CN102295709B - 一种浅色高分子量灵芝多糖及其制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了一种浅色高分子量灵芝多糖及其制备方法。该浅色高分子量灵芝多糖是通过灵芝粗多糖的提取、灵芝粗提液的浓缩、乙醇沉淀及洗涤、干燥的方法制备得到。本发明所制备的灵芝多糖质量稳定、有效成份含量高、可明显增强巨噬细胞的吞噬杀伤能力，从而增强机体的抗肿瘤能力。

Description

一种浅色高分子量灵芝多糖及其制备方法
技术领域
本发明涉及药用真菌提取领域，具体地说涉及一种浅色高分子量灵芝多糖及其制备方法。
背景技术
灵芝在我国是一种沿用已久的传统药用真菌，其包括赤芝(Ganoderma lucidum)和紫芝，作为药用，赤芝更常用。大量的研究表明灵芝多糖是其主要活性成分之一，具有免疫调节、抗肿瘤、抗病毒、抗氧化、降血糖和保肝等药理作用。
目前市场上灵芝多糖类的保健产品越来越多，但由于灵芝中含有的多糖成分复杂，加上提取方式粗糙、精深加工成本高等原因，使得目前以灵芝为原料的保健产品都不是用纯化后的灵芝活性成分制成，这导致产品的质量难以控制和产品效果不稳定。
常规水提法获得的灵芝粗产品中含有色素、蛋白及小分子杂质，使得多糖产品颜色较深且多糖含量不高，现有的脱色、脱蛋白技术较为复杂，需要活性炭、过氧化氢甚至氯仿、正丁醇等有机溶剂的处理，会造成多糖的损失，甚至造成有害有机溶剂的残留，不利于规模化生产和提高产品的品质，所得产品的多糖含量也仅达到50％左右，纯度不高。
灵芝大分子多糖成分的免疫调节作用已有大量的研究报道，并可通过提高机体的免疫功能而达到抗癌作用，是灵芝抗癌作用的主要有效成分之一。
发明内容
本发明所要解决的技术问题在于提供一种浅色高分子量灵芝多糖及其制备方法。
本发明首先提供了一种浅色高分子量灵芝多糖，其是由如下方法制备得到的：
①灵芝粗多糖的提取：以灵芝子实体为原料，粉碎成粗粒，加入10-15倍重量的水中，常温浸泡30-60分钟，加热至沸腾，保持60-120分钟，过滤；滤渣可再重复上述步骤，提取1-2次，并合并滤液；
②灵芝粗提液的浓缩：滤液用50-200目的滤网粗滤，再用100微米的膜过滤，滤液减压浓缩至料液比(质量/体积，单位：千克/升)为1∶1-1∶2；
③乙醇沉淀及洗涤：向上述滤液中加入无水乙醇，至乙醇含量达到20％-30％，室温静置4-6小时，离心去除醇沉上清，收集沉淀，用20％-30％的乙醇洗涤沉淀2-3次；
④干燥：沉淀加水溶解，挥干乙醇后冷冻干燥即获得所需的浅色高分子量灵芝多糖。
本发明还提供了制备上述浅色高分子量灵芝多糖的方法，具体包含如下步骤：
①灵芝粗多糖的提取：以灵芝子实体为原料，粉碎成粗粒，加入10-15倍重量的水中，常温浸泡30-60分钟，加热至沸腾，保持60-120分钟，过滤；滤渣可再重复上述步骤，提取1-2次，并合并滤液；
②灵芝粗提液的浓缩：滤液用50-200目的滤网粗滤，再用100微米的膜过滤，滤液减压浓缩至料液比(质量/体积，单位：千克/升)为1∶1-1∶2；
③乙醇沉淀及洗涤：向上述滤液中加入无水乙醇，至乙醇含量达到20％-30％，室温静置4-6小时，离心去除醇沉上清，收集沉淀，用20％-30％的乙醇洗涤沉淀2-3次；
④干燥：沉淀加水溶解，挥干乙醇后冷冻干燥即获得所需的浅色高分子量灵芝多糖。
本发明所制备的灵芝多糖质量稳定、有效成份含量高、分子量较大且色素少，高效液相色谱分析显示多糖分子量大且分布均一，多糖含量大大提高，超过70％。其制备方法是一种简便、快速、高效、成本低、无污染、多糖纯度高的适合规模化生产的方法。并且本发明所制备的灵芝多糖对RAW264.7巨噬细胞株释放NO有明显的促进作用，可明显增强巨噬细胞的吞噬杀伤能力，从而增强机体的抗肿瘤能力。
灵芝中含有多种多糖成分，分子量的大小也各不相同，其活性也各不相同，本发明有效地富集了高活性的大分子量灵芝多糖，且所得多糖产品色浅，糖含量高，省去后续处理工艺，易于进行规模化生产。
附图说明
图1：灵芝多糖体外刺激巨噬细胞释放NO的活性测定结果
具体实施方式：
实施例1：
1、灵芝粗多糖的提取：以赤芝子实体(上海市农科院食用菌研究所菌种保藏中心保藏的菌种编号为2442的灵芝菌种，经人工栽培获得)为原料，粉碎成粗粒，称取2kg，加入20L水，室温浸泡30min，加热至沸腾，保持微沸90min，过滤。滤渣重复上述步骤，再提取2次，合并滤液。
