CN114409638B - 组蛋白去乙酰化酶8选择性降解剂、制备方法及其在抗肿瘤活性中的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了组蛋白去乙酰化酶8选择性降解剂、制备方法及其在抗肿瘤活性中的应用，涉及药物设计合成技术领域；本发明提供的组蛋白去乙酰化酶8选择性降解剂能够以浓度依赖性的显著选择性降解肿瘤细胞中的去乙酰化酶8，而不影响其他其它类型的去乙酰化酶，提示其在制备预防或治疗与HDAC8活性或表达异常相关疾病药物，尤其是抗肿瘤活性药物方面的价值。
Description
技术领域
本发明涉及药物设计合成技术领域，具体涉及组蛋白去乙酰化酶8选择性降解剂、制备方法及其在抗肿瘤活性中的应用。
背景技术
蛋白降解靶向嵌合体(PROTAC)技术是一种通过泛素-蛋白酶体途径化学诱导靶蛋白降解的新型策略。PROTAC是由靶蛋白配体和E3泛素连接酶配体通过适当的连接链连接而成的双功能分子，能够同时招募靶蛋白和E3泛素连接酶，从而诱导靶蛋白泛素化降解，具有广泛的应用前景。
相对于传统的小分子抑制剂，PROTAC技术具有如下显著优势：从作用模式来看，PROTAC分子与传统的抑制剂有着根本的区别。传统的抑制剂是以占用驱动(occupancy-driven)的作用模式，特异性结合于靶蛋白的空腔内。这种模式需要较高的药物浓度，以维持对靶蛋白的占用水平，进而发挥药理活性，获得临床应用价值。相反，PROTAC是事件驱动(event-driven)的作用模式，其不受均衡占有率(equilibrium occupancy)的影响，在较低浓度就能够实现超90％的靶蛋白降解，这对占用驱动模式是难以实现的。自2001年PROTAC被提出，已有9款此类药物到达临床开发阶段，其中ARV-471和ARV-110蛋白降解药物进入临床二期试验。
组蛋白去乙酰化酶(histone deacetylases，HDACs)是一种蛋白酶，是维持染色体的基本组成单位核小体中组蛋白乙酰化平衡的关键酶类之一。正常状态下，核内组蛋白乙酰化与去乙酰化处于动态平衡，一旦失衡可导致细胞周期与细胞代谢异常而诱发肿瘤。HDACs家族中的组蛋白去乙酰化酶8参与体内肿瘤细胞增殖和凋亡以及遗传信息的调控等多种关键信号通路，已成为多种疾病潜在的治疗靶点，同时，HDAC8也是表观遗传基因沉默的新药物样分子的有效靶标。HDAC8抑制剂可抑制DNA修复机制，阻滞细胞周期过程，诱导细胞凋亡并改变基因表达。
目前已上市的HDACs抑制剂大多为广谱型HDACs抑制剂。由于具有不可忽视的副作用，亟待开发具有选择性的抑制剂或降解剂。因此，开发选择性靶向组蛋白去乙酰化酶8的降解药物具有重要意义，但目前未见有靶向组蛋白去乙酰化酶8的降解药物的相关报道。
发明内容
为克服现有的技术缺陷，本发明的目的在于提供了组蛋白去乙酰化酶8选择性降解剂、制备方法及其在抗肿瘤活性中的应用。本发明提供的组蛋白去乙酰化酶8选择性降解剂能够以浓度依赖性的显著选择性降解肿瘤细胞中的去乙酰化酶8，而不影响其他其它类型的去乙酰化酶。
为了解决上述技术问题，本发明提供了以下技术方案：
第一方面，提供了组蛋白去乙酰化酶8选择性降解剂，所述降解剂具有式11a-11l所示的至少一化合物或其药学上可接受的盐：
第二方面，提供了一种如第一方面所述的组蛋白去乙酰化酶8选择性降解剂的制备方法，所述制备方法包括以下步骤：
(1)将化合物1和化合物2a或2b溶于有机溶剂中，加入N,N-二异丙基乙胺，反应生成化合物3a或3b；
(2)将化合物4和化合物5分别溶于有机溶剂中得到第一溶液和第二溶液，往第一溶液中加入NaH进行反应得到反应液，然后将第二溶液滴加至反应液中继续进行反应，得到化合物6；
(3)将化合物6溶于甲醇溶液中，加入Pd/C反应得到化合物7；
(4)将化合物7溶于无水乙腈中，分别加入1,2-二溴丙烷、1,3-二溴丙烷、1,4-二溴丁烷、1,5-二溴戊烷、1,6-二溴己烷、1-bromo-2-(2-bromoethoxy)ethane、1,2-bis(2-bromoethoxy)ethane、1-bromo-2-(2-(2-(2-bromoethoxy)ethoxy)ethoxy)ethane、1,14-dibromo-3,6,9,12-tetraoxatetradecane或1,17-dibromo-3,6,9,12,15-pentaoxaheptadecane，反应得到化合物8a-8j；
(5)将化合物8a-8j分别与叠氮钠溶于有机溶剂中，反应得到化合物9a-9j；
(6)取NH2OH溶液冷却，加入碱试剂，搅拌溶解得到羟胺溶液；将化合物9a-9j分别溶于MeOH/THF溶液中，再加入羟胺溶液中，反应中加入酸试剂中和，得到化合物10a-10j；
(7)将化合物10a-10j分别与化合物3a溶于异丁醇/N,N-二甲基乙酰基胺/水溶液中，在惰性气体气氛下，依次加入硫酸铜、tris[(1-benzyl-1H-1,2,3-triazol-4-yl)methyl]amine(TBTA)和维生素C钠，反应得到化合物11a-11j；
将化合物10d和化合物10f分别与化合物3b溶于异丁醇/N,N-二甲基乙酰基胺/水溶液中，在惰性气体气氛下，依次加入硫酸铜、tris[(1-benzyl-1H-1,2,3-triazol-4-yl)methyl]amine(TBTA)和维生素C钠，反应得到化合物11k和11l；
其中，步骤(1)的合成路线如下所示：
步骤(2)-(7)的合成路线如下所示：
其中，X为1～4的整数，m为0～4的整数，n为1～5的整数。
具体地，步骤(2)-(7)的合成路线中：
当x＝1时，m＝0为化合物11a，m＝1为化合物11b，m＝2为化合物11c，m＝3为化合物11d，m＝4为化合物11e，n＝1为化合物11f，n＝2为化合物11g，n＝3为化合物11h，n＝4为化合物11i，n＝5为化合物11j；
当x＝2时，m＝3为化合物11k，n＝1为化合物11l。
进一步地，所述有机溶剂为N,N-二甲基乙酰基胺。
进一步地，步骤(1)中，还包括以下步骤：
得到反应液后，反应液用乙酸乙酯萃取，有机相用饱和食盐水洗涤3～5次，合并有机相并浓缩，浓缩后通过硅胶柱分离纯化得化合物3a和3b。
进一步地，步骤(6)中，所述碱试剂为氢氧化钠，所述酸试剂为醋酸。
进一步地，步骤(6)中，所述MeOH/THF溶液中MeOH和THF的体积比为1:1。
进一步地，步骤(7)中，所述异丁醇/N,N-二甲基乙酰基胺/水溶液中异丁醇、N,N-二甲基乙酰基胺与水的体积比为1:2:0.5；所述惰性气体为氮气。
具体地，上述制备方法中，为了提高相应产物的收率和纯度，在得到初步反应产物后会进一步采用萃取、洗涤、浓缩以及通过硅胶柱分离的手段。
第三方面，提供了一种药物组合物，所述药物组合物包括如第一方面所述的组蛋白去乙酰化酶8选择性降解剂。
进一步地，所述药物组合物还包括药学上可接受的载体和/或辅剂。
本发明所述的药物组合物，该药物组合物以第一方面所述的组蛋白去乙酰化酶8选择性降解剂，不排除配制体系和给药方式的变动、对上述降解剂进行简单化学修饰调整后的衍生物、药用盐、多化合物以及多降解剂合用等情况。
具体地，本发明提供的如上所述的化合物的药学上可接受的盐可以为：钠盐、钾盐、铵盐、氨基酸盐、乳酸盐、盐酸盐、磷酸盐、醋酸盐、苹果酸盐、枸椽酸盐或天冬氨酸盐等，本发明不对药物盐做具体限定。
在本发明中，可将本发明的组蛋白去乙酰化酶8选择性降解剂作为活性成分配制于无毒的、惰性的和药学上可接受的载体介质；配制好的药物可以通过常规途径进行给药，包括但并不限口服、肌内、腹膜内、静脉内、皮下、皮内、或局部给药。
当本发明的药物组合物的剂型为用于口服施用的药物时，其含有安全有效量的本发明的组蛋白去乙酰化酶8选择性降解剂以及药学上可接受的载体和/或辅剂，口服施用的药物可制成片剂、丸剂、散剂、颗粒剂、胶囊剂、乳剂、糖浆剂、软膏剂、栓剂等常用剂型；本发明中，不对载体和/或辅剂做具体限定。
本发明的药物组合物还可以被制成注射剂，可以在无菌操作环境下与注射用水、生理盐水、葡萄糖水制成注射剂，上述注射剂可通过常规方法进行制备。
第四方面，提供了如第一方面所述的组蛋白去乙酰化酶8选择性降解剂、第三方面所述的药物组合物在制备用于预防或治疗与HDAC8活性或表达异常相关疾病的药物中的应用。
具体地，上述相关疾病为血液瘤、实体瘤等肿瘤、病毒感染以及寄生虫病。
与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：
本发明提供的组蛋白去乙酰化酶8选择性降解剂能够以浓度依赖性的显著选择性降解肿瘤细胞中的去乙酰化酶8，而不影响其他其它类型的去乙酰化酶，提示其在制备预防或治疗与HDAC8活性或表达异常相关疾病药物，尤其是抗肿瘤活性药物方面的价值。
本发明附加的方面和优点将在下面的描述中部分给出，这些将从下面的描述中变得明显，或通过本发明的实践了解到。
附图说明
图1为本发明蛋白降解实验的测试结果示意图；
图2为本发明A549细胞的免疫荧光实验的测试结果示意图；
图3为本发明HCT116细胞的免疫荧光实验的测试结果示意图；
图4为本发明细胞克隆实验的测试结果示意图；
图5为本发明细胞凋亡实验的测试结果示意图；
图6为本发明细胞凋亡实验的测试结果示意图；
图7为本发明小鼠移植瘤模型实验中小鼠体重和肿瘤体积的测试结果示意图；
图8为本发明小鼠移植瘤模型实验的测试结果示意图。
具体实施方式
为了更充分的理解本发明的技术内容，下面将结合附图和具体实施例对本发明作进一步介绍和说明；显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例；基于本发明中的实施例，本领域技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其它实施例，都属于本发明保护的范围。
对于本领域的技术人员来说，通过阅读本说明书公开的内容，本发明的特征、有益效果和优点将变得显而易见。
除非另外指明，所有百分比、分数和比率都是按本发明组合物的总重量计算的。本文术语“重量含量”可用符号“％”表示。
术语“包含”为开放式表达，即包括本发明所指明的内容，但并不排除其他方面的内容。
术语“药物组合物”表示一种或多种本文所述化合物或者其生理学上/药学上可以接受的盐或前体药物或与其他活性药物联用的混合物。
实施例1
本实施例提供上述组蛋白去乙酰化酶8选择性降解剂的制备方法，具体地，该制备方法包括以下步骤：
化合物3a或3b的合成
合成路线如下所示：
具体步骤为：
称取化合物1(0.5g,1.8mmol)和炔丙基盐酸盐2a(0.2g,2.2mmol)溶于5mL N,N-二甲基乙酰基胺，再滴加N,N-二异丙基乙胺(1.1mL,6.6mmol)，在常温下搅拌5分钟。然后再置换氮气，加热至95℃，继续反应16h后，冷却至常温。反应液用乙酸乙酯萃取，有机相用饱和食盐水洗涤(30mLX3)。合并有机相，浓缩后，通过硅胶柱分离(VMeOH:VDCM＝2％)纯化得化合物3a(0.45g)，黄色固体，收率为83％。
化合物3a的结构表征数据如下：
1H NMR(500MHz,CDCl3):δ＝2.13-2.16(m,1H),2.26(t,J＝2.3Hz 1H),2.70-2.92(m,3H),4.10(dd,J＝6.0,2.4Hz,2H),4.90(dd,J＝12.2,5.4Hz,1H),6.46(t,J＝5.8Hz,1H),7.02(d,J＝8.4Hz,1H),7.20(d,J＝7.2Hz,1H),7.56-7.58(m,1H),7.98(s,1H).13C NMR(126MHz,DMSO):δ＝22.76,31.60,32.26,49.04,72.49,79.68,111.26,112.20,117.40,132.46,136.04,145.54,167.56,169.18,169.44,172.34.HRMS(EI)calcd.for[C16H13N3O4](M+H)+:312.0979,found:312.0981.
