CN114502958A - 用于提取并测定糖链抗原的免疫色谱器件 - Google Patents

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Abstract

本发明提供一种在于免疫色谱试验片上通过亚硝酸提取来提取并测定糖链抗原的免疫色谱法中，能够通过用充分的时间进行亚硝酸提取处理来以足够的灵敏度进行测定的方法以及免疫色谱器件。一种免疫色谱器件，包括用于提取并测定标本中的糖链抗原的免疫色谱试验片和储存该试验片的容器，所述免疫色谱试验片包括：样品垫，用于添加与亚硝酸盐或者酸性溶液混合后的标本；标记体区域，包含标记抗体，该标记抗体标记有针对糖链抗原的抗体；及检测区域，固相化有针对所述糖链抗原的抗体，所述免疫色谱试验片在检测区域内形成抗体‑糖链抗原‑标记抗体的复合物，以测定糖链抗原，在所述标记体区域的上游具有含浸有中和试剂的区域，并且，在该含浸有中和试剂的区域的上游，在使用与亚硝酸盐混合的标本时具有含浸有固体酸性试剂的区域，在使用与酸性溶液混合的标本时具有含浸有亚硝酸盐的区域，试验片的样品垫的上部具有标本滴加口，在免疫色谱器件中，(i)具有宽大的标本滴加口，所述标本滴加口用于通过保持所添加的标本样品溶液，并在短时间内将标本样品溶液供给含浸有所述固体酸性试剂或亚硝酸盐的区域，来促进利用亚硝酸盐和固体酸性试剂所进行的糖链抗原的提取；(ii)滴加口和样品垫之间不存在间隙，以使得样品不从滴加口溢出。

Description

用于提取并测定糖链抗原的免疫色谱器件
技术领域
本发明涉及一种可以在免疫色谱试验片上进行糖链抗原的亚硝酸提取处理的用于提取并测定糖链抗原的免疫色谱器件。
背景技术
大部分以免疫色谱法为原理的快速诊断试剂都能够快速简便地测定病毒或细菌感染，从而被广泛用作用于确定治疗方针的一种方式。
以免疫色谱法为原理的普通快速诊断试剂在使标本悬浮于标本悬浮液之后，将该悬浮液提供给免疫色谱试验片，从而能够快速简便地进行测定。
为了检测A组β溶血性链球菌(A组β溶链菌)、口腔链球菌等属于链球菌属的微生物，需要提取并测定糖链抗原。
例如，报道了如下方法：预先使免疫色谱试验片中含有亚硝酸钠和中和试剂，将标本悬浮于醋酸等酸性溶液后供给免疫色谱试验片，仅通过该操作在免疫色谱试验片上进行亚硝酸提取处理(专利文献1)。
另外，还有预先使免疫色谱试验片中包含酸性试剂和中和试剂，将标本悬浮于亚硝酸盐后供给免疫色谱试验片的方法。
在免疫色谱法中，有时需要控制免疫色谱试验片上的色谱展开速度，报道有通过器件形状控制、通过贴合位置控制、通过所使用的原材料(无纺布等材料)控制、使用试剂控制等免疫色谱法(专利文献2及3)。
现有技术文献
专利文献
专利文献1：国际公开WO2005/121794号公报
专利文献2：日本特开2005-331471号公报
专利文献3：日本特开2005-331463号公报
发明内容
为了检测A组β溶血性链球菌(A组β溶链菌)、口腔链球菌等属于链球菌属的微生物，提取并测定糖链抗原。
提取糖链抗原需要亚硝酸。由于亚硝酸单独使用是不稳定的，因此亚硝酸提取时，需要通过在使用时将亚硝酸盐溶液和酸溶液(醋酸、柠檬酸、酒石酸等)混合以产生亚硝酸来进行抗原提取。
在通过免疫色谱法检测A组β溶血性链球菌(A组β溶链菌)等的情况下，将亚硝酸溶液或酸溶液中任意一种涂布并干燥，并组装于免疫色谱试验片即可。在这样的试剂形式下，与液体试剂相比，不需要试剂的混合操作且操作方便，但另一方面，存在试剂混合后，若如通常的免疫色谱法那样样品在短时间内展开，则不能充分进行亚硝酸提取处理，从而导致灵敏度不足的技术问题。
在混合液体试剂而进行亚硝酸提取的试剂形式中，通常提取样品1～2分钟。因此，为了显示出与液体形式同等的灵敏度，需要在免疫色谱试验片上样品被中和的上游保持1～2分钟。
与此相对，有些方法中，使用由疏水性原材料制造的包含亚硝酸或酸的垫片，以充分进行提取，但若样品的展开过慢，则存在样品不能在5分钟的反应时间内在试验片完全展开的技术问题。
为了解决这些技术问题，有些方法采用在垫片中使用与通常免疫色谱试验片相比具有一定厚度的原材料等方式，但仍存在如下技术问题：由于原材料的厚度及柔软性，导致添加标本的滴加口上产生间隙，应提取1～2分钟的样品从滴加口溢出至容器内部，并沿试验片的侧面展开，导致反应无法正常进行(酸性的样品未被中和而直接在膜片上展开，从而产生非特异反应)。
本发明的目的在于提供一种在免疫色谱试验片上通过亚硝酸提取来提取并测定糖链抗原的免疫色谱法中，通过用充分的时间进行亚硝酸提取处理而能够以足够的灵敏度进行测定的方法、及免疫色谱器件。
本发明人等针对在用于提取并测定糖链抗原的免疫色谱法中用充分的时间进行亚硝酸提取处理的技术进行了潜心研究，所述免疫色谱法可以在免疫色谱试验片上进行糖链抗原的亚硝酸提取处理。
因而发现，通过使免疫色谱器件中由支承免疫色谱试验片的突起构成的支承体部分具有倾斜来调节展开时间，能够实现上述目的，从而完成了本发明。即，本发明如下所述。
[1]一种免疫色谱器件，包括用于提取并测定标本中的糖链抗原的免疫色谱试验片和储存该试验片的容器，
所述免疫色谱试验片包括：用于添加与亚硝酸盐或者酸性溶液混合后的标本的样品垫；包含标记抗体的标记体区域，该标记抗体标记有针对糖链抗原的抗体；及固相化有针对所述糖链抗原的抗体的检测区域，所述免疫色谱试验片在检测区域内形成抗体-糖链抗原-标记抗体的复合物，以测定糖链抗原，在所述标记体区域的上游具有含浸有中和试剂的区域，并且，在该含浸有中和试剂的区域的上游，在使用与亚硝酸盐混合的标本时具有含浸有固体酸性试剂的区域，在使用与酸性溶液混合的标本时具有含浸有亚硝酸盐的区域，
所述容器包括上方的盖部分和下方的容器部分，上方的盖部分具有上部支承体，所述上部支承体包括支承免疫色谱试验片的上侧的突起，下方的容器部分具有下部支承体，所述下部支承体包括支承免疫色谱试验片的下侧的突起，
试验片的样品垫的上部具有标本滴加口，
在免疫色谱器件中，使形成支承免疫色谱试验片的上部支承体和/或下部支承体的突起部分具有倾斜。
[2]根据[1]的免疫色谱器件，其特征在于，使形成支承免疫色谱试验片的上部支承体和下部支承体的突起部分具有倾斜。
[3]根据[1]或[2]的免疫色谱器件，其特征在于，
免疫色谱试验片的下部支承体的突起部分的倾斜沿免疫色谱试验片的下游方向向下。
[4]根据[1]～[3]中的任意一项免疫色谱器件，其特征在于，
