取物、1-3重量份人参皂苷rh2、2-5重量份黄芩苷、3-7重量份牛磺酸混合均匀，得到快速解酒护肝保肝的组合物。
本发明进一步保护一种上述的制备方法制得的快速解酒护肝保肝。
本发明具有如下有益效果：葛根能升阳举陷、生津止渴、辛凉解表、解酒，主治风热外感、中气下陷、热渴、醉酒等证，其所含的皂苷类成分，对肝免疫损伤预防作用显著；葛根黄酮具有较强的抗氧化作用，能增强SOD活力，提高抗氧化酶系统水平，抑制氧化反应，对肝脏起到保护作用；葛根素则能诱导肝脏中星状细胞的凋亡，从而有效地保护肝脏；
柴胡能疏肝解郁、清热解表，主治肝气郁滞、少阳病证、食积不消等证，其中的皂苷能直接保护生物膜，且能通过调控转录因子信号通路达到抗乙酰氨基酚致肝损伤的效果，柴胡皂苷还具有提高肝脏内抗氧化分子水平、降低血清ALT、 AST水平，改变肝再生增强因子的功能，从而减少炎症反应起到保护肝脏的作用；
水飞蓟对治疗急、慢性肝炎、肝硬化、脂肪肝有较好的疗效，在初期肝硬化、肝中毒等治疗中发挥着良好的作用。其中，黄酮类物质水飞蓟宾对肝细胞膜具有明显的保护及稳定作用，同时对硫代乙酞胺、四氯化碳、毒草碱等肝脏毒物引起的各种类型肝损伤能够发挥良好的保护作用，能够抑制四氯化碳所引起的丙氨酸氨基转移酶的升高从而发挥保肝降酶作用；
北枳椇能解酒毒、止渴除烦、止呕、利大小便，主醉酒、烦渴、呕吐、二便不利。北枳椇有解酒保肝、抗脂质过氧化反应和抗高脂血症、抗致突变、抗肿瘤、抑制组胺释放、镇静、抗痉、镇痛、降压利尿等方面的功能。研究表明，能够降低血液中乙醇的含量、加速乙醇在体内的分解、清除乙醇代谢过程中所产生的自由基离子、抑制脂质过氧化反应，从而保护肝脏免受损伤，维持其正常的功能；
叶下珠具有清热解毒、消毒退肿之效，具有良好的保肝及抗乙型肝炎病毒作用，能够促进肝细胞修复和再生。叶下珠对D-半乳糖酸、四氧化碳所致的小白鼠的肝细胞损伤有明显修复作用；
将葛根、柴胡、水飞蓟、北枳椇、叶下珠进行纤维素酶、果胶酶酶解后，能够将中药细胞破壁从而使得其大量的有效成分溶出，菠萝蛋白酶能将中药组分中高分子蛋白质酶解成小分子短肽类物质，进一步经过水提取和醇提取后，能够得到大量的黄酮类、皂苷类、短肽类活性物质，包括葛根黄酮、葛根素、柴胡皂苷、水飞蓟宾等活性物质，具有明显的解酒醒酒，能够降低血液中乙醇的含量、加速乙醇在体内的分解，预防酒精性肝损伤，提高抗氧化酶系统水平，抑制氧化反应，降低血清ALT、AST水平，改变肝再生增强因子的功能，从而减少炎症反应起到保护肝脏的作用；
当人体大量饮酒，酒精代谢量小于摄入量时，酒精就会在体内短时间大量蓄积，使肝脏乙醇脱氢酶(ADH)、谷胱甘肽巯基转移酶(GST)，谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的含量显著降低，对肝脏产生直接损伤作用。氧化葡糖酸杆菌和醋酸杆菌含有丰富的吡咯喹啉醌-酒精脱氢酶和乙醛脱氢酶，在低酸碱度的条件下依然具有酶活性，使得酒精和组合物中的氧化葡糖酸杆菌和醋酸杆菌在胃部内就会发生大量的乙醇代谢，将乙醇氧化成有机酸，从而起到较好的分解体内的乙醇的作用，有明显的解酒效果，预防酒精性肝损伤，减轻肝脏负担，保护肝脏，降低血液和人体呼出气体中的乙醇浓度；同时，醋酸杆菌还可以促进肝脏的乙醇和乙醛的代谢，调节了脂质代谢酶环境，有效降低肝脏甘油三酯和总胆固醇含量并显著降低了转氨酶的含量，氧化葡糖酸杆菌能有效抑制了转氨酶的升高和脂质的堆积、改善肝脏纤维化，产生大量维生素C，提高了超氧化物歧化酶活力和谷胱甘肽转移酶的含量，达到了解酒效果。
进一步地，将第一次发酵提取物、岩藻聚糖硫酸酯和玉米低聚肽混合后加入副干酪乳杆菌和鼠李糖乳杆菌进行无氧发酵后，能进一步降低活性物质的分子量，得到小分子糖类、短肽以及黄酮类、皂苷类、三萜类等活性物质，进一步降低中药物质的毒性，提高原料的药效，达到减毒增效的作用，玉米低聚肽具有多种生物活性，如抗氧化、抗高血压、增强免疫力、抗疲劳、保护肝脏等作用，还具有极好的醒酒作用，岩藻聚糖硫酸酯发酵后，具有降血脂、抗肿瘤、抗凝血、抗氧化、降血糖等多种生物活性，能明显提高SOD酶活性，提高还原型谷胱甘肽含量，增强小鼠的抗氧化能力，抑制自由基引起的脂质过氧化，从而保护肝脏免受损伤，具有协同增效的作用；
黄芩苷在治疗病毒性肝炎，酒精肝，化学性肝损伤，抗肝纤维化，肝衰竭，肝癌等具有较好的作用，人参皂苷rh2具有提高自身免疫功能，增强抗病能力的效果，牛磺酸能够与胆汁酸结合形成牛黄胆酸，增加脂质和胆固醇的溶解性，解除胆汁阻塞，降低某些游离胆汁酸的细胞毒性，并具有促进有机体免疫力的增强和抗疲劳的作用，加入第二次发酵提取物中后，能明显增强机体抵抗能力，提高肝脏活力，抑制炎症反应，提高抗氧化效果，起到了协同增效的作用，起到明显的保肝护肝的作用；
本发明制得的快速解酒护肝保肝的组合物通过其含有的丰富的醋酸杆菌、氧化葡糖酸杆菌、玉米低聚肽以及中药酶解提取物和发酵代写产物，能够明显促进乙醇代谢，降低肝脏负担，快速解酒醒酒，同时，通过加入黄芩苷、人参皂苷rh2 等保肝护肝成分，增强机体抵抗能力，提高肝脏活力，抑制炎症反应，提高抗氧化效果，起到明显的保肝护肝的作用，具有广阔的应用前景。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动性的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1为本发明测试例1中各组小鼠肝脏指数结果图。
具体实施方式
下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
中药材均购于齐鲁(山东)国药集团中药饮片有限公司。
菠萝蛋白酶，CAS号9001-00-7，酶活性10万U/g，购于重庆骄王天然产物股份有限公司；纤维素酶，CAS号9012-54-8，酶活性1.1万U/g，购于夏盛(北京)生物科技开发有限公司；果胶酶，CAS号9032-75-1，酶活性2.5万U/g，购于夏盛(北京)生物科技开发有限公司。
醋酸杆菌，ATCC15973，购于上海沪峥生物科技有限公司；氧化葡糖酸杆菌，来源于美国Gluconobacter oxydans ATCC 621H，由南京林业大学生物化工研究所木质纤维水解液长期驯化选育并保藏；副干酪乳杆菌，100亿cfu/g，购于西安美禾生物科技有限公司；鼠李糖乳杆菌，100亿cfu/g，购于西安东峰生物科技有限公司。
岩藻聚糖硫酸酯，CAS号9072-19-9，含量为98％，粒度为80目，购于南京百慕达生物科技有限公司；玉米低聚肽，CAS号6025-53-2，购于陕西晨明生物科技有限公司；人参皂苷rh2，CAS号78214-33-2，纯度>96％，购于成都仪睿生物科技有限公司；黄芩苷，CAS号21967-41-9，纯度>85％，购于西安明朗生物科技有限公司；牛磺酸，CAS号107-35-7，纯度>99％，购于江西百盈生物技术有限公司。
实施例1
本实施例提供一种快速解酒护肝保肝的组合物的制备方法，具体包括以下步骤：
S1.中药组合物的制备：将5重量份葛根、2重量份柴胡、3重量份水飞蓟、2 重量份北枳椇、1重量份叶下珠分别洗净，70℃干燥2h，粉碎后过200目筛，混合均匀，得到中药组合物；
S2.酶解：将10重量份步骤S1制得的中药组合物加入50重量份水中，加入 2重量份酶制剂，酶制剂包括菠萝蛋白酶、纤维素酶、果胶酶，质量比为3：3： 1，酶解，酶解条件为35℃，pH值为6，酶解时间为3h，105℃灭酶10min，过滤，滤渣留用，滤液70℃干燥4h，得到酶提取物；
S3.水提：将步骤S2得到的滤渣加入水中，所述滤渣和水的固液比为1： 3g/mL，加热回流4h，提取后，过滤，重复1次，合并滤液，滤渣留用，滤液70℃干燥4h，得到水提取物；
S4.醇提：将步骤S3得到的滤渣加入70wt％的乙醇水溶液中，所述滤渣和水的固液比为1：2g/mL，加热回流2h，提取后，过滤，重复1次，合并滤液，滤渣弃除，滤液70℃干燥4h，得到醇提取物；
S5.培养基的制备：将2重量份阿拉伯糖、6重量份葡萄糖、2重量份麦芽糖、 2重量份蛋白胨、1重量份尿素、1重量份半胱氨酸、1重量份甲氨酸、0.1重量份维生素C、0.05重量份维生素D、0.05重量份维生素E、0.1重量份氯化钾、0.05 重量份氯化铁、0.05重量份硫酸锌用100重量份无菌水溶解，用PBS溶液调节培养基pH值为6.8，分成两份，紫外线灭菌备用；
S6.有氧发酵菌液的制备：将2重量份醋酸杆菌和1重量份氧化葡糖酸杆菌分别接种到高氏培养基中，第一次有氧培养，培养条件为35℃，氧含量为20％，湿度为70％，培养时间为12h，分别培养成菌种种子液，含菌量为107cfu/mL，接种于步骤S5制得的其中一份的液体培养基中，所述醋酸杆菌和氧化葡糖酸杆菌的接种量分别为2％和1％，第二次有氧培养，培养条件为35℃，氧含量为20％，湿度为70％，培养时间为24h，将培养基等体积混合并稀释100倍得到有氧发酵菌液；
S7.有氧发酵：将5重量份步骤S2制得的酶提取物、3重量份S3制得的水提取物、2重量份S4制得的醇提取物混合后，加入10重量份步骤S6得到的有氧发酵菌液中，恒温有氧发酵，发酵条件为36℃，氧含量为25％，发酵时间为24h，过滤，去离子水洗涤，冷冻干燥，得到第一次发酵提取物；
S8.无氧发酵菌液的制备：将4重量份副干酪乳杆菌和2重量份鼠李糖乳杆菌分别接种到高氏培养基中，第一次无氧培养，培养条件为35℃，无氧环境，湿度为65％，培养时间为12h，分别培养成菌种种子液，含菌量为107cfu/mL，接种于步骤S5制得的另一份的液体培养基中，所述副干酪乳杆菌和鼠李糖乳杆菌的接种量分别为1％和2％，第二次无氧培养，培养条件为35℃，无氧环境，湿度为65％，培养时间为24h，将培养基等体积混合并稀释100倍得到无氧发酵菌液；
S9.无氧发酵：将100重量份步骤S7制得的第一次发酵提取物、15重量份岩藻聚糖硫酸酯、3重量份玉米低聚肽混合均匀后，加入150重量份步骤S8得到的无氧发酵菌液中，恒温无氧发酵，条件为36℃，无氧环境，发酵时间为24h，过滤，去离子水洗涤，冷冻干燥，得到第二次发酵提取物；
S10.快速解酒护肝保肝的组合物的制备：将100重量份步骤S9制得的第二次发酵提取物、1重量份人参皂苷rh2、2重量份黄芩苷、3重量份牛磺酸混合均匀，得到快速解酒护肝保肝的组合物。
实施例2
本实施例提供一种快速解酒护肝保肝的组合物的制备方法，具体包括以下步骤：
S1.中药组合物的制备：将15重量份葛根、5重量份柴胡、7重量份水飞蓟、 5重量份北枳椇、3重量份叶下珠分别洗净，70℃干燥2h，粉碎后过500目筛，混合均匀，得到中药组合物；
S2.酶解：将10重量份步骤S1制得的中药组合物加入100重量份水中，加入4重量份酶制剂，酶制剂包括菠萝蛋白酶、纤维素酶、果胶酶，质量比为7：5：2，酶解，酶解条件为40℃，pH值为8，酶解时间为5h，110℃灭酶20min，过滤，滤渣留用，滤液70℃干燥4h，得到酶提取物；
S3.水提：将步骤S2得到的滤渣加入水中，所述滤渣和水的固液比为1： 5g/mL，加热回流4h，提取后，过滤，重复1次，合并滤液，滤渣留用，滤液70℃干燥4h，得到水提取物；
S4.醇提：将步骤S3得到的滤渣加入80wt％的乙醇水溶液中，所述滤渣和水的固液比为1：4g/mL，加热回流2h，提取后，过滤，重复1次，合并滤液，滤渣弃除，滤液70℃干燥4h，得到醇提取物；
S5.培养基的制备：将10重量份蔗糖、4重量份果糖、6重量份淀粉、8重量份酵母膏、1重量份色氨酸、1重量份亮氨酸、2重量份尿素、0.2重量份维生素 A、0.1重量份维生素K、0.1重量份维生素B12和0.1重量份氯化锌、0.1重量份氯化铜、0.5重量份氯化钠、0.2重量份硫酸镁用100重量份无菌水溶解，用PBS 溶液调节培养基pH值为7.2，分成两份，紫外线灭菌备用；
S6.有氧发酵菌液的制备：将5重量份醋酸杆菌和3重量份氧化葡糖酸杆菌分别接种到高氏培养基中，第一次有氧培养，培养条件为40℃，氧含量为35％，湿度为80％，培养时间为24h，分别培养成菌种种子液，含菌量为108cfu/mL，接种于步骤S5制得的其中一份的液体培养基中，所述醋酸杆菌和氧化葡糖酸杆菌的接种量分别为4％和3％，第二次有氧培养，培养条件为40℃，氧含量为35％，湿度为80％，培养时间为36h，将培养基等体积混合并稀释200倍得到有氧发酵菌液；
S7.有氧发酵：将10重量份步骤S2制得的酶提取物、7重量份S3制得的水提取物、5重量份S4制得的醇提取物混合后，加入20重量份步骤S6得到的有氧发酵菌液中，恒温有氧发酵，发酵条件为38℃，氧含量为30％，发酵时间为 48h，过滤，去离子水洗涤，冷冻干燥，得到第一次发酵提取物；
S8.无氧发酵菌液的制备：将7重量份副干酪乳杆菌和5重量份鼠李糖乳杆菌分别接种到高氏培养基中，第一次无氧培养，培养条件为40℃，无氧环境，湿度为75％，培养时间为24h，分别培养成菌种种子液，含菌量为108cfu/mL，接种于步骤S5制得的另一份的液体培养基中，所述副干酪乳杆菌和鼠李糖乳杆菌的接种量分别为3％和5％，第二次无氧培养，培养条件为40℃，无氧环境，湿度为75％，培养时间为36h，将培养基等体积混合并稀释200倍得到无氧发酵菌液；
S9.无氧发酵：将100重量份步骤S7制得的第一次发酵提取物、22重量份岩藻聚糖硫酸酯、7重量份玉米低聚肽混合均匀后，加入200重量份步骤S8得到的无氧发酵菌液中，恒温无氧发酵，条件为38℃，无氧环境，发酵时间为48h，过滤，去离子水洗涤，冷冻干燥，得到第二次发酵提取物；
S10.快速解酒护肝保肝的组合物的制备：将100重量份步骤S9制得的第二次发酵提取物、3重量份人参皂苷rh2、5重量份黄芩苷、7重量份牛磺酸混合均匀，得到快速解酒护肝保肝的组合物。
实施例3
本实施例提供一种快速解酒护肝保肝的组合物的制备方法，具体包括以下步骤：
S1.中药组合物的制备：将10重量份葛根、3.5重量份柴胡、5重量份水飞蓟、 3.5重量份北枳椇、2重量份叶下珠分别洗净，70℃干燥2h，粉碎后过400目筛，混合均匀，得到中药组合物；
S2.酶解：将10重量份步骤S1制得的中药组合物加入70重量份水中，加入 3重量份酶制剂，酶制剂包括菠萝蛋白酶、纤维素酶、果胶酶，质量比为5：4： 1.5，酶解，酶解条件为37℃，pH值为7，酶解时间为4h，110℃灭酶15min，过滤，滤渣留用，滤液70℃干燥4h，得到酶提取物；
S3.水提：将步骤S2得到的滤渣加入水中，所述滤渣和水的固液比为1： 4g/mL，加热回流4h，提取后，过滤，重复1次，合并滤液，滤渣留用，滤液70℃干燥4h，得到水提取物；
S4.醇提：将步骤S3得到的滤渣加入75wt％的乙醇水溶液中，所述滤渣和水的固液比为1：3g/mL，加热回流2h，提取后，过滤，重复1次，合并滤液，滤渣弃除，滤液70℃干燥4h，得到醇提取物；
S5.培养基的制备：将10重量份葡萄糖、5重量份蔗糖、6重量份蛋白胨、2 重量份尿素、0.1重量份维生素C、0.1重量份维生素B1、0.1重量份维生素B2、 0.2重量份氯化钙、0.2重量份硫酸镁、0.1重量份氯化铁用100重量份无菌水溶解，用PBS溶液调节培养基pH值为7，分成两份，紫外线灭菌备用；
S6.有氧发酵菌液的制备：将3.5重量份醋酸杆菌和2重量份氧化葡糖酸杆菌分别接种到高氏培养基中，第一次有氧培养，培养条件为37℃，氧含量为28％，湿度为75％，培养时间为18h，分别培养成菌种种子液，含菌量为108cfu/mL，接种于步骤S5制得的其中一份的液体培养基中，所述醋酸杆菌和氧化葡糖酸杆菌的接种量分别为3％和2％，第二次有氧培养，培养条件为37℃，氧含量为27％，湿度为75％，培养时间为30h，将培养基等体积混合并稀释150倍得到有氧发酵菌液；
S7.有氧发酵：将7重量份步骤S2制得的酶提取物、5重量份S3制得的水提取物、3.5重量份S4制得的醇提取物混合后，加入15重量份步骤S6得到的有氧发酵菌液中，恒温有氧发酵，发酵条件为37℃，氧含量为27％，发酵时间为36h，过滤，去离子水洗涤，冷冻干燥，得到第一次发酵提取物；
S8.无氧发酵菌液的制备：将5重量份副干酪乳杆菌和3.5重量份鼠李糖乳杆菌分别接种到高氏培养基中，第一次无氧培养，培养条件为37℃，无氧环境，湿度为70％，培养时间为18h，分别培养成菌种种子液，含菌量为108cfu/mL，接种于步骤S5制得的另一份的液体培养基中，所述副干酪乳杆菌和鼠李糖乳杆菌的接种量分别为2％和3.5％，第二次无氧培养，培养条件为37℃，无氧环境，湿度为70％，培养时间为30h，将培养基等体积混合并稀释150倍得到无氧发酵菌液；
S9.无氧发酵：将100重量份步骤S7制得的第一次发酵提取物、19重量份岩藻聚糖硫酸酯、5重量份玉米低聚肽混合均匀后，加入170重量份步骤S8得到的无氧发酵菌液中，恒温无氧发酵，条件为37℃，无氧环境，发酵时间为36h，过滤，去离子水洗涤，冷冻干燥，得到第二次发酵提取物；
S10.快速解酒护肝保肝的组合物的制备：将100重量份步骤S9制得的第二次发酵提取物、2重量份人参皂苷rh2、3.5重量份黄芩苷、5重量份牛磺酸混合均匀，得到快速解酒护肝保肝的组合物。
实施例4
与实施例3相比，酶制剂中未添加菠萝蛋白酶，酶制剂包括纤维素酶、果胶酶，质量比为9：1.5，其他条件均不改变。
实施例5
与实施例3相比，酶制剂中未添加纤维素酶，酶制剂包括菠萝蛋白酶、果胶酶，质量比为9：1.5，其他条件均不改变。
对比例1
与实施例3相比，未进行步骤S2酶解，其他条件均不改变。
具体包括以下步骤：
S1.中药组合物的制备：将10重量份葛根、3.5重量份柴胡、5重量份水飞蓟、 3.5重量份北枳椇、2重量份叶下珠分别洗净，70℃干燥2h，粉碎后过400目筛，混合均匀，得到中药组合物；
S2.水提：将步骤S1得到的中药组合物加入水中，所述滤渣和水的固液比为 1：4g/mL，加热回流4h，提取后，过滤，重复1次，合并滤液，滤渣留用，滤液70℃干燥4h，得到水提取物；
S3.醇提：将步骤S2得到的滤渣加入75wt％的乙醇水溶液中，所述滤渣和水的固液比为1：3g/mL，加热回流2h，提取后，过滤，重复1次，合并滤液，滤渣弃除，滤液70℃干燥4h，得到醇提取物；
S4.培养基的制备：将10重量份葡萄糖、5重量份蔗糖、6重量份蛋白胨、2 重量份尿素、0.1重量份维生素C、0.1重量份维生素B1、0.1重量份维生素B2、 0.2重量份氯化钙、0.2重量份硫酸镁、0.1重量份氯化铁用100重量份无菌水溶解，用PBS溶液调节培养基pH值为7，分成两份，紫外线灭菌备用；
S5.有氧发酵菌液的制备：将3.5重量份醋酸杆菌和2重量份氧化葡糖酸杆菌分别接种到高氏培养基中，第一次有氧培养，培养条件为37℃，氧含量为28％，湿度为75％，培养时间为18h，分别培养成菌种种子液，含菌量为108cfu/mL，接种于步骤S5制得的其中一份的液体培养基中，所述醋酸杆菌和氧化葡糖酸杆菌的接种量分别为3％和2％，第二次有氧培养，培养条件为37℃，氧含量为27％，湿度为75％，培养时间为30h，将培养基等体积混合并稀释150倍得到有氧发酵菌液；
S6.有氧发酵：将5重量份S2制得的水提取物、3.5重量份S3制得的醇提取物混合后，加入15重量份步骤S5得到的有氧发酵菌液中，恒温有氧发酵，发酵条件为37℃，氧含量为27％，发酵时间为36h，过滤，去离子水洗涤，冷冻干燥，得到第一次发酵提取物；
S7.无氧发酵菌液的制备：将5重量份副干酪乳杆菌和3.5重量份鼠李糖乳杆菌分别接种到高氏培养基中，第一次无氧培养，培养条件为37℃，无氧环境，湿度为70％，培养时间为18h，分别培养成菌种种子液，含菌量为108cfu/mL，接种于步骤S5制得的另一份的液体培养基中，所述副干酪乳杆菌和鼠李糖乳杆菌的接种量分别为2％和3.5％，第二次无氧培养，培养条件为37℃，无氧环境，湿度为70％，培养时间为30h，将培养基等体积混合并稀释150倍得到无氧发酵菌液；
S8.无氧发酵：将100重量份步骤S6制得的第一次发酵提取物、19重量份岩藻聚糖硫酸酯、5重量份玉米低聚肽混合均匀后，加入170重量份步骤S8得到的无氧发酵菌液中，恒温无氧发酵，条件为37℃，无氧环境，发酵时间为36h，过滤，去离子水洗涤，冷冻干燥，得到第二次发酵提取物；
S9.快速解酒护肝保肝的组合物的制备：将100重量份步骤S8制得的第二次发酵提取物、2重量份人参皂苷rh2、3.5重量份黄芩苷、5重量份牛磺酸混合均匀，得到快速解酒护肝保肝的组合物。
对比例2
与实施例3相比，步骤S6中未添加醋酸杆菌，其他条件均不改变。
具体包括以下步骤：
S1.中药组合物的制备：将10重量份葛根、3.5重量份柴胡、5重量份水飞蓟、 3.5重量份北枳椇、2重量份叶下珠分别洗净，70℃干燥2h，粉碎后过400目筛，混合均匀，得到中药组合物；
S2.酶解：将10重量份步骤S1制得的中药组合物加入70重量份水中，加入 3重量份酶制剂，酶制剂包括菠萝蛋白酶、纤维素酶、果胶酶，质量比为5：4： 1.5，酶解，酶解条件为37℃，pH值为7，酶解时间为4h，110℃灭酶15min，过滤，滤渣留用，滤液70℃干燥4h，得到酶提取物；
S3.水提：将步骤S2得到的滤渣加入水中，所述滤渣和水的固液比为1： 4g/mL，加热回流4h，提取后，过滤，重复1次，合并滤液，滤渣留用，滤液70℃干燥4h，得到水提取物；
S4.醇提：将步骤S3得到的滤渣加入75wt％的乙醇水溶液中，所述滤渣和水的固液比为1：3g/mL，加热回流2h，提取后，过滤，重复1次，合并滤液，滤渣弃除，滤液70℃干燥4h，得到醇提取物；
S5.培养基的制备：将10重量份葡萄糖、5重量份蔗糖、6重量份蛋白胨、2 重量份尿素、0.1重量份维生素C、0.1重量份维生素B1、0.1重量份维生素B2、 0.2重量份氯化钙、0.2重量份硫酸镁、0.1重量份氯化铁用100重量份无菌水溶解，用PBS溶液调节培养基pH值为7，分成两份，紫外线灭菌备用；
S6.有氧发酵菌液的制备：将5.5重量份氧化葡糖酸杆菌接种到高氏培养基中，第一次有氧培养，培养条件为37℃，氧含量为28％，湿度为75％，培养时间为 18h，分别培养成菌种种子液，含菌量为108cfu/mL，接种于步骤S5制得的其中一份的液体培养基中，所述氧化葡糖酸杆菌的接种量分别为5％，第二次有氧培养，培养条件为37℃，氧含量为27％，湿度为75％，培养时间为30h，将培养基等体积混合并稀释150倍得到有氧发酵菌液；
S7.有氧发酵：将7重量份步骤S2制得的酶提取物、5重量份S3制得的水提取物、3.5重量份S4制得的醇提取物混合后，加入15重量份步骤S6得到的有氧发酵菌液中，恒温有氧发酵，发酵条件为37℃，氧含量为27％，发酵时间为36h，过滤，去离子水洗涤，冷冻干燥，得到第一次发酵提取物；
S8.无氧发酵菌液的制备：将5重量份副干酪乳杆菌和3.5重量份鼠李糖乳杆菌分别接种到高氏培养基中，第一次无氧培养，培养条件为37℃，无氧环境，湿度为70％，培养时间为18h，分别培养成菌种种子液，含菌量为108cfu/mL，接种于步骤S5制得的另一份的液体培养基中，所述副干酪乳杆菌和鼠李糖乳杆菌的接种量分别为2％和3.5％，第二次无氧培养，培养条件为37℃，无氧环境，湿度为70％，培养时间为30h，将培养基等体积混合并稀释150倍得到无氧发酵菌液；
S9.无氧发酵：将100重量份步骤S7制得的第一次发酵提取物、19重量份岩藻聚糖硫酸酯、5重量份玉米低聚肽混合均匀后，加入170重量份步骤S8得到的无氧发酵菌液中，恒温无氧发酵，条件为37℃，无氧环境，发酵时间为36h，过滤，去离子水洗涤，冷冻干燥，得到第二次发酵提取物；
S10.快速解酒护肝保肝的组合物的制备：将100重量份步骤S9制得的第二次发酵提取物、2重量份人参皂苷rh2、3.5重量份黄芩苷、5重量份牛磺酸混合均匀，得到快速解酒护肝保肝的组合物。
对比例3
与实施例3相比，步骤S6中未添加氧化葡糖酸杆菌，其他条件均不改变。
具体包括以下步骤：
S1.中药组合物的制备：将10重量份葛根、3.5重量份柴胡、5重量份水飞蓟、 3.5重量份北枳椇、2重量份叶下珠分别洗净，70℃干燥2h，粉碎后过400目筛，混合均匀，得到中药组合物；
S2.酶解：将10重量份步骤S1制得的中药组合物加入70重量份水中，加入 3重量份酶制剂，酶制剂包括菠萝蛋白酶、纤维素酶、果胶酶，质量比为5：4： 1.5，酶解，酶解条件为37℃，pH值为7，酶解时间为4h，110℃灭酶15min，过滤，滤渣留用，滤液70℃干燥4h，得到酶提取物；
S3.水提：将步骤S2得到的滤渣加入水中，所述滤渣和水的固液比为1： 4g/mL，加热回流4h，提取后，过滤，重复1次，合并滤液，滤渣留用，滤液70℃干燥4h，得到水提取物；
S4.醇提：将步骤S3得到的滤渣加入75wt％的乙醇水溶液中，所述滤渣和水的固液比为1：3g/mL，加热回流2h，提取后，过滤，重复1次，合并滤液，滤渣弃除，滤液70℃干燥4h，得到醇提取物；
S5.培养基的制备：将10重量份葡萄糖、5重量份蔗糖、6重量份蛋白胨、2 重量份尿素、0.1重量份维生素C、0.1重量份维生素B1、0.1重量份维生素B2、 0.2重量份氯化钙、0.2重量份硫酸镁、0.1重量份氯化铁用100重量份无菌水溶解，用PBS溶液调节培养基pH值为7，分成两份，紫外线灭菌备用；
S6.有氧发酵菌液的制备：将5.5重量份醋酸杆菌接种到高氏培养基中，第一次有氧培养，培养条件为37℃，氧含量为28％，湿度为75％，培养时间为18h，分别培养成菌种种子液，含菌量为108cfu/mL，接种于步骤S5制得的其中一份的液体培养基中，所述醋酸杆菌的接种量分别为5％，第二次有氧培养，培养条件为37℃，氧含量为27％，湿度为75％，培养时间为30h，将培养基等体积混合并稀释150倍得到有氧发酵菌液；
S7.有氧发酵：将7重量份步骤S2制得的酶提取物、5重量份S3制得的水提取物、3.5重量份S4制得的醇提取物混合后，加入15重量份步骤S6得到的有氧发酵菌液中，恒温有氧发酵，发酵条件为37℃，氧含量为27％，发酵时间为36h，过滤，去离子水洗涤，冷冻干燥，得到第一次发酵提取物；
S8.无氧发酵菌液的制备：将5重量份副干酪乳杆菌和3.5重量份鼠李糖乳杆菌分别接种到高氏培养基中，第一次无氧培养，培养条件为37℃，无氧环境，湿度为70％，培养时间为18h，分别培养成菌种种子液，含菌量为108cfu/mL，接种于步骤S5制得的另一份的液体培养基中，所述副干酪乳杆菌和鼠李糖乳杆菌的接种量分别为2％和3.5％，第二次无氧培养，培养条件为37℃，无氧环境，湿度为70％，培养时间为30h，将培养基等体积混合并稀释150倍得到无氧发酵菌液；
S9.无氧发酵：将100重量份步骤S7制得的第一次发酵提取物、19重量份岩藻聚糖硫酸酯、5重量份玉米低聚肽混合均匀后，加入170重量份步骤S8得到的无氧发酵菌液中，恒温无氧发酵，条件为37℃，无氧环境，发酵时间为36h，过滤，去离子水洗涤，冷冻干燥，得到第二次发酵提取物；
