CN114384179A - 一种利用高效液相紫外法同时定量检测月桂酰基甲基牛磺酸钠中牛磺酸和甲基牛磺酸的方法 - Google Patents
一种利用高效液相紫外法同时定量检测月桂酰基甲基牛磺酸钠中牛磺酸和甲基牛磺酸的方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN114384179A CN114384179A CN202111672348.1A CN202111672348A CN114384179A CN 114384179 A CN114384179 A CN 114384179A CN 202111672348 A CN202111672348 A CN 202111672348A CN 114384179 A CN114384179 A CN 114384179A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- taurine
- methyltaurine
- mobile phase
- high performance
- performance liquid
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- XOAAWQZATWQOTB-UHFFFAOYSA-N taurine Chemical compound NCCS(O)(=O)=O XOAAWQZATWQOTB-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 112
- 229960003080 taurine Drugs 0.000 title claims abstract description 56
- SUZRRICLUFMAQD-UHFFFAOYSA-N N-Methyltaurine Chemical compound CNCCS(O)(=O)=O SUZRRICLUFMAQD-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 53
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 41
- 239000007788 liquid Substances 0.000 title claims abstract description 21
- 125000000400 lauroyl group Chemical group O=C([*])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 title claims abstract description 6
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims abstract description 26
- DABQDIXIAXPQFG-UHFFFAOYSA-N 2-[dodecanoyl(methyl)amino]ethanesulfonic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCC(=O)N(C)CCS(O)(=O)=O DABQDIXIAXPQFG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 19
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 42
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 30
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 23
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 22
- 239000012071 phase Substances 0.000 claims description 22
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 claims description 19
- CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L Sodium Carbonate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C([O-])=O CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 16
- 229910000147 aluminium phosphate Inorganic materials 0.000 claims description 11
- 230000001502 supplementing effect Effects 0.000 claims description 11
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 claims description 10
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 10
- VOLRSQPSJGXRNJ-UHFFFAOYSA-N 4-nitrobenzyl bromide Chemical compound [O-][N+](=O)C1=CC=C(CBr)C=C1 VOLRSQPSJGXRNJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 229910000029 sodium carbonate Inorganic materials 0.000 claims description 8