免疫色谱试验片的上部支承体的突起部分的倾斜沿免疫色谱试验片的下游方向向上。
[5]根据[1]～[4]中的任意一项免疫色谱器件，其中，
糖链抗原为原生动物、真菌、细菌、支原体、立克次氏体、衣原体或病毒的糖链抗原。
[6]一种测定标本中的糖链抗原的方法，使用[1]～[5]中的任意一项免疫色谱器件，通过免疫色谱法测定标本中的糖链抗原，所述方法包括：
在免疫色谱器件具有含浸有固体酸性试剂的区域时，使标本与亚硝酸溶液混合，在免疫色谱器件具有含浸有亚硝酸盐的区域时，使标本与酸性溶液混合，并添加于所述免疫色谱器件的样品垫，
在含浸有固体酸性试剂的区域或含浸有亚硝酸盐的区域内，通过由亚硝酸盐与固体酸性试剂的反应而产生的亚硝酸的作用从标本中提取糖链抗原，在含浸有中和试剂的区域内，包含所述糖链抗原的酸性溶液被中和，
在检测区域内，形成抗体-糖链抗原-标记抗体的复合物，促进糖链抗原的提取，通过免疫色谱法测定标本中的糖链抗原。
本说明书包括作为本申请的优先权基础的日本专利申请号2019-184047号的公开内容。
在使用本发明的免疫色谱器件的情况下，能够将标本样品溶液在添加样品后的免疫色谱试验片上的展开时间调节为适当的时间。其结果，能够充分地进行通过免疫色谱试验片上所含的标本处理试剂而在试验片上所进行的标本处理。
附图说明
图1是示意性示出具有固体酸性试剂区域及中和试剂区域的免疫色谱试验片(单垫试验片)的结构的图。
图2是示意性示出具有固体酸性试剂区域及中和试剂区域的免疫色谱试验片(双垫试验片)的结构的图。
图3是示出免疫色谱器件的储存容器的外观的立体图。
图4是免疫色谱器件的储存容器的剖视图。
图5是示出免疫色谱器件的储存容器的盖部分、免疫色谱试验片、及储存容器的容器部分的立体图。
图6是示出免疫色谱器件的储存容器的盖部分、免疫色谱试验片、及储存容器的容器部分的剖视图。
图7是免疫色谱器件的储存容器的盖部分的立体图。
图8是免疫色谱器件的储存容器的盖部分和容器部分的俯视图。
具体实施方式
下面，对本发明进行详细说明。
本发明涉及一种免疫色谱器件，该免疫色谱器件进行简化以能够在免疫色谱试验片上进行糖链抗原的亚硝酸提取处理，其可以快速并准确地测定作为被检测物质的糖链抗原。免疫色谱器件包括免疫色谱试验片和储存其的容器，能够通过将免疫色谱试验片组装于免疫色谱器件而制成。通过该储存容器，能够防止例如紫外线及空气中的湿气导致劣化。另外，在使用具有污染性、感染性的标本样品的情况下，能够通过储存容器来防止进行测定的测定者被污染或感染。例如只要将适当大小的树脂外壳用作储存容器，并将免疫色谱试验片收纳于该外壳中即可。另外，还可以用树脂膜等(顶部层压体)覆盖固定化有抗原或抗体的试验片的表面。
免疫色谱试验片具备：支承体，所述支承体具有检测区域，检测区域上固定有捕捉被检测物质(抗原等)的抗体(抗体1)；标记体区域，具有可移动的标记抗体(抗体2)；添加标本的样品垫；吸收展开后的标本液的吸收带；及用于将以上部件贴合为一体的衬背板等。
需要指出，检测区域的数量及标记体区域中所含的标记抗体的种类不限定于一个，能够使用与多个被检测物质对应的抗体在同一试验片上测定两个以上抗原。
支承体是具有固定化用于捕捉被检测物质(抗原)的抗体的性能的材料，并具有不会妨碍液体沿水平方向通行的性能。优选为具有毛细管作用的多孔薄膜(膜片)，其材料可以通过吸收来输送液体及分散于液体中的成分。组成支承体的材质不受特别限定，可列举例如：纤维素、硝基纤维素、醋酸纤维素、聚偏二氟乙烯(PVDF)、玻璃纤维、尼龙、聚酮等。其中，更优选使用硝基纤维素制成薄膜或膜片。将固定化有抗体的膜片称为抗体固定化膜片。
标记体区域由包含标记抗体的多孔基材构成，基材的材质能够使用常用的玻璃纤维(Fiberglass)、无纺布等。为了含浸大量的标记抗体，该基材优选为厚度0.3mm～0.6mm左右的垫状。也将含浸标记抗体并使其干燥后的多孔基材称为干燥垫。
标记抗体的标记多使用诸如碱性磷酸酶及辣根过氧化物酶之类的酶、诸如金胶体之类的金属胶体、二氧化硅颗粒、纤维素颗粒、着色聚苯乙烯颗粒及着色胶乳颗粒等。在使用金属胶体颗粒、着色聚苯乙烯颗粒及着色胶乳颗粒等着色颗粒的情况下，由于这些标记试剂凝聚而产生着色，因此测定该着色。将固定化有抗体的颗粒称为抗体固定化颗粒。
检测区域是指固定化有捕捉被检测物质(抗原)的抗体的支承体的部分区域。检测区域至少设置一个固定化有用于捕捉抗原的抗体的区域。检测区域只要包含于支承体即可，并且只要在支承体上固定化抗体即可。
样品垫是用于添加标本的部位，采用多孔材料。样品垫是位于免疫色谱试验片的最上游的部位。该材料能够使用常用的滤纸、玻璃纤维、无纺布等。为了将大量标本用于免疫测定，优选为厚度0.3mm～1mm左右的垫状。标本中也包括例如将标本悬浮于其它溶液而得到的样品等使用标本所制备的样品。
吸收带是用于吸收被供给至支承体但在检测区域未参加反应的成分的部件。吸收带的材料能够使用由普通的天然高分子化合物、合成高分子化合物等构成的保水性较高的滤纸、海绵等，但为了促进标本展开，优选吸水性较高的材料。
衬背板是供前述的全部材料、即支承体、样品垫、标记体区域、吸收带等部分重叠地粘贴、固定的部件。只要这些材料按照最佳的间隔配置、固定即可，衬背板并不是必须的，但从制造或使用的便利性考虑，通常优选使用衬背板。
本发明的免疫色谱试验片中还可以进一步存在对照显示区域(部件)。对照显示区域是显示已正确实施试验的部位。例如，对照显示区域存在于检测区域的下游，当标本样品通过检测区域并到达对照显示区域时，通过着色等发出信号。对照显示区域中可以预先固相化有与结合有标记载体的抗体结合的物质，也可以预先固相化有标本到达后颜色产生变化的pH指示剂等试剂。在结合有标记载体的抗体为小鼠单克隆抗体的情况下，使用抗小鼠IgG抗体即可。
免疫色谱试验片的大小不受限定，例如为纵长数cm～十数cm、横长数mm～数cm左右。
在上述方案的试验片中，标本经过由样品垫、标记体区域、支承体、检测区域、吸收带等的一系列的连接所形成的多孔流道。由此，在本方案中，以上全部为标本移动区域。根据各构成材料的材质及形式的不同，有些方案中标本也可以不浸透于材料内部而通过表面，但本说明书中所定义的标本移动区域不分材料的内部或表面，因此该方案的试验片也包括在本说明书的范围中。
