CN114480202A - 一种石油污染土壤生物修复菌剂、制备装置以及方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种石油污染土壤生物修复菌剂、制备装置以及方法，生耐碱微生物菌液、复合肥和生物表面活性的重量份配比为60：10：10或者60：20：10或者70：10：10或者100：10：10；本发明在传统葡萄糖培养基培养的基础上，通过恒温箱体向培养皿中逐步加入不同浓度的无机盐原油培养基、碱性原油培养基溶液和酸性原油培养基溶液，培养该细菌菌群对酸碱、盐分和石油的耐受力，从而增强该细菌菌群的分解效果，还添加有辅助微生物菌液进行混合培养，从而在对土壤中原油去除的基础上，还可进一步去除土壤中的重金属离子，提高和改善土壤的微生态环境质量和对环境不造成二次污染，可以显著地提高盐碱土壤中石油烃的降解效率。
Description
技术领域
本发明涉及生物修复菌剂，特别涉及一种石油污染土壤生物修复菌剂、制备装置以及方法，属于石油污染土壤技术领域。
背景技术
在石油生产、贮运、炼制加工及使用过程中，由于事故，不正常操作及检修等原因，都会有石油烃类的溢出和排放，例如，油田开发过程中的井喷事故；输油管线和贮油罐的泄漏事故；油槽车和油轮的泄漏事故；油井清蜡和油田地面设备检修，炼油和石油化工生产装置检修等，石油烃类大量溢出，应当尽可能予以回收，但有的情况下回收很困难，即使尽力回收，仍会残留一部分，对环境(土壤、地面和地下水)造成污染。
土壤的石油污染既有生产过程的污染物直接排放，也有污染物的间接迁移。石油类物质进入土壤，可引起土壤理化性质的变化，如堵塞土壤孔隙，改变土壤有机质的组成和结构，引起土壤有机质的碳氮比(C/N)和碳磷比(C/P)的变化；引起土壤微生物群落、微生物区系的变化，土壤的石油污染直接导致粮食的减产，食用生长于石油污染土地上的植物及其产品会对人类的健康产生影响，石油类在作物体及果实部分主要残留毒害成分是多环芳烃类，芳香烃类物质对人及动物的毒性极大，尤其是双环和三环为代表的多环芳烃毒性更大，多环芳烃类物质可通过呼吸、皮肤接触、饮食摄入等方式进入人和动物体内,影响其肝、肾等器官的正常功能，甚至引起癌变，石油类物质还通过地下水的污染以及污染的转移构成对人类生存环境多个层面上的不良胁迫。
现有治理石油污染主要以生物降解为主，在进行石油降解的时候，需要进行培养基的制备，现有制备培养基的通过单一的葡萄糖培养基进行培养，其抗盐、抗酸碱能力较差，导致细菌菌落分解效果较差，同时不能对土壤中的中金属离子进行吸附。
发明内容
本发明的目的在于提供一种石油污染土壤生物修复菌剂、制备装置以及方法，以解决上述背景技术中提出的问题。
为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种石油污染土壤生物修复菌剂，所述生物修复菌剂由含有提取细菌菌群的耐碱微生物菌液、辅助微生物菌液、复合肥和生物表面活性组成，且所述耐碱微生物菌液、复合肥和生物表面活性的重量份配比为60：10：10或者60：20：10或者70：10：10或者100：10：10。
作为本发明的一种优选技术方案，所述耐碱微生物菌液包括芽孢杆菌属、黄杆菌属、无色杆菌属、假单胞菌属、不动杆菌属、产碱杆菌属、微球菌属、分支杆菌属和奈瑟氏球菌属，所述辅助微生物菌液包括平菇真菌、白囊耙齿菌和盐单胞菌属、绿脓杆菌AT18和还原菌硫弧菌组成。
