CN114371226B - 一种分析检测精制左旋氨基物及其有关物质的方法 - Google Patents
一种分析检测精制左旋氨基物及其有关物质的方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN114371226B CN114371226B CN202011104151.3A CN202011104151A CN114371226B CN 114371226 B CN114371226 B CN 114371226B CN 202011104151 A CN202011104151 A CN 202011104151A CN 114371226 B CN114371226 B CN 114371226B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- refined
- mobile phase
- amino
- high performance
- impurity
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 239000000126 substance Substances 0.000 title claims abstract description 29
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 28
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 title abstract description 7
- 238000007670 refining Methods 0.000 title abstract description 5
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 102
- ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N Triethylamine Chemical compound CCN(CC)CC ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 54
- 238000000926 separation method Methods 0.000 claims abstract description 49
- 239000012488 sample solution Substances 0.000 claims abstract description 44
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 34
- 238000010828 elution Methods 0.000 claims abstract description 24
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 claims abstract description 22
- JRMUNVKIHCOMHV-UHFFFAOYSA-M tetrabutylammonium bromide Chemical compound [Br-].CCCC[N+](CCCC)(CCCC)CCCC JRMUNVKIHCOMHV-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims abstract description 18
- 229910000147 aluminium phosphate Inorganic materials 0.000 claims abstract description 17
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 6
- 239000011259 mixed solution Substances 0.000 claims abstract description 5
- 239000000945 filler Substances 0.000 claims abstract description 3
- YTJSFYQNRXLOIC-UHFFFAOYSA-N octadecylsilane Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC[SiH3] YTJSFYQNRXLOIC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 3
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 claims abstract description 3
- 239000000377 silicon dioxide Substances 0.000 claims abstract description 3
- 239000000523 sample Substances 0.000 claims description 41
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 40
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims description 38
- WIIZWVCIJKGZOK-RKDXNWHRSA-N chloramphenicol Chemical compound ClC(Cl)C(=O)N[C@H](CO)[C@H](O)C1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 WIIZWVCIJKGZOK-RKDXNWHRSA-N 0.000 claims description 13
- 229960005091 chloramphenicol Drugs 0.000 claims description 12
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 3
- 238000010790 dilution Methods 0.000 claims description 2
