CN114503908A - 一种通过精准计数控制游孢子放散的海带育苗方法 - Google Patents
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Abstract
本申请提供了一种通过精准计数控制游孢子放散的海带育苗方法,包括种海带培育阶段、游孢子母液制备阶段、游孢子母液分发及游孢子附着阶段以及海带幼苗培育阶段。本申请提供的通过精准计数控制游孢子放散的海带育苗方法,可显著降低种海带的使用量,减少种海带携带有害微生物以及杂藻进入育苗系统中的机会,降低生产成本和劳动强度,减少苗期病害的发生机率;将海带游孢子采集的方式由定性采集改进为定量采集,保证附着在各个育苗器上游孢子数量的一致性,降低因技术人员操作方式、显微镜配置等因素带来的误差,降低育苗的操作难度,有利于附苗密度的控制和壮苗的培育,便于育苗期间的日常管理,提高培育健康海带苗种的成功率。
Description
技术领域
本申请属于海藻培养技术领域,更具体地说,是涉及一种通过精准计数控制游孢子放散的海带育苗方法。
背景技术
海水养殖种子工程是发展海洋农业的重中之重,苗种是发展海水养殖业根基。近年来,我国的干海带总产量为160余万吨,占全国藻类总产量的60%以上,位居国内藻类产量的第一位。
我国每年海带苗种的产量约400亿株左右。所有的海带苗种均采用20世纪50年代建立的自然光夏苗培苗法培育而成,该方法经历了近70年的发展,目前已经推广至辽宁、山东、福建等区域应用。在生产实际中发现传统的自然光夏苗培苗法依然存在一些问题。例如传统的方法中游孢子的放散方式为分池放散,因而十分容易出现不同放散池中游孢子成熟程度、放散时间难以统一的问题,造成海带放散的游孢子活力不一,育苗器附着密度难以控制的难点,也容易带入大量微生物及浮游生物污染育苗器,造成苗期病害的发生;使用种海带数量较大,造成大量种海带资源的浪费,工作量大,耗费人力物力等问题。
发明内容
为实现上述目的,本申请采用的技术方案是:提供一种通过精准计数控制游孢子放散的海带育苗方法,包括:种海带培育阶段、游孢子母液制备阶段、游孢子母液分发及附着阶段以及海带幼苗培育阶段;
其中游孢子母液制备阶段包括将种海带集中统一放散得到游孢子发育状态统一、放散程度一致的游孢子母液,并对游孢子母液中的游孢子浓度进行跟踪计数,待浓度达到目标数值后说明游孢子母液制备完成;
其中游孢子母液分发及附着阶段包括将制备完成的游孢子母液按需求分发多份并将每一份稀释得到特定浓度的游孢子附着液,育苗器在游孢子附着液中完成游孢子的附着。
可选的,种海带培育阶段包括种海带的自然海区培育以及种海带的室内培育;自然海区培育以及室内培育得到的种海带均包括种海带预处理步骤和孢子囊促成熟步骤。
可选的,种海带预处理为对海带进行切梢,通过切梢阻断海带营养向非繁殖部位输送,促进孢子囊成长发育。
可选的,种海带的室内培育方法中,孢子囊促成熟步骤包括将切梢后的种海带转移到室内培育,通过控制室内培养条件来控制种海带孢子囊统一发育、成熟度一致。
可选的,孢子囊促成熟步骤的具体方法为:
种海带的自然海区培育方法为当自然海区的水温上升至15℃后,将种海带培养水层下降以促进孢子囊的成熟,减缓孢子体腐烂速度;
种海带的室内培育方法为当养殖海域水温上升至15℃后,将种海带移出养殖海域,用清洁海水冲洗多遍后,转移至室内的种海带培育车间促进孢子囊的成熟,日常清洁操作下,驯化培养30天以上直至孢子囊发育成熟。
可选的,种海带预处理的具体方法为:
当表层海水温度上升至15℃时,选择具备特定品种典型特征的海带作为种海带,切除种海带梢部及波褶,保留假根、基部及以下1-1.5m部分,将种海带转移至种海带暂养海域暂养。
可选的,游孢子母液制备的具体方法为:
选取种海带,用低温海水冲洗种海带后悬挂在阴凉通风的环境中阴干,待种海带表面水分蒸发完全后,将其完全浸没在制冷海水中刺激放散获得游孢子母液;
