CN114384178B - 一种匹伐他汀钙中间体及杂质的检测方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种匹伐他汀钙中间体及杂质的检测方法,该方法采用高效液相色谱法对匹伐他汀钙中间体以及杂质1和杂质2进行检测分析,以八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱,采用缓冲盐水溶液与乙腈的混合溶液为流动相A,乙腈为流动相B,进行梯度洗脱。该方法能准确检测出已知杂质,并且中间体主峰与已知杂质峰能够达到有效分离,是一种全新的有利于匹伐他汀钙中间体质量控制的检测分析方法。
Description
技术领域
本发明涉及药物检测分析技术领域,具体涉及一种匹伐他汀钙中间体及杂质的检测方法。
背景技术
匹伐他汀钙,化学名为(+)-双{(3R,5S,6E)-7-[2-环丙基-4-(氟代苯基)喹啉-3-苯基]-3,5-二羟基-6-庚烯酸}钙盐(2:1),作为羟甲基戊二酸单酰辅酶A(HMG-CoA)还原酶抑制剂,其具有显著降低低密度脂蛋白胆固醇(LDL—C)效应,为第三代他汀类药物,是目前国际临床应用中降血脂效果较好的他汀类药物之一,具有高效(1毫克起效)、安全(不与其他常规药物竞争代谢)等特点,且具有良好的耐受性,其作用与阿托伐他汀相似,而强于其他5种他汀类药物,其CAS号为:147526-32-7,分子式为C50H46CaF2N2O8,分子量为:880.98,化学结构如下:
目前,匹伐他汀钙主要的合成路线如下:
在合成匹伐他汀钙的过程中,需要控制一些关键中间体的纯度,以减少副反应的发生和杂质的生成,继而提高匹伐他汀钙的收率和纯度。
其中,(3R,6E)-7-[2-环丙基-4-(4-氟苯基)-3-喹啉基]-3-羟基-5-氧代-6-庚烯酸甲酯是合成匹伐他汀钙的重要中间体,其CAS号为:917752-45-5,分子式为:C26H24FNO4,分子量为:433.47,具体结构如下:
在合成上述中间体的过程中可能产生的杂质有2个,具体结构分别为:
杂质1:
杂质2:
现有技术中针对上述中间体及其2个杂质还没有对应的检测方法,这非常不利于(3R,6E)-7-[2-环丙基-4-(4-氟苯基)-3-喹啉基]-3-羟基-5-氧代-6-庚烯酸甲酯以及匹伐他汀钙的质量控制,因此建立一种有效地洗脱、分离和定量的分析检测方法对该匹伐他汀钙中间体及杂质进行检测分析是非常必要的。
发明内容
本发明的目的,是提供一种能够专属的对匹伐他汀钙中间体及杂质进行有效的洗脱、分离和定量的分析检测方法,并且该方法准确度高、重复性好、灵敏度高,操作简单且高效。
本发明提供如下的技术方案:
一种测定匹伐他汀钙中间体及杂质的分析方法,采用高效液相色谱法,用以八烷基硅烷键合硅胶或十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱,采用缓冲盐水溶液与有机溶剂的混合溶液为流动相A,有机溶剂为流动相B,进行梯度洗脱。
其中匹伐他汀钙中间体为(3R,6E)-7-[2-环丙基-4-(4-氟苯基)-3-喹啉基]-3-羟基-5-氧代-6-庚烯酸甲酯,其结构如下:
杂质有两种,杂质1为三苯基氧膦,其结构如下:
杂质2为(3R,6E)-7-[2-环丙基-4-(4-氟苯基)-3-喹啉基]-3-{[(1,1-二甲基乙基)二甲基甲硅烷基]氧基}-5-氧代-6-庚酸甲酯,其结构如下:
缓冲盐水溶液为磷酸盐缓冲液,选自磷酸二氢钾溶液、磷酸氢二钾溶液、磷酸二氢铵溶液,优选磷酸二氢钾溶液。
在一些实施方案中,所述流动相A溶液中的磷酸二氢钾溶液的浓度为5mmol/L~50mmol/L,优选10mmol/L;pH为1.5~7.0;磷酸二氢钾缓冲液-乙腈混合溶液,两者体积比为90:10~98:2,优选95:5。更优选地,流动相A磷酸二氢钾溶液的pH可用磷酸调节2.0。
在一些实施方案中,液相色谱法的检测器为紫外检测器,柱温为25℃~40,检测波长是210nm~260nm。优选地,柱温为28℃-33℃,检测波长是215nm~225nm。更优选的柱温为30℃,检测波长是220nm。