- 239000012895 dilution Substances 0.000 claims description 2
- 239000012535 impurity Substances 0.000 abstract description 83
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 abstract description 20
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 104
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 25
- 239000013558 reference substance Substances 0.000 description 17
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- AAEQXEDPVFIFDK-UHFFFAOYSA-N 3-(4-fluorobenzoyl)-2-(2-methylpropanoyl)-n,3-diphenyloxirane-2-carboxamide Chemical compound C=1C=CC=CC=1NC(=O)C1(C(=O)C(C)C)OC1(C=1C=CC=CC=1)C(=O)C1=CC=C(F)C=C1 AAEQXEDPVFIFDK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 13
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 13
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 13
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 13
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 13
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 12
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 12
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 10
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 9
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 9
- XUKUURHRXDUEBC-SXOMAYOGSA-N (3s,5r)-7-[2-(4-fluorophenyl)-3-phenyl-4-(phenylcarbamoyl)-5-propan-2-ylpyrrol-1-yl]-3,5-dihydroxyheptanoic acid Chemical compound C=1C=CC=CC=1C1=C(C=2C=CC(F)=CC=2)N(CC[C@@H](O)C[C@H](O)CC(O)=O)C(C(C)C)=C1C(=O)NC1=CC=CC=C1 XUKUURHRXDUEBC-SXOMAYOGSA-N 0.000 description 8
- 230000005526 G1 to G0 transition Effects 0.000 description 5
- -1 amino compound Chemical class 0.000 description 5
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 5
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 5
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 5
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 4
- 238000003908 quality control method Methods 0.000 description 4
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 2
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 2
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 2
- OCYJXSUPZMNXEN-RKDXNWHRSA-N (R,R)-2-amino-1-(4-nitrophenyl)propane-1,3-diol Chemical compound OC[C@@H](N)[C@H](O)C1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 OCYJXSUPZMNXEN-RKDXNWHRSA-N 0.000 description 1
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037386 Typhoid Diseases 0.000 description 1
- NWKHIZXZESQPSP-UHFFFAOYSA-N acetonitrile;phosphoric acid;hydrate Chemical compound O.CC#N.OP(O)(O)=O NWKHIZXZESQPSP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000012863 analytical testing Methods 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 229940097572 chloromycetin Drugs 0.000 description 1
- 238000013375 chromatographic separation Methods 0.000 description 1