2、灵芝粗提液的浓缩：滤液用120目的滤网(购自上海新华丝网商店)粗滤，再用100微米的膜(购自上海弗立特公司)过滤，过滤液减压浓缩至3L。
3、乙醇沉淀及洗涤：向浓缩液中缓慢加入无水乙醇，边加边搅拌，至乙醇含量达到20％，室温静置6h，离心去除醇沉上清，收集沉淀，用30％的乙醇洗涤沉淀2次。
4、冷冻干燥：沉淀加水溶解，挥干乙醇后置于-20℃冰箱中冻存2h，然后再放到-80℃冰箱中冷冻3h，最后放入冷冻干燥机中冻干，即获得所需的高分子量灵芝多糖。
多糖含量的检测：
用苯酚-硫酸法测定，精密称取本品10mg置100ml容量瓶中，加水约80ml，加热助溶后冷却至室温，在100ml容量瓶中定容。精密吸取样品1.0ml，置15ml试管中，分别加入苯酚、硫酸试剂，充分反应后在490nm处测定吸光度值，以葡聚糖为标准品计算样品的糖含量。制备所得灵芝多糖的多糖含量为74.21％。
实施例2：
1、灵芝粗多糖的提取：以赤芝子实体(上海市农科院食用菌研究所菌种保藏中心保藏的菌种编号为灵芝2442的菌种，经人工栽培获得)为原料，粉碎成粗粒，称取1.5kg，加入20L水，室温浸泡30min，加热至沸腾，保持微沸60min，过滤。滤渣重复上述步骤，再提取1次，合并滤液。
2、灵芝粗提液的浓缩：滤液用120目的滤网(购自上海新华丝网商店)粗滤，再用100微米的膜(购自上海弗立特公司)过滤，过滤液减压浓缩至2L。
3、乙醇沉淀及洗涤：向浓缩液中缓慢加入无水乙醇，边加边搅拌，至乙醇含量达到25％，室温静置4h，离心去除醇沉上清，收集沉淀，用30％的乙醇洗涤沉淀3次。
4、冷冻干燥：沉淀加水溶解，挥干乙醇后置于-20℃冰箱中冻存3h，然后再放到-80℃冰箱中冷冻3h，最后放入冷冻干燥机中冻干，即获得所需的高分子量灵芝多糖。
多糖含量的检测：
用苯酚-硫酸法测定，精密称取本品10mg置100ml容量瓶中，加水约80ml，加热助溶后冷却至室温，在100ml容量瓶中定容。精密吸取样品1.0ml，置15ml试管中，分别加入苯酚、硫酸试剂，充分反应后在490nm处测定吸光度值，以葡聚糖为标准品计算样品的糖含量。制备所得灵芝多糖的多糖含量为73.47％。
实施例3：
灵芝多糖体外刺激巨噬细胞释放NO的活性测定：
1、样品准备：精确称取实施例1和实施例2中制备得到的灵芝多糖样品于灭过菌的eppendorf管中，用无菌的PBS配制成浓度5mg/mL的样品液。充分溶解后以15000r/min离心30min，无菌条件下将上清转移至新的无菌eppendorf管中，将样品稀释成2mg/ml、0.5mg/ml待用。
2、细胞培养：取对数生长期的RAW264.7巨噬细胞株(购自中科院细胞所)，用DMEM完全培养基(购自Gibco公司)在37℃、含5％CO2条件下传代培养，用0.05％胰酶或5％EDTA溶液消化，混悬液1000rpm/min离心3min后收集细胞，计数备用。
3、试剂配制及标准曲线绘制
Griess试剂的配制：在烧杯中加入6.25ml H3PO3，加入蒸馏水250ml，分别加入2.5g的sulfanilamide(4-氨基苯磺酰胺，Sigma公司)和0.25g的naphthyl ethylenediaminedihydrochloride(盐酸萘乙二胺，Sigma公司)用磁力搅拌器至全部溶解，棕色试剂瓶4℃冰箱保存。
标准曲线绘制：配成不同浓度的亚硝酸钠溶液，浓度梯度为0、5、10、15、20、25、30、35、40μM共九个；取100μL于96孔板孔，加入50μL Griess试剂，测定543nm吸光值，标准曲线每个浓度3个重复，根据吸光值绘制标准曲线。
4、样品刺激巨噬细胞释放NO量的测定：收集RAW264.7细胞，用无色RPMI1640培养基(购自Gibco公司)(10％胎牛血清+1％抗生素液体)将细胞稀释至5×105/mL，加入96孔板，每孔加入180μL，然后再加入20μL待测样品，使得样品终浓度依次为500μg/ml，200μg/ml和50μg/ml，阳性对照为LPS(终浓度为1μg/mL)，阴性对照为PBS，37℃培养48小时。取100μL上清于96孔板孔，加入50μl Griess试剂，室温孵浴10分钟，测定543nm吸光值。根据标准曲线计算细胞NO的释放量。
结果见附图1，由此结果可以看出，实施例1和实施例2所得的灵芝多糖对RAW264.7巨噬细胞株释放NO有明显的促进作用，可明显增强巨噬细胞的吞噬杀伤能力，从而增强机体的抗肿瘤能力。