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 7
- 238000005303 weighing Methods 0.000 claims description 7
- 238000012417 linear regression Methods 0.000 claims description 6
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 6
- 238000009210 therapy by ultrasound Methods 0.000 claims description 6
- 238000000825 ultraviolet detection Methods 0.000 claims description 6
- 238000001212 derivatisation Methods 0.000 claims description 5
- 238000010828 elution Methods 0.000 claims description 4
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims description 4
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 4
- 238000002347 injection Methods 0.000 claims description 3
- 239000007924 injection Substances 0.000 claims description 3
- 239000007791 liquid phase Substances 0.000 claims description 3
- 239000000945 filler Substances 0.000 claims description 2
- 239000002245 particle Substances 0.000 claims description 2
- 238000002211 ultraviolet spectrum Methods 0.000 abstract description 7
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 15
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 9
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 5
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 4
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 4
- 239000013076 target substance Substances 0.000 description 4
- 238000009795 derivation Methods 0.000 description 3
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 3
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- SZCFGVHVAMAMQP-UHFFFAOYSA-N C(CCCCCCCCCCC)(=O)C[Na] Chemical compound C(CCCCCCCCCCC)(=O)C[Na] SZCFGVHVAMAMQP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 2
- 239000003945 anionic surfactant Substances 0.000 description 2
- 239000012459 cleaning agent Substances 0.000 description 2
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 2
- 238000000105 evaporative light scattering detection Methods 0.000 description 2
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 2
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 239000013558 reference substance Substances 0.000 description 2
- 229940104256 sodium taurate Drugs 0.000 description 2
- 238000012430 stability testing Methods 0.000 description 2
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 2
- 238000004885 tandem mass spectrometry Methods 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- GFOBSZSXQKGNMN-UHFFFAOYSA-N 2-[dodecanoyl(methyl)amino]ethanesulfonic acid;sodium Chemical compound [Na].CCCCCCCCCCCC(=O)N(C)CCS(O)(=O)=O GFOBSZSXQKGNMN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 206010037660 Pyrexia Diseases 0.000 description 1
