CN114480195B - 一种幽门螺杆菌快速增菌培养试剂及其制备方法 - Google Patents
一种幽门螺杆菌快速增菌培养试剂及其制备方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN114480195B CN114480195B CN202210119306.3A CN202210119306A CN114480195B CN 114480195 B CN114480195 B CN 114480195B CN 202210119306 A CN202210119306 A CN 202210119306A CN 114480195 B CN114480195 B CN 114480195B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- helicobacter pylori
- culture reagent
- culture
- rapid
- sulfate
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 241000590002 Helicobacter pylori Species 0.000 title claims abstract description 89
- 229940037467 helicobacter pylori Drugs 0.000 title claims abstract description 89
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 title claims abstract description 75
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims abstract description 14
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims abstract description 23
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 claims abstract description 19
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 18
- 210000002216 heart Anatomy 0.000 claims abstract description 17
- 210000005228 liver tissue Anatomy 0.000 claims abstract description 15
- 239000002994 raw material Substances 0.000 claims abstract description 14
- 230000006037 cell lysis Effects 0.000 claims abstract description 13
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 11
- ARUVKPQLZAKDPS-UHFFFAOYSA-L copper(II) sulfate Chemical compound [Cu+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] ARUVKPQLZAKDPS-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims abstract description 11
- SQQMAOCOWKFBNP-UHFFFAOYSA-L manganese(II) sulfate Chemical compound [Mn+2].[O-]S([O-])(=O)=O SQQMAOCOWKFBNP-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims abstract description 11
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 claims abstract description 10
- 108010093965 Polymyxin B Proteins 0.000 claims abstract description 10
- 108010059993 Vancomycin Proteins 0.000 claims abstract description 10
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 claims abstract description 10
- 229910000365 copper sulfate Inorganic materials 0.000 claims abstract description 10
- BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L disodium hydrogen phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].OP([O-])([O-])=O BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims abstract description 10
- 229960001781 ferrous sulfate Drugs 0.000 claims abstract description 10
- 235000003891 ferrous sulphate Nutrition 0.000 claims abstract description 10