在使用本发明的免疫色谱试验片测定标本中的糖链抗原的情况下，首先需要提取标本中的糖链抗原。糖链抗原的提取通过用亚硝酸处理包含糖链抗原的标本来进行。通过将亚硝酸钠等亚硝酸盐与酸混合能够产生亚硝酸，用这样所产生的亚硝酸处理包含糖链抗原的标本即可。所提取的抗原通过抗原抗体反应结合于固相化在免疫色谱试验片上的抗体，但若此时反应系统中残留酸，则反应系统变为酸性，进而抑制抗原抗体反应。因而，需要中和反应系统的酸。
在本发明中，将亚硝酸盐和酸混合以产生亚硝酸，通过该亚硝酸提取标本中的糖链抗原，并中和亚硝酸，然后，在固相化在免疫色谱试验片上的抗体上结合糖链抗原，并测定糖链抗原，在该方法中，作为提取并测定糖链抗原的方法，可列举以下的方法。在所有方法中，利用亚硝酸所进行的糖链抗原的提取、及中和都在免疫色谱试验片上进行。为了在免疫色谱试验片上利用亚硝酸提取糖链抗原，预先在免疫色谱试验片中含浸酸性试剂或亚硝酸盐即可。为了在免疫色谱试验片上进行中和，预先在免疫色谱试验片中含浸中和试剂即可。
(A)预先将标本和酸性溶液混合，并添加于含浸有亚硝酸盐和中和试剂的免疫色谱试验片的样品垫。混合液到达含有亚硝酸盐的区域时，亚硝酸盐与酸反应，产生亚硝酸，提取标本中的糖链抗原。糖链抗原的提取液在免疫色谱试验片上含浸有中和试剂的区域被中和，糖链抗原能够结合于固相化在免疫色谱试验片上的抗体并进行检测。在该方法中，作为所使用的酸性溶液，可列举：醋酸、盐酸、丙二酸、苹果酸、马来酸、柠檬酸、酒石酸等。
(B)预先将标本和亚硝酸盐溶液混合，并添加于含浸有酸性试剂和中和试剂的免疫色谱试验片的样品垫。混合液达到含有酸性试剂的区域时，亚硝酸盐和酸反应，产生亚硝酸，提取标本中的糖链抗原。糖链抗原的提取液在免疫色谱试验片上含浸有中和试剂的区域被中和，糖链抗原能够结合于固相化在免疫色谱试验片上的抗体并进行检测。
在用于进行上述(A)或(B)的方法的本发明的免疫色谱试验片中，在标记体区域的上游(标本流动的上游，存在样品垫的一侧)、即在样品垫内或样品垫与标记体区域之间含浸有酸性试剂或者硝酸盐、和中和试剂。在样品垫内或样品垫与标记体区域之间含浸有亚硝酸盐、和中和试剂的免疫色谱试验片能够用于上述(A)方法。另外，在样品垫内或样品垫与标记体区域之间含浸有酸性试剂和中和试剂的免疫色谱试验片能够用于上述(B)方法。需要指出，作为含浸于免疫色谱试验片的酸性试剂，使用固体酸性试剂。通过这些方法，可以准确且特异性地检测检验样品中的被检测物质，而不依赖于用于检验样品试验的量。
所述固体酸性试剂或亚硝酸盐可以含浸于样品垫，也可以含浸于与样品垫不同的由无纺布等多孔材料构成的垫片，并将得到的固体酸性试剂含浸多孔材料或亚硝酸盐含浸多孔材料配置于样品垫和标记体区域之间、即标记体区域的上游侧。在此，含浸有固体酸性试剂或亚硝酸盐的区域与样品垫或标记体区域可以接触或不接触。在本发明中，也将含浸有试剂的区域称为含浸有试剂的垫片。
所述中和试剂配置于含浸固体酸性试剂或亚硝酸盐的区域的下游。中和试剂可以含浸于样品垫，也可以含浸于支承体，还可以含浸于与支承体不同的由无纺布等多孔材料构成的垫片，并将得到的含浸有中和试剂的多孔材料配置于含浸固体酸性试剂或亚硝酸盐的区域与标记体区域之间。即，在标记体区域的上游具有含浸有中和试剂的区域，并且，在该含浸有中和试剂的区域的上游具有含浸有固体酸性试剂或亚硝酸盐的区域。在此，含浸有中和试剂的区域与含浸有固体酸性试剂或亚硝酸盐的区域或标记体区域可以接触或不接触。
将含浸有固体酸性试剂的区域称为固体酸性试剂区域，将含浸有亚硝酸盐的区域称为亚硝酸盐区域，将含浸有中和试剂的区域称为中和试剂区域或碱性试剂区域。
作为具有固体酸性试剂区域或者亚硝酸盐区域和中和试剂区域的免疫色谱试验片，其在支承体上，从上游起具有样品垫、固体酸性试剂区域或者亚硝酸盐区域、中和试剂区域、标记体区域、检测区域及吸收带，固体酸性试剂区域或亚硝酸盐区域也可以位于样品垫上。另外，样品垫、固体酸性试剂区域或者亚硝酸盐区域、中和试剂区域、标记体区域、检测区域及吸收带中，相邻的区域可以彼此接触或不接触。并且，固体酸性试剂区域或者亚硝酸盐区域、中和试剂区域、标记体区域无需一定含浸于单独的多孔材料，也可以将多个或全部区域含浸于相同的多孔材料。
本发明中使用的固体酸性试剂在常温下为固形状，在高温下不会挥发。
作为本发明中使用的优选的固体酸性试剂，能够列举：丙二酸、苹果酸、马来酸、柠檬酸、酒石酸。
另外，作为本发明中使用的优选的固体酸性试剂，若使用例如柠檬酸之类的价数较多的酸，则能够通过更小的量进行提取。另外，如果价数相同，则例如马来酸，酒石酸等酸解离常数更小的酸的效率更好。
另外，作为本发明中使用的优选的固体酸性试剂，优选在免疫色谱试验片上不会被着色的试剂、具体优选干燥状态下为白色或不易因干燥热或氧化而产生着色的试剂。
作为本发明中使用的亚硝酸盐，可列举：亚硝酸钠、亚硝酸钾等。
本发明中使用的固体酸性试剂或亚硝酸盐的使用量、即含浸于免疫色谱试验片的量不受特别限定，通常为每片免疫色谱试验片0.01μg～1mg左右，优选为0.1μg～0.1mg左右。最优选根据所使用的固体酸性试剂或亚硝酸盐的种类、标本悬浮液的组成及添加量等选择可以实现效果的最佳的量。
一次溶解固体酸性试剂或亚硝酸盐并涂布干燥，以使固体酸性试剂或亚硝酸盐含浸于样品垫或多孔材料。
本发明中使用的中和试剂在常温下为固形状，在高温下不会挥发。
作为本发明中使用的优选的中和试剂，能够列举：Tris碱(三羟甲基氨基甲烷)、氢氧化钠、磷酸氢二钾、柠檬酸三钠、在碱性区域具有缓冲能力的Good’s缓冲液。
本发明中使用的中和试剂的使用量、即含浸于免疫色谱试验片的量不受特别限定，通常为每片免疫色谱试验片0.01μg～1mg左右，优选为0.1μg～0.1mg左右。最优选根据所使用的中和试剂的种类、标本悬浮液的组成及添加量等选择可以实现效果的最佳的量。
为了将中和试剂含浸于样品垫或多孔材料，一次溶解中和试剂，将溶液涂布于样品垫或多孔材料，然后使其干燥即可。
图1及图2是示出典型的免疫色谱试验片的一种优选形式的图。虽然图1及图2所示的免疫色谱试验片为含浸有固体酸性试剂及中和试剂的免疫色谱试验片，但也可以含浸硝酸盐来代替固体酸性试剂，在该情况下，形成含浸有硝酸盐及中和试剂的免疫色谱试验片。本领域技术人员能够适当设计并制造含浸有硝酸盐及中和试剂的免疫色谱试验片。需要指出，免疫色谱试验片不限定于图1及图2所示的试验片。图1及图2中，1表示支承体，2表示标记体区域，3表示检测区域，4表示样品垫，7表示吸收带，8表示衬背板。另外，可以将顶部层压体粘贴在试验片整体的上方。