在一些实施方案中,流动相的流速为0.5ml/min-1.5ml/min,进样量为5μl~50μl。优选地,流速为0.8ml/min-1.2ml/min,进样量为5μl~20μl。更优选地,流动相的流速为1.0ml/min,进样量为10μl。
在一些实施方案中,所述色的谱柱为八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱,优选地,Aglient SB C8系列;所述色谱柱规格为:内径4.0~5.0mm,长度100~250mm,填料粒径2~6μm,优选地,内径4.6mm,长度150mm,填料粒径4.6μm。
在一些实施方案中,梯度洗脱的程序为
洗脱时间 | A相(%) | B相(%) |
0min | 85 | 15 |
3min | 85 | 15 |
40min | 20 | 80 |
50min | 20 | 80 |
55min | 85 | 15 |
65min | 85 | 15 |
在一些实施方案中,检测方法还包括匹伐他汀钙中间体供试品溶液配制:取匹伐他汀钙中间体供试品,用稀释液溶解并稀释,作为匹伐他汀钙中间体供试品溶液,其中稀释液为乙腈。
在一些实施方案中,检测方法还包括系统适用性溶液配制:取匹伐他汀钙中间体对照品以及杂质1对照品、杂质2对照品用稀释液溶解并稀释,制成系统适用性溶液。在一些优选实施方案中,每1ml系统适用性溶液中,匹伐他汀钙中间体含量为0.2mg~1.0mg,杂质1、杂质2含量分别为0.5μg~2.5μg。
附图说明:
图1为本发明实施例1的HPLC色谱图。
图2为本发明实施例2的HPLC色谱图。
图3为本发明实施例3的HPLC色谱图。
具体实施方式
以下结合附图对本发明技术方案进行详细说明,但不因此将本发明限制在所述的实施例范围之中。除非另有说明,否则以下实施例中所用的试剂、材料及仪器均可通过常规条件和方法,或者常规商业手段获得。
实施例1
仪器:安捷伦1260
色谱柱:SVEA C8 4.6*150mm 5.0μm
流动相:A相:0.01M磷酸二氢钾(pH=2.0):乙腈=95:5
B相:乙腈
检测波长:220nm
流速:1.0ml/min
柱温:30℃
进样量:10μl
混合溶液配制:精密称取样品及杂质各适量,置于50ml量瓶中,用乙腈稀释至刻度。
表1.对比例的梯度洗脱程序
洗脱时间 | A相(%) | B相(%) |
0min | 85 | 15 |
3min | 85 | 15 |
20min | 20 | 80 |
25min | 20 | 80 |
26min | 85 | 15 |
35min | 85 | 15 |
稀释液(空白溶液):乙腈。
杂质定位溶液配制:分别取杂质1和杂质2对照品适量,精密称定,分别加乙腈溶解并稀释,制成每1ml中杂质1和杂质2的含量分别为约2.5μg和2.5μg的溶液,分别作为杂质1定位溶液和杂质2定位溶液。
系统适用性溶液配制:取匹伐他汀钙中间体对照品和各杂质对照品适量,精密称定,加乙腈溶解并稀释,制成每1ml中匹伐他汀钙中间体含量为约0.5mg,杂质1和杂质2含量分别为约2.5μg和2.5μg的溶液,作为系统适用性溶液。上述配制过程使用的乙腈为稀释液,乙腈视情况可以替换为其他任何适合的溶剂。
样品测定:分别量取空白溶液、杂质1定位溶液和杂质2定位溶液及系统适用性溶液各10μl,分别注入液相色谱仪。
检测结果:结果参见附图1,故可知在本实施例中RT=12.105min为匹伐他汀钙中间体的峰,RT=12.330min为杂质1的峰,RT=19.450min为杂质2的峰,其它均为未知杂质峰,匹伐他汀钙中间体的峰与杂质1分离度1.43,不符合分离度不得小于1.5的要求。
实施例2
采用与实施例1中一致的仪器、试剂、方法,仅改变洗脱程序如下表2所示。
表2.实施例2的梯度洗脱程序
洗脱时间 | A相(%) | B相(%) |