- 239000011790 ferrous sulphate Substances 0.000 claims abstract description 10
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 claims abstract description 10
- BAUYGSIQEAFULO-UHFFFAOYSA-L iron(2+) sulfate (anhydrous) Chemical compound [Fe+2].[O-]S([O-])(=O)=O BAUYGSIQEAFULO-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims abstract description 10
- 229910000359 iron(II) sulfate Inorganic materials 0.000 claims abstract description 10
- 229940099596 manganese sulfate Drugs 0.000 claims abstract description 10
- 235000007079 manganese sulphate Nutrition 0.000 claims abstract description 10
- 239000011702 manganese sulphate Substances 0.000 claims abstract description 10
- 229920000024 polymyxin B Polymers 0.000 claims abstract description 10
- 229960005266 polymyxin b Drugs 0.000 claims abstract description 10
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims abstract description 10
- 239000012137 tryptone Substances 0.000 claims abstract description 10
- 229960003165 vancomycin Drugs 0.000 claims abstract description 10
- MYPYJXKWCTUITO-LYRMYLQWSA-N vancomycin Chemical compound O([C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1OC1=C2C=C3C=C1OC1=CC=C(C=C1Cl)[C@@H](O)[C@H](C(N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@H]3C(=O)N[C@H]1C(=O)N[C@H](C(N[C@@H](C3=CC(O)=CC(O)=C3C=3C(O)=CC=C1C=3)C(O)=O)=O)[C@H](O)C1=CC=C(C(=C1)Cl)O2)=O)NC(=O)[C@@H](CC(C)C)NC)[C@H]1C[C@](C)(N)[C@H](O)[C@H](C)O1 MYPYJXKWCTUITO-LYRMYLQWSA-N 0.000 claims abstract description 10
- MYPYJXKWCTUITO-UHFFFAOYSA-N vancomycin Natural products O1C(C(=C2)Cl)=CC=C2C(O)C(C(NC(C2=CC(O)=CC(O)=C2C=2C(O)=CC=C3C=2)C(O)=O)=O)NC(=O)C3NC(=O)C2NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(CC(C)C)NC)C(O)C(C=C3Cl)=CC=C3OC3=CC2=CC1=C3OC1OC(CO)C(O)C(O)C1OC1CC(C)(N)C(O)C(C)O1 MYPYJXKWCTUITO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 10
- NWONKYPBYAMBJT-UHFFFAOYSA-L zinc sulfate Chemical compound [Zn+2].[O-]S([O-])(=O)=O NWONKYPBYAMBJT-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims abstract description 10
- 229910000368 zinc sulfate Inorganic materials 0.000 claims abstract description 10
- 229960001763 zinc sulfate Drugs 0.000 claims abstract description 10
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 claims abstract description 9
- 239000008367 deionised water Substances 0.000 claims abstract description 9
- 229910021641 deionized water Inorganic materials 0.000 claims abstract description 9
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 claims abstract description 9
- LXNHXLLTXMVWPM-UHFFFAOYSA-N pyridoxine Chemical compound CC1=NC=C(CO)C(CO)=C1O LXNHXLLTXMVWPM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 9
- RADKZDMFGJYCBB-UHFFFAOYSA-N pyridoxal hydrochloride Natural products CC1=NC=C(CO)C(C=O)=C1O RADKZDMFGJYCBB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 6
- 239000011726 vitamin B6 Substances 0.000 claims abstract description 6
- 235000019158 vitamin B6 Nutrition 0.000 claims abstract description 6
- 229940011671 vitamin b6 Drugs 0.000 claims abstract description 6
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 claims abstract description 5
- 229960000355 copper sulfate Drugs 0.000 claims abstract description 5
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 claims description 16
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 15
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims description 10
- 101150086731 ges-1 gene Proteins 0.000 claims description 10
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 claims description 10
- 239000012528 membrane Substances 0.000 claims description 8
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 claims description 7
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 claims description 6
- 238000003756 stirring Methods 0.000 claims description 6
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 claims description 6
- 238000005406 washing Methods 0.000 claims description 6
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 5
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 claims description 4
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 claims description 4
- 229930003270 Vitamin B Natural products 0.000 claims description 4
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 claims description 4
- 235000019156 vitamin B Nutrition 0.000 claims description 4
- 239000011720 vitamin B Substances 0.000 claims description 4
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 claims description 3
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims description 3
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 claims description 3
- 239000005457 ice water Substances 0.000 claims description 3
- 239000012535 impurity Substances 0.000 claims description 3
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 claims description 3
- 239000000463 material Substances 0.000 claims description 3
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims description 3
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 claims description 3
- 239000000843 powder Substances 0.000 claims description 3
- 238000007790 scraping Methods 0.000 claims description 3
- 229910001220 stainless steel Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 239000010935 stainless steel Substances 0.000 claims description 3