作为本发明的一种优选技术方案，所述复合肥的重量份含量组成为：速效氮10-15份、五氧化二磷5-15份、黄腐酸钾10-14份、甲壳素1-5份、氨基酸5-10份、和钙镁硫12-19份。
作为本发明的一种优选技术方案，所述生物表面活性为鼠李糖脂、槐糖脂、海藻糖脂和磷脂酰基乙醇胺泡囊其中的一种或者其中的几种混合形成。
一种石油污染土壤生物修复菌剂制备装置，用于制取上述权利要求-所述的生物修复菌剂，包括恒温箱体、活动臂、安装臂、外转盘、内转盘和加液管，所述恒温箱体的两侧均活动安装有活动臂，所述活动臂的顶端均活动连接有安装臂，所述安装臂的一端固定连接有固定座，所述固定座的内部开设有固定槽，所述固定槽的内部固定安装有连接臂，所述连接臂的一端固定连接有外转盘，所述外转盘的内部活动安装有内转盘，所述内转盘的内部固定安装有多组加液管。
作为本发明的一种优选技术方案，所述恒温箱体的两侧均固定连接有支撑座，所述支撑座的顶端开设有限位槽，所述限位槽的内部固定设置有磁力搅拌器。
作为本发明的一种优选技术方案，所述固定座的顶端螺纹连接有固定螺杆，且所述固定螺杆的顶端固定连接有固定旋钮，所述恒温箱体的内部固定安装有加热棒和温控探头。
一种石油污染土壤生物修复菌剂制备方法，通过上述权利要求5-7所述的制备装置进行制备，所述制备方法的具体制备步骤如下：
第一步骤：细菌菌群样品溶解
向锥形瓶中加入100mL无菌水，将5-9g有石油污染的自然盐碱土壤样品加入到盛有100mL无菌水的锥形瓶中，并置于振荡培养箱中室温振荡0.5～2h，保持振荡频率为100-180rpm；
第二步骤：葡萄糖培养基培养
将溶解在锥形瓶中的样品溶液取出5-10ml，放入培养皿中，然后在培养皿中接种50mL-60ml的葡萄糖培养基，将培养皿置于恒温制备装置中，在150-200rpm、25-30℃条件下，连续培养3天；
第三步骤：细菌菌群耐酸碱性培养和提取
继续在上述条件下对细菌菌群进行培养，向培养皿中逐步加入无机盐原油培养基、碱性原油培养基溶液和酸性原油培养基溶液，并连续培养5-7天，即可以将细菌菌群样品中的细菌菌群提取出来，该细菌菌群对酸碱、盐分和石油具有显著的耐受力；
第四步骤：细菌菌群的富集培养
将上述微生物菌液重新接种在新制备的原油培养基中，并加入辅助微生物菌液进行混合培养，连续富集5-6个周期，富集培养条件为温度30℃、120-150rpm/min恒温水浴摇床，使微生物总量达到1013-1014cfu/mL并稳定，从而便于制备微生物菌剂；
第五步骤：微生物菌剂制备
将上述提取的含有细菌菌群的微生物菌液与复合肥和生物表面活性剂按照重量份配比为60：10：10或者60：20：10或者70：10：10或者100：10：10进行混合，从而获得微生物菌液；
第六步骤：微生物菌剂保存和使用
微生物菌剂采用冷冻保存，即将制备好的微生物菌液存放在-25℃冰箱中保存，保存时间不超过100天，使用时快速放入20-25℃恒温水浴摇床中急剧解冻，然后放入新制备的无机盐石油培养基中培养。
与现有技术相比，本发明的有益效果是：