0min | 85 | 15 |
3min | 85 | 15 |
40min | 20 | 80 |
50min | 20 | 80 |
55min | 85 | 15 |
65min | 85 | 15 |
样品测定:
检测结果:结果参见附图2,故可知在本实施例中RT=20.638min为杂质1的峰,RT=24.095min为匹伐他汀钙中间体的峰,RT=49.588min为杂质2的峰,其它均为未知杂质峰,RT=18.592min与RT=18.893min的两个杂质分离度为1.13,不符合分离度不得小于1.5的要求。
实施例3
采用与实施例2中一致的仪器、试剂、方法,仅改变色谱柱为Aglient SB C8,4.6*150mm,5.0μm。
稀释液、杂质定位溶液、系统适用性溶液的配置与实施例1中的一致,样品测定的方法也与实施例1一致。
检测结果:结果参见附图3,其中,RT=20.704min为杂质1的峰,RT=22.180min为匹伐他汀钙中间体的峰,RT=45.898min为杂质2的峰,其它均为未知杂质峰,杂质间的分离度为均大于1.5,符合要求。
实施例3中的方法学验证结果如下表3:
表3.验证结果及结论
由上述表3的数据可知,本发明提供的检测方法专属性强、线性关系良好、灵敏度高、重复性好、准确度高、且有良好的溶液稳定性及耐用性,可以实现匹伐他汀钙中间体样品及杂质的检测。
Claims (9)
1.一种匹伐他汀钙中间体及杂质的检测方法,其特征在于,采用液相色谱法对匹伐他汀钙中间体和/或杂质进行检测分析,以八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱,采用磷酸盐缓冲液与乙腈的混合溶液为流动相A,乙腈为流动相B,进行梯度洗脱,所述中间体为(3R,6E)-7-[2-环丙基-4-(4-氟苯基)-3-喹啉基]-3-羟基-5-氧代-6-庚烯酸甲酯;
所述杂质为杂质1:三苯基氧膦;
杂质2:(3R,6E)-7-[2-环丙基-4-(4-氟苯基)-3-喹啉基]-3-{[(1,1-二甲基乙基)二甲基甲硅烷基]氧基}-5-氧代-6-庚酸甲酯。
2.根据权利要求1所述的检测方法,其特征在于,流动相A的起始体积分数为80%-90%。
3.根据权利要求1所述的检测方法,其特征在于,所述梯度洗脱的程序为:0min~3min,所述流动相A在流动相A和流动相B中的体积分数保持在80%~90%;3min~40min,所述流动相A在流动相A和流动相B中的体积分数由80%~90%降低至15%~25%,40min~50min,所述流动相A在流动相A和流动相B中的体积分数保持在15%~25%。
4.根据权利要求1所述的检测方法,其特征在于,所述梯度洗脱的程序为:0min~3min,所述流动相A在流动相A和流动相B中的体积分数保持在85%;3min~40min,所述流动相A在流动相A和流动相B中的体积分数由85%降低至20%,40min~50min,所述流动相A在流动相A和流动相B中的体积分数保持在20%。
5.根据权利要求2所述的检测方法,其特征在于,所述磷酸盐缓冲液为磷酸二氢钾溶液时,浓度为5mmol/L~50mmol/L,pH为1.5~7.0,磷酸二氢钾缓冲液与乙腈的体积比为90:10~98:2。
6.根据权利要求1所述的检测方法,其特征在于,所述液相色谱法采用的检测器为紫外检测器,柱温为25℃~40℃,检测波长是210nm~260nm。
7.根据权利要求1所述的检测方法,其特征在于,所述流动相的流速为0.5ml/min-1.5ml/min。
8.根据权利要求1所述的检测方法,其特征在于,所述梯度洗脱程序为:
柱温为30℃,流动相的流速为1.0ml/min。
9.根据权利要求1所述的检测方法,其特征在于,所述检测方法还包括供试品溶液配制:取匹伐他汀钙中间体供试品,用稀释液溶解并稀释,作为供试品溶液,其中所述稀释液为乙腈。
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