- 230000001276 controlling effect Effects 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- 230000007717 exclusion Effects 0.000 description 1
- 230000003631 expected effect Effects 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 1
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 239000012074 organic phase Substances 0.000 description 1
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 1
- 201000008297 typhoid fever Diseases 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
- G01N30/26—Conditioning of the fluid carrier; Flow patterns
- G01N30/28—Control of physical parameters of the fluid carrier
- G01N30/34—Control of physical parameters of the fluid carrier of fluid composition, e.g. gradient
Landscapes
- Physics & Mathematics (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Treatment Of Liquids With Adsorbents In General (AREA)
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
Abstract
本发明涉及化学分析技术领域,具体涉及分析精制左旋氨基物及其有关物质的方法。本发明提供一种分析检测精制左旋氨基物及其有关物质的方法,所述分析方法以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的反相色谱柱,以四丁基溴化铵、三乙胺和磷酸的混合溶液为流动相A,以有机溶剂甲醇为流动相B,对含有精制左旋氨基物的样品溶液进行梯度洗脱并进行HPLC分析。本发明分析方法能够有效分离精制左旋氨基物及其有关物质,使得各杂质峰以及精制左旋氨基物峰不重叠、峰形良好并达到分离要求,适合有关物质的控制。
Description
技术领域
本发明涉及化学分析技术领域,具体而言,本发明涉及一种分析检测精制左旋氨基物及其有关物质的方法。
背景技术
氯霉素属广谱抑菌抗生素,是治疗伤寒、副伤寒的首选药,治疗厌氧菌感染的特效药物之一,其次用于敏感微生物所致的各种感染性疾病的治疗。氯霉素中间体“(1R,2R)-1-(4-硝基苯基)-2-氨基-1,3-丙二醇”简称“精制左旋氨基物”是制备氯霉素原料药的关键中间体,主要用于制备氯霉素原料药。为了提高氯霉素药品生产的质量,按照药品生产规范及产品标准,如欧洲药典(EP)的规定,需要对精制左旋氨基物的质量进行有效的分析和控制,精制左旋氨基物的制备工艺路线如下:
根据精制左旋氨基物工艺路线,在制备过程中会产生杂质,可能存在的杂质如下:
冯立双等(冯立双,何连顺,赵刚.HPLC测定D(-)苏-1-对硝基苯基-2-氨基-1,3-丙二醇含量[J].石化技术,2019(10):306,164)公开了一种HPLC测定D(-)苏-1-对硝基苯基-2-氨基-1,3-丙二醇(简称左旋氨基物)的分析方法,该方法以乙腈-水-磷酸为流动相,采用HPLC测定样品中左旋氨基物的有效含量,适用于D(-)苏-1-对硝基苯基-2-氨基-1,3-丙二醇的快速定量检测。但是,该检测方法只能检测左旋氨基物的有效含量,无法检测其他杂质及含量,因此,使用现有技术的方法无法识别左旋氨基物及其相关杂质,更无法将精制左旋氨基物及其相关杂质进行有效分离,无法对精制左旋氨基物的质量进行有效控制。
因此,亟需开发一种简单快速方便地分析检测精制左旋氨基物及其有关物质的方法,从而实现氯霉素原料药及其制剂的质量控制。
发明内容
本发明旨在至少在一定程度上解决相关技术中的技术问题之一。为此,本发明的一个目的在于提供一种分析检测精制左旋氨基物及其有关物质的方法,利用高效液相色谱分析方法,将精制左旋氨基物及其有关物质进行识别并有效分离,进而分析精制左旋氨基物的纯度,从而实现氯氯霉素原料药及其制剂的质量控制。
为此,本发明第一方面提供了一种分析检测精制左旋氨基物及其有关物质的方法,其特征在于,利用高效液相色谱法对待测样品进行检测,以获得色谱图;以及
基于所述色谱图,获得待测样品中精制左旋氨基物的含量;
其中,所述高效液相色谱法的色谱条件如下所述:
色谱柱采用以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的反相色谱柱;
以混合溶液为流动相A,以有机溶剂为流动相B进行梯度洗脱,
所述梯度洗脱条件为:
时间(min) | A相(%) | B相(%) |
0 | 92 | 8 |
7 | 92 | 8 |
20 | 20 | 80 |
21 | 92 | 8 |
35 | 92 | 8 |
其中,所述流动相A为四丁基溴化铵、三乙胺和磷酸的混合溶液,所述流动相B为甲醇。
溶于流动相中的各组分经过固定相时,由于与固定相发生作用(吸附、分配、离子吸引、排阻、亲和)的大小、强弱不同,在固定相中滞留时间不同,从而先后从固定相中流出。高效液相色谱便是基于此原理实现物质分离的。本发明的发明人创造性的发现,采用本发明的分析检测方法可将精制左旋氨基物与其生产过程中存在的杂质A、杂质B、杂质C、杂质D以及杂质F进行有效分离,进而分析检测精制左旋氨基物的纯度,以实现对精制左旋氨基物的质量控制,从而实现氯霉素原料药及其制剂的质量控制。并且,只有在本发明特定的洗脱条件下,才能使得色谱图中精制左旋氨基物与杂质A、杂质B、杂质C、杂质D、杂质F峰型良好,分离度达到预期标准,各相邻峰的分离度均>1.5。若待测样品中精制左旋氨基物含量不达标,则该待测样品不能作为生产氯霉素的原料进行氯霉素的生产。
根据本发明实施例的分析检测精制左旋氨基物及其有关物质的方法,还可以具有以下附加技术特征的至少之一:
根据本发明的实施例,所述流动相A中四丁基溴化铵的浓度为1g/L,三乙胺占所述流动相总体积的0.2%。
根据本发明的实施例,所述流动相A的pH值为2.2~2.4。
根据本发明优选的实施例,所述流动相A的配制方法:称取1.0g四丁基溴化铵,加1000ml水溶解后,再加入2ml三乙胺,混匀,用磷酸调pH值至2.3,获得流动相A。
根据本发明的实施例,所述高效液相色谱法中色谱柱为WelchXB-C18;
任选地,所述高效液相色谱法中色谱柱还包括鬼峰捕集柱welch ghost-column。
在色谱分离中,特别在梯度洗脱过程中容易产生莫名其妙的色谱峰,俗称鬼峰,主要来源于流动相和管路,方法开发中一旦出现鬼峰,消除鬼峰则需要花费分析人员较多的时间和精力。本发明的发明人发现在进行高效液相色谱分离精制左旋氨基物及其有关物质时,若在混合器与六通阀之间连接一根鬼峰捕集柱,可使精制左旋氨基物及各杂质的出峰分离良好,分离度达到预期标准,且主峰与杂质峰不受空白干扰;当不使用鬼峰捕集柱时,会导致杂质峰受到鬼峰干扰,但其峰型与分离度达到了预期标准。因此,在本发明提供的分析检测精制左旋氨基物及其有关物质的方法中,进行高效液相色谱时选择加入或者不加入鬼峰捕集柱,均能够使得精制左旋氨基物及各杂质出峰时的峰型和分离度达到预期标准。
根据本发明的实施例,所述色谱柱的柱温为25~35℃。
根据本发明的实施例,所述流动相的流速为0.9~1.1ml/min。
色谱柱的柱温和流动相的流速会影响分离效果,如果色谱柱的柱温或流动相的流速不在上述范围内,则会导致分离效果不好,使分离度<1.5,主峰与杂质峰之间不能达到良好分离,也会使峰形较差。
根据本发明的实施例,所述高效液相色谱法中检测波长为250~280nm。
根据本发明的实施例,所述方法还包括如下步骤:
(1)取含精制左旋氨基物的待测样品,用甲醇溶解,后加入流动相A稀释,配制成浓度为0.4mg/ml的样品溶液;
(2)取步骤(1)中样品溶液10μl注入高效液相色谱仪中,记录色谱图,完成所述含精制左旋氨基物样品的分离检测。
本发明中所用的溶解含精制左旋氨基物的待测样品的甲醇的用量能够溶解固体待测样品即可,且其用量多少对检测结果影响不大,本领域技术人员可以根据需要进行调整。
本发明第二方面提供第一方面所述的方法在以精制左旋氨基物为原料生产氯霉素或其盐的分析检测中的应用。
利用本发明提供的分析检测精制左旋氨基物及其有关物质的方法,通过将精制左旋氨基物与其生产过程中存在的杂质A、杂质B、杂质C、杂质D以及杂质F进行有效分离,进而分析检测精制左旋氨基物的纯度,通过对原料精制左旋氨基物的纯度的控制,可实现以其为原料制备氯霉素或其盐的分析检测。
本发明的附加方面和优点将在下面的描述中部分给出,部分将从下面的描述中变得明显,或通过本发明的实践了解到。
附图说明
本发明的上述和/或附加的方面和优点从结合下面附图对实施例的描述中将变得明显和容易理解,其中:
图1显示了根据本发明的实施例1,所得样品的高效液相色谱图;
图2显示了根据本发明的实施例2,所得样品的高效液相色谱图;
图3显示了根据本发明的实施例3,所得样品的高效液相色谱图;
图4显示了根据本发明的实施例4,所得样品的高效液相色谱图;
图5显示了根据本发明的实施例5,所得样品的高效液相色谱图;
图6显示了根据本发明的实施例6,所得样品的高效液相色谱图;
图7显示了根据本发明的实施例7,所得样品的高效液相色谱图;
图8显示了根据本发明的实施例8,所得样品的高效液相色谱图;
图9显示了根据本发明的实施例9,所得样品的高效液相色谱图;
图10显示了根据本发明的实施例10,所得样品的高效液相色谱图;
图11显示了根据本发明的对比例1,所得样品的高效液相色谱图;
图12显示了根据本发明的对比例2,所得样品的高效液相色谱图。
具体实施方式
下面详细描述本发明的实施例。下面描述的实施例是示例性的,仅用于解释本发明,而不能理解为对本发明的限制。
在本发明一些具体的实施方案中,本发明提供的分析检测精制左旋氨基物及其有关物质的方法,可以依照以下方法实现:
1)精密称定适量精制左旋氨基物对照品和杂质A、B、C、D、F,将其混合后先用甲醇溶解,再用流动相A稀释,配制成含精制左旋氨基物0.4mg/ml和杂质A、B、C、D、F分别为0.4ug/ml的样品溶液;
2)取10μL步骤1)中所得样品溶液注入高效液相色谱仪中,采用以下色谱条件,记录色谱图,完成所述含精制左旋氨基物的样品溶液的分析分离。
在本发明一些具体的实施方案中,所用的用于溶解精制左旋氨基物对照品和杂质A、B、C、D、F混合物的甲醇的用量能够溶解固体样品即可,且其用量多少对检测结果影响不大,本领域技术人员可以根据需要进行调整。
色谱条件:
高效液相色谱仪:戴安:UltiMate3000;
色谱柱:WelchXB-C18 4.6×250mm,5μm;可选地,在混合器与六通阀之间连接一根鬼峰捕集柱:welch ghost-column 2.1×3.3mm;
色谱柱柱温:25~35℃;
流速:0.9~1.1ml/min;
检测波长:250~280nm
进样量:10μL
稀释剂:流动相A
流动相:A相:称取1.0g四丁基溴化铵,加1000ml水溶解后,再加入2ml三乙胺,混匀,用磷酸调pH值至2.2~2.4;
B相:甲醇;
按下表进行梯度洗脱:
实施例中未注明具体技术或条件的,按照本领域内的文献所描述的技术或条件或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者,均为可以通过市购获得的常规产品。
实施例1
1)精密称定适量精制左旋氨基物对照品和杂质A、B、C、D、F,将其混合后先用甲醇溶解,再用流动相A稀释,配制成含精制左旋氨基物0.4mg/ml和杂质A、B、C、D、F分别为0.4ug/ml的样品溶液;
2)取10μL步骤1)中所得样品溶液注入高效液相色谱仪中,采用以下色谱条件,记录色谱图,如图1所示,完成所述含精制左旋氨基物的样品溶液的分析分离。
色谱条件:
高效液相色谱仪:戴安:UltiMate3000;
色谱柱:WelchXB-C18 4.6×250mm,5μm;在混合器与六通阀之间连接一根鬼峰捕集柱:welch ghost-column 2.1×3.3mm;
色谱柱柱温:30℃;
流速:1.0ml/min;
检测波长:267nm
进样量:10μL
稀释剂:流动相A
流动相:A相:称取1.0g四丁基溴化铵,加1000ml水溶解后,再加入2ml三乙胺,混匀,用磷酸调pH值至2.3;
B相:甲醇;
按下表进行梯度洗脱:
时间(min) | 流速(ml/min) | A相(%) | B相(%) |
0 | 1.0 | 92 | 8 |
7 | 1.0 | 92 | 8 |
20 | 1.0 | 20 | 80 |
21 | 1.0 | 92 | 8 |
35 | 1.0 | 92 | 8 |
图1为利用上述检测方法获得的最终色谱图,出峰依次为杂质C、精制左旋氨基物、杂质A、杂质D、杂质F、杂质B,从图1可以看出杂质F、杂质B的出峰与其他峰分离很好,所以在实际检测中不再对这两个杂质的分离进行考察。在该条件下色谱峰峰型良好,分离度达到预期标准,且主峰与杂质峰不受空白干扰,主峰与其相邻峰的分离度均>1.5。
实施例2
1)精密称定适量精制左旋氨基物对照品和杂质A、B、C、D、F,将其混合后先用甲醇溶解,再用流动相A稀释,配制成含精制左旋氨基物0.4mg/ml和杂质A、B、C、D、F分别为0.4ug/ml的样品溶液;
2)取10μL步骤1)中所得样品溶液注入高效液相色谱仪中,采用以下色谱条件,记录色谱图,如图2所示,完成所述含精制左旋氨基物的样品溶液的分析分离。
色谱条件:
高效液相色谱仪:戴安:UltiMate3000;
色谱柱:WelchXB-C18 4.6×250mm,5μm;
色谱柱柱温:30℃;
流速:1.0ml/min;
检测波长:267nm
进样量:10μL
稀释剂:流动相A
流动相:A相:称取1.0g四丁基溴化铵,加1000ml水溶解后,再加入2ml三乙胺,混匀,用磷酸调pH值至2.3;
B相:甲醇;
按下表进行梯度洗脱:
时间(min) | 流速(ml/min) | A相(%) | B相(%) |
0 | 1.0 | 92 | 8 |
7 | 1.0 | 92 | 8 |
20 | 1.0 | 20 | 80 |
21 | 1.0 | 92 | 8 |
35 | 1.0 | 92 | 8 |
图2为利用上述检测方法获得的最终色谱图,与实施例1相比,未加鬼峰捕集柱,出峰依次为杂质C、精制左旋氨基物、杂质A、杂质D、杂质F、杂质B,从图谱可以看出,在不添加鬼峰捕集柱的情况下,由于梯度洗脱在高浓度的有机相下,鬼峰与杂质峰一起出峰,导致杂质峰会受到鬼峰干扰,但其峰型与分离度达到了预期标准,主峰与其相邻峰的分离度均>1.5。
实施例3
1)精密称定适量精制左旋氨基物对照品和杂质A、C、D,将其混合后先用甲醇溶解,再用流动相A稀释,配制成含精制左旋氨基物0.4mg/ml和杂质A、C、D分别为0.4ug/ml的样品溶液;
2)取10μL步骤1)中所得样品溶液注入高效液相色谱仪中,采用以下色谱条件,记录色谱图,如图3所示,完成所述含精制左旋氨基物的样品溶液的分析分离。
色谱条件:
高效液相色谱仪:戴安:UltiMate3000;
色谱柱:WelchXB-C18 4.6×250mm,5μm;
色谱柱柱温:25℃;
流速:1.0ml/min;
检测波长:267nm
进样量:10μL
稀释剂:流动相A
流动相:A相:称取1.0g四丁基溴化铵,加1000ml水溶解后,再加入2ml三乙胺,混匀,用磷酸调pH值至2.3;
B相:甲醇;
按下表进行梯度洗脱:
时间(min) | 流速(ml/min) | A相(%) | B相(%) |
0 | 1.0 | 92 | 8 |
7 | 1.0 | 92 | 8 |
20 | 1.0 | 20 | 80 |
21 | 1.0 | 92 | 8 |
35 | 1.0 | 92 | 8 |
图3为利用上述检测方法获得的最终色谱图,与实施例2相比,柱温为25℃,出峰依次为杂质C、精制左旋氨基物、杂质A、杂质D,从图中可以看出该条件下峰型良好,分离度达到预期标准,主峰与其相邻峰的分离度均>1.5。
实施例4
1)精密称定适量精制左旋氨基物对照品和杂质A、C、D,将其混合后先用甲醇溶解,再用流动相A稀释,配制成含精制左旋氨基物0.4mg/ml和杂质A、C、D分别为0.4ug/ml的样品溶液;
2)取10μL步骤1)中所得样品溶液注入高效液相色谱仪中,采用以下色谱条件,记录色谱图,如图4所示,完成所述含精制左旋氨基物的样品溶液的分析分离。
色谱条件:
高效液相色谱仪:戴安:UltiMate3000;
色谱柱:WelchXB-C18 4.6×250mm,5μm;
色谱柱柱温:35℃;
流速:1.0ml/min;
检测波长:267nm
进样量:10μL
稀释剂:流动相A
流动相:A相:称取1.0g四丁基溴化铵,加1000ml水溶解后,再加入2ml三乙胺,混匀,用磷酸调pH值至2.3;
B相:甲醇;
按下表进行梯度洗脱:
时间(min) | 流速(ml/min) | A相(%) | B相(%) |
0 | 1.0 | 92 | 8 |
7 | 1.0 | 92 | 8 |
20 | 1.0 | 20 | 80 |
21 | 1.0 | 92 | 8 |
35 | 1.0 | 92 | 8 |
图4为利用上述检测方法获得的最终色谱图,与实施例2相比,柱温35℃,出峰依次为杂质C、精制左旋氨基物、杂质A、杂质D,从图中可以看出该条件下峰型良好,分离度达到预期标准,主峰与其相邻峰的分离度均>1.5。
实施例5
1)精密称定适量精制左旋氨基物对照品和杂质A、C、D,将其混合后先用甲醇溶解,再用流动相A稀释,配制成含精制左旋氨基物0.4mg/ml和杂质A、C、D分别为0.4ug/ml的样品溶液;
2)取10μL步骤1)中所得样品溶液注入高效液相色谱仪中,采用以下色谱条件,记录色谱图,如图5所示,完成所述含精制左旋氨基物的样品溶液的分析分离。
色谱条件:
高效液相色谱仪:戴安:UltiMate3000;
色谱柱:WelchXB-C18 4.6×250mm,5μm;
色谱柱柱温:30℃;
流速:0.9ml/min;
检测波长:267nm
进样量:10μL
稀释剂:流动相A
流动相:A相:称取1.0g四丁基溴化铵,加1000ml水溶解后,再加入2ml三乙胺,混匀,用磷酸调pH值至2.3;
B相:甲醇;
按下表进行梯度洗脱:
时间(min) | 流速(ml/min) | A相(%) | B相(%) |
0 | 0.9 | 92 | 8 |
7 | 0.9 | 92 | 8 |
20 | 0.9 | 20 | 80 |
21 | 0.9 | 92 | 8 |
35 | 0.9 | 92 | 8 |
图5为利用上述检测方法获得的最终色谱图,当高效液相色谱条件中流速为0.9ml/min时,色谱图中出峰依次为杂质C、精制左旋氨基物、杂质A、杂质D,从图5中可以看出该条件下峰型良好,分离度达到预期标准,主峰与其相邻峰的分离度均>1.5。
实施例6
1)精密称定适量精制左旋氨基物对照品和杂质A、C、D,将其混合后先用甲醇溶解,再用流动相A稀释,配制成含精制左旋氨基物0.4mg/ml和杂质A、C、D分别为0.4ug/ml的样品溶液;
2)取10μL步骤1)中所得样品溶液注入高效液相色谱仪中,采用以下色谱条件,记录色谱图,如图6所示,完成所述含精制左旋氨基物的样品溶液的分析分离。
色谱条件:
高效液相色谱仪:戴安:UltiMate3000;
色谱柱:WelchXB-C18 4.6×250mm,5μm;
色谱柱柱温:30℃;
流速:1.1ml/min;
检测波长:267nm
进样量:10μL
稀释剂:流动相A
流动相:A相:称取1.0g四丁基溴化铵,加1000ml水溶解后,再加入2ml三乙胺,混匀,用磷酸调pH值至2.3;
B相:甲醇;
按下表进行梯度洗脱:
时间(min) | 流速(ml/min) | A相(%) | B相(%) |
0 | 1.1 | 92 | 8 |
7 | 1.1 | 92 | 8 |
20 | 1.1 | 20 | 80 |
21 | 1.1 | 92 | 8 |
35 | 1.1 | 92 | 8 |
图6为利用上述检测方法获得的最终色谱图,当高效液相色谱条件中流速为1.1ml/min时,色谱图中出峰依次为杂质C、精制左旋氨基物、杂质A、杂质D,从图6中可以看出该条件下峰型良好,分离度达到预期标准,主峰与其相邻峰的分离度均>1.5。
实施例7
1)精密称定适量精制左旋氨基物对照品和杂质A、C、D,将其混合后先用甲醇溶解,再用流动相A稀释,配制成含精制左旋氨基物0.4mg/ml和杂质A、C、D分别为0.4ug/ml的样品溶液;
2)取10μL步骤1)中所得样品溶液注入高效液相色谱仪中,采用以下色谱条件,记录色谱图,如图7所示,完成所述含精制左旋氨基物的样品溶液的分析分离。
色谱条件:
高效液相色谱仪:戴安:UltiMate3000;
色谱柱:WelchXB-C18 4.6×250mm,5μm;
色谱柱柱温:30℃;
流速:1.0ml/min;
检测波长:267nm
进样量:10μL
稀释剂:流动相A
流动相:A相:称取1.0g四丁基溴化铵,加1000ml水溶解后,再加入2ml三乙胺,混匀,用磷酸调pH值至2.2;
B相:甲醇;
按下表进行梯度洗脱:
时间(min) | 流速(ml/min) | A相(%) | B相(%) |
0 | 1.0 | 92 | 8 |
7 | 1.0 | 92 | 8 |
20 | 1.0 | 20 | 80 |
21 | 1.0 | 92 | 8 |
35 | 1.0 | 92 | 8 |
图7为利用上述检测方法获得的最终色谱图,当高效液相色谱条件中A相pH为2.2时,色谱图中出峰依次为杂质C、精制左旋氨基物、杂质A、杂质D,从图7中可以看出该条件下峰型良好,分离度达到预期标准,主峰与其相邻峰的分离度均>1.5。
实施例8
1)精密称定适量精制左旋氨基物对照品和杂质A、C、D,将其混合后先用甲醇溶解,再用流动相A稀释,配制成含精制左旋氨基物0.4mg/ml和杂质A、C、D分别为0.4ug/ml的样品溶液;
2)取10μL步骤1)中所得样品溶液注入高效液相色谱仪中,采用以下色谱条件,记录色谱图,如图8所示,完成所述含精制左旋氨基物的样品溶液的分析分离。
色谱条件:
高效液相色谱仪:戴安:UltiMate3000;
色谱柱:WelchXB-C18 4.6×250mm,5μm;
色谱柱柱温:30℃;
流速:1.0ml/min;
检测波长:267nm
进样量:10μL
稀释剂:流动相A
流动相:A相:称取1.0g四丁基溴化铵,加1000ml水溶解后,再加入2ml三乙胺,混匀,用磷酸调pH值至2.4;
B相:甲醇;
按下表进行梯度洗脱:
时间(min) | 流速(ml/min) | A相(%) | B相(%) |
0 | 1.0 | 92 | 8 |
7 | 1.0 | 92 | 8 |
20 | 1.0 | 20 | 80 |
21 | 1.0 | 92 | 8 |
35 | 1.0 | 92 | 8 |
图8为利用上述检测方法获得的最终色谱图,当高效液相色谱条件中A相pH为2.4时,色谱图中出峰依次为杂质C、精制左旋氨基物、杂质A、杂质D,从图8中可以看出该条件下峰型良好,分离度达到预期标准,主峰与其相邻峰的分离度均>1.5。
实施例9
1)精密称定适量精制左旋氨基物对照品和杂质A、B、C、D、F,将其混合后先用甲醇溶解,再用流动相A稀释,配制成含精制左旋氨基物和杂质A、B、C、D、F各0.1mg/ml的样品溶液;
2)取10μL步骤1)中所得样品溶液注入高效液相色谱仪中,采用以下色谱条件,记录色谱图,如图9所示,完成所述含精制左旋氨基物的样品溶液的分析分离。
色谱条件:
高效液相色谱仪:戴安:UltiMate3000;
色谱柱:WelchXB-C18 4.6×250mm,5μm;
色谱柱柱温:30℃;
流速:1.0ml/min;
检测波长:250nm
进样量:10μL
稀释剂:流动相A
流动相:A相:称取1.0g四丁基溴化铵,加1000ml水溶解后,再加入2ml三乙胺,混匀,用磷酸调pH值至2.3;
B相:甲醇;
按下表进行梯度洗脱:
图9为利用上述检测方法获得的最终色谱图,在250nm波长下,色谱图中出峰依次为杂质C、精制左旋氨基物、杂质A、杂质D、杂质F、杂质B,从图9中可以看出该条件下峰型良好,分离度达到预期标准,主峰与其相邻峰的分离度均>1.5。
实施例10
1)精密称定适量精制左旋氨基物对照品和杂质A、B、C、D、F,将其混合后先用甲醇溶解,再用流动相A稀释,配制成含精制左旋氨基物和杂质A、B、C、D、F各0.1mg/ml的样品溶液;
2)取10μL步骤1)中所得样品溶液注入高效液相色谱仪中,采用以下色谱条件,记录色谱图,如图10所示,完成所述含精制左旋氨基物的样品溶液的分析分离。
色谱条件:
高效液相色谱仪:戴安:UltiMate3000;
色谱柱:WelchXB-C18 4.6×250mm,5μm;
色谱柱柱温:30℃;
流速:1.0ml/min;
检测波长:280nm
进样量:10μL
稀释剂:流动相A
流动相:A相:称取1.0g四丁基溴化铵,加1000ml水溶解后,再加入2ml三乙胺,混匀,用磷酸调pH值至2.3;
B相:甲醇;
按下表进行梯度洗脱:
时间(min) | 流速(ml/min) | A相(%) | B相(%) |
0 | 1.0 | 92 | 8 |
7 | 1.0 | 92 | 8 |
20 | 1.0 | 20 | 80 |
21 | 1.0 | 92 | 8 |