本发明一种石油污染土壤生物修复菌剂、制备装置以及方法，在传统葡萄糖培养基培养的基础上，通过恒温箱体向培养皿中逐步加入不同浓度的无机盐原油培养基、碱性原油培养基溶液和酸性原油培养基溶液，培养该细菌菌群对酸碱、盐分和石油的耐受力，从而增强该细菌菌群的分解效果，且在传统添加表面活性剂的基础上，还添加有辅助微生物菌液进行混合培养，从而在对土壤中原油去除的基础上，还可进一步去除土壤中的重金属离子，以及增强土壤的耐酸碱性，该微生物菌剂制备简单具有微生物丰富、优势菌明显并有较好的稳定性、制备工艺简单，采用本微生物菌剂处理石油污染物盐碱土壤的处理成本低、有利于石油专性降解菌适应新的污染环境、提高和改善土壤的微生态环境质量和对环境不造成二次污染，可以显著地提高盐碱土壤中石油烃的降解效率。
附图说明
图1为本发明的结构示意图；
图2为本发明的恒温箱体的内部结构示意图。
图中：1、恒温箱体；2、活动臂；3、安装臂；4、固定座；5、固定旋钮；6、外转盘；7、内转盘；8、加液管；9、连接臂；10、限位槽；11、加热棒；12、温控探头；13、支撑座。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
请参阅图1-2，本发明提供了一种石油污染土壤生物修复菌剂、制备装置以及方法的技术方案：
实施例一：
一种石油污染土壤生物修复菌剂，生物修复菌剂由含有提取细菌菌群的耐碱微生物菌液、辅助微生物菌液、复合肥和生物表面活性组成，且耐碱微生物菌液、复合肥和生物表面活性的重量份配比为60：10：10。
具体的，耐碱微生物菌液包括芽孢杆菌属、黄杆菌属、无色杆菌属、假单胞菌属、不动杆菌属、产碱杆菌属、微球菌属、分支杆菌属和奈瑟氏球菌属，辅助微生物菌液包括平菇真菌、白囊耙齿菌和盐单胞菌属、绿脓杆菌AT18和还原菌硫弧菌组成。
具体的，复合肥的重量份含量组成为：速效氮10-15份、五氧化二磷5-15份、黄腐酸钾10-14份、甲壳素1-5份、氨基酸5-10份、和钙镁硫12-19份，生物表面活性为鼠李糖脂、槐糖脂、海藻糖脂和磷脂酰基乙醇胺泡囊其中的一种或者其中的几种混合形成。
制备方法的具体制备步骤如下：
第一步骤：细菌菌群样品溶解
向锥形瓶中加入100mL无菌水，将5g有石油污染的自然盐碱土壤样品加入到盛有100mL无菌水的锥形瓶中，并置于振荡培养箱中室温振荡2h，保持振荡频率为100rpm；
第二步骤：葡萄糖培养基培养
将溶解在锥形瓶中的样品溶液取出10ml，放入培养皿中，然后在培养皿中接种50mL的葡萄糖培养基，将培养皿置于恒温制备装置中，打开加热棒11，调节水浴温度为25℃，通过温控探头12对水浴温度实时进行监测，在200rpm、条件下，连续培养3天；
第三步骤：细菌菌群耐酸碱性培养和提取
继续在上述条件下对细菌菌群进行培养，通过烧杯配置浓度为0.1mol/L、0.2mol/L、0.3mol/L、0.4mol/L和0.5mol/L的无机盐原油培养基溶液，该无机盐原油培养液的由基础无机盐和原油混合形成，其中，基础无机盐溶液的组成为：NaCl、(NH4)2SO4、MgSO4·7H2O、NaNO3、KH2PO4、K2HPO4·3H2O和蒸馏水，配置完成后，将烧杯固定在支撑座13上的限位槽10内部，同时转动活动臂2，带动外转盘6置于烧杯上部，然后通过加液管8对液体进行吸附，从而对放置在恒温箱体1内部的培养皿每相隔一小时依次加入0.1mol/L、0.2mol/L、0.3mol/L、0.4mol/L和0.5mol/L的无机盐原油培养基5ml，在加入无机盐原油培养基，根据上述方法依次配置不同浓度的碱性原油培养基溶液和酸性原油培养基溶液，从而对培养皿进行滴加，每种培养液平均培养2-3天，共培养7-8天，即可以将细菌菌群样品中的细菌菌群提取出来，该细菌菌群对酸碱、盐分和石油具有显著的耐受力；
