CN108445091B - 一种雌酚酮有关物质的hplc分析方法 - Google Patents

一种雌酚酮有关物质的hplc分析方法 Download PDF

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Abstract

本发明属于甾体激素药物分析方法领域，特别涉及一种雌酚酮有关物质的HPLC分析方法，主要参数包括：选用辛烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱；采用流动相梯度洗脱，流动相的组成为水、甲醇及乙腈；在适当流速和柱温下进行高效液相色谱分析，记录色谱图。本发明能有效的洗脱、分离和定量雌酚酮原料药中的杂质，使杂质峰与主峰完全分离，且分析速度快，同时该方法也可单独适用于雌酚酮杂质A样品或杂质D样品的有关物质检测。

Description

一种雌酚酮有关物质的HPLC分析方法
技术领域
本发明属于甾体激素药物分析方法领域，特别涉及一种雌酚酮有关物质的 HPLC分析方法。
背景技术
雌酚酮(3-羟基-1，3，5(10)-三烯，17-雌酮)属于雌激素，是一种重要的医药 中间体，可用于合成炔雌醇或雌二醇类的衍生物。
雌酚酮有关物质测定中，常见的杂质分别为A、B、C、D、E及F的六种 化合物，其中，杂质A和杂质E是未转化的物料，其他杂质来源于生产原料药 时产生的副产物。对于雌酚酮原料药有关物质HPLC检测方法，未见详细报 道。如果按照美国药典USP雌酚酮含量检测方法检测原料药中有关物质，发现 有如下缺点：一是USP方法为等度洗脱，而杂质F极性较小，USP方法流动 相中用到了高浓度磷酸盐(50mM)，不能进行梯度洗脱，杂质F无法洗脱出 来；二是杂质C与雌酚酮结构类似，无法进行有效分离，杂质C定量不准确。 因此，寻找一种简单可行，能将雌酚酮及其各杂质依次洗脱且分离，并做定量 分析的分析方法势在必行。
Figure BDA0001517082340000011
Figure BDA0001517082340000021
发明内容
为了解决上述现有技术中存在的雌酚酮原料药有关物质测定中的问题，本 发明的目的在于提供一种梯度洗脱的高效液相色谱法测定雌酚酮原料药有关物 质的分析方法；同时，本发明的方法还可用于雌酚酮杂质A(即ADD)和杂质 D(即雌酚酮缩酮物)的质量控制。
为实现本发明的发明目的，发明人提供如下技术方案：
一种雌酚酮有关物质的HPLC分析方法，包括：
(1)所述的雌酚酮及其有关物质的结构如下：
Figure BDA0001517082340000022
(2)HPLC分析方法的主要参数：
a、色谱柱选用辛烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱；
b、流动相梯度洗脱，其中：
流动相的组成为水、甲醇及乙腈，A为水；B为甲醇+乙腈，B中乙腈占比 为55％～65％；
梯度洗脱时间与流动相比例如下：
时间(min) 流动相A％ 流动相B％
0～18 60～56 40～44
18～20 60～56→30 40～44→70
20～29 30 70
30～35 60～56 40～44
c、检测波长为280nm；
d、检测方法：
取测试样品适量，精密称定，加等比组成的乙腈-甲醇溶解并稀释成一定浓 度的样品溶液，摇匀，精密量取5μL注入液相色谱仪，在适当流速和柱温下进 行高效液相色谱分析，记录色谱图。
作为优选，本发明的雌酚酮有关物质的HPLC分析方法中，所述的步骤
(2)b流动相梯度洗脱中流动相B中的乙腈比例为60％。
作为优选，本发明的雌酚酮有关物质的HPLC分析方法中，所述的步骤
(2)d检测方法中的流速为0.8～1.5ml/min。
作为优选，本发明的雌酚酮有关物质的HPLC分析方法中，所述的步骤
(2)d检测方法中的柱温为30～45℃。
作为优选，本发明的雌酚酮有关物质的HPLC分析方法中，所述的步骤
(2)d检测方法中的样品溶液的浓度为0.5～5mg/ml。最优选浓度为4mg/ml。
此外，本发明的方法还可单独用于雌酚酮杂质A(即ADD)样品或杂质D (即雌酚酮缩酮物)样品的分析检测和质量控制。操作方法同上。
与相比现有技术，本发明的有益效果是：
本发明提供的高效液相色谱分析方法，能有效的洗脱、分离和定量雌酚酮 原料药中的杂质，使杂质峰与主峰完全分离，且分析速度快，同时该方法也可 单独适用于雌酚酮杂质A(ADD)样品或杂质D(雌酚酮缩酮物)样品的有关 物质检测。本发明提供的高效液相色谱梯度法不仅可以对杂质进行有效的分离 还可对杂质含量进行准确测定，且快速、简单、可靠。
附图说明
图1是本发明实施例1中系统适应性溶液(流动相B含60％乙腈)色谱 图。
图2是本发明实施例2中系统适应性溶液(流动相B含65％乙腈)色谱 图。
图3是本发明实施例3中系统适应性溶液(流动相B含55％乙腈)色谱 图。
图4是本发明实施例4中(流速1.0ml/min)系统适应性溶液色谱图。
图5是本发明实施例4中(流速1.4ml/min)系统适应性溶液色谱图。
图6是本发明实施例5中(柱温35℃)系统适应性溶液色谱图。
图7是本发明实施例5中(柱温45℃)系统适应性溶液色谱图。
图8是本发明实施例6中雌酚酮原料药色谱图。
图9是本发明实施例7中雌酚酮杂质A(即ADD)色谱图。
图10是本发明实施例8中雌酚酮杂质D(即雌酚酮缩酮物)色谱图。
具体实施方式
下面结合实施例，更具体地说明本发明的内容。应当理解，本发明的实施 并不局限于下面的实施例，对本发明所做的任何形式上的变通和/或改变都将落 入本发明保护范围。
在本发明中，若非特指，所有的份、百分比均为重量单位，所有的设备和 原料等均可从市场购得或是本行业常用的。若无特别指明，实施例采用的方法 为本领域通用技术。
一些说明：
除特别指出外，本发明实施例中按以下测定条件：色谱柱：Kinetex C8 4.6*250mm，5μm；检测波长：280nm；样品浓度：4mg/ml。
实施例1
检测方法：
取雌酚酮测试样品适量，精密称定，加乙腈-甲醇(1∶1)溶解并稀释成 4mg/ml的样品溶液，摇匀，精密量取5μL注入液相色谱仪，在流速1.2ml/min和 柱温40℃下进行高效液相色谱分析，记录色谱图。
流动相B中乙腈为60％。
按以下梯度冼脱程序分析系统适应性溶液，
时间(min) 流动相A％ 流动相B％
0 58 42
18 58 42
20 30 70
29 30 70
30 58 42
35 58 42
色谱图见图1，各杂质与主峰的保留时间及相邻峰之间的分离度见表1。
表1
样品名 代号 保留时间(min) 相邻峰间分离度
ADD 杂质A 10.360 /
雌二醇 杂质B 12.596 6.76
雌酚酮-H2 杂质C 13.535 2.48
雌酚酮 / 14.237 1.76
雌酚酮缩酮物 杂质D 22.676 32.58
联苯 杂质E 23.052 3.29
17-联苯雌二醇 杂质F 26.377 22.45
从表1数据可知：流动相B中乙腈为60％；流速：1.2ml/min；柱温：40℃ 时，各杂质与主峰之间以及杂质与杂质之间均分离良好。
实施例2
其他同实施例1，不同之处在于：
流动相B中乙腈为65％；
按以下梯度冼脱程序分析系统适应性溶液
时间(min) 流动相A％ 流动相B％
0 58 42
18 58 42
20 30 70
29 30 70
30 58 42
35 58 42
色谱图见图2，流动相B中乙腈为65％，各杂质与主峰之间以及杂质与杂质之间均分离良好。
实施例3
其他同实施例1，不同之处在于：
流动相B中乙腈为55％；
按以下梯度冼脱程序分析系统适应性溶液
时间(min) 流动相A％ 流动相B％
0 58 42
18 58 42
20 30 70
29 30 70
30 58 42
35 58 42
色谱图见图3，流动相B中乙腈为55％，各杂质与主峰之间以及杂质与杂质之间均分离良好。
对以上3个实施例中的色谱图进行比较，选择实施例1的色谱条件为优选条件，即流动相B中乙腈为60％。
实施例4
其他同实施例1，不同之处在于：
流速：1.0ml/min或1.4ml/min；
按以下梯度冼脱程序分析系统适应性溶液
时间(min) 流动相A％ 流动相B％
0 58 42
18 58 42
20 30 70
29 30 70
30 58 42
35 58 42
色谱图见图4和5，由色谱图可知当流速为1.0ml/min或1.4ml/min时各杂质与主峰之间以及杂质与杂质之间均分离良好。
对实施例1及实施例4中的色谱图进行比较，最终选择流速1.2ml/min为优选条件。
实施例5
其他同实施例1，不同之处在于：
柱温：35℃或45℃；
按以下梯度冼脱程序分析系统适应性溶液
时间(min) 流动相A％ 流动相B％
0 58 42
18 58 42
20 30 70
29 30 70
30 58 42
35 58 42
色谱图见图6和7，由色谱图可知当柱温为35℃或45℃时，各杂质与主峰之间以及杂质与杂质之间均分离良好。
对实施例1及实施例5中的色谱图进行比较，最终选择柱温40℃为优选条件。
结论：对比以上实施例1-5结果，最终优选条件为：色谱柱：Kinetex C8 4.6*250mm，5μm；流速1.2ml/min；柱温40℃；检测波长：280nm，流动相B乙腈为60％。
实施例6
按照实施例1的检测方法，按最终优选条件(即色谱柱：Kinetex C8 4.6*250mm，5μm；流速1.2ml/min；柱温40℃；检测波长：280nm，流动相B乙腈为60％)检测雌酚酮原料药样品浓度4.0mg/ml。色谱图见附图8，各杂质的含量见表2。
表2
杂质名称 杂质A 杂质B 杂质C 杂质D 杂质E 杂质F
杂质含量％ 未检出 0.11 0.10 未检出 未检出 0.24
从色谱图8中可知，样品中杂质与主峰以及各杂质间分离均良好，可对杂质进行准确的定量。
实施例7
按照实施例1的检测方法，按最终优选条件(即色谱柱：Kinetex C8 4.6*250mm，5μm；流速1.2ml/min；柱温40℃；检测波长：280nm，流动相B乙腈为60％)检测雌酚酮杂质A(即ADD)。不同之处在于：
ADD样品浓度为0.8mg/ml。
色谱图见图9，ADD与各杂质分离良好，说明本发明的方法也适用于雌酚酮杂质A(ADD)的有关物质检测。
实施例8
按照实施例1的检测方法，按最终优选条件(即色谱柱：Kinetex C8 4.6*250mm，5μm；流速1.2ml/min；柱温40℃；检测波长：280nm，流动相B乙腈为60％)检测雌酚杂质D(雌酚酮缩酮物)。其他同实施例1，不同之处 在于：雌酚酮缩酮物样品浓度为0.8mg/ml。
色谱图见图10，雌酚酮缩酮物与各杂质分离良好，说明本发明的方法也适 用于雌酚酮杂质D(雌酚酮缩酮物)的有关物质检测。

Claims (8)

1.一种雌酚酮有关物质的HPLC分析方法，其特征在于包括：
（1）所述的雌酚酮及其有关物质的结构如下:
Figure DEST_PATH_IMAGE002
Figure DEST_PATH_IMAGE004
Figure DEST_PATH_IMAGE006
Figure DEST_PATH_IMAGE008
杂质A 杂质B 杂质C 杂质D
Figure DEST_PATH_IMAGE010
Figure DEST_PATH_IMAGE012
Figure DEST_PATH_IMAGE014
杂质E 杂质F 雌酚酮
（2）HPLC分析方法的主要参数：
a、色谱柱选用辛烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱；
b、流动相梯度洗脱，其中：
流动相的组成为水、甲醇及乙腈，A为水；B为甲醇+乙腈，B 中乙腈占比为体积百分比55%~65%；
梯度洗脱时间与流动相比例如下：
时间(min) 流动相A% 流动相B% 0~18 60~56 40~44 18~20 60~56→30 40~44→70 20~29 30 70 30~35 60~56 40~44
c、检测波长为280nm；
d、检测方法：
取测试样品适量，精密称定，加等比组成的乙腈-甲醇溶解并稀释成一定浓度的样品溶液，摇匀，精密量取5µL注入液相色谱仪，在适当流速和柱温下进行高效液相色谱分析，记录色谱图。
2.根据权利要求1所述的一种雌酚酮有关物质的HPLC分析方法，其特征在于，所述的步骤（2）b流动相梯度洗脱中流动相B中的乙腈比例为60%。
3.根据权利要求1所述的一种雌酚酮有关物质的HPLC分析方法，其特征在于，所述的步骤（2）d检测方法中的流速为0.8～1.5ml/min。
4.根据权利要求1所述的一种雌酚酮有关物质的HPLC分析方法，其特征在于，所述的步骤（2）d检测方法中的柱温为30～45℃。
5.根据权利要求1所述的一种雌酚酮有关物质的HPLC分析方法，其特征在于，所述的步骤（2）d检测方法中的样品溶液的浓度为0.5～5mg/ml。
6.根据权利要求5所述的一种雌酚酮有关物质的HPLC分析方法，其特征在于，所述的步骤（2）d检测方法中的样品溶液的浓度为4 mg/ml。
7.一种如权利要求1-6任一所述的HPLC分析方法，其特征在于用于雌酚酮杂质A样品的分析检测和质量控制。
8.一种如权利要求1-6任一所述的HPLC分析方法，其特征在于用于雌酚酮杂质D样品的分析检测和质量控制。
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* Cited by examiner, † Cited by third party
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Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104231025A (zh) * 2014-09-30 2014-12-24 华润紫竹药业有限公司 一种雌酚酮原料药杂质及其制备方法和作为标准品的用途
CN105277633A (zh) * 2014-07-26 2016-01-27 浙江仙琚制药股份有限公司 一种炔诺酮衍生物及其中间体的杂质检测分析方法
CN105891342A (zh) * 2014-11-06 2016-08-24 常州市第四制药厂有限公司 烯丙雌醇杂质的制备方法及其在烯丙雌醇质量分析中的应用

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105277633A (zh) * 2014-07-26 2016-01-27 浙江仙琚制药股份有限公司 一种炔诺酮衍生物及其中间体的杂质检测分析方法
CN104231025A (zh) * 2014-09-30 2014-12-24 华润紫竹药业有限公司 一种雌酚酮原料药杂质及其制备方法和作为标准品的用途
CN105891342A (zh) * 2014-11-06 2016-08-24 常州市第四制药厂有限公司 烯丙雌醇杂质的制备方法及其在烯丙雌醇质量分析中的应用

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Determination of estradiol and its degradation products by liquid chromatography;Lucie Nováková等;《Journal of Chromatography A》;20060208;第1119卷;第216–223页 *
HPLC determination of estradiol, its degradation product, and preservatives in new topical formulation Estrogel HBF;Lucie Nováková等;《Anal Bioanal Chem》;20041231;第379卷;第781–787页 *
HPLC 测定炔雌醚含量和有关物质;石云峰等;《中国现代应用药学》;20130131;第30卷(第1期) *

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