CN114514923A - 一种尿液脱落细胞预处理液的制备方法 - Google Patents

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赵家熙
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Abstract

本发明公开了一种尿液脱落细胞预处理液的制备方法，包括如下步骤：S1，在超纯水中分别加入273.6mmol/LNaCl，5.2mmol/LKCl，16.2mmol/LNa2HPO4和3.5mmol/LKH2PO4，制备成0.02mol/L磷酸盐缓冲液，用水为2‰的DEPC水；S2，将制备好的0.02mol/L磷酸盐缓冲液与乙醇/甲醇1：1互溶；S3，加入3％的聚乙二醇1500，2％的巯基乙醇，0.1％的二硫苏糖醇，0.1％的吐温‑20；S4，再加入0.83％氯化铵，0.1％碳酸氢钾，0.04％的乙二胺四乙酸二钠。本发明使尿液细胞在检查之前可以保持更长时间，可以保持尿液中的细胞，在室温下保存3‑5天，保存的细胞可以直接进行后续细胞学检测及核酸检测等。

Description

一种尿液脱落细胞预处理液的制备方法
技术领域
本发明涉及细胞处理液技术领域，具体为一种尿液脱落细胞预处理液的制备方法。
背景技术
尿液由肾脏产生，经由输尿管到膀胱储存，然后经过尿道排除体外。由于尿液的生理特质，尿液样本在临床检测常见、并对于泌尿系统肿瘤是十分优秀的液态活检样本来源，其中尿液细胞学检查是用于发现泌尿系统恶性肿瘤的一种病理学检查方法。
由于尿脱落细胞含量较少，其中异常细胞比例更少，为保证足够脱落细胞量，通常需要晨尿样本，尿量多，细胞含量高，但由于晨尿更加浓缩，尿素等有机成分浓度高，Ph值偏低，渗透压也不利于细胞保存，因此对于尿液异常细胞等检查通常要求尿液常温不能超过2小时，4℃也仅能保存4小时，这极大限制了尿液异常细胞检查的应用。而目前对于细胞保存的产品大多只能对细胞的形态、DNA等进行维持，对于RNA保存的产品较少。
发明内容
针对以上问题，本发明提供了一种尿液脱落细胞预处理液的制备方法，使尿液细胞在检查之前可以保持更长时间，方便进行后续细胞形态学和核酸异常检查。
根据本发明的一个目的，本发明提供一种尿液脱落细胞预处理液的制备方法，包括如下步骤：
S1，在超纯水中分别加入273.6mmol/L NaCl，5.2mmol/L KCl，16.2mmol/LNa2HPO4和3.5mmol/L KH2PO4，制备成0.02mol/L磷酸盐缓冲液，用水为2‰的DEPC水；
S2，将制备好的0.02mol/L磷酸盐缓冲液与乙醇/甲醇1：1互溶；
S3，加入3％的聚乙二醇1500，2％的巯基乙醇，0.1％的二硫苏糖醇，0.1％的吐温-20；
S4，再加入0.83％氯化铵，0.1％碳酸氢钾，0.04％的乙二胺四乙酸二钠。
进一步地，所述磷酸缓冲液用于渗透压维持剂。
进一步地，所述乙醇/甲醇/EDTA-Na用于固定剂，抑制细菌。
进一步地，所述聚乙二醇1500用于保持细胞骨架完整性，防止细胞肿胀。
进一步地，所述二硫苏糖醇用于粘液溶解剂。
进一步地，所述乙二胺四乙酸用于抗聚集试剂，避免细胞堆积。
进一步地，所述氯化铵和所述碳酸氢钾用于裂解红细胞。
本发明的有益效果是：
本发明一种尿液脱落细胞预处理液的制备方法，使尿液细胞在检查之前可以保持更长时间，可以保持尿液中的细胞，在室温下保存3-5天，保存的细胞可以直接进行后续细胞学检测及核酸检测等。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例1
一种尿液脱落细胞预处理液的制备方法，包括如下步骤：
S1，在超纯水中分别加入273.6mmol/L NaCl，5.2mmol/L KCl，16.2mmol/LNa2HPO4和3.5mmol/L KH2PO4，制备成0.02mol/L磷酸盐缓冲液，用水为2‰的DEPC水；
S2，将制备好的0.02mol/L磷酸盐缓冲液与乙醇/甲醇1：1互溶；
S3，加入3％的聚乙二醇1500，2％的巯基乙醇，0.1％的二硫苏糖醇，0.1％的吐温-20；
S4，再加入0.83％氯化铵，0.1％碳酸氢钾，0.04％的乙二胺四乙酸二钠。
上述实施例中，各组分技术原理：
磷酸缓冲液：渗透压维持剂；
乙醇/甲醇/EDTA-Na：固定剂，抑制细菌；
聚乙二醇1500：保持细胞骨架完整性，防止细胞肿胀；
二硫苏糖醇：粘液溶解剂；
乙二胺四乙酸：抗聚集试剂，避免细胞堆积；
氯化铵，碳酸氢钾：裂解红细胞。
实施例2
如表1所示，采用实施例1的一种尿液脱落细胞预处理液的制备方法所制备的细胞预处理液，RNA保存效果良好。
表1细胞保存液处理后的RNA保存效果
Figure BDA0003535508110000041
本发明一种尿液脱落细胞预处理液的制备方法，使尿液细胞在检查之前可以保持更长时间，可以保持尿液中的细胞，在室温下保存3-5天，保存的细胞可以直接进行后续细胞学检测及核酸检测等。
最后应说明的是：以上各实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述各实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分或者全部技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的范围。

Claims (7)

1.一种尿液脱落细胞预处理液的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
S1，在超纯水中分别加入273.6mmol/LNaCl，5.2mmol/L KCl，16.2mmol/LNa2HPO4和3.5mmol/LKH2PO4，制备成0.02mol/L磷酸盐缓冲液，用水为2‰的DEPC水；
S2，将制备好的0.02mol/L磷酸盐缓冲液与乙醇/甲醇1：1互溶；
S3，加入3％的聚乙二醇1500，2％的巯基乙醇，0.1％的二硫苏糖醇，0.1％的吐温-20；
S4，再加入0.83％氯化铵，0.1％碳酸氢钾，0.04％的乙二胺四乙酸二钠。
2.根据权利要求1所述的尿液脱落细胞预处理液的制备方法，其特征在于，所述磷酸缓冲液用于渗透压维持剂。
3.根据权利要求1所述的尿液脱落细胞预处理液的制备方法，其特征在于，所述乙醇/甲醇/EDTA-Na用于固定剂，抑制细菌。
4.根据权利要求1所述的尿液脱落细胞预处理液的制备方法，其特征在于，所述聚乙二醇1500用于保持细胞骨架完整性，防止细胞肿胀。
5.根据权利要求1所述的尿液脱落细胞预处理液的制备方法，其特征在于，所述二硫苏糖醇用于粘液溶解剂。
6.根据权利要求1所述的尿液脱落细胞预处理液的制备方法，其特征在于，所述乙二胺四乙酸用于抗聚集试剂，避免细胞堆积。
7.根据权利要求1所述的尿液脱落细胞预处理液的制备方法，其特征在于，所述氯化铵和所述碳酸氢钾用于裂解红细胞。
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