第四步骤：细菌菌群的富集培养
将上述微生物菌液重新接种在新制备的原油培养基中，并加入辅助微生物菌液进行混合培养，连续富集5-6个周期，富集培养条件为温度30℃、120-150rpm/min恒温水浴摇床，使微生物总量达到1013-1014cfu/mL并稳定，从而便于制备微生物菌剂；
第五步骤：微生物菌剂制备
将上述提取的含有细菌菌群的微生物菌液与复合肥和生物表面活性剂按照重量份配比为60：10：10进行混合，从而获得微生物菌液；
第六步骤：微生物菌剂保存和使用
微生物菌剂采用冷冻保存，即将制备好的微生物菌液存放在-25℃冰箱中保存，保存时间不超过100天，使用时快速放入20-25℃恒温水浴摇床中急剧解冻，然后放入新制备的无机盐石油培养基中培养。
实施例二：
一种石油污染土壤生物修复菌剂，生物修复菌剂由含有提取细菌菌群的耐碱微生物菌液、辅助微生物菌液、复合肥和生物表面活性组成，且耐碱微生物菌液、复合肥和生物表面活性的重量份配比为60：20：10。
具体的，耐碱微生物菌液包括芽孢杆菌属、黄杆菌属、无色杆菌属、假单胞菌属、不动杆菌属、产碱杆菌属、微球菌属、分支杆菌属和奈瑟氏球菌属，辅助微生物菌液包括平菇真菌、白囊耙齿菌和盐单胞菌属、绿脓杆菌AT18和还原菌硫弧菌组成。
具体的，复合肥的重量份含量组成为：速效氮10-15份、五氧化二磷5-15份、黄腐酸钾10-14份、甲壳素1-5份、氨基酸5-10份、和钙镁硫12-19份，生物表面活性为鼠李糖脂、槐糖脂、海藻糖脂和磷脂酰基乙醇胺泡囊其中的一种或者其中的几种混合形成。
制备方法的具体制备步骤如下：
第一步骤：细菌菌群样品溶解
向锥形瓶中加入100mL无菌水，将5g有石油污染的自然盐碱土壤样品加入到盛有100mL无菌水的锥形瓶中，并置于振荡培养箱中室温振荡2h，保持振荡频率为100rpm；
第二步骤：葡萄糖培养基培养
将溶解在锥形瓶中的样品溶液取出10ml，放入培养皿中，然后在培养皿中接种50mL的葡萄糖培养基，将培养皿置于恒温制备装置中，打开加热棒11，调节水浴温度为25℃，通过温控探头12对水浴温度实时进行监测，在200rpm、条件下，连续培养3天；
第三步骤：细菌菌群耐酸碱性培养和提取
继续在上述条件下对细菌菌群进行培养，通过烧杯配置浓度为0.1mol/L、0.2mol/L、0.3mol/L、0.4mol/L和0.5mol/L的无机盐原油培养基溶液，该无机盐原油培养液的由基础无机盐和原油混合形成，其中，基础无机盐溶液的组成为：NaCl、(NH4)2SO4、MgSO4·7H2O、NaNO3、KH2PO4、K2HPO4·3H2O和蒸馏水，配置完成后，将烧杯固定在支撑座13上的限位槽10内部，同时转动活动臂2，带动外转盘6置于烧杯上部，然后通过加液管8对液体进行吸附，从而对放置在恒温箱体1内部的培养皿每相隔一小时依次加入0.1mol/L、0.2mol/L、0.3mol/L、0.4mol/L和0.5mol/L的无机盐原油培养基5ml，在加入无机盐原油培养基，根据上述方法依次配置不同浓度的碱性原油培养基溶液和酸性原油培养基溶液，从而对培养皿进行滴加，每种培养液平均培养2-3天，共培养7-8天，即可以将细菌菌群样品中的细菌菌群提取出来，该细菌菌群对酸碱、盐分和石油具有显著的耐受力；
