CN114450024A - 抗cd39抗体组合物和方法 - Google Patents

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Abstract

本发明提供抗CD39抗体组合物和它们于治疗癌症的用途。在一些实施方案中，提供经分离的抗CD39抗体。此一经分离的抗CD39抗体结合到人CD39，其中所述抗体任选地是全人抗体或人源化抗体。在一些实施方案中，本公开提供增强、增加和/或持续受试者中的抗肿瘤免疫反应的方法，所述方法包括向患有肿瘤的受试者施用本文所述的抗体或组合物。

Description

抗CD39抗体组合物和方法
相关申请
本申请要求于2019年9月16日提交的美国临时申请第62/901,153号和于2019年9月18日提交的美国临时申请第62/902,285号和于2019年11月7日提交的美国临时申请第62/932,249号和于2019年11月15日提交的美国临时申请第62/935,969号和于2020年2月12日提交的美国临时申请第62/975,519号和于2020年3月31日提交的美国临时申请第63/003,191号和于2020年9月8日提交的美国临时申请第63/075,567号的优先权益，所述美国临时申请都是通过引用以其整体并入。
序列表
本申请含有以ASCII格式电子提交的序列表且它通过引用以其整体并入本文中。所述ASCII副本于2020年9月9日创建，命名为2020-09-09_01219-0005-00-PCT_ST25.txt且大小为1,641,716个字节。
技术领域
提供抗CD39抗体以及它们在增强、增加和持续抗肿瘤免疫反应、减少肿瘤微环境中细胞外腺苷的量和治疗癌症方面的用途。
背景技术
免疫系统通过抑制路径起作用以阻止癌细胞生长。癌症使用各种机制来破坏免疫抑制路径从而避免被免疫细胞识别和消除，并允许疾病进展。免疫疗法通过直接刺激排斥型过程或通过阻断抑制路径来改变患者的免疫系统，从而对抗癌症。
腺苷是肿瘤微环境(TME)内的免疫调节代谢物，它干扰免疫系统的抗肿瘤反应。在一些癌症中，细胞外腺苷积累并随后抑制免疫细胞的功能，所述免疫细胞包括T细胞、树突细胞(DC)和自然杀手(NK)细胞，从而有助于抗肿瘤免疫抑制并支持肿瘤生长。
胞外核苷酸酶CD39水解细胞外腺苷三磷酸(ATP)和腺苷二磷酸(ADP)以产生腺苷单磷酸(AMP)，所述腺苷单磷酸然后被CD73转化为腺苷。细胞外腺苷结合到免疫细胞上的腺苷受体，从而抑制免疫系统。CD39的过表达与患有某些类型的癌症的患者中的预后不良有关。在TME内，腺苷路径是指ATP向腺苷的细胞外转化和腺苷通过免疫细胞上的A2A/A2B腺苷受体的信号传导。在正常条件下，CD39起作用以维持免疫抑制腺苷和免疫刺激ATP的细胞外水平的平衡。在健康组织中，ATP因被CD39快速分解和被CD73转化成腺苷而在细胞外环境中几乎检测不到。在包括癌症在内的细胞应激条件下，细胞外ATP水平显著升高，产生高水平的腺苷，所述腺苷用于抑制免疫系统对肿瘤的识别和抗肿瘤反应。
仍迫切需要开发新颖癌症疗法。也需要与现有疗法和治疗方案的新颖组合以更有效地抵抗各种癌症。
发明内容
在一些实施方案中，提供经分离的抗CD39抗体。此一经分离的抗CD39抗体结合到人CD39，其中抗体任选地是全人抗体或人源化抗体。
在一些实施方案中，本公开提供经分离抗体，所述经分离抗体包含：
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(a)包含SEQ ID NO:10001的氨基酸序列的HCDR1；(b)包含SEQ ID NO:10002的氨基酸序列的HCDR2；(c)包含SEQ ID NO:10003的氨基酸序列的HCDR3；(d)包含SEQ ID NO:10004的氨基酸序列的LCDR1；(e)包含SEQ ID NO:10005的氨基酸序列的LCDR2；和(f)包含SEQ ID NO:10006的氨基酸序列的LCDR3；或
(a)包含SEQ ID NO:20001的氨基酸序列的HCDR1；(b)包含SEQ ID NO:20002的氨基酸序列的HCDR2；(c)包含SEQ ID NO:20003的氨基酸序列的HCDR3；(d)包含SEQ ID NO:20004的氨基酸序列的LCDR1；(e)包含SEQ ID NO:20005的氨基酸序列的LCDR2；和(f)包含SEQ ID NO:20006的氨基酸序列的LCDR3；或
(a)包含SEQ ID NO:30001的氨基酸序列的HCDR1；(b)包含SEQ ID NO:30002的氨基酸序列的HCDR2；(c)包含SEQ ID NO:30003的氨基酸序列的HCDR3；(d)包含SEQ ID NO:30004的氨基酸序列的LCDR1；(e)包含SEQ ID NO:30005的氨基酸序列的LCDR2；和(f)包含SEQ ID NO:30006的氨基酸序列的LCDR3。
在一些实施方案中，抗体包含重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)，其中：
VH与SEQ ID NO:12的氨基酸序列至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一且VL与SEQ ID NO:18的氨基酸序列至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一；或
VH与SEQ ID NO:112的氨基酸序列至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一且VL与SEQ ID NO:118的氨基酸序列至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一；或
VH与SEQ ID NO:212的氨基酸序列至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一且VL与SEQ ID NO:218的氨基酸序列至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一；或
VH与SEQ ID NO:312的氨基酸序列至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一且VL与SEQ ID NO:318的氨基酸序列至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一；或
VH与SEQ ID NO:412的氨基酸序列至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一且VL与SEQ ID NO:418的氨基酸序列至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一；或
VH与SEQ ID NO:512的氨基酸序列至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一且VL与SEQ ID NO:518的氨基酸序列至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一；或
VH与SEQ ID NO:612的氨基酸序列至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一且VL与SEQ ID NO:618的氨基酸序列至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一；或
VH与SEQ ID NO:712的氨基酸序列至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一且VL与SEQ ID NO:718的氨基酸序列至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一；或
VH与SEQ ID NO:812的氨基酸序列至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一且VL与SEQ ID NO:818的氨基酸序列至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一；或
VH与SEQ ID NO:912的氨基酸序列至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一且VL与SEQ ID NO:918的氨基酸序列至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一；或
VH与SEQ ID NO:1012的氨基酸序列至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一且VL与SEQ ID NO:1018的氨基酸序列至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一；或
VH与SEQ ID NO:2012的氨基酸序列至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一且VL与SEQ ID NO:2018的氨基酸序列至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一；或
VH与SEQ ID NO:3012的氨基酸序列至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一且VL与SEQ ID NO:3018的氨基酸序列至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一；或
VH与SEQ ID NO:4012的氨基酸序列至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一且VL与SEQ ID NO:4018的氨基酸序列至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一；或
VH与SEQ ID NO:5012的氨基酸序列至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一且VL与SEQ ID NO:5018的氨基酸序列至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一；或
VH与SEQ ID NO:6012的氨基酸序列至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一且VL与SEQ ID NO:6018的氨基酸序列至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一；或
VH与SEQ ID NO:7012的氨基酸序列至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一且VL与SEQ ID NO:7018的氨基酸序列至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一；或
VH与SEQ ID NO:8012的氨基酸序列至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一且VL与SEQ ID NO:8018的氨基酸序列至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一；或
VH与SEQ ID NO:9012的氨基酸序列至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一且VL与SEQ ID NO:9018的氨基酸序列至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一；或
VH与SEQ ID NO:10012的氨基酸序列至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一且VL与SEQ ID NO:10018的氨基酸序列至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一；或
VH与SEQ ID NO:20012的氨基酸序列至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一且VL与SEQ ID NO:20018的氨基酸序列至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一；或
VH与SEQ ID NO:30012的氨基酸序列至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一且VL与SEQ ID NO:30018的氨基酸序列至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一。
在一些实施方案中，抗体包含如本文所述的6个CDR(HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3)，以及与本文所述的VH和/或VL氨基酸序列至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一的VH和/或VL序列。在一些实施方案中，VH和/或VL序列与本文所述的氨基酸序列并非100％同一。在一些实施方案中，抗体包含本文所述的HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3氨基酸序列，以及VH和/或VL序列内在CDR序列之外的序列变化。在此类实施方案中，VH和/或VL序列的序列变化处于VH和/或VL的一个或多个框架区内。
在一些实施方案中，抗体包含与本文所述的氨基酸序列至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一的VH和/或VL序列。在一些实施方案中，VH和/或VL序列与本文所述的氨基酸并非100％同一。在此类实施方案中，除非另有说明，否则VH和/或VL序列的序列变化处于CDR序列内和/或CDR序列外。
在一些实施方案中，抗体包含重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)，其中：
VH包含SEQ ID NO:12的氨基酸序列且VL包含SEQ ID NO:18的氨基酸序列；或
VH包含SEQ ID NO:112的氨基酸序列且VL包含SEQ ID NO:118的氨基酸序列；或
VH包含SEQ ID NO:212的氨基酸序列且VL包含SEQ ID NO:218的氨基酸序列；或
VH包含SEQ ID NO:312的氨基酸序列且VL包含SEQ ID NO:318的氨基酸序列；或
VH包含SEQ ID NO:412的氨基酸序列且VL包含SEQ ID NO:418的氨基酸序列；或
VH包含SEQ ID NO:512的氨基酸序列且VL包含SEQ ID NO:518的氨基酸序列；或
VH包含SEQ ID NO:612的氨基酸序列且VL包含SEQ ID NO:618的氨基酸序列；或
VH包含SEQ ID NO:712的氨基酸序列且VL包含SEQ ID NO:718的氨基酸序列；或
VH包含SEQ ID NO:812的氨基酸序列且VL包含SEQ ID NO:818的氨基酸序列；或
VH包含SEQ ID NO:912的氨基酸序列且VL包含SEQ ID NO:918的氨基酸序列；或
VH包含SEQ ID NO:1012的氨基酸序列且VL包含SEQ ID NO:1018的氨基酸序列；或
VH包含SEQ ID NO:2012的氨基酸序列且VL包含SEQ ID NO:2018的氨基酸序列；或
VH包含SEQ ID NO:3012的氨基酸序列且VL包含SEQ ID NO:3018的氨基酸序列；或
VH包含SEQ ID NO:4012的氨基酸序列且VL包含SEQ ID NO:4018的氨基酸序列；或
VH包含SEQ ID NO:5012的氨基酸序列且VL包含SEQ ID NO:5018的氨基酸序列；或
VH包含SEQ ID NO:6012的氨基酸序列且VL包含SEQ ID NO:6018的氨基酸序列；或
VH包含SEQ ID NO:7012的氨基酸序列且VL包含SEQ ID NO:7018的氨基酸序列；或
VH包含SEQ ID NO:8012的氨基酸序列且VL包含SEQ ID NO:8018的氨基酸序列；或
VH包含SEQ ID NO:9012的氨基酸序列且VL包含SEQ ID NO:9018的氨基酸序列；或
VH包含SEQ ID NO:10012的氨基酸序列且VL包含SEQ ID NO:10018的氨基酸序列；或
VH包含SEQ ID NO:20012的氨基酸序列且VL包含SEQ ID NO:20018的氨基酸序列；或
VH包含SEQ ID NO:30012的氨基酸序列且VL包含SEQ ID NO:30018的氨基酸序列。
在一些实施方案中，抗体是克隆1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21或22或其CD39结合片段。在一些实施方案中，抗体是克隆22。
在一些实施方案中，抗体是单克隆抗体。在一些实施方案中，抗体是人源化抗体。在一些实施方案中，抗体是全人抗体。在一些实施方案中，抗体是抗体片段，其中抗体片段结合CD39。在一些实施方案中，抗体是选自以下的抗体片段：Fab、Fab’、Fv、scFv或(Fab’)2。在一些实施方案中，抗体是全长抗体。在一些实施方案中，经分离抗体包含IgG1、IgG2、IgG3或IgG4 Fc区。在一些实施方案中，抗体包含人IgG1重链恒定区。在一些实施方案中，抗体包含人IgG4重链恒定区。在一些实施方案中，抗体包含突变体人IgG4重链恒定区。在一些实施方案中，突变体IgG4恒定区包含选自以下的突变：根据EU编号编号的Ser228处的取代、Leu235处的取代、Asn297处的取代或其组合。在一些实施方案中，突变体IgG4重链恒定区包含S228P取代。在一些实施方案中，抗体包含SEQ ID NO:40002的重链恒定区。在一些实施方案中，抗体包含SEQ ID NO:40003的重链恒定区。在一些实施方案中，抗体包含人κ轻链。
在一些实施方案中，本公开提供组合物，所述组合物包含本文所公开的抗体和医药学上可接受的载体。
在一些实施方案中，抗体结合并抑制CD39。在一些实施方案中，抗体减小或抑制人CD39的酶活性。在一些实施方案中，抗体结合到重组CD39和/或结合到膜结合的人CD39。在一些实施方案中，抗体以小于10nM的平衡解离常数(KD)结合到人CD39。在一些实施方案中，与人CD39结合的KD为约1.11nM。在一些实施方案中，抗体结合到人CD39和食蟹猴CD39但不与小鼠CD39或大鼠CD39结合。在一些实施方案中，抗体抑制或减少人CD39将细胞外腺苷三磷酸(eATP)或细胞外腺苷二磷酸(eADP)转化为细胞外腺苷单磷酸(eAMP)。在一些实施方案中，抗体增加eATP的量。在一些实施方案中，抗体降低或减少细胞外腺苷的量。在一些实施方案中，抗体维持、增加或增强eATP的免疫刺激水平。在一些实施方案中，抗体拮抗组织肿瘤微环境中的人CD39。在一些实施方案中，抗体与食蟹猴CD39交叉反应。在一些实施方案中，抗体增加或增强淋巴细胞的增殖。在一些实施方案中，抗体增加或增强肿瘤中的巨噬细胞浸润。在一些实施方案中，抗体在正常或癌性组织内结合到CD39且抑制CD39。在一些实施方案中，组织处于子宫、子宫颈、肺、前列腺、乳房、头、颈、结肠或卵巢中。在一些实施方案中，组织处于子宫中。在一些实施方案中，在子宫内，抗体抑制子宫肌层中的CD39。
在一些实施方案中，提供抑制组织中的CD39活性的方法，其中抗体包含(a)包含SEQ ID NO:30001的氨基酸序列的HCDR1；(b)包含SEQ ID NO:30002的氨基酸序列的HCDR2；(c)包含SEQ ID NO:30003的氨基酸序列的HCDR3；(d)包含SEQ ID NO:30004的氨基酸序列的LCDR1；(e)包含SEQ ID NO:30005的氨基酸序列的LCDR2；和(f)包含SEQ ID NO:30006的氨基酸序列的LCDR3。在一些实施方案中，抑制组织中的CD39活性的抗体包含SEQ ID NO:30012的可变重链和SEQ ID NO:30018的可变轻链。在一些实施方案中，抑制组织中的CD39活性的抗体包含SEQ ID NO:30019的重链。在一些实施方案中，抑制组织中的CD39活性的抗体包含30021的轻链。在一些实施方案中，抑制组织中的CD39活性的抗体包含SEQ ID NO:30019的重链和30021的轻链。在一些实施方案中，抑制组织中的CD39活性的抗体是克隆22。
在一些实施方案中，本公开提供增强、增加和/或持续受试者中的抗肿瘤免疫反应的方法，所述方法包括向患有肿瘤的受试者施用本文所述的抗体或组合物。
在一些实施方案中，本公开提供治疗受试者的癌症的方法，所述方法包括向患有癌症的受试者施用本文所述的抗体或组合物。在一些实施方案中，本公开提供抑制患有癌症的受试者组织中的CD39的方法，所述方法包括施用本文所述的抗体或组合物，其中与施用前组织中的CD39活性或CD39的总量相比，所述施用减小组织中的CD39活性或CD39的总量。在一些实施方案中，本公开提供防止患有癌症的受试者组织中CD39介导的eATP和eADP向细胞外腺苷转化的方法，所述方法包括施用本文所述的抗体或组合物，其中所述施用减小组织的肿瘤微环境内的细胞外腺苷水平。在一些实施方案中，本公开提供抑制患有癌症的受试者组织中的CD39活性的方法，所述方法包括施用本文所述的抗体或组合物，其中所述施用改良引起针对肿瘤细胞的免疫反应的能力。
在一些实施方案中，癌症为癌瘤、淋巴瘤、母细胞瘤、肉瘤或白血病。在一些实施方案中，癌症为鳞状细胞癌、小细胞肺癌、脑垂体癌、食道癌、星形细胞瘤、软组织肉瘤、非小细胞肺癌(包括鳞状细胞非小细胞肺癌)、肺腺癌、肺鳞状癌、腹膜癌、肝细胞癌、胃肠癌、胰腺癌、神经胶母细胞瘤、子宫颈癌、卵巢癌、肝癌(liver cancer)、膀胱癌、肝细胞瘤、乳腺癌、结肠癌、结肠直肠癌、子宫内膜癌或子宫癌、唾液腺癌、肾癌、肾细胞癌、肝癌、前列腺癌、外阴癌、甲状腺癌、肝癌(hepatic carcinoma)、脑癌、子宫内膜癌、睾丸癌、胆管癌、胆囊癌、胃癌、黑色素瘤或各种类型的头颈癌(包括头颈部鳞状细胞癌)。在一些实施方案中，癌症为胰腺癌。在一些实施方案中，癌症为胃癌。在一些实施方案中，癌症为前列腺癌。在一些实施方案中，癌症为子宫内膜癌。在一些实施方案中，癌症为非小细胞肺癌。在一些实施方案中，癌症为结肠直肠癌。在一些实施方案中，癌症为卵巢癌。
在一些实施方案中，癌症为晚期癌症。在一些实施方案中，癌症为复发性癌症。在一些实施方案中，癌症为难治性癌症。在一些实施方案中，癌症为转移性癌症。在一些实施方案中，癌症为实体肿瘤。在一些实施方案中，癌症为晚期实体肿瘤。在一些实施方案中，癌症为复发性实体肿瘤。在一些实施方案中，癌症为难治性实体肿瘤。在一些实施方案中，癌症为转移性实体肿瘤。在一些实施方案中，癌症为晚期实体肿瘤和/或复发性实体肿瘤和/或难治性实体肿瘤和/或转移性实体肿瘤。
在一些实施方案中，患有癌症的受试者在标准疗法期间或之后已经历疾病进展。在一些实施方案中，患有癌症的受试者不耐受标准疗法。在一些实施方案中，患有癌症的受试者不具基于研究者的判断可用于他们的适当疗法。
在一些实施方案中，本文所述的方法还包括施用第二疗法。在一些实施方案中，第二疗法是放射疗法、手术或施用第二剂。在一些实施方案中，第二疗法是施用化学疗法、调理剂或调控T细胞耗竭剂。在一些实施方案中，第二疗法是靶向抗癌疗法、溶瘤药物、细胞毒性剂、基于免疫的疗法、细胞因子、共刺激分子的活化剂、抑制分子的抑制剂、疫苗或细胞免疫疗法或其组合。在一些此类实施方案中，第二疗法是PD-1拮抗剂、PD-L1拮抗剂、CTLA-4拮抗剂、Lag-3拮抗剂、TIM-3拮抗剂、腺苷A2A受体(A2AR)拮抗剂、腺苷A2B受体(A2BR)拮抗剂、双重A2AR/A2BR拮抗剂、CD40抑制剂、CD73抑制剂、嵌合抗原受体(CAR)细胞疗法或其组合。在一些实施方案中，第二疗法是PD-1拮抗剂。在一些实施方案中，第二疗法是PD-L1拮抗剂。在一些实施方案中，第二疗法是CTLA-4拮抗剂。在一些实施方案中，第二疗法是Lag-3拮抗剂。在一些实施方案中，第二疗法是TIM-3拮抗剂。在一些实施方案中，第二疗法是腺苷A2AR拮抗剂。在一些实施方案中，第二疗法是腺苷A2BR拮抗剂。在一些实施方案中，第二疗法是A2AR/A2BR双重拮抗剂。在一些实施方案中，第二疗法是CD40抑制剂。在一些实施方案中，第二疗法是CD73抑制剂。在一些实施方案中，第二疗法是嵌合抗原受体(CAR)细胞疗法。在一些实施方案中，第二疗法是TIGIT拮抗剂、CD112R拮抗剂或CD96拮抗剂或其组合。在一些实施方案中，第二疗法是TIGIT拮抗剂。在一些实施方案中，第二疗法是CD112R拮抗剂。在一些实施方案中，第二疗法是CD96拮抗剂。在一些实施方案中，第二疗法是PVRL1拮抗剂、PVRL2拮抗剂、PVRL3拮抗剂、PVRL4拮抗剂或CD155拮抗剂或其组合。在一些实施方案中，第二疗法是PVRL1拮抗剂。在一些实施方案中，第二疗法是PVRL2拮抗剂。在一些实施方案中，第二疗法是PVRL3拮抗剂。在一些实施方案中，第二疗法是PVRL4拮抗剂。在一些实施方案中，第二疗法是CD155拮抗剂。在一些实施方案中，第二疗法是CD47拮抗剂或细胞因子IL-27拮抗剂或其组合。在一些实施方案中，第二剂是促炎症细胞因子、促炎症细胞因子的激动剂或细胞因子融合物(例如IL-15激动剂NKTR-214)。在一些实施方案中，第二疗法是CD47拮抗剂。在一些实施方案中，第二疗法是IL-27拮抗剂。在一些实施方案中，第二疗法是STING激动剂。在一些实施方案中，一种或多种其它疗法是蒽环。在一些实施方案中，蒽环选自多柔比星(doxorubicin)、道诺霉素(daunorubicin)、泛艾霉素(epirubicin)、伊达比星(idarubicin)和戊柔比星(valrubicin)。在一些实施方案中，蒽环是多柔比星。在一些实施方案中，拮抗剂是抗体。在一些实施方案中，第二疗法是吉西他滨(gemcitabine)和太平洋紫杉醇(paclitaxel)(包括白蛋白结合的太平洋紫杉醇)。在一些实施方案中，第二疗法是派姆单抗(pembrolizumab)。在其它实施方案中，第二疗法是A2AR拮抗剂、A2BR拮抗剂或双重A2AR/A2BR拮抗剂。
在一些实施方案中，本文所述的方法还包括施用第二疗法，其中第二疗法是CD47拮抗剂。在一些实施方案中，CD47拮抗剂是抗CD47抗体。在一些实施方案中，抗CD47抗体包含重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)，其中VH包含SEQ ID NO:40004的氨基酸序列且VL包含SEQ ID NO:40005的氨基酸序列。在一些实施方案中，抗CD47抗体包含：(a)包含SEQ IDNO:40006的氨基酸序列的HCDR1；(b)包含SEQ ID NO:40007的氨基酸序列的HCDR2；(c)包含SEQ ID NO:40008的氨基酸序列的HCDR3；(d)包含SEQ ID NO:40009的氨基酸序列的LCDR1；(e)包含SEQ ID NOL 40010的氨基酸序列的LCDR2；和(f)包含SEQ ID NO:40011的氨基酸序列的LCDR3。
在一些实施方案中，本文所述的方法还包括施用CD39抗体、第二疗法和第三疗法，在本文中也称为癌症疗法的三联组合。在一些实施方案中，癌症疗法的三联组合包含抗CD39抗体、化学治疗剂和PD-1拮抗剂。在一些实施方案中，癌症疗法的三联组合包含抗CD39抗体、化学治疗剂和PD-L1拮抗剂。在一些实施方案中，癌症疗法的三联组合包含抗CD39抗体、靶向腺苷轴的剂(例如CD73抑制剂或A2AR拮抗剂、A2BR拮抗剂或双重A2AR/A2BR拮抗剂)和PD-1拮抗剂。在一些实施方案中，癌症疗法的三联组合包含抗CD39抗体、靶向腺苷轴的剂(例如CD73抑制剂或A2AR拮抗剂、A2BR拮抗剂或双重A2AR/A2BR拮抗剂)和PD-L1拮抗剂。在一些实施方案中，癌症疗法的三联组合包含抗CD39抗体、CD73抑制剂和PD-1拮抗剂。在一些实施方案中，癌症疗法的三联组合包含抗CD39抗体、CD73抑制剂和PD-L1拮抗剂。在一些实施方案中，癌症疗法的三联组合包含抗CD39抗体、A2AR拮抗剂、A2BR拮抗剂或双重A2AR/A2BR拮抗剂和PD-1拮抗剂。在一些实施方案中，癌症疗法的三联组合包含抗CD39抗体、A2AR拮抗剂、A2BR拮抗剂或双重A2AR/A2BR拮抗剂和PD-L1拮抗剂。在一些实施方案中，癌症疗法的三联组合包含抗CD39抗体、靶向腺苷轴的剂(例如CD73抑制剂或A2AR拮抗剂、A2BR拮抗剂或双重A2AR/A2BR拮抗剂)和化学治疗剂。在一些实施方案中，癌症疗法的三联组合包含抗CD39抗体、CD73抑制剂和化学治疗剂。在一些实施方案中，癌症疗法的三联组合包含抗CD39抗体、A2AR拮抗剂、A2BR拮抗剂或双重A2AR/A2BR拮抗剂和化学治疗剂。
在一些实施方案中，本公开提供本文所述的抗体或组合物于增强和/或增加和/或持续抗肿瘤免疫反应和/或治疗癌症的用途。
在一些实施方案中，本公开提供本文所述的抗体或组合物于制备用于增强和/或增加和/或持续抗肿瘤免疫反应和/或治疗癌症的药物的用途。
在一些实施方案中，本公开提供编码本文所公开抗体的核酸。
在一些实施方案中，本公开提供包含编码本文所公开抗体的核酸的宿主细胞。
在一些实施方案中，本公开提供产生本文所公开抗体的方法，所述方法包括培养包含编码本文所公开抗体的核酸的宿主细胞，宿主细胞是在其中表达抗体的条件下进行培养。在一些实施方案中，所述方法还包括纯化抗体。
在一些实施方案中，本公开提供试剂盒，所述试剂盒包含本文所公开的抗体或组合物、编码本文所公开抗体的核酸、包含编码本文所公开抗体的核酸的宿主细胞或其任何组合。
本公开的例示性实施方案包括以下：
实施方案1.一种结合到人CD39的经分离的抗CD39抗体，其中抗体任选地是全人抗体或人源化抗体。
实施方案2.如实施方案1所述的经分离抗体，其中经分离抗体包含：
i)(a)包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列的HCDR1；(b)包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列的HCDR2；(c)包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列的HCDR3；(d)包含SEQ ID NO:4的氨基酸序列的LCDR1；(e)包含SEQ ID NO:5的氨基酸序列的LCDR2；和(f)包含SEQ ID NO:6的氨基酸序列的LCDR3；或
ii)(a)包含SEQ ID NO:101的氨基酸序列的HCDR1；(b)包含SEQ ID NO:102的氨基酸序列的HCDR2；(c)包含SEQ ID NO:103的氨基酸序列的HCDR3；(d)包含SEQ ID NO:104的氨基酸序列的LCDR1；(e)包含SEQ ID NO:105的氨基酸序列的LCDR2；和(f)包含SEQ ID NO:106的氨基酸序列的LCDR3；或
iii)(a)包含SEQ ID NO:201的氨基酸序列的HCDR1；(b)包含SEQ ID NO:202的氨基酸序列的HCDR2；(c)包含SEQ ID NO:203的氨基酸序列的HCDR3；(d)包含SEQ ID NO:204的氨基酸序列的LCDR1；(e)包含SEQ ID NO:205的氨基酸序列的LCDR2；和(f)包含SEQ IDNO:206的氨基酸序列的LCDR3；或
iv)(a)包含SEQ ID NO:301的氨基酸序列的HCDR1；(b)包含SEQ ID NO:302的氨基酸序列的HCDR2；(c)包含SEQ ID NO:303的氨基酸序列的HCDR3；(d)包含SEQ ID NO:304的氨基酸序列的LCDR1；(e)包含SEQ ID NO:305的氨基酸序列的LCDR2；和(f)包含SEQ ID NO:306的氨基酸序列的LCDR3；或
v)(a)包含SEQ ID NO:401的氨基酸序列的HCDR1；(b)包含SEQ ID NO:402的氨基酸序列的HCDR2；(c)包含SEQ ID NO:403的氨基酸序列的HCDR3；(d)包含SEQ ID NO:404的氨基酸序列的LCDR1；(e)包含SEQ ID NO:405的氨基酸序列的LCDR2；和(f)包含SEQ ID NO:406的氨基酸序列的LCDR3；或
vi)(a)包含SEQ ID NO:501的氨基酸序列的HCDR1；(b)包含SEQ ID NO:502的氨基酸序列的HCDR2；(c)包含SEQ ID NO:503的氨基酸序列的HCDR3；(d)包含SEQ ID NO:504的氨基酸序列的LCDR1；(e)包含SEQ ID NO:505的氨基酸序列的LCDR2；和(f)包含SEQ ID NO:506的氨基酸序列的LCDR3；或
vii)(a)包含SEQ ID NO:601的氨基酸序列的HCDR1；(b)包含SEQ ID NO:602的氨基酸序列的HCDR2；(c)包含SEQ ID NO:603的氨基酸序列的HCDR3；(d)包含SEQ ID NO:604的氨基酸序列的LCDR1；(e)包含SEQ ID NO:605的氨基酸序列的LCDR2；和(f)包含SEQ IDNO:606的氨基酸序列的LCDR3；或
viii)(a)包含SEQ ID NO:701的氨基酸序列的HCDR1；(b)包含SEQ ID NO:702的氨基酸序列的HCDR2；(c)包含SEQ ID NO:703的氨基酸序列的HCDR3；(d)包含SEQ ID NO:704的氨基酸序列的LCDR1；(e)包含SEQ ID NO:705的氨基酸序列的LCDR2；和(f)包含SEQ IDNO:706的氨基酸序列的LCDR3；或
ix)(a)包含SEQ ID NO:801的氨基酸序列的HCDR1；(b)包含SEQ ID NO:802的氨基酸序列的HCDR2；(c)包含SEQ ID NO:803的氨基酸序列的HCDR3；(d)包含SEQ ID NO:804的氨基酸序列的LCDR1；(e)包含SEQ ID NO:805的氨基酸序列的LCDR2；和(f)包含SEQ ID NO:806的氨基酸序列的LCDR3；或
x)(a)包含SEQ ID NO:901的氨基酸序列的HCDR1；(b)包含SEQ ID NO:902的氨基酸序列的HCDR2；(c)包含SEQ ID NO:903的氨基酸序列的HCDR3；(d)包含SEQ ID NO:904的氨基酸序列的LCDR1；(e)包含SEQ ID NO:905的氨基酸序列的LCDR2；和(f)包含SEQ ID NO:906的氨基酸序列的LCDR3；或
xi)(a)包含SEQ ID NO:1001的氨基酸序列的HCDR1；(b)包含SEQ ID NO:1002的氨基酸序列的HCDR2；(c)包含SEQ ID NO:1003的氨基酸序列的HCDR3；(d)包含SEQ ID NO:1004的氨基酸序列的LCDR1；(e)包含SEQ ID NO:1005的氨基酸序列的LCDR2；和(f)包含SEQID NO:1006的氨基酸序列的LCDR3；或
xii)(a)包含SEQ ID NO:2001的氨基酸序列的HCDR1；(b)包含SEQ ID NO:2002的氨基酸序列的HCDR2；(c)包含SEQ ID NO:2003的氨基酸序列的HCDR3；(d)包含SEQ ID NO:2004的氨基酸序列的LCDR1；(e)包含SEQ ID NO:2005的氨基酸序列的LCDR2；和(f)包含SEQID NO:2006的氨基酸序列的LCDR3；或
xiii)(a)包含SEQ ID NO:3001的氨基酸序列的HCDR1；(b)包含SEQ ID NO:3002的氨基酸序列的HCDR2；(c)包含SEQ ID NO:3003的氨基酸序列的HCDR3；(d)包含SEQ ID NO:3004的氨基酸序列的LCDR1；(e)包含SEQ ID NO:3005的氨基酸序列的LCDR2；和(f)包含SEQID NO:3006的氨基酸序列的LCDR3；或
xiv)(a)包含SEQ ID NO:4001的氨基酸序列的HCDR1；(b)包含SEQ ID NO:4002的氨基酸序列的HCDR2；(c)包含SEQ ID NO:4003的氨基酸序列的HCDR3；(d)包含SEQ ID NO:4004的氨基酸序列的LCDR1；(e)包含SEQ ID NO:4005的氨基酸序列的LCDR2；和(f)包含SEQID NO:4006的氨基酸序列的LCDR3；或
xv)(a)包含SEQ ID NO:5001的氨基酸序列的HCDR1；(b)包含SEQ ID NO:5002的氨基酸序列的HCDR2；(c)包含SEQ ID NO:5003的氨基酸序列的HCDR3；(d)包含SEQ ID NO:5004的氨基酸序列的LCDR1；(e)包含SEQ ID NO:5005的氨基酸序列的LCDR2；和(f)包含SEQID NO:5006的氨基酸序列的LCDR3；或
xvi)(a)包含SEQ ID NO:6001的氨基酸序列的HCDR1；(b)包含SEQ ID NO:6002的氨基酸序列的HCDR2；(c)包含SEQ ID NO:6003的氨基酸序列的HCDR3；(d)包含SEQ ID NO:6004的氨基酸序列的LCDR1；(e)包含SEQ ID NO:6005的氨基酸序列的LCDR2；和(f)包含SEQID NO:6006的氨基酸序列的LCDR3；或
xvii)(a)包含SEQ ID NO:7001的氨基酸序列的HCDR1；(b)包含SEQ ID NO:7002的氨基酸序列的HCDR2；(c)包含SEQ ID NO:7003的氨基酸序列的HCDR3；(d)包含SEQ ID NO:7004的氨基酸序列的LCDR1；(e)包含SEQ ID NO:7005的氨基酸序列的LCDR2；和(f)包含SEQID NO:7006的氨基酸序列的LCDR3；或
xviii)(a)包含SEQ ID NO:8001的氨基酸序列的HCDR1；(b)包含SEQ ID NO:8002的氨基酸序列的HCDR2；(c)包含SEQ ID NO:8003的氨基酸序列的HCDR3；(d)包含SEQ IDNO:8004的氨基酸序列的LCDR1；(e)包含SEQ ID NO:8005的氨基酸序列的LCDR2；和(f)包含SEQ ID NO:8006的氨基酸序列的LCDR3；或
xix)(a)包含SEQ ID NO:9001的氨基酸序列的HCDR1；(b)包含SEQ ID NO:9002的氨基酸序列的HCDR2；(c)包含SEQ ID NO:9003的氨基酸序列的HCDR3；(d)包含SEQ ID NO:9004的氨基酸序列的LCDR1；(e)包含SEQ ID NO:9005的氨基酸序列的LCDR2；和(f)包含SEQID NO:9006的氨基酸序列的LCDR3；或
xx)(a)包含SEQ ID NO:10001的氨基酸序列的HCDR1；(b)包含SEQ ID NO:10002的氨基酸序列的HCDR2；(c)包含SEQ ID NO:10003的氨基酸序列的HCDR3；(d)包含SEQ ID NO:10004的氨基酸序列的LCDR1；(e)包含SEQ ID NO:10005的氨基酸序列的LCDR2；和(f)包含SEQ ID NO:10006的氨基酸序列的LCDR3；或
xxi)(a)包含SEQ ID NO:20001的氨基酸序列的HCDR1；(b)包含SEQ ID NO:20002的氨基酸序列的HCDR2；(c)包含SEQ ID NO:20003的氨基酸序列的HCDR3；(d)包含SEQ IDNO:20004的氨基酸序列的LCDR1；(e)包含SEQ ID NO:20005的氨基酸序列的LCDR2；和(f)包含SEQ ID NO:20006的氨基酸序列的LCDR3；或
xxii)(a)包含SEQ ID NO:30001的氨基酸序列的HCDR1；(b)包含SEQ ID NO:30002的氨基酸序列的HCDR2；(c)包含SEQ ID NO:30003的氨基酸序列的HCDR3；(d)包含SEQ IDNO:30004的氨基酸序列的LCDR1；(e)包含SEQ ID NO:30005的氨基酸序列的LCDR2；和(f)包含SEQ ID NO:30006的氨基酸序列的LCDR3。
实施方案3.如权利要求1所述的经分离抗体，其中抗体包含重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)，其中：
i)VH与SEQ ID NO:12的氨基酸序列至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一且VL与SEQ ID NO:18的氨基酸序列至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一；或
ii)VH与SEQ ID NO:112的氨基酸序列至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一且VL与SEQ ID NO:118的氨基酸序列至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一；或
iii)VH与SEQ ID NO:212的氨基酸序列至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一且VL与SEQ ID NO:218的氨基酸序列至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一；或
iv)VH与SEQ ID NO:312的氨基酸序列至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一且VL与SEQ ID NO:318的氨基酸序列至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一；或
v)VH与SEQ ID NO:412的氨基酸序列至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一且VL与SEQ ID NO:418的氨基酸序列至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一；或
vi)VH与SEQ ID NO:512的氨基酸序列至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一且VL与SEQ ID NO:518的氨基酸序列至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一；或
vii)VH与SEQ ID NO:612的氨基酸序列至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一且VL与SEQ ID NO:618的氨基酸序列至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一；或
viii)VH与SEQ ID NO:712的氨基酸序列至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一且VL与SEQ ID NO:718的氨基酸序列至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一；或
ix)VH与SEQ ID NO:812的氨基酸序列至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一且VL与SEQ ID NO:818的氨基酸序列至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一；或
x)VH与SEQ ID NO:912的氨基酸序列至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一且VL与SEQ ID NO:918的氨基酸序列至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一；或
xi)VH与SEQ ID NO:1012的氨基酸序列至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一且VL与SEQ ID NO:1018的氨基酸序列至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一；或
xii)VH与SEQ ID NO:2012的氨基酸序列至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一且VL与SEQ ID NO:2018的氨基酸序列至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一；或
xiii)VH与SEQ ID NO:3012的氨基酸序列至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一且VL与SEQ ID NO:3018的氨基酸序列至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一；或
xiv)VH与SEQ ID NO:4012的氨基酸序列至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一且VL与SEQ ID NO:4018的氨基酸序列至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一；或
xv)VH与SEQ ID NO:5012的氨基酸序列至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一且VL与SEQ ID NO:5018的氨基酸序列至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一；或
xvi)VH与SEQ ID NO:6012的氨基酸序列至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一且VL与SEQ ID NO:6018的氨基酸序列至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一；或
xvii)VH与SEQ ID NO:7012的氨基酸序列至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一且VL与SEQ ID NO:7018的氨基酸序列至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一；或
xviii)VH与SEQ ID NO:8012的氨基酸序列至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一且VL与SEQ ID NO:8018的氨基酸序列至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一；或
xix)VH与SEQ ID NO:9012的氨基酸序列至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一且VL与SEQ ID NO:9018的氨基酸序列至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一；或
xx)VH与SEQ ID NO:10012的氨基酸序列至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一且VL与SEQ ID NO:10018的氨基酸序列至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一；或
xxi)VH与SEQ ID NO:20012的氨基酸序列至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一且VL与SEQ ID NO:20018的氨基酸序列至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一；或
xxii)VH与SEQ ID NO:30012的氨基酸序列至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一且VL与SEQ ID NO:30018的氨基酸序列至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一。
实施方案4.如实施方案1-3中任一者所述的经分离抗体，其中抗体包含重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)，其中：
i)VH包含SEQ ID NO:12的氨基酸序列且VL包含SEQ ID NO:18的氨基酸序列；或
ii)VH包含SEQ ID NO:112的氨基酸序列且VL包含SEQ ID NO:118的氨基酸序列；或
iii)VH包含SEQ ID NO:212的氨基酸序列且VL包含SEQ ID NO:218的氨基酸序列；或
iv)VH包含SEQ ID NO:312的氨基酸序列且VL包含SEQ ID NO:318的氨基酸序列；或
v)VH包含SEQ ID NO:412的氨基酸序列且VL包含SEQ ID NO:418的氨基酸序列；或
vi)VH包含SEQ ID NO:512的氨基酸序列且VL包含SEQ ID NO:518的氨基酸序列；或
vii)VH包含SEQ ID NO:612的氨基酸序列且VL包含SEQ ID NO:618的氨基酸序列；或
viii)VH包含SEQ ID NO:712的氨基酸序列且VL包含SEQ ID NO:718的氨基酸序列；或
ix)VH包含SEQ ID NO:812的氨基酸序列且VL包含SEQ ID NO:818的氨基酸序列；或
x)VH包含SEQ ID NO:912的氨基酸序列且VL包含SEQ ID NO:918的氨基酸序列；或
xi)VH包含SEQ ID NO:1012的氨基酸序列且VL包含SEQ ID NO:1018的氨基酸序列；或
xii)VH包含SEQ ID NO:2012的氨基酸序列且VL包含SEQ ID NO:2018的氨基酸序列；或
xiii)VH包含SEQ ID NO:3012的氨基酸序列且VL包含SEQ ID NO:3018的氨基酸序列；或
xiv)VH包含SEQ ID NO:4012的氨基酸序列且VL包含SEQ ID NO:4018的氨基酸序列；或
xv)VH包含SEQ ID NO:5012的氨基酸序列且VL包含SEQ ID NO:5018的氨基酸序列；或
xvi)VH包含SEQ ID NO:6012的氨基酸序列且VL包含SEQ ID NO:6018的氨基酸序列；或
xvii)VH包含SEQ ID NO:7012的氨基酸序列且VL包含SEQ ID NO:7018的氨基酸序列；或
xviii)VH包含SEQ ID NO:8012的氨基酸序列且VL包含SEQ ID NO:8018的氨基酸序列；或
xix)VH包含SEQ ID NO:9012的氨基酸序列且VL包含SEQ ID NO:9018的氨基酸序列；或
xx)VH包含SEQ ID NO:10012的氨基酸序列且VL包含SEQ ID NO:10018的氨基酸序列；或
xxi)VH包含SEQ ID NO:20012的氨基酸序列且VL包含SEQ ID NO:20018的氨基酸序列；或
xxii)VH包含SEQ ID NO:30012的氨基酸序列且VL包含SEQ ID NO:30018的氨基酸序列。
实施方案5.如前述实施方案中任一者所述的经分离抗体，其中抗体是单克隆抗体。
实施方案6.如前述实施方案中任一者所述的经分离抗体，其中抗体是全长抗体或是抗体片段，任选地为Fab、Fab’、Fv、scFv或(Fab’)2。
实施方案7.如实施方案1-5中任一者所述的经分离抗体，其中抗体包含IgG1、IgG2、IgG3或IgG4 Fc区，其中抗体任选地包含人IgG1重链恒定区、人IgG4重链恒定区或突变体人IgG4重链恒定区，其中突变体人IgG4重链恒定区任选地包含选自以下的突变：根据EU编号编号的Ser228处的取代、Leu235处的取代、Asn297处的取代或其组合，或根据EU编号编号的S228P取代和L235E取代，或其中抗体包含SEQ ID NO:40002或SEQ ID NO:40003的重链恒定区，和/或其中抗体任选地包含人κ轻链。
实施方案8.如实施方案1-7中任一者所述的经分离抗体，其中抗体
(i)结合并抑制CD39，任选地其中抗体在正常或癌性组织内结合到CD39且抑制CD39，任选地其中所述组织处于子宫、子宫颈、肺、前列腺、乳房、头、颈、结肠或卵巢中，任选地其中所述组织处于子宫中，且任选地其中在子宫内，抗体抑制子宫肌层中的CD39；
(ii)抑制或减小人CD39的酶活性；
(iii)结合到重组人CD39和/或结合到膜结合的人CD39；
(iv)以小于10nM的平衡解离常数(KD)结合到人CD39；
(v)以约1.11nM的KD结合到人CD39；
(iv)结合到人CD39和食蟹猴CD39但不与小鼠CD39或大鼠CD39结合；
(vii)抑制或减少人CD39将细胞外腺苷三磷酸(eATP)或细胞外腺苷二磷酸(eADP)转化为细胞外腺苷单磷酸(eAMP)；
(viii)增加或增强eATP的水平；
(ix)减少或降低细胞外腺苷的水平；
(x)维持、增加或增强eATP的免疫刺激水平；
(xi)拮抗组织的肿瘤微环境中的人CD39；
(xii)与食蟹猴CD39交叉反应；
(xiii)增加或增强淋巴细胞的增殖；
(xiv)增加或增强肿瘤中的巨噬细胞浸润；或
(xv)减小肿瘤组织中CD39的活性或量。
实施方案9.一种药物组合物，所述药物组合物包含如实施方案1-8中任一者所述的抗体和医药学上可接受的载体，其中组合物任选地包含调理剂、调控T细胞耗竭剂、化学疗法和/或PD-1、PD-L1、CTLA-4、Lag-3、TIM-3、A2AR、A2BR、双重A2AR/A2BR、CD40或CD73的拮抗剂，和/或TIGIT、CD112R或CD96的拮抗剂，和/或PVRL1、PVRL2、PVRL3、PVRL4或CD155的拮抗剂，和/或CD47或IL-27的拮抗剂，和/或STING的激动剂，和/或CAR细胞疗法，任选地其中拮抗剂是抗体。
实施方案10.如实施方案1-8中任一者所述的经分离抗体或如实施方案9所述的药物组合物，所述经分离抗体或药物组合物用于减小组织中CD39的量或活性，增强、增加和/或持续受试者中的抗肿瘤免疫反应，和/或抑制受试者组织中的CD39，其中与施用前人组织中的CD39活性或CD39的总量相比，所述施用减小人组织中的CD39活性或CD39的总量。
实施方案11.如实施方案1-8中任一者所述的经分离抗体或如实施方案9所述的药物组合物，所述经分离抗体或药物组合物用于治疗受试者的癌症，其中癌症任选地是癌瘤、淋巴瘤、母细胞瘤、肉瘤或白血病，或其中癌症任选地是鳞状细胞癌、小细胞肺癌、脑垂体癌、食道癌、星形细胞瘤、软组织肉瘤、非小细胞肺癌(包括鳞状细胞非小细胞肺癌)、肺腺癌、肺鳞状癌、腹膜癌、肝细胞癌、胃肠癌、胰腺癌、神经胶母细胞瘤、子宫颈癌、卵巢癌、肝癌、膀胱癌、肝细胞瘤、乳腺癌、结肠癌、结肠直肠癌、子宫内膜癌或子宫癌、唾液腺癌、肾癌、肾细胞癌、肝癌、前列腺癌、外阴癌、甲状腺癌、肝癌、脑癌、子宫内膜癌、睾丸癌、胆管癌、胆囊癌、胃癌、黑色素瘤或各种类型的头颈癌(包括头颈部鳞状细胞癌)，和/或其中癌症为晚期癌症和/或复发性癌症和/或难治性癌症和/或转移性癌症，和/或其中癌症为晚期实体肿瘤和/或复发性实体肿瘤和/或难治性实体肿瘤和/或转移性实体肿瘤。
实施方案12.如实施方案10或11使用的经分离抗体或药物组合物，其中所述用途还包括施用第二疗法，其中第二疗法任选地是放射疗法、手术或施用PD-1、PD-L1、CTLA-4、Lag-3、TIM-3、A2AR、A2BR、A2AR/A2BR、CD40、CD73、TIGIT、CD112R、CD96、PVRL1、PVRL2、PVRL3、PVRL4、CD155、CD47或IL-27的拮抗剂、STING的激动剂、CAR细胞疗法或其组合，任选地其中拮抗剂是抗体。
实施方案13.如实施方案10或11使用的经分离抗体或药物组合物，其中所述用途还包括施用第二疗法，其中第二疗法是CD47拮抗剂，任选地其中CD47拮抗剂是抗CD47抗体，任选地其中抗CD47抗体包含：
a)重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)，其中VH包含SEQ ID NO:40004的氨基酸序列且VL包含SEQ ID NO:40005的氨基酸序列；和/或
b)(a)包含SEQ ID NO:40006的氨基酸序列的HCDR1；(b)包含SEQ ID NO:40007的氨基酸序列的HCDR2；(c)包含SEQ ID NO:40008的氨基酸序列的HCDR3；(d)包含SEQ ID NO:40009的氨基酸序列的LCDR1；(e)包含SEQ ID NOL 40010的氨基酸序列的LCDR2；和(f)包含SEQ ID NO:40011的氨基酸序列的LCDR3。
实施方案14.一种核酸，所述核酸编码如实施方案1-8中任一者所述的抗体。
实施方案15.一种宿主细胞，所述宿主细胞包含如实施方案1-8中任一者所述的核酸。
实施方案16.一种产生如实施方案1-8中任一者所述的抗体的方法，所述方法包括在其中表达抗体的条件下培养如实施方案15所述的宿主细胞，任选地还包括纯化抗体。
附图说明
图1A、图1B、图1C和图1D绘示与对照IgG1抗体相比，两种浓度的抗CD39抗体结合到SK-MEL-28细胞(图1A和图1B)和MOLP-8细胞(图1C和图D)的能力。
图2A、图2B、图2C和图2D绘示与对照IgG1抗体相比，抗CD39抗体抑制SK-MEL-28细胞(图2A和图2B)和MOLP-8细胞(图2C和图2D)中CD39的酶活性的能力。
图3A、图3B和图3C绘示与对照IgG1抗体相比，剂量范围内的抗CD39抗体抑制SK-MEL-28细胞(图3C)和MOLP-8细胞(图3A和图3B)中CD39的酶活性的能力。
图4A、图4B、图4C和图4D绘示与对照IgG1抗体相比，剂量范围内的抗CD39抗体抑制单核细胞(图4A和图4B)和B细胞(图4C和图4D)中CD39的酶活性的能力。
图5A和图5B显示抗CD39抗体的亲和力测量。
图6A和图6B显示抗CD39响应一系列浓度的原初抗体(图6A)和亲和力成熟抗体(图6B)的处理增加人PBMC的CD4+T细胞增殖的能力。
图7A和图7B显示用克隆22处理小鼠MOLP-8异种移植物模型产生肿瘤生长抑制，绘示克隆22的血浆水平和靶占据(TO)百分比(％)(图7A)和肿瘤体积(图7B)。
图8A、图8B、图8C和图8D显示用克隆22处理小鼠MOLP-8异种移植物模型产生肿瘤中增加的巨噬细胞浸润，如通过流式细胞术(图8A)和免疫组织化学染色(图8B和图8C)所展示，和减小的肿瘤体积(图8D)。
图9A和图9B显示克隆22抑制经治疗小鼠的MOLP-8肿瘤中的CD39酶活性的能力。
图10显示在每一剂量组中的3种不同动物的CD39 ATPase测定染色后食蟹猴的子宫组织的经染色切片：媒介物，10mg/kg、30mg/kg和100mg/kg克隆22。
图11显示在小鼠H520异种移植物模型中克隆22减少升高的全身性腺苷水平的能力。
图12A、图12B、图12C、图12D和图12E显示克隆22以剂量依赖性方式结合到单核细胞(图12A)和B细胞(图12B)。通过比较克隆22的剂量滴定与克隆22的饱和“尖峰”来计算靶占据(TO)百分比(％)作为单核细胞(图12C)和B细胞(图12D)的最大占据对照。RBC裂解经克隆22预处理的全血且计算ATP水解的抑制百分比(％)(图12E)。
图13A、图13B、图13C、图13D和图13E显示克隆22的结合数据。重组人CD39与克隆22结合(图13A)、小鼠CD39与克隆22结合(图13B)、小鼠CD39与Duha59结合(图13C)、大鼠CD39与克隆22结合(图13D)和食蟹猴CD39与克隆22结合(图13E)的结合传感图。每条迹线代表重组CD39分析物的已从参考迹线减去的递增浓度。实线指示分析物和配体(重组CD39:克隆22或Duha59)的1:1结合模型(伪一阶动力学)的整体拟合。垂直虚线分别指示重组CD39分析物的缔合和解离的开始。
图14显示CT26小鼠模型中鼠抗CD39抗体与鼠抗PD-1抗体组合的协同活性。
图15显示来自经ATP和克隆22处理的PMBC的CD4+CD39+细胞的增加的三阳性细胞(PD1、TIM3、Lag3)的百分比。
图16显示在人肺癌的H520异种移植物模型中克隆22和太平洋紫杉醇的组合效应。
图17显示在CT26小鼠模型中鼠抗CD39抗体对肿瘤浸润淋巴细胞：CD8+T细胞(图17A)、CD4+T细胞(图17B)和T调控细胞(图17C)的效应以及对肿瘤体积的效应(图17D)。
图18显示在胰腺导管腺癌的人肿瘤活检模型中克隆22单独和与吉西他滨的组合的效应。
图19显示在人多发性骨髓瘤的MOLP-8鼠模型中克隆22单独、或抗CD47抗体单独、或克隆22和抗CD47抗体的组合对肿瘤体积(图19A)和存活率(图19B)的效应。
图20显示在经同种型对照抗体、抗鼠CD39抗体、抗鼠PD-1抗体和抗鼠CD39抗体与抗鼠PD-1抗体的组合治疗的小鼠的复合分析的CT26小鼠的TME中，免疫细胞的单细胞RNA测序(scRNAseq)的结果。基于免疫标记物的差异表达对细胞类型分群。X轴和Y轴显示均匀流形近似投影(UMAP)，所述均匀流形近似投影是应用于执行scRNAseq分析的降维算法。X坐标和Y坐标显示每一细胞之间的距离，此展示映射到特定表型的细胞的群。
图21A-C显示经抗鼠PD-1抗体单独或与抗鼠CD39抗体的组合治疗的CT26小鼠的TME中增加的淋巴细胞浸润。图21A显示与同种型对照抗体相比，在同种型和抗PD1抗体处理的群体中在CD8+细胞群内和淋巴细胞细胞群内CD45+细胞的频率的增加。图21B显示在未经治疗的CT26小鼠或经同种型对照抗体治疗的CT26小鼠(“第1组Iso”)、经抗鼠CD39治疗的CT26小鼠(“第2组CD39”)、经抗鼠PD-1治疗的CT26小鼠(“第3组PD-1”)或经抗鼠CD39+抗鼠PD-1治疗的CT26小鼠(“第4组Combo”)中每mm2的CD8+细胞数，如通过免疫组织化学(IHC)所鉴别。图21C显示从经抗鼠PD-1(底部图像)或同种型对照抗体(顶部图像)治疗的CT26小鼠分离的肿瘤样品的代表性IHC图像。
图22显示使用scRNAseq分析，浸润经抗鼠CD39抗体或同种型对照抗体治疗的CT26小鼠的TME的免疫细胞类型的频率。每一细胞类型群的频率显示为相对于同种型对照组的平均倍数变化的倍数变化。
图23A-B显示在抗CD39抗体处理后的肿瘤相关巨噬细胞(“CD39TX”)中IFNγ反应基因的上调。肿瘤相关巨噬细胞是从scRNAseq数据集基于F4/80抗原表达来鉴别。使用基因集富集分析(GSEA)和标志基因集(如通过GSEA中多个基因集的聚集衍生而来以证明明确定义的生物学状态；参见万维网的gsea-msigdb.org/gsea/msigdb/collecti ons.jsp#H)进行差异表达分析，以将在抗鼠CD39组对同种型对照中更高表达的基因分级。基于富集评分(ES)的最高富集基因与上调的I FNγ反应相关(图23A)。P值＝0.0。FDR q值＝0.005。使用UMAP降维对细胞分群，产生约20个不同的群体(图23B)。
图24显示在用同种型对照抗体、抗鼠CD39抗体(“CD39”)、抗鼠PD-1抗体(“PD1”)或抗鼠CD39抗体+抗鼠PD-1抗体(“combo”)处理后，肿瘤相关巨噬细胞中IFNγ印记的评分。肿瘤相关巨噬细胞是从scRNAseq数据集基于F4/80抗原表达来鉴别。基于F4/80表达，通过采用鉴别为巨噬细胞的细胞群中IFNγ印记基因的平均表达来计算IFNγ印记的评分。
图25显示使用scRNAseq分析，浸润经同种型对照抗体、抗鼠CD39(“CD39”)、抗鼠PD-1(“PD1”)或抗鼠CD39+抗鼠PD-1(“Combo”)治疗的CT26小鼠的TME的细胞类型的频率。每一细胞类型群的频率显示为相对于同种型对照组的平均倍数变化的倍数变化。
具体实施方式
II.定义
在本申请中，除非另有说明，否则“或”的使用意指“和/或”。在多个附属权利要求的上下文中，“或”的使用仅在替代方案中指一个以上的前述独立或附属权利要求。术语“包含”、“包括”和“具有”在本文中可互换使用。
术语“CD39”是指在人中由ENTPD1基因编码的胞外核苷三磷酸二磷酸水解酶1多肽。CD39的其它名称包括ENTPD1、E-NTPDase1、分化群39、ATPDase、NTPDase-1和SPG64。CD39催化细胞外核苷三磷酸(NTP；例如腺苷三磷酸或ATP)和核苷二磷酸(NDP；例如腺苷二磷酸或ADP)的γ-磷酸残基和β-磷酸残基的水解，使这些分子转化为核苷单磷酸(NMP；例如腺苷单磷酸或AMP)衍生物。CD39的例示性氨基酸序列处于NCBI参考序列：NP_001767.3处。
“亲和力”是指分子(例如抗体)的单个结合位点与它的结合伴侣(例如抗原)之间的非共价相互作用的总和的强度。除非另外指明，否则如本文所用，“结合亲和力”是指反映结合对(例如抗体和抗原)的成员之间的1:1相互作用的固有结合亲和力。分子X对它的伴侣Y的亲和力通常可由解离常数(KD)表示。亲和力可通过此项技术中已知的常用方法(包括本文所述的那些方法)来测量。用于测量结合亲和力的特定说明性和例示性实施方案描述于下文中。
“亲和力成熟”抗体是指与不具变化的亲代抗体相比，在一个或多个超变区(HVR)中具有一个或多个变化的抗体，此类变化任选地改良抗体对抗原的亲和力。
如本文所用的术语“拮抗剂”是指靶分子的抑制剂且在本文中可与术语“抑制剂”同义使用。拮抗剂包括(但不限于)抗体(例如单克隆抗体、多克隆抗体、多特异性抗体、双特异性抗体和抗体片段)、配体、融合蛋白、小分子、多价剂和其它拮抗剂/抑制剂。
术语“抗体”在本文中以最广泛含义使用且涵盖多种抗体结构，包括(但不限于)单克隆抗体、多克隆抗体、多特异性抗体(例如双特异性抗体)和抗体片段，只要它们展现所需抗原结合活性即可。
“抗体片段”是指除完整抗体外的分子，所述分子包含完整抗体的一部分，所述部分结合完整抗体所结合的抗原。抗体片段的实例包括(但不限于)Fv、Fab、Fab'、Fab’-SH、F(ab')2；双价抗体；线性抗体；单链抗体分子(例如scFv)；和从抗体片段形成的多特异性抗体。
在两个或多个分子之间的相互作用的上下文中，术语“阻断”在本文中用于指抑制或阻止两个或多个分子之间的所述相互作用，其中抑制或阻止两个或多个分子之间的所述相互作用在至少一个条件下是完全或接近完全的。“接近完全的”抑制是约70％-99.9％的抑制百分比，且“完全”抑制为100％。例如，如果分子在某些浓度下以剂量依赖性方式完全或接近完全地抑制两个或多个其它分子之间的相互作用，那么称所述分子“阻断”所述相互作用。
术语“癌症”在本文中用于指展现异常高的增殖和生长水平的一组细胞。癌症可为良性(也称为良性肿瘤)、恶性前期或恶性的。癌细胞可为实体癌细胞或白血病癌细胞。术语“肿瘤”在本文中用于指包含癌症的一个或多个细胞。术语“肿瘤生长”在本文中用于指通过包含癌症的一个或多个细胞的增殖或生长，此导致癌症的大小或程度的相应增加。
术语“嵌合”抗体是指其中重链和/或轻链的一部分衍生自特定来源或物种、而重链和/或轻链的其余部分衍生自不同来源或物种的抗体。
抗体的“类别”是指它的重链所具有的恒定结构域或恒定区的类型。存在五大类抗体：IgA、IgD、IgE、IgG和IgM，且这些抗体中的若干种抗体可进一步细分成子类(同种型)，例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1和IgA2。对应于不同免疫球蛋白类别的重链恒定结构域分别称为α、β、ε、γ和μ。
“与一种或多种其它治疗剂组合”施用包括以任一顺序同时(同步)和连续(相继)施用。
如本文所用的术语“细胞毒性剂”是指抑制或阻止细胞功能和/或引起细胞死亡或毁灭的物质。细胞毒性剂包括(但不限于)放射性同位素(例如At211、I131、I125、Y90、Re186、Re188、Sm153、Bi212、P32、Pb212和Lu的放射性同位素)；化学治疗剂或药物(例如氨甲喋呤(methotre xate)、阿霉素(adriamicin)、长春花生物碱(长春新碱(vincristine)、长春碱(vinblastine)、依托泊苷(etoposide))、多柔比星、美法仑(melphalan)、丝裂霉素C(mitomycin C)、氮芥苯丁酸(chlorambucil)、道诺霉素或其它嵌入剂)；生长抑制剂；酶和其片段，例如溶核酶；抗生素；毒素，例如细菌、真菌、植物或动物起源的小分子毒素或酶活性毒素，包括其片段和/或变体；和下文所公开的各种抗肿瘤剂或抗癌剂。
“效应功能”是指可归因于抗体的Fc区的那些生物活性，所述生物活性随着抗体同种型而变化。抗体效应功能的实例包括：C1q结合和补体依赖性细胞毒性(CDC)；Fc受体结合；抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)；吞噬作用；细胞表面受体(例如B细胞受体)的下调；和B细胞活化。
剂(例如医药调配物)的“有效量”是指在所需时间段内以所需剂量有效地实现所需治疗或预防结果的量。
术语“Fc区”在本文中用于定义免疫球蛋白重链的含有恒定区的至少一部分的C末端区域。所述术语包括天然序列Fc区和变体Fc区。在一些实施方案中，人IgG重链Fc区从Cys226或从Pro230延伸到重链的羧基末端。然而，Fc区的C末端赖氨酸(Lys447)可存在或可不存在(此段中的编号是根据EU编号系统，也称为EU索引，如Kabat等人，Sequences ofProteins of Immunological Interest，第5版，Public Health Service,NationalInstitutes of Health,Bethesda,MD,1991中所述)。
“框架”、“框架区”或“FR”是指除超变区(HVR)残基外的可变结构域残基。可变结构域的FR通常是由四个FR结构域组成：FR1、FR2、FR3和FR4。因此，HVR序列和FR序列通常以下列序列出现在VH(或VL)中：FR1-H1(L1)-FR2-H2(L2)-FR3-H3(L3)-FR4。
术语“全长抗体”、“完整抗体”和“全抗体”在本文中可互换使用且是指具有基本上与天然抗体结构类似的结构或具有含有如本文所定义Fc区的重链的抗体。
术语“宿主细胞”、“宿主细胞系”和“宿主细胞培养物”可互换使用且是指已引入外源核酸的细胞，包括此类细胞的子代。宿主细胞包括“转化体”和“转化细胞”，所述转化体和转化细胞包括原代转化细胞和衍生自它的子代，与传代次数无关。子代的核酸含量可与亲代细胞不完全相同，且可含有突变。本文包括具有与在原始转化细胞中所筛选或选择相同的功能或生物活性的突变体子代。
“人抗体”是具有如下氨基酸序列的抗体，所述氨基酸序列对应于由人或人细胞产生或衍生自利用人抗体谱或其它人抗体编码序列的非人来源的抗体的氨基酸序列。此人抗体的定义明确排除包含非人抗原结合残基的人源化抗体。
术语“可变区”或“可变结构域”是指抗体重链或轻链的参与抗体与抗原结合的结构域。天然抗体的重链和轻链的可变结构域(分别为VH和VL)通常具有相似的结构，其中每个结构域包含四个保守框架区(FR)和三个超变区(HVR)。(参见例如Kindt等人，KubyImmunology，第6版，W.H.Freeman and Co.，第91页(2007))。单一VH或VL结构域可足以赋予抗原结合特异性。此外，结合特定抗原的抗体可利用结合所述抗原的抗体的VH或VL结构域分离以分别筛选互补VL或VH结构域的文库。参见例如Portolano等人，J.Immunol.150:880-887(1993)；Clarkson等人，Nature 352:624-628(1991)。
“人共有框架”是代表在人免疫球蛋白VL或VH框架序列的选择中最常出现的氨基酸残基的框架。通常，人免疫球蛋白VL或VH序列的选择来自可变结构域序列的亚组。通常，序列的亚组是如Kabat等人，Sequences of Proteins of Immunological Interest，第5版，NIH Publication 91-3242,Bethesda MD(1991)，第1-3卷中的亚组。在一些实施方案中，对于VL，亚组是如Kabat等人，见上文中的亚组κI。在一些实施方案中，对于VH，亚组是如Kabat等人，见上文中的亚组III。
如本文所用的术语“超变区”或“HVR”是指抗体可变结构域的序列超变(“互补决定区”或“CDR”)和/或形成结构定义的环(“超变环”)和/或含有抗原接触残基(“抗原接触”)的区域中的每一者。通常，抗体包含6个HVR：三个在VH(H1、H2、H3)中，且三个在VL(L1、L2、L3)中。
“免疫缀合物”是缀合到一种或多种异源分子(包括但不限于细胞毒性剂)的抗体。
“个体”或“受试者”是哺乳动物。哺乳动物包括(但不限于)家养动物(例如牛、绵羊、猫、狗和马)、灵长类动物(例如人和非人灵长类动物，例如猴)、兔和啮齿类动物(例如小鼠和大鼠)。在某些实施方案中，个体或受试者是人。
“干扰素γ反应”或“IFNγ反应”或“IFN-γ反应”的增加是指与细胞因子IFNγ相关的活性的任何增加，且包括例如IFNγ蛋白(例如存在于TME中、从细胞分泌或在细胞内检测到)的增加、细胞中IFNγ基因表达的增加(例如通过测量mRNA水平)、与IFNγ相关的基因的基因表达的增加(例如通过测量mRNA水平)(例如，与IFNγ相关的基因包括例如表3中列出的基因)。与来自未经治疗的个体的样品相比，所述增加可在例如施用疗法后的个体样品中检测到。在一些实施方案中，与仅施用第一疗法或第二疗法后的个体的样品相比，所述增加可在例如施用第一疗法和第二疗法后的个体样品中检测到。
免疫细胞(例如先天免疫细胞)的“浸润”是指在位置(例如肿瘤微环境)中检测到的免疫细胞数量的增加。浸润可例如通过测量例如与来自未经治疗的个体的样品相比施用疗法后的个体样品中的免疫细胞的数量(例如根据细胞类型)来检测。在一些实施方案中，浸润可例如通过测量例如与来自仅施用第一疗法或第二疗法后的个体的样品相比施用第一疗法和第二疗法后个体样品中的免疫细胞的量(例如根据细胞类型)来检测。可使用标准技术来检测免疫细胞的浸润，包括例如从肿瘤微环境分离的细胞的流式细胞术，它测量从肿瘤微环境分离的细胞的基因表达用于免疫细胞标记物的差异表达；或肿瘤样品的免疫组织化学染色。
“经分离”抗体是已从它的天然环境的组分分离的抗体。在一些实施方案中，将抗体纯化到大于95％或99％的纯度，如通过例如电泳(例如SDS-PAGE、等电聚焦(IEF)、毛细管电泳)或色谱(例如离子交换或反相HPLC)所测定。关于评价抗体纯度的方法的综述参见例如Flatman等人，J.Chromatogr.B 848:79-87(2007)。
如本文所用的术语“单克隆抗体”是指从基本上同源的抗体群体获得的抗体，即包含所述群体的单个抗体是相同的和/或结合相同的表位，例如含有天然突变或在产生单克隆抗体制剂期间产生的可能的变体抗体除外，此类变体通常以较小量存在。与通常包括针对不同决定簇(表位)的不同抗体的多克隆抗体制剂相比，单克隆抗体制剂的每一单克隆抗体是针对抗原上的单一决定簇。因此，修饰词“单克隆”指示抗体的特征在于从基本上同源的抗体群体获得，且不应理解为需要通过任一特定方法来产生所述抗体。例如，拟根据本发明使用的单克隆抗体可通过多种技术制得，包括(但不限于)杂交瘤方法、重组DNA方法、噬菌体展示方法和利用含有所有或一部分人免疫球蛋白基因座的转基因动物的方法，此类方法和用于制造单克隆抗体的其它例示性方法描述于本文中。
“裸抗体”是指不与异源部分(例如细胞毒性部分)或放射性标记缀合的抗体。裸抗体可存在于医药调配物中。
“天然抗体”是指具有不同结构的天然免疫球蛋白分子。例如，天然IgG抗体是约150,000道尔顿(dalton)的异四聚体糖蛋白，它由二硫键键结的两条相同轻链和两条相同重链构成。从N末端到C末端，每一重链具有可变区(VH)，也称为可变重链结构域或重链可变结构域，之后为三个恒定结构域(CH1、CH2和CH3)。类似地，从N末端到C末端，每一轻链具有可变区(VL)，也称为可变轻链结构域或轻链可变结构域，之后为恒定轻链(CL)结构域。基于抗体恒定结构域的氨基酸序列，可将所述抗体的轻链分配为两种类型中的一者，称为卡帕(κ)和拉姆达(λ)。
相对于参考多肽序列的“氨基酸序列同一性百分比(％)”定义为在比对序列并引入空位(如果需要)以实现最大序列同一性百分比且不将任何保守取代视为序列同一性的一部分后，候选序列中与参考多肽序列中的氨基酸残基同一的氨基酸残基的百分比。出于确定氨基酸序列同一性百分比的目的的比对可以所属领域技术人员所熟知的各种方式来实现，例如使用可公开获得的计算机软件，例如BLAST、BLAST-2、ALIGN或Megalign(DNASTAR)软件。所属领域技术人员可确定用于比对序列的合适参数，包括在所比较序列的全长范围内实现最大比对所需的任何算法。然而，出于本文的目的，使用序列比较计算机程序ALIGN-2来产生氨基酸序列同一性％的值。ALIGN-2序列比较计算机程序是由Genentech,Inc.原创，且源代码已与用户文件一起存盘在美国版权局(U.S.Copyright Office)，Washington D.C.,20559中，其中它以美国版权注册号TXU510087注册。ALIGN-2程序可从Genentech,Inc.,South San Francisco,California公开获得，或可从源代码进行编译。ALIGN-2程序应被编译用于UNIX操作系统(包括数字UNIX V4.0D)中。所有序列比较参数都是由ALIGN-2程序设定且不发生变化。
在采用ALIGN-2进行氨基酸序列比较的情形下，给定氨基酸序列A对(to)、与(with)或针对(against)给定氨基酸序列B的氨基酸序列同一性％(这可替代地表达为对、与或针对给定氨基酸序列B具有或包含一定氨基酸序列同一性％的给定氨基酸序列A)计算如下：
100×分数X/Y
其中X是在所述A与B的程序比对中由序列比对程序ALIGN-2评定为同一性匹配的氨基酸残基数，且其中Y是B中氨基酸残基的总数。将了解，当氨基酸序列A的长度不等于氨基酸序列B的长度时，A对B的氨基酸序列同一性％将不等于B对A的氨基酸序列同一性％。除非另有明确说明，否则本文所用的所有氨基酸序列同一性％的值都是如前面紧接段落中所述使用ALIGN-2计算机程序获得。
术语“医药调配物”或“药物组合物”是指如下制剂：它的形式允许其中所含活性成分的生物活性有效，且不含对将施用所述调配物的受试者具有不可接受毒性的其它组分。
“医药学上可接受的载体”是指医药调配物或组合物中除活性成分外对受试者无毒的成分。医药学上可接受的载体包括(但不限于)缓冲剂、赋形剂、稳定剂或防腐剂。
如本文所用的术语“难治性”是指对先前治疗无反应的癌症。难治性癌症包括已对先前治疗(例如使用免疫肿瘤学药物或免疫疗法药物、例如使用封闭性CTLA-4或PD-1抗体的先前治疗)展现不足反应、部分反应或有进展的癌症。在一些实施方案中，癌症为先前治疗难治性或抗性的，为固有难治性或抗性(例如为PD-1路径拮抗剂难治性)，或获得抗性或难治性状态。如本文所用的术语“复发性”是指受试者癌症的重新出现。如本文所用的术语“转移性”是指癌细胞从它开始之处改变位置，例如癌症从体内的原发位点扩散到另一处。如本文所用的术语“晚期”是指不太可能用治疗治愈或控制的癌症。
如本文所用，“治疗(treatment)”(和其语法变化形式，例如“治疗(treat)”或“治疗(treating)”)是指试图改变所治疗个体的自然病程的临床干预，且可为了预防或在临床病理学病程期间进行。治疗的所需效应包括(但不限于)防止疾病发生或再发、缓解症状、减弱疾病的任何直接或间接病理结果、防止转移、降低疾病进展速率、改善或缓和疾病状态和减轻或改良预后。在一些实施方案中，使用所公开抗体来延迟疾病发生或减缓疾病进展。
本文所用的术语“载体”是指能够转运与它连接的另一核酸的核酸分子。所述术语包括呈自复制核酸结构的载体，以及纳入引入它的宿主细胞基因组中的载体。某些载体能够引导与它们可操作地连接的核酸的表达。此类载体在本文中称为“表达载体”。
III.组合物和方法
提供抗CD39抗体、包含所述抗体的组合物和它们的使用方法。
A.例示性抗CD39抗体
下文序列表提供本文所公开和主张的抗体的某些实施方案的序列。
在某些实施方案中，提供结合到CD39的经分离抗体。
本文提供特异性结合到CD39的经分离抗体。
在一些实施方案中，抗体结合到人CD39。
在一些实施方案中，抗体结合并抑制CD39。在一些实施方案中，提供减小或抑制人CD39的酶活性的抗CD39抗体。在一些实施方案中，抗CD39抗体结合到重组CD39和/或结合到膜结合的人CD39。在一些实施方案中，抗CD39抗体以小于10nM的平衡解离常数(KD)结合到人CD39。在一些实施方案中，与人CD39结合的KD为约1.11nM。在一些实施方案中，抗体结合到人CD39和食蟹猴CD39，但不与小鼠CD39或大鼠CD39结合。在一些实施方案中，抗CD39抗体抑制或减少人CD39将细胞外腺苷三磷酸(eATP)或细胞外腺苷二磷酸(eADP)转化为细胞外腺苷单磷酸(eAMP)。在一些实施方案中，抗CD39抗体增加eATP的量。在一些实施方案中，抗CD39抗体降低或减少细胞外腺苷的量。在一些实施方案中，抗CD39抗体维持、增加或增强eATP的免疫刺激水平。在一些实施方案中，抗CD39抗体拮抗组织的肿瘤微环境中的人CD39。在一些实施方案中，抗CD39抗体与食蟹猴CD39交叉反应。在一些实施方案中，抗CD39抗体增加或增强淋巴细胞的增殖。在一些实施方案中，抗CD39抗体增加或增强肿瘤中的巨噬细胞浸润。在一些实施方案中，抗体在正常或癌性组织内结合到CD39且抑制CD39。在一些实施方案中，组织处于子宫、子宫颈、肺、前列腺、乳房、头、颈、结肠或卵巢中。在一些实施方案中，组织处于子宫中。在一些实施方案中，在子宫内，抗体抑制子宫肌层中的CD39。
在某些实施方案中，CD39抗体包含重链可变区(“VH”)，所述重链可变区包含本文所提供CD39抗体(即抗体克隆编号1-22)中任一者的VH CDR1、CDR2和/或CDR3。
在某些实施方案中，CD39抗体包含VH，所述VH包含本文所提供CD39抗体中任一者的VH CDR1、CDR2和/或CDR3；和VL，所述VL包含本文所提供CD39抗体中任一者的CDR1、CDR2和/或CDR3。在某些实施方案中，CD39抗体包含VH，所述VH包含抗体克隆编号1-22中任一者的VH CDR1、CDR2和/或CDR3；和VL，所述VL包含抗体克隆编号1-22中任一者的VL CDR1、CDR2和/或CDR3，任选地其中VH CDR和VL CDR来自同一抗体克隆。
在一些实施方案中，提供包含以下的抗体：
(a)包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列的HCDR1；(b)包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列的HCDR2；(c)包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列的HCDR3；具或不具(d)包含SEQ ID NO:4的氨基酸序列的LCDR1；(e)包含SEQ ID NO:5的氨基酸序列的LCDR2；和(f)包含SEQ ID NO:6的氨基酸序列的LCDR3；或
(b)包含SEQ ID NO:101的氨基酸序列的HCDR1；(b)包含SEQ ID NO:102的氨基酸序列的HCDR2；(c)包含SEQ ID NO:103的氨基酸序列的HCDR3；具或不具(d)包含SEQ ID NO:104的氨基酸序列的LCDR1；(e)包含SEQ ID NO:105的氨基酸序列的LCDR2；和(f)包含SEQID NO:106的氨基酸序列的LCDR3；或
(c)包含SEQ ID NO:201的氨基酸序列的HCDR1；(b)包含SEQ ID NO:202的氨基酸序列的HCDR2；(c)包含SEQ ID NO:203的氨基酸序列的HCDR3；具或不具(d)包含SEQ ID NO:204的氨基酸序列的LCDR1；(e)包含SEQ ID NO:205的氨基酸序列的LCDR2；和(f)包含SEQID NO:206的氨基酸序列的LCDR3；或
(d)包含SEQ ID NO:301的氨基酸序列的HCDR1；(b)包含SEQ ID NO:302的氨基酸序列的HCDR2；(c)包含SEQ ID NO:303的氨基酸序列的HCDR3；具或不具(d)包含SEQ ID NO:304的氨基酸序列的LCDR1；(e)包含SEQ ID NO:305的氨基酸序列的LCDR2；和(f)包含SEQID NO:306的氨基酸序列的LCDR3；或
(e)包含SEQ ID NO:401的氨基酸序列的HCDR1；(b)包含SEQ ID NO:402的氨基酸序列的HCDR2；(c)包含SEQ ID NO:403的氨基酸序列的HCDR3；具或不具(d)包含SEQ ID NO:404的氨基酸序列的LCDR1；(e)包含SEQ ID NO:405的氨基酸序列的LCDR2；和(f)包含SEQID NO:406的氨基酸序列的LCDR3；或
(f)包含SEQ ID NO:501的氨基酸序列的HCDR1；(b)包含SEQ ID NO:502的氨基酸序列的HCDR2；(c)包含SEQ ID NO:503的氨基酸序列的HCDR3；具或不具(d)包含SEQ ID NO:504的氨基酸序列的LCDR1；(e)包含SEQ ID NO:505的氨基酸序列的LCDR2；和(f)包含SEQID NO:506的氨基酸序列的LCDR3；或
(g)包含SEQ ID NO:601的氨基酸序列的HCDR1；(b)包含SEQ ID NO:602的氨基酸序列的HCDR2；(c)包含SEQ ID NO:603的氨基酸序列的HCDR3；具或不具(d)包含SEQ ID NO:604的氨基酸序列的LCDR1；(e)包含SEQ ID NO:605的氨基酸序列的LCDR2；和(f)包含SEQID NO:606的氨基酸序列的LCDR3；或
(h)包含SEQ ID NO:701的氨基酸序列的HCDR1；(b)包含SEQ ID NO:702的氨基酸序列的HCDR2；(c)包含SEQ ID NO:703的氨基酸序列的HCDR3；具或不具(d)包含SEQ ID NO:704的氨基酸序列的LCDR1；(e)包含SEQ ID NO:705的氨基酸序列的LCDR2；和(f)包含SEQID NO:706的氨基酸序列的LCDR3；或
(i)包含SEQ ID NO:801的氨基酸序列的HCDR1；(b)包含SEQ ID NO:802的氨基酸序列的HCDR2；(c)包含SEQ ID NO:803的氨基酸序列的HCDR3；具或不具(d)包含SEQ ID NO:804的氨基酸序列的LCDR1；(e)包含SEQ ID NO:805的氨基酸序列的LCDR2；和(f)包含SEQID NO:806的氨基酸序列的LCDR3；或
(j)(a)包含SEQ ID NO:901的氨基酸序列的HCDR1；(b)包含SEQ ID NO:902的氨基酸序列的HCDR2；(c)包含SEQ ID NO:903的氨基酸序列的HCDR3；(d)包含SEQ ID NO:904的氨基酸序列的LCDR1；(e)包含SEQ ID NO:905的氨基酸序列的LCDR2；和(f)包含SEQ ID NO:906的氨基酸序列的LCDR3；或
(k)(a)包含SEQ ID NO:1001的氨基酸序列的HCDR1；(b)包含SEQ ID NO:1002的氨基酸序列的HCDR2；(c)包含SEQ ID NO:1003的氨基酸序列的HCDR3；(d)包含SEQ ID NO:1004的氨基酸序列的LCDR1；(e)包含SEQ ID NO:1005的氨基酸序列的LCDR2；和(f)包含SEQID NO:1006的氨基酸序列的LCDR3；或
(l)(a)包含SEQ ID NO:2001的氨基酸序列的HCDR1；(b)包含SEQ ID NO:2002的氨基酸序列的HCDR2；(c)包含SEQ ID NO:2003的氨基酸序列的HCDR3；(d)包含SEQ ID NO:2004的氨基酸序列的LCDR1；(e)包含SEQ ID NO:2005的氨基酸序列的LCDR2；和(f)包含SEQID NO:2006的氨基酸序列的LCDR3；或
(m)(a)包含SEQ ID NO:3001的氨基酸序列的HCDR1；(b)包含SEQ ID NO:3002的氨基酸序列的HCDR2；(c)包含SEQ ID NO:3003的氨基酸序列的HCDR3；(d)包含SEQ ID NO:3004的氨基酸序列的LCDR1；(e)包含SEQ ID NO:3005的氨基酸序列的LCDR2；和(f)包含SEQID NO:3006的氨基酸序列的LCDR3；或
(n)(a)包含SEQ ID NO:4001的氨基酸序列的HCDR1；(b)包含SEQ ID NO:4002的氨基酸序列的HCDR2；(c)包含SEQ ID NO:4003的氨基酸序列的HCDR3；(d)包含SEQ ID NO:4004的氨基酸序列的LCDR1；(e)包含SEQ ID NO:4005的氨基酸序列的LCDR2；和(f)包含SEQID NO:4006的氨基酸序列的LCDR3；或
(o)(a)包含SEQ ID NO:5001的氨基酸序列的HCDR1；(b)包含SEQ ID NO:5002的氨基酸序列的HCDR2；(c)包含SEQ ID NO:5003的氨基酸序列的HCDR3；(d)包含SEQ ID NO:5004的氨基酸序列的LCDR1；(e)包含SEQ ID NO:5005的氨基酸序列的LCDR2；和(f)包含SEQID NO:5006的氨基酸序列的LCDR3；或
(p)(a)包含SEQ ID NO:6001的氨基酸序列的HCDR1；(b)包含SEQ ID NO:6002的氨基酸序列的HCDR2；(c)包含SEQ ID NO:6003的氨基酸序列的HCDR3；(d)包含SEQ ID NO:6004的氨基酸序列的LCDR1；(e)包含SEQ ID NO:6005的氨基酸序列的LCDR2；和(f)包含SEQID NO:6006的氨基酸序列的LCDR3；或
(q)(a)包含SEQ ID NO:7001的氨基酸序列的HCDR1；(b)包含SEQ ID NO:7002的氨基酸序列的HCDR2；(c)包含SEQ ID NO:7003的氨基酸序列的HCDR3；(d)包含SEQ ID NO:7004的氨基酸序列的LCDR1；(e)包含SEQ ID NO:7005的氨基酸序列的LCDR2；和(f)包含SEQID NO:7006的氨基酸序列的LCDR3；或
(r)(a)包含SEQ ID NO:8001的氨基酸序列的HCDR1；(b)包含SEQ ID NO:8002的氨基酸序列的HCDR2；(c)包含SEQ ID NO:8003的氨基酸序列的HCDR3；(d)包含SEQ ID NO:8004的氨基酸序列的LCDR1；(e)包含SEQ ID NO:8005的氨基酸序列的LCDR2；和(f)包含SEQID NO:8006的氨基酸序列的LCDR3；或
(s)(a)包含SEQ ID NO:9001的氨基酸序列的HCDR1；(b)包含SEQ ID NO:9002的氨基酸序列的HCDR2；(c)包含SEQ ID NO:9003的氨基酸序列的HCDR3；(d)包含SEQ ID NO:9004的氨基酸序列的LCDR1；(e)包含SEQ ID NO:9005的氨基酸序列的LCDR2；和(f)包含SEQID NO:9006的氨基酸序列的LCDR3；或
(t)(a)包含SEQ ID NO:10001的氨基酸序列的HCDR1；(b)包含SEQ ID NO:10002的氨基酸序列的HCDR2；(c)包含SEQ ID NO:10003的氨基酸序列的HCDR3；(d)包含SEQ ID NO:10004的氨基酸序列的LCDR1；(e)包含SEQ ID NO:10005的氨基酸序列的LCDR2；和(f)包含SEQ ID NO:10006的氨基酸序列的LCDR3；或
(u)(a)包含SEQ ID NO:20001的氨基酸序列的HCDR1；(b)包含SEQ ID NO:20002的氨基酸序列的HCDR2；(c)包含SEQ ID NO:20003的氨基酸序列的HCDR3；(d)包含SEQ ID NO:20004的氨基酸序列的LCDR1；(e)包含SEQ ID NO:20005的氨基酸序列的LCDR2；和(f)包含SEQ ID NO:20006的氨基酸序列的LCDR3；或
(v)(a)包含SEQ ID NO:30001的氨基酸序列的HCDR1；(b)包含SEQ ID NO:30002的氨基酸序列的HCDR2；(c)包含SEQ ID NO:30003的氨基酸序列的HCDR3；(d)包含SEQ ID NO:30004的氨基酸序列的LCDR1；(e)包含SEQ ID NO:30005的氨基酸序列的LCDR2；和(f)包含SEQ ID NO:30006的氨基酸序列的LCDR3。
在某些实施方案中，CD39抗体包含VL，所述VL包含本文所提供CD39抗体中任一者的VL CDR1、CDR2和CDR3。在某些实施方案中，CD39抗体包含VL，所述VL包含抗体克隆编号1-22中任一者的VL CDR1、CDR2和CDR3。
在一些实施方案中，CD39抗体可包含：
(a)包含抗体克隆编号1的VH CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列的VH，和包含抗体克隆编号1的VL CDR1、CDR2和CDR3的VL；或
(b)包含抗体克隆编号2的VH CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列的VH，和包含抗体克隆编号2的VL CDR1、CDR2和CDR3的VL；或
(c)包含抗体克隆编号3的VH CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列的VH，和包含抗体克隆编号3的VL CDR1、CDR2和CDR3的VL；或
(d)包含抗体克隆编号4的VH CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列的VH，和包含抗体克隆编号4的VL CDR1、CDR2和CDR3的VL；或
(e)包含抗体克隆编号5的VH CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列的VH，和包含抗体克隆编号5的VL CDR1、CDR2和CDR3的VL；或
(f)包含抗体克隆编号6的VH CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列的VH，和包含抗体克隆编号6的VL CDR1、CDR2和CDR3的VL；或
(g)包含抗体克隆编号7的VH CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列的VH，和包含抗体克隆编号7的VL CDR1、CDR2和CDR3的VL；或
(h)包含抗体克隆编号8的VH CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列的VH，和包含抗体克隆编号8的VL CDR1、CDR2和CDR3的VL；或
(i)包含抗体克隆编号9的VH CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列的VH，和包含抗体克隆编号9的VL CDR1、CDR2和CDR3的VL；或
(j)包含抗体克隆编号10的VH CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列的VH，和包含抗体克隆编号10的VL CDR1、CDR2和CDR3的VL；或
(k)包含抗体克隆编号11的VH CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列的VH，和包含抗体克隆编号11的VL CDR1、CDR2和CDR3的VL；或
(l)包含抗体克隆编号12的VH CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列的VH，和包含抗体克隆编号12的VL CDR1、CDR2和CDR3的VL；或
(m)包含抗体克隆编号13的VH CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列的VH，和包含抗体克隆编号13的VL CDR1、CDR2和CDR3的VL；或
(n)包含抗体克隆编号14的VH CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列的VH，和包含抗体克隆编号14的VL CDR1、CDR2和CDR3的VL；或
(o)包含抗体克隆编号15的VH CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列的VH，和包含抗体克隆编号15的VL CDR1、CDR2和CDR3的VL；或
(p)包含抗体克隆编号16的VH CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列的VH，和包含抗体克隆编号16的VL CDR1、CDR2和CDR3的VL；或
(q)包含抗体克隆编号17的VH CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列的VH，和包含抗体克隆编号17的VL CDR1、CDR2和CDR3的VL；或
(r)包含抗体克隆编号18的VH CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列的VH，和包含抗体克隆编号18的VL CDR1、CDR2和CDR3的VL；或
(s)包含抗体克隆编号19的VH CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列的VH，和包含抗体克隆编号19的VL CDR1、CDR2和CDR3的VL；或
(t)包含抗体克隆编号20的VH CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列的VH，和包含抗体克隆编号20的VL CDR1、CDR2和CDR3的VL；或
(u)包含抗体克隆编号21的VH CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列的VH，和包含抗体克隆编号21的VL CDR1、CDR2和CDR3的VL；或
(v)包含抗体克隆编号22的VH CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列的VH，和包含抗体克隆编号22的VL CDR1、CDR2和CDR3的VL。
下文序列表提供某些所公开抗体的重链可变区序列和轻链可变区序列。
在某些实施方案中，CD39抗体包含VH，所述VH包含本文所提供CD39抗体中任一者的VH的氨基酸序列。在某些实施方案中，CD39抗体包含VH，所述VH包含抗体克隆编号1-22中任一者的VH的氨基酸序列。
在一些实施方案中，CD39抗体包含抗体克隆编号1-22中任一者的VH，但在互补决定区(CDR)外具有1个、2个、3个、4个或5个氨基酸取代，例如CDR外的1个、2个、3个、4个或5个保守取代。在一些实施方案中，CD39抗体包含抗体克隆编号1-22中任一者的VH，但在互补决定区(CDR)外具有1个、2个、3个、4个或5个回复取代。
在一些实施方案中，CD39抗体包含抗体克隆编号1-22中任一者的VH，但在VH序列的框架区中具有1个、2个、3个、4个或5个氨基酸取代，例如1个、2个、3个、4个或5个保守取代。在一些实施方案中，CD39抗体包含抗体克隆编号1-22中任一者的VH，但在VH序列的框架区中具有1个、2个、3个、4个或5个回复取代。
在一些实施方案中，CD39抗体包含本文所述CD39抗体中任一者的VH CDR和VLCDR，其中每一CDR包含0个、1个、2个或3个氨基酸添加、取代(例如保守取代)或缺失。
在某些实施方案中，CD39抗体包含含有本文所提供CD39抗体中任一者的VH CDR的氨基酸序列的VH CDR1、CDR2和CDR3，且包含与本文所提供CD39抗体中任一者的VH至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的VH。在某些实施方案中，CD39抗体包含VH，所述VH包含与抗体克隆编号1-22中任一者的VH的氨基酸序列至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的氨基酸序列。在某些实施方案中，由于VH序列的框架区中的1个、2个、3个、4个或5个氨基酸取代，例如1个、2个、3个、4个或5个保守取代，抗体的VH不同于序列表中所示的VH序列。在某些实施方案中，由于VH序列的框架区中的1个、2个、3个、4个或5个回复取代，抗体的VH不同于序列表中所示的VH序列。
在某些实施方案中，CD39抗体包含VH，所述VH由本文所提供CD39抗体中任一者的VH的氨基酸序列组成。在某些实施方案中，CD39抗体包含VH，所述VH由抗体克隆编号1-22中任一者的VH的氨基酸序列组成。
在某些实施方案中，CD39抗体包含VL，所述VL包含本文所提供CD39抗体中任一者的VL的氨基酸序列。在某些实施方案中，CD39抗体包含VL，所述VL包含抗体克隆编号1-22中任一者的VL的氨基酸序列。在某些实施方案中，CD39抗体包含含有本文所提供CD39抗体中任一者的VL CDR的氨基酸序列的VL CDR1、CDR2和CDR3，且包含与本文所提供CD39抗体中任一者的VL至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的VL。在某些实施方案中，CD39抗体包含VL，所述VL包含与抗体克隆编号1-22中任一者的VL的氨基酸序列至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的氨基酸序列。在某些实施方案中，由于VL序列的框架区中的1个、2个、3个、4个或5个氨基酸取代，例如1个、2个、3个、4个或5个保守取代，抗体的VL不同于序列表中所示的VL序列。在某些实施方案中，由于1个、2个、3个、4个或5个回复取代，抗体的VL不同于序列表中所示的VL序列。
在某些实施方案中，CD39抗体包含VL，所述VL由本文所提供CD39抗体中任一者的VL的氨基酸序列组成。在某些实施方案中，CD39抗体包含VL，所述VL由抗体克隆编号1-22中任一者的VL的氨基酸序列组成。
在某些实施方案中，CD39抗体包含含有本文所提供CD39抗体中任一者的VH的氨基酸序列的VH，且包含含有本文所提供相同CD39抗体中任一者的VL的氨基酸序列的VL。在这些实施方案中的某些实施方案中，CD39抗体包含VH，所述VH包含抗体克隆编号1-22中任一者的VH的氨基酸序列；和VL，所述VL包含抗体克隆编号1-22中任一者的VL的氨基酸序列，任选地其中VH和VL来自同一抗体克隆编号。
在某些实施方案中，抗体的VH是抗体克隆编号1-22中任一者的VH，但在VH序列的框架区中具有1个、2个、3个、4个或5个氨基酸取代，例如1个、2个、3个、4个或5个保守取代，且VL是来自上述清单的相同抗体中任一者的VL。然而，在某些实施方案中，抗体的VH是抗体克隆编号1-22中任一者的VH，但在VH序列的框架区中具有1个、2个、3个、4个或5个取代。
在某些实施方案中，CD39抗体包含VH和VL，所述VH和VL包含抗体克隆编号1-22中任一者的VH和VL的氨基酸序列。
在某些实施方案中，CD39抗体包含含有本文所提供CD39抗体中任一者的VH CDR的氨基酸序列的VH CDR1、CDR2和CDR3，以及含有本文所提供CD39抗体中任一者的VL CDR的氨基酸序列的VL CDR1、CDR2和CDR3，且还包含各自与本文所提供CD39抗体中任一者的相应VH和VL至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的VH和VL。在某些实施方案中，由于序列框架区中的1个、2个、3个、4个或5个氨基酸取代，例如1个、2个、3个、4个或5个保守取代或例如1个、2个、3个、4个或5个回复取代，抗体的VH和VL不同于序列表中所示的VH和VL序列。
在某些实施方案中，CD39抗体包含VH和VL，所述VH和VL由本文所提供CD39抗体中任一者的VH和VL的氨基酸序列组成。在某些实施方案中，CD39抗体包含VH和VL，所述VH和VL各自由抗体克隆编号1-22中任一者的VH和VL的氨基酸序列组成。
CD39抗体可包含：
(a)包含抗体克隆编号1的VH的氨基酸序列的VH，和包含抗体克隆编号1的VL的氨基酸序列的VL；或
(b)包含抗体克隆编号2的VH的氨基酸序列的VH，和包含抗体克隆编号2的VL的氨基酸序列的VL；或
(c)包含抗体克隆编号3的VH的氨基酸序列的VH，和包含抗体克隆编号3的VL的氨基酸序列的VL；或
(d)包含抗体克隆编号4的VH的氨基酸序列的VH，和包含抗体克隆编号4的VL的氨基酸序列的VL；或
(e)包含抗体克隆编号5的VH的氨基酸序列的VH，和包含抗体克隆编号5的VL的氨基酸序列的VL；或
(f)包含抗体克隆编号6的VH的氨基酸序列的VH，和包含抗体克隆编号6的VL的氨基酸序列的VL；或
(g)包含抗体克隆编号7的VH的氨基酸序列的VH，和包含抗体克隆编号7的VL的氨基酸序列的VL；或
(h)包含抗体克隆编号8的VH的氨基酸序列的VH，和包含抗体克隆编号8的VL的氨基酸序列的VL；或
(i)包含抗体克隆编号9的VH的氨基酸序列的VH，和包含抗体克隆编号9的VL的氨基酸序列的VL；
(j)包含抗体克隆编号10的VH的氨基酸序列的VH，和包含抗体克隆编号10的VL的氨基酸序列的VL；或
(k)包含抗体克隆编号11的VH的氨基酸序列的VH，和包含抗体克隆编号11的VL的氨基酸序列的VL；或
(l)包含抗体克隆编号12的VH的氨基酸序列的VH，和包含抗体克隆编号12的VL的氨基酸序列的VL；或
(m)包含抗体克隆编号13的VH的氨基酸序列的VH，和包含抗体克隆编号13的VL的氨基酸序列的VL；或
(n)包含抗体克隆编号14的VH的氨基酸序列的VH，和包含抗体克隆编号14的VL的氨基酸序列的VL；或
(o)包含抗体克隆编号15的VH的氨基酸序列的VH，和包含抗体克隆编号15的VL的氨基酸序列的VL；或
(p)包含抗体克隆编号16的VH的氨基酸序列的VH，和包含抗体克隆编号16的VL的氨基酸序列的VL；或
(q)包含抗体克隆编号17的VH的氨基酸序列的VH，和包含抗体克隆编号17的VL的氨基酸序列的VL；或
(r)包含抗体克隆编号18的VH的氨基酸序列的VH，和包含抗体克隆编号18的VL的氨基酸序列的VL；或
(s)包含抗体克隆编号19的VH的氨基酸序列的VH，和包含抗体克隆编号19的VL的氨基酸序列的VL；或
(t)包含抗体克隆编号20的VH的氨基酸序列的VH，和包含抗体克隆编号20的VL的氨基酸序列的VL；或
(u)包含抗体克隆编号21的VH的氨基酸序列的VH，和包含抗体克隆编号21的VL的氨基酸序列的VL；或
(v)包含抗体克隆编号22的VH的氨基酸序列的VH，和包含抗体克隆编号22的VL的氨基酸序列的VL。
CD39抗体可包含：
(a)包含抗体克隆编号1的VH的VH CDR的VH，和包含抗体克隆编号1的VL CDR的VL，和与抗体克隆编号1的VH和VL至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的VH和VL氨基酸序列；或
(b)包含抗体克隆编号2的VH的VH CDR的VH，和包含抗体克隆编号2的VL CDR的VL，和与抗体克隆编号2的VH和VL至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的VH和VL氨基酸序列；或
(c)包含抗体克隆编号3的VH的VH CDR的VH，和包含抗体克隆编号3的VL CDR的VL，和与抗体克隆编号3的VH和VL至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的VH和VL氨基酸序列；或
(d)包含抗体克隆编号4的VH的VH CDR的VH，和包含抗体克隆编号4的VL CDR的VL，和与抗体克隆编号4的VH和VL至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的VH和VL氨基酸序列；或
(e)包含抗体克隆编号5的VH的VH CDR的VH，和包含抗体克隆编号5的VL CDR的VL，和与抗体克隆编号5的VH和VL至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的VH和VL氨基酸序列；或
(f)包含抗体克隆编号6的VH的VH CDR的VH，和包含抗体克隆编号6的VL CDR的VL，和与抗体克隆编号6的VH和VL至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的VH和VL氨基酸序列；或
(g)包含抗体克隆编号7的VH的VH CDR的VH，和包含抗体克隆编号7的VL CDR的VL，和与抗体克隆编号7的VH和VL至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的VH和VL氨基酸序列；或
(h)包含抗体克隆编号8的VH的VH CDR的VH，和包含抗体克隆编号8的VL CDR的VL，和与抗体克隆编号8的VH和VL至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的VH和VL氨基酸序列；或
(i)包含抗体克隆编号9的VH的VH CDR的VH，和包含抗体克隆编号9的VL CDR的VL，和与抗体克隆编号9的VH和VL至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的VH和VL氨基酸序列；或
(j)包含抗体克隆编号10的VH的VH CDR的VH，和包含抗体克隆编号10的VL CDR的VL，和与抗体克隆编号10的VH和VL至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的VH和VL氨基酸序列；或
(k)包含抗体克隆编号11的VH的VH CDR的VH，和包含抗体克隆编号11的VL CDR的VL，和与抗体克隆编号11的VH和VL至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的VH和VL氨基酸序列；或
(l)包含抗体克隆编号12的VH的VH CDR的VH，和包含抗体克隆编号12的VL CDR的VL，和与抗体克隆编号12的VH和VL至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的VH和VL氨基酸序列；或
(m)包含抗体克隆编号13的VH的VH CDR的VH，和包含抗体克隆编号13的VL CDR的VL，和与抗体克隆编号13的VH和VL至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的VH和VL氨基酸序列；或
(n)包含抗体克隆编号14的VH的VH CDR的VH，和包含抗体克隆编号14的VL CDR的VL，和与抗体克隆编号14的VH和VL至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的VH和VL氨基酸序列；或
(o)包含抗体克隆编号15的VH的VH CDR的VH，和包含抗体克隆编号15的VL CDR的VL，和与抗体克隆编号15的VH和VL至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的VH和VL氨基酸序列；或
(p)包含抗体克隆编号16的VH的VH CDR的VH，和包含抗体克隆编号16的VL CDR的VL，和与抗体克隆编号16的VH和VL至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的VH和VL氨基酸序列；或
(q)包含抗体克隆编号17的VH的VH CDR的VH，和包含抗体克隆编号17的VL CDR的VL，和与抗体克隆编号17的VH和VL至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的VH和VL氨基酸序列；或
(r)包含抗体克隆编号18的VH的VH CDR的VH，和包含抗体克隆编号18的VL CDR的VL，和与抗体克隆编号18的VH和VL至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的VH和VL氨基酸序列；或
(s)包含抗体克隆编号19的VH的VH CDR的VH，和包含抗体克隆编号19的VL CDR的VL，和与抗体克隆编号19的VH和VL至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的VH和VL氨基酸序列；或
(t)包含抗体克隆编号20的VH的VH CDR的VH，和包含抗体克隆编号20的VL CDR的VL，和与抗体克隆编号20的VH和VL至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的VH和VL氨基酸序列；或
(u)包含抗体克隆编号21的VH的VH CDR的VH，和包含抗体克隆编号21的VL CDR的VL，和与抗体克隆编号21的VH和VL至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的VH和VL氨基酸序列；或
(v)包含抗体克隆编号22的VH的VH CDR的VH，和包含抗体克隆编号22的VL CDR的VL，和与抗体克隆编号22的VH和VL至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的VH和VL氨基酸序列。
在一些上述实施方案中，VH和/或VL可因存在1个、2个、3个、4个或5个氨基酸取代(例如1个、2个、3个、4个或5个保守取代)而不同于每一物种的序列。在一些实施方案中，VH可包含1个、2个、3个、4个或5个回复取代。
CD39抗体可包含：
(a)由抗体克隆编号1的VH的氨基酸序列组成的VH，和由抗体克隆编号1的VL组成的VL；或
(b)由抗体克隆编号2的VH的氨基酸序列组成的VH，和由抗体克隆编号2的VL组成的VL；或
(c)由抗体克隆编号3的VH的氨基酸序列组成的VH，和由抗体克隆编号3的VL组成的VL；或
(d)由抗体克隆编号4的VH的氨基酸序列组成的VH，和由抗体克隆编号4的VL组成的VL；或
(e)由抗体克隆编号5的VH的氨基酸序列组成的VH，和由抗体克隆编号5的VL组成的VL；或
(f)由抗体克隆编号6的VH的氨基酸序列组成的VH，和由抗体克隆编号6的VL组成的VL；或
(g)由抗体克隆编号7的VH的氨基酸序列组成的VH，和由抗体克隆编号7的VL组成的VL；或
(h)由抗体克隆编号8的VH的氨基酸序列组成的VH，和由抗体克隆编号8的VL组成的VL；或
(i)由抗体克隆编号9的VH的氨基酸序列组成的VH，和由抗体克隆编号9的VL组成的VL；或
(j)由抗体克隆编号10的VH的氨基酸序列组成的VH，和由抗体克隆编号10的VL组成的VL；或
(k)由抗体克隆编号11的VH的氨基酸序列组成的VH，和由抗体克隆编号11的VL组成的VL；或
(l)由抗体克隆编号12的VH的氨基酸序列组成的VH，和由抗体克隆编号12的VL组成的VL；或
(m)由抗体克隆编号13的VH的氨基酸序列组成的VH，和由抗体克隆编号13的VL组成的VL；或
(n)由抗体克隆编号14的VH的氨基酸序列组成的VH，和由抗体克隆编号14的VL组成的VL；或
(o)由抗体克隆编号15的VH的氨基酸序列组成的VH，和由抗体克隆编号15的VL组成的VL；或
(p)由抗体克隆编号16的VH的氨基酸序列组成的VH，和由抗体克隆编号16的VL组成的VL；或
(q)由抗体克隆编号17的VH的氨基酸序列组成的VH，和由抗体克隆编号17的VL组成的VL；或
(r)由抗体克隆编号18的VH的氨基酸序列组成的VH，和由抗体克隆编号18的VL组成的VL；或
(s)由抗体克隆编号19的VH的氨基酸序列组成的VH，和由抗体克隆编号19的VL组成的VL；或
(t)由抗体克隆编号20的VH的氨基酸序列组成的VH，和由抗体克隆编号20的VL组成的VL；或
(u)由抗体克隆编号21的VH的氨基酸序列组成的VH，和由抗体克隆编号21的VL组成的VL；或
(v)由抗体克隆编号22的VH的氨基酸序列组成的VH，和由抗体克隆编号22的VL组成的VL。
在某些实施方案中，CD39抗体包含上文和本文别处(例如序列表中)所述的抗体的可变区和/或可变区CDR 1-3中的任一者。
在一些实施方案中，CD39抗体是IgG抗体，例如IgG1、IgG2、IgG3或IgG4抗体或其经修饰形式，如下文部分中所述。在一些实施方案中，恒定区具有效应功能，且在一些实施方案中，恒定区是无效应的。
在某些实施方案中，CD39抗体包含含有本文所提供CD39抗体中任一者的重链的氨基酸序列的重链(HC)。在某些实施方案中，CD39抗体包含含有抗体克隆编号1-22中任一者的重链的氨基酸序列的重链。
在一些实施方案中，CD39抗体可包含：
(a)包含抗体克隆编号1的重链的氨基酸序列的重链，和包含抗体克隆编号1的轻链氨基酸序列的轻链；或
(b)包含抗体克隆编号2的重链的氨基酸序列的重链，和包含抗体克隆编号2的轻链氨基酸序列的轻链；或
(c)包含抗体克隆编号3的重链的氨基酸序列的重链，和包含抗体克隆编号3的轻链氨基酸序列的轻链；或
(d)包含抗体克隆编号4的重链的氨基酸序列的重链，和包含抗体克隆编号4的轻链氨基酸序列的轻链；或
(e)包含抗体克隆编号5的重链的氨基酸序列的重链，和包含抗体克隆编号5的轻链氨基酸序列的轻链；或
(f)包含抗体克隆编号6的重链的氨基酸序列的重链，和包含抗体克隆编号6的轻链氨基酸序列的轻链；或
(g)包含抗体克隆编号7的重链的氨基酸序列的重链，和包含抗体克隆编号7的轻链氨基酸序列的轻链；或
(h)包含抗体克隆编号8的重链的氨基酸序列的重链，和包含抗体克隆编号8的轻链氨基酸序列的轻链；或
(i)包含抗体克隆编号9的重链的氨基酸序列的重链，和包含抗体克隆编号9的轻链氨基酸序列的轻链；或
(j)包含抗体克隆编号10的重链的氨基酸序列的重链，和包含抗体克隆编号10的轻链氨基酸序列的轻链；或
(k)包含抗体克隆编号11的重链的氨基酸序列的重链，和包含抗体克隆编号11的轻链氨基酸序列的轻链；或
(l)包含抗体克隆编号12的重链的氨基酸序列的重链，和包含抗体克隆编号12的轻链氨基酸序列的轻链；或
(m)包含抗体克隆编号13的重链的氨基酸序列的重链，和包含抗体克隆编号13的轻链氨基酸序列的轻链；或
(n)包含抗体克隆编号14的重链的氨基酸序列的重链，和包含抗体克隆编号14的轻链氨基酸序列的轻链；或
(o)包含抗体克隆编号15的重链的氨基酸序列的重链，和包含抗体克隆编号15的轻链氨基酸序列的轻链；或
(p)包含抗体克隆编号16的重链的氨基酸序列的重链，和包含抗体克隆编号16的轻链氨基酸序列的轻链；或
(q)包含抗体克隆编号17的重链的氨基酸序列的重链，和包含抗体克隆编号17的轻链氨基酸序列的轻链；或
(r)包含抗体克隆编号18的重链的氨基酸序列的重链，和包含抗体克隆编号18的轻链氨基酸序列的轻链；或
(s)包含抗体克隆编号19的重链的氨基酸序列的重链，和包含抗体克隆编号19的轻链氨基酸序列的轻链；或
(t)包含抗体克隆编号20的重链的氨基酸序列的重链，和包含抗体克隆编号20的轻链氨基酸序列的轻链；或
(u)包含抗体克隆编号21的重链的氨基酸序列的重链，和包含抗体克隆编号21的轻链氨基酸序列的轻链；或
(v)包含抗体克隆编号22的重链的氨基酸序列的重链，和包含抗体克隆编号22的轻链氨基酸序列的轻链。
CD39抗体可包含：
(a)包含抗体克隆编号1的HC的HC CDR的重链(HC)，和包含抗体克隆编号1的LCCDR的轻链(LC)，以及分别与抗体克隆编号1的HC和LC至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的HC和LC氨基酸序列；或
(b)包含抗体克隆编号2的HC的HC CDR的HC，和包含抗体克隆编号2的LC CDR的轻链(LC)，以及分别与抗体克隆编号2的HC和LC至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的HC和LC氨基酸序列；或
(c)包含抗体克隆编号3的HC的HC CDR的HC，和包含抗体克隆编号3的LC CDR的轻链(LC)，以及分别与抗体克隆编号3的HC和LC至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的HC和LC氨基酸序列；或
(d)包含抗体克隆编号4的HC的HC CDR的HC，和包含抗体克隆编号4的LC CDR的轻链(LC)，以及分别与抗体克隆编号4的HC和LC至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的HC和LC氨基酸序列；或
(e)包含抗体克隆编号5的HC的HC CDR的HC，和包含抗体克隆编号5的LC CDR的轻链(LC)，以及分别与抗体克隆编号5的HC和LC至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的HC和LC氨基酸序列；或
(f)包含抗体克隆编号6的HC的HC CDR的HC，和包含抗体克隆编号6的LC CDR的轻链(LC)，以及分别与抗体克隆编号6的HC和LC至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的HC和LC氨基酸序列；或
(g)包含抗体克隆编号7的HC的HC CDR的HC，和包含抗体克隆编号7的LC CDR的轻链(LC)，以及分别与抗体克隆编号7的HC和LC至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的HC和LC氨基酸序列；或
(h)包含抗体克隆编号8的HC的HC CDR的HC，和包含抗体克隆编号8的LC CDR的轻链(LC)，以及分别与抗体克隆编号8的HC和LC至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的HC和LC氨基酸序列；或
(i)包含抗体克隆编号9的HC的HC CDR的HC，和包含抗体克隆编号9的LC CDR的轻链(LC)，以及分别与抗体克隆编号9的HC和LC至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的HC和LC氨基酸序列；或
(j)包含抗体克隆编号10的HC的HC CDR的HC，和包含抗体克隆编号10的LC CDR的轻链(LC)，以及分别与抗体克隆编号10的HC和LC至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的HC和LC氨基酸序列；或
(k)包含抗体克隆编号11的HC的HC CDR的HC，和包含抗体克隆编号11的LC CDR的LC，以及分别与抗体克隆编号11的HC和LC至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的HC和LC氨基酸序列；或
(l)包含抗体克隆编号12的HC的HC CDR的HC，和包含抗体克隆编号12的LC CDR的轻链(LC)，以及分别与抗体克隆编号12的HC和LC至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的HC和LC氨基酸序列；或
(m)包含抗体克隆编号13的HC的HC CDR的HC，和包含抗体克隆编号13的LC CDR的轻链(LC)，以及分别与抗体克隆编号13的HC和LC至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的HC和LC氨基酸序列；或
(n)包含抗体克隆编号14的HC的HC CDR的HC，和包含抗体克隆编号14的LC CDR的轻链(LC)，以及分别与抗体克隆编号14的HC和LC至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的HC和LC氨基酸序列；或
(o)包含抗体克隆编号15的HC的HC CDR的HC，和包含抗体克隆编号15的LC CDR的轻链(LC)，以及分别与抗体克隆编号15的HC和LC至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的HC和LC氨基酸序列；或
(p)包含抗体克隆编号16的HC的HC CDR的HC，和包含抗体克隆编号16的LC CDR的轻链(LC)，以及分别与抗体克隆编号16的HC和LC至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的HC和LC氨基酸序列；或
(q)包含抗体克隆编号17的HC的HC CDR的HC，和包含抗体克隆编号17的LC CDR的轻链(LC)，以及分别与抗体克隆编号17的HC和LC至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的HC和LC氨基酸序列；或
(r)包含抗体克隆编号18的HC的HC CDR的HC，和包含抗体克隆编号18的LC CDR的轻链(LC)，以及分别与抗体克隆编号18的HC和LC至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的HC和LC氨基酸序列；或
(s)包含抗体克隆编号19的HC的HC CDR的HC，和包含抗体克隆编号19的LC CDR的轻链(LC)，以及分别与抗体克隆编号19的HC和LC至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的HC和LC氨基酸序列；或
(t)包含抗体克隆编号20的HC的HC CDR的HC，和包含抗体克隆编号20的LC CDR的轻链(LC)，以及分别与抗体克隆编号20的HC和LC至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的HC和LC氨基酸序列；或
(u)包含抗体克隆编号21的HC的HC CDR的HC，和包含抗体克隆编号21的LC CDR的轻链(LC)，以及分别与抗体克隆编号21的HC和LC至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的HC和LC氨基酸序列；或
(v)包含抗体克隆编号22的HC的HC CDR的HC，和包含抗体克隆编号22的LC CDR的轻链(LC)，以及分别与抗体克隆编号22的HC和LC至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的HC和LC氨基酸序列。
在一些上述实施方案中，HC和/或LC可因存在1个、2个、3个、4个或5个氨基酸取代(例如1个、2个、3个、4个或5个保守取代)而不同于每一物种的序列。在一些上述实施方案中，HC和/或LC可因存在1个、2个、3个、4个或5个氨基酸取代(例如1个、2个、3个、4个或5个回复取代)而不同于每一物种的序列。
在某些实施方案中，本文所提供的抗体是抗体片段。抗体片段包括(但不限于)Fab、Fab’、Fab’-SH、F(ab’)2、Fv和scFv片段以及下文所述的其它片段。关于某些抗体片段的综述参见Hudson等人，Nat.Med.9:129-134(2003)。关于scFv片段的综述参见例如Pluckthün,The Pharmacology of Monoclonal Antibodies，第113卷，Rosenburg和Moore编辑(Springer-Verlag,New York)，第269-315页(1994)；也参见WO 93/16185；以及美国专利第5,571,894号和美国专利第5,587,458号。关于包含补救受体结合表位残基且具有延长的体内半衰期的Fab和F(ab')2片段的论述参见美国专利第5,869,046号。
双价抗体是可为二价或双特异性的具有两个抗原结合位点的抗体片段。参见例如EP 404,097；WO 1993/01161；Hudson等人，Nat.Med.9:129-134(2003)；和Hollinger等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 90:6444-6448(1993)。三价抗体和四价抗体也描述于Hudson等人，Nat.Med.9:129-134(2003)中。
单结构域抗体是包含抗体的重链可变结构域的全部或一部分或轻链可变结构域的全部或一部分的抗体片段。在某些实施方案中，单结构域抗体是人单结构域抗体(Domantis,Inc.,Waltham,MA；参见例如美国专利第6,248,516B1号)。
可通过各种技术来制造抗体片段，包括(但不限于)蛋白水解消化完整抗体以及通过重组宿主细胞(例如大肠杆菌(E.coli)或噬菌体)来产生，如本文所述。
1.多特异性抗体
在某些实施方案中，本文所提供的抗体是多特异性抗体，例如双特异性抗体。多特异性抗体是对至少两个不同位点具有结合特异性的单克隆抗体。在某些实施方案中，一种结合特异性是针对CD39且另一种结合特异性是针对任何其它抗原。在某些实施方案中，一种结合特异性是针对CD39且另一种结合特异性是针对独立地选自以下中的一者(在双特异性的情形下)或多者(在多特异性的情形下)：PD-1、PD-L1、CTLA-4、Lag-3、TIM-3、A2AR、A2BR、双重A2AR/A2BR、CD40、CD73、TIGIT、CD112R、CD96、PVRL1、PVRL2、PVRL3、PVRL4、CD155、STING、CD47和IL-27。在某些实施方案中，双特异性抗体可结合到CD39的两种不同表位。双特异性抗体也可用于将细胞毒性剂定位到表达CD39的细胞。双特异性抗体可制备为全长抗体或抗体片段。
用于制造多特异性抗体的技术包括(但不限于)重组共表达具有不同特异性的两个免疫球蛋白重链-轻链对(参见Milstein和Cuello,Nature 305:537(1983))、WO 93/08829和Traunecker等人，EMBO J.10:3655(1991))和“隆凸于孔洞中(knob-in-hole)”工程改造(参见例如美国专利第5,731,168号)。多特异性抗体也可通过以下方式来制造：工程改造用于制造抗体Fc-异源二聚体分子的静电牵引效应(WO 2009/089004A1)；使两个或多个抗体或片段交联(参见例如美国专利第4,676,980号和Brennan等人，Science,229:81(1985))；使用亮氨酸拉链产生双特异性抗体(参见例如Kostelny等人，J.Immunol.,148(5):1547-1553(1992))；使用制造双特异性抗体片段的“双价抗体”技术(参见例如Hollinger等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA,90:6444-6448(1993))；和使用单链Fv(sFv)二聚体(参见例如Gruber等人，J.Immunol.,152:5368(1994))；和制备三特异性抗体，如例如Tutt等人，J.Immunol.147:60(1991)中所述。
本文也包括经工程改造以具有三个或多个功能抗原结合位点的抗体，包括“章鱼抗体”(参见例如US 2006/0025576A1)。
本文的抗体或片段还包括包含结合到CD39以及另一不同抗原的抗原结合位点的“双重作用Fantibody”或“DAF”(参见例如US2008/0069820)。
2.抗体变体
在某些实施方案中，涵盖本文所提供抗体的氨基酸序列变体。例如，可能需要改良抗体的结合亲和力和/或其它生物性质。抗体的氨基酸序列变体可通过向编码所述抗体的核苷酸序列中引入适宜修饰或通过肽合成来制备。此类修饰包括例如抗体氨基酸序列内残基的缺失和/或插入和/或取代。可进行缺失、插入和取代的任一组合以获得最终构筑体，前提是最终构筑体具有所需特征，例如抗原结合。
3.取代、插入和缺失变体
在某些实施方案中，提供具有一个或多个氨基酸取代的抗体变体。用于取代诱变的相关位点包括HVR和FR。保守取代在表1中显示为“例示性取代”。可将氨基酸取代引入相关抗体和经筛选具有所需活性的产物中，所述所需活性是例如保留/改良的抗原结合、降低的免疫原性或经改良的ADCC或CDC。
表1
Figure BDA0003537223380000741
可根据常见侧链性质将氨基酸分组：
(1)疏水性：正亮氨酸、Met、Ala、Val、Leu、Ile；
(2)中性亲水性：Cys、Ser、Thr、Asn、Gln；
(3)酸性：Asp、Glu；
(4)碱性：His、Lys、Arg；
(5)影响链取向的残基：Gly、Pro；
(6)芳族：Trp、Tyr、Phe。
非保守取代将使得需要将这些类别中的一者的成员交换为另一类别。
可在HVR中制造变化(例如取代)，例如以改良抗体亲和力。此类变化可在HVR“热点”(即，由在体细胞成熟过程中经受高频率突变的密码子编码的残基)(参见例如Chowdhury,Methods Mol.Biol.207:179-196(2008))和/或接触抗原的残基中进行，其中测试所得变体VH或VL的结合亲和力。通过从二级文库构筑和重新选择来实现亲和力成熟已描述于例如Hoogenboom等人，Methods in Molecular Biology 178:1-37(O’Brien等人编辑，Human Press,Totowa,NJ,(2001))中。在亲和力成熟的一些实施方案中，通过众多种方法(例如易错PCR、链改组或寡核苷酸定向诱变)中的任一者将多样性引入所选用于成熟的可变基因中。然后建立二级文库。然后筛选文库以鉴别具有所需亲和力的任何抗体变体。引入多样性的另一方法涉及HVR定向方法，其中将若干HVR残基(例如一次4-6个残基)随机化。可特定鉴别(例如使用丙氨酸扫描诱变或建模)参与抗原结合的HVR残基。具体来说，通常靶向CDR-H3和CDR-L3。
在某些实施方案中，取代、插入或缺失可发生于一个或多个HVR内，只要此类变化基本上不会降低抗体结合抗原的能力即可。例如，可在HVR中进行基本上不会降低结合亲和力的保守变化(例如如本文所提供的保守取代)。此类变化可位于例如HVR中的抗原接触残基之外。在上文所提供的变体VH和VL序列的某些实施方案中，每一HVR未发生变化，或含有不超过一个、两个或三个氨基酸取代。
可用于鉴别抗体的可经靶向用于诱变的残基或区域的方法称为“丙氨酸扫描诱变”，如Cunningham和Wells(1989)Science,244:1081-1085中所述。在此方法中，鉴别残基或目标残基的组(例如带电残基，例如arg、asp、his、lys和glu)，并使所述残基或目标残基的组被中性或带负电的氨基酸(例如丙氨酸或聚丙氨酸)替代以确定是否影响抗体与抗原的相互作用。可在对初始取代展示功能敏感性的氨基酸位置引入其它取代。替代地或另外，抗原-抗体复合物的晶体结构以鉴别抗体与抗原之间的接触点。可靶向此类接触残基和相邻残基作为候选取代或将它们消除。可筛选变体以确定它们是否含有所需性质。
氨基酸序列插入包括氨基末端和/或羧基末端融合物(长度介于一个残基到含有上百个或多个残基的多肽范围内)、以及单个或多个氨基酸残基的序列内插入物。末端插入物的实例包括具有N末端甲硫氨酰残基的抗体。抗体分子的其它插入变体包括抗体N末端或C末端与酶(例如用于ADEPT)或延长抗体血清半衰期的多肽的融合物。
4.糖基化变体
在某些实施方案中，改变本文所提供的抗体以增加或降低抗体糖基化的程度。抗体糖基化位点的添加或缺失可方便地通过改变氨基酸序列以产生或去除一个或多个糖基化位点来实现。
当抗体包含Fc区时，它所连接的碳水化合物可能有所变化。由哺乳动物细胞产生的天然抗体通常包含具支链的二分枝寡糖，所述具支链的二分枝寡糖通常通过N-链接连接到Fc区的CH2结构域的Asn297。参见例如Wright等人，TIBTECH 15:26-32(1997)。寡糖可包括多种碳水化合物，例如甘露糖、N-乙酰基葡糖胺(GlcNAc)、半乳糖和唾液酸，以及连接到二分枝寡糖结构的“主干”中的GlcNAc的岩藻糖。在一些实施方案中，可修饰抗体中的寡糖以产生具有某些改良性质的抗体变体。
在一些实施方案中，提供具有缺少连接(直接或间接)到Fc区的岩藻糖的碳水化合物结构的抗体变体。例如，所述抗体中岩藻糖的量可为1％到80％、1％到65％、5％到65％或20％到40％。通过计算相对于如通过MALDI-TOF质谱所测量的连接到Asn 297的所有糖结构(例如复合物、杂合体和高甘露糖结构)的总和的Asn297处糖链内岩藻糖的平均量来确定岩藻糖的量，如例如WO 2008/077546中所述。Asn297是指位于Fc区中大约位置297处的天冬酰胺残基(Fc区残基的EU编号)；然而，因抗体中具有微小序列变化，Asn297也可位于位置297上游或下游约±3个氨基酸处，即介于位置294与300之间。此类岩藻糖基化变体可具有改良的ADCC功能。参见例如美国专利公开第US 2003/0157108号(Presta,L.)；美国专利公开第US 2004/0093621号(Kyowa Hakko Kogyo Co.,Ltd)。与“去岩藻糖基化”或“缺少岩藻糖”的抗体变体相关的公开的实例包括：US 2003/0157108；WO 2000/61739；WO 2001/29246；US2003/0115614；US 2002/0164328；US 2004/0093621；US 2004/0132140；US 2004/0110704；US2004/0110282；US 2004/0109865；WO 2003/085119；WO 2003/084570；WO 2005/035586；WO 2005/035778；WO2005/053742；WO2002/031140；Okazaki等人，J.Mol.Biol.336:1239-1249(2004)；Yamane-Ohnuki等人，Biotech.Bioeng.87:614(2004)。能够产生去岩藻糖基化抗体的细胞系的实例包括缺少蛋白质岩藻糖基化的Lec13CHO细胞(Ripka等人，Arch.Biochem.Biophys.249:533-545(1986)；美国专利申请第US 2003/0157108 A1号,Presta,L；和WO 2004/056312A1,Adams等人，尤其在实施例11中)和基因敲除细胞系，例如α-1,6-岩藻糖基转移酶基因FUT8基因敲除CHO细胞(参见例如Yamane-Ohnuki等人，Biotech.Bioeng.87:614(2004)；Kanda,Y.等人，Biotechnol.Bioeng.,94(4):680-688(2006)；和WO2003/085107)。
进一步提供具有二等分寡糖的抗体变体，例如其中连接到抗体Fc区的二分枝寡糖被GlcNAc二等分。此类抗体变体可具有降低的岩藻糖基化和/或改良的ADCC功能。此类抗体变体的实例描述于例如WO 2003/011878(Jean-Mairet等人)；美国专利第6,602,684号(Umana等人)；和US 2005/0123546(Umana等人)中。还提供在连接到Fc区的寡糖中具有至少一个半乳糖残基的抗体变体。此类抗体变体可具有改良的CDC功能。此类抗体变体描述于例如WO 1997/30087(Patel等人)；WO 1998/58964(Raju,S.)；和WO 1999/22764(Raju,S.)中。
5.Fc区变体
在某些实施方案中，可将一个或多个氨基酸修饰引入本文所提供抗体的Fc区中，由此产生Fc区变体。Fc区变体可包含人Fc区序列(例如人IgG1、IgG2、IgG3或IgG4 Fc区)，所述人Fc区序列在一个或多个氨基酸位置包含氨基酸修饰(例如取代)。
在某些实施方案中，本发明涵盖具有一些但非所有效应功能的抗体变体，此使它成为许多应用的所需候选物，在所述应用中抗体的体内半衰期至关重要，但某些效应功能(例如补体和ADCC)是不必要或有害的。可进行体外和/或体内细胞毒性测定来确认CDC和/或ADCC活性的降低/耗竭。例如，可进行Fc受体(FcR)结合测定以确保抗体缺少FcγR结合能力(因此可能缺少ADCC活性)，但保留FcRn结合能力。用于调介ADCC的原代细胞(NK细胞)仅表达FcγRIII，而单核细胞表达FcγRI、FcγRII和FcγRIII。FcR于造血细胞上的表达汇总于Ravetch和Kinet,Annu.Rev.Immunol.9:457-492(1991)的第464页的表3中。评价相关分子的ADCC活性的体外测定的非限制性实例描述于美国专利第5,500,362号(参见例如Hellstrom,I.等人，Proc.Nat’l Acad.Sci.USA 83:7059-7063(1986))和Hellstrom,I等人，Proc.Nat’l Acad.Sci.USA 82:1499-1502(1985)；美国专利第5,821,337号(参见Bruggemann,M.等人，J.Exp.Med.166:1351-1361(1987))中。替代地，可使用非放射性测定方法(参见例如用于流式细胞术的ACTITM非放射性细胞毒性测定(CellTechnology,Inc.Mountain View,CA)；和CytoTox
Figure BDA0003537223380000791
非放射性细胞毒性测定(Promega,Madison,WI))。可用于此类测定的效应细胞包括外周血单核细胞(PBMC)和自然杀手(NK)细胞。替代地或另外，相关分子的ADCC活性可在体内例如在诸如Clynes等人，Proc.Nat’l Acad.Sci.USA 95:652-656(1998)中所公开的动物模型中进行评价。还可进行C1q结合测定来确认抗体不能结合C1q且因此缺少CDC活性。参见例如WO 2006/029879和WO 2005/100402中的C1q和C3c结合ELISA。为评价补体活化，可进行CDC测定(参见例如Gazzano-Santoro等人，J.Immunol.Methods202:163(1996)；Cragg,M.S.等人，Blood 101:1045-1052(2003)；以及Cragg,M.S.和M.J.Glennie,Blood 103:2738-2743(2004))。还可使用此项技术中已知的方法来进行FcRn结合和体内清除率/半衰期测定(参见例如Petkova,S.B.等人，Int’l.Immunol.18(12):1759-1769(2006))。
具有降低的效应功能的抗体包括具有Fc区残基238、265、269、270、297、327和329中的一者或多者的取代的那些抗体(美国专利第6,737,056号)。此类Fc突变体包括在氨基酸位置265、269、270、297和327中的两者或多者处具有取代的Fc突变体，包括残基265和297被丙氨酸取代的所谓的“DANA”Fc突变体(美国专利第7,332,581号)。
描述具有改良或降低的FcR结合的某些抗体变体。(参见例如美国专利第6,737,056号；WO 2004/056312和Shields等人，J.Biol.Chem.9(2):6591-6604(2001))。
在某些实施方案中，抗体变体包含具有改良ADCC的一个或多个氨基酸取代(例如在Fc区的位置298、333和/或334(残基的EU编号)处的取代)的Fc区。
在一些实施方案中，对Fc区进行改变，从而改变(即改良或减小)C1q结合和/或补体依赖性细胞毒性(CDC)，例如如美国专利第6,194,551号、WO 99/51642和Idusogie等人，J.Immunol.164:4178-4184(2000)中所述。
具有延长的半衰期和改良的新生Fc受体(FcRn)(它负责将母体IgG转移到胎儿中)(Guyer等人，J.Immunol.117:587(1976)和Kim等人，J.Immunol.24:249(1994))结合的抗体描述于US2005/0014934A1(Hinton等人)中。那些抗体包含具有改良Fc区与FcRn的结合的一个或多个取代的Fc区。此类Fc变体包括在以下Fc区残基中的一者或多者处具有取代的那些Fc变体：238、252、254、256、265、272、286、303、305、307、311、312、317、340、356、360、362、376、378、380、382、413、424或434，例如取代Fc区残基434(例如美国专利第7,371,826号)。关于Fc区变体的其它实例也参见Duncan和Winter,Nature 322:738-40(1988)；美国专利第5,648,260号；美国专利第5,624,821号；和WO 94/29351。
在一些实施方案中，提供根据序列表的抗体，其中同种型是人IgG1。在一些实施方案中，提供根据序列表的抗体，其中同种型是人IgG4。在一些实施方案中，提供根据序列表的抗体，其中同种型是人IgG4，其中存在丝氨酸228到脯氨酸(S228P)的单突变。在一些实施方案中，提供根据序列表的抗体，其中同种型是人IgG4，其中存在丝氨酸228到脯氨酸(S228P)和亮氨酸235到谷氨酸(L235E)的两个突变。S228P突变在文献中出现在位置228。S→P突变在克隆21和克隆22中出现在位置229处，但在本文中仍称为S228P。在一些实施方案中，抗体包含SEQ ID NO:40002的重链恒定区。在一些实施方案中，抗体包含SEQ ID NO:40003的重链恒定区。
6.半胱氨酸工程改造的抗体变体
在某些实施方案中，可能需要产生半胱氨酸工程改造的抗体，例如“硫代M抗体(thioMantibody)”，其中抗体的一个或多个残基被半胱氨酸残基取代。在具体实施方案中，经取代残基出现在抗体的可及位点处。通过用半胱氨酸取代那些残基，反应性硫醇基团由此定位于抗体的可及位点处且可用于使抗体缀合到其它部分(例如药物部分或接头-药物部分)，以产生免疫缀合物，如本文进一步描述。在某些实施方案中，下列残基中的任一者或多者可用半胱氨酸取代：轻链的V205(Kabat编号)、重链的A118(EU编号)和重链Fc区的S400(EU编号)。半胱氨酸工程改造的抗体可如例如美国专利第7,521,541号中所述来产生。
7.抗体衍生物
在某些实施方案中，本文所提供的抗体可经进一步修饰以含有此项技术中已知且易于获得的额外非蛋白质性部分。适于衍生抗体的部分包括(但不限于)水溶性聚合物。水溶性聚合物的非限制性实例包括(但不限于)聚乙二醇(PEG)、乙二醇/丙二醇的共聚物、羧甲基纤维素、葡聚糖、聚乙烯醇、聚乙烯基吡咯烷酮、聚-1,3-二氧戊环、聚-1,3,6-三噁烷、乙烯/马来酸酐共聚物、聚氨基酸(均聚物或无规共聚物)和葡聚糖或聚(n-乙烯基吡咯烷酮)聚乙二醇、聚丙二醇均聚物、聚氧化丙烯/氧化乙烯共聚物、聚氧乙烯化多元醇(例如甘油)、聚乙烯醇和其混合物。聚乙二醇丙醛可因它在水中具有稳定性而在制造方面具有优势。聚合物可具有任何分子量，且可为具支链或不具支链的。连接到抗体的聚合物的数量可有所变化，且如果连接一个以上的聚合物，那么它们可为相同或不同的分子。一般来说，衍生所用聚合物的数量和/或类型可基于包括(但不限于)以下在内的考虑因素来确定：拟改良抗体的具体性质或功能、抗体衍生物是否将用于所定义条件下的疗法等。
在另一实施方案中，提供可通过暴露于辐射来选择性加热的抗体和非蛋白性部分的缀合物。在一些实施方案中，非蛋白质性部分是碳纳米管(Kam等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 102:11600-11605(2005))。辐射可具有任一波长，且包括(但不限于)如下波长：不会危害正常细胞，但将非蛋白质性部分加热到可将靠近抗体-非蛋白质性部分的细胞杀伤时的温度。
B.重组方法
可使用例如如美国专利第4,816,567号中所述的重组方法和组合物来产生抗体。在一些实施方案中，提供编码本文所述抗CD39抗体的经分离核酸。此(类)核酸可编码包含抗体的VL的氨基酸序列和/或包含抗体的VH的氨基酸序列(例如抗体的轻链和/或重链)。在另一实施方案中，提供包含此(类)核酸的一种或多种载体(例如表达载体)。在另一实施方案中，提供包含此(类)核酸的宿主细胞。在一个所述实施方案中，宿主细胞包含(例如已转化有)：(1)包含核酸的载体，所述核酸编码包含抗体的VL的氨基酸序列和包含抗体的VH的氨基酸序列，或(2)包含编码包含抗体的VL的氨基酸序列的核酸的第一载体，和包含编码包含抗体的VH的氨基酸序列的核酸的第二载体。在一些实施方案中，宿主细胞是真核细胞，例如中国仓鼠卵巢(CHO)细胞或淋巴细胞(例如Y0、NS0、Sp20细胞)。在一些实施方案中，提供制造抗CD39抗体的方法，其中所述方法包括在适于表达抗体的条件下培养包含编码抗体的核酸的宿主细胞，如上文所提供，和任选地从宿主细胞(或宿主细胞培养基)回收抗体。
对于抗CD39抗体的重组产生，分离例如如上文所述编码抗体的核酸并将它(们)插入一个或多个载体中以在宿主细胞中进一步克隆和/或表达。此(类)核酸可使用常规程序容易地分离和测序(例如通过使用能够特异性结合到编码抗体的重链和轻链的基因的寡核苷酸探针)。
适于克隆或表达抗体编码载体的宿主细胞包括本文所述的原核细胞或真核细胞。例如，抗体可在细菌中产生，尤其在无需糖基化和Fc效应功能时。关于抗体片段和多肽在细菌中的表达参见例如美国专利第5,648,237号、第5,789,199号和第5,840,523号。(也参见Charlton,Methods in Molecular Biology，第248卷(B.K.C.Lo编辑，Humana Press,Totowa,NJ,2003)，第245-254页，所述文献描述抗体片段在大肠杆菌中的表达)。表达后，抗体可以可溶性流份从细菌细胞浆糊分离且可被进一步纯化。
除原核生物外，真核微生物(例如丝状真菌或酵母)也是适用于抗体编码载体的克隆或表达宿主，包括糖基化路径已经“人源化”、从而产生具有部分或完全人糖基化模式的抗体的真菌和酵母菌株。参见Gerngross,Nat.Biotech.22:1409-1414(2004)和Li等人，Nat.Biotech.24:210-215(2006)。
适于表达糖基化抗体的宿主细胞还源自多细胞生物体(无脊椎动物和脊椎动物)。无脊椎动物细胞的实例包括植物细胞和昆虫细胞。已鉴别出多种杆状病毒株可与昆虫细胞联合使用，尤其用于转染草地贪夜蛾(Spodoptera frugiperda)细胞。
也可利用植物细胞培养物作为宿主。参见例如美国专利第5,959,177号、美国专利第6,040,498号、美国专利第6,420,548号、美国专利第7,125,978号和美国专利第6,417,429号(描述用于在转基因植物中产生抗体的PLANTIBODIESTM技术)。
也可使用脊椎动物细胞作为宿主。例如，可使用适于悬浮生长的哺乳动物细胞系。有用哺乳动物宿主细胞系的其它实例是经SV40转化的猴肾CV1细胞系(COS-7)；人胚肾细胞系(如例如Graham等人，J.Gen Virol.36:59(1977)中所述的293或293细胞)；幼仓鼠肾细胞(BHK)；小鼠赛特利细胞(mouse sertoli cell，如例如Mather,Biol.Reprod.23:243-251(1980)中所述的TM4细胞)；猴肾细胞(CV1)；非洲绿猴肾细胞(VERO-76)；人子宫颈癌细胞(HELA)；犬肾细胞(MDCK)；布法罗大鼠(buffalo rat)肝细胞(BRL 3A)；人肺细胞(W138)；人肝细胞(Hep G2)；小鼠乳房肿瘤(MMT 060562)；TRI细胞，如例如Mather等人，AnnalsN.Y.Acad.Sci.383:44-68(1982)中所述；MRC 5细胞；和FS4细胞。其它有用哺乳动物宿主细胞系包括中国仓鼠卵巢(CHO)细胞，包括DHFR-CHO细胞(Urlaub等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 77:4216(1980))；和骨髓瘤细胞系，例如Y0、NS0和Sp2/0。关于适于抗体产生的某些哺乳动物宿主细胞系的综述参见例如Yazaki和Wu,Methods inMolecular Biology，第248卷(B.K.C.Lo编辑，Humana Press,Totowa,NJ)，第255-268页(2003)。
C.免疫缀合物
本发明还提供免疫缀合物，所述免疫缀合物包含缀合到一种或多种其它治疗剂或放射性同位素的本文的抗CD39抗体。
在另一实施方案中，免疫缀合物包含缀合到放射性原子以形成放射性缀合物的如本文所述抗体。众多种放射性同位素可用于产生放射性缀合物。实例包括At211、I131、I125、Y90、Re186、Re188、Sm153、Bi212、P32、Pb212和Lu的放射性同位素。当使用放射性缀合物来检测时，它可包含用于闪烁法研究的放射性原子，例如tc99m或I123；或用于核磁共振(NMR)成像(也称为磁共振成像，mri)的自旋标记，例如碘-123以及碘-131、铟-111、氟-19、碳-13、氮-15、氧-17、钆、锰或铁。
抗体的缀合物可使用众多种双功能蛋白质偶合剂制得，例如3-(2-吡啶基二硫代)丙酸N-琥珀酰亚胺酯(SPDP)、4-(N-马来酰亚胺甲基)环己烷-1-甲酸琥珀酰亚胺酯(SMCC)、亚胺基硫杂环戊烷(IT)、亚胺酯的双功能衍生物(例如己二酰亚胺二甲酯HCl)、活性酯(例如辛二酸二琥珀酰亚胺酯)、醛(例如戊二醛)、双-叠氮基化合物(例如双(对-叠氮基苯甲酰基)己二胺)、双-重氮衍生物(例如双-(对-重氮苯甲酰基)-己二胺)、二异氰酸酯(例如甲苯2,6-二异氰酸酯)和双-活性氟化合物(例如1,5-二氟-2,4-二硝基苯)。例如，蓖麻蛋白免疫毒素可如Vitetta等人，Science 238:1098(1987)中所述来制备。经碳-14标记的1-异氰硫基苄基-3-甲基二亚乙基三胺五乙酸(MX-DTPA)是用于将放射性核苷酸缀合到抗体的例示性螯合剂。参见WO94/11026。接头可为促进细胞毒性药物在细胞中释放的“可裂解接头”。例如，可使用酸不稳定性接头、肽酶敏感性接头、光不稳定性接头、二甲基接头或含有二硫化物的接头(Chari等人，Cancer Res.52:127-131(1992)；美国专利第5,208,020号)。
本文的免疫缀合物或ADC明确地涵盖(但不限于)使用包括(但不限于)以下的交联试剂制备的此类缀合物：BMPS、EMCS、GMBS、HBVS、LC-SMCC、MBS、MPBH、SBAP、SIA、SIAB、SMCC、SMPB、SMPH、磺基-EMCS、磺基-GMBS、磺基-KMUS、磺基-MBS、磺基-SIAB、磺基-SMCC和磺基-SMPB以及SVSB((4-乙烯基砜)苯甲酸琥珀酰亚胺酯)，所述交联试剂在市面上有售(例如来自Pierce Biotechnology,Inc.,Rockford,IL.,U.S.A)。
D.医药调配物和组合物
如本文所述的抗CD39抗体的医药调配物或组合物是通过混合具有所需纯度的所述抗体与一种或多种可选医药学上可接受的载体、稀释剂和/或赋形剂(Remington'sPharmaceutical Sciences，第16版，Osol,A.编辑(1980))以冻干调配物或水溶液形式制备。医药学上可接受的载体、稀释剂和赋形剂通常在所用剂量和浓度下对接受者无毒，且包括(但不限于)：无菌水；缓冲剂，例如磷酸盐、柠檬酸盐和其它有机酸；抗氧化剂，包括抗坏血酸和甲硫氨酸；防腐剂(例如十八烷基二甲基苄基氯化铵；氯化六甲双铵；苯扎氯铵(benzalkonium chloride)；苄索氯铵(benzethonium chloride)；苯酚、丁醇或苯甲醇；对羟基苯甲酸烷基酯，例如对羟基苯甲酸甲酯或对羟基苯甲酸丙酯；儿茶酚；间苯二酚；环己醇；3-戊醇；和间甲酚)；低分子量(小于约10个残基)多肽；蛋白质，例如血清白蛋白、明胶或免疫球蛋白；亲水聚合物，例如聚乙烯基吡咯烷酮；氨基酸，例如甘氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、组氨酸、精氨酸或赖氨酸；单糖、二糖和其它碳水化合物，包括葡萄糖、甘露糖或糊精；螯合剂，例如EDTA；糖，例如蔗糖、甘露醇、海藻糖或山梨醇；成盐抗衡离子，例如钠；金属错合物(例如Zn-蛋白质错合物)；和/或非离子型表面活性剂，例如聚乙二醇(PEG)。本文的例示性医药学上可接受的载体还包括间质性药物分散剂，例如可溶性中性活性玻尿酸酶糖蛋白(sHASEGP)，例如人可溶性PH-20玻尿酸酶糖蛋白，例如rHuPH20(
Figure BDA0003537223380000851
BaxterInternational,Inc.)。某些例示性sHASEGP和使用方法(包括rHuPH20)描述于美国专利公开第2005/0260186号和第2006/0104968号中。在一个方面中，将sHASEGP与一种或多种其它糖氨基聚糖酶(例如软骨素酶)组合。
例示性冻干抗体调配物描述于美国专利第6,267,958号中。水性抗体调配物包括描述于美国专利第6,171,586号和WO2006/044908中的那些水性抗体调配物，后者调配物包括组氨酸-乙酸盐缓冲液。
本文的调配物或组合物也可视需要含有一种以上的用于所治疗的特定适应症的活性成分，优选为具有不会对彼此造成不利影响的补充活性的那些活性成分。此类活性成分适宜地以有效地用于预期目的的量以组合形式存在。
活性成分可装入例如通过凝聚技术或通过界面聚合制备的微胶囊(分别例如羟甲基纤维素或明胶微胶囊和聚-(甲基丙烯酸甲酯)微胶囊))中、胶质药物递送系统(例如脂质体、白蛋白微球体、微乳液、纳米颗粒和纳米胶囊)中或巨乳液中。此类技术公开于Remington's Pharmaceutical Sciences，第16版，Osol,A.编辑(1980)中。
可制备持续释放制剂。持续释放制剂的适宜实例包括含有抗体的固体疏水性聚合物的半渗透性基质，所述半渗透性基质呈成形物品形式，例如膜或微胶囊。
拟用于体内施用的调配物或组合物通常为无菌的。无菌性可通过例如无菌过滤膜进行过滤来容易地实现。
E.治疗方法
本文所提供的任一抗CD39抗体可用于治疗方法中。在通篇中，在论述“抗体”时也应了解，也涵盖包含抗体的组合物。
在一个方面中，提供抗CD39抗体用作药物。在一些实施方案中，提供抗CD39抗体用于增强、增加和/或持续患有肿瘤的受试者中的抗肿瘤免疫反应。在一些实施方案中，肿瘤是癌性肿瘤。在一些实施方案中，提供抗CD39抗体用于治疗癌症。
在另一方面中，本发明提供抗CD39抗体于制造或制备药物的用途。在一些实施方案中，药物用于增强、增加和/或持续患有肿瘤的受试者中的抗肿瘤免疫反应。在一些实施方案中，肿瘤是癌性肿瘤。在一些实施方案中，药物用于治疗癌症。
在其它方面中，本发明提供治疗需要减小或抑制CD39的酶活性的疾病和/或病症的方法。在一些实施方案中，提供增强、增加和/或持续患有肿瘤的受试者中的抗肿瘤免疫反应的方法，所述方法包括施用如本文所述的抗CD39抗体。在一些实施方案中，肿瘤是癌性肿瘤。在一些实施方案中，提供治疗患有癌症的受试者的癌症的方法，所述方法包括施用如本文所述的抗CD39抗体。
在一些方面中，本发明提供缓解CD39蛋白相关的疾病或病症的一种或多种症状的方法；或缓解CD39蛋白相关的疾病或病症(例如本文所述疾病或病症中的任一者，例如癌症)的一种或多种症状的抗CD39抗体或包含抗CD39抗体的药物。在一些方面中，本发明提供减少CD39蛋白相关的疾病或病症的一种或多种症状的症状次数或严重程度的方法；或减少CD39蛋白相关的疾病或病症(例如本文所述疾病或病症中的任一者，例如癌症)的一种或多种症状的症状次数或严重程度的抗CD39抗体或包含抗CD39抗体的药物。在特定实施方案中，CD39蛋白相关的疾病或病症的症状是肿瘤，且减少是减小肿瘤的大小、使肿瘤无法生长或消除肿瘤。
本文所述的抗体可用于例如治疗癌症。在一些实施方案中，提供治疗癌症的方法，所述方法包括向受试者施用有效量的本文所述抗体。在一些实施方案中，抗体可抑制受试者中至少一种肿瘤的生长。在一些实施方案中，提供抑制患有癌症的受试者组织中的CD39的方法，所述方法包括向受试者施用本文所述的抗体或组合物，其中与施用前组织中的CD39活性或CD39的总量相比，所述施用减小组织中的CD39活性或CD39的总量。在一些实施方案中，提供防止患有癌症的受试者组织中的CD39介导的eATP和eADP向细胞外腺苷转化的方法，所述方法包括施用本文所述的抗体或组合物，其中所述施用减小组织的肿瘤微环境内的细胞外腺苷水平。在一些实施方案中，提供抑制患有癌症的受试者组织中的CD39活性的方法，所述方法包括施用本文所述的抗体或组合物，其中所述施用改良引起针对肿瘤细胞的免疫反应的能力。
本文提供治疗患有癌症的受试者的方法，所述方法包括向受试者施用有效量的本文所述CD39抗体，使得受试者得以治疗。CD39抗体可单独使用。替代地，CD39抗体可与另一疗法或剂联合使用，如下文进一步描述。
在一些实施方案中，通过施用抗CD39抗体治疗患有癌症的受试者的方法使先天免疫细胞浸润到肿瘤微环境中。在一些实施方案中，与来自未经治疗的个体的样品相比，先天免疫细胞的浸润在例如施用疗法后的个体的样品中更大。在一些实施方案中，先天免疫细胞的浸润大于施用PD-1拮抗剂(例如抗PD-1抗体)的先天免疫细胞的浸润。在一些实施方案中，先天免疫细胞是骨髓细胞。在一些实施方案中，先天免疫细胞是肿瘤相关巨噬细胞。在一些实施方案中，肿瘤相关巨噬细胞对F4/80抗原的表达呈阳性。在一些实施方案中，先天免疫细胞是NK细胞。
癌症可为具有实体肿瘤或血液恶性病(例如液体肿瘤)的癌症。在一些实施方案中，癌症为晚期癌症。在一些实施方案中，癌症为复发性癌症。在一些实施方案中，癌症为难治性癌症。在一些实施方案中，癌症为转移性癌症。在一些实施方案中，癌症为实体肿瘤。在一些实施方案中，癌症为晚期实体肿瘤。在一些实施方案中，癌症为复发性实体肿瘤。在一些实施方案中，癌症为难治性实体肿瘤。在一些实施方案中，癌症为转移性实体肿瘤。在一些实施方案中，癌症为晚期复发性实体肿瘤。在一些实施方案中，癌症为晚期难治性实体肿瘤。在一些实施方案中，癌症为晚期转移性实体肿瘤。在一些实施方案中，癌症为复发性、难治性实体肿瘤。在一些实施方案中，癌症为复发性、转移性实体肿瘤。在一些实施方案中，癌症为难治性、转移性肿瘤。在一些实施方案中，肿瘤为晚期、复发性、难治性实体肿瘤。在一些实施方案中，癌症为晚期、复发性、转移性肿瘤。在一些实施方案中，癌症为晚期、难治性、转移性肿瘤。在一些实施方案中，癌症为复发性、难治性、转移性实体肿瘤。在一些实施方案中，肿瘤为晚期、复发性、难治性、转移性实体肿瘤。
用于治疗的癌症的非限制性实例包括鳞状细胞癌瘤、小细胞肺癌、非小细胞肺癌、鳞状非小细胞肺癌(NSCLC)、非鳞状NSCLC、神经胶质瘤、胃肠癌、肾癌(例如透明细胞癌)、卵巢癌、肝癌、结肠直肠癌、子宫内膜癌、肾癌(例如肾细胞癌(RCC))、前列腺癌(例如激素难治性前列腺腺癌)、甲状腺癌、神经母细胞瘤、胰腺癌、神经胶母细胞瘤(多形性神经胶母细胞瘤)、子宫颈癌、胃癌(stomach cancer)、膀胱癌、肝癌、乳腺癌、结肠癌和头颈癌(或癌瘤)、胃癌(gastric cancer)、生殖细胞肿瘤、小儿肉瘤、鼻窦自然杀手、黑色素瘤(例如转移性恶性黑色素瘤，例如皮肤或眼内恶性黑色素瘤)、骨癌、皮肤癌、子宫癌、肛区癌、睾丸癌、输卵管癌、子宫内膜癌、子宫颈癌、阴道癌、外阴癌、食道癌、小肠癌、内分泌系统癌、副甲状腺癌、肾上腺癌、软组织肉瘤、尿道癌、阴茎癌、儿童实体肿瘤、输尿管癌、肾盂癌、中枢神经系统赘瘤(CNS)、原发性CNS淋巴瘤、肿瘤血管生成、脊椎肿瘤、脑癌、脑干神经胶质瘤、垂体腺瘤、卡波西氏肉瘤(Kaposi's sarcoma)、表皮样癌、鳞状细胞癌、T细胞淋巴瘤、环境诱发的癌症(包括由石棉诱发的癌症)、病毒相关的癌症或病毒起源的癌症(例如人乳头瘤病毒(HPV)相关肿瘤或人乳头瘤病毒起源的肿瘤)和衍生自两个主要血细胞谱系(即骨髓样细胞系(它产生粒细胞、红细胞、血小板、巨噬细胞和肥大细胞)或淋巴样细胞系(它产生B细胞、T细胞、NK细胞和浆细胞))中任一者的血液恶性病，例如所有类型的白血病、淋巴瘤和骨髓瘤，例如急性、慢性、淋巴细胞性和/或骨髓性白血病，例如急性白血病(ALL)、急性骨髓性白血病(AML)、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)和慢性骨髓性白血病(CML)、未分化AML(MO)、成髓细胞性白血病(M1)、成髓细胞性白血病(M2；具有细胞成熟)、前髓细胞性白血病(M3或M3变体[M3V])、骨髓单核细胞性白血病(M4或具有嗜酸性细胞增多症的M4变体[M4E])、单核细胞性白血病(M5)、红白血病(M6)、巨核细胞性白血病(M7)、孤立性粒细胞肉瘤和绿色瘤；淋巴瘤，例如霍奇金氏淋巴瘤(Hodgkin's lymphoma，HL)、非霍奇金氏淋巴瘤(NHL)、B细胞血液恶性病(例如B细胞淋巴瘤)、T细胞淋巴瘤、淋巴浆细胞样淋巴瘤、单核细胞样B细胞淋巴瘤、粘膜相关淋巴样组织(MALT)淋巴瘤、退行性(例如Ki 1+)大细胞淋巴瘤、成人T细胞淋巴瘤/白血病、外套细胞淋巴瘤、血管免疫母细胞性T细胞淋巴瘤、血管中心性淋巴瘤、肠道T细胞淋巴瘤、原发性纵膈B细胞淋巴瘤、前体T淋巴母细胞性淋巴瘤、T淋巴母细胞性；和淋巴瘤/白血病(T-Lbly/T-ALL)、外周T细胞淋巴瘤、淋巴母细胞性淋巴瘤、移植后淋巴组织增生性病症、真性组织细胞性淋巴瘤、原发性中枢神经系统淋巴瘤、原发性积液淋巴瘤、B细胞淋巴瘤、淋巴母细胞性淋巴瘤(LBL)、淋巴样谱系的造血肿瘤、急性淋巴母细胞性白血病、弥漫性大B细胞淋巴瘤、伯基特氏淋巴瘤(Burkitt's lymphoma)、滤泡性淋巴瘤、弥漫性组织细胞性淋巴瘤(DHL)、免疫母细胞性大细胞淋巴瘤、前体B淋巴母细胞性淋巴瘤、皮肤T细胞淋巴瘤(CTLC)(也称为蕈样霉菌病或塞扎里综合征(Sezary syndrome))和淋巴浆细胞样淋巴瘤(LPL)与瓦登斯特伦巨球蛋白血症(Waldenstrom's macroglobulinemia)；骨髓瘤，例如IgG骨髓瘤、轻链骨髓瘤、非分泌性骨髓瘤、郁积型骨髓瘤(也称为无痛性骨髓瘤)、孤立性浆细胞瘤和多发性骨髓瘤、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、多毛细胞淋巴瘤；骨髓样谱系的造血肿瘤、间叶来源的肿瘤，包括纤维肉瘤和横纹肌肉瘤；精原细胞瘤、畸形癌、中枢和外周神经肿瘤，包括星形细胞瘤、神经鞘瘤；间叶来源的肿瘤，包括纤维肉瘤、横纹肌肉瘤和骨肉瘤；和其它肿瘤，包括黑色素瘤、着色性干皮病、角质棘皮瘤、精原细胞瘤、甲状腺滤泡癌和畸形癌、淋巴样谱系的造血肿瘤，例如T细胞和B细胞肿瘤，包括(但不限于)T细胞病症，例如T前淋巴细胞性白血病(T-PLL)，包括小细胞和脑状细胞类型；T细胞类型的大颗粒淋巴细胞白血病(LGL)；a/d T-NHL肝脾淋巴瘤；外周/胸腺后T细胞淋巴瘤(多形和免疫母细胞性亚型)；血管中心性(鼻)T细胞淋巴瘤；头颈癌、肾癌、直肠癌、甲状腺癌；急性骨髓样淋巴瘤以及所述癌症的任何组合。本文所述的方法可用于治疗转移性癌症和/或不可切除性癌症和/或复发性癌症和/或难治性癌症和/或晚期癌症和/或再发性癌症。本文所述的方法可用于治疗胰腺癌。本文所述的方法可用于治疗胃癌。本文所述的方法可用于治疗前列腺癌。本文所述的方法可用于治疗子宫内膜癌。本文所述的方法可用于治疗非小细胞肺癌。本文所述的方法可用于治疗结肠直肠癌。本文所述的方法可用于治疗卵巢癌。
在某些实施方案中，将本文所述的抗体施用于患有癌症的受试者，所述受试者已展现对先前治疗(例如使用肿瘤免疫药物或免疫疗法药物的先前治疗)反应不足或进展。在一些实施方案中，癌症为先前治疗难治性或抗性的，为固有难治性或抗性(例如为PD-1路径拮抗剂难治性)，或获得抗性或难治性状态。例如，本文所述的抗体可施用于对第一疗法无反应或反应不足的受试者或在治疗(例如抗PD-1路径拮抗剂单独或与另一疗法(例如与抗PD-1路径拮抗剂疗法)组合治疗)后具有疾病进展的受试者。在其它实施方案中，将本文所述的抗体施用于先前尚未接受肿瘤免疫剂(例如PD-1路径拮抗剂)(即用它治疗)的受试者。
F.组合
抗CD39抗体可单独使用或与其它治疗剂(在本文中有时也称为第二疗法)组合使用。例如，抗CD39抗体可与至少一种其它治疗剂组合使用(例如还包括施用第二疗法，或还包括施用第二疗法和第三疗法(癌症疗法的三联组合))。
在一些实施方案中，靶向另一独立抑制路径或其组合具有进一步增强免疫细胞活化超出单一疗法的潜能。
在一些实施方案中，提供增强、增加和/或持续受试者中的抗肿瘤免疫反应的方法，所述方法包括向患有肿瘤的受试者施用抗CD39抗体，其中所述方法还包括施用第二疗法。在一些实施方案中，提供增强、增加和/或持续受试者中的抗肿瘤免疫反应的方法，所述方法包括向患有肿瘤的受试者施用抗CD39抗体，其中所述方法还包括施用第二疗法和第三疗法。
在一些实施方案中，提供治疗受试者癌症的方法，所述方法包括向患有癌症的受试者施用抗CD39抗体，其中所述方法还包括施用第二疗法。在一些实施方案中，提供治疗受试者癌症的方法，所述方法包括向患有癌症的受试者施用抗CD39抗体，其中所述方法还包括施用第二疗法和第三疗法。
在一些实施方案中，提供抑制患有癌症的受试者组织中的CD39的方法，所述方法包括向患有癌症的受试者施用抗CD39抗体，其中与施用前组织中的CD39活性或CD39的总量相比，所述施用减小组织中的CD39活性或CD39的总量，且其中所述方法还包括施用第二疗法。在一些实施方案中，提供抑制患有癌症的受试者组织中的CD39的方法，所述方法包括向患有癌症的受试者施用抗CD39抗体，其中与施用前组织中的CD39活性或CD39的总量相比，所述施用减小组织中的CD39活性或CD39的总量，且其中所述方法还包括施用第二疗法和第三疗法。
在一些实施方案中，提供增强、增加和/或持续受试者中的抗肿瘤免疫反应的方法，所述方法包括向患有肿瘤的受试者施用抗CD39抗体，其中所述方法还包括施用第二疗法，其中第二疗法是PD-1拮抗剂。在一些实施方案中，提供增强、增加和/或持续受试者中的抗肿瘤免疫反应的方法，所述方法包括向患有肿瘤的受试者施用抗CD39抗体，其中所述方法还包括施用PD-1拮抗剂和第三疗法。
在一些实施方案中，提供治疗受试者癌症的方法，所述方法包括向患有癌症的受试者施用抗CD39抗体，其中所述方法还包括施用第二疗法，其中第二疗法是PD-1拮抗剂。在一些实施方案中，提供治疗受试者癌症的方法，所述方法包括向患有癌症的受试者施用抗CD39抗体，其中所述方法还包括施用PD-1拮抗剂和第三疗法。
在一些实施方案中，提供抑制患有癌症的受试者组织中的CD39的方法，所述方法包括向患有癌症的受试者施用抗CD39抗体，其中与施用前组织中的CD39活性或CD39的总量相比，所述施用减小组织中的CD39活性或CD39的总量，且其中所述方法还包括施用第二疗法，其中第二疗法是PD-1拮抗剂。在一些实施方案中，提供抑制患有癌症的受试者组织中的CD39的方法，所述方法包括向患有癌症的受试者施用抗CD39抗体，其中与施用前组织中的CD39活性或CD39的总量相比，所述施用减小组织中的CD39活性或CD39的总量，且其中所述方法还包括施用PD-1拮抗剂和第三疗法。
在一些实施方案中，提供增强、增加和/或持续受试者中的抗肿瘤免疫反应的方法，所述方法包括向患有肿瘤的受试者施用抗CD39抗体，其中所述方法还包括施用第二疗法，其中第二疗法是PD-L1拮抗剂。在一些实施方案中，提供增强、增加和/或持续受试者中的抗肿瘤免疫反应的方法，所述方法包括向患有肿瘤的受试者施用抗CD39抗体，其中所述方法还包括施用PD-L1拮抗剂和第三疗法。
在一些实施方案中，提供治疗受试者癌症的方法，所述方法包括向患有癌症的受试者施用抗CD39抗体，其中所述方法还包括施用第二疗法，其中第二疗法是PD-L1拮抗剂。在一些实施方案中，提供治疗受试者癌症的方法，所述方法包括向患有癌症的受试者施用抗CD39抗体，其中所述方法还包括施用PD-L1拮抗剂和第三疗法。
在一些实施方案中，提供抑制患有癌症的受试者组织中的CD39的方法，所述方法包括向患有癌症的受试者施用抗CD39抗体，其中与施用前组织中的CD39活性或CD39的总量相比，所述施用减小组织中的CD39活性或CD39的总量，且其中所述方法还包括施用第二疗法，其中第二疗法是PD-L1拮抗剂。在一些实施方案中，提供抑制患有癌症的受试者组织中的CD39的方法，所述方法包括向患有癌症的受试者施用抗CD39抗体，其中与施用前组织中的CD39活性或CD39的总量相比，所述施用减小组织中的CD39活性或CD39的总量，且其中所述方法还包括施用PD-L1拮抗剂和第三疗法。
在一些实施方案中，提供增强、增加和/或持续受试者中的抗肿瘤免疫反应的方法，所述方法包括向患有肿瘤的受试者施用抗CD39抗体，其中所述方法还包括施用第二疗法，其中第二疗法是CD73拮抗剂。在一些实施方案中，提供增强、增加和/或持续受试者中的抗肿瘤免疫反应的方法，所述方法包括向患有肿瘤的受试者施用抗CD39抗体，其中所述方法还包括施用CD73拮抗剂和第三疗法。
在一些实施方案中，提供治疗受试者癌症的方法，所述方法包括向患有癌症的受试者施用抗CD39抗体，其中所述方法还包括施用第二疗法，其中第二疗法是CD73拮抗剂。在一些实施方案中，提供治疗受试者癌症的方法，所述方法包括向患有癌症的受试者施用抗CD39抗体，其中所述方法还包括施用CD73拮抗剂和第三疗法。
在一些实施方案中，提供抑制患有癌症的受试者组织中的CD39的方法，所述方法包括向患有癌症的受试者施用抗CD39抗体，其中与施用前组织中的CD39活性或CD39的总量相比，所述施用减小组织中的CD39活性或CD39的总量，且其中所述方法还包括施用第二疗法，其中第二疗法是CD73拮抗剂。在一些实施方案中，提供抑制患有癌症的受试者组织中的CD39的方法，所述方法包括向患有癌症的受试者施用抗CD39抗体，其中与施用前组织中的CD39活性或CD39的总量相比，所述施用减小组织中的CD39活性或CD39的总量，且其中所述方法还包括施用CD73拮抗剂和第三疗法。
在一些实施方案中，提供增强、增加和/或持续受试者中的抗肿瘤免疫反应的方法，所述方法包括向患有肿瘤的受试者施用抗CD39抗体，其中所述方法还包括施用第二疗法，其中第二疗法是A2AR拮抗剂、A2BR拮抗剂或双重A2AR/A2B拮抗剂。在一些实施方案中，提供增强、增加和/或持续受试者中的抗肿瘤免疫反应的方法，所述方法包括向患有肿瘤的受试者施用抗CD39抗体，其中所述方法还包括施用A2AR拮抗剂、A2BR拮抗剂或双重A2AR/A2B拮抗剂和第三疗法。
在一些实施方案中，提供治疗受试者癌症的方法，所述方法包括向患有癌症的受试者施用抗CD39抗体，其中所述方法还包括施用第二疗法，其中第二疗法是A2AR拮抗剂、A2BR拮抗剂或双重A2AR/A2B拮抗剂。在一些实施方案中，提供治疗受试者癌症的方法，所述方法包括向患有癌症的受试者施用抗CD39抗体，其中所述方法还包括施用A2AR拮抗剂、A2BR拮抗剂或双重A2AR/A2B拮抗剂和第三疗法。
在一些实施方案中，提供抑制患有癌症的受试者组织中的CD39的方法，所述方法包括向患有癌症的受试者施用抗CD39抗体，其中与施用前组织中的CD39活性或CD39的总量相比，所述施用减小组织中的CD39活性或CD39的总量，且其中所述方法还包括施用第二疗法，其中第二疗法是A2AR拮抗剂、A2BR拮抗剂或双重A2AR/A2B拮抗剂。在一些实施方案中，提供抑制患有癌症的受试者组织中的CD39的方法，所述方法包括向患有癌症的受试者施用抗CD39抗体，其中与施用前组织中的CD39活性或CD39的总量相比，所述施用减小组织中的CD39活性或CD39的总量，且其中所述方法还包括施用A2AR拮抗剂、A2BR拮抗剂或双重A2AR/A2B拮抗剂和第三疗法。
在一些实施方案中，提供增强、增加和/或持续受试者中的抗肿瘤免疫反应的方法，所述方法包括向患有肿瘤的受试者施用抗CD39抗体，其中所述方法还包括施用第二疗法，其中第二疗法是CD47拮抗剂。在一些实施方案中，提供增强、增加和/或持续受试者中的抗肿瘤免疫反应的方法，所述方法包括向患有肿瘤的受试者施用抗CD39抗体，其中所述方法还包括施用CD47拮抗剂和第三疗法。
在一些实施方案中，提供治疗受试者癌症的方法，所述方法包括向患有癌症的受试者施用抗CD39抗体，其中所述方法还包括施用第二疗法，其中第二疗法是CD47拮抗剂。在一些实施方案中，提供治疗受试者癌症的方法，所述方法包括向患有癌症的受试者施用抗CD39抗体，其中所述方法还包括施用CD47拮抗剂和第三疗法。
在一些实施方案中，提供抑制患有癌症的受试者组织中的CD39的方法，所述方法包括向患有癌症的受试者施用抗CD39抗体，其中与施用前组织中的CD39活性或CD39的总量相比，所述施用减小组织中的CD39活性或CD39的总量，且其中所述方法还包括施用第二疗法，其中第二疗法是CD47拮抗剂。在一些实施方案中，提供抑制患有癌症的受试者组织中的CD39的方法，所述方法包括向患有癌症的受试者施用抗CD39抗体，其中与施用前组织中的CD39活性或CD39的总量相比，所述施用减小组织中的CD39活性或CD39的总量，且其中所述方法还包括施用CD47拮抗剂和第三疗法。
在一些实施方案中，提供增强、增加和/或持续受试者中的抗肿瘤免疫反应的方法，所述方法包括向患有肿瘤的受试者施用抗CD39抗体，其中所述方法还包括施用第二疗法，其中第二疗法是CTLA4拮抗剂。在一些实施方案中，提供增强、增加和/或持续受试者中的抗肿瘤免疫反应的方法，所述方法包括向患有肿瘤的受试者施用抗CD39抗体，其中所述方法还包括施用CTLA4拮抗剂和第三疗法。
在一些实施方案中，提供治疗受试者癌症的方法，所述方法包括向患有癌症的受试者施用抗CD39抗体，其中所述方法还包括施用第二疗法，其中第二疗法是CTLA4拮抗剂。在一些实施方案中，提供治疗受试者癌症的方法，所述方法包括向患有癌症的受试者施用抗CD39抗体，其中所述方法还包括施用CTLA4拮抗剂和第三疗法。
在一些实施方案中，提供抑制患有癌症的受试者组织中的CD39的方法，所述方法包括向患有癌症的受试者施用抗CD39抗体，其中与施用前组织中的CD39活性或CD39的总量相比，所述施用减小组织中的CD39活性或CD39的总量，且其中所述方法还包括施用第二疗法，其中第二疗法是CTLA4拮抗剂。在一些实施方案中，提供抑制患有癌症的受试者组织中的CD39的方法，所述方法包括向患有癌症的受试者施用抗CD39抗体，其中与施用前组织中的CD39活性或CD39的总量相比，所述施用减小组织中的CD39活性或CD39的总量，且其中所述方法还包括施用CTLA4拮抗剂和第三疗法。
在一些实施方案中，其它治疗剂或第二疗法或第三疗法是化学治疗剂、调理剂、调控T细胞(“Treg”)耗竭剂、除CD39外的靶的拮抗剂或除CD39外的靶的激动剂。在某些实施方案中，其它治疗剂或第二疗法或第三疗法是本文所述的化学治疗剂或任何已知的化学治疗剂。在一些实施方案中，其它治疗剂或第二疗法或第三疗法是调理剂，其中调理剂是除抗CD39抗体外靶向癌细胞或肿瘤细胞的抗体。在一些实施方案中，其它治疗剂或第二疗法或第三疗法是本文所述的Treg耗竭剂或任何已知的Treg耗竭剂。在一些实施方案中，其它治疗剂或第二疗法或第三疗法是除CD39外的靶的拮抗剂。在一些实施方案中，其它治疗剂或第二疗法或第三疗法是除CD39外的靶的激动剂。
在一些情况下，其它治疗剂或第二疗法或第三疗法靶向独立抑制路径，例如涉及PD-1、PD-L1、CTLA-4、Lag-3、TIM-3、A2AR、A2BR、CD40或CD73的路径。在一些实施方案中，其它治疗剂或第二疗法或第三疗法拮抗PD-1、PD-L1、CTLA-4、Lag-3、TIM-3、A2AR、A2BR、CD40或CD73中的一者或多者。在一些实施方案中，其它治疗剂或第二疗法或第三疗法是靶向腺苷轴的剂。在一些实施方案中，靶向腺苷轴的剂是CD73抑制剂。在一些实施方案中，靶向腺苷轴的剂是A2AR拮抗剂、A2BR拮抗剂或双重A2AR/A2BR拮抗剂。适用于本文所述的组合疗法中的拮抗剂包括(但不限于)配体、抗体(例如单克隆抗体和双特异性抗体)和多价剂。在一个实施方案中，拮抗剂是融合蛋白，例如Fc融合蛋白，例如AMP-244。在一些实施方案中，PD-1拮抗剂是抗PD-1抗体或抗PD-L1抗体。
在一些实施方案中，所述方法还包括施用第二疗法，其中第二疗法是施用PD-1拮抗剂(例如抗PD-1抗体)。在一些实施方案中，所述方法使肿瘤微环境中的干扰素γ(IFN-γ)反应增加。在一些实施方案中，IFN-γ反应的增加大于仅施用PD-1拮抗剂的IFN-γ反应。在一些实施方案中，IFN-γ反应的增加大于尚未接受PD-1拮抗剂施用的受试者的IFN-γ反应。在一些实施方案中，IFN-γ反应的增加是肿瘤微环境中的肿瘤相关巨噬细胞中干扰素γ(IFN-γ)相关的基因的上调。在一些实施方案中，IFN-γ反应的增加是肿瘤微环境中的IFN-γ蛋白量增加。在一些实施方案中，IFN-γ反应的增加是从肿瘤微环境分离的细胞中的IFN-γ基因表达增加。
在一些实施方案中，使用抗CD39抗体和PD-1拮抗剂(例如抗PD-1抗体)治疗患有癌症的受试者的方法使先天免疫细胞浸润到肿瘤微环境中。在一些实施方案中，先天免疫细胞的浸润大于仅施用PD-1拮抗剂的先天免疫细胞的浸润。在一些实施方案中，先天免疫细胞的浸润大于尚未接受PD-1拮抗剂施用的受试者的先天免疫细胞的浸润。在一些实施方案中，先天免疫细胞是骨髓细胞。在一些实施方案中，先天免疫细胞是肿瘤相关巨噬细胞。在一些实施方案中，肿瘤相关巨噬细胞对F4/80抗原的表达呈阳性。在一些实施方案中，先天免疫细胞是NK细胞。
例示性抗PD-1抗体是尼沃鲁单抗(nivolumab，BMS-936558)，或包含WO 2006/121168中所述的抗体17D8、2D3、4H1、5C4、7D3、5F4和4A11中的一者的CDR或可变区的抗体。在某些实施方案中，抗PD-l抗体是WO2012/145493中所述的MK-3475(派姆单抗)；WO 2012/145493中所述的AMP-514；PDR001；BGB-A317(替雷利珠单抗(tislelizumab))和BGB-108；如WO2016106159中所述的244C8和388D4；REGN2810；匹利珠单抗(pidilizumab)；TSR-042；PF-06801591；或AMP-224。其它已知PD-1抗体和其它PD-1抑制剂包括WO 2009/014708、WO 03/099196、WO 2009/114335、WO 2011/066389、WO 2011/161699、WO 2012/145493、美国专利第7,635,757号和美国专利第8,217,149号以及美国专利公开第2009/0317368号中所述的那些PD-1抗体和PD-1抑制剂。也可使用WO2013/173223中所公开的任一抗PD-1抗体。与这些抗体中的一者竞争结合和/或结合到PD-1上与这些抗体中的一者相同的表位的抗PD-1抗体也可用于组合治疗中。
在一些实施方案中，可用于组合疗法中的抗PD-L1抗体是BMS-936559(在WO 2007/005874和美国专利第7,943,743号中称为12A4)，或包含PCT公开WO 07/005874和美国专利第7,943,743号中所述的3G10、12A4、10A5、5F8、10H10、1B12、7H1、11E6、12B7和13G4的CDR或可变区的抗体。在某些实施方案中，抗PD-L1抗体是MEDI4736(也称为德瓦鲁单抗(durvalumab)和抗B7-H1)、MPDL3280A(也称为阿替珠单抗(atezolizumab)和RG7446)、MSB0010718C(也称为阿维鲁单抗(avelumab)；WO2013/79174)、FAZ053、MDX1105或rHigM12B7。也可使用WO2013/173223、WO2011/066389、WO2012/145493、美国专利第7,635,757号和美国专利第8,217,149号以及美国公开第2009/145493号中所公开的任一抗PD-L1抗体。与这些抗体中的任一者竞争和/或结合到与这些抗体中的任一者相同的表位的抗PD-L1抗体也可用于组合治疗中。
在某些实施方案中，本公开的CD39抗体可与CTLA-4拮抗剂(例如抗CTLA-4抗体)一起使用。在一个实施方案中，抗CTLA-4抗体是选自以下的组的抗体：
Figure BDA0003537223380000991
(PCT公开WO01/14424中所述的伊匹单抗(ipilimumab)或抗体10D1)、曲美木单抗(tremelimumab，之前称为替西莫单抗(ticilimumab)、CP-675,206)、以下公开中的任一者中所述的单克隆抗体或抗CTLA-4抗体：WO 98/42752；WO 00/37504；美国专利第6,207,156号；Hurwitz等人(1998)Pro.Natl.Acad.Sci.USA 95(17):10067-10071；Camacho等人(2004)J.Clin.Oncology 22(145):抗体片段编号2505(抗体CP-675206)；和Mokyr等人(1998)Cancer Res.58:5301-5304。也可使用WO2013/173223中所公开的任一抗CTLA-4抗体。
在一些实施方案中，本公开的CD39抗体与LAG-3(在本文和其它地方也称为LAG3)拮抗剂组合使用。在一些实施方案中，LAG-3抑制剂选自由LAG525、BMS-986016和TSR-033组成的组。抗LAG3抗体的实例包括包含美国专利公开第US2011/0150892号、WO10/19570和WO2014/008218中所述的抗体25F7、26H10、25E3、8B7、11F2或17E5的CDR或可变区的抗体。在一个实施方案中，抗LAG-3抗体是BMS-986016。可使用的其它公认抗LAG-3抗体包括US2011/007023、WO08/132601和WO09/44273中所述的IMP731和IMP-321。与这些抗体中的任一者竞争和/或结合到与这些抗体中的任一者相同的表位的抗LAG-3抗体也可用于组合治疗中。
在一些实施方案中，本公开的CD39抗体与腺苷A2AR拮抗剂、A2BR拮抗剂或双重A2AR/A2BR拮抗剂组合使用。A2AR拮抗剂、A2BR拮抗剂和双重A2AR/A2BR拮抗剂的实例包括普赖迪特(Prelad enant)/SCH 420814(Merck/Schering,CAS注册号：377727-87-2)，它描述于Hodgson等人(2009)J Pharmacol Exp Ther 330(1):294-303中且所述文献通过引用以其整体并入本文中；ST-4206(Leadiant Biosci ences)，它描述于美国专利9,133,197中且所述专利通过引用以其整体并入本文中；KW-6356(Kyowa Hakko Kogyo)、托扎迪特(Tozadena nt)/SYN-115(Acorda)、依曲茶碱(Istradefylline)/KW-6002(Kyowa Ha kkoKogyo,CAS注册号：155270-99-8)，它描述于LeWitt等人(2008)Ann Neurol 63(3):295-302中且所述文献通过引用以其整体并入本文中；茶碱(theophylline)(CAS注册号：58-55-9)、NIR178(Novartis)；AB928(Arcus Biosciences)、GBV-2034(Globavir)、韦帕迪特(Vipadenant)(Redox/Juno)、AZD4635/HTL-1071(AstraZeneca/Heptares)，它描述于WO2011/095625中且所述文献通过引用以其整体并入本文中；CPI-444/V81444(Corvus/Genentech)，它描述于WO 2009/156737中且所述文献的全文都以引用方式并入本文中；PBF509(Palobiofa rma/Novartis)，它描述于US 8,796,284和WO 2017/025918中且所述文献通过引用以其整体并入本文中；US8114845、US9029393、US20170015758或US20160129108中所述的A2AR拮抗剂，所有所述文献通过引用以其整体并入本文中；和ATL-444、MSX-3、SCH-58261、SCH-412,348、SCH-442,416、VER-6623、VER-6947、VER-7835、CGS-15943或ZM-241,385。
在一些实施方案中，本公开的CD39抗体与腺苷A2BR拮抗剂组合使用。在一些实施方案中，本公开的CD39抗体与双重A2AR/A2BR拮抗剂组合使用。
在一些实施方案中，本公开的CD39抗体与CD40抑制剂组合使用。
在一些实施方案中，本公开的CD39抗体与靶向腺苷轴的剂(例如CD73抑制剂或A2AR/A2BR拮抗剂)组合使用。
在一些实施方案中，本公开的CD39抗体与CD73抑制剂组合使用。CD73抑制剂的实例包括小分子CD73抑制剂(例如AB421(Arcus))、CD73抗体或其结合到CD73的抗原结合部分，例如MEDI9447(Medimmune)、BMS-986179(Bristol Meyers Squibb)，或例如US2018/0009899中所述的CD73抑制剂(Corvus)，所述专利通过引用以其整体并入本文中。
在一些实施方案中，本公开的CD39抗体与TIM-3抑制剂组合使用。TIM-3抑制剂的实例包括MGB453(Novartis)、TSR-022(Tesaro)或LY3321367(Eli Lilly)。适用于本文所述的组合疗法中的拮抗剂包括(但不限于)配体、抗体(例如单克隆抗体和双特异性抗体)和多价剂。
在一些实施方案中，一种或多种其它治疗剂是嵌合抗原受体(CAR)细胞疗法。在一些实施方案中，CAR细胞疗法是CTL019。
在一些实施方案中，PVR基因家族的成员在肿瘤细胞上上调且可展现固有的促肿瘤性质。因此，在一些实施方案中，第二疗法选自以下中的一者或多者：TIGIT拮抗剂、CD112R拮抗剂、CD96拮抗剂、PVRL1拮抗剂、PVRL2拮抗剂、PVRL3拮抗剂、PVRL4拮抗剂和CD155拮抗剂。适用于本文所述的组合疗法中的拮抗剂包括(但不限于)配体、抗体(例如单克隆抗体和双特异性抗体)和多价剂。
STING激动剂诱导先天免疫细胞活化，从而增加T细胞启动和免疫细胞募集到肿瘤微环境中。靶向STING激动剂与CD39的组合具有甚至进一步增加T细胞和NK细胞募集和活化的潜能。
增加的抗CD47抗体介导的吞噬作用可增加巨噬细胞将癌症源性抗原呈递到T细胞。使用抗CD47抗体和抗CD39抗体(例如本文所提供的抗CD39抗体)的组合治疗提供增强癌症抗原特异性T细胞反应的机会且完全涵盖于本文中。
在一些实施方案中，其它治疗剂或第二疗法或第三疗法是CD47拮抗剂。在一些实施方案中，CD47拮抗剂是抗CD47抗体。抗CD47抗体可包含SEQ ID NO:40004(包含野生型人IgG4恒定区的重链)和SEQ ID NO:40005(轻链)。在一些实施方案中，抗CD47抗体包含：(a)包含SEQ ID NO:40006的氨基酸序列的HCDR1；(b)包含SEQ ID NO:40007的氨基酸序列的HCDR2；(c)包含SEQ ID NO:40008的氨基酸序列的HCDR3；(d)包含SEQ ID NO:40009的氨基酸序列的LCDR1；(e)包含SEQ ID NO:40010的氨基酸序列的LCDR2；和(f)包含SEQ ID NO:40011的氨基酸序列的LCDR3。参见美国专利第9,803,016号(例如SEQ ID NO:24和SEQ IDNO:26)，所述专利通过引用以其整体并入本文中。
本文的抗体也可在其它疗法(例如手术、化学疗法、放射疗法或施用生物剂，例如另一治疗性抗体)之前、基本上同时或之后提供。在例如施用两种疗法或施用癌症疗法的三联组合的一些实施方案中，所述疗法可同步、连续和/或在不同时间点根据它们自身给药时间表施用。在一些实施方案中，癌症在选自手术、化学疗法和放射疗法或其组合的疗法后已再发或进展。例如，当存在可存在微转移的风险和/或为降低复发风险时，如本文所述的CD39抗体可作为辅助疗法施用。
在一些实施方案中，化学治疗剂与本文所述的抗CD39抗体组合使用。例示性化学治疗剂包括(但不限于)蒽环(例如多柔比星、伊达比星、道诺霉素、阿糖胞苷(cytarabine)、泛艾霉素、戊柔比星和米托蒽醌(mitoxantrone))(参见例如Minotti等人(2004)PharmacolRev56(2):185-229)、拓扑异构酶抑制剂(例如托泊替康(topotecan)；癌康定(Hycamtin)、喜树碱(camptothecin)、依托泊苷)(参见例如Pommier等人(2010)Chem Biol 17(5):421-433；所述文献通过引用以其整体并入本文中)、博来霉素(bleomycin)(Kimura等人(1972)Cancer29(1):58-60)、吉西他滨(Plunkett等人(1995)Semin Oncol 22(4增刊11):3-10)、铂(platin)(例如卡铂(carboplatin)、顺铂(cisplatin)、奥沙利铂(oxaliplatin)、沙铂(satraplatin)、吡铂(picoplatin))(Kelland(2007)Nat Rev Cancer 7(8):573-584)、紫杉烷(例如多西他赛(docetaxel)、太平洋紫杉醇、埃布尔杉烷(abraxane))(Abal等人(2003)Curr Cancer Drug Targets 3(3):193-203)(包括紫杉烷的白蛋白结合形式(例如白蛋白结合的太平洋紫杉醇)、DNA烷基化剂(例如环磷酰胺、苯达莫斯汀(bendamustine))(Leoni等人(2008)Clin Cancer Res 14(1):309-317)、CHOP(环磷酰胺、多柔比星盐酸盐、长春新碱(vincristine)和泼尼松(prednisone)的药物组合)(Dunleavy(2014)HematologyAm Soc Hematol Educ Program 2014(1):107-112)以及氟尿嘧啶和其衍生物(Alvarez等人(2012)Expert Opin Ther Pat 22(2):107-123，所述文献通过引用以其整体并入本文中)。
在一些实施方案中，化学治疗剂诱导免疫原性细胞死亡(ICD)。在一些实施方案中，诱导ICD的剂是蒽环。在一些实施方案中，蒽环选自多柔比星、道诺霉素、泛艾霉素、伊达比星和戊柔比星。在一些实施方案中，蒽环是多柔比星。在一些实施方案中，诱导ICD的剂是铂衍生物。在一些实施方案中，铂衍生物选自奥沙利铂、卡铂和顺铂。在一些实施方案中，铂衍生物是奥沙利铂。
适于与本发明的组合物组合和/或共施用的其它化学治疗剂包括例如：紫杉醇(taxol)、细胞松弛素B、短杆菌素D、溴乙锭(ethidium bromide)、依米丁(emetine)、丝裂霉素、依托泊苷、替尼泊苷(tenoposide)、长春新碱、长春碱、秋水仙碱(colchicin)、多柔比星、道诺霉素、二羟基炭疽菌素二酮(dihydroxyanthrancindione)、米托蒽醌、光辉霉素(mithramycin)、放线菌素D、1-去氢睾甾酮(1-dehydrotestosterone)、糖皮质素、普鲁卡因(procaine)、四卡因(tetracaine)、利多卡因(lidocaine)、普萘洛尔(propranolol)和嘌呤霉素(puromycin)和其类似物或同系物。其它剂包括例如抗代谢物(例如氨甲喋呤、6-巯基嘌呤、6-硫鸟嘌呤、阿糖胞苷、5-氟尿嘧啶达卡巴嗪(5-fluorouracil decarbazine))、烷基化剂(例如甲基二氯乙胺(mechlorethamine)、噻替派(thioTEPA)、氮芥苯丁酸、美法仑、卡莫司汀(carmustine)(BSNU)、洛莫司汀(lomustine)(CCNU)、环磷酰胺、白消安(busulfan)、二溴甘露醇、链佐霉素(streptozotocin)、丝裂霉素C、顺式-二氯二胺铂(II)(DDP)、丙卡巴肼(procarbazine)、六甲蜜胺(altretamine)、顺铂、卡铂、奥沙利铂、奈达铂(nedaplatin)、沙铂或四硝酸三铂)、蒽环(例如道诺霉素(先前为柔红霉素(daunomycin))和多柔比星)、抗生素(例如放线菌素D(dactinomcin)(先前为放线菌素)、博来霉素、光辉霉素和安曲霉素(anthramycin)(AMC))和抗有丝分裂剂(例如长春新碱和长春碱)和替莫唑胺(temozolomide)。
为治疗癌症，所述组合可与一种或多种其它抗癌剂(例如化学治疗剂、生长抑制剂、抗癌疫苗(例如基因疗法疫苗)、抗血管生成剂和/或抗赘瘤组合物)联合施用。
在一些实施方案中，抗炎症药物可与所述组合一起施用，例如类固醇或非类固醇抗炎症药物(NSAID)。在需要联合使用本文所述抗CD39抗体治疗或在它之前使异常增殖细胞静止的情形下，也可向受试者施用激素和类固醇(包括合成类似物)，例如17a-炔雌醇、乙烯雌酚、睾固酮、泼尼松、氟甲睾酮(Fluoxymesterone)、丙酸屈他雄酮(Dromostanolonepropionate)、睾内酯(Testolactone)、乙酸甲地孕酮(Megestrolacetate)、甲基泼尼松龙(Methylprednisolone)、甲基-睾固酮、泼尼松龙、曲安西隆(Triamcinolone)、氯烯雌醚(Chlorotrianisene)、羟基孕酮、氨鲁米特(Aminoglutethimide)、雌莫司汀(Estramustine)、乙酸甲羟孕酮(Medroxyprogesteroneacetate)、柳菩林(Leuprolide)、氟他胺(Flutamide)、托瑞米芬(Toremifene)、
Figure BDA0003537223380001051
当采用本文所述的方法或组合物时，也可视需要施用用于调节临床环境中的肿瘤生长或转移的其它剂，例如抗模拟物。
上述此类组合疗法涵盖组合施用(其中在同一或单独调配物或组合物中包括两种或三种或多种治疗剂)和单独施用(在所述情形下，可在施用一种或多种其它治疗剂之前、同时和/或之后施用抗CD39抗体)。在一些实施方案中，抗CD39抗体的施用和其它治疗剂的施用发生在彼此的约一个月内，或约一周、两周或三周内，或约一天、两天、三天、四天、五天或六天内。
抗CD39抗体(和任何其它治疗剂)可通过任何适宜方式施用，包括非经肠、肺内和鼻内以及(如果需要用于局部治疗)病灶内施用。非经肠输注包括肌内、静脉内、动脉内、腹膜内或皮下施用。可通过任一适宜途径、例如通过注射、例如静脉内或皮下注射来给药，此部分取决于施用是短期施用还是长期施用。本文涵盖各种给药时间表，包括(但不限于)在不同时间点单次或多次施用、浓注施用和脉冲输注。
抗CD39抗体(和二级抗体疗法)可以与良好医疗实践一致的方式来配制、给药和施用。在此上下文中需考虑的因素包括所治疗的具体病症、所治疗的具体哺乳动物、单个受试者的临床疾患、病因、剂的递送位点、施用方法、施用时间安排和从业医师所知的其它因素。如本文所用，“分割剂量”是将单个单位剂量或总日剂量分成两个或多个剂量，例如单次单位剂量的两次或多次施用。抗体可以“分割剂量”施用。
抗体无需但任选地与目前用于预防或治疗所讨论病症的一种或多种剂一起配制。此类其它剂的有效量取决于调配物或组合物中所存在抗体的量、病症或治疗的类型以及上文所论述的其它因素。这些剂通常以相同剂量和如本文所述的施用途径来使用，或以本文所述剂量的约1％到99％来使用，或以凭经验/临床确定适宜的任一剂量和任一途径来使用。在一些实施方案中，抗体提供于调配物中用于立即释放，且另一剂经配制用于延时释放，或反之亦然。
G.制品
在另一方面中，提供含有可用于治疗、预防和/或诊断上述病症的材料的制品。制品包含容器和位于容器上或与容器缔合的标记或包装插页。适宜容器包括例如瓶子、小瓶、注射器、IV溶液袋等。容器可从诸如玻璃或塑料的众多种材料形成。容器装有自身或与另一组合物组合时可有效地治疗、预防和/或诊断疾患的组合物，且可具有无菌存取通道(例如，容器可为静脉内溶液袋或具有可由皮下注射针刺穿的塞子的小瓶)。组合物中的至少一种活性剂是抗体。标记或包装插页指示组合物用于治疗所选疾患。另外，制品可包含(a)含有组合物的第一容器，其中组合物包含抗CD39抗体；和(b)含有组合物的第二容器，其中组合物包含另一细胞毒性剂或其它治疗剂。此实施方案中的制品还可包含指示组合物可用于治疗特定疾患的包装插页。替代地或另外，制品还可包含第二(或第三)容器，所述容器包含医药学上可接受的缓冲剂，例如抑菌性注射用水(BWFI)、磷酸盐缓冲盐水、林格氏溶液(Ringer's solution)和右旋糖溶液。它可另外包括从商业和用户角度来看所需的其它材料，包括其它缓冲剂、稀释剂、过滤器、针和注射器。
应理解，替代抗CD39抗体或除所述抗体以外，任一上述制品可包括免疫缀合物。
IV.实施例
实施例1.抗CD39抗体产生
使用来自Pierce的EZ-Link Sulfo-NHS-生物素化试剂盒将CD39抗原(重组CD39；R&D systems目录号4397-EN)生物素化。山羊F(ab’)2抗人κ-FITC(LC-FITC)、外抗生物素蛋白(ExtrAvidin)-PE(EA-PE)和链霉抗生物素蛋白(Streptavidin)-AF633(SA-633)分别从Southern Biotech、Sigma和Molecular Probes获得。链霉抗生物素蛋白微珠和MACS LC分离柱购自Miltenyi Biotec。山羊抗人IgG-PE(人-PE)从Southern Biotech获得。
初次发现
如先前所述使各自约109多样性的八个原初人合成酵母文库繁殖(参见例如Y.Xu等人，Addressing polyspecificity of antibodies selected from an in vitro yeastpresentation system:a FACS-based,high-throughput selection and analyticaltool.PEDS 26.10,663-70(2013)；WO2009036379；WO2010105256；和WO2012009568)。对于前两个选择周期，利用Miltenyi MACS系统进行磁珠分选技术，如先前所述(参见例如Siegel等人，High efficiency recovery and epitope-specific sorting of an scFv yeastdisplay library.”J Immunol Methods 286(1-2),141-153(2004))。简言之，将酵母细胞(约1010个细胞/文库)与1.5ml的10nM生物素化Fc融合抗原在30℃下在洗涤缓冲液(磷酸盐缓冲盐水(PBS)/0.1％牛血清白蛋白(BSA))中一起培育15min。用40ml冰冷洗涤缓冲液洗涤一次后，将细胞沉淀重悬浮于20mL洗涤缓冲液中，且将链霉抗生物素蛋白微珠(500μl)添加到酵母中并在4℃下培育15min。然后，使酵母沉淀，重悬浮于20mL洗涤缓冲液中，且加载到Miltenyi LS柱上。加载20mL后，用3mL洗涤缓冲液将柱洗涤3次。然后从磁场移除柱，并用5mL生长培养基洗脱酵母，且然后使所述酵母生长过夜。使用流式细胞术进行以下选择周期。使约2×107个酵母沉淀，用洗涤缓冲液洗涤三次，且在30℃下在平衡条件下与递减浓度的生物素化抗原(200nM到5nM)一起培育，或与多特异性耗竭试剂(PSR)一起培育以从选择去除非特异性抗体。对于PSR耗竭，如先前所述将文库与生物素化PSR试剂的1:10稀释物一起培育(参见例如Y.Xu等人，Addressing polyspecificity of antibodies selectedfrom an in vitro yeast presentation system:a FACS-based,high-throughputselection and analytical tool.PEDS 26.10,663-70(2013))。然后用洗涤缓冲液将酵母洗涤两次，且在4℃下用LC-FITC(以1:100稀释)和SA-633(以1:500稀释)或EAPE(以1:50稀释)二级试剂染色15min。用洗涤缓冲液洗涤两次后，将细胞沉淀重悬浮于0.3mL洗涤缓冲液中且转移到带滤盖的分选管中。