化合物3b的合成方法参照化合物3a的合成方法，具体为采用化合物2b与化合物1反应合成，得到的化合物3b为黄色固体(0.42g)，收率为83％。
化合物3b的结构表征数据如下：
1H NMR(600MHz,d6-DMSO):δ＝2.14-2.16(m,1H),2.26(m,3H),2.68-2.90(m,3H),4.11(dd,J＝6.0,2.4Hz,2H),4.92(dd,J＝12.2,6.0Hz,1H),6.48(t,J＝5.8Hz,1H),7.04(d,J＝8.4Hz,1H),7.20(d,J＝7.2Hz,1H),7.54-7.56(m,1H),7.95(s,1H).13C NMR(126MHz,DMSO):δ＝21.6,22.78,31.64,32.28,49.04,72.50,79.68,111.26,112.22,117.40,132.46,136.05,145.53,167.58,169.18,169.46,172.33.HRMS(EI)calcd.for[C17H16N3O4](M+H)+:326.1135,found:326.1138.
化合物6的合成
称取化合物4(3.0g,17.1mmol)溶于5mL N,N-二甲基乙酰基胺，将溶液冷却至0℃，分批缓慢加入NaH(1.1g,42.8mmol)，继续反应1h。然后称取4-苄氧基苄氯5(4.8g,21.1mmol)溶于5mL N,N-二甲基乙酰基胺，缓慢滴加至上述反应溶液中，继续在0℃下反应15min.后，缓慢回复至常温，继续反应2h。TLC板监测反应完毕后，缓慢加入冰水5mL，再搅拌5分钟后，用乙酸乙酯萃取，有机相合并用饱和食盐水洗涤(30mLX3)。有机相用乙酸乙酯萃取，饱和食盐水洗涤，浓缩后，通过硅胶柱分离(VEA:VPE＝1:4)纯化得化合物6(4.8g)，白色固体，收率为75％。
化合物6的结构表征数据如下：
1H NMR(600MHz,d6-DMSO):δ＝8.94(brs,1H),8.09(s,1H),7.73-7.75(m,1H),7.60-7.62(m,1H),7.13(d,J＝8.2Hz,1H),7.00(d,J＝8.2Hz,2H),6.75-6.78(m,2H),6.53-6.54(m,1H),5.28(s,2H),3.90(s,3H).13C NMR(125MHz,d6-DMSO):δ＝167.9,157.1,135.4,132.3,131.6,129.4,128.4,127.4,122.9,120.4,115.7,112.0,101.7,51.8,49.7.HRMS(EI)calcd.for[C24H22NO3](M+H)+:372.1594,found:372.1596.
化合物7的合成
称取化合物6(3.6g,9.7mmol)，加入10mL甲醇溶解，加入Pd/C(0.4g)，常温下反应24h。反应完毕后减压称取溶剂，通过硅胶柱分离(VEA:VPE＝1:3)纯化得化合物7(2.5g)，白色固体，收率为92％。
化合物7的结构表征数据如下：
1H NMR(600MHz,d6-DMSO):δ＝8.09(s,1H),7.62-7.67(m,3H),7.40(d,J＝8.4Hz,2H),7.36(d,J＝8.4Hz,2H),7.13(d,J＝8.2Hz,2H),6.92-6.95(m,3H),6.53(d,J＝10.0Hz,1H),6.56-6.58(m,1H),5.44(s,2H),5.04(s,2H),3.84(s,3H).13C NMR(125MHz,d6-DMSO):δ＝167.5,158.2,155.4,137.3,135.4,132.1,132.4,130.4,128.7,127.9,127.5,122.8,120.7,120.2,115.4,112.4,101.8,69.7,52.1,49.2.HRMS(EI)calcd.for[C17H16NO3](M+H)+:282.1125,found:282.1126.
化合物8a-8j的合成
称取化合物7(0.20g,0.71mmol)溶于3mL无水乙腈，加入1,2-二溴丙烷(0.30mL,2.7mmol)和K2CO3(3.9g,2.8mmol)。反应液加热至90℃，反应16h。TLC板监测反应完毕后，冷却至常温，用乙酸乙酯萃取，有机相合并用饱和食盐水洗涤(30mLX3)。饱和食盐水洗涤，浓缩后，通过硅胶柱分离(VEA:VPE＝1:5)纯化得化合物8a(0.22g)，白色固体，收率为80％。
化合物8a的结构式为：
化合物8a的结构表征数据如下：
1H NMR(500MHz,CDCl3):δ＝8.16(s,1H),7.86(d,J＝8.0Hz,1H),7.70(d,J＝8.0Hz,1H),7.29(d,J＝8.0Hz,1H),7.12(d,J＝8.2Hz,2H),6.90(d,J＝8.2Hz,2H),6.61-6.62(m,1H),5.36(s,2H),4.12(t,J＝6.0Hz,2H),3.96(s,3H),3.64(t,J＝6.0Hz,2H).13CNMR(125MHz,CDCl3):δ＝168.2,158.4,135.4,132.2,131.1,129.2,128.4,123.3,120.6,115.0,114.8,112.1,102.0,65.4,51.9,49.8,32.4.HRMS(EI)calcd.for[C19H18BrNO3](M+H)+:387.0465,found:387.0470.
化合物8b的合成方法参照化合物8a的合成方法，具体为采用化合物7与1,3-二溴丙烷反应合成，得到的化合物8b为白色固体(0.20g)，收率为78％。
化合物8b的结构式为：
化合物8b的结构表征数据如下：
1H NMR(500MHz,CDCl3):δ＝8.16(s,1H),7.85(d,J＝8.0Hz,1H),7.69(d,J＝8.0Hz,1H),7.29(d,J＝8.0Hz,1H),7.12(d,J＝8.2Hz,2H),6.89(d,J＝8.2Hz,2H),6.61-6.62(m,1H),5.36(s,2H),4.11(t,J＝6.0Hz,2H),3.96(s,3H),3.62(t,J＝6.0Hz,2H),2.31-2.34(m,2H).13C NMR(125MHz,CDCl3):δ＝168.2,158.4,135.6,132.2,131.2,129.2,128.3,123.3,120.5,115.0,114.8,112.0,102.0,65.3,51.9,49.6,32.3,29.9.HRMS(EI)calcd.for[C20H21BrNO3](M+H)+:402.0699,found:402.0700.
化合物8c的合成方法参照化合物8a的合成方法，具体为采用化合物7与1,4-二溴丁烷反应合成，得到的化合物8c为白色固体(0.22g)，收率为75％。
化合物8c的结构式为：
化合物8c的结构表征数据如下：
1H NMR(500MHz,CDCl3):δ＝8.13(s,1H),7.82(d,J＝8.0Hz,1H),7.67(d,J＝8.0Hz,1H),7.27-7.28(m,1H),7.09(d,J＝8.0Hz,2H),6.84(d,J＝8.2Hz,2H),6.58-6.59(m,1H),5.32(s,2H),3.99-4.02(m,2H),3.94(s,3H),3.48-3.50(m,2H),2.05-2.08(m,2H),1.93-1.95(m,2H).13C NMR(125MHz,CDCl3):δ＝169.2,158.5,135.6,132.3,131.2,129.3,128.3,123.2,120.5,114.7,114.3,112.0,102.0,66.8,51.9,49.6,32.4,30.9,29.9.HRMS(EI)calcd.for[C21H23BrNO3](M+H)+:416.0856,found:416.0858.
化合物8d的合成方法参照化合物8a的合成方法，具体为采用化合物7与1,5-二溴戊烷反应合成，得到的化合物8d为白色固体(0.23g)，收率为75％。
化合物8d的结构式为：
化合物8d的结构表征数据如下：
1H NMR(500MHz,CDCl3):δ＝8.11(s,1H),7.72(d,J＝8.0Hz,1H),7.64-7.65(m,2H),7.13(d,J＝8.0Hz,2H),6.86(d,J＝8.2Hz,2H),6.58-6.59(m,1H),5.43(s,2H),3.90-3.91(m,2H),3.89(s,3H),3.51-3.53(m,2H),1.80-1.85(m,2H),1.67-1.70(m,2H),1.48-1.51(m,2H).13C NMR(125MHz,CDCl3):δ＝167.6,158.4,135.3,133.3,132.5,130.2.128.7,122.7,120.8,120.2,114.9,112.5,101.8,67.6,52.3,49.1,35.4,32.4,28.2,24.7.HRMS(EI)calcd.for[C22H25BrNO3](M+H)+:430.1012,found:430.1012.
化合物8e的合成方法参照化合物8a的合成方法，具体为采用化合物7与1,6-二溴己烷反应合成，得到的化合物8e为白色固体(0.22g)，收率为70％。
化合物8e的结构式为：
化合物8e的结构表征数据如下：
1H NMR(500MHz,CDCl3):δ＝8.16(s,1H),7.84(d,J＝8.0Hz,1H),7.69(d,J＝8.0Hz,1H),7.28-7.29(m,1H),7.11(d,J＝8.2Hz,2H),6.86(d,J＝8.2Hz,2H),6.60-6.61(m,1H),5.35(s,2H),3.96-3.97(m,2H),3.95(s,3H),3.46(t,J＝6.0Hz,2H),1.91-1.94(m,2H),1.80-1.83(m,2H),1.52-1.55(m,4H).13C NMR(125MHz,CDCl3):δ＝168.2,158.7,135.6,132.3,131.4,128.8,128.4,128.2,123.3,120.5,114.7,112.0,102.1,67.7,52.1,51.7,49.6,33.8,32.6,29.0,27.9,25.3.HRMS(EI)calcd.for[C23H27BrNO3](M+H)+:444.1169,found:444.1170.
化合物8f的合成方法参照化合物8a的合成方法，具体为采用化合物7与1-bromo-2-(2-bromoethoxy)ethane反应合成，得到的化合物8f为白色固体(0.21g)，收率为71％。
化合物8f的结构式为：
化合物8f的结构表征数据如下：
1H NMR(500MHz,CDCl3):δ＝8.15(s,1H),7.84(d,J＝8.0Hz,1H),7.69(d,J＝8.0Hz,1H),7.28(d,J＝8.2Hz,1H),7.11(d,J＝8.2Hz,2H),6.90(d,J＝8.0Hz,2H),6.61-6.62(m,1H),5.35(s,2H),4.14-4.15(m,2H),3.96(s,3H),3.89-3.96(m,4H),3.52(t,J＝6.0Hz,2H).13C NMR(125MHz,CDCl3):δ＝168.2,158.3,135.6,132.3,131.4,129.3,128.4,128.2,123.3,120.5,115.0,112.0,102.1,71.4,69.6,67.5,52.2,49.6,30.2.HRMS(EI)calcd.for[C21H23BrNO4](M+H)+:432.0805,found:432.0806.
化合物8g的合成方法参照化合物8a的合成方法，具体为采用化合物7与1,2-bis(2-bromoethoxy)ethane反应合成，得到的化合物8g为白色固体(0.27g)，收率为80％。
化合物8g的结构式为：
化合物8g的结构表征数据如下：
1H NMR(500MHz,CDCl3):δ＝8.15(s,1H),7.84(d,J＝8.0Hz,1H),7.69(d,J＝8.0Hz,1H),7.28(d,J＝8.0Hz,1H),7.10(d,J＝8.2Hz,2H),6.89(d,J＝8.2Hz,2H),6.60-6.61(m,1H),5.35(s,2H),4.14(t,J＝6.0Hz,2H),3.96(s,3H),3.88(t,J＝6.0Hz,2H),3.84(t,J＝6.0Hz,2H),3.75-3.76(m,2H),3.72-3.73(m,2H),3.50(t,J＝6.0Hz,2H).13C NMR(125MHz,CDCl3):δ＝168.2,158.5,135.6,132.3,131.3,131.2,129.2,128.3,123.4,120.5,115.1,112.1,102.1,71.2,70.8,70.6,69.8,67.5,52.1,51.7,49.6,30.3.HRMS(EI)calcd.for[C23H27BrNO5](M+H)+:476.1067,found:476.1067.
化合物8h的合成方法参照化合物8a的合成方法，具体为采用化合物7与1-bromo-2-(2-(2-(2-bromoethoxy)ethoxy)ethoxy)ethane反应合成，得到的化合物8h为白色固体(0.27g)，收率为72％。
化合物8h的结构式为：
化合物8h的结构表征数据如下：
1H NMR(500MHz,CDCl3):δ＝8.15(s,1H),7.84(d,J＝8.2Hz,1H),7.68(d,J＝8.0Hz,1H),7.28(d,J＝8.2Hz,1H),7.10(d,J＝8.2Hz,2H),6.89(d,J＝8.2Hz,2H),6.60-6.61(m,1H),5.34(s,2H),4.13(t,J＝6.0Hz,2H),3.96(s,3H),3.86-3.88(m,2H),3.82(t,J＝6.0Hz,2H),3.74-3.75(m,2H),3.70-3.72(m,6H),3.49(t,J＝6.0Hz,2H).13C NMR(125MHz,CDCl3):δ＝168.2,158.5,135.6,132.2,131.3,131.2,129.1,128.3,123.4,120.6,115.0,112.0,102.0,71.2,70.8,70.6,70.0,69.7,67.5,52.1,51.7,49.6,30.3.HRMS(EI)calcd.for[C25H31BrNO6](M+H)+:520.1329,found:520.1330.
化合物8i的合成方法参照化合物8a的合成方法，具体为采用化合物7与1,14-dibromo-3,6,9,12-tetraoxatetradecane反应合成，得到的化合物8i为白色固体(0.27g)，收率为68％。
化合物8i的结构式为：
化合物8i的结构表征数据如下：
1H NMR(500MHz,CDCl3):δ＝8.15(s,1H),7.83(d,J＝8.0Hz,1H),7.68(d,J＝8.0Hz,1H),7.28(d,J＝8.0Hz,1H),7.10(d,J＝8.2Hz,2H),6.89(d,J＝8.2Hz,2H),6.60-6.61(m,1H),5.35(s,2H),4.13(t,J＝6.0Hz,2H),3.96(s,3H),3.82-3.88(m,4H),3.67-3.76(m,12H),3.48-3.52(m,2H).13C NMR(125MHz,CDCl3):δ＝168.2,158.4,135.6,132.3,131.3,131.1,129.1,128.3,123.3,120.5,114.9,112.0,102.0,71.2,70.8,70.6,70.5,70.1,69.7,67.5,67.1,52.2,51.7,49.6,30.4.HRMS(EI)calcd.for[C27H35BrNO7](M+H)+:564.1591,found:564.1593.
化合物8j的合成方法参照化合物8a的合成方法，具体为采用化合物7与1,17-dibromo-3,6,9,12,15-pentaoxaheptadecane反应合成，得到的化合物8j为白色固体(0.24g)，收率为61％。
化合物8j的结构式为：
化合物8j的结构表征数据如下：
1H NMR(500MHz,CDCl3):δ＝8.16(s,1H),7.84(d,J＝8.0Hz,1H),7.68(d,J＝8.0Hz,1H),7.30(d,J＝8.0Hz,1H),7.12(d,J＝8.2Hz,2H),6.90(d,J＝8.2Hz,2H),6.60-6.62(m,1H),5.35(s,2H),4.13(t,J＝6.0Hz,2H),3.98(s,3H),3.82-3.88(m,4H),3.68-3.78(m,16H),3.48-3.52(m,2H).13C NMR(125MHz,CDCl3):δ＝168.2,158.4,135.6,132.3,131.3,131.1,129.1,128.3,123.3,120.5,114.9,112.0,102.0,71.2,70.8,70.6,70.5,70.4,70.3,70.1,69.7,67.5,67.1,52.2,51.7,49.6,30.4.HRMS(EI)calcd.for[C29H39BrNO8](M+H)+:608.1854,found:608.1858.
化合物9的合成
称取化合物8a(0.22g,0.55mmol)和叠氮钠(0.23g,3.6mmol)溶于3mL无水N,N-二甲基乙酰胺，加热至50℃反应5h。TLC板监测反应完毕，冷却至常温，用乙酸乙酯萃取，有机相合并用饱和食盐水洗涤(30mLX3)。饱和食盐水洗涤，浓缩后，通过硅胶柱分离(VEA:VPE＝1:6)纯化得化合物9a(0.17g)，白色固体，收率为85％。
化合物9的结构式为：
化合物9的结构表征数据如下：
1H NMR(500MHz,CDCl3):δ＝8.15(s,1H),7.84(d,J＝8.0Hz,1H),7.69(d,J＝8.0Hz,1H),7.30(s,1H),7.11(d,J＝8.0Hz,2H),6.87(d,J＝8.0Hz,2H),6.62-6.64(m,1H),5.35(s,2H),4.06(t,J＝5.0Hz,2H),3.53(t,J＝5.0Hz,2H).13C NMR(125MHz,CDCl3):δ＝168.2,158.4,135.6,132.4,131.2,129.4,128.4,123.5,120.6,120.5,114.8,112.0,102.2,64.5,51.9,49.8,48.2.HRMS(EI)calcd.for[C19H19N4O3](M+H)+:351.1452,found:351.1456.
化合物9b的合成方法参照化合物9a的合成方法，具体为采用化合物8b与叠氮钠反应合成，得到的化合物9b为白色固体(0.17g)，收率为85％。
化合物9b的结构式为：
化合物9b的结构表征数据如下：
1H NMR(500MHz,CDCl3):δ＝8.16(s,1H),7.85(d,J＝8.0Hz,1H),7.69(d,J＝8.0Hz,1H),7.29(s,1H),7.11(d,J＝8.0Hz,2H),6.87(d,J＝8.0Hz,2H),6.61-6.62(m,1H),5.35(s,2H),4.05(t,J＝5.0Hz,2H),3.54(t,J＝5.0Hz,2H),2.06-2.09(m,2H).13C NMR(125MHz,CDCl3):δ＝168.2,158.3,135.6,132.3,131.2,129.4,128.3,123.3,120.6,120.5,114.8,112.0,102.1,64.5,51.9,49.6,48.2,28.7.HRMS(EI)calcd.for[C20H21N4O3](M+H)+:365.1608,found:365.1609.
化合物9c的合成方法参照化合物9a的合成方法，具体为采用化合物8c与叠氮钠反应合成，得到的化合物9c为白色固体(0.17g)，收率为90％。
化合物9c的结构式为：
化合物9c的结构表征数据如下：
1H NMR(500MHz,CDCl3):δ＝8.16(s,1H),7.85(d,J＝8.0Hz,1H),7.69(d,J＝8.0Hz,1H),7.29(s,1H),7.11(d,J＝8.0Hz,2H),6.87(d,J＝8.0Hz,2H),6.61-6.62(m,1H),5.35(s,2H),3.99(t,J＝5.0Hz,2H),3.97(s,3H),3.40(t,J＝4.9Hz,2H),1.88-1.89(m,2H),1.80-1.83(m,2H).13C NMR(125MHz,CDCl3):δ＝168.2,158.5,135.6,132.3,131.2,129.4,129.1,128.4,123.3,120.6,114.8,112.0,102.0.67.2,51.9,51.2,49.6,26.5,25.8.HRMS(EI)calcd.for[C21H23N4O3](M+H)+:379.1765,found:379.1766.
化合物9d的合成方法参照化合物9a的合成方法，具体为采用化合物8d与叠氮钠反应合成，得到的化合物9d为白色固体(0.16g)，收率为90％。
化合物9d的结构式为：
化合物9d的结构表征数据如下：
1H NMR(500MHz,CDCl3):δ＝8.14(s,1H),7.83(d,J＝8.0Hz,1H),7.67(d,J＝8.0Hz,1H),7.27(s,1H),7.09(d,J＝8.0Hz,2H),6.85(d,J＝8.0Hz,2H),6.59-5.60(m,1H),5.32(s,2H),3.96(t,J＝5.0Hz,2H),3.94(s,3H),3.32(t,J＝4.8Hz,2H),1.79-1.84(m,2H),1.66-1.71(m,2H),1.55-1.57(m,2H).13C NMR(125MHz,CDCl3):δ＝168.2,158.6,135.6,132.3,131.2,128.9,128.3,123.3,120.6,120.5,114.7,112.0,102.0,67.6,51.9,51.3,49.6,28.7,23.4.HRMS(EI)calcd.for[C22H25N4O3](M+H)+:393.1921,found:393.1922.
化合物9e的合成方法参照化合物9a的合成方法，具体为采用化合物8e与叠氮钠反应合成，得到的化合物9e为白色固体(0.18g)，收率为94％。
化合物9e的结构式为：
化合物9e的结构表征数据如下：
1H NMR(500MHz,CDCl3):δ＝8.16(s,1H),7.84(d,J＝8.0Hz,1H),7.69(d,J＝8.0Hz,1H),7.29(s,1H),7.11(d,J＝8.0Hz,2H),6.87(d,J＝8.0Hz,2H),6.60-6.61(m,1H),5.35(s,2H),3.97(t,J＝4.9Hz,2H),3.96(s,3H),3.31(t,J＝4.8Hz,2H),1.79-1.82(m,2H),1.64-1.69(m,2H),1.46-1.54(m,4H).13C NMR(125MHz,CDCl3):δ＝168.2,158.7,135.6,132.3,131.4,128.8,128.4,128.2,123.3,120.5,120.5,114.7,112.1,102.0,67.7,52.1,51.4,49.6,29.1,28.8,26.5,25.7.HRMS(EI)calcd.for[C23H27N4O3](M+H)+:407.2078,found:407.2080.
化合物9f的合成方法参照化合物9a的合成方法，具体为采用化合物8f与叠氮钠反应合成，得到的化合物9f为白色固体(0.18g)，收率为95％。
化合物9f的结构式为：
化合物9f的结构表征数据如下：
1H NMR(500MHz,CDCl3):δ＝8.15(s,1H),7.84(d,J＝8.0Hz,1H),7.69(d,J＝8.0Hz,1H),7.29(s,1H),7.11(d,J＝8.0Hz,2H),6.90(d,J＝8.0Hz,2H),6.60-6.61(m,1H),5.35(s,2H),4.15(t,J＝4.9Hz,2H),3.88(t,J＝4.9Hz,2H),3.77(t,J＝4.9Hz,2H),3.44(t,J＝4.9Hz,2H).13C NMR(125MHz,CDCl3):δ＝168.2,158.3,135.6,132.3,131.4,131.1,129.3,128.4,123.4,120.6,115.1,112.0,102.1,69.7,67.5,52.2,51.7,50.7,49.6.HRMS(EI)calcd.for[C21H23N4O4](M+H)+:395.1714,found:395.1716.
化合物9g的合成方法参照化合物9a的合成方法，具体为采用化合物8g与叠氮钠反应合成，得到的化合物9g为白色固体(0.18g)，收率为91％。
化合物9g的结构式为：
化合物9g的结构表征数据如下：
1H NMR(500MHz,CDCl3):δ＝8.14(s,1H),7.84(d,J＝8.0Hz,1H),7.68(d,J＝8.0Hz,1H),7.28(s,1H),7.09(d,J＝8.0Hz,2H),6.89(d,J＝8.0Hz,2H),6.59-6.60(m,1H),5.33(s,2H),4.13(t,J＝4.9Hz,2H),3.95(s,3H),3.87(t,J＝4.9Hz,2H),3.75(t,J＝4.9Hz,2H),3.69-3.71(m,4H),3.39(t,J＝4.5Hz,2H).13C NMR(125MHz,CDCl3):δ＝168.2,162.6,158.5,135.6,132.3,131.4,129.1,128.4,123.3,120.5,115.4,112.0,102.0,70.8,70.1,69.7,67.4,52.1,51.7,50.6,49.6.HRMS(EI)calcd.for[C23H27N4O5](M+H)+:439.1976,found:439.1980.
化合物9h的合成方法参照化合物9a的合成方法，具体为采用化合物8h与叠氮钠反应合成，得到的化合物9h为白色固体(0.19g)，收率为89％。
化合物9h的结构式为：
化合物9h的结构表征数据如下：
1H NMR(500MHz,CDCl3):δ＝8.11(s,1H),7.80(d,J＝8.0Hz,1H),7.65(d,J＝8.0Hz,1H),7.25(s,1H),7.08(d,J＝8.0Hz,2H),6.86(d,J＝8.0Hz,2H),6.57-6.58(m,1H),5.32(s,2H),4.10(t,J＝4.9Hz,2H),3.93(s,3H),3.84(t,J＝4.9Hz,2H),3.65-3.72(m,10H),3.37(t,J＝4.8Hz,2H).13C NMR(125MHz,CDCl3):δ＝168.1,162.6,158.4,135.6,132.3,131.2,129.2,128.2,123.3,120.5,115.0,112.0,101.9,71.2,70.7,70.2,69.9,69.6,67.4,52.1,51.7,50.6,49.6.HRMS(EI)calcd.for[C25H31N4O6](M+H)+:483.2238,found:483.2240.
化合物9i的合成方法参照化合物9a的合成方法，具体为采用化合物8i与叠氮钠反应合成，得到的化合物9i为白色固体(0.21g)，收率为88％。
化合物9i的结构式为：
化合物9i的结构表征数据如下：
1H NMR(500MHz,CDCl3):δ＝8.15(s,1H),7.84(d,J＝8.0Hz,1H),7.68(d,J＝8.0Hz,1H),7.30(s,1H),7.10(d,J＝8.0Hz,2H),6.90(d,J＝8.0Hz,2H),6.60-6.61(m,1H),5.36(s,2H),4.14(t,J＝5.0Hz,2H),3.96(s,3H),3.88(t,J＝5.0Hz,2H),3.64-3.78(m,14H),3.42(t,J＝5.0Hz,2H).13C NMR(125MHz,CDCl3):δ＝168.2,162.8,158.5,135.6,132.3,131.4,131.2,129.1,128.3,123.4,120.4,115.0,112.2,102.0,71.4,70.8,70.6,70.5,70.2,69.7,67.5,52.2,51.7,50.7,49.6.HRMS(EI)calcd.for[C27H35N4O7](M+H)+:527.2500,found:527.2500.
化合物9j的合成方法参照化合物9a的合成方法，具体为采用化合物8j与叠氮钠反应合成，得到的化合物9j为白色固体(0.19g)，收率为80％。
化合物9j的结构式为：
化合物9j的结构表征数据如下：
1H NMR(500MHz,CDCl3):δ＝8.15(s,1H),7.83(d,J＝8.0Hz,1H),7.68(d,J＝8.0Hz,1H),7.28(s,1H),7.10(d,J＝8.0Hz,2H),6.89(d,J＝8.0Hz,2H),6.60-6.61(m,1H),5.35(s,2H),4.13(t,J＝5.0Hz,2H),3.96(s,3H),3.87(t,J＝5.0Hz,2H),3.68-3.74(m,18H),3.41(t,J＝5.0Hz,2H).13C NMR(125MHz,CDCl3):δ＝168.2,162.6,158.5,135.6,132.3,131.4,131.1,129.1,128.3,123.3,120.4,115.0,112.0,102.0,71.2,70.8,70.6,70.5,70.1,70.0,69.8,69.7,67.5,52.2,51.7,50.7,49.6.HRMS(EI)calcd.for[C27H35N4O7](M+H)+:571.2768,found:571.2770.