放散期间,每间隔一段时间对游孢子母液进行一次计数;放散结束后,去除种海带并用筛网过滤杂质,得到洁净的游孢子母液,混合均匀后,进行最终的精准计数。
可选的,游孢子母液制备的末尾阶段,对单位体积内的游孢子进行计数,配合体积换算得到母液中游孢子浓度,当浓度达到标准后可停止放散。
可选的,游孢子母液附着阶段,将游孢子母液稀释制备成附着液,将育苗器放入附着液中进行附着;附着完成后,将附着海带孢子的育苗器转移至育苗池中进行培育。
可选的,海带幼苗培育阶段包括采用自然光夏苗培苗法进行海带幼苗的培育,并统计海带胚孢子的萌发率、幼孢子体发育初期畸形率和育苗水体中微生物数量,及时调整育苗过程中的光照、水温和营养盐添加量,保证海带幼苗健康的生长发育。
海带孢子囊经阴干会失水收缩,经干燥处理的成熟孢子囊,由于孢子囊顶部的帽结构破裂,因此,倒入制冷海水后,大量游孢子即从孢子囊中放散出来,由此可通过制冷海水来刺激海带释放游孢子。
本发明的有益效果:
A、孢子放散方式的改进:将传统工艺中种海带分散的放散方式改进为集中的放散方式。该工艺的改进可显著降低种海带的使用量,减少种海带携带有害微生物以及杂藻进入育苗系统中的机会,降低生产成本和劳动强度,减少苗期病害的发生机率;
B、游孢子采集方式的改进:将海带游孢子采集的方式由定性采集转变为定量采集。该工艺的改进主要是利用科学计数法进行采苗计数以准确控制种海带数量,保证各个育苗池中游孢子数量的一致性,降低由于技术人员操作方式、显微镜配置等因素带来的误差,减小采苗的操作难度,有利于采苗密度的控制和壮苗的培育,便于育苗期间的日常管理;
C、种海带室内驯养:室内培育种海带可以使得种带孢子囊在相同条件下发育,孢子囊发育整齐统一,游孢子放散程度一致,保证了游孢子放散的可控性和成功率,不仅可以减少种海带的使用数量,还可降低不动孢子的比例,同时,使用在洁净条件培育的种海带可以减少带入育苗系统中病原微生物数量,也减少畸形等苗期病害的发生。
附图说明
为了更清楚地说明本申请实施例中的技术方案,下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍,显而易见地,下面描述中的附图仅仅是本申请的一些实施例,对于本领域普通技术人员来讲,在不付出创造性劳动性的前提下,还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1为本发明的方法流程示意图。
图2为实施例一具有代表性的光学显微镜下部分游孢子形态照片。
图3为与实施例一同时期以现有方法获得的放散游孢子形态照片。
图4为实施例二具有代表性的光学显微镜下部分游孢子形态照片。
图5为与实施例二同时期以现有方法获得的放散游孢子形态照片。
图6为实施例三具有代表性的光学显微镜下部分游孢子形态照片。
图7为与实施例三同时期以现有方法获得的放散游孢子形态照片。
具体实施方式
为了使本申请所要解决的技术问题、技术方案及有益效果更加清楚明白,以下结合附图及实施例,对本申请进行进一步详细说明。应当理解,此处所描述的具体实施例仅用以解释本申请,并不用于限定本申请。
现对本申请实施例提供的通过精准计数控制游孢子放散的海带育苗方法进行说明。
实施例一、
本实施例所述通过精准计数控制游孢子放散的海带育苗方法,包括:
种海带培育阶段:
S1、2019年,当表层海水温度上升至15℃的夏季(6月中旬)选择具有典型特征、健康的寻山1号品系种海带进行切梢,切除梢部及波褶,保留假根、基部及以下1m部分,切梢可以阻断海带营养向非繁殖部位输送,促进孢子囊成长发育。暂养至水流适中,海水营养丰富的海域暂养至测得养殖海域水温上升至18℃,此时一般为7月初。其中选择具有典型特征的海带以便于后续观察。
S2、此时将种海带移出养殖海域,将种海带拖至码头,用清洁海水冲洗后,转运至海带育苗场。再次用滤净消毒的大量海水冲洗2遍后,转移至清洁育苗池内室内驯养。每个育苗池内50棵种海带,驯养条件为水温15℃(流水),光照3000-5000lx,光照时间8-10h。日常清洁管理包括每天更换十分之一海水,保证水质干净,适当添加营养盐,既保证营养成分的充足又避免池内水滋生细菌造成污染。驯化培养40天至8月中旬。
游孢子母液制备阶段:
S3、驯化培养完成后,用低温海水冲洗种海带表面,悬挂于阴凉通风的环境如育苗池上方阴干,待种海带表面水分完全蒸发后,在1000L槽内倒入6℃左右的制冷海水1000L左右,选取50株种海带置于其中,每20min搅动一次,期间光照约为1000lx,刺激游孢子释放。如图2所示,图2为本实施例选取的具有代表性的光学显微镜下部分游孢子形态照片。同时期以现有养殖方法获得的放散游孢子形态照片如图3所示。将图2与图3对比可发现本申请放散的游孢子发育状态统一、密度高、无过多杂质和硅藻。
S4、跟踪计数:放散期间每20min左右计数一次,可使用血球计数板计数并计算浓度。浓度达到标准后结束放散,取出种海带并用筛网过滤杂质,得到洁净的游孢子母液,混合均匀后,进行最终的精准计数。本实施例中当游孢子数量达到10万个/ml,停止放散,得到高浓度的游孢子母液。
游孢子母液分发及附着阶段:
S5、将游孢子母液按照表1进行稀释制备多份低浓度的游孢子附着液。在游孢子附着液中放入育苗器使游孢子附着。附着条件为水温8℃,光照强度800lx,附着12h,对附着孢子进行计数,完成采苗。
表1实施例一采苗及出苗记录表。
海带幼苗培育阶段:
S6、将附着海带游孢子的育苗器转移至育苗池中进行培育,海带幼苗培育阶段包括采用自然光夏苗培苗法进行海带幼苗的培育,并统计海带胚孢子的萌发率、幼孢子体发育初期畸形率和育苗水体中微生物数量,及时调整育苗过程中的光照、水温和营养盐添加量,保证海带幼苗健康的生长发育。
统计结果如表2-表4所示,本次育苗种海带使用量降低50%,胚孢子的萌发率为54%,畸形率为15%,微生物数量为常规育苗的25%,幼苗20mm时期各个不同附着密度育苗器上苗种总数分别为17、79和195万株/帘,符合一级商品帘(5万株/帘)的要求,具有明显的精准节约化优势。
表2实施例一海带胚孢子萌发率
表3实施例一幼孢子体发育初期畸形率
表4实施例一育苗水体中微生物数量
实施例二、
本实施例所述通过精准计数控制游孢子放散的海带育苗方法,包括:
种海带培育阶段:
S1、2020年,当表层海水温度上升至15℃的夏季(6月中旬)选择具有典型特征、健康的寻山1号品系种海带进行切梢,切除梢部及波褶,保留假根、基部及以下1m左右部分,如1-1.5m,暂养至水流适中,海水营养丰富的海域暂养至养殖海域水温上升至18℃。其中选择具有典型特征的海带以便于后续观察。
S2、此时将种海带移出养殖海域,将种海带拖至码头,用清洁海水冲洗后,转运至海带育苗场。再次用滤净消毒的大量海水冲洗2遍后,转移至清洁育苗池内室内驯养。每个育苗池内50棵种海带,驯养条件为水温15℃(流水),光照3000-5000lx,光照周期8-10h。日常清洁管理,每天更换十分之一海水,适当添加营养盐。驯化培养40天至8月中旬。
游孢子母液制备阶段:
S3、驯化培养完成后,用低温海水冲洗种海带表面,悬挂于阴凉通风的环境如育苗池上方阴干,待种海带表面水分完全蒸发后,在1000L槽内,倒入6℃海水800L左右,选取50株种海带置于其中,每20min翻转搅拌一次,期间保持光照1500lx,刺激游孢子释放。如图4所示,图4为本实施例选取的具有代表性的光学显微镜下部分游孢子形态照片。同时期以现有养殖方法获得的放散游孢子形态照片如图5所示。将图4与图5对比可发现本申请放散的游孢子发育状态统一、形态一致、密度高、无过多杂质、无聚集在一起的情况。