第四步骤：细菌菌群的富集培养
将上述微生物菌液重新接种在新制备的原油培养基中，并加入辅助微生物菌液进行混合培养，连续富集5-6个周期，富集培养条件为温度30℃、120-150rpm/min恒温水浴摇床，使微生物总量达到1013-1014cfu/mL并稳定，从而便于制备微生物菌剂；
第五步骤：微生物菌剂制备
将上述提取的含有细菌菌群的微生物菌液与复合肥和生物表面活性剂按照重量份配比为60：20：10进行混合，从而获得微生物菌液；
第六步骤：微生物菌剂保存和使用
微生物菌剂采用冷冻保存，即将制备好的微生物菌液存放在-25℃冰箱中保存，保存时间不超过100天，使用时快速放入20-25℃恒温水浴摇床中急剧解冻，然后放入新制备的无机盐石油培养基中培养。
实施例三：
一种石油污染土壤生物修复菌剂，生物修复菌剂由含有提取细菌菌群的耐碱微生物菌液、辅助微生物菌液、复合肥和生物表面活性组成，且耐碱微生物菌液、复合肥和生物表面活性的重量份配比为70：10：10。
具体的，耐碱微生物菌液包括芽孢杆菌属、黄杆菌属、无色杆菌属、假单胞菌属、不动杆菌属、产碱杆菌属、微球菌属、分支杆菌属和奈瑟氏球菌属，辅助微生物菌液包括平菇真菌、白囊耙齿菌和盐单胞菌属、绿脓杆菌AT18和还原菌硫弧菌组成。
具体的，复合肥的重量份含量组成为：速效氮10-15份、五氧化二磷5-15份、黄腐酸钾10-14份、甲壳素1-5份、氨基酸5-10份、和钙镁硫12-19份，生物表面活性为鼠李糖脂、槐糖脂、海藻糖脂和磷脂酰基乙醇胺泡囊其中的一种或者其中的几种混合形成。
制备方法的具体制备步骤如下：
第一步骤：细菌菌群样品溶解
向锥形瓶中加入100mL无菌水，将5g有石油污染的自然盐碱土壤样品加入到盛有100mL无菌水的锥形瓶中，并置于振荡培养箱中室温振荡2h，保持振荡频率为100rpm；
第二步骤：葡萄糖培养基培养
将溶解在锥形瓶中的样品溶液取出10ml，放入培养皿中，然后在培养皿中接种50mL的葡萄糖培养基，将培养皿置于恒温制备装置中，打开加热棒11，调节水浴温度为25℃，通过温控探头12对水浴温度实时进行监测，在200rpm、条件下，连续培养3天；
第三步骤：细菌菌群耐酸碱性培养和提取
继续在上述条件下对细菌菌群进行培养，通过烧杯配置浓度为0.1mol/L、0.2mol/L、0.3mol/L、0.4mol/L和0.5mol/L的无机盐原油培养基溶液，该无机盐原油培养液的由基础无机盐和原油混合形成，其中，基础无机盐溶液的组成为：NaCl、(NH4)2SO4、MgSO4·7H2O、NaNO3、KH2PO4、K2HPO4·3H2O和蒸馏水，配置完成后，将烧杯固定在支撑座13上的限位槽10内部，同时转动活动臂2，带动外转盘6置于烧杯上部，然后通过加液管8对液体进行吸附，从而对放置在恒温箱体1内部的培养皿每相隔一小时依次加入0.1mol/L、0.2mol/L、0.3mol/L、0.4mol/L和0.5mol/L的无机盐原油培养基5ml，在加入无机盐原油培养基，根据上述方法依次配置不同浓度的碱性原油培养基溶液和酸性原油培养基溶液，从而对培养皿进行滴加，每种培养液平均培养2-3天，共培养7-8天，即可以将细菌菌群样品中的细菌菌群提取出来，该细菌菌群对酸碱、盐分和石油具有显著的耐受力；
第四步骤：细菌菌群的富集培养
将上述微生物菌液重新接种在新制备的原油培养基中，并加入辅助微生物菌液进行混合培养，连续富集5-6个周期，富集培养条件为温度30℃、120-150rpm/min恒温水浴摇床，使微生物总量达到1013-1014cfu/mL并稳定，从而便于制备微生物菌剂；
第五步骤：微生物菌剂制备
将上述提取的含有细菌菌群的微生物菌液与复合肥和生物表面活性剂按照重量份配比为70：10：10进行混合，从而获得微生物菌液；
第六步骤：微生物菌剂保存和使用
微生物菌剂采用冷冻保存，即将制备好的微生物菌液存放在-25℃冰箱中保存，保存时间不超过100天，使用时快速放入20-25℃恒温水浴摇床中急剧解冻，然后放入新制备的无机盐石油培养基中培养。
实施例四：
一种石油污染土壤生物修复菌剂，生物修复菌剂由含有提取细菌菌群的耐碱微生物菌液、辅助微生物菌液、复合肥和生物表面活性组成，且耐碱微生物菌液、复合肥和生物表面活性的重量份配比为100：10：10。
具体的，耐碱微生物菌液包括芽孢杆菌属、黄杆菌属、无色杆菌属、假单胞菌属、不动杆菌属、产碱杆菌属、微球菌属、分支杆菌属和奈瑟氏球菌属，辅助微生物菌液包括平菇真菌、白囊耙齿菌和盐单胞菌属、绿脓杆菌AT18和还原菌硫弧菌组成。
具体的，复合肥的重量份含量组成为：速效氮10-15份、五氧化二磷5-15份、黄腐酸钾10-14份、甲壳素1-5份、氨基酸5-10份、和钙镁硫12-19份，生物表面活性为鼠李糖脂、槐糖脂、海藻糖脂和磷脂酰基乙醇胺泡囊其中的一种或者其中的几种混合形成。
制备方法的具体制备步骤如下：
第一步骤：细菌菌群样品溶解
向锥形瓶中加入100mL无菌水，将5g有石油污染的自然盐碱土壤样品加入到盛有100mL无菌水的锥形瓶中，并置于振荡培养箱中室温振荡2h，保持振荡频率为100rpm；
第二步骤：葡萄糖培养基培养
将溶解在锥形瓶中的样品溶液取出10ml，放入培养皿中，然后在培养皿中接种50mL的葡萄糖培养基，将培养皿置于恒温制备装置中，打开加热棒11，调节水浴温度为25℃，通过温控探头12对水浴温度实时进行监测，在200rpm、条件下，连续培养3天；
第三步骤：细菌菌群耐酸碱性培养和提取
继续在上述条件下对细菌菌群进行培养，通过烧杯配置浓度为0.1mol/L、0.2mol/L、0.3mol/L、0.4mol/L和0.5mol/L的无机盐原油培养基溶液，该无机盐原油培养液的由基础无机盐和原油混合形成，其中，基础无机盐溶液的组成为：NaCl、(NH4)2SO4、MgSO4·7H2O、NaNO3、KH2PO4、K2HPO4·3H2O和蒸馏水，配置完成后，将烧杯固定在支撑座13上的限位槽10内部，同时转动活动臂2，带动外转盘6置于烧杯上部，然后通过加液管8对液体进行吸附，从而对放置在恒温箱体1内部的培养皿每相隔一小时依次加入0.1mol/L、0.2mol/L、0.3mol/L、0.4mol/L和0.5mol/L的无机盐原油培养基5ml，在加入无机盐原油培养基，根据上述方法依次配置不同浓度的碱性原油培养基溶液和酸性原油培养基溶液，从而对培养皿进行滴加，每种培养液平均培养2-3天，共培养7-8天，即可以将细菌菌群样品中的细菌菌群提取出来，该细菌菌群对酸碱、盐分和石油具有显著的耐受力；
第四步骤：细菌菌群的富集培养
将上述微生物菌液重新接种在新制备的原油培养基中，并加入辅助微生物菌液进行混合培养，连续富集5-6个周期，富集培养条件为温度30℃、120-150rpm/min恒温水浴摇床，使微生物总量达到1013-1014cfu/mL并稳定，从而便于制备微生物菌剂；
第五步骤：微生物菌剂制备
将上述提取的含有细菌菌群的微生物菌液与复合肥和生物表面活性剂按照重量份配比为100：10：10进行混合，从而获得微生物菌液；
第六步骤：微生物菌剂保存和使用
微生物菌剂采用冷冻保存，即将制备好的微生物菌液存放在-25℃冰箱中保存，保存时间不超过100天，使用时快速放入20-25℃恒温水浴摇床中急剧解冻，然后放入新制备的无机盐石油培养基中培养，在传统葡萄糖培养基培养的基础上，通过恒温箱体向培养皿中逐步加入不同浓度的无机盐原油培养基、碱性原油培养基溶液和酸性原油培养基溶液，培养该细菌菌群对酸碱、盐分和石油的耐受力，从而增强该细菌菌群的分解效果，且在传统添加表面活性剂的基础上，还添加有辅助微生物菌液进行混合培养，从而在对土壤中原油去除的基础上，还可进一步去除土壤中的重金属离子，以及增强土壤的耐酸碱性，该微生物菌剂制备简单具有微生物丰富、优势菌明显并有较好的稳定性、制备工艺简单，采用本微生物菌剂处理石油污染物盐碱土壤的处理成本低、有利于石油专性降解菌适应新的污染环境、提高和改善土壤的微生态环境质量和对环境不造成二次污染，可以显著地提高盐碱土壤中石油烃的降解效率。
在本发明的描述中，需要理解的是，指示的方位或位置关系为基于附图所示的方位或位置关系，仅是为了便于描述本发明和简化描述，而不是指示或暗示所指的装置或元件必须具有特定的方位、以特定的方位构造和操作，因此不能理解为对本发明的限制。
在本发明中，除非另有明确的规定和限定，例如，可以是固定连接，也可以是可拆卸连接，或成一体；可以是机械连接，也可以是电连接；可以是直接相连，也可以通过中间媒介间接相连，可以是两个元件内部的连通或两个元件的相互作用关系，除非另有明确的限定，对于本领域的普通技术人员而言，可以根据具体情况理解上述术语在本发明中的具体含义。
尽管已经示出和描述了本发明的实施例，对于本领域的普通技术人员而言，可以理解在不脱离本发明的原理和精神的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由所附权利要求及其等同物限定。
Claims (8)
1.一种石油污染土壤生物修复菌剂，其特征在于，所述生物修复菌剂由含有提取细菌菌群的耐碱微生物菌液、辅助微生物菌液、复合肥和生物表面活性组成，且所述耐碱微生物菌液、复合肥和生物表面活性的重量份配比为60：10：10或者60：20：10或者70：10：10或者100：10：10。
2.根据权利要求1所述的一种石油污染土壤生物修复菌剂、制备装置以及方法，其特征在于：所述耐碱微生物菌液包括芽孢杆菌属、黄杆菌属、无色杆菌属、假单胞菌属、不动杆菌属、产碱杆菌属、微球菌属、分支杆菌属和奈瑟氏球菌属，所述辅助微生物菌液包括平菇真菌、白囊耙齿菌和盐单胞菌属、绿脓杆菌AT18和还原菌硫弧菌组成。
3.根据权利要求1所述的一种石油污染土壤生物修复菌剂、制备装置以及方法，其特征在于：所述复合肥的重量份含量组成为：速效氮10-15份、五氧化二磷5-15份、黄腐酸钾10-14份、甲壳素1-5份、氨基酸5-10份、和钙镁硫12-19份。
