CN114410482A - 一种用于提高卷枝毛霉WJ11产γ-亚麻酸产量的方法 - Google Patents

一种用于提高卷枝毛霉WJ11产γ-亚麻酸产量的方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种用于提高卷枝毛霉WJ11产γ‑亚麻酸产量的方法，包括以下步骤：步骤1、菌种分离筛选，选用的菌种为卷枝毛霉WJ11；步骤2、制备PDA斜面培养基；步骤3、制备摇瓶基；步骤4、制备液体培养基；步骤5、固体原料发酵；步骤6、孢子分离；本发明依次进行菌种分离筛选，选用的菌种为卷枝毛霉WJ11；制备PDA斜面培养基；制备摇瓶基；制备液体培养基；固体原料发酵；孢子分离；本发明使用卷枝毛霉WJ11菌体，并采用固体原料发酵方式，与液态发酵相比，油脂含量偏低，而亚麻酸的比例更高，液态发酵亚麻酸比例只有12‑14％，而固态发酵孢子的亚麻酸比例能达到20％以上，提高了亚麻酸的产量。

Description

一种用于提高卷枝毛霉WJ11产γ-亚麻酸产量的方法
技术领域
本发明涉及微生物技术领域，具体为一种用于提高卷枝毛霉WJ11产γ-亚麻酸产量的方法。
背景技术
亚麻酸是人体不能缺少、自身又不能合成的必需脂肪酸，属于维生素F样物质；人体一旦缺乏，其免疫、心脑血管、生殖内分泌等系统就会出现异常；γ-亚麻酸在人体可转化成前列腺素E1，能抑制血小板的聚集和血栓素A2的形成，有明显的抗血栓及抗动脉粥样斑块形成的作用，能显著降低高血脂、胆固醇和血糖，降低密度脂蛋白等，延缓衰老和女性经前症状也有显著疗效；另一方面，γ-亚麻酸外用是优秀的调理剂和营养补充剂，能增进血液流通和细胞的新陈代谢。
亚麻酸人体不能自身合成，现有技术通常是采用微生物培养的方式制备亚麻酸，现有的亚麻酸产量交底，因此，提出了一种能够提高亚麻酸产量的制备工艺。
发明内容
本发明的目的在于提供一种用于提高卷枝毛霉WJ11产γ-亚麻酸产量的方法，以解决上述背景技术中提出的问题。
为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种用于提高卷枝毛霉WJ11产γ-亚麻酸产量的方法，包括以下步骤：
步骤1、菌种分离筛选
选用的菌种为卷枝毛霉WJ11；
步骤2、制备PDA斜面培养基；
步骤3、制备摇瓶基
将麸皮加水1000ml煮沸10分钟，然后过滤，再定容1000ml，接着加入葡萄糖、酒石酸铵、酵母粉、氯化钙、硫酸镁和磷酸二氢钾；将做好的PDA斜面培养基接种到摇瓶中；
步骤4、制备液体培养基
将麦芽糊精、蛋白胨、葡萄糖、麸皮、消泡剂和水均匀混合，然后在121℃条件下灭菌处理40分钟；然后冷却至35℃，并接入到摇瓶基中，接种量为1.2L/1000L；然后在29℃-31℃条件下，培养24小时；
步骤5、固体原料发酵
将麸皮、葡萄糖、硫酸铵和酵母膏混合均匀，然后在121℃条件下，蒸煮50分钟；然后冷却至35℃，然后和卷枝毛霉WJ11接种到液体培养基中，接种时流速要慢，并且灭菌罐须旋转，菌种拌匀后，料的初始水含量约在55％-60％；然后进行装盘，装盘厚度为3cm，装盘完成后室温调节30℃，进行培养，室温升高超过35℃时并有失水时开始通过喷淋无菌凉水降温及补水；喷淋凉水时，每次喷淋时间不能过长，持续培养120小时；
步骤6、孢子分离
采用风分离装置进行物理分离，得到发酵孢子，并全部通过100目筛过滤。