使用FACS ARIA分选仪(BD Biosciences)进行分选，且确定分选门以选择具有所需特征的抗体。重复选择周期直到获得具有所有所需特征的群体。在最后一个分选周期后，将酵母平铺且挑选单个菌落进行表征。
轻链分批改组
在初次发现期中使用轻链多样化方案来进一步发现和改良抗体。
轻链分批多样化方案：通过PCR从酵母提取原初选择输出的重链且转化到多样性为5×106的轻链文库中。如原初发现中所述利用一个MACS周期和三个FACS周期进行选择。在不同的FACS周期中，寻找文库的PSR结合和通过抗原滴定的亲和压力。进行分选以获得具有所需特征的群体。
抗体亲和力成熟
通过将多样性引入重链可变区中来进行抗体的亲和力成熟，如下文所述。
CDRH1和CDRH2选择：将单个抗体的CDRH3重组到CDRH1和CDRH2变体的多样性为1×108的预制备文库中，且如原初发现中所述使用一个MACS周期和三个FACS周期来进行选择。在不同的FACS周期中，寻找文库的PSR结合、小鼠交叉反应性和通过滴定的亲和压力或通过抗原与亲代Fab或亲代IgG的预复合的亲和压力，以富集亲和力高于亲代IgG的结合物。进行分选以获得具有所需特征的群体。
抗体产生和纯化
使酵母克隆生长到饱和，且然后在30℃下在振荡的同时诱导48小时。诱导后，使酵母细胞沉淀且收获上清液用于纯化。使用蛋白质A柱纯化IgG且用乙酸(pH 2.0)洗脱。通过木瓜酶消化产生Fab片段且经KappaSelect(GE Healthcare LifeSciences)纯化。
克隆1-20是IgG1抗体(人IgG1恒定区的序列显示为SEQ ID NO:40000)。克隆21-22是具有单点突变S228P的IgG4抗体(具有S228P突变的人IgG4恒定区的序列显示为SEQ IDNO:40002)。克隆22与克隆21的不同之处在于VH FR4中的单个氨基酸(克隆21中的K、克隆22中的R)。一般来说，使用SEQ ID NO:40002(S228P突变)、SEQ ID NO:40003(S228P和L235E)、SEQ ID NO:40000(IgG1野生型)和SEQ ID NO:40001(IgG4野生型)的重链恒定区的抗体也可分别根据克隆编号以及-A、-B、-C和-D来提及。一般来说，本文所述的所有例示性抗体包含人κ轻链。
克隆21的重链和轻链蛋白质序列分别显示为SEQ ID NO:20019和SEQ ID NO:20021。克隆21的重链和轻链核苷酸序列分别显示为SEQ ID NO:20020和SEQ ID NO:20022。
克隆22的重链和轻链蛋白质序列分别显示为SEQ ID NO:30019和SEQ ID NO:30021。克隆22的重链和轻链核苷酸序列分别显示为SEQ ID NO:30020和SEQ ID NO:30022。
实施例2.抗CD39抗体结合到人癌细胞
为确定抗CD39抗体与细胞结合的相对程度，用两种浓度的经荧光标记的抗CD39抗体或对照IgG1抗体处理MOLP-8细胞或SK-MEL-28细胞，如图1A、图1B、图1C、图1D中所指示。确定与细胞结合的程度且表示为平均荧光强度(MFI)。用FACS缓冲液(2mM EDTA、2％FBS)洗涤细胞且通过离心沉淀。将细胞重悬浮于含有一定剂量的直接用荧光团Alexa Fluor 488(AF488)标记的抗CD39或对照IgG1抗体的FACS缓冲液中，且在室温下培育30分钟。然后用FACS缓冲液将细胞洗涤两次，随后固定于4％多聚甲醛(PFA)中并重悬浮于FACS缓冲液中且在FACS Canto II分析仪(BD Biosciences)上分析。
如图1A(亲和力成熟前抗体)和图1B(亲和力成熟抗体)中所示结合到SK-MEL-28细胞。如图1C(亲和力成熟前抗体)和图1D(亲和力成熟抗体)中所示结合到MOLP-8细胞。
实施例3.抗CD39抗体抑制恶性细胞和免疫细胞上的CD39活性
使用孔雀石绿磷酸盐测定测量抗CD39抗体抑制恶性细胞系和原代免疫细胞上的CD39酶活性的能力。简言之，使用抗CD39抗体或对照抗体和25μM ATP将细胞处理60min。使用孔雀石绿磷酸盐测定试剂盒(Enzo Life Sciences，目录号BML-AK111)测量无机磷酸盐从ATP的释放。使用“时间零对照”表示100％抑制和“无抗体对照”表示0％INH来确定正规化抑制百分比(INH％)。“时间零对照”是含有所有试剂的孔，其中反应立即停止以模拟不产生磷酸盐且CD39被完全抑制的条件。“无抗体对照”是添加所有试剂和细胞但不存在抗体的孔。此孔模拟释放最大量的磷酸盐且不抑制CD39的条件。为测定抑制百分比：从测定值减去“无抗体对照”值且除以从“时间零对照”值减去的“无抗体对照”值。所得值乘以100以获得百分比值。将MOLP-8(人多发性骨髓瘤细胞系)、SK-MEL-28、原代人B细胞(从全血分离)或原代人单核细胞(从全血分离)用于此测定中。
如图2A(亲和力成熟前抗体)和图2B(亲和力成熟抗体)中所示，如所指示，用10μg/mL的抗CD39抗体或对照IgG1抗体处理SK-MEL-28细胞导致CD39酶活性的抑制。
如图2C(亲和力成熟前抗体)和图2D(优化抗体)中所示，如所指示，用10μg/mL的抗CD39抗体或对照IgG1抗体处理MOLP-8细胞导致CD39酶活性的抑制。
如图3A(亲和力成熟前抗体)和图3B(亲和力成熟抗体)中所示，如所指示，在ATP存在下，用一系列浓度的抗CD39抗体或对照IgG1抗体(DNP-C)处理MOLP-8细胞导致所有测试的抗CD39抗体对CD39活性的剂量依赖性抑制。CD39活性的抑制是通过无机磷酸盐释放的程度确定且表示为抑制％(INH％)。
如图3C(具有丝氨酸228到脯氨酸(S228P)的单突变的亲和力成熟抗体IgG4，命名为克隆16-A、14-A和13-A)中所示，如所指示，在ATP存在下，用一系列浓度的抗CD39抗体或包含丝氨酸228到脯氨酸(S228P)的相同单突变的对照IgG4抗体(DNP.41)处理SK-MEL-28细胞导致CD39活性的剂量依赖性抑制。CD39活性的抑制是通过无机磷酸盐释放的程度确定且表示为抑制％(INH％)。
如图4A(亲和力成熟前抗体)和图4B(亲和力成熟抗体)中所示，如所指示，在ATP存在下，用一系列浓度的抗CD39抗体或对照IgG1抗体(DNP-C)处理从全血分离的原代人单核细胞导致CD39活性的剂量依赖性抑制。CD39活性的抑制是通过无机磷酸盐释放的程度确定且表示为抑制％(INH％)。
如图4C(亲和力成熟前抗体)和图4D(亲和力成熟抗体)中所示，如所指示，在ATP存在下，用一系列浓度的抗CD39抗体或对照IgG1抗体(DNP-C)处理从全血分离的原代人B细胞导致CD39活性的剂量依赖性抑制。CD39活性的抑制是通过无机磷酸盐释放的程度确定且表示为抑制％(INH％)。
总之，这些结果展示，用抗CD39抗体处理恶性细胞和原代免疫细胞抑制CD39酶活性。
实施例4.抗CD39抗体的结合亲和力
某些抗CD39抗体(克隆1-20)的结合亲和力是通常如先前所述(Estep等人(2013)Mabs 5(2):270-278，所述文献通过引用以其整体并入本文中)通过使用ForteBio OctetRED384(Pall Forte Bio Corporation,Menlo Park,CA)测量它们的动力学常数(ka、kd、KD)来确定。
简言之，通过将IgG在线加载到AHQ传感器中来进行ForteBio亲和力测量。将传感器在测定缓冲液中脱机平衡30min，且然后在线监测60秒来建立基线。使加载有IgG的传感器于100nM抗原中暴露3分钟，且然后转移到测定缓冲液达3分钟用于解离速率测量。使用1:1结合模型来分析所有动力学。使用缺少跨膜结构域的无载体人CD39-His作为抗原(R&DSystems目录：4397-EN-010)。
如先前所述进行平衡亲和力测量(Estep等人(2013)Mabs5(2):270-278)。在PBS+0.1％无IgG BSA(PBSF)中进行溶液平衡滴定(SET)，其中抗原保持恒定在10-100pM且与抗体的从5-100nM开始的3到5倍连续稀释物一起培育(实验条件是样品依赖性的)。将抗体(20nM于PBS中)包被到标准结合MSD-ECL板上，在4℃下过夜或在室温下保持30min。然后在700rpm下振荡的同时将板封闭30min，然后用洗涤缓冲液(PBSF+0.05％Tween 20)洗涤三次。施加SET样品且在700rpm下振荡的同时在板上培育150秒，然后洗涤一次。用PBSF中的250ng/mL经磺基标签标记的链霉抗生物素蛋白通过在板上培育3min来检测板上所捕获的抗原。用洗涤缓冲液将板洗涤三次，且然后在MSD Sector Imager 2400仪器上使用含有表面活性剂的1×读取缓冲液T来读取。在Graphpad Prism中将游离抗原％绘制为滴定抗体的函数且拟合到二次方程以提取KD。为改良通量，在整个MSD-SET实验中(包括SET样品制备)使用液体处置机器人。将缺少跨膜结构域的无载体人CD39-His生物素化且用作抗原(R&DSystems目录：4397-EN-010)。图5提供抗CD39抗体的Fortebio和MSD亲和力测量。
然后，使用生物层干涉术(BLI)测定来评价克隆22与重组人CD39、小鼠CD39、大鼠CD39和食蟹猴CD39的缔合和解离，所述生物层干涉术测定是利用光学分析技术分析从两个表面反射的白光的干涉图案的无标记技术。与生物传感器结合的分子数量的变化导致实时测量的干涉图案的位移。当前分析使用2种不同的生物传感器配置来确定人重组CD39、小鼠重组CD39、大鼠重组CD39和食蟹猴重组CD39与克隆22的结合亲和力。
在第一种配置中，首先使用抗人免疫球蛋白G(IgG)可结晶片段(Fc)捕获(AHC)生物传感器，以将1μg/mL的克隆22作为配体捕获到8个生物传感器上，且随后测量作为分析物的0到5μg/mL的人重组CD39、大鼠重组CD39或食蟹猴重组CD39的缔合(600s)和解离(900s)。重组小鼠CD39结合分析需要第二种配置，这是因为阳性对照抗体是大鼠IgG，且不与AHC生物传感器结合。用此第二种配置分析重组小鼠CD39与克隆22的结合，以实现与阳性对照抗体的直接比较。使用胺反应性第二代(AR2G)生物传感器，通过将96孔板格式中的蛋白质上的伯胺交联到8个生物传感器上，首先将20μg/mL的克隆22或Duha59阳性对照抗体(配体)结合到生物传感器的表面。随后，在两种抗体的0到5.0μg/mL的浓度范围下，测量重组小鼠CD39(分析物)的缔合(600s)和解离(1200s)。AR2G生物传感器配置包括预先必要的负载搜索实验以确定抗体与生物传感器偶合的最佳条件(pH5.0或6.0)。用于加载克隆22和Duha59阳性对照抗体的最佳pH为pH 6.0。在两种配置下，测定缔合常数(ka)和解离常数(kd)，并计算每种抗体的KD，其中观察到分析物的结合(克隆22与人重组CD39和食蟹猴重组CD39，以及Duha59阳性对照抗体与重组小鼠CD39)。未测定没有观察到结合(克隆22与小鼠重组CD39和大鼠重组CD39)的相互作用的动力学结合参数。
图13A-E显示浓度介于0到1.25μg/mL范围内的重组人CD39、小鼠CD39、大鼠CD39和食蟹猴CD39与1.0μg/mL的克隆22浓度(对于人、大鼠和食蟹猴)以及20μg/mL的克隆22浓度(对于小鼠)的缔合和解离的结果。最终结合动力学参数(KD、ka和kd)以及结合模型拟合参数(R2和χ2)一起显示于表2中，所述结合模型拟合参数展示模型拟合到数据的优度。2.5μg/mL和5.0μg/mL的更高分析物浓度(对于人重组CD39和食蟹猴重组CD39分别为35.7nM和71.4nM)远高于1:1结合相互作用的KD(0.4nM到1.11nM)并显示非特异性效应，此不指示与克隆22的结合相互作用。因此，KD的计算不包括这些较高分析物浓度。
表2
Figure BDA0003537223380001141
缩写：Duha59＝大鼠抗小鼠CD39 Duha59克隆，ka＝缔合常数，kd＝解离常数，KD＝结合亲和力，N/A＝不适用，rhCD39＝重组人CD39
注意：R2值>0.95且χ2值<3.0证明模型与数据的良好拟合。
重组人CD39和食蟹猴CD39都显示对克隆22的强结合亲和力，如通过KD(分别为1.11nM和0.41nM)所测量。重组小鼠CD39和大鼠CD39不与克隆22结合，通过对结合传感图(图13B和图13D)未观察到反应所指示。因此，未确定重组大鼠CD39或小鼠CD39的结合动力学参数。重组小鼠CD39的确展示对Duha59阳性对照抗体的良好结合亲和力，如通过KD(1.09nM)所测量。
如图13A-13E中所示，克隆22对重组人CD39(rhCD39)具有强结合亲和力，如通过KD所测量(KD＝1.11nM)。对小鼠、大鼠和食蟹猴的物种交叉反应性的分析显示，克隆22对重组食蟹猴CD39也具有高亲和力(KD＝0.41nM)，但不与重组小鼠CD39或大鼠CD39结合。
实施例5：抗CD39抗体增加CD4+T细胞增殖
为确定用抗CD39抗体处理对CD4+T细胞的效应，测定体外CD4+T细胞响应一系列浓度的抗CD39抗体(如所指示)或对照IgG1抗体(DNP-C)的治疗的增殖量。用细胞示踪紫染色剂对人供体血液的新鲜PBMC的CD4+细胞染色，然后接种于96孔板中。将细胞与250μM ATP、抗CD3/CD28珠粒一起培育3天以刺激T细胞和抗CD39抗体或对照IgG1抗体，如所指示，且通过流式细胞术通过测量细胞中剩余的细胞示踪紫的量来量化每种抗体处理的增殖指数。也针对CD4对细胞染色以确认T细胞谱系。如图6A(亲和力成熟前抗体)和图6B(亲和力成熟抗体)中所示，CD4+T细胞响应ATP的增殖指数在抗CD39抗体存在下增加。
实施例6：用抗CD39抗体处理在小鼠MOLP-8异种移植物模型中产生肿瘤生长抑制
向SCID小鼠皮下注射MOLP-8肿瘤细胞。在第14天，用10mg/kg克隆22腹膜内治疗小鼠(n＝10-11只小鼠/组)一次。在所指示时间点，通过ELISA测定克隆22的血浆水平(图7A)。使肿瘤解离成单细胞悬浮液，分流，且投用1mg/mL克隆22和AF647-IgG4(经荧光标记的抗IgG4抗体以检测克隆22)或直接用AF647-IgG4染色。使用流式细胞术计算靶占据(TO)百分比(％)。图7A显示在所指示时间点经AF647-IgG4处理的细胞的TO％(平均值±SEM)。向5到7周龄的雌性SCID小鼠的右侧腹中皮下注射MOLP-8肿瘤细胞，且当肿瘤达到约100mm3的平均体积时，将所述雌性SCID小鼠随机化到4个治疗组中。用30mg/kg具有丝氨酸228到脯氨酸的单点突变的对照IgG4抗体(DNP.41)或3mg/kg、10mg/kg或30mg/kg克隆22每周两次持续3周IP治疗各组(n＝10-11只小鼠/组)。每周两次使用卡尺在2个维度上测量肿瘤且计算肿瘤体积。数据在图7B中显示为平均值±SEM。
实施例7：抗CD39抗体增加经治疗的MOLP-8异种移植物小鼠的肿瘤中的巨噬细胞浸润且减小肿瘤体积
向5到7周龄的雌性SCID小鼠的右侧腹中皮下注射1×107个MOLP-8肿瘤细胞，且当肿瘤达到约100mm3的平均体积时，将所述雌性SCID小鼠随机化到2个治疗组中。用20mg/kg具有丝氨酸228到脯氨酸的单点突变的对照IgG4抗体(DNP.41)或20mg/kg克隆22或60mg/kg克隆22每周两次持续2周IP治疗各组(n＝10-11只小鼠/组)。在第14天研究结束时收集5-7只动物的肿瘤样品且使用胶原酶和机械解聚解离成单肿瘤细胞悬浮液或用福尔马林固定。在4℃下用小鼠抗体的混合剂(抗CD45-BV421、抗CD11b-BV711和抗F4/80-AF488)将解离的肿瘤细胞染色30min且通过流式细胞术分析。为CD11b和F4/80双阳性的CD45+细胞的百分比设门为巨噬细胞。图8A.中所示的数据是经分离CD45+细胞的巨噬细胞的总百分比平均值±SEM。通过2尾未配对t测试(*p<0.05)计算统计数据。针对鼠F4/80对固定的样品染色且将阳性像素百分比(平均值±SEM)算法用于量化，如图8B中所示。图8C绘示不同治疗组的样品图像。如图8D中所示，经60mg/kg克隆22治疗的小鼠与同种型对照相比具有减小的肿瘤体积。
实施例8：抗CD39抗体抑制经治疗小鼠的MOLP-8肿瘤中的CD39酶活性
向5到7周龄的雌性SCID小鼠注射MOLP-8肿瘤细胞且在肿瘤接种后14天分成4组，3个时间点治疗组和1个无治疗对照组。用单一剂量的10mg/kg克隆22IP治疗小鼠(n＝2只小鼠/组)。在用克隆22治疗后4小时、24小时和72小时对小鼠进行安乐死且收集肿瘤样品。将肿瘤样品包埋于OCT中且在图9A中所绘示的低温恒温器组织切片上进行CD39 ATPase测定。强染色指示高CD39 ATPase活性。使用QuPath软件(v0.1.2)来量化MOLP-8肿瘤样品中的原位CD39酶测定活性。对ROI人工定义以排除且最小化鼠CD39对信号(例如鼠血管系统)的酶贡献和具有显著组织质量假影(例如组织折叠)的区域。图9B绘示使用阳性像素百分比算法。从不同治疗组获得的样品图像和阳性像素百分比(平均值±SEM)。
实施例9：抗CD39抗体抑制经治疗食蟹猴的子宫组织中的CD39酶活性
用媒介物、10mg/kg、30mg/kg和100mg/kg克隆22治疗食蟹猴(3种不同动物于每一剂量组中)。如图10中所示，在CD39 ATPase测定染色(ATP染色溶液，15分钟)后，扫描来自每一剂量组中的3种不同动物的子宫组织的载玻片。对图像进行注释以区分子宫组织切片内的各种解剖区室，并突出显示克隆22在不同组织区域中的CD39ATPase活性和酶抑制的差异程度。
实施例10：抗CD39抗体降低小鼠H520异种移植物模型中的升高的合成腺苷水平
向8到12周龄的雌性Ncr nu/nu小鼠的右侧腹中皮下注射1×107个H520肿瘤细胞，且当肿瘤达到约100mm3的平均体积时，将所述雌性Ncr nu/nu小鼠随机化到3个治疗组中。用30mg/kg对照IgG4抗体S228P(DNP.41)或15mg/kg或30mg/kg的克隆22每周两次IP治疗各组(n＝10只小鼠/组)。添加另一组无肿瘤的小鼠(n＝5)以确定腺苷的基线水平。在研究的第10天收集可评估动物的血液样品(无肿瘤，n＝5；30mg/kg对照IgG4抗体S228P(DNP.41)，n＝8；15mg/kg克隆22，n＝10；和30mg/kg克隆22，n＝9)，然后分离血浆且使用LC-MS/MS分析腺苷水平。数据显示为图11中的血浆腺苷水平的平均值±SEM。通过2尾未配对t测试(*p<0.05)计算统计数据。
实施例11：抗CD39抗体克隆22结合到全血中的CD39
进行全血测定以确定克隆22与CD14和CD19阳性细胞的CD39结合能力。通过针对克隆22的饱和剂量滴定来确定结合程度。选择CD14和CD19阳性细胞的原因在于它们的高CD39先天表达。将200μL全血(WB；Research Blood Components)等分到v底聚丙烯板中。将另外100μL添加到连续稀释物的第一孔中，总共300μL克隆22WB。将克隆22掺入第一孔的300μLWB中以实现200μg/ml的最终浓度。在板上如所指示通过在板上将100μL血液从孔到孔进行连续转移来进行克隆22于WB中的1:3连续稀释。允许克隆22系列滴定以在室温下培育60分钟，此后将200μg/ml克隆22的尖峰添加到所有样品孔中以用作“最大占据”对照。此有时也称为“尖峰”孔。将整个板在室温下另外再培育60分钟以培育尖峰孔。然后，所有孔边混合边接受200μL的ACK裂解缓冲液(Life Technologies目录号A10492-01)。将板在室温下培育5分钟，在2000rpm下旋转5分钟，且然后裂解红细胞部分并将它轻弹出板。将新鲜的200μLACK裂解缓冲液边混合边添加到所有孔中，且立即在2000rpm下旋转5分钟。将200μL的PBS边混合边添加到孔中作为洗涤步骤，并立即在1500rpm下旋转5分钟。取出100μL PBS重悬所有样品且将它们转移到96孔聚苯乙烯u底板。将100μL的人TruStain FcXTM(BioLegend目录号422302)以1:50稀释添加到所有孔中。将板在4℃下培育15分钟。制备FITC抗人CD14(BioLegend目录号367166)、亮紫罗兰(Brilliant Violet)421TM抗人CD19(BioLegend目录号302234)和小鼠抗人IgG4-pFc’-PE(Southern Biotech目录号9190-09)于PBS中的溶液。以1:100稀释抗CD14和抗CD19。以1:250稀释抗人IgG4。将100微升抗CD14、抗CD19和抗IgG4溶液添加到所有孔中。以类似方式制备额外孔用于抗CD14、抗CD19和抗IgG4的单个流动染色。将流动抗体在4℃下培育30分钟。将板立即在1500rpm下旋转5分钟。将125μL的FACS缓冲液添加到所有孔中。在Fortessa X20流式细胞仪系统上分析细胞。受体占据(RO)％值计算为[RO％＝样品geo-MFI/尖峰geo-MFI]。
图12A-D显示，克隆22以剂量依赖性方式结合到全血中的单核细胞(图12A)和B细胞(图12B)且具有合理信号窗。从比较克隆22的剂量滴定与克隆22的饱和“尖峰”容易地计算靶占据(TO)百分比作为单核细胞(图12C)和B细胞(图12D)中的最大占据对照。
单独地，用克隆22将全血细胞预处理1小时。RBC裂解全血且然后添加25μM ATP以观察ATP水解。使用CellTiterGloTM量化剩余ATP。低抑制对照(0％)设定在无ATP时。高抑制对照(100％)设定在克隆22的饱和量下。抑制百分比(％)计算为样品对高抑制对照的比率，如图12E中所绘示。
实施例12：鼠抗CD39显示在鼠CT26模型中与抗PD1组合的协同活性
向BALB/C小鼠皮下注射CT26细胞。当肿瘤达到约80mm3时，用同种型对照、20mg/kg抗鼠CD39、10mg/kg抗鼠PD-1或抗鼠CD39和抗鼠PD-1每周两次持续三周腹膜内治疗小鼠(n＝16-18只小鼠/组)。图14显示治疗组的存活率分析曲线(*p<0.05)。
实施例13：经ATP和克隆22处理的CD4+CD39+细胞的增加的三阳性细胞(PD1、TIM3、Lag3)
将单一供体PBMC以100,000个细胞/孔与100,000个dynabead/孔一起共培育。在珠粒时添加500μM ATP、500μM ATP+10μg/mL克隆22或无ATP的处理。将细胞在37℃下在5％CO2培育器中培育5天。通过流式细胞术用以下细胞标记物设门来分析细胞：CD4-BV421、CD8-BV711、CD39-FITC、PD1-PE、TIM3-APC和Lag3-PE/Cy7。分析量化为对CD4+CD39+门中的所有三种标记物(PD1、TIM3和Lag3)呈阳性的细胞的百分比(％)。结果显示于图15中。
实施例14：抗CD39抗体和太平洋紫杉醇在人肺癌H520异种移植物模型中的组合效应
为测定组合CD39与另一标准护理化学治疗剂在实体肿瘤模型中的抗肿瘤效应，在无胸腺裸(NCr nu/nu)小鼠的皮下异种移植物H520人肺癌模型中评估抗CD39抗体与太平洋紫杉醇的组合的抗肿瘤活性。简言之，通过皮下注射到右侧腹中向8-12周龄的NCr nu/nu小鼠(Charles River Labs)接种与基质胶混合的0.1mL PBS(1:1)中的1×107个H520肿瘤细胞，且当肿瘤达到约60-90mm3的平均体积时将所述NCr nu/nu小鼠随机化到4个治疗组中。用以下腹膜内(i.p)治疗各组(n＝各自10-15只小鼠)：同种型对照(DNP.41)、单独克隆22(600μg或30mg/kg，每周两次持续4周)或与太平洋紫杉醇的组合。太平洋紫杉醇是以10mg/kg每隔一天(qod)共5个剂量和在第19天开始20mg/kg qod共4个剂量的剂量静脉内(iv)施用。所有测试抗体配制于PBS(Gibco)中。在5％乙醇:5％右旋糖中的5％cremphor EL中制备太平洋紫杉醇储备溶液。通过使用游标卡尺测量肿瘤大小(长度和宽度)部分地测定抗肿瘤活性且使用下式计算肿瘤体积：(L*W*W)/2。每周三次测定体重(数据未显示)和肿瘤体积直到第68天。在动物达到1800mm3的肿瘤体积时使它们终止。绘制卡普兰-迈耶存活率曲线(Kaplan Meier survival curve)以测量总存活率。对于存活率分析，进行对数秩测试以测试与对照和与单独的单一剂治疗组相比每组的统计学显著性。(p<0.005)。
图16显示经治疗小鼠的存活率曲线。这些数据指示，用抗CD39抗体克隆22与太平洋紫杉醇的组合治疗产生显著的组合抗肿瘤效应，使肿瘤体积减小的程度大于用单独抗CD39抗体或太平洋紫杉醇治疗时且显著改良存活率。用所有测试抗体(抗CD39和太平洋紫杉醇)组合治疗展示与同种型对照相比统计学上显著的抗肿瘤功效(p<0.05)。
实施例15：在鼠CT26模型中鼠抗CD39对肿瘤浸润淋巴细胞的效应
向带有CT26结肠直肠肿瘤的BALB/C小鼠BIW投用三次20mg/kg鼠抗CD39抗体(第11天)，然后移除肿瘤并解离用于流式分析。用靶向以下标记物的抗体对CD45+细胞染色以鉴别肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)群体：CD3、CD4、CD8、CD25、CD27、CD39、CD45、F4/80、NKp46、FOXP3和CD279。使用FlowjoV10进行流式分析。显示CD8+T细胞(图17A)、CD4+T细胞(图17B)和Treg(图17C)的效应。图17D显示与同种型对照相比对肿瘤体积的效应。
实施例16：抗CD39抗体和吉西他滨在人PDAC肿瘤活检模型中的组合效应
肿瘤活检取自8个胰腺导管腺癌(PDAC)患者且各自分成四种不同样品。使用四种不同条件处理每一肿瘤活检的四种样品：1)媒介物+同种型对照，2)吉西他滨+同种型对照，3)媒介物+克隆22，和4)吉西他滨+克隆22。24h后，测试上清液的ATP水平。在作为单一疗法施用或以与吉西他滨的组合施用时，暴露于克隆22的组中的ATP水平增加，如图18中所示。
实施例17：在人多发性骨髓瘤的MOLP-8鼠模型中抗CD39和抗CD47抗体阻断的协同效应
为测定阻断CD39和CD47二者的抗肿瘤效应，在重度组合免疫缺陷(SCID)小鼠的皮下异种移植物MOLP-8人多发性骨髓瘤模型中评估抗CD39抗体(克隆22)与抗CD47抗体(SEQID NO:40004(包含野生型人IgG4恒定区的重链)；SEQ ID NO:40005(轻链))的组合的抗肿瘤活性。还测定所述组合增强存活的能力。简言之，通过皮下注射到右侧腹中向6-8周龄的SCID小鼠(Charles River Labs)接种与基质胶混合的0.1mL PBS(1:1)中的1×107个MOLP-8肿瘤细胞，且当肿瘤达到约100mm3的平均体积时将所述SCID小鼠随机化到4个治疗组中。用以下腹膜内(i.p)治疗各组(n＝各自10只小鼠)：同种型对照(单克隆人IgG4(IgG4-A))、单独克隆22(400μg或20mg/kg，每周两次持续3周)、单独抗CD47抗体(60μg或3mg/kg，每周一次持续3周)或按照与单一疗法相同的时间表投用的克隆22和抗CD47抗体的组合。所有测试抗体配制于PBS(Gibco)中。通过使用游标卡尺测量肿瘤大小(长度和宽度)部分地测定抗肿瘤活性，且使用下式计算肿瘤体积：(L*W*W)/2。每周两次测定体重(数据未显示)和肿瘤体积直到第18天。对于肿瘤体积分析，进行单因子Anova分析以测试与对照相比每组的统计学显著性(p<0.005)。对于存活率分析，在18天后当肿瘤体积达到1000mm3时或当肿瘤变得坏死时，对小鼠进行安乐死。使用卡普兰-迈耶曲线分析存活率统计学且使用对数秩(Mantel-cox)测试计算显著性(p<0.005)。
图19A和图19B分别显示经治疗小鼠的平均肿瘤体积和存活百分比。这些数据指示，用抗CD39抗体(克隆22)与抗CD47抗体的组合治疗产生协同抗肿瘤效应，使肿瘤体积减小和小鼠存活率增加的程度大于用任一抗体作为单一疗法治疗时。用所有测试抗体单独或组合治疗展示与同种型对照相比统计学上显著的抗肿瘤功效(p<0.005)。在任一组中未观察到对体重的不利效应(数据未显示)。
实施例18：在鼠CT26肿瘤模型中鼠抗CD39和抗PD1对肿瘤微环境的效应
在CT26鼠肿瘤模型中评估抗CD39单独和与抗PD-1治疗的组合对肿瘤微环境(TME)中的免疫细胞的效应。
用三个剂量的同种型对照抗体(400μg)、抗鼠CD39抗体(400μg)、抗鼠PD-1抗体(200μg)或抗鼠CD39(400μg)和抗鼠PD-1(200μg)抗体的组合治疗带有CT26肿瘤的BALB/C小鼠，然后在第9天收获肿瘤；n＝10/组。从每只小鼠提取肿瘤且使用Miltenyi Biotec温和MACS解离器用胶原酶和DNAse处理的组合进行酶解离(参见万维网的miltenyibiotec.com/US-en/products/gentlemacs-dissociator.html#gref)。在离心后移除碎片和死细胞。将细胞重悬浮于达尔伯克氏改良伊格尔培养基(Dulbecco’s Modified Eagle Medium，DMEM)中。通过使用CD45+磁珠从肿瘤富集免疫细胞且将所述免疫细胞捕获于磁柱上。
进行单细胞RNA测序(scRNA seq)实验以使用标准10×genomics3’mRNA方案评估从经治疗小鼠的TME分离的免疫细胞。简言之，在10×微流体芯片上产生凝胶珠乳液(GEM)，其中细胞样品以受控方式与油和PCR/条形码试剂一起，产生含有单细胞、寡核苷酸条形码和用于随后PCR步骤的化学的液滴。这些液滴中的细胞裂解且它们的RNA经条形码和聚A捕获寡核苷酸(10×Genomics铬单细胞3’试剂试剂盒，CG000183Rev C)标记。使用IlluminaNextSeq500仪器对样品测序。
根据scRNAseq结果，基于免疫细胞标记物的差异表达将单个细胞的数据分配到免疫细胞类型的群(图20)。主要细胞类型群是淋巴细胞/NK、巨噬细胞/骨髓细胞和CD45阴性细胞。scRNAseq的分群结果为下游分析提供TME中细胞类型的充分分离。
与经同种型对照抗体治疗的小鼠相比，在经抗PD1治疗的小鼠中观察到在来自TME的细胞的CD8+和淋巴细胞群内CD45+细胞的频率增加(图21A)，此指示用抗PD1治疗增加TME中的淋巴细胞浸润。与这些数据一致，来自经抗PD1治疗的小鼠的肿瘤通过免疫组织化学染色显示CD8+T细胞密度增加(图21B和图21C)。使用标准福尔马林固定、石蜡包埋(FFPE)组织方法处理肿瘤样品且制成5微米切片。用以1:50稀释的小鼠特异性大鼠单克隆抗CD8抗体(克隆4SM15,Thermo Fisher Scientific,Waltham,MA)使用Leica Bond自动化染色器(Leica Biosystems,Buffalo Grove,IL)进行免疫组织化学染色。使用Aperio Versa扫描仪(Leica Biosystems,Buffalo Grove,IL)对经染色的载玻片进行数字扫描。为获得CD8+T细胞的密度，使用HALO软件套3.0.311.228版(Indica Labs,Albuquerque,NM)中的多重IHC模块进行定量图像分析。
scRNAseq分析的结果显示与经同种型对照抗体治疗的小鼠相比，经抗CD39治疗的小鼠中的骨髓细胞和NK细胞的倍数变化增加(图22)，此指示用抗CD39治疗增加TME中的先天细胞浸润。观察到，表达在活化后可诱导ATP释放的P2X7受体的细胞群体对治疗有反应。
还发现用抗CD39治疗会上调肿瘤相关巨噬细胞中的干扰素γ(IFNγ)反应基因。基于F4/80抗原表达，巨噬细胞鉴别为来自scRNAseq数据集的细胞的子集。进行差异表达分析以鉴别在经抗CD39对同种型对照治疗的小鼠TME中更高表达的基因集。顶部富集的基因与上调的IFNγ反应(图23A)相关，此证明在抗CD39治疗后已发生或正在发生免疫反应。使用Suerat第3版对所有样品的数据积分。然后使用UMAP降维对细胞分群，从而鉴别出约20个不同的细胞群(图23B)。从整个数据集使用以下代码产生图23中的绘图：
数据<-RunUMAP(数据，下降＝“pca”，dims＝1:显著_PC，冗余＝假)
UMAP_coloredby_群<-DimPlot(数据，下降＝“umap”，标记＝真)
UMAP_coloredby_群
下表3显示每个细胞群中最可变的基因。
表3：
Figure BDA0003537223380001251
Figure BDA0003537223380001261
Figure BDA0003537223380001271
Figure BDA0003537223380001281
Figure BDA0003537223380001291
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进一步评估治疗组之间的IFNγ反应。对于每个治疗组，基于F4/80抗原表达来鉴别肿瘤相关巨噬细胞。基于F4/80表达，通过采用鉴别为巨噬细胞的细胞群中IFNγ印记基因的平均表达来计算IFNγ印记的评分。与通过单独抗鼠CD39或抗鼠PD-1观察到的反应相比，使用抗鼠CD39和抗鼠PD-1的组合的治疗显示IFNγ反应增加(图24)。这些数据指示抗CD39治疗增强抗PD1反应。
在TME的不同细胞类型中进一步评估抗CD39对抗PD1诱导的TME效应的功能效应。观察到抗CD39和抗PD1治疗的组合在树突细胞和淋巴细胞浸润中最强烈地改变抗PD1诱导的TME效应(图25)。
尽管出于清楚理解的目的，已借助说明和实例方式对前述发明进行一定详细的描述，但描述和实例不应解释为限制本公开的范围。本文引用的所有专利和科学文献的公开内容通过引用以其整体明确并入。
V.序列表
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Figure BDA0003537223380001601

Claims (92)

1.一种经分离抗体，所述经分离抗体包含：
i)(a)包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列的HCDR1；(b)包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列的HCDR2；(c)包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列的HCDR3；(d)包含SEQ ID NO:4的氨基酸序列的LCDR1；(e)包含SEQ ID NO:5的氨基酸序列的LCDR2；和(f)包含SEQ ID NO:6的氨基酸序列的LCDR3；或
ii)(a)包含SEQ ID NO:101的氨基酸序列的HCDR1；(b)包含SEQ ID NO:102的氨基酸序列的HCDR2；(c)包含SEQ ID NO:103的氨基酸序列的HCDR3；(d)包含SEQ ID NO:104的氨基酸序列的LCDR1；(e)包含SEQ ID NO:105的氨基酸序列的LCDR2；和(f)包含SEQ ID NO:106的氨基酸序列的LCDR3；或
iii)(a)包含SEQ ID NO:201的氨基酸序列的HCDR1；(b)包含SEQ ID NO:202的氨基酸序列的HCDR2；(c)包含SEQ ID NO:203的氨基酸序列的HCDR3；(d)包含SEQ ID NO:204的氨基酸序列的LCDR1；(e)包含SEQ ID NO:205的氨基酸序列的LCDR2；和(f)包含SEQ ID NO:206的氨基酸序列的LCDR3；或
iv)(a)包含SEQ ID NO:301的氨基酸序列的HCDR1；(b)包含SEQ ID NO:302的氨基酸序列的HCDR2；(c)包含SEQ ID NO:303的氨基酸序列的HCDR3；(d)包含SEQ ID NO:304的氨基酸序列的LCDR1；(e)包含SEQ ID NO:305的氨基酸序列的LCDR2；和(f)包含SEQ ID NO:306的氨基酸序列的LCDR3；或
v)(a)包含SEQ ID NO:401的氨基酸序列的HCDR1；(b)包含SEQ ID NO:402的氨基酸序列的HCDR2；(c)包含SEQ ID NO:403的氨基酸序列的HCDR3；(d)包含SEQ ID NO:404的氨基酸序列的LCDR1；(e)包含SEQ ID NO:405的氨基酸序列的LCDR2；和(f)包含SEQ ID NO:406的氨基酸序列的LCDR3；或
vi)(a)包含SEQ ID NO:501的氨基酸序列的HCDR1；(b)包含SEQ ID NO:502的氨基酸序列的HCDR2；(c)包含SEQ ID NO:503的氨基酸序列的HCDR3；(d)包含SEQ ID NO:504的氨基酸序列的LCDR1；(e)包含SEQ ID NO:505的氨基酸序列的LCDR2；和(f)包含SEQ ID NO:506的氨基酸序列的LCDR3；或
vii)(a)包含SEQ ID NO:601的氨基酸序列的HCDR1；(b)包含SEQ ID NO:602的氨基酸序列的HCDR2；(c)包含SEQ ID NO:603的氨基酸序列的HCDR3；(d)包含SEQ ID NO:604的氨基酸序列的LCDR1；(e)包含SEQ ID NO:605的氨基酸序列的LCDR2；和(f)包含SEQ ID NO:606的氨基酸序列的LCDR3；或
viii)(a)包含SEQ ID NO:701的氨基酸序列的HCDR1；(b)包含SEQ ID NO:702的氨基酸序列的HCDR2；(c)包含SEQ ID NO:703的氨基酸序列的HCDR3；(d)包含SEQ ID NO:704的氨基酸序列的LCDR1；(e)包含SEQ ID NO:705的氨基酸序列的LCDR2；和(f)包含SEQ ID NO:706的氨基酸序列的LCDR3；或
ix)(a)包含SEQ ID NO:801的氨基酸序列的HCDR1；(b)包含SEQ ID NO:802的氨基酸序列的HCDR2；(c)包含SEQ ID NO:803的氨基酸序列的HCDR3；(d)包含SEQ ID NO:804的氨基酸序列的LCDR1；(e)包含SEQ ID NO:805的氨基酸序列的LCDR2；和(f)包含SEQ ID NO:806的氨基酸序列的LCDR3；或
x)(a)包含SEQ ID NO:901的氨基酸序列的HCDR1；(b)包含SEQ ID NO:902的氨基酸序列的HCDR2；(c)包含SEQ ID NO:903的氨基酸序列的HCDR3；(d)包含SEQ ID NO:904的氨基酸序列的LCDR1；(e)包含SEQ ID NO:905的氨基酸序列的LCDR2；和(f)包含SEQ ID NO:906的氨基酸序列的LCDR3；或
xi)(a)包含SEQ ID NO:1001的氨基酸序列的HCDR1；(b)包含SEQ ID NO:1002的氨基酸序列的HCDR2；(c)包含SEQ ID NO:1003的氨基酸序列的HCDR3；(d)包含SEQ ID NO:1004的氨基酸序列的LCDR1；(e)包含SEQ ID NO:1005的氨基酸序列的LCDR2；和(f)包含SEQ IDNO:1006的氨基酸序列的LCDR3；或
xii)(a)包含SEQ ID NO:2001的氨基酸序列的HCDR1；(b)包含SEQ ID NO:2002的氨基酸序列的HCDR2；(c)包含SEQ ID NO:2003的氨基酸序列的HCDR3；(d)包含SEQ ID NO:2004的氨基酸序列的LCDR1；(e)包含SEQ ID NO:2005的氨基酸序列的LCDR2；和(f)包含SEQ IDNO:2006的氨基酸序列的LCDR3；或
xiii)(a)包含SEQ ID NO:3001的氨基酸序列的HCDR1；(b)包含SEQ ID NO:3002的氨基酸序列的HCDR2；(c)包含SEQ ID NO:3003的氨基酸序列的HCDR3；(d)包含SEQ ID NO:3004的氨基酸序列的LCDR1；(e)包含SEQ ID NO:3005的氨基酸序列的LCDR2；和(f)包含SEQ IDNO:3006的氨基酸序列的LCDR3；或
xiv)(a)包含SEQ ID NO:4001的氨基酸序列的HCDR1；(b)包含SEQ ID NO:4002的氨基酸序列的HCDR2；(c)包含SEQ ID NO:4003的氨基酸序列的HCDR3；(d)包含SEQ ID NO:4004的氨基酸序列的LCDR1；(e)包含SEQ ID NO:4005的氨基酸序列的LCDR2；和(f)包含SEQ IDNO:4006的氨基酸序列的LCDR3；或
xv)(a)包含SEQ ID NO:5001的氨基酸序列的HCDR1；(b)包含SEQ ID NO:5002的氨基酸序列的HCDR2；(c)包含SEQ ID NO:5003的氨基酸序列的HCDR3；(d)包含SEQ ID NO:5004的氨基酸序列的LCDR1；(e)包含SEQ ID NO:5005的氨基酸序列的LCDR2；和(f)包含SEQ IDNO:5006的氨基酸序列的LCDR3；或
xvi)(a)包含SEQ ID NO:6001的氨基酸序列的HCDR1；(b)包含SEQ ID NO:6002的氨基酸序列的HCDR2；(c)包含SEQ ID NO:6003的氨基酸序列的HCDR3；(d)包含SEQ ID NO:6004的氨基酸序列的LCDR1；(e)包含SEQ ID NO:6005的氨基酸序列的LCDR2；和(f)包含SEQ IDNO:6006的氨基酸序列的LCDR3；或
xvii)(a)包含SEQ ID NO:7001的氨基酸序列的HCDR1；(b)包含SEQ ID NO:7002的氨基酸序列的HCDR2；(c)包含SEQ ID NO:7003的氨基酸序列的HCDR3；(d)包含SEQ ID NO:7004的氨基酸序列的LCDR1；(e)包含SEQ ID NO:7005的氨基酸序列的LCDR2；和(f)包含SEQ IDNO:7006的氨基酸序列的LCDR3；或
xviii)(a)包含SEQ ID NO:8001的氨基酸序列的HCDR1；(b)包含SEQ ID NO:8002的氨基酸序列的HCDR2；(c)包含SEQ ID NO:8003的氨基酸序列的HCDR3；(d)包含SEQ ID NO:8004的氨基酸序列的LCDR1；(e)包含SEQ ID NO:8005的氨基酸序列的LCDR2；和(f)包含SEQID NO:8006的氨基酸序列的LCDR3；或
xix)(a)包含SEQ ID NO:9001的氨基酸序列的HCDR1；(b)包含SEQ ID NO:9002的氨基酸序列的HCDR2；(c)包含SEQ ID NO:9003的氨基酸序列的HCDR3；(d)包含SEQ ID NO:9004的氨基酸序列的LCDR1；(e)包含SEQ ID NO:9005的氨基酸序列的LCDR2；和(f)包含SEQ IDNO:9006的氨基酸序列的LCDR3；或
xx)(a)包含SEQ ID NO:10001的氨基酸序列的HCDR1；(b)包含SEQ ID NO:10002的氨基酸序列的HCDR2；(c)包含SEQ ID NO:10003的氨基酸序列的HCDR3；(d)包含SEQ ID NO:10004的氨基酸序列的LCDR1；(e)包含SEQ ID NO:10005的氨基酸序列的LCDR2；和(f)包含SEQ ID NO:10006的氨基酸序列的LCDR3；或
xxi)(a)包含SEQ ID NO:20001的氨基酸序列的HCDR1；(b)包含SEQ ID NO:20002的氨基酸序列的HCDR2；(c)包含SEQ ID NO:20003的氨基酸序列的HCDR3；(d)包含SEQ ID NO:20004的氨基酸序列的LCDR1；(e)包含SEQ ID NO:20005的氨基酸序列的LCDR2；和(f)包含SEQ ID NO:20006的氨基酸序列的LCDR3；或
xxii)(a)包含SEQ ID NO:30001的氨基酸序列的HCDR1；(b)包含SEQ ID NO:30002的氨基酸序列的HCDR2；(c)包含SEQ ID NO:30003的氨基酸序列的HCDR3；(d)包含SEQ ID NO:30004的氨基酸序列的LCDR1；(e)包含SEQ ID NO:30005的氨基酸序列的LCDR2；和(f)包含SEQ ID NO:30006的氨基酸序列的LCDR3。
2.如权利要求1所述的经分离抗体，其中所述抗体包含重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)，其中：
i)所述VH与SEQ ID NO:12的氨基酸序列至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一且所述VL与SEQ ID NO:18的氨基酸序列至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一；或
ii)所述VH与SEQ ID NO:112的氨基酸序列至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一且所述VL与SEQ ID NO:118的氨基酸序列至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一；或
iii)所述VH与SEQ ID NO:212的氨基酸序列至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一且所述VL与SEQ ID NO:218的氨基酸序列至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一；或
iv)所述VH与SEQ ID NO:312的氨基酸序列至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一且所述VL与SEQ ID NO:318的氨基酸序列至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一；或
v)所述VH与SEQ ID NO:412的氨基酸序列至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一且所述VL与SEQ ID NO:418的氨基酸序列至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一；或
vi)所述VH与SEQ ID NO:512的氨基酸序列至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一且所述VL与SEQ ID NO:518的氨基酸序列至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一；或
vii)所述VH与SEQ ID NO:612的氨基酸序列至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一且所述VL与SEQ ID NO:618的氨基酸序列至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一；或
viii)所述VH与SEQ ID NO:712的氨基酸序列至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一且所述VL与SEQ ID NO:718的氨基酸序列至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一；或
ix)所述VH与SEQ ID NO:812的氨基酸序列至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一且所述VL与SEQ ID NO:818的氨基酸序列至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一；或
x)所述VH与SEQ ID NO:912的氨基酸序列至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一且所述VL与SEQ ID NO:918的氨基酸序列至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一；或
xi)所述VH与SEQ ID NO:1012的氨基酸序列至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一且所述VL与SEQ ID NO:1018的氨基酸序列至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一；或
xii)所述VH与SEQ ID NO:2012的氨基酸序列至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一且所述VL与SEQ ID NO:2018的氨基酸序列至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一；或
xiii)所述VH与SEQ ID NO:3012的氨基酸序列至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一且所述VL与SEQ ID NO:3018的氨基酸序列至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一；或
xiv)所述VH与SEQ ID NO:4012的氨基酸序列至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一且所述VL与SEQ ID NO:4018的氨基酸序列至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一；或
xv)所述VH与SEQ ID NO:5012的氨基酸序列至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一且所述VL与SEQ ID NO:5018的氨基酸序列至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一；或
xvi)所述VH与SEQ ID NO:6012的氨基酸序列至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一且所述VL与SEQ ID NO:6018的氨基酸序列至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一；或
xvii)所述VH与SEQ ID NO:7012的氨基酸序列至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一且所述VL与SEQ ID NO:7018的氨基酸序列至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一；或
xviii)所述VH与SEQ ID NO:8012的氨基酸序列至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一且所述VL与SEQ ID NO:8018的氨基酸序列至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一；或
xix)所述VH与SEQ ID NO:9012的氨基酸序列至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一且所述VL与SEQ ID NO:9018的氨基酸序列至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一；或
xx)所述VH与SEQ ID NO:10012的氨基酸序列至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一且所述VL与SEQ ID NO:10018的氨基酸序列至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一；或
xxi)所述VH与SEQ ID NO:20012的氨基酸序列至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一且所述VL与SEQ ID NO:20018的氨基酸序列至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一；或
xxii)所述VH与SEQ ID NO:30012的氨基酸序列至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一且所述VL与SEQ ID NO:30018的氨基酸序列至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一。
3.如权利要求1或2所述的经分离抗体，其中所述抗体包含重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)，其中：
i)所述VH包含所述SEQ ID NO:12的氨基酸序列且所述VL包含所述SEQ ID NO:18的氨基酸序列；或
ii)所述VH包含所述SEQ ID NO:112的氨基酸序列且所述VL包含所述SEQ ID NO:118的氨基酸序列；或
iii)所述VH包含所述SEQ ID NO:212的氨基酸序列且所述VL包含所述SEQ ID NO:218的氨基酸序列；或
iv)所述VH包含所述SEQ ID NO:312的氨基酸序列且所述VL包含所述SEQ ID NO:318的氨基酸序列；或
v)所述VH包含所述SEQ ID NO:412的氨基酸序列且所述VL包含所述SEQ ID NO:418的氨基酸序列；或
vi)所述VH包含所述SEQ ID NO:512的氨基酸序列且所述VL包含所述SEQ ID NO:518的氨基酸序列；或
vii)所述VH包含所述SEQ ID NO:612的氨基酸序列且所述VL包含所述SEQ ID NO:618的氨基酸序列；或
viii)所述VH包含所述SEQ ID NO:712的氨基酸序列且所述VL包含所述SEQ ID NO:718的氨基酸序列；或
ix)所述VH包含所述SEQ ID NO:812的氨基酸序列且所述VL包含所述SEQ ID NO:818的氨基酸序列；或
x)所述VH包含所述SEQ ID NO:912的氨基酸序列且所述VL包含所述SEQ ID NO:918的氨基酸序列；或
xi)所述VH包含所述SEQ ID NO:1012的氨基酸序列且所述VL包含所述SEQ ID NO:1018的氨基酸序列；或
xii)所述VH包含所述SEQ ID NO:2012的氨基酸序列且所述VL包含所述SEQ ID NO:2018的氨基酸序列；或
xiii)所述VH包含所述SEQ ID NO:3012的氨基酸序列且所述VL包含所述SEQ ID NO:3018的氨基酸序列；或
xiv)所述VH包含所述SEQ ID NO:4012的氨基酸序列且所述VL包含所述SEQ ID NO:4018的氨基酸序列；或
xv)所述VH包含所述SEQ ID NO:5012的氨基酸序列且所述VL包含所述SEQ ID NO:5018的氨基酸序列；或
xvi)所述VH包含所述SEQ ID NO:6012的氨基酸序列且所述VL包含所述SEQ ID NO:6018的氨基酸序列；或
xvii)所述VH包含所述SEQ ID NO:7012的氨基酸序列且所述VL包含所述SEQ ID NO:7018的氨基酸序列；或
xviii)所述VH包含所述SEQ ID NO:8012的氨基酸序列且所述VL包含所述SEQ ID NO:8018的氨基酸序列；或
xix)所述VH包含所述SEQ ID NO:9012的氨基酸序列且所述VL包含所述SEQ ID NO:9018的氨基酸序列；或
xx)所述VH包含所述SEQ ID NO:10012的氨基酸序列且所述VL包含所述SEQ ID NO:10018的氨基酸序列；或
xxi)所述VH包含所述SEQ ID NO:20012的氨基酸序列且所述VL包含所述SEQ ID NO:20018的氨基酸序列；或
xxii)所述VH包含所述SEQ ID NO:30012的氨基酸序列且所述VL包含所述SEQ ID NO:30018的氨基酸序列。
4.如前述权利要求中任一项所述的经分离抗体，其中所述抗体是克隆1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20或21或其CD39结合片段。
5.如前述权利要求中任一项所述的经分离抗体，其中所述抗体是单克隆抗体。
6.如前述权利要求中任一项所述的经分离抗体，其中所述抗体是抗体片段，其中所述抗体片段结合CD39。
7.如权利要求6所述的经分离抗体，其中所述片段是Fab、Fab’、Fv、scFv或(Fab’)2。
8.如权利要求1到5中任一项所述的经分离抗体，其中所述抗体是全长抗体。
9.如权利要求1到8中任一项所述的经分离抗体，其中所述抗体的Fc区包含IgG1、IgG2、IgG3或IgG4。
10.如权利要求1到9中任一项所述的经分离抗体，其中所述抗体包含人IgG1重链恒定区。
11.如权利要求1到9中任一项所述的经分离抗体，其中所述抗体包含人IgG4重链恒定区。
12.如权利要求11所述的经分离抗体，其中所述抗体包含突变体人IgG4重链恒定区。
13.如权利要求12所述的经分离抗体，其中所述突变体IgG4重链恒定区包含选自以下的突变：根据EU编号编号的Ser228处的取代、Leu235处的取代、Asn297处的取代或其组合。
14.如权利要求12所述的经分离抗体，其中所述突变体IgG4重链恒定区包含S228P取代。
15.如权利要求1到9和11到14中任一项所述的经分离抗体，所述经分离抗体包含SEQID NO:40002的重链恒定区。
16.如权利要求1到9和11到15中任一项所述的经分离抗体，所述经分离抗体包含SEQID NO:40003的重链恒定区。
17.一种经分离抗体，所述经分离抗体包含SEQ ID NO:30018的轻链可变区和SEQ IDNO:30012的重链可变区。
18.如权利要求1到16中任一项所述的经分离抗体，所述经分离抗体包含人κ轻链。
19.如前述权利要求中任一项所述的经分离抗体，其中所述抗体结合并抑制CD39。
20.如前述权利要求中任一项所述的经分离抗体，其中所述抗体在正常或癌性组织内结合到CD39且抑制CD39。
21.如权利要求20所述的经分离抗体，其中所述组织处于子宫、子宫颈、肺、前列腺、乳房、头、颈、结肠或卵巢中。
22.如权利要求21所述的经分离抗体，其中所述组织处于所述子宫中。
23.如权利要求22所述的经分离抗体，其中在所述子宫内，所述抗体抑制子宫肌层中的CD39。
24.一种如前述权利要求中任一项所述的抗体的人源化或全人形式。
25.一种组合物，所述组合物包含如权利要求1到24中任一项所述的抗体和医药学上可接受的载体。
26.如权利要求25所述的组合物，所述组合物还包含PD-1、PD-L1、CTLA-4、Lag-3、TIM-3、A2AR、A2BR、双重A2AR/A2BR、CD40或CD73的拮抗剂，和/或TIGIT、CD112R或CD96的拮抗剂，和/或PVRL1、PVRL2、PVRL3、PVRL4或CD155的拮抗剂，和/或CD47或IL-27的拮抗剂，和/或STING的激动剂，和/或CAR细胞疗法。
27.一种增强、增加和/或持续受试者中的抗肿瘤免疫反应的方法，所述方法包括向患有肿瘤的受试者施用如权利要求1到24中任一项所述的抗体或如权利要求25或26所述的组合物。
28.一种治疗受试者的癌症的方法，所述方法包括向患有癌症的受试者施用如权利要求1到24中任一项所述的抗体或如权利要求25或26所述的组合物。
29.一种抑制患有癌症的受试者的组织中的CD39的方法，所述方法包括向患有癌症的受试者施用如权利要求1到24中任一项所述的抗体或如权利要求25或26所述的组合物，其中与施用前组织中的CD39活性或CD39的总量相比，所述施用减小所述组织中的所述活性或量。
30.如权利要求28或29所述的方法，其中所述癌症为晚期癌症。
31.如权利要求28到30中任一项所述的方法，其中所述癌症为复发性癌症。
32.如权利要求28到31中任一项所述的方法，其中所述癌症为难治性癌症。
33.如权利要求28到32中任一项所述的方法，其中所述癌症为转移性癌症。
34.如权利要求28到33中任一项所述的方法，其中所述癌症为晚期实体肿瘤。
35.如权利要求28到34中任一项所述的方法，其中所述癌症为复发性实体肿瘤。
36.如权利要求28到35中任一项所述的方法，其中所述癌症为难治性实体肿瘤。
37.如权利要求28到36中任一项所述的方法，其中所述癌症为转移性实体肿瘤。
38.如权利要求28到37中任一项所述的方法，其中所述癌症为癌瘤、淋巴瘤、母细胞瘤、肉瘤或白血病。
39.如权利要求28到37中任一项所述的方法，其中所述癌症为胰腺癌。
40.如权利要求28到37中任一项所述的方法，其中所述癌症为胃癌。
41.如权利要求28到37中任一项所述的方法，其中所述癌症为前列腺癌。
42.如权利要求28到37中任一项所述的方法，其中所述癌症为子宫内膜癌。
43.如权利要求28到37中任一项所述的方法，其中所述癌症为非小细胞肺癌。
44.如权利要求28到37中任一项所述的方法，其中所述癌症为结肠直肠癌。
45.如权利要求28到37中任一项所述的方法，其中所述癌症为卵巢癌。
46.如权利要求28到37中任一项所述的方法，其中所述癌症为鳞状细胞癌、小细胞肺癌、脑垂体癌、食道癌、星形细胞瘤、软组织肉瘤、非小细胞肺癌(包括鳞状细胞非小细胞肺癌)、肺腺癌、肺鳞状癌、腹膜癌、肝细胞癌、胃肠癌、胰腺癌、神经胶母细胞瘤、子宫颈癌、卵巢癌、肝癌、膀胱癌、肝细胞瘤、乳腺癌、结肠癌、结肠直肠癌、子宫内膜癌或子宫癌、唾液腺癌、肾癌、肾细胞癌、肝癌、前列腺癌、外阴癌、甲状腺癌、肝癌、脑癌、子宫内膜癌、睾丸癌、胆管癌、胆囊癌、胃癌、黑色素瘤或各种类型的头颈癌(包括头颈部鳞状细胞癌)。
47.如权利要求27到46中任一项所述的方法，其中所述方法还包括施用第二疗法。
48.如权利要求47所述的方法，其中所述第二疗法是放射疗法或手术。
49.如权利要求47所述的方法，其中所述第二疗法是施用化学疗法、调理剂或调控T细胞耗竭剂。
50.如权利要求47所述的方法，其中所述第二疗法是施用PD-1、PD-L1、CTLA-4、Lag-3、TIM-3、A2AR、A2BR、双重A2AR/A2BR、CD40或CD73的拮抗剂。
51.如权利要求47的方法，其中所述第二疗法是施用TIGIT拮抗剂、CD112R拮抗剂或CD96拮抗剂。
52.如权利要求47所述的方法，其中所述第二疗法是施用PVRL1拮抗剂、PVRL2拮抗剂、PVRL3拮抗剂、PVRL4拮抗剂或CD155拮抗剂。
53.如权利要求47所述的方法，其中所述第二疗法是施用CD47拮抗剂。
54.如权利要求47所述的方法，其中所述第二疗法是施用IL-27的拮抗剂。
55.如权利要求47所述的方法，其中所述第二疗法是施用CD73的拮抗剂。
56.如权利要求47所述的方法，其中所述第二疗法是施用A2AR的拮抗剂。
57.如权利要求47所述的方法，其中所述第二疗法是施用A2BR的拮抗剂。
58.如权利要求47所述的方法，其中所述第二疗法是施用双重A2AR/A2BR拮抗剂。
59.如权利要求47所述的方法，其中所述第二疗法是施用STING激动剂。
60.如权利要求50到58中任一项所述的方法，其中所述拮抗剂是抗体。
61.一种核酸，所述核酸编码如权利要求1到24中任一项所述的抗体。
62.一种宿主细胞，所述宿主细胞包含如权利要求61所述的核酸。
63.一种产生如权利要求1到24中任一项所述的抗体的方法，所述方法包括在其中表达所述抗体的条件下培养如权利要求62所述的宿主细胞。
64.如权利要求63所述的方法，所述方法还包括纯化所述抗体。
65.一种试剂盒，所述试剂盒包含如权利要求1到24中任一项所述的抗体、如权利要求25或26所述的组合物、如权利要求61所述的核酸、如权利要求62所述的宿主细胞或其任何组合。
66.如权利要求2或3所述的抗体，其中与人CD39结合的KD为约1.11nM。
67.如权利要求2或3所述的抗体，其中所述抗体结合到人CD39和食蟹猴CD39但不与小鼠CD39或大鼠CD39结合。
68.如权利要求53所述的方法，其中所述CD47拮抗剂是抗CD47抗体。
69.如权利要求68所述的方法，其中所述抗CD47抗体包含重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)，其中：所述VH包含SEQ ID NO:40004的氨基酸序列且所述VL包含SEQ ID NO:40005的氨基酸序列。
70.如权利要求68所述的方法，其中所述抗CD47抗体包含：(a)包含SEQ ID NO:40006的氨基酸序列的HCDR1；(b)包含SEQ ID NO:40007的氨基酸序列的HCDR2；(c)包含SEQ ID NO:40008的氨基酸序列的HCDR3；(d)包含SEQ ID NO:40009的氨基酸序列的LCDR1；(e)包含SEQID NO:40010的氨基酸序列的LCDR2；和(f)包含SEQ ID NO:40011的氨基酸序列的LCDR3。
71.如权利要求47所述的方法，其中所述第二疗法是吉西他滨和白蛋白结合的太平洋紫杉醇。
72.如权利要求47所述的方法，其中所述第二疗法是派姆单抗。
73.如权利要求27到46中任一项所述的方法，其中所述方法还包括施用癌症疗法的三联组合。
74.如权利要求73所述的方法，其中所述癌症疗法的三联组合包含如权利要求1到24中任一项所述的抗体、化学治疗剂和PD-1拮抗剂或PD-L1拮抗剂。
75.如权利要求73所述的方法，其中所述癌症疗法的三联组合包含如权利要求1到24中任一项所述的抗体、化学治疗剂和靶向腺苷轴的剂。
76.如权利要求73所述的方法，其中所述癌症疗法的三联组合包含如权利要求1到24中任一项所述的抗体、PD-1拮抗剂或PD-L1拮抗剂和靶向腺苷轴的剂。
77.如权利要求75或76所述的方法，其中所述靶向所述腺苷轴的剂是CD73抑制剂。
78.如权利要求75或76所述的方法，其中所述靶向所述腺苷轴的剂是A2AR拮抗剂、A2BR拮抗剂或双重A2AR/A2B拮抗剂。
79.如权利要求47所述的方法，其中所述第二疗法是施用PD-1拮抗剂。
80.如权利要求79所述的方法，其中所述PD-1拮抗剂是抗PD-1抗体。
81.如权利要求79或80所述的方法，其中所述方法使肿瘤微环境中的干扰素γ(IFN-γ)反应增加。
82.如权利要求81所述的方法，其中所述IFN-γ反应增加大于仅施用所述PD-1拮抗剂的IFN-γ反应。
83.如权利要求81到82中任一项所述的方法，其中所述IFN-γ反应是所述肿瘤微环境中的肿瘤相关巨噬细胞中干扰素γ(IFN-γ)相关的基因上调。
84.如权利要求79或80所述的方法，其中所述方法使先天免疫细胞浸润到所述肿瘤微环境中。
85.如权利要求84所述的方法，其中所述先天免疫细胞是骨髓细胞。
86.如权利要求84所述的方法，其中所述先天免疫细胞是巨噬细胞。
87.如权利要求84所述的方法，其中所述先天免疫细胞是NK细胞。
88.如权利要求84到87所述的方法，其中所述先天免疫细胞浸润大于仅施用所述PD-1拮抗剂或所述抗PD-1抗体的先天免疫细胞浸润。
89.如权利要求27到46中任一项所述的方法，其中所述方法使先天免疫细胞浸润到所述肿瘤微环境中。
90.如权利要求89所述的方法，其中所述先天免疫细胞是骨髓细胞。
91.如权利要求89所述的方法，其中所述先天免疫细胞是巨噬细胞。
92.如权利要求89所述的方法，其中所述先天免疫细胞是NK细胞。
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