4.根据权利要求1所述的一种石油污染土壤生物修复菌剂、制备装置以及方法，其特征在于：所述生物表面活性为鼠李糖脂、槐糖脂、海藻糖脂和磷脂酰基乙醇胺泡囊其中的一种或者其中的几种混合形成。
5.一种石油污染土壤生物修复菌剂制备装置，用于制取上述权利要求1-5所述的生物修复菌剂，包括恒温箱体(1)、活动臂(2)、安装臂(3)、外转盘(6)、内转盘(7)和加液管(8)，其特征在于：所述恒温箱体(1)的两侧均活动安装有活动臂(2)，所述活动臂(2)的顶端均活动连接有安装臂(3)，所述安装臂(3)的一端固定连接有固定座(4)，所述固定座(4)的内部开设有固定槽，所述固定槽的内部固定安装有连接臂(9)，所述连接臂(9)的一端固定连接有外转盘(6)，所述外转盘(6)的内部活动安装有内转盘(7)，所述内转盘(7)的内部固定安装有多组加液管(8)。
6.根据权利要求5所述的一种石油污染土壤生物修复菌剂制备装置，其特征在于：所述恒温箱体(1)的两侧均固定连接有支撑座(13)，所述支撑座(13)的顶端开设有限位槽(10)，所述限位槽(10)的内部固定设置有磁力搅拌器。
7.根据权利要求5所述的一种石油污染土壤生物修复菌剂制备装置，其特征在于：所述固定座(4)的顶端螺纹连接有固定螺杆，且所述固定螺杆的顶端固定连接有固定旋钮(5)，所述恒温箱体(1)的内部固定安装有加热棒(11)和温控探头(12)。
8.一种石油污染土壤生物修复菌剂制备方法，通过上述权利要求5-7所述的制备装置进行制备，其特征在于：所述制备方法的具体制备步骤如下：
第一步骤：细菌菌群样品溶解
向锥形瓶中加入100mL无菌水，将5-9g有石油污染的自然盐碱土壤样品加入到盛有100mL无菌水的锥形瓶中，并置于振荡培养箱中室温振荡0.5～2h，保持振荡频率为100-180rpm；
第二步骤：葡萄糖培养基培养
将溶解在锥形瓶中的样品溶液取出5-10ml，放入培养皿中，然后在培养皿中接种50mL-60ml的葡萄糖培养基，将培养皿置于恒温制备装置中，在150-200rpm、25-30℃条件下，连续培养3天；
第三步骤：细菌菌群耐酸碱性培养和提取
继续在上述条件下对细菌菌群进行培养，向培养皿中逐步加入无机盐原油培养基、碱性原油培养基溶液和酸性原油培养基溶液，并连续培养5-7天，即可以将细菌菌群样品中的细菌菌群提取出来，该细菌菌群对酸碱、盐分和石油具有显著的耐受力；
第四步骤：细菌菌群的富集培养
将上述微生物菌液重新接种在新制备的原油培养基中，并加入辅助微生物菌液进行混合培养，连续富集5-6个周期，富集培养条件为温度30℃、120-150rpm/min恒温水浴摇床，使微生物总量达到1013-1014cfu/mL并稳定，从而便于制备微生物菌剂；
第五步骤：微生物菌剂制备
将上述提取的含有细菌菌群的微生物菌液与复合肥和生物表面活性剂按照重量份配比为60：10：10或者60：20：10或者70：10：10或者100：10：10进行混合，从而获得微生物菌液；
第六步骤：微生物菌剂保存和使用
微生物菌剂采用冷冻保存，即将制备好的微生物菌液存放在-25℃冰箱中保存，保存时间不超过100天，使用时快速放入20-25℃恒温水浴摇床中急剧解冻，然后放入新制备的无机盐石油培养基中培养。
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