其中，所述PDA斜面培养基按重量份包括以下组份：去皮土豆200g、葡萄糖20g、琼脂20g、水1000mL。
其中，所述PDA斜面培养基的制备方法包括以下步骤：
(1)、称量和熬煮
按重量份分别称取去皮土豆、葡萄糖和琼脂，将去皮土豆切成小块放入锅中，加水1000ml，在加热器上加热至沸腾，维持20-30min，然后用2层纱布趁热在量杯上过滤，滤渣弃取，再滤液补充水分到1000ml；
(2)、加热溶解
把滤液放入锅中，加入葡萄糖和琼脂，待琼脂完全溶解后，再定容1000ml；
(3)、分装
将配制的培养基分装入试管内，分装时用三角漏斗以免使培养基沾在管口上造成污染；
(4)、加棉塞
培养基分装完毕后，在试管口塞上棉塞，以阻止外界微生物进入培养基内造成污染，并保证有良好的通气性能；
(5)、包扎
加塞后，将全部试管用麻绳或橡皮筋捆好，再在棉塞外包一层牛皮纸，以防止灭菌时冷凝水润湿棉塞，其外再用一道线绳或橡皮筋扎好，用记号笔注明培养基名称、组别、配制日期。
其中，所述摇瓶基按重量包括以下组份：麸皮20g、葡萄糖10g、酒石酸铵3.3g，酵母粉1.5g，氯化钙0.1g，硫酸镁2g，磷酸二氢钾1.5g。
其中，所述液体种子培养基按质量百分比包括以下组份：麦芽糊精5.6％，蛋白胨1.0％，葡萄糖3.0％，麸皮2％，消泡剂0.1％，余量为水。
其中，所述固体原料按重量份包括以下组份：麸皮500kg，葡萄糖20kg，硫酸铵5kg，酵母膏5kg。
与现有技术相比，本发明的有益效果是：
本发明依次进行菌种分离筛选，选用的菌种为卷枝毛霉WJ11；制备PDA斜面培养基；制备摇瓶基；制备液体培养基；固体原料发酵；孢子分离，采用风分离装置进行物理分离，得到发酵孢子，并全部通过100目筛过滤；本发明使用卷枝毛霉WJ11菌体，并采用固体原料发酵方式，与液态发酵相比，油脂含量偏低，而亚麻酸的比例更高，液态发酵亚麻酸比例只有12-14％，而固态发酵孢子的亚麻酸比例能达到20％以上，提高了亚麻酸的产量。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例，本发明提供如下技术方案：一种用于提高卷枝毛霉WJ11产γ-亚麻酸产量的方法，包括以下步骤：
步骤1、菌种分离筛选
选用的菌种为卷枝毛霉WJ11；
步骤2、制备PDA斜面培养基
PDA斜面培养基按重量份包括以下组份：去皮土豆200g、葡萄糖20g、琼脂20g、水1000mL。
其中，PDA斜面培养基的制备方法包括以下步骤：
(1)、称量和熬煮
按重量份分别称取去皮土豆、葡萄糖和琼脂，将去皮土豆切成小块放入锅中，加水1000ml，在加热器上加热至沸腾，维持20-30min，然后用2层纱布趁热在量杯上过滤，滤渣弃取，再滤液补充水分到1000ml；
(2)、加热溶解
把滤液放入锅中，加入葡萄糖和琼脂，待琼脂完全溶解后，再定容1000ml；
(3)、分装
将配制的培养基分装入试管内，分装时用三角漏斗以免使培养基沾在管口上造成污染；
(4)、加棉塞
培养基分装完毕后，在试管口塞上棉塞，以阻止外界微生物进入培养基内造成污染，并保证有良好的通气性能；
(5)、包扎
加塞后，将全部试管用麻绳或橡皮筋捆好，再在棉塞外包一层牛皮纸，以防止灭菌时冷凝水润湿棉塞，其外再用一道线绳或橡皮筋扎好，用记号笔注明培养基名称、组别、配制日期；