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000002280 amphoteric surfactant Substances 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 125000000129 anionic group Chemical group 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 1
- 238000012937 correction Methods 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 1
- 239000012483 derivatization solution Substances 0.000 description 1
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 1
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 1
- 238000010812 external standard method Methods 0.000 description 1
- 239000006260 foam Substances 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 235000020510 functional beverage Nutrition 0.000 description 1
- 235000020604 functional milk Nutrition 0.000 description 1
- 239000008233 hard water Substances 0.000 description 1
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 231100000053 low toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 1
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002736 nonionic surfactant Substances 0.000 description 1
- 238000005457 optimization Methods 0.000 description 1
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 1
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 1
- 230000035790 physiological processes and functions Effects 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 150000003254 radicals Chemical class 0.000 description 1
- 238000012827 research and development Methods 0.000 description 1
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 1
- BDHFUVZGWQCTTF-UHFFFAOYSA-M sulfonate Chemical compound [O-]S(=O)=O BDHFUVZGWQCTTF-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 125000000542 sulfonic acid group Chemical group 0.000 description 1
- 238000004448 titration Methods 0.000 description 1
- 238000011144 upstream manufacturing Methods 0.000 description 1
- 210000001835 viscera Anatomy 0.000 description 1
- 230000004382 visual function Effects 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
- G01N30/04—Preparation or injection of sample to be analysed
- G01N30/06—Preparation
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
- G01N30/62—Detectors specially adapted therefor
- G01N30/74—Optical detectors
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
- G01N2030/022—Column chromatography characterised by the kind of separation mechanism
- G01N2030/027—Liquid chromatography
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