Claims (1)

1..一种浅色高分子量灵芝多糖，其特征在于由如下方法制备得到：
①灵芝粗多糖的提取：以灵芝子实体为原料，粉碎成粗粒，加入10-15倍重量的水中，常温浸泡30-60分钟，加热至沸腾，保持60-120分钟，过滤；滤渣可再重复上述步骤，提取1-2次，并合并滤液；
②灵芝粗提液的浓缩：滤液用50-200目的滤网粗滤，再用100微米的膜过滤，滤液减压浓缩至料液比为1∶1-1∶2；
③乙醇沉淀及洗涤：向上述滤液中加入无水乙醇，至乙醇含量达到20％-30％，室温静置4-6小时，离心去除醇沉上清，收集沉淀，用20％-30％的乙醇洗涤沉淀2-3次；
④干燥：沉淀加水溶解，挥干乙醇后冷冻干燥即获得所需的浅色高分子量灵芝多糖。
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CN103859252A (zh) * 2012-12-11 2014-06-18 镇江市丹徒区南山溪园茶叶专业合作社 一种解酒护肝胶囊的配方及加工工艺
CN104059162B (zh) * 2014-06-25 2016-03-23 上海市农业科学院 一种灵芝多糖及其制备方法
CN104193840B (zh) * 2014-07-31 2016-08-31 上海市农业科学院 一种灵芝孢子粉多糖及其制备方法
CN104789528B (zh) * 2015-03-31 2017-11-14 南京邮电大学 十二烷基癸烯酸bdsf在提升raw264.7巨噬细胞吞噬能力中的应用
CN104710543A (zh) * 2015-04-07 2015-06-17 上海市农业科学院 一种高分子量杏鲍菇多糖及其制备方法
CN107556393A (zh) * 2017-08-07 2018-01-09 华南理工大学 一种灵芝药渣的热水除糖方法及产品
CN116268254A (zh) * 2022-08-26 2023-06-23 广西师范大学 一种具有保健功能的仿野生全灵芝泡腾片及其制备方法

Family Cites Families (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
MX2008012066A (es) * 2006-03-23 2008-10-07 Herbalscience Singapore Pte Ltd Extractos y metodos que comprenden especies de ganoderma.
CN101693745B (zh) * 2009-09-01 2012-02-01 广东神农烟科技术有限公司 灵芝多糖及其提取方法、添加灵芝多糖的卷烟及其制备方法

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