步骤3、制备摇瓶基
摇瓶基按重量包括以下组份：麸皮20g、葡萄糖10g、酒石酸铵3.3g，酵母粉1.5g，氯化钙0.1g，硫酸镁2g，磷酸二氢钾1.5g；
将麸皮加水1000ml煮沸10分钟，然后过滤，再定容1000ml，接着加入葡萄糖、酒石酸铵、酵母粉、氯化钙、硫酸镁和磷酸二氢钾；将做好的PDA斜面培养基接种到摇瓶中；
步骤4、制备液体培养基
液体种子培养基按质量百分比包括以下组份：麦芽糊精5.6％，蛋白胨1.0％，葡萄糖3.0％，麸皮2％，消泡剂0.1％，余量为水；
将麦芽糊精、蛋白胨、葡萄糖、麸皮、消泡剂和水均匀混合，然后在121℃条件下灭菌处理40分钟；然后冷却至35℃，并接入到摇瓶基中，接种量为1.2L/1000L；然后在29℃-31℃条件下，培养24小时；
步骤5、固体原料发酵
固体原料按重量份包括以下组份：麸皮500kg，葡萄糖20kg，硫酸铵5kg，酵母膏5kg；
将麸皮、葡萄糖、硫酸铵和酵母膏混合均匀，然后在121℃条件下，蒸煮50分钟；然后冷却至35℃，然后和卷枝毛霉WJ11接种到液体培养基中，接种时流速要慢，并且灭菌罐须旋转，菌种拌匀后，料的初始水含量约在55％-60％；然后进行装盘，装盘厚度为3cm，装盘完成后室温调节30℃，进行培养，室温升高超过35℃时并有失水时开始通过喷淋无菌凉水降温及补水；喷淋凉水时，每次喷淋时间不能过长，以免温控过低影响发酵，持续培养120小时；
步骤6、孢子分离
采用风分离装置进行物理分离，得到发酵孢子，并全部通过100目筛过滤。
本发明发酵孢子中，油脂含量占孢子重量的6.7％，脂肪酸组成：C14:0 0.9％；C16:0 14.6％；C16:1 3.0％；C18:0 1.8％；C18:1 32.7％；C18:2 25.5％；C18:3(GLA)21.5％；亚麻酸(GLA)等指标，以及先进性。与液态发酵相比，油脂含量偏低，而亚麻酸(GLA)比例更高，液态发酵亚麻酸(GLA)比例只有12-14％，而固态发酵孢子的亚麻酸(GLA)比例能达到20％以上。
相比同行业类似产品的长处：出品率可达22-24％，比同水平高了近两倍。
综上所述，本发明依次进行菌种分离筛选，选用的菌种为卷枝毛霉WJ11；制备PDA斜面培养基；制备摇瓶基；制备液体培养基；固体原料发酵；孢子分离，采用风分离装置进行物理分离，得到发酵孢子，并全部通过100目筛过滤；本发明使用卷枝毛霉WJ11菌体，并采用固体原料发酵方式，与液态发酵相比，油脂含量偏低，而亚麻酸的比例更高，液态发酵亚麻酸比例只有12-14％，而固态发酵孢子的亚麻酸比例能达到20％以上，提高了亚麻酸的产量。
需要说明的是，在本文中，诸如第一和第二等之类的关系术语仅仅用来将一个实体或者操作与另一个实体或操作区分开来，而不一定要求或者暗示这些实体或操作之间存在任何这种实际的关系或者顺序。而且，术语“包括”、“包含”或者其任何其他变体意在涵盖非排他性的包含，从而使得包括一系列要素的过程、方法、物品或者设备不仅包括那些要素，而且还包括没有明确列出的其他要素，或者是还包括为这种过程、方法、物品或者设备所固有的要素。
尽管已经示出和描述了本发明的实施例，对于本领域的普通技术人员而言，可以理解在不脱离本发明的原理和精神的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由所附权利要求及其等同物限定。

Claims (6)

1.一种用于提高卷枝毛霉WJ11产γ-亚麻酸产量的方法，其特征在于，包括以下步骤：
步骤1、菌种分离筛选
选用的菌种为卷枝毛霉WJ11；
步骤2、制备PDA斜面培养基；
步骤3、制备摇瓶基
将麸皮加水1000ml煮沸10分钟，然后过滤，再定容1000ml，接着加入葡萄糖、酒石酸铵、酵母粉、氯化钙、硫酸镁和磷酸二氢钾；将做好的PDA斜面培养基接种到摇瓶中；
步骤4、制备液体培养基
将麦芽糊精、蛋白胨、葡萄糖、麸皮、消泡剂和水均匀混合，然后在121℃条件下灭菌处理40分钟；然后冷却至35℃，并接入到摇瓶基中，接种量为1.2L/1000L；然后在29℃-31℃条件下，培养24小时；
步骤5、固体原料发酵
将麸皮、葡萄糖、硫酸铵和酵母膏混合均匀，然后在121℃条件下，蒸煮50分钟；然后冷却至35℃，然后和卷枝毛霉WJ11接种到液体培养基中，接种时流速要慢，并且灭菌罐须旋转，菌种拌匀后，料的初始水含量约在55％-60％；然后进行装盘，装盘厚度为3cm，装盘完成后室温调节30℃，进行培养，室温升高超过35℃时并有失水时开始通过喷淋无菌凉水降温及补水，持续培养120小时；
步骤6、孢子分离
采用风分离装置进行物理分离，得到发酵孢子，并全部通过100目筛过滤。
2.根据权利要求1所述的一种用于提高卷枝毛霉WJ11产γ-亚麻酸产量的方法，其特征在于：所述PDA斜面培养基按重量份包括以下组份：去皮土豆200g、葡萄糖20g、琼脂20g、水1000mL。
3.根据权利要求2所述的一种用于提高卷枝毛霉WJ11产γ-亚麻酸产量的方法，其特征在于：所述PDA斜面培养基的制备方法包括以下步骤：
(1)、称量和熬煮
按重量份分别称取去皮土豆、葡萄糖和琼脂，将去皮土豆切成小块放入锅中，加水1000ml，在加热器上加热至沸腾，维持20-30min，然后用2层纱布趁热在量杯上过滤，滤渣弃取，再滤液补充水分到1000ml；
(2)、加热溶解
把滤液放入锅中，加入葡萄糖和琼脂，待琼脂完全溶解后，再定容1000ml；
(3)、分装
将配制的培养基分装入试管内，分装时用三角漏斗以免使培养基沾在管口上造成污染；
(4)、加棉塞
培养基分装完毕后，在试管口塞上棉塞，以阻止外界微生物进入培养基内造成污染，并保证有良好的通气性能；
(5)、包扎
加塞后，将全部试管用麻绳或橡皮筋捆好，再在棉塞外包一层牛皮纸，以防止灭菌时冷凝水润湿棉塞，其外再用一道线绳或橡皮筋扎好，用记号笔注明培养基名称、组别、配制日期。
4.根据权利要求1所述的一种用于提高卷枝毛霉WJ11产γ-亚麻酸产量的方法，其特征在于：所述摇瓶基按重量包括以下组份：麸皮20g、葡萄糖10g、酒石酸铵3.3g，酵母粉1.5g，氯化钙0.1g，硫酸镁2g，磷酸二氢钾1.5g。
5.根据权利要求1所述的一种用于提高卷枝毛霉WJ11产γ-亚麻酸产量的方法，其特征在于：所述液体种子培养基按质量百分比包括以下组份：麦芽糊精5.6％，蛋白胨1.0％，葡萄糖3.0％，麸皮2％，消泡剂0.1％，余量为水。
6.根据权利要求1所述的一种用于提高卷枝毛霉WJ11产γ-亚麻酸产量的方法，其特征在于：所述固体原料按重量份包括以下组份：麸皮500kg，葡萄糖20kg，硫酸铵5kg，酵母膏5kg。
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