- G01N30/04—Preparation or injection of sample to be analysed
- G01N30/06—Preparation
- G01N2030/067—Preparation by reaction, e.g. derivatising the sample
Abstract
本发明属于检测领域，公开了一种利用高效液相紫外法同时定量检测月桂酰基甲基牛磺酸钠中牛磺酸和甲基牛磺酸的方法。该方法包括以下步骤：用甲基牛磺酸和牛磺酸标准品制备系列标准品样品；将标准品样品进行紫外光谱检测，得到牛磺酸和甲基牛磺酸的峰面积；分别以甲基牛磺酸和牛磺酸浓度为横坐标，各自的峰面积为纵坐标，得到两个线性方程；将月桂酰基甲基牛磺酸钠制得待测样品；将待测样品进行紫外光谱检测，得到牛磺酸和甲基牛磺酸的峰面积；分别代入线性方程中，计算得出甲基牛磺酸和牛磺酸的浓度，在0‑10mg/ml浓度范围内线性良好(r>0.999)；准确度和重复性均良好；溶液放置24小时及48小时均很稳定。
Description
技术领域
本发明属于检测领域，具体涉及一种利用高效液相紫外法同时定量检测月桂酰基甲基牛磺酸钠中牛磺酸和甲基牛磺酸的方法。
背景技术
牛磺酸和甲基牛磺酸，均易溶于水，性质稳定，普遍存在于人及哺乳动物的脏器中，是最重要的氨基酸之一，具有特殊的药理作用和生理功能，可消炎，镇痛，解热，降血糖，维持正常的视觉机能，牛磺酸还具有增强细胞抗氧化、抗自由基损伤及抗病毒损伤的能力，对提高免疫力具有重要作用。
月桂酰基甲基牛磺酸钠具有磺酸集团，与阴离子、非离子以及两性表面活性剂都具有良好地配伍性，易溶于水，泡沫丰富细腻且耐硬水性好，是一种性能优良、安全性高的阴离子表面活性剂。pH值与人体皮肤接近，呈弱酸性，用于清洁皮肤具有良好的覅干且低毒无刺激，因此用于个人洗护用品中效果十分优异。
现有检测方法中，并没有同时检测甲基牛磺酸和牛磺酸的方法。对于牛磺酸的检测多在食品领域，比如检测功能饮料和奶粉中的牛磺酸。检测方法分为化学法和仪器法。化学法有氮测定法，主要用于含酸制剂检测中，用于克服碱性物质用量增加带来的滴定不准确等问题；仪器法使用的方法更多样，有示差折光检测器、ELSD检测器检测、高效液相色谱串联质谱检测、离子色谱检测和磁共振核自旋单态选择性检测，仪器法对人员条件要求高，操作难度大，且无法满足同时定量甲基牛磺酸和牛磺酸的要求。
月桂酰基甲基牛磺酸钠产品及其他相关的生产工艺中，牛磺酸反应不完全，易残留，开发牛磺酸和甲基牛磺酸含量同时检测的方法，对月桂酰基甲基牛磺酸钠类产品生产工艺提高目标产物量，具有指导性意义。
发明内容
为了克服现有技术中存在的缺点与不足，本发明的目的在于提供一种利用高效液相紫外法同时定量检测月桂酰基甲基牛磺酸钠中牛磺酸和甲基牛磺酸的方法。
本发明的目的通过下述技术方案实现：
一种利用高效液相紫外法同时定量检测月桂酰基甲基牛磺酸钠中牛磺酸和甲基牛磺酸的方法，包括以下操作步骤：
(1)称取0.1g甲基牛磺酸标准品和0.1g牛磺酸标准品，一起溶于蒸馏水中，定容至100ml，得到储备液；分别量取0.50mL、1.00mL、2.00mL、4.00mL和8.00mL的储备液，用蒸馏水分别补齐到10ml，加入1ml质量浓度5％的碳酸钠，滴加入1.5ml质量浓度1％的4-硝基溴化苄，边滴边晃动瓶身使充分反应，分别置于55℃的水浴锅中水浴1-3小时，反应结束后，添加0.5ml质量浓度10％磷酸终止反应，蒸馏水定容至50ml，超声去除气泡，用针头过滤器过滤得到一系列标准品样品；
(2)将步骤(1)所得标准品样品进样到高效液相色谱仪中进行高效液相紫外检测，得到牛磺酸和甲基牛磺酸的峰面积；以甲基牛磺酸浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，进行线性回归，得线性方程1为：y＝75.973x–2.727，，相关系数R2＝0.9974；以牛磺酸浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，进行线性回归，得线性方程2为：y＝30.524x–2.868，相关系数R2＝0.9998；
(3)称取0.1-0.2g(精确到0.1mg)月桂酰基甲基牛磺酸钠，置于100ml容量瓶，用蒸馏水补齐10ml，添加10ml乙腈和1ml质量浓度5％的碳酸钠，滴加1ml 4-硝基溴化苄，边滴边晃动瓶身使充分反应，置于55℃的水浴锅中水浴1-3小时，进行衍生化反应；反应结束后，加入0.5ml质量浓度10％磷酸溶液终止反应，再加蒸馏水定容至100ml，超声去除气泡，用针头过滤器过滤得到待测样品；
(4)将步骤(3)所得待测样品进样到高效液相色谱仪中进行高效液相紫外检测，得到牛磺酸和甲基牛磺酸的峰面积；将所得甲基牛磺酸的峰面积代入步骤(2)所述线性方程1中，计算得出甲基牛磺酸的浓度；将所得牛磺酸的峰面积代入步骤(2)所述线性方程2中，计算得出牛磺酸的浓度。
步骤(1)和步骤(3)所述超声的时间为1分钟。
步骤(2)和步骤(4)所述高效液相紫外检测的条件如下：色谱柱选用Agilent SB-C8，检测波长设置为260nm，进样量为20μL；流动相A为乙腈，流动相B为体积比100：898：2的乙腈、水和磷酸混合物，流速：1.0mL/min。
所述色谱柱的柱温为30℃，色谱柱长度250mm，色谱柱内径为4.6mm，色谱柱填料颗粒直径为5μm。
所述流动相A和流动相B在洗脱过程中的体积配比为：先用体积比0:100的流动相A和流动相B洗脱6min，再用体积比70:30的流动相A和流动相B洗脱12min，接着用体积比70:30的流动相A和流动相B洗脱16min。
本发明相对于现有技术具有如下的优点及有益效果：
(1)本发明能够同时检测产品中的甲基牛磺酸和牛磺酸含量，比于现有的单独甲基牛磺酸和单独检测牛磺酸检测方法效率高；解决了现有单独检测牛磺酸(或甲基牛磺酸)的方法混杂甲基牛磺酸(或牛磺酸)的问题，提高了精确度，为上游产品研发工艺优化提供思路。
(2)本发明采用4-硝基溴化苄作为衍生剂，将甲基牛磺酸与牛磺酸分别衍生化，经过液相达到分离检测的目的，与现有的示差检测器、ELSD检测器、高效液相色谱串联质谱检测、离子色谱检测和磁共振核自旋单态选择性检测相比，该方法操作要求不高，条件易满足；
(3)本发明人发现，衍生化的反应温度影响色谱图的分离效果，随着温度的升高，分离度越高。达到峰值后，分离度又降低，本发明设置不同梯度的反应温度，进行分批反应，待进样到高效液相色谱仪中检测分离度，得出甲基牛磺酸和牛磺酸的衍生温度确定为55℃；
(4)本发明牛磺酸和甲基牛磺酸在0-10mg/ml浓度范围内线性良好(r>0.999)；加标回收率处于在95-105％之间，准确度良好；进样6次的结果RSD<3％，重复性良好；溶液放置24小时及48小时均很稳定；
(5)本发明方法能够通过柱前衍生得到两种稳定的甲基牛磺酸和牛磺酸衍生产物，通过紫外光谱检测进行分离，利用已建立的校正模型，能快速且同时得到月桂酰基甲基牛磺酸钠产品中的牛磺酸和甲基牛磺酸的含量。
附图说明
图1为衍生反应温度对牛磺酸和甲基牛磺酸分离度的影响；
图2为月桂酰基甲基牛磺酸钠的色谱图；
图3为牛磺酸的标准曲线；
图4为甲基牛磺酸的标准曲线。
具体实施方式
下面结合实施例及附图对本发明作进一步详细的描述，但本发明的实施方式不限于此。
以下所有实施例中使用高效液相色谱仪进行分析的方法和条件如下：
流动相A：乙腈；流动相B：乙腈：磷酸：水＝100：2：898
梯度洗脱程序如表1：
表1梯度洗脱程序
色谱柱选用Agilent ZORBAX SB-C8，检测波长设置为260nm，色谱柱的柱温为30℃，进样量为20μL。
实施例1-10：
本发明人发现月桂酰基甲基牛磺酸钠的前处理过程中的衍生环境温度与其中甲基牛磺酸和牛磺酸的分离度R有紧密关系。于是设置梯度水浴温度，检测甲基牛磺酸和牛磺酸的分离度，具体为：
取10支50ml容量瓶，称取10份月桂酰基甲基牛磺酸钠0.2g(精确到0.01mg)分别置于容量瓶中，均用蒸馏水补齐到10ml，加入1ml质量浓度5％的碳酸钠，滴加入1.5ml质量浓度1％的4-溴化苄，边滴边晃动瓶身使充分反应，分别置于35℃、40℃、45℃、50℃、55℃、60℃、65℃、70℃、75℃、80℃的水浴锅中水浴1小时，反应结束后，将容量瓶取出，添加0.5ml质量浓度10％的磷酸终止反应，蒸馏水补齐到刻度线，超声1分钟，去除气泡；用针头过滤器过滤到样品瓶中。进样到高效液相色谱仪中进行紫外光谱检测，根据检测结构计算分离度：
分离度(R)的计算公式为：
式中：t(R2)为相邻两峰中后一峰的保留时间；
t(R1)为相邻两峰中前一峰的保留时间；
W1及W2为此相邻两峰的峰底宽。
以水浴温度为横坐标，分离度R为纵坐标，结果如图1所示，基于表2及图1，甲基牛磺酸和牛磺酸的分离度随温度的升高而变大，到达峰值后，随着温度的升高反而下降。当温度为55℃时，R>1.5，分离效果好。因此，甲基牛磺酸和牛磺酸的衍生温度确定为55℃。分离后的月桂酰基甲基牛磺酸钠的液相色谱图如图2所示。
表2水浴温度和分离度
对比例1-5：
称取0.1g甲基牛磺酸和0.1g牛磺酸标准品于100ml容量瓶中，蒸馏水稀释到刻度线，作为储备液(1000mg/mL)备用；分别量取0.50mL、1.00mL、2.00mL、4.00mL和8.00mL的储备液于5个的50ml容量瓶中，用蒸馏水补齐到10ml，加入1ml质量浓度5％的碳酸钠，滴加入1.5ml质量浓度1％的4-硝基溴化苄，边滴边晃动瓶身使充分反应，分别置于55℃的水浴锅中水浴1小时，反应结束后，将容量瓶取出，添加0.5ml质量浓度10％的磷酸终止反应，蒸馏水补齐到刻度线，超声1分钟，去除气泡；用针头过滤器过滤到样品瓶中。进样到高效液相色谱仪中进行紫外光谱检测，得到甲基牛磺酸和牛磺酸的峰面积，如表3所示：
表3检测甲基牛磺酸和牛磺酸的峰面积
以甲基牛磺酸浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，进行线性回归，得线性方程1为：y＝75.973x–2.727，相关系数R2＝0.9974，如图3所示；以牛磺酸浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，进行线性回归，得线性方程2为：y＝30.524x–2.868，相关系数R2＝0.9998，如图4所示；结果表明甲基牛磺酸在1.0-8.5mg/ml浓度范围内线性良好；牛磺酸在1.0-8.5mg/ml浓度范围内线性良好。
对比例6-8：
精确称取3份月桂酰基甲基牛磺酸钠，重量见表4(精确到0.01mg)，分别置于50ml容量瓶中，用蒸馏水补齐到10ml，加入1ml质量浓度5％的碳酸钠，滴加入1.5ml质量浓度1％的4-硝基溴化苄，边滴边晃动瓶身，使充分反应，分别置于55℃的水浴锅中水浴1小时，反应结束后，将容量瓶取出，添加0.5ml质量浓度10％的磷酸终止反应，蒸馏水补齐到刻度线，超声1分钟，去除气泡；用针头过滤器过滤到样品瓶中。将所得样品进样到高效液相色谱仪中进行紫外光谱检测，得到甲基牛磺酸和牛磺酸的峰面积，分别代入上述对比例1-5中得到的线性方程1和线性方程2中，计算得出各样品中甲基牛磺酸和牛磺酸，即为对比例6-8含有的目标物质的含量，记作A值。
实施例11-13：准确度实验
精确称取3份月桂酰基甲基牛磺酸钠，重量见表4(精确到0.01mg)，分别置于50ml容量瓶中，取对比例1-5中配制的储备液(1000mg/mL)作为对照品(已知浓度)，分别加入1mL、2ml、4ml，用蒸馏水补齐到10ml，加入1ml质量浓度5％的碳酸钠，滴加入1.5ml质量浓度1％的4-硝基溴化苄，边滴边晃动瓶身，使充分反应，分别置于55℃的水浴锅中水浴1小时，反应结束后，将容量瓶取出，添加0.5ml质量浓度10％的磷酸终止反应，蒸馏水补齐到刻度线，超声1分钟，去除气泡。用针头过滤器过滤到样品瓶中。将所得样品进样到高效液相色谱仪中进行紫外光谱检测，得到甲基牛磺酸和牛磺酸的峰面积，分别代入上述对比例1-5中得到的线性方程1和线性方程2中，计算得出样品中甲基牛磺酸和牛磺酸，即为实施例11-13中含有的目标物质的含量，记作C值。
在含量测定色谱条件下，进样20μL，记录峰面积，用外标法计算。
式中：A为对比例中含有的目标物质的含量；
B为加入的对照品的量,计算可得；
C为实施例中含有的目标物质的含量。
每个浓度各平行配制三份，做三组平行实验。按含量测定项下分别测定回收率，结果如下表4：
表4准确度实验结果
m代表牛磺酸
n代表甲基牛磺酸
表4结果表明：从三个平行组实验的平均回收率以及综合RSD来看，回收率处于95％-105％之间，且RSD<3％，表明准确度良好。
实施例14-19：精密度实验
取上述对比例6的月桂酰基甲基牛磺酸钠溶液，连续进样6次，记录主成分峰面积的精密度如下表5。
表5精密度实验结果
表5结果表明：本发明的检测方法精密度良好
实施例20-24：溶液稳定性检测
取上述对比例6的月桂酰基甲基牛磺酸钠溶液，分别在常温下4、8、12、24、48小时，进样，记录主成分的峰面积变化，结果如下表6：
表6溶液稳定性检测结果
表6结果表明：本发明的检测方法常温下48小时内衍生化溶液稳定性良好。
上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。
Claims (5)
1.一种利用高效液相紫外法同时定量检测月桂酰基甲基牛磺酸钠中牛磺酸和甲基牛磺酸的方法，其特征在于包括以下操作步骤：
(1)称取0.1g甲基牛磺酸标准品和0.1g牛磺酸标准品，一起溶于蒸馏水中，定容至100ml，得到储备液；分别量取0.50mL、1.00mL、2.00mL、4.00mL和8.00mL的储备液，用蒸馏水分别补齐到10ml，加入1ml质量浓度5％的碳酸钠，滴加入1.5ml质量浓度1％的4-硝基溴化苄，边滴边晃动瓶身使充分反应，分别置于55℃的水浴锅中水浴1-3小时，反应结束后，添加0.5ml质量浓度10％磷酸终止反应，蒸馏水定容至50ml，超声去除气泡，用针头过滤器过滤得到一系列标准品样品；
(2)将步骤(1)所得标准品样品进样到高效液相色谱仪中进行高效液相紫外检测，得到牛磺酸和甲基牛磺酸的峰面积；以甲基牛磺酸浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，进行线性回归，得线性方程1为：y＝75.973x–2.727，，相关系数R2＝0.9974；以牛磺酸浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，进行线性回归，得线性方程2为：y＝30.524x–2.868，相关系数R2＝0.9998；
(3)称取0.1-0.2g(精确到0.1mg)月桂酰基甲基牛磺酸钠，置于100ml容量瓶，用蒸馏水补齐10ml，添加10ml乙腈和1ml质量浓度5％的碳酸钠，滴加1ml 4-硝基溴化苄，边滴边晃动瓶身使充分反应，置于55℃的水浴锅中水浴1-3小时，进行衍生化反应；反应结束后，加入0.5ml质量浓度10％磷酸溶液终止反应，再加蒸馏水定容至100ml，超声去除气泡，用针头过滤器过滤得到待测样品；
(4)将步骤(3)所得待测样品进样到高效液相色谱仪中进行高效液相紫外检测，得到牛磺酸和甲基牛磺酸的峰面积；将所得甲基牛磺酸的峰面积代入步骤(2)所述线性方程1中，计算得出甲基牛磺酸的浓度；将所得牛磺酸的峰面积代入步骤(2)所述线性方程2中，计算得出牛磺酸的浓度。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤(1)和步骤(3)所述超声的时间为1分钟。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤(2)和步骤(4)所述高效液相紫外检测的条件如下：色谱柱选用Agilent SB-C8，检测波长设置为260nm，进样量为20μL；流动相A为乙腈，流动相B为体积比100：900：2的乙腈、水和浓磷酸混合物，流速：1.0mL/min。
4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于：所述色谱柱的柱温为30℃，色谱柱长度250mm，色谱柱内径为4.6mm，色谱柱填料颗粒直径为5μm。
5.根据权利要求3所述的方法，其特征在于：所述流动相A和流动相B在洗脱过程中的体积配比为：先用体积比0:100的流动相A和流动相B洗脱6min，再用体积比70:30的流动相A和流动相B洗脱12min，接着用体积比70:30的流动相A和流动相B洗脱16min。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202111672348.1A CN114384179A (zh) | 2021-12-31 | 2021-12-31 | 一种利用高效液相紫外法同时定量检测月桂酰基甲基牛磺酸钠中牛磺酸和甲基牛磺酸的方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202111672348.1A CN114384179A (zh) | 2021-12-31 | 2021-12-31 | 一种利用高效液相紫外法同时定量检测月桂酰基甲基牛磺酸钠中牛磺酸和甲基牛磺酸的方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN114384179A true CN114384179A (zh) | 2022-04-22 |
Family
ID=81199275
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202111672348.1A Pending CN114384179A (zh) | 2021-12-31 | 2021-12-31 | 一种利用高效液相紫外法同时定量检测月桂酰基甲基牛磺酸钠中牛磺酸和甲基牛磺酸的方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN114384179A (zh) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN115754041A (zh) * | 2022-11-01 | 2023-03-07 | 珠海溪谷医疗科技有限公司 | 一种洗眼液中护眼物质牛磺酸的检测方法及检测试剂盒 |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN106596768A (zh) * | 2016-12-13 | 2017-04-26 | 广州天赐高新材料股份有限公司 | 氨基酸类表面活性剂中脂肪酸残留的液相检测方法 |
-
2021
- 2021-12-31 CN CN202111672348.1A patent/CN114384179A/zh active Pending
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN106596768A (zh) * | 2016-12-13 | 2017-04-26 | 广州天赐高新材料股份有限公司 | 氨基酸类表面活性剂中脂肪酸残留的液相检测方法 |
Non-Patent Citations (4)
| Title |
|---|
| ANITHA POLICE 等: "RP-HPLC method for simultaneous estimation of vigabatrin, gammaaminobutyric acid and taurine in biological samples", JOURNAL OF CHROMATOGRAPHY B, vol. 1076 * |
| RIKA SATOH 等: "N-Methyltaurine N-acyl amidated bile acids and deoxycholic acid in the bile of angelfish (Pomacanthidae): A novel bile acid profile in Perciform fish", STEROIDS, vol. 80 * |
| 陈瑞瑾;: "柱前衍生高效液相色谱法测定通络下乳口服液中牛磺酸的含量", 中国民族民间医药, no. 12 * |
| 陈瑞瑾;: "柱前衍生高效液相色谱法测定通络下乳口服液中牛磺酸的含量", 中国民族民间医药, no. 12, 30 June 2012 (2012-06-30) * |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN115754041A (zh) * | 2022-11-01 | 2023-03-07 | 珠海溪谷医疗科技有限公司 | 一种洗眼液中护眼物质牛磺酸的检测方法及检测试剂盒 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN102707005B (zh) | 水样中三价铁和二价铁的同时在线分析方法 | |
| CN102230921A (zh) | 一种高效液相色谱法对食品中γ-氨基丁酸含量的测定方法 | |
| CN110031573B (zh) | 二维柱切换高效液相色谱法测定维生素d含量的方法 | |
| CN104597160A (zh) | 一种同时测定半夏中6种有机酸含量的hplc方法 | |
| CN107561172B (zh) | 一种同时检测营养素软胶囊中多种维生素含量的方法 | |
| CN114384179A (zh) | 一种利用高效液相紫外法同时定量检测月桂酰基甲基牛磺酸钠中牛磺酸和甲基牛磺酸的方法 | |
| CN108845062B (zh) | 测定复方虎杖氨敏片组分含量的高效液相色谱法 | |
| CN106596795B (zh) | 一种测定硫辛酸注射液中乙二胺含量的方法 | |
| CN110441421A (zh) | 一种高效液相色谱法测定恩他卡朋片溶出度的方法 | |
| CN113325118B (zh) | 一种测定帕瑞昔布钠中钠含量的方法 | |
| CN103901147B (zh) | 一种穿心莲内酯滴丸溶出度的测定方法 | |
| CN109030668B (zh) | 钆塞酸二钠中间体的高效液相分析方法 | |
| CN114137120A (zh) | 一种雷帕霉素药物支架中有关物质的检测方法 | |
| CN111208214B (zh) | 液相法检测药物制剂中吐温含量的方法 | |
| CN108037221B (zh) | 用液相色谱法同时分离测定复方氨基酸注射液18aa中蛋氨酸亚砜和蛋氨酸砜杂质的方法 | |
| CN102393424A (zh) | 橡胶硫化促进剂n-环己基-2-苯并噻唑次磺酰胺纯度的分析方法 | |
| CN112697934A (zh) | 一种复方氨基酸注射液中焦谷氨酸含量的检测方法 | |
| CN114965790B (zh) | 一种赖氨葡锌颗粒中氨基酸杂质的液相检测方法 | |
| CN111398443A (zh) | 一种他氟前列素滴眼液中乙二胺四乙酸二钠的测定方法 | |
| CN109765311A (zh) | 一种碳酸氢钠注射液中乙二胺四乙酸二钠的测定方法 | |
| CN112595793B (zh) | 一种基于苯酚测定的地龙注射液检测方法 | |
| CN112816609B (zh) | 一种在制剂生产过程中检测磷酸肌酸钠残留的方法 | |
| CN112578044B (zh) | 一种高效液相检测Fmoc-AEEA含量的方法 | |
| CN116678982B (zh) | 一种棕榈酸帕利哌酮杂质sm1-g的检测方法 | |
| CN115327005B (zh) | 一种氧化氯吡格雷有关物质的检测方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination |