CN114507238A - 一种从蒙自青藤中分离纯化放线瑞香宁的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明属于分离纯化技术领域，具体涉及一种从蒙自青藤中分离纯化放线瑞香宁的方法，包括以下步骤：利用极性溶剂对蒙自青藤提取后进行第一浓缩，得到第一浸膏；将所述第一浸膏分散于水中，所得混合液利用大孔吸附树脂进行吸附，然后，对吸附后的大孔吸附树脂进行洗脱，所得洗脱液进行第二浓缩，得到第二浸膏；将所述第二浸膏进行高速逆流色谱分离，得到放线瑞香宁。本方法获得放线瑞香宁分离周期短、速度快，所得产物纯度高，且操作简单，易于产业化。
Description
技术领域
本发明属于分离纯化技术领域，具体涉及一种从蒙自青藤中分离纯化放线瑞香宁的方法。
背景技术
蒙自青藤为莲叶桐科青藤属藤本植物，主要分布在我国云南和广西等地。现有研究表明蒙自青藤主要含有生物碱、酚酸、内酯、甾体等化学成分，具有镇痛、解热等功效。其中生物碱含量较高，以放线瑞香宁含量最高。
放线瑞香宁是一种阿朴菲类生物碱，分子式C18H17NO4，化学命名为10-甲氧基-1,2-(次甲二氧基)-6-去甲基-9-阿朴菲醇。现代药理学表明放线瑞香宁碱具有解痉、解热、镇痛、抑制T细胞酪氨酸磷酸酶和胆碱酯酶等作用。目前放线瑞香宁的来源主要是从植物中提取分离，且尚未有成熟的方法。因此，提取所得提取液中含有杂质较多，需要进一步分离纯化，而传统的硅胶柱色谱分离得到的放线瑞香宁纯度较低。
发明内容
有鉴于此，本发明的目的在于一种从蒙自青藤中分离纯化放线瑞香宁的方法，本发明提供的分离纯化方法所得的放线瑞香宁纯度高。
为了实现上述发明目的，本发明提供了一种从蒙自青藤中分离纯化放线瑞香宁的方法，包括以下步骤：
利用极性溶剂对蒙自青藤提取后进行第一浓缩，得到第一浸膏；
将所述第一浸膏分散于水中，所得混合液利用大孔吸附树脂进行吸附，然后，对吸附后的大孔吸附树脂进行洗脱，所得洗脱液进行第二浓缩，得到第二浸膏；所述洗脱的洗脱剂包括甲醇；
将所述第二浸膏进行高速逆流色谱分离，得到放线瑞香宁；
所述高速逆流色谱分离的溶剂体系为正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水体系；
所述溶剂体系中正己烷、乙酸乙酯、甲醇和水的体积比为7:3:6:4。
优选地，所述极性溶剂包括醇类溶剂。
优选地，所述醇类溶剂包括甲醇、乙醇和正丁醇中的一种或几种。
优选地，所述蒙自青藤的质量和极性溶剂的体积比为200g：500～1000mL。
优选地，所述大孔吸附树脂包括D101型大孔吸附树脂。
优选地，所述吸附的时间为50～70min。
优选地，所述第一浸膏的质量和水的体积比为1～2g：50～100mL。
优选地，高速逆流色谱分离时，所述溶剂体系的上相的流速为40mL/min；所述溶剂体系的下相的流速为5mL/min。
优选地，所述高速逆流色谱分离的检测波长为280nm。
优选地，所述高速逆流色谱分离后，还包括将高速逆流色谱分离所得馏出液进行浓缩。
本发明提供了一种从蒙自青藤中分离纯化放线瑞香宁的方法，包括以下步骤：利用极性溶剂对蒙自青藤提取后进行第一浓缩，得到第一浸膏；将所述第一浸膏分散于水中，所得混合液利用大孔吸附树脂进行吸附，然后，对吸附后的大孔吸附树脂进行洗脱，所得洗脱液进行第二浓缩，得到第二浸膏；所述洗脱的洗脱剂包括甲醇；将所述第二浸膏进行高速逆流色谱分离，得到放线瑞香宁；所述高速逆流色谱分离的溶剂体系为正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水体系；所述溶剂体系中正己烷、乙酸乙酯、甲醇和水的体积比为7:3:6:4。本发明采用极性有机溶剂将生物碱从蒙自青藤中分离，然后以大孔吸附树脂除去糖类脂类等杂质后，利用不同组分在溶剂体系(正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水体系)中分配系数不同运用高速逆流色谱分离得到放线瑞香宁。本发明的方法获得放线瑞香宁的周期短、速度快；所得放线瑞香宁纯度高；而且本发明提供的方法操作简单，易于产业化。
附图说明
图1为高速逆流色谱分离色谱图；
图2为放线瑞香宁的1H NMR谱；
图3为放线瑞香宁的13C NMR和DEPT谱。
具体实施方式
本发明提供了一种从蒙自青藤中分离纯化放线瑞香宁的方法，包括以下步骤：
利用极性溶剂对蒙自青藤提取后进行第一浓缩，得到第一浸膏；
将所述第一浸膏分散于水中，所得混合液利用大孔吸附树脂进行吸附，然后，对吸附后的大孔吸附树脂进行洗脱，所得洗脱液进行第二浓缩，得到第二浸膏；所述洗脱的洗脱剂包括甲醇；
将所述第二浸膏进行高速逆流色谱分离，得到放线瑞香宁；
所述高速逆流色谱分离的溶剂体系为正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水体系；
所述溶剂体系中正己烷、乙酸乙酯、甲醇和水的体积比为7:3:6:4。
在本发明中，所述放线瑞香宁的结构式为：
在本发明中，如无特殊说明，本发明所用原料均优选为市售产品。
本发明利用极性溶剂对蒙自青藤提取后进行第一浓缩，得到第一浸膏。
本发明中，所述蒙自青藤优选为蒙自青藤茎粉末；所述蒙自青藤茎粉末的粒径优选为60～200目。在本发明中，所述蒙自青藤茎粉末优选由蒙自青藤茎经粉碎得到。
本发明中，所述极性溶剂优选包括醇类溶剂，所述醇类溶剂优选包括甲醇、乙醇和正丁醇中的一种或几种，进一步优选为甲醇。本发明中，所述蒙自青藤的质量和极性溶剂的体积比优选为200g：500～1000mL，进一步优选为200g：500～800mL。
本发明中，所述提取优选包括依次进行浸泡和超声。在本发明中，所述浸泡的温度优选为20～30℃，进一步优选为25～30℃；时间优选为2～12h，进一步优选为6～12h。在本发明中，所述超声的频率优选为20～40kHz，进一步优选为30～40kHz；时间优选为20～40min，进一步优选为30～40min。本发明中，所述超声的次数优选为2～4次，进一步优选为2～3次。本发明中，优选将多次提取得到的提取液合并。本发明对所述第一浓缩的方法没有特殊要求，使用本领域技术人员熟知的浓缩方法，浓缩至浸膏即可。
得到第一浸膏后，本发明将所述第一浸膏分散于水中，所得混合液利用大孔吸附树脂进行吸附，然后，对吸附后的大孔吸附树脂进行洗脱，所得洗脱液进行第二浓缩，得到第二浸膏。
本发明中，所述第一浸膏的质量和水的体积比优选为1～2g：50～100mL，进一步优选为1g：100mL。
本发明中，所述混合液的体积和大孔吸附树脂的质量比优选为50～100mL：50～80g，进一步优选为100mL：60g。
本发明中，所述吸附的时间优选为50～70min，进一步优选为60～70min。
本发明中，所述吸附后，洗脱前，优选还包括对吸附后的大孔吸附树脂进行淋洗，淋洗的试剂为水；所述淋洗的水体积优选为3～5BV(BV为树脂的柱床体积)，进一步优选为3～4BV。所述淋洗的水流速优选为2～6BV/h，进一步优选为3～5BV/h。本发明中，淋洗能够去除水溶性杂质。
本发明中，所述洗脱的洗脱剂包括甲醇。本发明中，所述洗脱的甲醇体积优选为3～5BV，进一步优选为3～4BV。所述洗脱的流速优选为4～10BV/h，进一步优选为5～8BV/h。
得到甲醇洗脱液后，本发明优选还包括将甲醇洗脱液进行浓缩，得到第二浸膏。本发明对所述第二浓缩不作具体限定，采用本领域技术人员熟知的浓缩方法，浓缩至浸膏即可。
得到第二浸膏后，本发明将所述第二浸膏进行高速逆流色谱分离，得到放线瑞香宁。
本发明中，所述高速逆流色谱分离的溶剂体系为正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水体系；所述溶剂体系中正己烷、乙酸乙酯、甲醇和水的体积比为7:3:6:4。本发明中，在上述比例下，所述溶剂体系能够分层，分为上相和下相。本发明优选以溶剂体系中的上相为固定相，下相为流动相。
本发明中，所述第二浸膏优选以第二浸膏溶液的形式使用，本发明中，所述第二浸膏溶液的获取优选包括将第二浸膏和溶剂体系的下相混合得到。本发明中，对第二浸膏溶液的浓度不做具体限定，采用本领域熟知的浓度参数即可。
在本发明的实施例中，在进行高速逆流色谱分离时，优选先将上相通过恒流泵泵入高速逆流色谱主机的多层螺旋柱内作为固定相，调节螺旋管转速为800r/min，然后将下相泵入，待溶剂体系平衡后，将第二浸膏溶液注入主机，并进行UV检测，根据对应的色谱峰位置收集馏出液。
在本发明中，所述上相的流速优选为40mL/min；所述下相的流速优选为5mL/min。在本发明中，所述UV检测的波长优选为280nm。本发明中，产物的收集时间段优选具体优选为20～24min。
得到馏出液后，本发明优选还包括将所得馏出液进行浓缩，得到放线瑞香宁。
本发明对所述浓缩不作具体限定，采用本领域技术人员熟知的操作将溶剂蒸干即可。
下面将结合本发明中的实施例，对本发明中的技术方案进行清楚、完整地描述。显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例1
将蒙自青藤藤茎粉碎至粒径为60～200目，得到蒙自青藤粉末。
将200g蒙自青藤粉末用500mL甲醇浸泡8h，然后，超声提取3次，每次30min，将3次所得提取液合并后用旋转蒸发仪进行第一浓缩，得到第一浸膏。
将所得第一浸膏1g用100mL蒸馏水分散，所得混合液用60g D101大孔树脂吸附1h后，放出水液。然后，用300mL蒸馏水进行淋洗，然后采用300mL甲醇洗脱，得到甲醇洗脱液，将所得甲醇洗脱液用旋转蒸发仪进行第二浓缩，得到第二浸膏。
将所得第二浸膏用溶剂体系(正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水体系，正己烷、乙酸乙酯、甲醇、水体积比为7:3:6:4)中的下相溶解后进行高速逆流色谱分离纯化。
高速逆流色谱分离条件如下：以正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水(7:3:6:4)为溶剂体系。先将溶剂体系中的上相通过恒流泵以流速40mL/min泵入高速逆流色谱主机的多层螺旋柱内作为固定相，然后调节转速为800r/min，然后将下相(流动相)泵入，待溶剂体系平衡后，将第二浸膏溶液注入主机，并进行UV检测(检测波长280nm)，收集20～24min的馏出液。
将所得馏出液采用旋转蒸发仪蒸干后即得60mg分离产物。
本发明实施例1收集得到的馏出液的高速逆流色谱分离色谱图见图1，从图1可知：本发明得到的馏出液不含其他杂质，纯度可达97％。
本发明实施例1制备得到的分离产物的核磁氢谱图见图2，从图2可知，图谱信息为：δH 7.54(1H,s),6.69(1H,s),6.57(1H,s),6.11(1H,d,J＝1.2Hz),5.95(1H,d,J＝1.6Hz),4.15(1H,dd,J＝13.2,3.6Hz),3.83(3H,s),3.34(3H,s),3.63(1H,m),2.80-3.22(4H,m)。
本发明实施例1制备得到的分离产物的核磁碳谱图和DEPT谱见图3，从图3可知，核磁碳谱图的图谱信息为：δC 149.6C,148.1C,147.7C,143.6C,126.6C,125.4C,122.9C,121.4C,117.6C,116.1CH,111.8CH,107.6CH,102.6CH2,56.4CH3,54.1CH,42.5CH2,33.6CH2,26.4CH2。
综合分析核磁氢谱和碳谱，鉴定化合物为放线瑞香宁。
实施例2
将蒙自青藤藤茎粉碎至粒径为60～200目，得到蒙自青藤粉末。
将200g蒙自青藤粉末用800mL的甲醇浸泡6h，然后，超声提取3次，每次30min，将3次所得提取液合并后用旋转蒸发仪进行第一浓缩，得到第一浸膏。
将所得第一浸膏1g用100mL蒸馏水分散，所得混合液用20g D101大孔树脂吸附1h后，放出水液。然后，用300mL蒸馏水进行淋洗后，采用300mL甲醇继续洗脱，将所得甲醇洗脱液用旋转蒸发仪进行第二浓缩，得到第二浸膏。
将所得第二浸膏用溶剂体系(正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水体系，正己烷、乙酸乙酯、甲醇、水体积比为7:3:6:4)中的下相溶解后进行高速逆流色谱分离纯化。
高速逆流色谱分离条件如下：以正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水(7:3:6:4)为溶剂体系。先将溶剂体系中的上相通过恒流泵以流速40mL/min泵入高速逆流色谱主机的多层螺旋柱内作为固定相，然后调节转速为800r/min，然后将下相(流动相)泵入，待溶剂体系平衡后，将第二浸膏溶液注入主机，并进行UV检测(检测波长280nm)，收集20～24min的馏出液。
将所得馏出液采用旋转蒸发仪蒸干后即得55mg分离产物，采用薄层色谱法与实施例1中所得的分离产物进行对照，Rf值相同，鉴定为放线瑞香宁。
实施例3
将蒙自青藤藤茎粉碎至粒径为60～200目，得到蒙自青藤粉末。
将200g蒙自青藤粉末用500mL甲醇浸泡10h，然后，超声提取3次，每次30min，将3次所得提取液合并后用旋转蒸发仪浓缩，得到第一浸膏。
将所得第一浸膏1g用100mL蒸馏水分散，所得混合液用20g D101大孔树脂吸附2h后，放出水液。然后，用300mL蒸馏水进行淋洗后，采用280mL甲醇继续洗脱，得到甲醇洗脱液，将甲醇洗脱液用旋转蒸发仪进行第二浓缩，得到第二浸膏。
将所得第二浸膏用溶剂体系(正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水体系，正己烷、乙酸乙酯、甲醇、水体积比为7:3:6:4)中的下相溶解后进行高速逆流色谱分离纯化。
高速逆流色谱分离条件如下：以正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水(7:3:6:4)为溶剂体系。先将溶剂体系中的上相通过恒流泵以流速40mL/min泵入高速逆流色谱主机的多层螺旋柱内作为固定相，然后调节转速为800r/min，然后将下相(流动相)泵入，待溶剂体系平衡后，将第二浸膏溶液注入主机，并进行UV检测(检测波长280nm)，收集20～24min的馏出液。
将所得馏出液采用旋转蒸发仪蒸干后即得53mg分离产物，采用薄层色谱法与实施例1中得到的分离产物进行对照，Rf值相同，鉴定为放线瑞香宁。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
Claims (10)
1.一种从蒙自青藤中分离纯化放线瑞香宁的方法，其特征在于，包括以下步骤：
利用极性溶剂对蒙自青藤提取后进行第一浓缩，得到第一浸膏；
将所述第一浸膏分散于水中，所得混合液利用大孔吸附树脂进行吸附，然后，对吸附后的大孔吸附树脂进行洗脱，所得洗脱液进行第二浓缩，得到第二浸膏；所述洗脱的洗脱剂包括甲醇；
将所述第二浸膏进行高速逆流色谱分离，得到放线瑞香宁；
所述高速逆流色谱分离的溶剂体系为正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水体系；
所述溶剂体系中正己烷、乙酸乙酯、甲醇和水的体积比为7:3:6:4。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述极性溶剂包括醇类溶剂。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述醇类溶剂包括甲醇、乙醇和正丁醇中的一种或几种。
4.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述蒙自青藤的质量和极性溶剂的体积的比为200g：500～1000mL。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述大孔吸附树脂包括D101型大孔吸附树脂。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述吸附的时间为50～70min。
7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述第一浸膏的质量和水的体积比为1～2g：50～100mL。
8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，高速逆流色谱分离时，所述溶剂体系的上相的流速为40mL/min；所述溶剂体系的下相的流速为5mL/min。
9.根据权利要求1或8所述的方法，其特征在于，所述高速逆流色谱分离的检测波长为280nm。
10.根据权利要求1或8或9所述的方法，其特征在于，所述高速逆流色谱分离后，还包括将高速逆流色谱分离所得馏出液进行浓缩。
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| CN106939006A (zh) * | 2017-03-22 | 2017-07-11 | 东南大学 | 一种从赛北紫堇中提取分离白毛茛碱的方法 |
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| 葛一超: ""香青藤化学成分及生物活性研究"", 《中国优秀硕士学位论文全文数据库 医药卫生科技辑》 * |
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