S4、跟踪计数:放散期间每20min左右计数一次,使用血球计数板计数并计算浓度。浓度达到标准后结束放散,去除种海带并用筛网过滤出杂质,得到洁净的游孢子母液,混合均匀后,进行最终的精准计数。本实施例中游孢子数量达到20万个/ml,停止放散,得到高浓度的游孢子母液。
游孢子母液分发及附着阶段:
S5、将游孢子母液按照表5进行稀释制备低浓度的游孢子附着液。在游孢子附着液中放入苗绳使游孢子附着。附着条件为水温8℃,光照强度1000lx,附着12h,对苗绳伤附着孢子进行计数,完成采苗。
表5实施例二采苗及出苗记录表
海带幼苗培育阶段:
S6、将附着海带孢子的育苗器转移至育苗池中进行培育,海带幼苗培育阶段包括采用自然光夏苗培苗法进行海带幼苗的培育,并统计海带胚孢子的萌发率、幼孢子体发育初期畸形率和育苗水体中微生物数量,及时调整育苗过程中的光照、水温和营养盐添加量,保证海带幼苗健康的生长发育。
统计结果如表6-表8所示,本次育苗种海带使用量降低50%,胚孢子的萌发率为58%,畸形率为19%,微生物数量为常规育苗的25%,幼苗20mm时期各个不同附着密度育苗器上苗种总数分别为90万株/帘,符合一级商品帘(5万株/帘)的要求,具有明显的精准节约化优势。
表5实施例二海带胚孢子萌发率
表6实施例二幼孢子体发育初期畸形率
表7实施例二育苗水体中微生物数量
实施例三、
本实施例所述通过精准计数控制游孢子放散的海带育苗方法,包括:
种海带培育阶段:
S1、2021年,本实施例受气候影响,当表层海水温度上升至15℃的夏季(7月初)选择具有典型特征、健康的寻山6号品系种海带进行切梢,切除梢部及波褶,保留假根、基部及以下1m左右部分,如1-1.5m,切梢可以阻断海带营养向非繁殖部位输送,促进孢子囊成长发育。暂养至水流适中,海水营养丰富的海域,并根据温度适时调节水层深度,将种海带培养水层下降至2m以下以促进孢子囊的成熟,减缓孢子体腐烂速度。暂养40天至8月上旬。本实施例采用的是自然海区培养。其中选择具有典型特征的海带以便于后续观察。
游孢子母液制备阶段:
S2、将种海带从培养海域移除,上岸后用低温海水冲洗,悬挂于阴凉通风的环境如育苗池上方阴干,待种海带表面水分完全蒸发后。在1000L槽内倒入10℃制冷海水1000L左右,选取80株种海带置于其中,每20min搅动一次,期间光照约为1000lx,刺激游孢子释放。如图6所示,图6为本实施例选取的具有代表性的光学显微镜下部分游孢子形态照片。同时期以现有养殖方法获得的放散游孢子形态照片如图7所示。将图6与图7对比可发现本申请放散的游孢子发育状态统一、形态一致、密度高、无杂质和硅藻。
S3、跟踪计数:放散期间每20min左右计数一次,使用血球计数板计数并计算浓度。浓度达到标准后结束放散,取出种海带并用筛网过滤杂质,得到洁净的游孢子母液,混合均匀后,进行最终的精准计数。本实施例中当游孢子数量达到8万个/ml,停止放散,得到高浓度的游孢子母液。
游孢子母液分发及附着阶段:
S4、将游孢子母液按照表8进行稀释制备低浓度的游孢子附着液。在游孢子附着液中放入育苗器使游孢子附着。附着条件为水温10℃,光照强度800lx,附着10h,对育苗器上附着孢子进行计数,完成采苗。
表8实施例三采苗及出苗记录表。
S6、将附着海带孢子的育苗器转移至育苗池中进行培育,海带幼苗培育阶段包括采用自然光夏苗培苗法进行海带幼苗的培育,并统计海带胚孢子的萌发率、幼孢子体发育初期畸形率和育苗水体中微生物数量,及时调整育苗过程中的光照、水温和营养盐添加量,保证海带幼苗健康的生长发育。
统计结果如表9-表11所示,本次育苗种海带使用量降低20%,胚孢子的萌发率为52%,畸形率为16%,微生物数量为常规育苗的27%,幼苗20mm时期各个不同附着密度育苗器上苗种总数为170万株/帘,符合一级商品帘(5万株/帘)的要求,具有显著的精准节约化优势。
表9实施例三海带胚孢子萌发率
表10实施例三幼孢子体发育初期畸形率