图1A及图2A为为顶视图，图1B及图2B为切割剖视图。在图1的例子中，在由树脂等构成的衬背板8上分别层叠形成有一个检测区域3的支承体1、吸收带7、标记体区域2、样品垫4等。并且，如图1所示，吸收带7的一端部和支承体1的一端部、支承体1的另一端部和标记体区域2的一端部、标记体区域2的另一端部和样品垫4的一端部分别重合，在样品垫4的上游部含浸固体酸性试剂，稍微隔开一定间隔后，在样品垫的下游部含浸中和试剂。将含浸有固体酸性试剂的区域称为固体酸性试剂区域5，将含浸有中和试剂的区域称为中和试剂区域6。在该试验片中，样品垫4兼作固体酸性试剂区域5及中和试剂区域6。即，样品垫上存在固体酸性试剂区域及中和试剂区域。在该试验片中，由于固体酸性试剂区域及中和试剂区域设为一片多孔材料(垫片)的形式，因此有时称为单垫试验片。在图2的例子中，标记体区域2的上游存在固体酸性试剂区域5和/或中和试剂区域6，这些区域重合，由此形成连续的横向流动流道。在图2所示的试验片中，固体酸性试剂区域5兼作样品垫。即，样品垫上存在固体酸性试剂区域。在该试验片中，固体酸性试剂区域及中和试剂区域设为单独的两张多孔材料(垫片)的形式，有时称为双垫试验片。固体酸性试剂区域的上游可以进一步存在样品垫。另外，虽然在图2所示的试验片中，固体酸性试剂区域5及中和试剂区域6含浸于不同的多孔材料，但也可以如图1的试验片的样品垫那样在相同的多孔材料(垫片)上的上游部设置固体酸性试剂区域5，并在下游部设置中和试剂区域6。
上述免疫色谱试验片收纳于储存容器，并被用作免疫色谱器件。即，将储存容器中组装有免疫色谱试验片的状态称为免疫色谱器件。通常上述储存容器包括下方的容器部分和上方的盖部分。在此，下方的容器部分中收纳免疫色谱试验片，在进行免疫色谱试验的情况下，下方的容器部分的上方被上方的盖部分覆盖。有时将下方的容器部分及上方的盖部分分别简称为储存容器的下部分及上部分。将上述免疫色谱试验片收纳于储存容器之后，能够向样品垫供应标本样品溶液的标本滴加口位于样品垫的上部，向容器的标本滴加口添加标本之后，标本浸入样品垫。在此，有时也将滴加口称为添加口。另外，在将免疫色谱试验片收纳于储存容器之后，判定部位于检测区域上方，能够通过容器的判定部的开孔来观察检测区域。
在上方的盖部分覆盖于下方的容器部分之后，收容于下方的容器部分的免疫色谱试验片被设于储存容器的上方的盖部分和下方的容器部分的突起夹持而被支承为不能活动。因此，将设于储存容器的上方的盖部分和下方的容器部分的突起分别称为包括突起的上部支承体及下部支承体。
上方的盖部分的上部支承体以在滴加口滴加标本的一侧的背面侧形成开口部的边缘的方式设置，并且，上方的盖部分的上部支承体由具有倾斜的突起形成。上方的盖部分的上部支承体支承免疫色谱试验片的样品垫的上侧。上部支承体具有倾斜，在上方的盖部分的上部支承体从上方按压免疫色谱试验片的样品垫的上侧的情况下，该倾斜使突起的高度朝向免疫色谱试验片的下游部变小，即该倾斜沿免疫色谱试验片的下游方向向上。在上方的盖部分覆盖于下方的容器部分之后，使得从上方按压免疫色谱试验片的样品垫的上侧而将其固定不能活动，并且，使其与样品垫密合，从而标本溶液不漏出至样品垫以外的部位。并且，在上方的盖部分的上部支承体挤压样品垫的情况下，按压从上游向下游逐渐变弱。有时将该支承体称为由倾斜的突起构成的支承体。
另一方面，现有的免疫色谱器件的储存容器的上方的盖部分的上部支承体不具有倾斜，而具有平坦的形状。
下方的容器部分的下部支承体由具有倾斜的突起形成，该突起设于下方的容器部分中与标本滴加口对应的部分。在此，下方的容器部分中与标本滴加口对应的部分是指，将上方的盖部分覆盖于下方的容器部分之后与标本滴加口的开口部重叠的部分。在下方的容器部分上覆盖上方的盖部分之后，下方的容器部分的下部支承体支承免疫色谱试验片的样品垫的下侧。下方的容器部分的下部支承体从下方按压免疫色谱试验片的样品垫的下侧以将其固定不能活动。下部支承体作为具有倾斜的突起被设于与标本滴加口对应的部分。下部支承体具有倾斜，在按压免疫色谱试验片的样品垫的情况下，该倾斜使突起的高度朝着免疫色谱试验片的下游部变小，即该倾斜沿免疫色谱试验片的下游方向向下，挤压样品垫的按压从上游向着下游逐渐变弱。有时将该支承体称为由倾斜的突起构成的支承体。
另一方面，现有的免疫色谱器件的储存容器的下方的容器的下部支承体不具有倾斜，而具有平坦的形状。
能够将具有包括突起的支承体的盖部分称为上部支承体具有倾斜的盖部分，其中，该突起按压并支承免疫色谱试验片的上侧，该试验片具有沿免疫色谱试验片的下游方向向上的倾斜；将具有由突起构成的支承体的容器部分称为下部支承体具有倾斜的容器部分，其中，突起按压并支承免疫色谱试验片的下侧，该试验片具有沿免疫色谱试验片的下游方向向下的倾斜；将不具有由倾斜的突起构成的支承体的盖部分称为现有的盖部分；将不具有由倾斜的突起构成的支承体的容器部分称为现有的容器部分。在该情况下，本发明的免疫色谱器件的储存容器的上方的盖部分和下方的容器部分的组合具有以下的A～C的组合。
A：上部支承体具有倾斜的盖部分、及现有的容器部分
B：上部支承体具有倾斜的盖部分、及下部支承体具有倾斜的容器部分
C：现有的盖部分、及下部支承体具有倾斜的容器部分
在本发明的免疫色谱器件中，由倾斜的突起构成的支承体可以如上述B那样存在于免疫色谱器件的储存容器的上方的盖部分和下方的容器部分两者，也可以如上述A及C那样仅存在于一侧。优选如上述B那样存在于两者。
如此一来，上方的盖部分和/或下方的容器部分的、与免疫色谱试验片的样品垫接触的支承体部分上存在倾斜部，该倾斜部包括高度朝向免疫色谱试验片的下游侧逐渐变低的突起，因此，在上部支承体和下部支承体夹持并挤压免疫色谱试验片的样品垫的情况下，上部支承体及下部支承体与免疫色谱试验片密合，并且，下游部的按压小于上游部的按压。因此，滴加的液体标本不会从免疫色谱试验片漏出，另外，免疫色谱试验片的样品垫的下游侧的液体的流道不会被支承体强烈挤压，因此液体标本不易流动。另外，样品垫的上游部存在于比下游部更高的位置，液体标本容易通过重力流动。标本容易流动后，能够将标本的展开开始时间调节为适当的速度，因此能够在所设置的判定时间内发挥最高灵敏度的性能。
