CN114478811A - 一种破壁提取灵芝多糖的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种破壁提取灵芝多糖的方法，包括以下步骤：将灵芝孢子粉浸泡在水中，得到悬浮液；对所述悬浮液进行超高压破壁提取，得到提取液。提取液经沉淀、浓缩、洗涤和干燥得到灵芝多糖。本发明的方法能够实现1.8～2.4％的灵芝多糖提取率。
Description
技术领域
本发明属于食品提取领域，具体涉及一种破壁提取灵芝多糖的方法。
背景技术
灵芝多糖是灵芝中最有效的成分之一，受到医药科技工作者的重视，国内外的论文中对灵芝的研究报道中提到灵芝孢子粉的也最多。目前已分离到的灵芝多糖有多大200多种，其中有数十种的结构已被研究清晰，分子量已被测定。
根据相关的权威报导，灵芝多糖具有多方面的药理活性如，加速血液微循环，能提高机体免疫力，降低机体静止状态下的无效耗氧量，提高血液供氧能力，消除体内自由基，提高机体细胞膜的封闭度，抗放射，提高肝脏、骨髓、血液合成DNA、RNA，蛋白质的能力，延长寿命等。灵芝的多种药理活性大多和灵芝多糖有关。
灵芝多糖在灵芝孢子中含量较高，但灵芝孢子包裹的两层壁十分坚韧，一般的化学、物理方法很难将其打破，导致灵芝多糖的提取率较低。目前最广泛的提取效率较高的方法为混合酶破壁法，破壁率高达50％左右。
发明内容
本发明的目的在于提供一种破壁提取灵芝多糖的方法，采用物理超高压的方法，利用瞬间压差的方法对灵芝孢子粉实现破壁，通过控制压力、温度、提取时间等参数提高灵芝孢子粉中灵芝多糖的提取率。
根据本发明的一个方面，提供一种破壁提取灵芝多糖的方法，包括以下步骤：
将灵芝孢子粉浸泡在水中，得到悬浮液；
对所述悬浮液进行超高压破壁提取，得到提取液。
优选地，所述灵芝孢子粉与水的质量体积比为每克灵芝孢子粉添加15mL水。
优选地，所述浸泡为在室温下浸泡30～60分钟。
优选地，所述超高压破壁提取的温度为20～30℃。
优选地，所述超高压破壁提取的压力为100～600MPa。
优选地，所述超高压破壁提取的时间为15～25分钟。
优选地，所述方法在超高压破壁提取后还包括对提取液进行真空浓缩，得到浓缩液。
优选地，所述方法还包括向所述浓缩液加入无水乙醇，静置过夜后，抽滤，得到沉淀。
优选地，所述沉淀依次用无水乙醇、丙酮和乙醚洗涤，并真空冷冻干燥。
优选地，真空浓缩的倍数为2倍，向浓缩液添加的无水乙醇的体积为浓缩液体积的3倍。
根据本发明的采用物理超高压的方法，利用瞬间压差的方法对灵芝孢子粉实现破壁，控制压力、温度、提取时间等参数提高灵芝孢子粉中灵芝多糖的提取率。根据本发明的方法在实现提高灵芝孢子粉中灵芝多糖的提取率的同时，提取的灵芝多糖相比传统水热法提取的灵芝多糖抗氧化能力更强。
附图说明
图1示出了对实施例1和对比例1的提取样品测定的提取率；
图2示出了对实施例1和对比例1的提取样品测定的DPPH自由基清除率。
具体实施方式
为了更加清楚地理解本发明的技术特征、目的和有益效果，现对本发明的技术方案进行进一步的详细说明。应理解，以下具体实施方式仅是示例性的，本发明的技术方案不限于以下所列举的具体实施方式。
本发明提供了一种破壁提取灵芝多糖的方法，包括以下步骤：
将灵芝孢子粉浸泡在水中，得到悬浮液；
对所述悬浮液进行超高压破壁提取，得到提取液。
可用于制备本发明的灵芝孢子粉的灵芝可以选择不同品种的灵芝，例如黑灵芝、黄灵芝、青桂灵芝等。
通常，灵芝孢子粉用干燥后的原料获得，浸泡步骤有利于在后续超高压破壁提取步骤中破坏灵芝细胞结构，从而有助于提高灵芝多糖提取率。
上述超高压破壁提取的温度可为20～30℃，例如可为21℃，22℃，23℃，24℃，25℃，26℃，27℃，28℃，29℃。提取温度在该范围内时，可提高所提取的灵芝多糖的抗氧化能力。
上述超高压破壁提取的压力可为100～600MPa，优选150～550MPa，更优选200～500MPa，例如可为300MPa、400MPa。
上述超高压破壁提取的时间可为15～25分钟，例如16分钟，17分钟，18分钟，19分钟，20分钟，21分钟，22分钟，23分钟，24分钟。
上述超高压破壁提取步骤可在超高压褐变设备中进行。该超高压褐变设备可实现内部压力在100-600MPa范围，以实现控制褐变压力的目的。超高压褐变设备中可以实现压力容器内部的压力能在瞬间(例如小于0.1秒)降低至常压。
在本发明的方法中，在超高压的环境下，通过这种压力的瞬间降低，利用瞬间压差的方法对灵芝孢子粉实现破壁，并且控制压力、温度、提取时间在上述范围内，从而提高灵芝孢子粉中灵芝多糖的提取率。
本发明的方法在超高压破壁提取后还包括对提取液进行真空浓缩，得到浓缩液。该真空浓缩步骤可用常规的真空浓缩方法进行，例如在2-10℃、0.4-0.6个大气压下进行。
进一步地，上述方法还包括向浓缩液加入无水乙醇，静置过夜后，使得灵芝多糖沉淀。经抽滤，得到沉淀。向上述浓缩液添加的无水乙醇的体积为浓缩液体积的3倍。
上述沉淀可依次用无水乙醇、丙酮和乙醚洗涤，并真空冷冻干燥。该真空冷冻干燥步骤可采用常规的真空冷冻方法，例如在-18至-15℃、0.4-0.6个大气压下进行。
综上所述，根据本发明的提取灵芝多糖的方法能够使灵芝孢子粉中灵芝多糖的提取率提高至1.8％以上，并且提取得到的灵芝多糖具有更强的抗氧化能力，即DPPH清除率可达到85％以上。
为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚明白，以下结合具体实施例，对本发明作进一步的详细说明。
下述实施例中所用方法如无特别说明均为常规方法，所用的试剂如无特别说明均为可商购的试剂。
实施例
实施例1
称取灵芝孢子粉3g，加45mL蒸馏水，浸泡30min；
将超高压破壁提取压力控制在100MPa、提取时间15min、提取温度30℃，得到提取液；
将提取液在6℃、0.5个大气压下进行2倍真空浓缩，得到浓缩液；
向浓缩液加入3倍体积的无水乙醇溶液，在4℃冰箱中静置过夜后，抽滤，得到沉淀；
依次用无水乙醇溶液、丙酮、乙醚洗涤沉淀2次；
在-15℃、0.5个大气压下真空冷冻干燥洗涤后的沉淀，得到灵芝多糖。
实施例2
称取灵芝孢子粉3g，加45mL蒸馏水，浸泡45min；
将超高压破壁提取压力控制在300MPa、提取时间25min、提取温度20℃，得到提取液；
将提取液在6℃、0.5个大气压下进行2倍真空浓缩，得到浓缩液；
向浓缩液加入3倍体积的无水乙醇溶液，在4℃冰箱中静置过夜后，抽滤，得到沉淀；
依次用无水乙醇溶液、丙酮、乙醚洗涤沉淀2次；
在-15℃、0.5个大气压下真空冷冻干燥洗涤后的沉淀，得到灵芝多糖。
实施例3
称取灵芝孢子粉3g，加45mL蒸馏水，浸泡60min；
将超高压破壁提取压力控制在500MPa、提取时间25min、提取温度25℃，得到提取液；
将提取液在6℃、0.5个大气压下进行2倍真空浓缩，得到浓缩液；
向浓缩液加入3倍体积的无水乙醇溶液，在4℃冰箱中静置过夜后，抽滤，得到沉淀；
依次用无水乙醇溶液、丙酮、乙醚洗涤沉淀3次；
在-15℃、0.5个大气压下真空冷冻干燥洗涤后的沉淀，得到灵芝多糖。
对比例1
称取灵芝孢子粉3g，加45mL蒸馏水，浸泡45min；
将超高压破壁提取压力控制在0MPa、提取时间20min、提取温度20℃，得到提取液；
将提取液在6℃、0.5个大气压下进行2倍真空浓缩，得到浓缩液；
向浓缩液加入3倍体积的无水乙醇溶液，在4℃冰箱中静置过夜后，抽滤，得到沉淀；
依次用无水乙醇溶液、丙酮、乙醚洗涤沉淀3次；
在-15℃、0.5个大气压下真空冷冻干燥洗涤后的沉淀，得到灵芝多糖。
灵芝孢子粉多糖提取率的检测方法
1.葡萄糖标准曲线的绘制
精确称取干燥至恒重的葡萄糖标准品200mg置于100mL容量瓶中，加蒸馏水溶解并稀释至刻度，准确吸取10mL置100mL容量瓶中，稀释至刻度，即得浓度为0.2mg/mL的葡萄糖标准品溶液。
精确称取蒽酮0.1g，置棕色瓶中，加入100mL 80％的硫酸溶液溶解，摇匀，放冰箱中备用。
分别精确吸取0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.4mL葡萄糖标准品溶液置于25mL干燥的具塞比色管中，加蒸馏水至2.0mL，精确加入硫酸蒽酮溶液6mL，摇匀，置沸水浴中加热15min取出，放入冷水浴中15min，放至室温。
以2.0mL水按同样显色操作作为空白对照。采用紫外可见分光光度计在625nm波长处测吸光度。以葡萄糖浓度为横坐标(x/mg/mL)，以提取率为纵坐标(Y)绘制标准曲线，得到回归方程30.923x+0.021，r＝0.9986。
2.灵芝多糖的提取称取灵芝粉末约3g，加45mL蒸馏水，称定质量，将灵芝孢子粉浸泡30min后，进行超高压辅助破壁提取，过滤，取滤液，真空冷冻干燥得灵芝粗多糖。
灵芝多糖提取率的计算
(1)换算因子的计算。精确称取干燥至恒重的灵芝粗多糖40mg置50mL容量瓶中，加蒸馏水溶解并稀释至刻度，摇匀，精确吸取2mL置于25mL干燥的具塞比色管中，另取2mL蒸馏水作空白对照，按“1”方法操作，测定多糖浓度，按公式(1)计算换算因子f。
(2)提取率的计算。精确量取样品提取液5mL置于25mL容量瓶中加蒸馏水稀释至刻度吸取待测多糖溶液2.0mL于干燥的具塞比色管，按“1”方法操作，测定多糖浓度。计算灵芝多糖提取率。
f＝m糖(C糖×D) (1)
灵芝多糖提取率＝C样×D×f×l00×100％/m样 (2)
式中，m糖表示灵芝多糖的质量(mg)；C糖表示灵芝多糖溶液中的葡萄糖浓度(mg/mL)；D表示稀释倍数：C样表示样品溶液中的葡萄糖浓度(mg/mL)；m样表示灵芝样品质量(mg)。
DPPH由基清除能力测定
取两种方法提取的多酚冻干粉末样品和VC用PBS溶液配置成不同浓度溶液待测。配制0.2mmol/L DPPH乙醇溶液，放在避光低温条件下保存，在96孔板中加入100μL DPPH乙醇溶液及100μL样品溶液，在室温避光放置30min，于517nm波长下用测定吸光值A1；将DPPH乙醇溶液用等体积的无水乙醇代替，其他操作相同，测定吸光值A2；将样品溶液用等体积无水乙醇溶液代替，其他操作相同，测定吸光值A0。
DPPH自由基清除能力(％)＝(1-(A1-A2)/A0×100 (3)
根据以上方法对实施例1-3和对比例1的提取样品测定提取率和DPPH由基清除，结果分别如图1和图2所示。由图1和图2可看出，根据本发明的方法能够使灵芝孢子粉中灵芝多糖的提取率达到1.8％以上，并且提取得到的灵芝多糖具有更强的抗氧化能力，即DPPH清除率可达到85％以上。
以上所述仅仅是本发明的优选实施方式。应当指出的是，在不脱离本发明的精神和实质的情况下，本领域技术人员可对本发明的细节和特征进行各种修改、组合、变更或替换。这些修改、组合、变更或替换也应理解为包括在本发明要求保护的范围之内。
Claims (10)
1.一种破壁提取灵芝多糖的方法，其特征在于，包括以下步骤：
将灵芝孢子粉浸泡在水中，得到悬浮液；
对所述悬浮液进行超高压破壁提取，得到提取液。
2.根据权利要求1所述的方法，所述灵芝孢子粉与水的质量体积比为每克灵芝孢子粉添加15mL水。
3.根据权利要求1所述的方法，所述浸泡为在室温下浸泡30～60分钟。
4.根据权利要求1所述的方法，所述超高压破壁提取的温度为20～30℃。
5.根据权利要求1所述的方法，所述超高压破壁提取的压力为100～600MPa。
6.根据权利要求1所述的方法，所述超高压破壁提取的时间为15～25分钟。
7.根据权利要求1所述的方法，在超高压破壁提取后还包括对提取液进行真空浓缩，得到浓缩液。
8.根据权利要求7所述的方法，还包括向所述浓缩液加入无水乙醇，静置过夜后，抽滤，得到沉淀。
9.根据权利要求8所述的方法，所述沉淀依次用无水乙醇、丙酮和乙醚洗涤，并真空冷冻干燥。
10.根据权利要求8所述的方法，真空浓缩的倍数为2-4倍，向所述浓缩液添加的无水乙醇的体积为浓缩液体积的3倍。
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| CN202011253162.8A CN114478811A (zh) | 2020-11-11 | 2020-11-11 | 一种破壁提取灵芝多糖的方法 |
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Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN115725005A (zh) * | 2022-12-19 | 2023-03-03 | 西藏天虹科技股份有限责任公司 | 高纯度灵芝多糖的制备方法 |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101357951A (zh) * | 2008-09-19 | 2009-02-04 | 南方李锦记有限公司 | 利用超高压提取灵芝子实体多糖的方法 |
| CN107857828A (zh) * | 2017-12-08 | 2018-03-30 | 大兴安岭林格贝寒带生物科技股份有限公司 | 一种利用超高压技术提取灵芝中灵芝多糖的方法 |
| CN111620961A (zh) * | 2020-06-28 | 2020-09-04 | 厦门大学 | 一种从灵芝孢子粉中提取灵芝多糖的方法 |
-
2020
- 2020-11-11 CN CN202011253162.8A patent/CN114478811A/zh active Pending
Patent Citations (3)
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