表11实施例三育苗水体中微生物数量
以上所述仅为本申请的较佳实施例而已,并不用以限制本申请,凡在本申请的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等,均应包含在本申请的保护范围之内。
Claims (10)
1.一种通过精准计数控制游孢子放散的海带育苗方法,其特征在于:包括种海带培育阶段、游孢子母液制备阶段、游孢子母液分发及附着阶段以及海带幼苗培育阶段;
其中游孢子母液制备阶段包括将孢子体集中统一放散得到发育状态统一、放散程度一致的游孢子母液,并对游孢子母液中的游孢子浓度进行跟踪计数,待浓度达到目标数值后说明游孢子母液制备完成;
其中游孢子母液分发及附着阶段包括将制备完成的游孢子母液按需求分发多份并将每一份稀释得到特定浓度的游孢子附着液,育苗器在游孢子附着液中完成游孢子的附着。
2.如权利要求1所述的通过精准计数控制游孢子放散的海带育苗方法,其特征在于:所述种海带培育阶段包括种海带的自然海区培育以及种海带的室内培育两种方式;自然海区培育以及室内培育得到的种海带均包括种海带预处理步骤和孢子囊促成熟步骤。
3.如权利要求2所述的通过精准计数控制游孢子放散的海带育苗方法,其特征在于:所述种海带预处理为对海带进行切梢,通过切梢阻断海带营养向非繁殖部位输送,促进孢子囊成长发育。
4.如权利要求3所述的通过精准计数控制游孢子放散的海带育苗方法,其特征在于:所述种海带的室内培育方法中,孢子囊促成熟步骤包括将切梢后的种海带转移到室内培育,通过控制室内培养条件来控制种海带孢子囊统一发育、成熟度一致。
5.如权利要求3所述的通过精准计数控制游孢子放散的海带育苗方法,其特征在于:所述孢子囊促成熟步骤的具体方法为:
种海带的自然海区培育方法为当自然海区的水温上升至15℃后,将种海带培养水层下降以促进孢子囊的成熟,减缓孢子体腐烂速度;
种海带的室内培育方法为当养殖海域水温上升至15℃后,将种海带移出养殖海域,用清洁海水冲洗多遍后,转移至室内的种海带培育车间促进孢子囊的成熟,日常清洁操作下,驯化培养30天以上直至孢子囊发育成熟。
6.如权利要求3所述的通过精准计数控制游孢子放散的海带育苗方法,其特征在于:所述种海带预处理的具体方法为:
当表层海水温度上升至15℃时,选择具备特定品种典型特征的海带作为种海带,切除种海带梢部及波褶,保留假根、基部及以下1-1.5m的部分,将种海带转移至种海带暂养海域暂养。
7.如权利要求1所述的通过精准计数控制游孢子放散的海带育苗方法,其特征在于:所述游孢子母液制备的具体方法为:
选取种海带,用低温海水冲洗种海带后悬挂在阴凉通风的环境中阴干,待种海带表面水分蒸发完全后,将其完全浸没在制冷海水中刺激放散获得游孢子母液;
放散期间,每间隔一段时间对游孢子母液进行一次计数;放散结束后,取出种海带并用筛网过滤杂质,得到洁净的游孢子母液,混合均匀后,进行最终的精准计数。
8.如权利要求1所述的通过精准计数控制游孢子放散的海带育苗方法,其特征在于:所述游孢子母液制备的末尾阶段,对单位体积内的游孢子进行计数,配合体积换算得到母液中游孢子浓度,当浓度达到标准后可停止放散。
9.如权利要求1所述的通过精准计数控制游孢子放散的海带育苗方法,其特征在于:游孢子母液附着阶段,将游孢子母液稀释制备成附着液,将育苗器放入附着液中进行附着;附着完成后,将附着海带孢子的育苗器转移至育苗池中进行培育。
10.如权利要求1所述的通过精准计数控制游孢子放散的海带育苗方法,其特征在于:海带幼苗培育阶段包括采用自然光夏苗培苗法进行海带幼苗的培育,并统计海带胚孢子的萌发率、幼孢子体发育初期畸形率和育苗水体中微生物数量,及时调整育苗过程中光照、水温和营养盐添加量,保证海带幼苗健康的生长发育。
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