本发明的免疫色谱器件在免疫色谱试验片的储存容器中具有支承体，该支承体包括具备上述倾斜的突起，因此，在可以于免疫色谱试验片上进行糖链抗原的亚硝酸提取处理的、用于提取并测定糖链抗原的免疫色谱法中，能够将样品的展开调节为适当的速度。此外，本发明的免疫色谱器件还可以具有与调节以下的标本样品的展开速度的结构相关的结构特征。
(1)本发明的免疫色谱器件可以较宽地设置滴加口。
例如，储存有纵长5～9cm、优选7cm、横长0.3～0.7cm、优选为0.5cm的免疫色谱试验片的现有的免疫色谱器件(Quick Navi(商标)-Strep A，电化生研)的滴加口被设为具有约3.5mm×约5.5mm(19.25mm2)尺寸的大致矩形的滴加口，而储存相同尺寸的免疫色谱试验片的本发明的免疫色谱器件的滴加口被设置为具有约3.5mm×约11mm(38.5mm2)的尺寸的大致矩形的滴加口。免疫色谱器件及储存于其中的免疫色谱试验片的大小为大致类似的尺寸，因此，横长3cm、纵长9cm的免疫色谱器件中具有大致矩形的3～5mm×8～15mm(24～75mm2)的滴加口的免疫色谱器件是滴加口较宽的免疫色谱器件，能够起到本发明的免疫色谱器件的效果。滴加口的长边为与色谱试验片的长边平行的一边，即沿着标本样品溶液的流动方向的一边。有时将滴加口的长边的长度称为滴加口长，将短边的长度称为滴加口宽。上述例子是大致矩形的滴加口的情况，滴加口的形状可以为三角形，也可以为圆形。在用面积表示本发明的免疫色谱器件的滴加口的大小的情况下，面积为24～75mm2，优选为35～75mm2。
例如，本发明的免疫色谱器件储存有纵长5～9cm、横长0.3～0.7cm的免疫色谱试验片，具有尺寸为3～5mm(滴加口宽)×8～15mm(滴加口长)(24～75mm2)的大致矩形的滴加口。滴加口长优选为10mm以上，进一步优选为10mm。滴加口长小于8mm(例如5mm)的器件为现有的滴加口的宽度小的器件。
在现有的免疫色谱法中，用免疫色谱试验片上设置的标本处理试剂进行标本处理时，样品溶液与含浸有标本处理试剂的区域接触的面积较少，因此标本处理能力弱，并且由于一边逐渐展开免疫色谱试验片一边进行标本处理，因此最初展开的样品溶液与之后展开的样品溶液中会产生标本处理试剂的浓度差。因此，不能可靠地进行标本处理。
由于将本发明的免疫色谱器件的滴加口设置得宽，因此能够一次将大量的标本样品溶液在短时间内供给至含浸有免疫色谱上的标本处理试剂的区域、即含浸有固体酸性试剂的区域或含浸有亚硝酸的区域。其结果，能够促进在免疫色谱试验片上提取糖链抗原。一次能够供应的标本样品溶液为10μL～200μL。
其结果，不会因时间差产生标本处理试剂的浓度差，因此，能够促进并可靠高效地进行免疫色谱上的标本处理。
(2)本发明的免疫色谱器件可以配置为在滴加口和位于其下方的样品垫之间不具有间隙，以使得样品不从滴加口溢出。
本发明的免疫色谱器件将滴加口设置地较宽，一次供应大量的标本样品溶液。另外，作为滴加口的外轮廓的边缘部分具有一定的高度(1～5mm)，所供应的标本材料溶液暂时储存于滴加口内。
其结果，由于标本样品溶液全部被免疫色谱试验片吸收需要一定时间，因此，样品溶液可能不会被免疫色谱试验片吸收，而是溢出免疫色谱试验片外。
在本发明的免疫色谱用器件能够构成为，用外轮廓尺寸等于或大于滴加口的外轮廓尺寸的衬背板支承样品垫，以使得样品不从滴加口溢出支承样品垫的衬背板，由此，通过衬背板来将样品垫向滴加口挤压的力发挥作用，从而使滴加口与样品垫之间没有间隙，由此能够防止样品溶液泄漏。
另外，在样品垫的厚度存在差异的情况下，样品垫的厚度较薄处容易与滴加口产生间隙，进而容易产生样品溶液泄露。
在本发明中，样品垫较薄处设计器件的容器的基座较高，较厚处设计基座较低，由此，即使在垫片的厚度存在差异的情况下，也能够使滴加口和垫片之间没有间隙，由此能够防止样品溶液泄露。
其结果，能够在免疫色谱试验片上高效地提取糖链抗原。
(3)另外，可以选择疏水性高的原材料作为用于制造免疫色谱试验片的垫片的原材料(无纺布)，该垫片含浸固体酸性试剂、亚硝酸盐及中和试剂等标本处理试剂，由此，可以将液体的流动速度调低，即将标本样品溶液在免疫色谱试验片上展开的时间调慢。
在该情况下，疏水性高的原材料可列举例如：聚乙烯、聚酯、聚苯乙烯、聚丙烯、人造丝、尼龙等。
作为含浸中和试剂的区域中使用的多孔材料的原材料，可列举克重10～400g/m2且厚度0.1～2.0mm的织物，该织物为多孔材料，其每1cm/m2的吸水量为10～100μl/cm2，且吸水速度为1.0～5.0μl/sec，并且，使1cm/m2的碎片在湿润状态下与膜片接触并静置5分钟后的保水量为10～100μl/cm2，优选使1cm/m2的碎片在湿润状态下与膜片接触并静置5分钟后液体的扩散面积为20mm2以下，即该多孔材料具有吸水力高、保水性(液体的保持力)高、并且液体的释放性低或持续释放这三种特性。具体而言，可列举：由纤维素的棉纤维制得的滤纸及由玻璃纤维制得的玻璃滤纸等。作为这样的滤纸，可列举例如东洋滤纸株式会社的No.26-3。另外，所使用的滤纸的容积大，能够充分保持从上游晚于标本到达的酸性溶液。通过使用这样的多孔材料，能够含浸所需量的中和试剂，所需量的中和试剂可以充分中和被亚硝酸盐与酸性试剂反应所产生的亚硝酸提取糖链抗原后的标本。另外，该垫片能够吸收并保持大量的液体，释放性可持续，因此，即使残留于免疫色谱试验片的上游的包含亚硝酸的液体在判定时间以后展开时，也具有充分的中和能力，从而能够抑制酸性溶液到达固相化有抗体的检测区域，进而抑制非特异反应，从而能够检测糖链抗原而不产生非特异反应。另一方面，作为吸水力高、保水性高、且释放性低的玻璃滤纸，具体而言，可列举东洋滤纸株式会社的GS-25，由于其吸水力高，因此能够含浸更多中和试剂，由于保水性高，放水性低，因此防止酸性溶液达到固相化后的检测区域。其结果，阴性时能够抑制非特异反应，阳性时能够防止判定时间以后线条显色。
含浸中和试剂的区域使用的多孔材料的原材料的“克重”为10～400g/m2。在此，“克重”是指布等的每单位面积(1m2)的重量。克重可以根据含浸于该垫片的中和试剂的量及组成而适当变化。若克重为30g/m2以下，则孔隙率高，含浸中和试剂后容易撕裂，制造免疫色谱时难以操作，因此优选克重为50g/m2以上，在克重为300g/m2以上的情况下，孔隙率低，虽然根据中和试剂的组成而有所不同，但标本不会顺利浸透于原材料，从而不能与中和试剂混合，因此优选为300g/m2以下。最优选克重为250～270g/m2。
另外，含浸中和试剂的区域使用的多孔材料的原材料的“厚度”可以为0.1～2.0mm，厚度能够根据含浸于该垫片的中和试剂的量及组成适当变化。在厚度为0.4mm以下的情况下，含浸中和试剂后容易撕裂，制造免疫色谱时难以操作，因此优选的厚度为0.4～0.8mm，考虑到容易调节所含浸中和试剂的量，且制造免疫色谱时容易处置，更优选为0.6mm左右。
作为“吸水性”，优选每1cm/m2的吸水量为10～100μl/cm2，且吸水速度为1.0～5.0μl/sec。关于吸水量和吸水速度，在96孔的EIA板的一个凹槽中准备200μl有色溶液(1％Tween20+红色102号)，向其中放入试验片，试验片是5×60mm大小的原材料粘贴于衬背板而成的，将浸渍于溶液的一侧作为试验片的下端，测定溶液到达试验片的上端所需的时间，并在溶液到达上端之后立刻取出试验片，测定凹槽中残留的液量。吸水量是从200μl中减去凹槽残留的液量，并除以原材料每1cm2面积而得到的液量，吸水速度通过吸水量/到达上端所需的时间而求得。作为含浸中和试剂的区域使用的多孔材料的原材料，优选吸水量多、且吸水速度慢的原材料。虽然根据固体酸性试剂的浓度和含水量而有所不同，但在吸水量为30μl/cm2以下的情况下，有时免疫色谱试验片不能含浸所需的全部中和试剂，因此，具体而言，优选吸水量为30μl/cm2以上。含浸中和试剂的区域使用的多孔材料的原材料的吸水速度会影响提取标本中的糖链抗原的时间及提取后的试验液被中和的时间。提取糖链抗原的时间虽然一定程度上可以通过固体酸性试剂的原材料或者组成进行调节，但并不是完全调节，因此含浸中和试剂的区域所使用的原材料的吸水速度对于充分提取糖链抗原及中和是非常重要的因素。具体而言，吸水速度优选1.0～5.0μl/sec，更优选的吸水速度为2.0μl/sec以下。
“保水性”是通过将含浸中和试剂的区域使用的多孔材料的原材料的1cm/m2碎片置于膜片上，向其中添加70μl溶液(1％Tween20+红色102号)，静置5分钟，并测定静置前后的重量而得到的。保水性的液量根据所添加的溶液的组成(表面活性剂及蛋白量)而变化，优选用1％Tween20溶液试验时保水量为10～100μl/cm2，更优选的保水量为15μl/cm2以上。
“释放性”通过将含浸中和试剂的区域使用的多孔材料的原材料的1cm/m2碎片置于膜片上，向其中添加70μl溶液(1％Tween20+红色102号)，求得静置5分钟后膜片上所扩散的液体的面积来测定。面积根据所添加的溶液的组成(表面活性剂及蛋白量)而变化，优选用1％Tween20溶液试验时面积为30mm2以下，更优选的释放性为20mm2以下。
例如，含浸中和试剂的区域使用的多孔材料的原材料克重为50～300g/m2或者250～270g/m2，厚度为0.4～0.8mm，每1cm/m2的吸水量为30～100μl/cm2，吸水速度为1.0～2.0μl/sec，使1cm/m2的碎片在湿润状态下与检测区域接触并静置5分钟后的保水量为15～100μl/cm2，使1cm/m2的碎片在湿润状态下与膜片接触并静置5分钟后的液体的扩散面积为20mm2以下。具有该特性的原材料如下的能力较高，因此，与其它原材料相比，具有抑制非特异反应的效果：“通过含浸有中和试剂的区域的高吸水性及高保水性充分中和包含所述糖链抗原的酸性溶液，通过含浸有中和试剂的区域的低释放性或释放性的持续来抑制酸性溶液到达检测区域、或者使充分中和后的试验液继续持续展开至检测区域”。
下面，对本发明的器件的使用方法进行叙述。以下的使用方法是指将标本与亚硝酸溶液混合，并使用含浸有固体酸性试剂和中和试剂的免疫色谱试验法进行测定的方法，但将标本与酸性溶液混合，并使用含浸有亚硝酸盐和中和试剂的免疫色谱试验法进行测定的方法也可以参考以下的使用方法的说明来进行。
使标本或使用标本制备的样品与亚硝酸盐溶液接触混合，将标本悬浮于亚硝酸盐溶液，并添加供给至器件的标本滴加口，由此开始测定。此时，将5～100μL标本和0.01～2mL0.1M～8M的亚硝酸盐混合，并将5～200μL供给滴加口即可。作为亚硝酸盐，可列举：亚硝酸钠、亚硝酸钾等。
供给滴加口的被检测物质即包含糖链抗原的标本移动至样品垫，通过毛管作用向样品垫4上的固体酸性试剂区域5及中和试剂区域6展开，并沿水平方向向标记体区域2、支承体1、吸收带7依次展开。在固体酸性试剂区域5内，混合在标本中的亚硝酸盐与固体酸性试剂区域5上的固体酸性试剂进行反应，产生游离的亚硝酸，通过该亚硝酸的作用从标本中提取糖链抗原。提取后的糖链抗原与酸性的展开溶液一同向中和试剂区域6展开移动，包含糖链抗原的酸性展开溶液的pH在中和试剂区域6被中和而调节至中性范围。其结果，糖链抗原在中性条件下进一步向下游展开移动。在标记体区域2内，标本样品展开的同时，标记抗体被释放至液体中，并向支承体1展开。在标本样品中存在糖链抗原的情况下，在支承体1的检测区域3，通过捕捉抗体特异性捕捉糖链抗原，并且，糖链抗原也与标记抗体进行特异性反应，从而形成复合物。由此，在检测区域3，构建夹着糖链抗原的抗体的夹心，从而能够在检测区域3测定标记抗体-糖链抗原复合物。能够通过免疫色谱器件的判定部来观察检测区域。
根据使用本发明的免疫色谱试验片的方法，由于标本中的糖链抗原的提取在免疫色谱试验片上进行，因此，无需在使用免疫色谱试验片进行测定前预先提取标本中的糖链抗原，从而能够一步测定标本中的糖链抗原。
根据本发明，在组装有包含干燥后的固体酸性试剂或亚硝酸盐的垫片的免疫色谱试验片中，能够在试剂上高效地进行提取。
也可以使标本滴加口的面积与包含固体酸性试剂的垫片(固体酸性试剂区域)基本相同。如此一来，更多的样品能够瞬间与固体酸性试剂接触。并且，通过使用疏水性高的无纺布作为用于涂布及含浸的部件，能够防止样品添加后立刻向下游的含浸有中和试剂的垫片(中和试剂区域)展开。如此一来，样品在标本添加部被保持1～2分钟，从而能够充分进行抗原提取。
另外，在本发明中，在固体酸性试剂区域或者亚硝酸盐区域和中和试剂区域彼此重叠而接触的情况下，在固体酸性试剂区域或者亚硝酸盐区域和中和试剂区域之间夹设液体不能通过的片材。通过设置片材，能够起到以下的三个效果。
(A)保存试验片时，能够抑制试剂在相邻的两个区域中移动。其结果，能够防止固体酸性试剂或者亚硝酸盐与中和试剂接触而导致反应。其结果，能够提高试剂的稳定性。