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 claims description 3
- 210000005003 heart tissue Anatomy 0.000 claims description 2
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 abstract description 9
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 7
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 5
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 5
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 4
- ZUFQODAHGAHPFQ-UHFFFAOYSA-N pyridoxine hydrochloride Chemical compound Cl.CC1=NC=C(CO)C(CO)=C1O ZUFQODAHGAHPFQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 3
- GHCVXTFBVDVFGE-UHFFFAOYSA-N 4-amino-6-chloro-1,3,5-triazin-2-ol Chemical compound NC1=NC(O)=NC(Cl)=N1 GHCVXTFBVDVFGE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 2
- 239000013592 cell lysate Substances 0.000 description 2
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 2
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 2
- 210000002969 egg yolk Anatomy 0.000 description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 2
- 241000272203 Columba Species 0.000 description 1
- 229920000742 Cotton Polymers 0.000 description 1
- 206010059866 Drug resistance Diseases 0.000 description 1
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 description 1
- 244000068988 Glycine max Species 0.000 description 1
- GZCGUPFRVQAUEE-SLPGGIOYSA-N aldehydo-D-glucose Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C=O GZCGUPFRVQAUEE-SLPGGIOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 1
- 238000005452 bending Methods 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 210000000601 blood cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000009640 blood culture Methods 0.000 description 1
- 238000007821 culture assay Methods 0.000 description 1
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 1
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 1
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 238000009630 liquid culture Methods 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 1
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 1
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 238000010998 test method Methods 0.000 description 1
- 238000004879 turbidimetry Methods 0.000 description 1
- RZLVQBNCHSJZPX-UHFFFAOYSA-L zinc sulfate heptahydrate Chemical compound O.O.O.O.O.O.O.[Zn+2].[O-]S([O-])(=O)=O RZLVQBNCHSJZPX-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Virology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