35 | 1.0 | 92 | 8 |
图10为利用上述检测方法获得的最终色谱图,在280nm波长下,色谱图中出峰依次为杂质C、精制左旋氨基物、杂质A、杂质D、杂质F、杂质B,从图10中可以看出该条件下峰型良好,分离度达到预期标准,主峰与其相邻峰的分离度均>1.5。
对比例1
1)精密称定适量精制左旋氨基物对照品和杂质A、B、C、D、F,将其混合后先用甲醇溶解,再用流动相A稀释,配制成含精制左旋氨基物和杂质A、B、C、D、F各0.1mg/ml的样品溶液;
2)取10μL步骤1)中所得待测样品溶液注入高效液相色谱仪中,采用以下色谱条件,记录色谱图,如图11所示,完成所述含精制左旋氨基物的待测样品溶液的分析分离。
色谱条件:
高效液相色谱仪:戴安:UltiMate3000;
色谱柱:WelchXB-C18 4.6×250mm,5μm;
色谱柱柱温:30℃;
流速:1.0ml/min;
检测波长:267nm
进样量:10μL
稀释剂:流动相A
流动相:A相:称取1.0g四丁基溴化铵,加1000ml水溶解后,再加入2ml三乙胺,混匀,用磷酸调pH值至2.3;
B相:甲醇;
按下表进行梯度洗脱:
时间(min) | 流速(ml/min) | A相(%) | B相(%) |
0 | 1.0 | 92 | 8 |
7 | 1.0 | 92 | 8 |
20 | 1.0 | 40 | 60 |
21 | 1.0 | 92 | 8 |
35 | 1.0 | 92 | 8 |
图11为利用上述检测方法获得的最终色谱图,在上述梯度洗脱条件下,从图11中可以看出该条件下峰型良好,但杂质B与杂质F出峰时间重合,未达到预期效果,所以该条件不适用。只有在实施例中的梯度洗脱条件下,才能达到符合预期标准的分离效果。
对比例2
1)精密称定适量精制左旋氨基物对照品和杂质A、B、C、D、F,将其混合后先用甲醇溶解,再用所述流动相稀释,配制成含精制左旋氨基物和杂质A、B、C、D、F各0.5mg/ml的样品溶液;
2)取10μL步骤1)中所得待测样品溶液注入高效液相色谱仪中,采用以下色谱条件,记录色谱图,如图12所示,完成所述含精制左旋氨基物的待测样品溶液的分析分离。
色谱条件:
高效液相色谱仪:戴安:UltiMate3000;
色谱柱:WelchXB-C18 4.6×250mm,5μm;
色谱柱柱温:30℃;
流速:1.0ml/min;
检测波长:267nm
进样量:10μL
流动相:乙腈、水与磷酸的体积比为500:500:1
图12为利用上述检测方法获得的最终色谱图,在上述洗脱条件下,色谱图中出峰依次为杂质C、杂质A、杂质D、精制左旋氨基物、杂质F、杂质B,结果说明采用对比例2中的流动相,并且未采用本发明中的特殊的梯度洗脱条件,使杂质C、杂质A、杂质D未与固定相发生任何相互作用直接进入检测器,导致出峰过早,基本没有保留,容易在出峰时也会带着溶剂峰的出现,检测结果受到溶剂的干扰。
在本说明书的描述中,参考术语“一个实施例”、“一些实施例”、“示例”、“具体示例”、或“一些示例”等的描述意指结合该实施例或示例描述的具体特征、结构、材料或者特点包含于本发明的至少一个实施例或示例中。在本说明书中,对上述术语的示意性表述不必须针对的是相同的实施例或示例。而且,描述的具体特征、结构、材料或者特点可以在任一个或多个实施例或示例中以合适的方式结合。此外,在不相互矛盾的情况下,本领域的技术人员可以将本说明书中描述的不同实施例或示例以及不同实施例或示例的特征进行结合和组合。
尽管上面已经示出和描述了本发明的实施例,可以理解的是,上述实施例是示例性的,不能理解为对本发明的限制,本领域的普通技术人员在本发明的范围内可以对上述实施例进行变化、修改、替换和变型。
Claims (7)
1.一种分析检测精制左旋氨基物及其有关物质的方法,其特征在于,利用高效液相色谱法对待测样品进行检测,以获得色谱图;以及
基于所述色谱图,获得待测样品中精制左旋氨基物的含量;
其中,所述高效液相色谱法的色谱条件如下所述:
色谱柱采用以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的反相色谱柱;
以混合溶液为流动相A,以有机溶剂为流动相B进行梯度洗脱,
所述梯度洗脱条件为:
其中,
所述流动相A为四丁基溴化铵、三乙胺和磷酸的混合溶液,所述流动相B为甲醇;
所述有关物质包括结构式如下所示的物质中的至少之三:
式(1)式(2)式(3)
式(4)式(5);
所述色谱柱的柱温为25~35℃;
所述流动相的流速为0.9~1.1ml/min;
所述高效液相色谱法中检测波长为250~280nm。
2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述流动相A中四丁基溴化铵的浓度为1g/L,三乙胺占所述流动相总体积的0.2%。
3.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述流动相A的pH值为2.2~2.4。
4.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述高效液相色谱法中色谱柱为WelchUltimate® XB-C18。
5.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述高效液相色谱法中色谱柱还包括鬼峰捕集柱welch ghost-column。
6.根据权利要求1~5中任一项所述的方法,其特征在于,所述方法还包括如下步骤:
(1)取含精制左旋氨基物的待测样品,用甲醇溶解,后加入流动相A稀释,配制成浓度为0.4 mg/ml的样品溶液;
(2)取步骤(1)中样品溶液10μl注入高效液相色谱仪中,记录色谱图,完成所述含精制左旋氨基物样品的分离检测。
7.权利要求1~6中任一项所述的方法在以精制左旋氨基物为原料生产氯霉素或其盐的分析检测中的应用。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN202011104151.3A CN114371226B (zh) | 2020-10-15 | 2020-10-15 | 一种分析检测精制左旋氨基物及其有关物质的方法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN202011104151.3A CN114371226B (zh) | 2020-10-15 | 2020-10-15 | 一种分析检测精制左旋氨基物及其有关物质的方法 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN114371226A CN114371226A (zh) | 2022-04-19 |