化合物10的合成
取1.3mL 50％的NH2OH溶液冷却至0℃，加入NaOH(226mg,5.7mmol)，继续搅拌15min.再称取化合物9a(0.18g,0.48mmol)溶1mL的MeOH/THF(1:1)溶液，将该溶液滴加至上述羟胺溶液中，常温下继续反应1.5h。反应中加入适量的醋酸中和，用二氯甲烷萃取，浓缩后过柱(VMeOH:VDCM＝1:20)纯化得化合物10a(0.15g,0.42mmol)，收率85％。
化合物10a的结构表征数据如下：
1H NMR(500MHz,CDCl3):δ＝8.80(brs,1H),7.84-7.86(m,1H),7.66(s,1H),7.37-7.38(m,1H),7.23-7.24(m,1H),7.03-7.06(m,2H),6.79-6.82(m,2H),6.55-6.58(m,1H),5.26(s,2H),3.98-3.99(m,2H),3.47-3.49(m,2H).13C NMR(125MHz,CDCl3):δ＝158.6,135.7,131.9,129.1,128.4,123.4,121.2,117.2,115.3,114.8,109.8,102.0,64.6,49.7,48.3.HRMS(EI)calcd.for[C18H18N5O3](M+H)+:352.1404,found:352.1406.
化合物10b的合成方法参照化合物10a的合成方法，具体为采用化合物9b与羟胺反应合成，得到的化合物10b为白色固体(0.15g)，收率为85％。
化合物10b的结构式为：
化合物10b的结构表征数据如下：
1H NMR(500MHz,CDCl3):δ＝8.80(brs,1H),7.85-7.86(m,1H),7.65(s,1H),7.37-7.38(m,1H),7.23-7.24(m,1H),7.03-7.08(m,2H),6.79-6.82(m,2H),6.55-6.58(m,1H),5.26(s,2H),3.97-3.99(m,2H),3.47-3.49(m,2H),2.00-2.02(m,2H).13C NMR(125MHz,CDCl3):δ＝158.4,135.7,131.9,129.0,128.3,123.4,121.1,117.2,115.1,114.8,109.8,102.0,64.5,49.7,48.2,28.7.HRMS(EI)calcd.for[C19H20N5O3](M+H)+:366.1561,found:366.1564.
化合物10c的合成方法参照化合物10a的合成方法，具体为采用化合物9c与羟胺反应合成，得到的化合物10c为白色固体(0.15g)，收率为88％。
化合物10c的结构式为：
化合物10c的结构表征数据如下：
1H NMR(500MHz,CDCl3):δ＝8.72(brs,1H),7.84-7.86(m,1H),7.65(s,1H),7.37-7.38(m,1H),7.23-7.24(m,1H),7.04-7.06(m,2H),6.80-6.81(m,2H),6.55-6.58(m,1H),5.28(s,2H),3.92-3.95(m,2H),3.33-3.35(m,2H),1.75-1.82(m,4H).13C NMR(125MHz,CDCl3):δ＝158.6,135.7,131.9,131.1,128.7,128.3,123.3,121.1,117.1,114.8,112.9,109.8,102.0,67.1,51.1,49.7,26.4,25.7.HRMS(EI)calcd.for[C20H22N5O3](M+H)+:380.1717,found:380.1718.
化合物10d的合成方法参照化合物10a的合成方法，具体为采用化合物9d与羟胺反应合成，得到的化合物10d为白色固体(0.15g)，收率为90％。
化合物10d的结构式为：
化合物10d的结构表征数据如下：
1H NMR(500MHz,CDCl3):δ＝8.75(brs,1H),7.86-7.88(m,1H),7.64(s,1H),7.37-7.38(m,1H),7.23-7.24(m,1H),7.04-7.06(m,2H),6.79-6.80(m,2H),6.55-6.56(m,1H),5.27(s,2H),3.90-3.92(m,2H),3.28-3.30(m,2H),1.77-1.79(m,2H),1.63-1.68(m,2H),1.52-1.56(m,2H).13C NMR(125MHz,CDCl3):δ＝158.6,135.7,131.9,131.1,128.6,128.3,124.8,123.3,121.1,117.1,114.8,109.8,102.0,67.6,51.3,49.7,28.7,28.6,23.4.HRMS(EI)calcd.for[C21H24N5O3](M+H)+:394.1874,found:394.1876.
化合物10e的合成方法参照化合物10a的合成方法，具体为采用化合物9e与羟胺反应合成，得到的化合物10e为白色固体(0.18g)，收率为92％。
化合物10e的结构式为：
化合物10e的结构表征数据如下：
1H NMR(500MHz,CDCl3):δ＝8.89(brs,1H),7.68-7.69(m,1H),7.27(s,1H),7.09-7.10(m,2H),6.84-6.85(m,2H),6.58-6.59(m,1H),5.34(s,2H),3.92-3.94(m,2H),3.30-3.32(m,2H),1.76-1.82(m,2H),1.69-1.73(m,2H),1.42-1.48(m,4H).13C NMR(125MHz,CDCl3):δ＝158.7,136.4,131.7,131.4,128.7,128.2,125.1,124.6,122.0,118.2,114.9,109.9,104.0,67.6,54.5,51.4,49.8,28.5,26.5,22.8.HRMS(EI)calcd.for[C22H26N5O3](M+H)+:408.2030,found:408.2030.
化合物10f的合成方法参照化合物10a的合成方法，具体为采用化合物9f与羟胺反应合成，得到的化合物10f为白色固体(0.15g)，收率为95％。
化合物10f的结构式为：
化合物10f的结构表征数据如下：
1H NMR(500MHz,CDCl3):δ＝8.80(brs,1H),7.88-7.89(m,1H),7.63-7.64(m,1H),7.39-7.40(m,1H),7.23-7.24(m,1H),7.04-7.06(m,2H),6.84-6.85(m,2H),6.57-6.58(m,1H),5.25(s,2H),4.09-4.11(m,2H),3.85-3.86(m,2H),3.74-3.76(m,2H),3.42-3.44(m,2H).13C NMR(125MHz,CDCl3):δ＝168.3,158.4,135.7,131.8,130.9,129.1,128.4,123.6,121.2,117.3,115.1,109.7,102.1,70.2,69.7,67.5,50.7,49.6.HRMS(EI)calcd.for[C20H22N5O4](M+H)+:396.1666,found:396.1668.
化合物10g的合成方法参照化合物10a的合成方法，具体为采用化合物9g与羟胺反应合成，得到的化合物10g为白色固体(0.16g)，收率为92％。
化合物10g的结构式为：
化合物10g的结构表征数据如下：
1H NMR(500MHz,CDCl3):δ＝8.80(brs,1H),7.88-7.89(m,1H),7.59-7.60(m,1H),7.39-7.41(m,1H),7.21(s,1H),7.00(d,J＝8.0Hz,2H),6.80(d,J＝8.0Hz,2H),6.55(s,1H),5.19(s,2H),4.06(t,J＝6.0Hz,2H),3.84(t,J＝6.0Hz,2H),3.74-3.76(m,2H),3.67-3.70(m,4H),3.38(t,J＝6.0Hz,2H).13C NMR(125MHz,CDCl3):δ＝168.1,158.3,135.7,131.7,131.0,129.0,128.3,123.8,121.0,117.5,114.9,109.7,101.9,70.8,70.7,70.0,69.4,50.6,49.6.HRMS(EI)calcd.for[C22H26N5O5](M+H)+:440.1928,found:440.1930.
化合物10h的合成方法参照化合物10a的合成方法，具体为采用化合物9h与羟胺反应合成，得到的化合物10h为白色固体(0.17g)，收率为90％。
化合物10h的结构式为：
化合物10h的结构表征数据如下：
1H NMR(500MHz,CDCl3):δ＝8.89(brs,1H),7.88-7.89(m,1H),7.59-7.60(m,1H),7.42(d,J＝6.0Hz,1H),7.22(s,1H),7.00(d,J＝8.0Hz,2H),679(d,J＝8.0Hz,2H),6.55(s,1H),5.20(s,2H),4.04(t,J＝6.0Hz,2H),3.82(t,J＝6.0Hz,2H),3.64-3.72(m,10H),3.36(t,J＝6.0Hz,2H).13C NMR(125MHz,CDCl3):δ＝167.9,158.4,135.7,131.6,130.9,129.0,128.3,123.9,121.0,117.6,114.9,109.7,101.9,71.1,70.7,70.6,70.1,69.6,67.4,50.7,50.5,49.6.HRMS(EI)calcd.for[C24H30N5O6](M+H)+:484.2191,found:484.2092.
化合物10i的合成方法参照化合物10a的合成方法，具体为采用化合物9i与羟胺反应合成，得到的化合物10i为白色固体(0.17g)，收率为86％。
化合物10i的结构式为：
化合物10i的结构表征数据如下：
1H NMR(500MHz,CDCl3):δ＝8.89(brs,1H),7.88-7.89(m,1H),7.63(d,J＝8.0Hz,1H),7.44-7.45(m,1H),7.23(s,1H),7.01(d,J＝8.0Hz,2H),6.79(d,J＝8.0Hz,2H),6.56(s,1H),5.23(s,2H),4.05(t,J＝6.0Hz,2H),3.82(t,J＝6.0Hz,2H),3.64-3.72(m,14H),3.37(t,J＝6.0Hz,2H).13C NMR(125MHz,CDCl3):δ＝167.8,158.4,135.7,131.7,131.0,129.0,128.3,123.9,121.0,117.8,115.0,109.7,101.9,71.1,70.7,70.6,70.5,70.1,69.9,69.6,67.3,50.8,50.5,49.6.HRMS(EI)calcd.for[C26H34N5O7](M+H)+:528.2453,found:528.2453.
化合物10j的合成方法参照化合物10a的合成方法，具体为采用化合物9j与羟胺反应合成，得到的化合物10j为白色固体(0.18g)，收率为84％。
化合物10j的结构式为：
化合物10j的结构表征数据如下：
1H NMR(500MHz,CDCl3):δ＝8.90(brs,1H),7.88-7.89(m,1H),7.64(d,J＝8.0Hz,1H),7.44-7.46(m,1H),7.24(s,1H),7.02(d,J＝8.0Hz,2H),6.80(d,J＝8.0Hz,2H),6.57(s,1H),5.24(s,2H),4.06(t,J＝6.0Hz,2H),3.84(t,J＝6.0Hz,2H),3.62-3.74(m,18H),3.38(t,J＝6.0Hz,2H).13C NMR(125MHz,CDCl3):δ＝167.8,158.4,135.7,131.7,131.0,129.0,128.3,123.9,121.0,117.8,115.0,109.7,101.9,71.1,70.7,70.6,70.5,70.3,70.1,69.9,69.8,69.6,67.3,50.8,50.5,49.6.HRMS(EI)calcd.for[C28H38N5O8](M+H)+:572.2715,found:572.2718.
化合物11a的合成
称取化合物10a(53mg,0.15mmol)和3a(47mg,0.15mmol)，溶于2mL由异丁醇/N,N-二甲基乙酰基胺/水(Visobutanol:VDMF:VH2O＝1:2:0.5)组成的溶液中，将体系置换为氮气气氛。再依次加入硫酸铜(10mg)，tris[(1-benzyl-1H-1,2,3-triazol-4-yl)methyl]amine(TBTA)(9mg)和维生素C钠(8mg)，继续在常温下反应16h，TLC监测反应进程。反应完毕后，用二氯甲烷萃取(5mLX3)，合并有机层后，用饱和食盐水萃取(10mLX3)。有机层旋蒸除去后剩余物，用硅胶柱纯化(VMeOH:VDCM:VHOAc＝1:20:50)得化合物11a为51mg，黄色固体，收率为51％。
化合物11a的结构式为：
化合物11a的结构表征数据如下：
1H NMR(500MHz,d6-DMSO):δ＝11.07(brs,2H),8.91(brs,1H),8.05(s,1H),7.96(s,1H),7.63(s,1H),7.58(d,J＝8.0Hz,1H),7.54-7.55(m,1H),7.45-7.46(m,1H),7.15-7.18(m,2H),7.04-7.08(m,2H),6.84(d,J＝8.0Hz,1H),6.53(s,2H),5.38(s,2H),5.06-5.09(m,1H),4.61(d,J＝6.0Hz,2H),4.48(t,J＝6.0Hz,2H),3.90(t,J＝5.8Hz,2H),2.87-2.94(m,1H),2.60-2.63(m,1H),2.20-2.24(t,J＝5.9Hz,2H),2.02-2.04(m,1H).13C NMR(125MHz,d6-DMSO):δ＝173.4,170.6,169.2,167.7,165.5,158.2,146.2,144.9,136.8,135.4,132.6,131.8,130.8,130.6,128.9,126.0,123.4,120.5,118.2,118.0,115.0,111.4,110.1,109.8,101.6,65.4,64.9,49.2,47.0,38.3,31.2,29.4.HRMS(EI)calcd.for[C34H31N8O7](M+H)+:663.2310,found:663.2312.
化合物11b的合成方法参照化合物11a的合成方法，具体为采用化合物10b与化合物3a反应合成，得到的化合物11b为黄色固体(52mg)，收率为51％。
化合物11b的结构式为：
化合物11b的结构表征数据如下：
1H NMR(500MHz,d6-DMSO):δ＝11.07(brs,2H),8.92(brs,1H),8.05(s,1H),7.96(s,1H),7.63(s,1H),7.58(d,J＝8.0Hz,1H),7.53-7.55(m,1H),7.45-7.46(m,1H),7.15-7.17(m,2H),7.04-7.08(m,2H),6.83(d,J＝8.0Hz,1H),6.53(s,2H),5.38(s,2H),5.06-5.09(m,1H),4.60(d,J＝6.0Hz,2H),4.47(t,J＝6.0Hz,2H),3.90(t,J＝5.8Hz,2H),2.87-2.93(m,1H),2.60-2.63(m,1H),2.20-2.24(t,J＝5.9Hz,2H),2.02-2.05(m,1H),1.75-1.78(m,1H).13C NMR(125MHz,d6-DMSO):δ＝173.3,170.6,169.2,167.7,165.6,158.1,146.2,144.9,136.6,135.4,132.5,131.8,130.8,130.6,128.8,126.1,123.4,120.5,118.2,118.0,114.9,111.4,110.1,109.7,101.6,65.4,64.9,49.0,47.0,38.1,31.4,29.9,22.6.HRMS(EI)calcd.for[C35H33N8O7](M+H)+:677.2467,found:677.2467.
化合物11c的合成方法参照化合物11a的合成方法，具体为采用化合物10c与化合物3a反应合成，得到的化合物11c为黄色固体(52mg)，收率为50％。
化合物11c的结构式为：
化合物11c的结构表征数据如下：
1H NMR(500MHz,d6-DMSO):δ＝11.11(brs,2H),8.92(brs,1H),8.04(s,1H),7.96(s,1H),7.64(s,1H),7.56-7.59(m,,2H),7.45-7.46(m,1H),7.16-7.18(m,2H),7.05-7.09(m,2H),6.84(d,J＝8.0Hz,1H),6.53(s,1H),5.38(s,2H),5.06-5.09(m,1H),4.59(d,J＝6.0Hz,2H),4.38(t,J＝6.0Hz,2H),3.92(t,J＝5.8Hz,2H),2.90-2.93(m,1H),2.58-2.62(m,1H),2.02-2.06(t,J＝5.9Hz,2H),1.89-1.94(m,2H),1.60-1.65(m,2H).13C NMR(125MHz,d6-DMSO):δ＝173.2,170.5,169.2,167.7,165.7,158.3,146.2,144.9,136.6,135.4,132.6,131.8,130.8,130.3,128.8,126.0,123.3,120.5,118.2,118.1,114.9,111.3,110.1,109.8,101.6,67.1,65.4,49.4,49.0,38.1,27.0,26.1,22.6.HRMS(EI)calcd.for[C36H35N8O7](M+H)+:691.2623,found:691.2625.
化合物11d的合成方法参照化合物11a的合成方法，具体为采用化合物10d与化合物3a反应合成，得到的化合物11d为黄色固体(48mg)，收率为45％。
化合物11d的结构式为：
化合物11d的结构表征数据如下：
1H NMR(500MHz,d6-DMSO):δ＝11.10(brs,2H),8.91(brs,1H),8.02(s,1H),7.96(s,1H),7.63(s,1H),7.55-7.59(m,,2H),7.45-7.46(m,1H),7.15-7.17(m,2H),7.05-7.08(m,2H),6.84(d,J＝8.0Hz,1H),6.53(s,1H),5.38(s,2H),5.06-5.09(m,1H),4.59(d,J＝6.0Hz,2H),4.33(t,J＝6.0Hz,2H),3.88(t,J＝5.8Hz,2H),2.87-2.93(m,1H),2.59-2.63(m,1H),2.02-2.05(m,1H),1.82-1.85(m,2H),1.67-1.69(m,2H),1.31-1.34(m,2H).13C NMR(125MHz,d6-DMSO):δ＝173.2,170.5,169.2,167.7,165.6,158.4,146.2,144.8,136.5,135.4,132.5,131.8,130.8,130.3,128.8,126.0,123.2,120.5,118.2,118.1,114.9,111.3,110.1,109.8,101.5,67.1,65.4,49.6,49.0,38.1,31.4,29.8,28.4,22.9,22.6.HRMS(EI)calcd.for[C37H37N8O7](M+H)+:705.2780,found:705.2783.
化合物11e的合成方法参照化合物11a的合成方法，具体为采用化合物10e与化合物3a反应合成，得到的化合物11e为黄色固体(45mg)，收率为42％。
化合物11e的结构式为：
化合物11e的结构表征数据如下：
1H NMR(500MHz,d6-DMSO):δ＝11.12(brs,2H),8.92(brs,1H),8.02(s,1H),7.96(s,1H),7.64(s,1H),7.56-7.59(m,,2H),7.45-7.46(m,1H),7.15-7.18(m,2H),7.05-7.07(m,2H),6.85(d,J＝8.0Hz,1H),6.52-6.53(m,1H),5.38(s,2H),5.06-5.09(m,1H),4.59(d,J＝6.0Hz,2H),4.31(t,J＝6.0Hz,2H),3.88(t,J＝5.9Hz,2H),2.87-2.93(m,1H),2.58-2.62(m,1H),2.59-2.62(m,2H),2.02-2.05(m,1H),1.78-1.80(m,2H),1.61-1.64(m,2H),1.35-1.39(m,2H).13C NMR(125MHz,d6-DMSO):δ＝173.3,170.5,169.2,167.7,165.6,158.5,146.3,144.8,136.5,135.4,132.5,131.8,130.8,130.2,128.8,126.0,123.2,120.5,118.2,118.1,114.9,111.3,110.1,109.8,101.5,67.1,65.4,49.7,49.0,38.1,31.4,30.0,28.9,26.0,25.3,22.6.HRMS(EI)calcd.for[C38H39N8O7](M+H)+:719.2936,found:719.2938.
化合物11f的合成方法参照化合物11a的合成方法，具体为采用化合物10f与化合物3a反应合成，得到的化合物11f为黄色固体(70mg)，收率为66％。
化合物11f的结构式为：
化合物11f的结构表征数据如下：
1H NMR(500MHz,d6-DMSO):δ＝11.12(brs,2H),8.91(brs,1H),8.02(s,1H),7.99(s,1H),7.96(s,1H),7.62(d,J＝7.8Hz,1H),7.58-7.59(m,,1H),7.54-7.55(m,1H),7.44-7.46(m,1H),7.15-7.18(m,2H),7.04-7.06(m,2H),6.85-6.86(m,2H),6.52(d,J＝8.0Hz,1H),5.38(s,2H),5.06-5.09(m,1H),4.55(d,J＝6.0Hz,2H),4.51(t,J＝6.0Hz,2H),3.98(t,J＝5.9Hz,2H),3.84(t,J＝6.0Hz,2H),3.68(t,J＝5.9Hz,2H),2.87-2.93(m,1H),2.61-2.62(m,2H),2.02-2.05(m,1H).13C NMR(125MHz,d6-DMSO):δ＝173.2,170.5,169.2,167.7,165.7,158.1,146.2,144.8,136.6,135.4,132.5,131.8,130.8,130.5,128.9,126.0,123.7,120.5,118.2,118.0,114.9,111.4,110.1,109.8,101.5,69.2,67.3,65.4,55.4,49.8,49.0,38.0,31.4,22.6.HRMS(EI)calcd.for[C36H35N8O8](M+H)+:707.2572,found:707.2575.
化合物11g的合成方法参照化合物11a的合成方法，具体为采用化合物10g与化合物3a反应合成，得到的化合物11g为黄色固体(57mg)，收率为51％。
化合物11g的结构式为：
化合物11g的结构表征数据如下：
1H NMR(500MHz,d6-DMSO):δ＝11.11(brs,2H),8.91(brs,1H),8.02(s,1H),7.99(s,1H),7.97(s,1H),7.63(d,J＝8.0Hz,1H),7.55-7.59(m,,2H),7.44-7.46(m,1H),7.16(t,J＝7.8Hz,2H),7.04-7.06(m,2H),6.86-6.87(m,2H),6.52(d,J＝8.0Hz,1H),5.38(s,2H),5.05-5.09(m,2H),4.56(d,J＝6.0Hz,2H),4.48(t,J＝6.0Hz,2H),3.99(t,J＝5.9Hz,2H),3.78(t,J＝5.9Hz,2H),3.64(t,J＝6.0Hz,2H),3.49-3.51(m,3H),2.52-2.54(m,1H),2.01-2.04(m,2H).13C NMR(125MHz,d6-DMSO):δ＝173.2,170.5,169.2,167.7,165.6,158.2,146.2,144.7,136.5,135.4,132.5,131.8,130.8,130.4,128.9,126.0,123.7,120.5,118.2,118.1,114.0,111.4,110.1,109.8,101.5,70.1,69.9,69.3,67.5,65.4,49.8,49.0,38.0,31.4,29.8,22.6.HRMS(EI)calcd.for[C38H39N8O9](M+H)+:751.2835,found:751.2836.
化合物11h的合成方法参照化合物11a的合成方法，具体为采用化合物10h与化合物3a反应合成，得到的化合物11h为黄色固体(51mg)，收率为43％。
化合物11h的结构式为：
化合物11h的结构表征数据如下：
1H NMR(500MHz,d6-DMSO):δ＝11.11(brs,2H),8.91(brs,1H),8.02(s,1H),7.99(s,1H),7.97(s,1H),7.64(d,J＝8.0Hz,1H),7.56-7.59(m,2H),7.45-7.46(m,1H),7.17(d,J＝7.8Hz,2H),7.05-7.07(m,2H),6.86-6.87(m,2H),6.52(d,J＝8.0Hz,1H),5.38(s,2H),5.06-5.09(m,1H),4.59(d,J＝6.0Hz,2H),4.47(t,J＝6.0Hz,2H),4.02(t,J＝6.0Hz,2H),3.77(t,J＝5.9Hz,2H),3.68(t,J＝5.9Hz,2H),3.51-3.52(m,2H),3.42-3.48(m,5H),2.86-2.92(m,1H),2.52-2.62(m,2H),2.01-2.05(m,2H).13C NMR(125MHz,d6-DMSO):δ＝173.2,170.5,169.2,167.7,165.6,158.2,146.2,144.8,136.6,135.4,132.5,131.8,130.8,130.4,128.9,126.0,123.7,120.5,118.2,118.1,114.9,111.4,110.1,109.8,101.6,70.3,70.1,70.0,69.9,69.3,69.1,67.5,65.4,49.8,49.1,49.0,38.1,31.4,22.6.HRMS(EI)calcd.for[C40H43N8O10](M+H)+:795.3097,found:795.3098.
化合物11i的合成方法参照化合物11a的合成方法，具体为采用化合物10i与化合物3a反应合成，得到的化合物11i为黄色固体(47mg)，收率为37％。
化合物11i的结构式为：
化合物11i的结构表征数据如下：
1H NMR(500MHz,d6-DMSO):δ＝11.11(brs,2H),8.92(brs,1H),8.00(s,1H),7.97(s,1H),7.64(d,J＝8.0Hz,1H),7.56-7.59(m,2H),7.45-7.46(m,1H),7.17-7.19(m,2H),7.06-7.07(m,2H),6.87-6.89(m,2H),6.52(d,J＝8.0Hz,1H),5.38(s,2H),5.06-5.09(m,1H),4.60(d,J＝6.0Hz,2H),4.48(t,J＝6.0Hz,2H),4.02(t,J＝6.0Hz,2H),3.77(t,J＝6.0Hz,2H),3.69(t,J＝5.9Hz,2H),3.52-3.54(m,2H),3.42-3.50(m,9H),2.87-2.93(m,1H),2.58-2.62(m,2H),2.01-2.05(m,2H).13C NMR(125MHz,d6-DMSO):δ＝173.2,170.5,169.2,167.7,165.6,158.2,146.3,144.8,136.6,135.4,132.5,131.8,130.8,128.9,126.0,123.7,120.5,118.2,118.1,114.9,111.4,110.1,109.8,101.6,70.4,70.3,70.2,70.1,70.0,69.9,69.3,69.1,67.5,65.4,49.8,49.0,38.0,31.5,22.6.HRMS(EI)calcd.for[C42H47N8O11](M+H)+:839.3359,found:839.3362.
化合物11j的合成方法参照化合物11a的合成方法，具体为采用化合物10j与化合物3a反应合成，得到的化合物11j为黄色固体(44mg)，收率为33％。
化合物11j的结构式为：
化合物11j的结构表征数据如下：
1H NMR(500MHz,d6-DMSO):δ＝11.10(brs,2H),8.92(brs,1H),8.00(s,1H),7.98(s,1H),7.64(d,J＝8.0Hz,1H),7.56-7.60(m,2H),7.45-7.46(m,1H),7.18-7.19(m,2H),7.06-7.08(m,2H),6.87-6.90(m,2H),6.54(d,J＝8.0Hz,1H),5.38(s,2H),5.07-5.09(m,1H),4.60(d,J＝6.0Hz,2H),4.50(t,J＝6.0Hz,2H),4.04(t,J＝6.0Hz,2H),3.78(t,J＝6.0Hz,2H),3.70(t,J＝5.9Hz,2H),3.52-3.56(m,2H),3.41-3.50(m,11H),2.88-2.94(m,1H),2.58-2.62(m,2H),2.00-2.05(m,2H).13C NMR(125MHz,d6-DMSO):δ＝173.2,170.5,169.2,167.7,165.6,158.2,146.3,144.8,136.6,135.4,132.5,131.8,130.8,128.9,126.0,123.7,120.5,118.2,118.1,114.9,111.4,110.1,109.8,101.6,70.5,70.4,70.3,70.2,70.1,70.0,69.9,69.8,69.3,69.1,67.5,65.4,49.8,49.0,38.0,31.5,22.6.HRMS(EI)calcd.for[C44H51N8O12](M+H)+:883.3621,found:883.3624.
化合物11k的合成方法参照化合物11a的合成方法，具体为采用化合物10d与化合物3b反应合成，得到的化合物11k为黄色固体(49mg)，收率为45％。
化合物11k的结构式为：
化合物11k的结构表征数据如下：
1H NMR(500MHz,d6-DMSO):δ＝11.11(brs,2H),8.92(brs,1H),7.95-7.96(m,2H),7.63(s,1H),7.57-7.59(m,,2H),7.45-7.46(m,1H),7.16-7.18(m,2H),7.11-7.12(m,1H),7.03(d,J＝8.0Hz,1H),6.84(d,J＝7.8Hz,2H),6.71(t,J＝8.0Hz,1H),6.52-6.53(m,1H),5.38(s,2H),5.04-5.07(m,1H),4.32(t,J＝6.0Hz,2H),3.89(t,J＝6.0Hz,2H),3.59-3.60(m,2H),3.93(t,J＝6.0Hz,2H),2.88-2.90(m,1H),2.79(t,J＝5.8Hz,2H),2.59-2.61(m,1H),2.01-2.03(m,1H),1.80-1.84(m,2H),1.68-1.70(m,2H),1.32-1.35(m,2H).13C NMR(125MHz,d6-DMSO):δ＝173.2,170.6,169.0,167.7,165.6,158.4,146.2,144.6,136.5,135.4,132.6,131.8,130.8,130.4,128.8,126.0,123.2,120.5,118.2,118.0,114.9,111.3,110.0,109.8,101.5,67.2,65.4,49.6,49.0,38.2,31.4,29.8,28.9,28.6,22.9,22.8.HRMS(EI)calcd.for[C38H39N8O7](M+H)+:719.2936,found:719.2940.
化合物11l的合成方法参照化合物11k的合成方法，具体为采用化合物10f与化合物3b反应合成，得到的化合物11l为黄色固体(43mg)，收率为40％。
化合物11l的结构式为：
化合物11l的结构表征数据如下：
1H NMR(500MHz,CDCl3):δ＝11.12(brs,2H),8.91(brs,1H),8.02(s,1H),7.99(s,1H),7.96(s,1H),7.60(d,J＝7.8Hz,1H),7.58-7.59(m,,1H),7.54-7.56(m,1H),7.44-7.46(m,1H),7.16-7.18(m,2H),7.04-7.06(m,2H),6.84-6.85(m,2H),6.52(d,J＝8.0Hz,1H),5.37(s,2H),5.06-5.09(m,1H),4.54(d,J＝6.0Hz,2H),4.50(t,J＝6.0Hz,2H),3.98(t,J＝5.9Hz,2H),3.84(t,J＝6.0Hz,2H),3.68(t,J＝5.9Hz,2H),2.86-2.92(m,1H),2.78(t,J＝5.9Hz,2H),2.60-2.62(m,2H),2.01-2.04(m,1H).13C NMR(125MHz,CDCl3):δ＝173.0,170.5,169.1,167.7,165.8,158.0,146.2,144.8,136.6,135.2,132.6,131.8,130.8,130.6,128.9,126.0,123.8,120.5,118.2,118.0,114.9,111.6,110.1,109.8,101.4,69.2,67.3,65.6,55.5,49.8,49.0,38.2,31.4,24.6,22.6.HRMS(EI)calcd.for[C37H37N8O8](M+H)+:721.2729,found:721.2732.
化合物11a-11l的蛋白降解效率实验
将A549或HCT116细胞种植在96孔板中，每孔含5×104个/100μL，12h后，加入相应剂量的降解剂或DMSO(对照孔)。在培养箱中孵育20h后，每孔加入75μL含8％的甲醛TBS溶液，常温下固定20min。除去溶液，再用200μL/孔的TBST洗涤两次，加入50μL/孔含0.1％的Ttiton PBS溶液，放置15min。除去96孔板中溶液，用TBST 150μL/孔，洗涤两次。然后加入100μL/孔含1％的H2O2TBS溶液，常温下孵育20min。除去溶液，再用适量的TBST洗涤3次。每孔加入50μL封闭液，4℃下孵育过夜。除去封闭液，每孔加入100μL含1:2000稀释的HDAC8抗体封闭液，对照组加入含DMSO的封闭液，常温下孵育2h。再回收HDAC8一抗，用适量的TBST洗涤两次，每孔加入150μL的含HRP标记的兔抗，常温下孵育1h。除去二抗，用TBST洗涤3次。每孔加入100μL预先配置好的TMB底物溶液，避光常温下孵育20min。每孔加入10μL含1N HCl终止液，摇晃5min。在光密度计上测试记录450和570nm的吸光度值并计算HDAC8蛋白相对含量。
测试结果如表1和表2所示。
表1：A549细胞降解效率
表2：HCT116细胞降解效率
根据表1和表2的测试结果可得，本发明提供的化合物11a-11l，能够以浓度依赖性地降解细胞中的去乙酰化酶8。
化合物11a-11l的蛋白降解实验
A549细胞用上述合成化合物处理后，在冰浴下加入RIPA裂解30分钟后，加入蛋白酶降解剂，用BCA试剂盒定量测试蛋白浓度。取等量的蛋白用10-12％的聚丙烯酰胺跑电泳，蛋白条带用PVDF膜转膜后，用5％的脱脂牛奶封闭1h。目的条带在4℃下用一抗封闭12h，洗涤后再用二抗在常温下孵育1h，加入免疫荧光底物后迅速化学荧光成像。测试结果如图1所示。
根据图1的测试结果显示，部分化合物11c、11f、11h能够以浓度依赖性地显著选择性降解肿瘤细胞中的去乙酰化酶8，而其它类型的去乙酰化酶如HDAC1、HDAC2、HDAC3、HDAC6和Sirt7蛋白基本不受影响。
免疫荧光实验
往A549和HCT116细胞分别加入化合物11f(浓度为0μM、0.5μM、1μM、2μM、4μM和8μM)，孵育20h后，先后用2％的细胞固定液固定和0.1％Triton X-100通透20分钟。用PBS洗涤3次，加入适量的HDAC8、γ-H2AX一抗，在4℃下孵育12h。再用PBS洗涤后加入荧光二抗(Alexa Fluor 488/594/647)，常温下避光孵育1h。PBS洗涤后，加入适量的0.5ng/mL DAPI，继续孵育10分钟。样品在荧光显微镜下观察拍照，结果如图2和图3所示(图2和图3中，从左到右的浓度依次为0μM、0.5μM、1μM、2μM、4μM和8μM)。
根据图2和图3的结果显示，化合物11f同样以浓度依赖的方法显著降解肿瘤细胞中的HDAC8。
细胞增殖实验
在96孔板中每孔铺5000-10000个细胞/孔，次日加入梯度浓度的降解剂，继续孵育3天，用CCK-8试剂盒测试记录波长450nm的吸光度，用GraphPad Prism 8软件处理得到相应化合物11c、11f、11h的IC50，分别为：7.11μM、9.55μM和12.52μM。
细胞克隆实验
在6孔板中铺800个/孔A549和HCT116细胞，培养12小时后，每孔加入相应浓度的降解剂(化合物11f和pcl-34051)；继续孵育7-10天，期间每隔3天换一次培养基。然后细胞固定后，用结晶紫染色，用ImageJ软件统计分析，实验结果如图4所示。
根据图4的结果显示，本发明提供的降解剂11f能够以浓度依赖的方式影响肿瘤细胞的克隆形成。
细胞凋亡实验
A549细胞用降解剂11f处理后，根据试剂盒说明，用Annexin V Alexa Fluor 488和propidium iodide(PI)染色10分钟，在流式细胞仪上分析凋亡情况。实验结果如图5和图6所示。
根据图5-图6的结果显示，降解剂11f能够诱导A549细胞在浓度5μM-20μM范围内发生凋亡。
小鼠移植瘤模型实验
将5x106个A549细胞与50％的基质胶通过皮下注射方式在免疫缺陷型小鼠的右腹部，当肿瘤体积达到150mm2时，随机将小鼠分为四组，每组5只。给药物组和空白组按照剂量给药，每隔5天注射一次，辐照组在给药20h后，辐照剂量为3G。每天监测小鼠生长状况，每周称重和测量肿瘤体积一次，记录对应质量和肿瘤体积。实验结果如图7所示。
在连续监测3周后，小鼠安乐死后，取出肿瘤组织，用甲醛处理，编号保存。去部分肿瘤组织，用液氮研磨，PIPA裂解，进行Western blots分析。另外，取部分肿瘤组织用4％聚甲醛固定24h，脱水干燥，石蜡包埋。切片用HE或相应的HDAC8、γ-H2AX等抗体进行免疫组织染色。用数字切片扫描仪NanoZoomer S60进行测试，测试结果如图8所示。
根据图7和图8的测试结果可得，化合物11f能显著抑制肿瘤的增长。
综上所述，本发明提供的组蛋白去乙酰化酶8选择性降解剂能够以浓度依赖性的显著选择性降解肿瘤细胞中的去乙酰化酶8，而不影响其他其它类型的去乙酰化酶，提示其在制备预防或治疗与HDAC8活性或表达异常相关疾病药物，尤其是抗肿瘤活性药物方面的价值。
以上对本发明实施例所提供的技术方案进行了详细介绍，本文中应用了具体个例对本发明实施例的原理以及实施方式进行了阐述，以上实施例的说明只适用于帮助理解本发明实施例的原理；同时，对于本领域的一般技术人员，依据本发明实施例，在具体实施方式以及应用范围上均会有改变之处，综上所述，本说明书内容不应理解为对本发明的限制。
Claims (10)
1.一种组蛋白去乙酰化酶8选择性降解剂，其特征在于，具有式11c、11f、11h所示的至少一化合物或其药学上可接受的盐：
2.如权利要求1所述的组蛋白去乙酰化酶8选择性降解剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)将化合物1和化合物2a或2b溶于有机溶剂中，加入N,N-二异丙基乙胺，反应生成化合物3a或3b；
(2)将化合物4和化合物5分别溶于有机溶剂中得到第一溶液和第二溶液，往第一溶液中加入NaH进行反应得到反应液，然后将第二溶液滴加至反应液中继续进行反应，得到化合物6；
(3)将化合物6溶于甲醇溶液中，加入Pd/C反应得到化合物7；
(4)将化合物7溶于无水乙腈中，分别加入1,2-二溴丙烷、1,3-二溴丙烷、1,4-二溴丁烷、1,5-二溴戊烷、1,6-二溴己烷、1-溴-2-(2-溴乙氧基)乙烷、1,2-双(2-溴乙氧基)乙烷、1-溴-2-(2-(2-溴乙氧基)乙氧基)乙烷、1,14-二溴-3,6,9,12-四氧代十四烷或1,17-二溴-3,6,9,12,15-五氧代十七烷，反应得到化合物8a-8j；
(5)将化合物8a-8j分别与叠氮钠溶于有机溶剂中，反应得到化合物9a-9j；
(6)取NH2OH溶液冷却，加入碱试剂，搅拌溶解得到羟胺溶液；将化合物9a-9j分别溶于MeOH/THF溶液中，再加入羟胺溶液中，反应中加入酸试剂中和，得到化合物10a-10j；
(7)将化合物10a-10j分别与化合物3a溶于异丁醇/N,N-二甲基乙酰基胺/水溶液中，在惰性气体气氛下，依次加入硫酸铜、三[(1-苄基-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲基]胺和维生素C钠，反应得到化合物11a-11j；
将化合物10d和化合物10f分别与化合物3b溶于异丁醇/N,N-二甲基乙酰基胺/水溶液中，在惰性气体气氛下，依次加入硫酸铜、三[(1-苄基-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲基]胺和维生素C钠，反应得到化合物11k和11l；
其中，步骤(1)的合成路线如下所示：
步骤(2)-(7)的合成路线如下所示：
其中，X为1～4的整数，m为0～4的整数，n为1～5的整数。
3.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述有机溶剂为N,N-二甲基乙酰基胺。
4.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)中，还包括以下步骤：
得到反应液后，反应液用乙酸乙酯萃取，有机相用饱和食盐水洗涤3～5次，合并有机相并浓缩，浓缩后通过硅胶柱分离纯化得化合物3a和3b。
5.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(6)中，所述碱试剂为氢氧化钠，所述酸试剂为醋酸。
6.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤(6)中，所述MeOH/THF溶液中MeOH和THF的体积比为1:1。
7.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤(7)中，所述异丁醇/N,N-二甲基乙酰基胺/水溶液中异丁醇、N,N-二甲基乙酰基胺与水的体积比为1:2:0.5；所述惰性气体为氮气。
8.一种药物组合物，其特征在于，所述药物组合物包括如权利要求1所述的组蛋白去乙酰化酶8选择性降解剂。
9.如权利要求8所述的药物组合物，其特征在于，所述药物组合物还包括药学上可接受的载体和/或辅剂。
10.如权利要求1所述的组蛋白去乙酰化酶8选择性降解剂、如权利要求8所述的药物组合物在制备用于预防或治疗与HDAC8活性或表达异常相关疾病的药物中的应用。
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