S10.快速解酒护肝保肝的组合物的制备：将100重量份步骤S9制得的第二次发酵提取物、2重量份人参皂苷rh2、3.5重量份黄芩苷、5重量份牛磺酸混合均匀，得到快速解酒护肝保肝的组合物。
对比例4
与实施例3相比，未进行步骤S6、S7，其他条件均不改变。
具体包括以下步骤：
S1.中药组合物的制备：将10重量份葛根、3.5重量份柴胡、5重量份水飞蓟、 3.5重量份北枳椇、2重量份叶下珠分别洗净，70℃干燥2h，粉碎后过400目筛，混合均匀，得到中药组合物；
S2.酶解：将10重量份步骤S1制得的中药组合物加入70重量份水中，加入 3重量份酶制剂，酶制剂包括菠萝蛋白酶、纤维素酶、果胶酶，质量比为5：4：1.5，酶解，酶解条件为37℃，pH值为7，酶解时间为4h，110℃灭酶15min，过滤，滤渣留用，滤液70℃干燥4h，得到酶提取物；
S3.水提：将步骤S2得到的滤渣加入水中，所述滤渣和水的固液比为1： 4g/mL，加热回流4h，提取后，过滤，重复1次，合并滤液，滤渣留用，滤液70℃干燥4h，得到水提取物；
S4.醇提：将步骤S3得到的滤渣加入75wt％的乙醇水溶液中，所述滤渣和水的固液比为1：3g/mL，加热回流2h，提取后，过滤，重复1次，合并滤液，滤渣弃除，滤液70℃干燥4h，得到醇提取物；
S5.培养基的制备：将10重量份葡萄糖、5重量份蔗糖、6重量份蛋白胨、2 重量份尿素、0.1重量份维生素C、0.1重量份维生素B1、0.1重量份维生素B2、 0.2重量份氯化钙、0.2重量份硫酸镁、0.1重量份氯化铁用100重量份无菌水溶解，用PBS溶液调节培养基pH值为7，分成两份，紫外线灭菌备用；
S6.无氧发酵菌液的制备：将5重量份副干酪乳杆菌和3.5重量份鼠李糖乳杆菌分别接种到高氏培养基中，第一次无氧培养，培养条件为37℃，无氧环境，湿度为70％，培养时间为18h，分别培养成菌种种子液，含菌量为108cfu/mL，接种于步骤S5制得的另一份的液体培养基中，所述副干酪乳杆菌和鼠李糖乳杆菌的接种量分别为2％和3.5％，第二次无氧培养，培养条件为37℃，无氧环境，湿度为70％，培养时间为30h，将培养基等体积混合并稀释150倍得到无氧发酵菌液；
S7.无氧发酵：将100重量份步骤S2制得的酶提取物、S3制得的水提取物、 S4制得的醇提取物，质量比为7：5：3.5，混合均匀后，加入19重量份岩藻聚糖硫酸酯、5重量份玉米低聚肽混合均匀后，加入170重量份步骤S6得到的无氧发酵菌液中，恒温无氧发酵，条件为37℃，无氧环境，发酵时间为36h，过滤，去离子水洗涤，冷冻干燥，得到第二次发酵提取物；
S8.快速解酒护肝保肝的组合物的制备：将100重量份步骤S7制得的第二次发酵提取物、2重量份人参皂苷rh2、3.5重量份黄芩苷、5重量份牛磺酸混合均匀，得到快速解酒护肝保肝的组合物。
对比例5
与实施例3相比，步骤S8中未添加副干酪乳杆菌，其他条件均不改变。
具体包括以下步骤：
S1.中药组合物的制备：将10重量份葛根、3.5重量份柴胡、5重量份水飞蓟、 3.5重量份北枳椇、2重量份叶下珠分别洗净，70℃干燥2h，粉碎后过400目筛，混合均匀，得到中药组合物；
S2.酶解：将10重量份步骤S1制得的中药组合物加入70重量份水中，加入 3重量份酶制剂，酶制剂包括菠萝蛋白酶、纤维素酶、果胶酶，质量比为5：4： 1.5，酶解，酶解条件为37℃，pH值为7，酶解时间为4h，110℃灭酶15min，过滤，滤渣留用，滤液70℃干燥4h，得到酶提取物；
S3.水提：将步骤S2得到的滤渣加入水中，所述滤渣和水的固液比为1： 4g/mL，加热回流4h，提取后，过滤，重复1次，合并滤液，滤渣留用，滤液70℃干燥4h，得到水提取物；
S4.醇提：将步骤S3得到的滤渣加入75wt％的乙醇水溶液中，所述滤渣和水的固液比为1：3g/mL，加热回流2h，提取后，过滤，重复1次，合并滤液，滤渣弃除，滤液70℃干燥4h，得到醇提取物；
S5.培养基的制备：将10重量份葡萄糖、5重量份蔗糖、6重量份蛋白胨、2 重量份尿素、0.1重量份维生素C、0.1重量份维生素B1、0.1重量份维生素B2、 0.2重量份氯化钙、0.2重量份硫酸镁、0.1重量份氯化铁用100重量份无菌水溶解，用PBS溶液调节培养基pH值为7，分成两份，紫外线灭菌备用；
S6.有氧发酵菌液的制备：将3.5重量份醋酸杆菌和2重量份氧化葡糖酸杆菌分别接种到高氏培养基中，第一次有氧培养，培养条件为37℃，氧含量为28％，湿度为75％，培养时间为18h，分别培养成菌种种子液，含菌量为108cfu/mL，接种于步骤S5制得的其中一份的液体培养基中，所述醋酸杆菌和氧化葡糖酸杆菌的接种量分别为3％和2％，第二次有氧培养，培养条件为37℃，氧含量为27％，湿度为75％，培养时间为30h，将培养基等体积混合并稀释150倍得到有氧发酵菌液；
S7.有氧发酵：将7重量份步骤S2制得的酶提取物、5重量份S3制得的水提取物、3.5重量份S4制得的醇提取物混合后，加入15重量份步骤S6得到的有氧发酵菌液中，恒温有氧发酵，发酵条件为37℃，氧含量为27％，发酵时间为36h，过滤，去离子水洗涤，冷冻干燥，得到第一次发酵提取物；
S8.无氧发酵菌液的制备：将8.5重量份鼠李糖乳杆菌接种到高氏培养基中，第一次无氧培养，培养条件为37℃，无氧环境，湿度为70％，培养时间为18h，分别培养成菌种种子液，含菌量为108cfu/mL，接种于步骤S5制得的另一份的液体培养基中，所述鼠李糖乳杆菌的接种量分别为5.5％，第二次无氧培养，培养条件为37℃，无氧环境，湿度为70％，培养时间为30h，将培养基等体积混合并稀释150倍得到无氧发酵菌液；
S9.无氧发酵：将100重量份步骤S7制得的第一次发酵提取物、19重量份岩藻聚糖硫酸酯、5重量份玉米低聚肽混合均匀后，加入170重量份步骤S8得到的无氧发酵菌液中，恒温无氧发酵，条件为37℃，无氧环境，发酵时间为36h，过滤，去离子水洗涤，冷冻干燥，得到第二次发酵提取物；
S10.快速解酒护肝保肝的组合物的制备：将100重量份步骤S9制得的第二次发酵提取物、2重量份人参皂苷rh2、3.5重量份黄芩苷、5重量份牛磺酸混合均匀，得到快速解酒护肝保肝的组合物。
对比例6
与实施例3相比，步骤S8中未添加鼠李糖乳杆菌，其他条件均不改变。
具体包括以下步骤：
S1.中药组合物的制备：将10重量份葛根、3.5重量份柴胡、5重量份水飞蓟、 3.5重量份北枳椇、2重量份叶下珠分别洗净，70℃干燥2h，粉碎后过400目筛，混合均匀，得到中药组合物；
S2.酶解：将10重量份步骤S1制得的中药组合物加入70重量份水中，加入 3重量份酶制剂，酶制剂包括菠萝蛋白酶、纤维素酶、果胶酶，质量比为5：4： 1.5，酶解，酶解条件为37℃，pH值为7，酶解时间为4h，110℃灭酶15min，过滤，滤渣留用，滤液70℃干燥4h，得到酶提取物；
S3.水提：将步骤S2得到的滤渣加入水中，所述滤渣和水的固液比为1： 4g/mL，加热回流4h，提取后，过滤，重复1次，合并滤液，滤渣留用，滤液70℃干燥4h，得到水提取物；
S4.醇提：将步骤S3得到的滤渣加入75wt％的乙醇水溶液中，所述滤渣和水的固液比为1：3g/mL，加热回流2h，提取后，过滤，重复1次，合并滤液，滤渣弃除，滤液70℃干燥4h，得到醇提取物；
S5.培养基的制备：将10重量份葡萄糖、5重量份蔗糖、6重量份蛋白胨、2 重量份尿素、0.1重量份维生素C、0.1重量份维生素B1、0.1重量份维生素B2、 0.2重量份氯化钙、0.2重量份硫酸镁、0.1重量份氯化铁用100重量份无菌水溶解，用PBS溶液调节培养基pH值为7，分成两份，紫外线灭菌备用；
S6.有氧发酵菌液的制备：将3.5重量份醋酸杆菌和2重量份氧化葡糖酸杆菌分别接种到高氏培养基中，第一次有氧培养，培养条件为37℃，氧含量为28％，湿度为75％，培养时间为18h，分别培养成菌种种子液，含菌量为108cfu/mL，接种于步骤S5制得的其中一份的液体培养基中，所述醋酸杆菌和氧化葡糖酸杆菌的接种量分别为3％和2％，第二次有氧培养，培养条件为37℃，氧含量为27％，湿度为75％，培养时间为30h，将培养基等体积混合并稀释150倍得到有氧发酵菌液；
S7.有氧发酵：将7重量份步骤S2制得的酶提取物、5重量份S3制得的水提取物、3.5重量份S4制得的醇提取物混合后，加入15重量份步骤S6得到的有氧发酵菌液中，恒温有氧发酵，发酵条件为37℃，氧含量为27％，发酵时间为36h，过滤，去离子水洗涤，冷冻干燥，得到第一次发酵提取物；
S8.无氧发酵菌液的制备：将8.5重量份副干酪乳杆菌接种到高氏培养基中，第一次无氧培养，培养条件为37℃，无氧环境，湿度为70％，培养时间为18h，分别培养成菌种种子液，含菌量为108cfu/mL，接种于步骤S5制得的另一份的液体培养基中，所述副干酪乳杆菌的接种量分别为5.5％，第二次无氧培养，培养条件为37℃，无氧环境，湿度为70％，培养时间为30h，将培养基等体积混合并稀释150倍得到无氧发酵菌液；
S9.无氧发酵：将100重量份步骤S7制得的第一次发酵提取物、19重量份岩藻聚糖硫酸酯、5重量份玉米低聚肽混合均匀后，加入170重量份步骤S8得到的无氧发酵菌液中，恒温无氧发酵，条件为37℃，无氧环境，发酵时间为36h，过滤，去离子水洗涤，冷冻干燥，得到第二次发酵提取物；
S10.快速解酒护肝保肝的组合物的制备：将100重量份步骤S9制得的第二次发酵提取物、2重量份人参皂苷rh2、3.5重量份黄芩苷、5重量份牛磺酸混合均匀，得到快速解酒护肝保肝的组合物。
对比例7
与实施例3相比，未进行步骤S8、S9，其他条件均不改变。
具体包括以下步骤：
S1.中药组合物的制备：将10重量份葛根、3.5重量份柴胡、5重量份水飞蓟、 3.5重量份北枳椇、2重量份叶下珠分别洗净，70℃干燥2h，粉碎后过400目筛，混合均匀，得到中药组合物；
S2.酶解：将10重量份步骤S1制得的中药组合物加入70重量份水中，加入 3重量份酶制剂，酶制剂包括菠萝蛋白酶、纤维素酶、果胶酶，质量比为5：4： 1.5，酶解，酶解条件为37℃，pH值为7，酶解时间为4h，110℃灭酶15min，过滤，滤渣留用，滤液70℃干燥4h，得到酶提取物；
S3.水提：将步骤S2得到的滤渣加入水中，所述滤渣和水的固液比为1： 4g/mL，加热回流4h，提取后，过滤，重复1次，合并滤液，滤渣留用，滤液70℃干燥4h，得到水提取物；
S4.醇提：将步骤S3得到的滤渣加入75wt％的乙醇水溶液中，所述滤渣和水的固液比为1：3g/mL，加热回流2h，提取后，过滤，重复1次，合并滤液，滤渣弃除，滤液70℃干燥4h，得到醇提取物；
S5.培养基的制备：将10重量份葡萄糖、5重量份蔗糖、6重量份蛋白胨、2 重量份尿素、0.1重量份维生素C、0.1重量份维生素B1、0.1重量份维生素B2、 0.2重量份氯化钙、0.2重量份硫酸镁、0.1重量份氯化铁用100重量份无菌水溶解，用PBS溶液调节培养基pH值为7，分成两份，紫外线灭菌备用；
S6.有氧发酵菌液的制备：将3.5重量份醋酸杆菌和2重量份氧化葡糖酸杆菌分别接种到高氏培养基中，第一次有氧培养，培养条件为37℃，氧含量为28％，湿度为75％，培养时间为18h，分别培养成菌种种子液，含菌量为108cfu/mL，接种于步骤S5制得的其中一份的液体培养基中，所述醋酸杆菌和氧化葡糖酸杆菌的接种量分别为3％和2％，第二次有氧培养，培养条件为37℃，氧含量为27％，湿度为75％，培养时间为30h，将培养基等体积混合并稀释150倍得到有氧发酵菌液；
S7.有氧发酵：将7重量份步骤S2制得的酶提取物、5重量份S3制得的水提取物、3.5重量份S4制得的醇提取物混合后，加入15重量份步骤S6得到的有氧发酵菌液中，恒温有氧发酵，发酵条件为37℃，氧含量为27％，发酵时间为36h，过滤，去离子水洗涤，冷冻干燥，得到第一次发酵提取物；
S8.快速解酒护肝保肝的组合物的制备：将100重量份步骤S7制得的第一次发酵提取物、2重量份人参皂苷rh2、3.5重量份黄芩苷、5重量份牛磺酸混合均匀，得到快速解酒护肝保肝的组合物。
对比例8
与实施例3相比，步骤S9中未添加岩藻聚糖硫酸酯，其他条件均不改变。
具体包括以下步骤：
S1.中药组合物的制备：将10重量份葛根、3.5重量份柴胡、5重量份水飞蓟、 3.5重量份北枳椇、2重量份叶下珠分别洗净，70℃干燥2h，粉碎后过400目筛，混合均匀，得到中药组合物；
S2.酶解：将10重量份步骤S1制得的中药组合物加入70重量份水中，加入3重量份酶制剂，酶制剂包括菠萝蛋白酶、纤维素酶、果胶酶，质量比为5：4： 1.5，酶解，酶解条件为37℃，pH值为7，酶解时间为4h，110℃灭酶15min，过滤，滤渣留用，滤液70℃干燥4h，得到酶提取物；
S3.水提：将步骤S2得到的滤渣加入水中，所述滤渣和水的固液比为1： 4g/mL，加热回流4h，提取后，过滤，重复1次，合并滤液，滤渣留用，滤液70℃干燥4h，得到水提取物；
S4.醇提：将步骤S3得到的滤渣加入75wt％的乙醇水溶液中，所述滤渣和水的固液比为1：3g/mL，加热回流2h，提取后，过滤，重复1次，合并滤液，滤渣弃除，滤液70℃干燥4h，得到醇提取物；
S5.培养基的制备：将10重量份葡萄糖、5重量份蔗糖、6重量份蛋白胨、2 重量份尿素、0.1重量份维生素C、0.1重量份维生素B1、0.1重量份维生素B2、 0.2重量份氯化钙、0.2重量份硫酸镁、0.1重量份氯化铁用100重量份无菌水溶解，用PBS溶液调节培养基pH值为7，分成两份，紫外线灭菌备用；
S6.有氧发酵菌液的制备：将3.5重量份醋酸杆菌和2重量份氧化葡糖酸杆菌分别接种到高氏培养基中，第一次有氧培养，培养条件为37℃，氧含量为28％，湿度为75％，培养时间为18h，分别培养成菌种种子液，含菌量为108cfu/mL，接种于步骤S5制得的其中一份的液体培养基中，所述醋酸杆菌和氧化葡糖酸杆菌的接种量分别为3％和2％，第二次有氧培养，培养条件为37℃，氧含量为27％，湿度为75％，培养时间为30h，将培养基等体积混合并稀释150倍得到有氧发酵菌液；
S7.有氧发酵：将7重量份步骤S2制得的酶提取物、5重量份S3制得的水提取物、3.5重量份S4制得的醇提取物混合后，加入15重量份步骤S6得到的有氧发酵菌液中，恒温有氧发酵，发酵条件为37℃，氧含量为27％，发酵时间为36h，过滤，去离子水洗涤，冷冻干燥，得到第一次发酵提取物；
S8.无氧发酵菌液的制备：将5重量份副干酪乳杆菌和3.5重量份鼠李糖乳杆菌分别接种到高氏培养基中，第一次无氧培养，培养条件为37℃，无氧环境，湿度为70％，培养时间为18h，分别培养成菌种种子液，含菌量为108cfu/mL，接种于步骤S5制得的另一份的液体培养基中，所述副干酪乳杆菌和鼠李糖乳杆菌的接种量分别为2％和3.5％，第二次无氧培养，培养条件为37℃，无氧环境，湿度为70％，培养时间为30h，将培养基等体积混合并稀释150倍得到无氧发酵菌液；
S9.无氧发酵：将100重量份步骤S7制得的第一次发酵提取物、24重量份玉米低聚肽混合均匀后，加入170重量份步骤S8得到的无氧发酵菌液中，恒温无氧发酵，条件为37℃，无氧环境，发酵时间为36h，过滤，去离子水洗涤，冷冻干燥，得到第二次发酵提取物；
S10.快速解酒护肝保肝的组合物的制备：将100重量份步骤S9制得的第二次发酵提取物、2重量份人参皂苷rh2、3.5重量份黄芩苷、5重量份牛磺酸混合均匀，得到快速解酒护肝保肝的组合物。
对比例9
与实施例3相比，步骤S9中未添加玉米低聚肽，其他条件均不改变。
具体包括以下步骤：
S1.中药组合物的制备：将10重量份葛根、3.5重量份柴胡、5重量份水飞蓟、 3.5重量份北枳椇、2重量份叶下珠分别洗净，70℃干燥2h，粉碎后过400目筛，混合均匀，得到中药组合物；
S2.酶解：将10重量份步骤S1制得的中药组合物加入70重量份水中，加入 3重量份酶制剂，酶制剂包括菠萝蛋白酶、纤维素酶、果胶酶，质量比为5：4： 1.5，酶解，酶解条件为37℃，pH值为7，酶解时间为4h，110℃灭酶15min，过滤，滤渣留用，滤液70℃干燥4h，得到酶提取物；
S3.水提：将步骤S2得到的滤渣加入水中，所述滤渣和水的固液比为1： 4g/mL，加热回流4h，提取后，过滤，重复1次，合并滤液，滤渣留用，滤液70℃干燥4h，得到水提取物；
S4.醇提：将步骤S3得到的滤渣加入75wt％的乙醇水溶液中，所述滤渣和水的固液比为1：3g/mL，加热回流2h，提取后，过滤，重复1次，合并滤液，滤渣弃除，滤液70℃干燥4h，得到醇提取物；
S5.培养基的制备：将10重量份葡萄糖、5重量份蔗糖、6重量份蛋白胨、2 重量份尿素、0.1重量份维生素C、0.1重量份维生素B1、0.1重量份维生素B2、 0.2重量份氯化钙、0.2重量份硫酸镁、0.1重量份氯化铁用100重量份无菌水溶解，用PBS溶液调节培养基pH值为7，分成两份，紫外线灭菌备用；
S6.有氧发酵菌液的制备：将3.5重量份醋酸杆菌和2重量份氧化葡糖酸杆菌分别接种到高氏培养基中，第一次有氧培养，培养条件为37℃，氧含量为28％，湿度为75％，培养时间为18h，分别培养成菌种种子液，含菌量为108cfu/mL，接种于步骤S5制得的其中一份的液体培养基中，所述醋酸杆菌和氧化葡糖酸杆菌的接种量分别为3％和2％，第二次有氧培养，培养条件为37℃，氧含量为27％，湿度为75％，培养时间为30h，将培养基等体积混合并稀释150倍得到有氧发酵菌液；
S7.有氧发酵：将7重量份步骤S2制得的酶提取物、5重量份S3制得的水提取物、3.5重量份S4制得的醇提取物混合后，加入15重量份步骤S6得到的有氧发酵菌液中，恒温有氧发酵，发酵条件为37℃，氧含量为27％，发酵时间为36h，过滤，去离子水洗涤，冷冻干燥，得到第一次发酵提取物；
S8.无氧发酵菌液的制备：将5重量份副干酪乳杆菌和3.5重量份鼠李糖乳杆菌分别接种到高氏培养基中，第一次无氧培养，培养条件为37℃，无氧环境，湿度为70％，培养时间为18h，分别培养成菌种种子液，含菌量为108cfu/mL，接种于步骤S5制得的另一份的液体培养基中，所述副干酪乳杆菌和鼠李糖乳杆菌的接种量分别为2％和3.5％，第二次无氧培养，培养条件为37℃，无氧环境，湿度为70％，培养时间为30h，将培养基等体积混合并稀释150倍得到无氧发酵菌液；