CN114371226B true CN114371226B (zh) | 2024-05-28 |
Family
ID=81137886
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN202011104151.3A Active CN114371226B (zh) | 2020-10-15 | 2020-10-15 | 一种分析检测精制左旋氨基物及其有关物质的方法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN114371226B (zh) |
-
2020
- 2020-10-15 CN CN202011104151.3A patent/CN114371226B/zh active Active
Non-Patent Citations (5)
Title |
---|
Fuad AL-Rimawi等.Analysis of Chloramphenicol and Its Related Compound2-Amino-1-(4-nitrophenyl)propane-1,3-diol by Reversed-PhaseHigh-Performance Liquid Chromatography with UV Detection.Chromatography Research International.第2011卷全文. * |
HPLC法同时测定氯霉素滴眼液中有关物质和尼泊金酯类防腐剂;郭江红;姜红;赵亚萍;陈宁林;;药物分析杂志(第12期);全文 * |
冯立双 等.HPLC测定D(-)苏-1-对硝基苯基-2-氨基-1,3-丙二醇含量.石化技术.2019,(第10期),第306、164页. * |
反相HPLC法测定氯霉素注射液及其分解产物的含量;王小宁, 王玉, 叶汉中;中国药科大学学报(第02期);全文 * |
氯霉素主要杂质来源及控制方法研究;当代化工(第03期);全文 * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CN114371226A (zh) | 2022-04-19 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN111398480A (zh) | 同时检测三唑类抗真菌药物和糖肽类抗生素的试剂盒及其检测方法 | |
CN108627597A (zh) | 一种硫酸沙丁胺醇有关物质的检测方法 | |
CN107884498A (zh) | 一种同时测定普鲁卡因、青霉素和链霉素含量的液相色谱分析方法 | |
CN114371226B (zh) | 一种分析检测精制左旋氨基物及其有关物质的方法 | |
Chen et al. | Development of a high-performance liquid chromatography method for the simultaneous quantification of four organoarsenic compounds in the feeds of swine and chicken | |
CN108693288A (zh) | 一种利用dpx枪头式分散固相微萃取柱萃取及分析喹诺酮类药物的方法 | |
CN107843656B (zh) | 一种2,4-二甲基苯硫酚有关物质的检测方法 | |
CN111380993B (zh) | 罗沙司他有关物质分析方法 | |
CN109908879B (zh) | 一种检测四环素类抗生素的方法 | |
CN110865130B (zh) | 一种盐酸奥洛他定及其有关物质的检测方法 | |
Chang et al. | Rapid and sensitive determination of fentanyl in dog plasma by on-line solid-phase extraction integrated with a hydrophilic column coupled to tandem mass spectrometry | |
CN116754663A (zh) | 药物中苯甲酸、苯甲醛、苯甲醇和氯化苄的检测方法 | |
CN110531007A (zh) | 一种类花生四烯酸类物质检测方法 | |
CN107328880B (zh) | 一种反相色谱分离盐酸帕洛诺司琼注射液有关物质的方法 | |
CN110118836A (zh) | 高效液相色谱法测定利伐沙班中遗传毒性杂质的方法 | |
CN113820417B (zh) | 一种分离测定吡罗昔康及其杂质的方法 | |
CN106153795A (zh) | 测定鹅去氧胆酸原料药含量及其有关物质的方法 | |
CN108445091B (zh) | 一种雌酚酮有关物质的hplc分析方法 | |
CN110702819B (zh) | 一种用高效液相色谱法分离测定含多个手性中心的多肽手性异构体的方法 | |
CN110095554B (zh) | 高效液相色谱分析米力农有关物质的方法 | |
CN108872405A (zh) | 一种洛度沙胺氨丁三醇有关物质的hplc分析检测方法 | |
CN109085255B (zh) | 一种hplc法分析及制备3-(n-对甲苯磺酰基-l-丙氨酰氧基)-5-苯基吡咯及其对映异构体的方法 | |
CN114487237B (zh) | 一种3,5-二甲氧基苯甲酸甲酯的检测方法 | |
CN110455953A (zh) | 一种快速同时检测苯乳酸、苯甲酸以及山梨酸的方法 | |
Vasiliades et al. | Disopyramide determination by gas chromatography, liquid chromatography, and gas chromatography--mass spectrometry. |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PB01 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
GR01 | Patent grant |