(B)另外能够防止，在添加了与亚硝酸盐或酸性试剂混合后的标本时，标本达到固体酸性试剂区域或亚硝酸盐区域，并随后立即移动至中和试剂区域而导致糖链抗原的提取不充分。即，降低包含标本的液体从固体酸性试剂区域或亚硝酸盐区域向中和试剂区域移动的速度，延长包含标本的液体在固体酸性试剂区域或亚硝酸盐区域停留的时间，其结果，充分提取糖链抗原，并提高测定灵敏度。
(C)并且还能够防止，在添加了与亚硝酸盐或酸性试剂混合后的标本时，标本到达固体酸性试剂区域或亚硝酸盐区域，并随后立即移动至中和试剂区域，移动后的包含标本的液体向固体酸性试剂区域或亚硝酸盐区域逆流，降低固体酸性试剂或亚硝酸盐的活性，降低提取效率。即，防止到达中和试剂区域的包含标本的液体向固体酸性试剂区域或亚硝酸盐区域逆流，进而防止降低固体酸性试剂或亚硝酸盐的活性，使利用亚硝酸所进行的糖链抗原的提取处理高效进行，提高测定灵敏度。
固体酸性试剂区域或者亚硝酸盐区域和中和试剂区域之间所设置的片材的原材料只要为液体不能通过的原材料，则没有限定，能够使用例如PET(聚对苯二甲酸乙二醇酯)片材、聚乙烯片材等树脂片材。树脂片材也称为树脂膜。
片材可以以使固体酸性试剂区域或者亚硝酸盐区域和中和试剂区域部分接触并重叠的方式设置。在该情况下，固体酸性试剂区域或者亚硝酸盐区域和中和试剂区域的重叠部分的长度优选尽可能短，例如5mm以下，优选为3mm以下，进一步优选为2mm以下。
另外，片材也可以以使固体酸性试剂区域或者亚硝酸盐区域和中和试剂区域不接触的方式设置，并制成使含浸有酸性试剂或者亚硝酸盐的垫片覆盖在PET片材上的形状。在该情况下，中和区域被片材完全覆盖，在该片材上设置固体酸性试剂区域或亚硝酸区域即可。在该情况下，固体酸性试剂区域或亚硝酸区域内的液体不会直接移动至中和区域，而是流过片材上之后到达中和试剂区域。
片材可以仅设于例如固体酸性试剂区域或者亚硝酸盐区域和中和试剂区域之间。另一方面，在以覆盖免疫色谱试验片的上侧的方式粘贴树脂片材作为顶部层压体片材时，可以以覆盖除固体酸性试剂区域或亚硝酸区域以外(在固体酸性试剂区域或亚硝酸区域兼作样品垫的情况下除样品垫以外)的中和试剂区域、标记体区域、支承体、检测区域、吸收带的方式粘贴顶部层压体片材，并将固体酸性试剂区域或者亚硝酸盐区域粘贴于中和试剂部分的上部所粘贴的顶部层压体片材的上部。
在本发明的方法中，作为标本的生物样品不受特别限定，可列举：血清、血浆、血液、尿液、粪便、唾液、组织液、脑脊液、拭子液等体液等或其稀释物。
在使用本发明的免疫色谱器件的方法中，待测定的被检测物质为可以通过免疫测定法、即利用抗原抗体反应的测定法测定的糖链抗原。作为抗原，可列举：作为通过亚硝酸提取处理提取的细菌的细胞壁上存在的糖链抗原的多糖体等。也可以测定包含这些物质的原生动物、真菌、细菌、支原体、立克次氏体、衣原体、病毒等。通过使用本发明的免疫色谱试验片的方法，能够确认受试者的生物体样品中是否包含来自原生动物、真菌、细菌、支原体、立克次氏体、衣原体、病毒等的糖链抗原，在包含有糖链抗原的情况下，能够判断受试者患有原生动物、真菌、细菌、支原体、立克次氏体、衣原体、病毒等导致的感染。例如，能够检测有无A组β溶血性链球菌(Streptococcus pyogenes)、大肠杆菌、军团杆菌、弯曲杆菌等的感染。
实施例
通过下面的实施例对本发明进行具体说明，但本发明不受这些实施例限定。
在下面的实施例中，只要没有特别限定，则％表示w/v％。
实施例1：探讨滴加口的大小
1.抗Streptococcus pyogenes(A组β溶血性链球菌)抗体向硝基纤维素膜片(支承体)固定化
准备用纯水将抗Streptococcus pyogenes抗体稀释至1.0mg/mL而得到的液体及抗兔IgG抗体，在由PET(聚对苯二甲酸乙二醇酯)薄膜支承的硝基纤维素膜片的样品垫侧线形涂布抗Streptococcus pyogenes抗体，在吸收带侧线形涂布抗兔IgG抗体。然后，将硝基纤维素膜片在45℃下干燥30分钟，得到抗Streptococcus pyogenes抗体固定化膜片。在本实施例中，将该膜片称为“抗体固定化膜片”。
2.抗Streptococcus pyogenes抗体向着色聚苯乙烯颗粒固定化
用纯水将抗Streptococcus pyogenes抗体稀释至1.0mg/mL，向其中加入着色聚苯乙烯颗粒至0.1％，搅拌后，加入碳二亚胺至1％，在进行搅拌。通过离心操作除去上清，重悬于50mM Tris(pH9.0)、3％BSA，得到结合0.04％抗Streptococcus pyogenes抗体的着色聚苯乙烯颗粒悬浮液。在本实施例中，将该颗粒称为“抗体固定化颗粒”。
3.抗Streptococcus pyogenes抗体结合着色聚苯乙烯颗粒的涂布及干燥
将规定量2中所制作的抗体固定化颗粒悬浮液涂布于无纺布，并在45℃下干燥30分钟。在本实施例中，将得到的无纺布称为“干燥垫”。
4.中和试剂(碱性试剂)垫片的制作
将作为中和试剂(碱性试剂)的3M Trizma(商标名)Base(Tris碱)、1.5％TritonX100涂布于30μL/cm滤纸(东洋滤纸；No.26-3)。
5.固体酸性试剂垫片的制作
将作为固体酸性试剂的1.0M酒石酸、0.5％TritonX100按照13μL/cm涂布于无纺布(Unitika；ELEVES(注册商标))。涂布后立刻在45℃下干燥1小时，得到固体酸性试剂含浸无纺布。
6.Streptococcus pyogenes检测用免疫色谱试验片的制作
将1中制作的抗体固定化膜片、3中制作的干燥垫、4中制作的中和试剂(碱性试剂)垫片、5中制作的固体酸性试剂垫片与其它部件(衬背板、吸收带)贴合并切割为5mm宽，从而制得Streptococcus pyogenes试验片。在本实施例中，将使用固体酸性试剂及中和试剂(碱性试剂)含浸滤纸作为样品垫的试验片称为“本发明免疫色谱试验片”。需要指出，免疫色谱试验片沿着标本的流动轨迹从上游起具备固体酸性试剂含浸无纺布、中和试剂(碱性试剂)含浸无纺布、干燥垫(标记体区域)、抗体固定化膜片(检测区域)、吸收带。
7.免疫色谱器件
将本发明的免疫色谱试验片组装于滴加口长(长边的长度)5mm的储存容器((1)滴加口小)，制作1的免疫色谱器件，并组装于滴加口长(长边的长度)10mm的储存容器((2)滴加口大)，制作(2)的免疫色谱器件。(1)及(2)的免疫色谱器件的储存容器为现有所使用的储存容器，下方的容器部分和上方的盖部分上均不具有下方的免疫色谱器件的储存容器所具有的包括具有倾斜形状的突起的支承体。将现有所使用的储存容器的下方的容器部分称为现有的容器部分，将现有所使用的储存容器的上方的盖部分称为现有的盖部分。
另外，按照下面的方式将储存容器的下方的容器部分及储存容器的上方的盖部分、与上述现有的容器部分及现有的盖部分组合，其中，储存容器的下方的容器部分是具有包括按压并支承免疫色谱试验片的下侧的突起的支承体的容器部分(也称为下部支承体具有倾斜的容器部分)，所述突起具有沿免疫色谱试验片的下游方向向下的倾斜；储存容器的上方的盖部分是具有包括按压并支承免疫色谱试验片的上侧的突起的支承体的盖部分(上部支承体具有倾斜的盖部分)，突起具有沿免疫色谱试验片的下游方向向上的倾斜，从而制作组装有免疫色谱试验片的免疫色谱器件(3)～(5)，并实施以下的试验。免疫色谱器件(3)～(5)的上方的盖部分的滴加口长为10mm。
(3)上部支承体具有倾斜的盖部分、及现有的容器部分
(4)上部支承体具有倾斜的盖部分、及下部支承体具有倾斜的容器部分
(5)现有的盖部分、及下部支承体具有倾斜的容器部分
8.标本
培养Streptococcus pyogenes，并用生理食盐水将培养液调节为菌数1.0×107CFU/mL。
另外，使用生理盐水作为阴性标本。
9.测定
将20μL标本悬浮于亚硝酸钠溶液(2.0M NaNO3、1％Tween20)180μL，将其中的75μL添加于本发明的免疫色谱器件的滴加口。另外，作为现有的方法，向亚硝酸钠和盐酸混合而成的亚硝酸提取液中悬浮标本之后，将通过Tri溶液中和后的50μL标本悬浮液添加于现有方法的免疫色谱器件(没有固定化酸性试剂及中和试剂)的滴加口。10分后通过评分码评价固定化有抗Streptococcus pyogenes抗体的规定位置上有无堆积着色聚苯乙烯颗粒及堆积的程度，将信号程度强者依次作为+++、++、+，将难以判定的情况作为±，未发现信号的情况作为-。
10.结果
器件的条件
(1) 滴加口小
(2) 滴加口大，
(3) 滴加口大，上部支承体倾斜
(4) 滴加口大，上部支承体倾斜且下部支承体倾斜
(5) 滴加口大，下部支承体倾斜
阳性标本
展开时间 (1) (2) (3) (4) (5)
1min - - - - -
2min - ± + ± +
3min - + + + +
4min - + + + +
5min ± + + + +
6min ± + + + +
7min + + + ++ +
8min + + + ++ +
9min + + ++ ++ +
10min + + ++ +++ ++
展开开始时间(秒) 155 47 46 50 48
与滴加口较小的(1)的免疫色谱器件相比，滴加口较大的(2)、(3)、(4)及(5)的免疫色谱器件的展开开始时间变早，因此能够更快速判定阳性。
另外，与不具备包括具有倾斜的突起的支承体的(1)及(2)的免疫色谱器件相比，上方的盖部分和/或下方的容器部分具备包括具有倾斜的突起的支承体的(3)、(4)及(5)的免疫色谱器件在10分钟后显著获得信号。特别是上方的盖部分和下方的容器部分具备包括具有倾斜的突起的支承体的(4)的免疫色谱器件，相比仅在上方的盖部分或下方的容器部分的一者具备包括具有倾斜的突起的支承体的(3)及(5)的免疫色谱器件，其在10分钟后显著获得信号。
符号说明
1 支承体(包括检测区域)
2 标记体区域
3 检测区域
4 样品垫
5 固体酸性试剂区域
6 中和试剂区域
7 吸收带
8 衬背板
9 免疫色谱试验片
10 储存容器
11 储存容器的盖部分
12 储存容器的容器部分
13 器件的滴加口
14 器件的判定部
15 储存容器的盖部分的突起部分
16 储存容器的容器部分的倾斜部
工业适用性
使用本发明的免疫色谱器件能够高灵敏度地检测A组β溶血性链球菌感染。
本说明书中引用的所有出版物、专利及专利申请均直接通过引用并入本说明书。

Claims (6)

1.一种免疫色谱器件，其特征在于，
包括用于提取并测定标本中的糖链抗原的免疫色谱试验片和储存该试验片的容器，
所述免疫色谱试验片包括：
样品垫，用于添加与亚硝酸盐或者酸性溶液混合后的标本；
标记体区域，包含标记抗体，该标记抗体标记有针对糖链抗原的抗体；及
检测区域，固相化有针对所述糖链抗原的抗体，
所述免疫色谱试验片在检测区域内形成抗体-糖链抗原-标记抗体的复合物，以测定糖链抗原，在所述标记体区域的上游具有含浸有中和试剂的区域，并且，在该含浸有中和试剂的区域的上游，在使用与亚硝酸盐混合的标本时具有含浸有固体酸性试剂的区域，在使用与酸性溶液混合的标本时具有含浸有亚硝酸盐的区域，
所述容器包括上方的盖部分和下方的容器部分，上方的盖部分具有上部支承体，该上部支承体包括支承免疫色谱试验片的上侧的突起，下方的容器部分具有下部支承体，该下部支承体包括支承免疫色谱试验片的下侧的突起，
试验片的样品垫的上部具有标本滴加口，
所述免疫色谱器件中，使形成支承免疫色谱试验片的上部支承体和/或下部支承体的突起部分具有倾斜。
2.根据权利要求1所述的免疫色谱器件，其特征在于，
使形成支承免疫色谱试验片的上部支承体和下部支承体的突起部分具有倾斜。
3.根据权利要求1或2所述的免疫色谱器件，其特征在于，
免疫色谱试验片的下部支承体的突起部分的倾斜沿免疫色谱试验片的下游方向向下。
4.根据权利要求1～3中任一项所述的免疫色谱器件，其特征在于，
免疫色谱试验片的上部支承体的突起部分的倾斜沿免疫色谱试验片的下游方向向上。
5.根据权利要求1～4中任一项所述的免疫色谱器件，其中，
糖链抗原为原生动物、真菌、细菌、支原体、立克次氏体、衣原体或病毒的糖链抗原。
6.一种测定标本中的糖链抗原的方法，使用权利要求1～5中任一项所述的免疫色谱器件，通过免疫色谱法测定标本中的糖链抗原，所述方法包括：
在免疫色谱器件具有含浸有固体酸性试剂的区域时，使标本与亚硝酸溶液混合，在免疫色谱器件具有含浸有亚硝酸盐的区域时，使标本与酸性溶液混合，并添加于所述免疫色谱器件的样品垫，
在含浸有固体酸性试剂的区域或含浸有亚硝酸盐的区域内，通过由亚硝酸盐与固体酸性试剂的反应而产生的亚硝酸的作用从标本中提取糖链抗原，在含浸有中和试剂的区域内，包含所述糖链抗原的酸性溶液被中和，
在检测区域内，形成抗体-糖链抗原-标记抗体的复合物，促进糖链抗原的提取，通过免疫色谱法测定标本中的糖链抗原。
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