S9.无氧发酵：将100重量份步骤S7制得的第一次发酵提取物、24重量份岩藻聚糖硫酸酯混合均匀后，加入170重量份步骤S8得到的无氧发酵菌液中，恒温无氧发酵，条件为37℃，无氧环境，发酵时间为36h，过滤，去离子水洗涤，冷冻干燥，得到第二次发酵提取物；
S10.快速解酒护肝保肝的组合物的制备：将100重量份步骤S9制得的第二次发酵提取物、2重量份人参皂苷rh2、3.5重量份黄芩苷、5重量份牛磺酸混合均匀，得到快速解酒护肝保肝的组合物。
对比例10
与实施例3相比，步骤S10中未添加人参皂苷rh2，其他条件均不改变。
具体包括以下步骤：
S1.中药组合物的制备：将10重量份葛根、3.5重量份柴胡、5重量份水飞蓟、3.5重量份北枳椇、2重量份叶下珠分别洗净，70℃干燥2h，粉碎后过400目筛，混合均匀，得到中药组合物；
S2.酶解：将10重量份步骤S1制得的中药组合物加入70重量份水中，加入 3重量份酶制剂，酶制剂包括菠萝蛋白酶、纤维素酶、果胶酶，质量比为5：4： 1.5，酶解，酶解条件为37℃，pH值为7，酶解时间为4h，110℃灭酶15min，过滤，滤渣留用，滤液70℃干燥4h，得到酶提取物；
S3.水提：将步骤S2得到的滤渣加入水中，所述滤渣和水的固液比为1： 4g/mL，加热回流4h，提取后，过滤，重复1次，合并滤液，滤渣留用，滤液70℃干燥4h，得到水提取物；
S4.醇提：将步骤S3得到的滤渣加入75wt％的乙醇水溶液中，所述滤渣和水的固液比为1：3g/mL，加热回流2h，提取后，过滤，重复1次，合并滤液，滤渣弃除，滤液70℃干燥4h，得到醇提取物；
S5.培养基的制备：将10重量份葡萄糖、5重量份蔗糖、6重量份蛋白胨、2 重量份尿素、0.1重量份维生素C、0.1重量份维生素B1、0.1重量份维生素B2、0.2重量份氯化钙、0.2重量份硫酸镁、0.1重量份氯化铁用100重量份无菌水溶解，用PBS溶液调节培养基pH值为7，分成两份，紫外线灭菌备用；
S6.有氧发酵菌液的制备：将3.5重量份醋酸杆菌和2重量份氧化葡糖酸杆菌分别接种到高氏培养基中，第一次有氧培养，培养条件为37℃，氧含量为28％，湿度为75％，培养时间为18h，分别培养成菌种种子液，含菌量为108cfu/mL，接种于步骤S5制得的其中一份的液体培养基中，所述醋酸杆菌和氧化葡糖酸杆菌的接种量分别为3％和2％，第二次有氧培养，培养条件为37℃，氧含量为27％，湿度为75％，培养时间为30h，将培养基等体积混合并稀释150倍得到有氧发酵菌液；
S7.有氧发酵：将7重量份步骤S2制得的酶提取物、5重量份S3制得的水提取物、3.5重量份S4制得的醇提取物混合后，加入15重量份步骤S6得到的有氧发酵菌液中，恒温有氧发酵，发酵条件为37℃，氧含量为27％，发酵时间为36h，过滤，去离子水洗涤，冷冻干燥，得到第一次发酵提取物；
S8.无氧发酵菌液的制备：将5重量份副干酪乳杆菌和3.5重量份鼠李糖乳杆菌分别接种到高氏培养基中，第一次无氧培养，培养条件为37℃，无氧环境，湿度为70％，培养时间为18h，分别培养成菌种种子液，含菌量为108cfu/mL，接种于步骤S5制得的另一份的液体培养基中，所述副干酪乳杆菌和鼠李糖乳杆菌的接种量分别为2％和3.5％，第二次无氧培养，培养条件为37℃，无氧环境，湿度为70％，培养时间为30h，将培养基等体积混合并稀释150倍得到无氧发酵菌液；
S9.无氧发酵：将100重量份步骤S7制得的第一次发酵提取物、19重量份岩藻聚糖硫酸酯、5重量份玉米低聚肽混合均匀后，加入170重量份步骤S8得到的无氧发酵菌液中，恒温无氧发酵，条件为37℃，无氧环境，发酵时间为36h，过滤，去离子水洗涤，冷冻干燥，得到第二次发酵提取物；
S10.快速解酒护肝保肝的组合物的制备：将100重量份步骤S9制得的第二次发酵提取物、5.5重量份黄芩苷、5重量份牛磺酸混合均匀，得到快速解酒护肝保肝的组合物。
对比例11
与实施例3相比，步骤S10中未添加黄芩苷，其他条件均不改变。
具体包括以下步骤：
S1.中药组合物的制备：将10重量份葛根、3.5重量份柴胡、5重量份水飞蓟、 3.5重量份北枳椇、2重量份叶下珠分别洗净，70℃干燥2h，粉碎后过400目筛，混合均匀，得到中药组合物；
S2.酶解：将10重量份步骤S1制得的中药组合物加入70重量份水中，加入 3重量份酶制剂，酶制剂包括菠萝蛋白酶、纤维素酶、果胶酶，质量比为5：4： 1.5，酶解，酶解条件为37℃，pH值为7，酶解时间为4h，110℃灭酶15min，过滤，滤渣留用，滤液70℃干燥4h，得到酶提取物；
S3.水提：将步骤S2得到的滤渣加入水中，所述滤渣和水的固液比为1： 4g/mL，加热回流4h，提取后，过滤，重复1次，合并滤液，滤渣留用，滤液70℃干燥4h，得到水提取物；
S4.醇提：将步骤S3得到的滤渣加入75wt％的乙醇水溶液中，所述滤渣和水的固液比为1：3g/mL，加热回流2h，提取后，过滤，重复1次，合并滤液，滤渣弃除，滤液70℃干燥4h，得到醇提取物；
S5.培养基的制备：将10重量份葡萄糖、5重量份蔗糖、6重量份蛋白胨、2 重量份尿素、0.1重量份维生素C、0.1重量份维生素B1、0.1重量份维生素B2、 0.2重量份氯化钙、0.2重量份硫酸镁、0.1重量份氯化铁用100重量份无菌水溶解，用PBS溶液调节培养基pH值为7，分成两份，紫外线灭菌备用；
S6.有氧发酵菌液的制备：将3.5重量份醋酸杆菌和2重量份氧化葡糖酸杆菌分别接种到高氏培养基中，第一次有氧培养，培养条件为37℃，氧含量为28％，湿度为75％，培养时间为18h，分别培养成菌种种子液，含菌量为108cfu/mL，接种于步骤S5制得的其中一份的液体培养基中，所述醋酸杆菌和氧化葡糖酸杆菌的接种量分别为3％和2％，第二次有氧培养，培养条件为37℃，氧含量为27％，湿度为75％，培养时间为30h，将培养基等体积混合并稀释150倍得到有氧发酵菌液；
S7.有氧发酵：将7重量份步骤S2制得的酶提取物、5重量份S3制得的水提取物、3.5重量份S4制得的醇提取物混合后，加入15重量份步骤S6得到的有氧发酵菌液中，恒温有氧发酵，发酵条件为37℃，氧含量为27％，发酵时间为36h，过滤，去离子水洗涤，冷冻干燥，得到第一次发酵提取物；
S8.无氧发酵菌液的制备：将5重量份副干酪乳杆菌和3.5重量份鼠李糖乳杆菌分别接种到高氏培养基中，第一次无氧培养，培养条件为37℃，无氧环境，湿度为70％，培养时间为18h，分别培养成菌种种子液，含菌量为108cfu/mL，接种于步骤S5制得的另一份的液体培养基中，所述副干酪乳杆菌和鼠李糖乳杆菌的接种量分别为2％和3.5％，第二次无氧培养，培养条件为37℃，无氧环境，湿度为70％，培养时间为30h，将培养基等体积混合并稀释150倍得到无氧发酵菌液；
S9.无氧发酵：将100重量份步骤S7制得的第一次发酵提取物、19重量份岩藻聚糖硫酸酯、5重量份玉米低聚肽混合均匀后，加入170重量份步骤S8得到的无氧发酵菌液中，恒温无氧发酵，条件为37℃，无氧环境，发酵时间为36h，过滤，去离子水洗涤，冷冻干燥，得到第二次发酵提取物；
S10.快速解酒护肝保肝的组合物的制备：将100重量份步骤S9制得的第二次发酵提取物、5.5重量份人参皂苷rh2、5重量份牛磺酸混合均匀，得到快速解酒护肝保肝的组合物。
对比例12
与实施例3相比，未进行步骤S10，其他条件均不改变。
具体包括以下步骤：
S1.中药组合物的制备：将10重量份葛根、3.5重量份柴胡、5重量份水飞蓟、 3.5重量份北枳椇、2重量份叶下珠分别洗净，70℃干燥2h，粉碎后过400目筛，混合均匀，得到中药组合物；
S2.酶解：将10重量份步骤S1制得的中药组合物加入70重量份水中，加入 3重量份酶制剂，酶制剂包括菠萝蛋白酶、纤维素酶、果胶酶，质量比为5：4： 1.5，酶解，酶解条件为37℃，pH值为7，酶解时间为4h，110℃灭酶15min，过滤，滤渣留用，滤液70℃干燥4h，得到酶提取物；
S3.水提：将步骤S2得到的滤渣加入水中，所述滤渣和水的固液比为1： 4g/mL，加热回流4h，提取后，过滤，重复1次，合并滤液，滤渣留用，滤液70℃干燥4h，得到水提取物；
S4.醇提：将步骤S3得到的滤渣加入75wt％的乙醇水溶液中，所述滤渣和水的固液比为1：3g/mL，加热回流2h，提取后，过滤，重复1次，合并滤液，滤渣弃除，滤液70℃干燥4h，得到醇提取物；
S5.培养基的制备：将10重量份葡萄糖、5重量份蔗糖、6重量份蛋白胨、2 重量份尿素、0.1重量份维生素C、0.1重量份维生素B1、0.1重量份维生素B2、 0.2重量份氯化钙、0.2重量份硫酸镁、0.1重量份氯化铁用100重量份无菌水溶解，用PBS溶液调节培养基pH值为7，分成两份，紫外线灭菌备用；
S6.有氧发酵菌液的制备：将3.5重量份醋酸杆菌和2重量份氧化葡糖酸杆菌分别接种到高氏培养基中，第一次有氧培养，培养条件为37℃，氧含量为28％，湿度为75％，培养时间为18h，分别培养成菌种种子液，含菌量为108cfu/mL，接种于步骤S5制得的其中一份的液体培养基中，所述醋酸杆菌和氧化葡糖酸杆菌的接种量分别为3％和2％，第二次有氧培养，培养条件为37℃，氧含量为27％，湿度为75％，培养时间为30h，将培养基等体积混合并稀释150倍得到有氧发酵菌液；
S7.有氧发酵：将7重量份步骤S2制得的酶提取物、5重量份S3制得的水提取物、3.5重量份S4制得的醇提取物混合后，加入15重量份步骤S6得到的有氧发酵菌液中，恒温有氧发酵，发酵条件为37℃，氧含量为27％，发酵时间为36h，过滤，去离子水洗涤，冷冻干燥，得到第一次发酵提取物；
S8.无氧发酵菌液的制备：将5重量份副干酪乳杆菌和3.5重量份鼠李糖乳杆菌分别接种到高氏培养基中，第一次无氧培养，培养条件为37℃，无氧环境，湿度为70％，培养时间为18h，分别培养成菌种种子液，含菌量为108cfu/mL，接种于步骤S5制得的另一份的液体培养基中，所述副干酪乳杆菌和鼠李糖乳杆菌的接种量分别为2％和3.5％，第二次无氧培养，培养条件为37℃，无氧环境，湿度为70％，培养时间为30h，将培养基等体积混合并稀释150倍得到无氧发酵菌液；
S9.无氧发酵：将100重量份步骤S7制得的第一次发酵提取物、19重量份岩藻聚糖硫酸酯、5重量份玉米低聚肽混合均匀后，加入170重量份步骤S8得到的无氧发酵菌液中，恒温无氧发酵，条件为37℃，无氧环境，发酵时间为36h，过滤，去离子水洗涤，冷冻干燥，得到第二次发酵提取物，为得到快速解酒护肝保肝的组合物。
测试例1对四氯化碳诱导的小鼠急性肝损伤的保护作用
1、试验方法：
将200只体质量为(18±2)g的清洁级雌性昆明小鼠，随机分为20组：空白对照组、CCl4模型组、联苯双酯阳性对照组[剂量为300mg/(kg·d)]、实施例1-5组和对比例1-12组[300mg/(kg·d)]，每组10只小鼠。适应性饲养10d后，对各组小鼠进行灌胃处理，给药组分别灌胃相应药物，模型组和空白组灌胃等剂量纯水。末次灌胃2h后，给空白对照组小鼠腹腔注射植物油，给其他5组小鼠按10mL/kg 的剂量腹腔注射含0.4％CCl4的植物油溶液。小鼠禁食24h后，从眼球取血，脊椎脱臼法处死小鼠，解剖取肝脏称重。血液经5000r/min离心20min得到上清，用试剂盒测定谷草转氨酶AST、谷丙转氨酶ALT活性。肝脏取相同部位约0.3g，加入冰生理盐水进行匀浆，配制成10％肝组织匀浆液，用试剂盒测定肝脏匀浆液中的微量还原型谷胱甘肽GSH、丙二醛MDA、超氧化物歧化酶SOD值，并计算肝脏指数。
肝脏指数＝肝脏质量(mg)/体质量(g)。
2、结果：
生化指标结果见表1。肝脏指数结果见图1。
表1小鼠血清AST、ALT活性的变化(n＝10)
Figure BDA0003545814190000371
Figure BDA0003545814190000381
Figure BDA0003545814190000391
注释：*表示与空白组比较，P<0.05；△表示与CCl4模型组比较，P<0.05。
测试例2解酒防醉实验
1、试验方法：
取SPF级ICR雄性普通级小鼠190只，连续10d给小鼠饲喂基础饲料，随机分为模型组、阳性对照组[剂量为300mg/(kg·d)，由湖南炎帝生物工程有限公司提供的保健品久泰片，具有解酒醒酒，保护化学系肝损伤功能]、实施例1-5组和对比例1-12组[300mg/(kg·d)]，每组10只小鼠，禁食不禁水12h后，给药组分别灌胃相应药物，模型组和空白组灌胃等剂量纯水。30min后，除了空白组，其他各组小鼠均灌胃56°白酒(15mL/kg)，分别观察并记录每组小鼠醉酒潜伏期(灌酒-翻正反射消失的时间)和醒酒时间(翻正反射消失-翻正反射恢复的时间)。
2、结果：
结果见表2。
表2
Figure BDA0003545814190000392
Figure BDA0003545814190000401
注释：P<0.05，*表示与模型组比较，P<0.05。
实施例4、5与实施例3相比，酶制剂中未添加菠萝蛋白酶或纤维素酶，其血清ALT、AST水平比实施例3稍有提高，SOD含量下降，醒酒防醉效果下降，对比例1与实施例3相比，未进行步骤S2酶解，其血清ALT、AST水平比实施例3明显提高，GSH、SOD含量明显下降，醒酒防醉效果显著下降。纤维素酶、果胶酶酶解后，能够将中药细胞破壁从而使得其大量的有效成分溶出，菠萝蛋白酶能将中药组分中高分子蛋白质酶解成小分子短肽类物质，进一步经过水提取和醇提取后，能够得到大量的黄酮类、皂苷类、短肽类活性物质，包括葛根黄酮、葛根素、柴胡皂苷、水飞蓟宾等活性物质，具有明显的解酒醒酒，能够降低血液中乙醇的含量、加速乙醇在体内的分解，预防酒精性肝损伤，提高抗氧化酶系统水平，抑制氧化反应，降低血清ALT、AST水平，改变肝再生增强因子的功能，从而减少炎症反应起到保护肝脏的作用。
对比例2、3与实施例3相比，步骤S6中未添加醋酸杆菌或氧化葡糖酸杆菌，醒酒防醉效果下降，血清ALT、AST水平比实施例3明显提高，GSH含量下降， MDA含量升高，对比例4与实施例3相比，未进行步骤S6、S7，醒酒防醉效果明显下降，GSH含量明显下降，MDA含量明显升高。当人体大量饮酒，酒精代谢量小于摄入量时，酒精就会在体内短时间大量蓄积，使肝脏乙醇脱氢酶(ADH)、谷胱甘肽巯基转移酶(GST)，谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的含量显著降低，对肝脏产生直接损伤作用。氧化葡糖酸杆菌和醋酸杆菌含有丰富的吡咯喹啉醌-酒精脱氢酶和乙醛脱氢酶，在低酸碱度的条件下依然具有酶活性，使得酒精和组合物中的氧化葡糖酸杆菌和醋酸杆菌在胃部内就会发生大量的乙醇代谢，将乙醇氧化成有机酸，从而起到较好的分解体内的乙醇的作用，有明显的解酒效果，预防酒精性肝损伤，减轻肝脏负担，保护肝脏，降低血液和人体呼出气体中的乙醇浓度；同时，醋酸杆菌还可以促进肝脏的乙醇和乙醛的代谢，调节了脂质代谢酶环境，有效降低肝脏甘油三酯和总胆固醇含量并显著降低了转氨酶的含量，氧化葡糖酸杆菌能有效抑制了转氨酶的升高和脂质的堆积、改善肝脏纤维化，提高了超氧化物歧化酶和谷胱甘肽转移酶的含量，达到了解酒效果。
对比例5、6与实施例3相比，步骤S8中未添加副干酪乳杆菌或鼠李糖乳杆菌，对比例7与实施例3相比，未进行步骤S8、S9，其各项指标稍有下降。加入副干酪乳杆菌和鼠李糖乳杆菌进行无氧发酵后，能进一步降低活性物质的分子量，得到小分子糖类、短肽以及黄酮类、皂苷类、三萜类等活性物质，进一步降低中药物质的毒性，提高原料的药效，达到减毒增效的作用。
对比例8、9与实施例3相比，步骤S9中未添加岩藻聚糖硫酸酯或玉米低聚肽，实施例8中GSH、SOD含量和脏器指数下降，实施例9中脏器指数下降，血清ALT、AST水平明显提高，玉米低聚肽具有多种生物活性，如抗氧化、抗高血压、增强免疫力、抗疲劳、保护肝脏等作用，还具有极好的醒酒作用，岩藻聚糖硫酸酯发酵后，具有降血脂、抗肿瘤、抗凝血、抗氧化、降血糖等多种生物活性，能明显提高SOD酶活性，提高还原型谷胱甘肽含量，增强小鼠的抗氧化能力，抑制自由基引起的脂质过氧化，从而保护肝脏免受损伤，具有协同增效的作用。
对比例10、11与实施例3相比，步骤S10中未添加人参皂苷rh2或黄芩苷， GSH、SOD含量和脏器指数下降，血清ALT、AST水平提高，黄芩苷在治疗病毒性肝炎，酒精肝，化学性肝损伤，抗肝纤维化，肝衰竭，肝癌等具有较好的作用，人参皂苷rh2具有提高自身免疫功能，增强抗病能力的效果，两者加入第二次发酵提取物中后，能明显增强机体抵抗能力，提高肝脏活力，抑制炎症反应，提高抗氧化效果，起到了协同增效的作用，起到明显的保肝护肝的作用。
对比例12与实施例3相比，未进行步骤S10，GSH、SOD含量和脏器指数明显下降，血清ALT、AST水平明显提高。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种快速解酒护肝保肝的组合物的制备方法，其特征在于，将葛根、柴胡、水飞蓟、北枳椇、叶下珠经过粉碎后进行酶解、水提取、醇提取后，加入活化后的醋酸杆菌和氧化葡糖酸杆菌进行有氧发酵，将得到的第一次发酵提取物和岩藻聚糖硫酸酯、玉米低聚肽混合，加入活化后的副干酪乳杆菌和鼠李糖乳杆菌进行无氧发酵，得到第二次发酵提取物，与人参皂苷rh2、黄芩苷、牛磺酸混合均匀，得到快速解酒护肝保肝的组合物。
2.根据权利要求1所述快速解酒护肝保肝的组合物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1.中药组合物的制备：将葛根、柴胡、水飞蓟、北枳椇、叶下珠分别洗净，干燥，粉碎后过筛，混合均匀，得到中药组合物；
S2.酶解：将步骤S1制得的中药组合物加入水中，加入酶制剂，酶解，灭酶，过滤，滤渣留用，滤液干燥，得到酶提取物；
S3.水提：将步骤S2得到的滤渣加入水中，加热回流，提取后，过滤，重复1次，合并滤液，滤渣留用，滤液干燥，得到水提取物；
S4.醇提：将步骤S3得到的滤渣加入乙醇溶液中，加热回流，提取后，过滤，重复1次，合并滤液，滤渣弃除，滤液干燥，得到醇提取物；
S5.培养基的制备：将碳源、氮源、维生素和无机盐用无菌水溶解，用PBS溶液调节培养基pH值为6.8-7.2，分成两份，紫外线灭菌备用；
S6.有氧发酵菌液的制备：将醋酸杆菌和氧化葡糖酸杆菌分别接种到高氏培养基中，第一次有氧培养，分别培养成菌种种子液，接种于步骤S5制得的其中一份的液体培养基中，第二次有氧培养，将培养基等体积混合并稀释得到有氧发酵菌液；
S7.有氧发酵：将步骤S2制得的酶提取物、S3制得的水提取物、S4制得的醇提取物混合后，加入步骤S6得到的有氧发酵菌液中，恒温有氧发酵，过滤，洗涤，冷冻干燥，得到第一次发酵提取物；
S8.无氧发酵菌液的制备：将副干酪乳杆菌和鼠李糖乳杆菌分别接种到高氏培养基中，第一次无氧培养，分别培养成菌种种子液，接种于步骤S5制得的另一份的液体培养基中，第二次无氧培养，将培养基等体积混合并稀释得到无氧发酵菌液；
S9.无氧发酵：将步骤S7制得的第一次发酵提取物、岩藻聚糖硫酸酯、玉米低聚肽混合均匀后，加入步骤S8得到的无氧发酵菌液中，恒温无氧发酵，过滤，洗涤，冷冻干燥，得到第二次发酵提取物；
S10.快速解酒护肝保肝的组合物的制备：将步骤S9制得的第二次发酵提取物、人参皂苷rh2、黄芩苷、牛磺酸混合均匀，得到快速解酒护肝保肝的组合物。
3.根据权利要求2所述快速解酒护肝保肝的组合物的制备方法，其特征在于，步骤S1中所述葛根、柴胡、水飞蓟、北枳椇、叶下珠的质量比为(5-15)：(2-5)：(3-7)：(2-5)：(1-3)；所述过筛的筛网目数为200-500目。
4.根据权利要求2所述快速解酒护肝保肝的组合物的制备方法，其特征在于，步骤S2中所述酶制剂包括菠萝蛋白酶、纤维素酶、果胶酶，质量比为(3-7)：(3-5)：(1-2)；所述酶解条件为35-40℃，pH值为6-8，酶解时间为3-5h；所述灭酶条件为105-110℃灭酶10-20min；所述中药组合物、水和酶制剂的质量比为10：(50-100)：(2-4)。
5.根据权利要求2所述快速解酒护肝保肝的组合物的制备方法，其特征在于，步骤S3中所述滤渣和水的固液比为1：(3-5)g/mL；步骤S4中所述乙醇溶液为70-80wt％的乙醇水溶液；所述滤渣和水的固液比为1：(2-4)g/mL。
6.根据权利要求2所述快速解酒护肝保肝的组合物的制备方法，其特征在于，步骤S5中所述碳源选自阿拉伯糖、葡萄糖、麦芽糖、乳糖、蔗糖、果糖、淀粉中的至少一种；所述氮源选自酵母膏、蛋白胨、氨水、尿素、铵盐、硝酸盐、氨基酸中的至少一种；所述维生素选自维生素C、维生素B1、维生素B2、维生素B6、维生素A、维生素K、维生素B12、维生素D、维生素E中的至少一种；所述无机盐选自氯化钠、氯化钾、氯化钙、硫酸镁、氯化铁、硫酸锌、硫酸铜、硫酸锰、氯化锌、氯化铜、氯化锰中的至少一种；所述氨基酸选自甘氨酸、丝氨酸、苏氨酸、缬氨酸、色氨酸、亮氨酸、丙氨酸、半胱氨酸、甲氨酸、赖氨酸、异亮氨酸、苯丙氨酸中的一种或几种混合；所述碳源、氮源、维生素、无机盐和无菌水的质量比为(10-20)：(5-12)：(0.2-0.4)：(0.2-0.7)：100。
7.根据权利要求2所述快速解酒护肝保肝的组合物的制备方法，其特征在于，步骤S6中所述醋酸杆菌和氧化葡糖酸杆菌的质量比为(2-5)：(1-3)；所述第一次有氧培养条件为35-40℃，氧含量为20-35％，湿度为70-80％，培养时间为12-24h；所述第二次有氧培养条件为35-40℃，氧含量为20-35％，湿度为70-80％，培养时间为24-36h；所述菌种种子液的含菌量为107-108cfu/mL；所述醋酸杆菌和氧化葡糖酸杆菌的接种量分别为2-4％和1-3％；所述稀释倍数为100-200倍；步骤S7中所述酶提取物、水提取物、醇提取物和有氧发酵菌液的质量比为(5-10)：(3-7)：(2-5)：(10-20)；所述恒温有氧发酵条件为36-38℃，氧含量为25-30％，发酵时间为24-48h。
8.根据权利要求2所述快速解酒护肝保肝的组合物的制备方法，其特征在于，步骤S8中所述副干酪乳杆菌和鼠李糖乳杆菌的质量比为(4-7)：(2-5)；所述第一次无氧培养条件为35-40℃，无氧环境，湿度为65-75％，培养时间为12-24h；所述第二次无氧培养条件为35-40℃，无氧环境，湿度为65-75％，培养时间为24-36h；所述菌种种子液的含菌量为107-108cfu/mL；所述副干酪乳杆菌和鼠李糖乳杆菌的接种量分别为1-3％和2-5％；所述稀释倍数为100-200倍；步骤S9中所述第一次发酵提取物、岩藻聚糖硫酸酯、玉米低聚肽、无氧发酵菌液的质量比为100：(15-22)：(3-7)：(150-200)；所述恒温无氧发酵的条件为36-38℃，无氧环境，发酵时间为24-48h；步骤S10中所述第二次发酵提取物、人参皂苷rh2、黄芩苷、牛磺酸的质量比为100：(1-3)：(2-5)：(3-7)。
9.根据权利要求2所述快速解酒护肝保肝的组合物的制备方法，其特征在于，具体包括以下步骤：
S1.中药组合物的制备：将5-15重量份葛根、2-5重量份柴胡、3-7重量份水飞蓟、2-5重量份北枳椇、1-3重量份叶下珠分别洗净，干燥，粉碎后过200-500目筛，混合均匀，得到中药组合物；
S2.酶解：将10重量份步骤S1制得的中药组合物加入50-100重量份水中，加入2-4重量份酶制剂，酶制剂包括菠萝蛋白酶、纤维素酶、果胶酶，质量比为(3-7)：(3-5)：(1-2)，酶解，酶解条件为35-40℃，pH值为6-8，酶解时间为3-5h，105-110℃灭酶10-20min，过滤，滤渣留用，滤液干燥，得到酶提取物；
S3.水提：将步骤S2得到的滤渣加入水中，所述滤渣和水的固液比为1：(3-5)g/mL，加热回流，提取后，过滤，重复1次，合并滤液，滤渣留用，滤液干燥，得到水提取物；
S4.醇提：将步骤S3得到的滤渣加入70-80wt％的乙醇水溶液中，所述滤渣和水的固液比为1：(2-4)g/mL，加热回流，提取后，过滤，重复1次，合并滤液，滤渣弃除，滤液干燥，得到醇提取物；
S5.培养基的制备：将10-20重量份碳源、5-12重量份氮源、0.2-0.4重量份维生素和0.2-0.7重量份无机盐用100重量份无菌水溶解，用PBS溶液调节培养基pH值为6.8-7.2，分成两份，紫外线灭菌备用；
S6.有氧发酵菌液的制备：将2-5重量份醋酸杆菌和1-3重量份氧化葡糖酸杆菌分别接种到高氏培养基中，第一次有氧培养，培养条件为35-40℃，氧含量为20-35％，湿度为70-80％，培养时间为12-24h，分别培养成菌种种子液，含菌量为107-108cfu/mL，接种于步骤S5制得的其中一份的液体培养基中，所述醋酸杆菌和氧化葡糖酸杆菌的接种量分别为2-4％和1-3％，第二次有氧培养，培养条件为35-40℃，氧含量为20-35％，湿度为70-80％，培养时间为24-36h，将培养基等体积混合并稀释100-200倍得到有氧发酵菌液；
S7.有氧发酵：将5-10重量份步骤S2制得的酶提取物、3-7重量份S3制得的水提取物、2-5重量份S4制得的醇提取物混合后，加入10-20重量份步骤S6得到的有氧发酵菌液中，恒温有氧发酵，发酵条件为36-38℃，氧含量为25-30％，发酵时间为24-48h，过滤，洗涤，冷冻干燥，得到第一次发酵提取物；
S8.无氧发酵菌液的制备：将4-7重量份副干酪乳杆菌和2-5重量份鼠李糖乳杆菌分别接种到高氏培养基中，第一次无氧培养，培养条件为35-40℃，无氧环境，湿度为65-75％，培养时间为12-24h，分别培养成菌种种子液，含菌量为107-108cfu/mL，接种于步骤S5制得的另一份的液体培养基中，所述副干酪乳杆菌和鼠李糖乳杆菌的接种量分别为1-3％和2-5％，第二次无氧培养，培养条件为35-40℃，无氧环境，湿度为65-75％，培养时间为24-36h，将培养基等体积混合并稀释100-200倍得到无氧发酵菌液；
S9.无氧发酵：将100重量份步骤S7制得的第一次发酵提取物、15-22重量份岩藻聚糖硫酸酯、3-7重量份玉米低聚肽混合均匀后，加入150-200重量份步骤S8得到的无氧发酵菌液中，恒温无氧发酵，条件为36-38℃，无氧环境，发酵时间为24-48h，过滤，洗涤，冷冻干燥，得到第二次发酵提取物；
S10.快速解酒护肝保肝的组合物的制备：将100重量份步骤S9制得的第二次发酵提取物、1-3重量份人参皂苷rh2、2-5重量份黄芩苷、3-7重量份牛磺酸混合均匀，得到快速解酒护肝保肝的组合物。
10.一种如权利要求1-9任一项所述的制备方法制得的快速解酒护肝保肝。
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