本发明公开了一种幽门螺杆菌快速增菌培养试剂及其制备方法，涉及幽门螺杆菌培养试剂技术领域，所述的幽门螺杆菌快速增菌培养试剂包括第一幽门螺杆菌培养试剂和第二幽门螺杆菌培养试剂；所述的第一幽门螺杆菌培养试剂的原料组分包括猪脑心肝组织提取物、GSE‑1细胞裂解提取物、胰酪蛋白胨、大豆蛋白胨、氯化钠、磷酸氢二钠、蒸馏水；所述的第二幽门螺杆菌培养试剂的原料组分包括D‑葡萄糖、尿素、胎牛血清、万古霉素、多粘菌素B、硫酸铜、硫酸锌、硫酸亚铁、硫酸锰、维生素B6、去离子水。本发明提供的幽门螺杆菌快速增菌培养试剂的培养增菌速度较传统的培养提高约2倍，能96小时维持幽门螺杆菌菌体形态不变异。
Description
技术领域
本发明涉及幽门螺杆菌培养试剂技术领域，具体涉及一种幽门螺杆菌快速增菌培养试剂及其制备方法。
背景技术
目前，幽门螺杆菌的培养主要是商品化的试剂盒，但是其培养仅限于分离单克隆菌落，其对于微量细菌的大量扩增效率则显得较低。通常培养至少需72-96小时方可见针尖样大小的单个菌落。而在液体培养中其增菌效率略高于固体培养基中，但是容易菌体变形，且形成的耐药基因的质粒容易丢失。
还没有一种幽门螺杆菌快速增菌培养试剂，可以达到对幽门螺杆菌的快速培养，利于后期的检测的效果。
发明内容
针对现有技术中的缺陷，本发明提供一种幽门螺杆菌快速增菌培养试剂及其制备方法。本发明提供的幽门螺杆菌快速增菌培养试剂能够有效对幽门螺杆菌进行快速增菌，其相较传统的脑心浸液加上脱纤维绵羊血，相同培养周期内(48小时)能够提升2至3倍的菌量，且细菌经96小时连续监测，其菌体均保持革兰氏阴性弯曲状。本发明提供的幽门螺杆菌快速增菌培养试剂由于回避了血细胞的加入，呈现出透明状，有利于观察测量细菌生长浊度。
本发明的一个目的在于保护一种幽门螺杆菌快速增菌培养试剂，所述的幽门螺杆菌快速增菌培养试剂包括第一幽门螺杆菌培养试剂和第二幽门螺杆菌培养试剂；所述的第一幽门螺杆菌培养试剂的原料组分包括猪脑心肝组织提取物、GSE-1细胞裂解提取物、胰酪蛋白胨、大豆蛋白胨、氯化钠、磷酸氢二钠、蒸馏水；所述的第二幽门螺杆菌培养试剂的原料组分包括D-葡萄糖、尿素、胎牛血清、万古霉素、多粘菌素B、硫酸铜、硫酸锌、硫酸亚铁、硫酸锰、维生素B6、去离子水。
优选地，每900ml所述的第一幽门螺杆菌培养试剂的原料组分的配比为猪脑心肝组织提取物4克、GSE-1细胞裂解提取物2克、胰酪蛋白胨15克、大豆蛋白胨5克、氯化钠5克、磷酸氢二钠2.5克、蒸馏水900mL。
优选地，每500ml所述的第二幽门螺杆菌培养试剂的原料组分的配比为D-葡萄糖20克、尿素5克、胎牛血清200mL、万古霉素100mg、多粘菌素B 125mg、硫酸铜0.1μmol、硫酸锌0.09μmol、硫酸亚铁0.09μmol、硫酸锰0.06μmol、维生素B6 0.1μmol、余量为去离子水。
优选地，所述的猪脑心肝组织提取物的制备方法包括如下步骤：分别取猪脑、心、肝三种脏器各200克，无菌剪成碎片，生理盐水洗涤去除残留的红细胞，将上述组织完全浸泡于800mL 0℃的无菌冰水，浸泡48小时后，经800目无菌不锈钢网过滤除杂，冷冻干燥成粉末，制得所述的猪脑心肝组织提取物。
优选地，所述的GSE-1细胞裂解提取物的制备方法包括如下步骤：采用5×109的GES-1细胞经细胞刷刮取，取1500g离心15min收集细胞，无菌生理盐水重悬洗涤3次，每次1500g离心15min收集细胞；加入无菌生理盐水，调节至100毫升，使用高压均质仪于4℃破碎细胞，收集上清液，10000g离心60min，收集上清经0.22微米滤过膜过滤除菌，冷冻干燥，制得所述的GSE-1细胞裂解提取物。
本发明的另一个目的在于保护上述的幽门螺杆菌快速增菌培养试剂的制备方法，步骤如下：
S1.在蒸馏水中加入猪脑心肝组织提取物、GSE-1细胞裂解提取物、胰酪蛋白胨、大豆蛋白胨、氯化钠、磷酸氢二钠，加热搅拌溶解，高温灭菌，制得第一幽门螺杆菌培养试剂，备用；
S2.在去离子水中加入D-葡萄糖、尿素、胎牛血清、万古霉素、多粘菌素B、硫酸铜、硫酸锌、硫酸亚铁、硫酸锰、维生素B6，搅拌均匀，过滤除菌，制得第二幽门螺杆菌培养试剂，备用；
S3.将第一幽门螺杆菌培养试剂和第二幽门螺杆菌培养试剂进行混合，制得所述的幽门螺杆菌快速增菌培养试剂。
优选地，步骤S1中，所述的高温灭菌为在121℃下灭菌15分钟。
优选地，步骤S2中，所述的过滤除菌为采用0.22m滤膜过滤除菌。
优选地，步骤S3中，所述的第一幽门螺杆菌培养试剂和第二幽门螺杆菌培养试剂的体积比为9：1。
本发明的有益效果体现在：
(1)本发明提供的幽门螺杆菌快速增菌培养试剂通过对传统培养基的优化改良，其中添加了幽门螺杆菌生长发育的必备营养成分，其培养增菌速度较传统的培养提高约2倍。
(2)本发明提供的幽门螺杆菌快速增菌培养试剂能够较长时间(96小时)维持幽门螺杆菌菌体形态不变异，而传统的培养基易导致细菌形态学发生变异，呈现球状或球杆状。
(3)本发明提供的幽门螺杆菌快速增菌培养试剂较传统的添加了脱纤维羊血或卵黄的培养基呈现澄清透明状态，其较低的浊度易于进行比浊法测定相对菌落浓度，间接反映幽门螺杆菌生长情况。
附图说明
为了更清楚地说明本发明具体实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对具体实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍。在所有附图中，类似的元件或部分一般由类似的附图标记标识。附图中，各元件或部分并不一定按照实际的比例绘制。
图1为采用实施例制得的幽门螺杆菌快速增菌培养试剂和对比例进行幽门螺杆菌培养的菌量对比图；
图2为采用实施例制得的幽门螺杆菌快速增菌培养试剂进行幽门螺杆菌培养96小时的细菌形态图。
具体实施方式
下面将结合附图对本发明技术方案的实施例进行详细的描述。以下实施例仅用于更加清楚地说明本发明的技术方案，因此只作为示例，而不能以此来限制本发明的保护范围。
需要注意的是，除非另有说明，本申请使用的技术术语或者科学术语应当为本发明所属领域技术人员所理解的通常意义。
本发明实施例中采用的原料的来源：
胰蛋白胨Tryptone：品牌：OXOID；货号：LP0042B；
大豆蛋白胨：品牌：OXOID；货号：LP0042；
氯化钠：品牌：国药；货号：51024062；
磷酸氢二钠：品牌：国药；货号：10020318；
D-葡萄糖：品牌：国药；货号：527-07-1；
尿素：品牌：国药；货号：57-13-6；
胎牛血清：品牌：Gibco公司；货号：10100147；
万古霉素：品牌：CATO公司；货号：CCAD301745；
多粘菌素B：品牌：CATO公司；货号：CCAD302592；
硫酸铜：品牌：沃凯；货号：7758-98-7；
硫酸锌：品牌：沪试；货号：7446-20-0；
硫酸亚铁：品牌：沪试；货号：15244-10-7；
硫酸锰：品牌：沃凯；货号：7785-87-7；
维生素B6：品牌：沃凯；货号：58-56-0；
0.22μm滤膜：品牌：Millipore；货号：MAGVS2210。
实施例
一种幽门螺杆菌快速增菌培养试剂，所述的幽门螺杆菌快速增菌培养试剂包括第一幽门螺杆菌培养试剂和第二幽门螺杆菌培养试剂；
其中，每900ml所述的第一幽门螺杆菌培养试剂的原料组分的配比为猪脑心肝组织提取物4克、GSE-1细胞裂解提取物2克、胰酪蛋白胨15克、大豆蛋白胨5克、氯化钠5克、磷酸氢二钠2.5克、蒸馏水900mL。
每500ml所述的第二幽门螺杆菌培养试剂的原料组分的配比为D-葡萄糖20克、尿素5克、胎牛血清200mL、万古霉素100mg、多粘菌素B 125mg、硫酸铜0.1μmol、硫酸锌0.09μmol、硫酸亚铁0.09μmol、硫酸锰0.06μmol、维生素B6 0.1μmol、余量为去离子水。
所述的猪脑心肝组织提取物的制备方法包括如下步骤：分别取猪脑、心、肝三种脏器各200克，无菌剪成碎片，生理盐水洗涤去除残留的红细胞，将上述组织完全浸泡于800mL0℃的无菌冰水，浸泡48小时后，经800目无菌不锈钢网过滤除杂，冷冻干燥成粉末，制得所述的猪脑心肝组织提取物。
所述的GES-1细胞裂解提取物的制备方法包括如下步骤：采用5×109的GES-1细胞经细胞刷刮取，取1500g离心15min收集细胞，无菌生理盐水重悬洗涤3次，每次1500g离心15min收集细胞；加入无菌生理盐水，调节至100毫升，使用高压均质仪于4℃破碎细胞，收集上清液，10000g离心60min，收集上清经0.22微米滤过膜过滤除菌，冷冻干燥，制得所述的GES-1细胞裂解提取物。
本实施例还提供了上述幽门螺杆菌快速增菌培养试剂的制备方法，步骤如下：
S1.猪脑心肝组织提取物4克、GSE-1细胞裂解提取物2克、胰酪蛋白胨15克、大豆蛋白胨5克、氯化钠5克、磷酸氢二钠2.5克、加热搅拌溶解于900mL蒸馏水中，121℃高压灭菌15分钟，制得第一幽门螺杆菌培养试剂，备用；
S2.D-葡萄糖20克、尿素5克、胎牛血清200ml、100毫克的万古霉素、125mg的多粘菌素B、硫酸铜0.1mol、硫酸锌0.09mol、硫酸亚铁0.09mol、硫酸锰0.06mol、维生素B6 0.1mol，加入去离子水至500ml，搅拌均匀，采用0.22m滤膜过滤除菌，制得第一幽门螺杆菌培养试剂，保存备用。
S3.将第一幽门螺杆菌培养试剂和第二幽门螺杆菌培养试剂进行混合，制得所述的幽门螺杆菌快速增菌培养试剂。
步骤S1中，所述的高压灭菌为在121℃下高压灭菌15分钟。
步骤S2中，所述的过滤除菌为采用0.22μm滤膜过滤除菌。
步骤S3中，所述的第一幽门螺杆菌培养试剂和第二幽门螺杆菌培养试剂的体积比为9：1。
试验例
幽门螺杆菌培养试验
试验方法：采用实施例制得的幽门螺杆菌快速增菌培养试剂和哥伦比亚绵羊血培养试剂、布氏培养基、布氏卵黄培养基作为对比例进行幽门螺杆菌培养试验。
试验条件：同样的平板中，接种同样的菌量，置于微需氧环境中(微需氧罐和微需氧产气包均为日本三菱公司)，每隔12小时取菌一次，连续培养96小时后，分别使用无菌棉签刮取菌落置于无菌生理盐水中混匀，并通过麦氏浊度和菌落计数比较。
接种试验结果：具体结果见图1-2，本发明提供的幽门螺杆菌快速增菌培养试剂在相同的48小时培养周期内能够提升2至3倍的菌量，且细菌经96小时连续监测，其菌体均保持革兰氏阴性弯曲状。
最后应说明的是：以上各实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述各实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分或者全部技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的范围，其均应涵盖在本发明的权利要求和说明书的范围当中。
Claims (7)
1.一种幽门螺杆菌(Helicobacter pylori)快速增菌培养试剂，其特征在于：所述的幽门螺杆菌快速增菌培养试剂包括第一幽门螺杆菌培养试剂和第二幽门螺杆菌培养试剂；所述的第一幽门螺杆菌培养试剂的原料组分包括猪脑心肝组织提取物、GES-1细胞裂解提取物、胰酪蛋白胨、大豆蛋白胨、氯化钠、磷酸氢二钠和蒸馏水；所述的第二幽门螺杆菌培养试剂的原料组分包括D-葡萄糖、尿素、胎牛血清、万古霉素、多粘菌素B、硫酸铜、硫酸锌、硫酸亚铁、硫酸锰、维生素B6和去离子水；
所述的猪脑心肝组织提取物的制备方法包括如下步骤：分别取猪脑、心、肝三种脏器各200克，无菌剪成碎片，生理盐水洗涤去除残留的红细胞，将上述组织完全浸泡于800mL 0℃的无菌冰水，浸泡48小时后，经800目无菌不锈钢网过滤除杂，冷冻干燥成粉末，制得所述的猪脑心肝组织提取物。
所述的GES-1细胞裂解提取物的制备方法包括如下步骤：采用5×109的GES-1细胞经细胞刷刮取，取1500g离心15min收集细胞，无菌生理盐水重悬洗涤3次，每次1500g离心15min收集细胞；加入无菌生理盐水，调节至100毫升，使用高压均质仪于4℃破碎细胞，收集上清液，10000g离心60min，收集上清经0.22微米滤过膜过滤除菌，冷冻干燥，制得所述的GES-1细胞裂解提取物。
2.根据权利要求1所述的幽门螺杆菌快速增菌培养试剂，其特征在于：每900ml所述的第一幽门螺杆菌培养试剂的原料组分的配比为猪脑心肝组织提取物4克、GES-1细胞裂解提取物2克、胰酪蛋白胨15克、大豆蛋白胨5克、氯化钠5克、磷酸氢二钠2.5克、蒸馏水900mL。
3.根据权利要求1所述的幽门螺杆菌快速增菌培养试剂，其特征在于：每500ml所述的第二幽门螺杆菌培养试剂的原料组分的配比为D-葡萄糖20克、尿素5克、胎牛血清200mL、万古霉素100mg、多粘菌素B 125mg、硫酸铜0.1μmol、硫酸锌0.09μmol、硫酸亚铁0.09μmol、硫酸锰0.06μmol、维生素B6 0.1μmol、余量为去离子水。
4.权利要求1-3任一所述的幽门螺杆菌快速增菌培养试剂的制备方法，其特征在于：所述的的制备方法，步骤如下：
S1.在蒸馏水中加入猪脑心肝组织提取物、GES-1细胞裂解提取物、胰酪蛋白胨、大豆蛋白胨、氯化钠、磷酸氢二钠，加热搅拌溶解，高温灭菌，制得第一幽门螺杆菌培养试剂，备用；
S2.在去离子水中加入D-葡萄糖、尿素、胎牛血清、万古霉素、多粘菌素B、硫酸铜、硫酸锌、硫酸亚铁、硫酸锰、维生素B6，搅拌均匀，过滤除菌，制得第二幽门螺杆菌培养试剂，备用；
S3.将第一幽门螺杆菌培养试剂和第二幽门螺杆菌培养试剂进行混合，制得所述的幽门螺杆菌快速增菌培养试剂。
5.根据权利要求4所述的幽门螺杆菌快速增菌培养试剂的制备方法，其特征在于：步骤S1中，所述的高温灭菌为在121℃下灭菌15分钟。
6.根据权利要求4所述的幽门螺杆菌快速增菌培养试剂的制备方法，其特征在于：步骤S2中，所述的过滤除菌为采用0.22m滤膜过滤除菌。
7.根据权利要求4所述的幽门螺杆菌快速增菌培养试剂的制备方法，其特征在于：步骤S3中，所述的第一幽门螺杆菌培养试剂和第二幽门螺杆菌培养试剂的体积比为9：1。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202210119306.3A CN114480195B (zh) | 2022-02-08 | 2022-02-08 | 一种幽门螺杆菌快速增菌培养试剂及其制备方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202210119306.3A CN114480195B (zh) | 2022-02-08 | 2022-02-08 | 一种幽门螺杆菌快速增菌培养试剂及其制备方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN114480195A CN114480195A (zh) | 2022-05-13 |
| CN114480195B true CN114480195B (zh) | 2024-02-27 |
Family
ID=81477736
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202210119306.3A Active CN114480195B (zh) | 2022-02-08 | 2022-02-08 | 一种幽门螺杆菌快速增菌培养试剂及其制备方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN114480195B (zh) |
Citations (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6551779B1 (en) * | 1996-05-31 | 2003-04-22 | Tosiro Sugiyama | Helicobactor catalase nucleotide sequences, their production and use |
| KR20040019116A (ko) * | 2002-08-21 | 2004-03-05 | 주식회사 렉스진바이오텍 | 탱자 추출발효물 및 헬리코박터 파일로리 감염 질환의치료용 조성물 |
| CN101209271A (zh) * | 2006-12-29 | 2008-07-02 | 江苏正大天晴药业股份有限公司 | 一种抗幽门螺杆菌的药物组合物 |
| CN102888442A (zh) * | 2011-07-20 | 2013-01-23 | 农高惠 | 胃幽门螺杆菌快速培养、鉴别与药敏的试剂盒及其检查方法 |
| CN106389763A (zh) * | 2016-09-09 | 2017-02-15 | 成都六然医疗科技有限公司 | 心脑血管红色复合益生菌组合物 |
| CN112438998A (zh) * | 2020-11-27 | 2021-03-05 | 四川大学 | 一种防治幽门螺杆菌感染的益生菌菌剂papch及其制备方法 |
| CN113388555A (zh) * | 2021-08-05 | 2021-09-14 | 天益健康科学研究院（镇江）有限公司 | 一种幽门螺杆菌的快速培养方法 |
| CN114736786A (zh) * | 2022-04-20 | 2022-07-12 | 唐晓磊 | 一种用于幽门螺杆菌培养、鉴定及药敏实验的集成装置 |
| CN114806958A (zh) * | 2022-05-10 | 2022-07-29 | 广州维生君生物科技有限公司 | 胃源性凝结芽孢杆菌bcf-01及其应用 |
| CN114891675A (zh) * | 2022-05-11 | 2022-08-12 | 广州维生君生物科技有限公司 | 胃源性植物乳杆菌lpf-01及其应用 |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| SE0101030D0 (sv) * | 2001-03-23 | 2001-03-23 | Nordic Bio Ab | Immunogenic cell surface proteins of helicobacter pylori |
-
2022
- 2022-02-08 CN CN202210119306.3A patent/CN114480195B/zh active Active
Patent Citations (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6551779B1 (en) * | 1996-05-31 | 2003-04-22 | Tosiro Sugiyama | Helicobactor catalase nucleotide sequences, their production and use |
| KR20040019116A (ko) * | 2002-08-21 | 2004-03-05 | 주식회사 렉스진바이오텍 | 탱자 추출발효물 및 헬리코박터 파일로리 감염 질환의치료용 조성물 |
| CN101209271A (zh) * | 2006-12-29 | 2008-07-02 | 江苏正大天晴药业股份有限公司 | 一种抗幽门螺杆菌的药物组合物 |
| CN102888442A (zh) * | 2011-07-20 | 2013-01-23 | 农高惠 | 胃幽门螺杆菌快速培养、鉴别与药敏的试剂盒及其检查方法 |
| CN106389763A (zh) * | 2016-09-09 | 2017-02-15 | 成都六然医疗科技有限公司 | 心脑血管红色复合益生菌组合物 |
| CN112438998A (zh) * | 2020-11-27 | 2021-03-05 | 四川大学 | 一种防治幽门螺杆菌感染的益生菌菌剂papch及其制备方法 |
| CN113388555A (zh) * | 2021-08-05 | 2021-09-14 | 天益健康科学研究院（镇江）有限公司 | 一种幽门螺杆菌的快速培养方法 |
| CN114736786A (zh) * | 2022-04-20 | 2022-07-12 | 唐晓磊 | 一种用于幽门螺杆菌培养、鉴定及药敏实验的集成装置 |
| CN114806958A (zh) * | 2022-05-10 | 2022-07-29 | 广州维生君生物科技有限公司 | 胃源性凝结芽孢杆菌bcf-01及其应用 |
| CN114891675A (zh) * | 2022-05-11 | 2022-08-12 | 广州维生君生物科技有限公司 | 胃源性植物乳杆菌lpf-01及其应用 |
Non-Patent Citations (6)
| Title |
|---|
| 3种中药有效成分对幽门螺杆菌培养滤液转化的人胃黏膜上皮细胞的杀伤作用;石雪迎;赵凤志;由江峰;邵宏权;戴欣;王洁良;崔湘琳;;北京中医药大学学报(07);454-457 * |
| 四种幽门螺杆菌液体培养基增菌效果观察;王礼文, 高峰;中国卫生检验杂志(05);559-560 * |
| 幽门螺杆菌L型培养基的研究;贾继辉，黄谷良，林特夫;中国微生态学杂志(04);9-13 * |
| 幽门螺杆菌的分离与特性研究;丁云菲, 李安明, 李德华, 陈德高, 戴长柏;中国公共卫生(05);545-547 * |
| 幽门螺杆菌诱导人胃黏膜细胞GES-1过表达COX-2的研究;曾亚;刘玮;王赛;;实用预防医学(06);838-840 * |
| 用无血脑心浸液卵黄琼脂培养基分离培养幽门螺杆菌的研究;牟兆钦等;军事医学科学院院刊;63-65 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN114480195A (zh) | 2022-05-13 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN106754674B (zh) | 从人胎盘羊膜制备羊膜间充质干细胞的方法及其应用 | |
| CN109337862B (zh) | 一种精子洗涤液及其制备方法和应用 | |
| CN115322964B (zh) | 一种3d培养羊膜间充质干细胞种子库构建方法 | |
| CN102304492A (zh) | 鲫肝细胞原代培养方法 | |
| CN108998437B (zh) | 一种纳豆激酶液态发酵方法 | |
| CN114480195B (zh) | 一种幽门螺杆菌快速增菌培养试剂及其制备方法 | |
| CN108823154A (zh) | 一种脂肪干细胞的无血清培养基及其制备方法 | |
| CN113287603A (zh) | 一种生物样本保存液及其制备方法与应用 | |
| CN111643659A (zh) | 一种兔出血症病毒杆状病毒载体疫苗及其制备方法 | |
| CN114752590B (zh) | 一种高效且经济的猪肌肉干细胞的分离方法及其应用 | |
| CN101451122B (zh) | 褐点石斑鱼鳔细胞系的构建方法 | |
| CN109486730A (zh) | 芽孢杆菌h3、由其发酵鱼皮制备胶原蛋白多肽的用途和胶原蛋白多肽 | |
| CN106635865B (zh) | 一种用于牛鼻支原体分离纯化的培养基及其制备方法和应用 | |
| CN101451121A (zh) | 褐点石斑鱼心脏细胞系的构建方法 | |
| CN109771697B (zh) | 一种真皮成纤维细胞皮片及其构建方法和应用 | |
| CN113481120A (zh) | 培养基及其制备方法、用其培养脆弱拟杆菌的方法 | |
| CN107326016B (zh) | 一种微载体悬浮培养cpb细胞生产鳜传染性脾肾坏死病毒和鳜弹状病毒的方法 | |
| CN106868090B (zh) | 一种医学检验用痰液处理方法 | |
| CN111560451A (zh) | 一种经济高效的批量测定肠道菌体外生长和互作规律的方法 | |
| CN118147047A (zh) | 人胎盘干细胞提取物冻干粉及其制备方法 | |
| CN111575229B (zh) | 一种胎盘底蜕膜干细胞的分离方法 | |
| CN111004729B (zh) | 一株微小多年卧孔菌及其应用 | |
| CN109161490B (zh) | 一种产核酸的热带假丝酵母菌hy4-17-21及其制备方法 | |
| CN109280649B (zh) | 一种制备水貂犬瘟热抗原蛋白复合物的方法、抗原蛋白复合物及其应用 | |
| CN111793600A (zh) | 一种人脂肪间充质干细胞裂解物的获取与纯化方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant |