CN114306370A - 反义寡核苷酸在制备治疗肾癌药物中的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及肾癌的基因治疗,具体涉及一种包含胰岛素样生长因子‑1受体IGF1R基因为靶标的反义寡核苷酸或其组合物在抑制肾癌细胞增殖和治疗肾癌中的用途。
Description
技术领域
本申请涉及肾癌的基因疗法领域,具体涉及一种以胰岛素样生长因子-1受体IGF1R基因为靶标的全硫代反义寡核苷酸或其组合物在抑制肾癌细胞增殖和治疗肾癌中的用途。
背景技术
反义寡聚脱氧核糖核苷酸(ASODN)是一类经过人工合成的寡核苷酸片段,长度多为15~30个核苷酸,主要通过碱基互补配对原则,干扰靶基因的转录和翻译,从而实现基因的靶向治疗。ASODN具有候选靶点丰富,定向合理设计,体内外作用高效和可人工大规模合成等优势,被认为是极具潜力的基因治疗药物。近几年,随着核苷酸化学修饰技术和递送技术的突破,ASODN药物研发掀起了新的浪潮,国内外一些著名制药企业已将反义药物作为其新药研发的重点方向之一。目前已有9款反义寡核苷酸药物上市(表1)。
表1已上市的反义寡核苷酸药物
肾癌是泌尿系常见的恶性肿瘤之一,其发病机制复杂,临床无明显症状,多数肾癌患者检查时已确诊为晚期,全球每年大约40万人罹患肾脏恶性肿瘤,其中17.5万人死于此疾病。
因此,本领域存在开发出治疗肾癌的药物的需求。
发明内容
对此,本申请通过设计出独特序列的靶向胰岛素样生长因子-1受体IGF1R的反义寡核酸S-ASODN-1来治疗肾癌,解决了此技术问题。
本申请首次发现,针对胰岛素样生长因子-1受体IGF1R的具有特定序列的反义寡核苷酸S-ASODN-1可以有效地抑制肾癌细胞增殖和肾癌肿瘤的生长,用于治疗肾癌。实质上,现有的目前已经批准或者进入临床阶段的治疗肾癌的药物中并没有一个以胰岛素样生长因子-1受体IGF1R为靶点。并且目前在研的与IGF1R受体为靶点的药物的适应症中并不涉及肾癌(具体描述见下表2和表3)。并且,并不是针对IGF1R的任何序列的反义寡核苷酸能够治疗肾癌,例如本申请的其他反义寡核苷酸序列S-ASODN-2,S-ASODN-3,S-ASODN-4,S-ASODN-5均不能抑制肾癌细胞增殖和肾癌肿瘤的生长,不能用于治疗肾癌(参见实施例2)。
肾癌约占成人恶性肿瘤的2%~3%,占成人肾脏恶性肿瘤的80%~90%。世界范围内各国或各地区的发病率各不相同,总体上发达国家发病率高于发展中国家,城市地区高于农村地区,男性多于女性,男女患者比例约为2∶1,发病年龄可见于各年龄段,高发年龄50~70岁。据全国肿瘤防治研究办公室和卫生部卫生统计信息中心统计我国试点市、县肿瘤发病及死亡资料显示我国肾癌发病率呈逐年上升趋势,至2008年已经成为我国男性恶性肿瘤发病率第10位。
肾癌的病因未明。已经明确的与肾癌发病相关因素有遗传、吸烟、肥胖、高血压及抗高血压治疗等有关。
表2介绍了目前已经批准或者进入临床阶段的用于治疗肾癌相关的药物,由表2中可见,目前在研究的治疗肾癌的药物中并没有任何一个以胰岛素样生长因子-1受体IGF1R为靶点。
胰岛素样生长因子(IGFs),亦称生长调节素,包括IGF-I和IGF-II,这些生长因子只有与其受体IGF1R结合才能发挥生物效应。胰岛素样生长因子-1受体IGF1R属受体酪氨酸激酶家族,位于细胞膜上,与IGFs结合后发生二聚化,酪氨酸结构域得以靠近并引发自身磷酸化,随即激活胞内RAS-RAF-MAPK、PI3K-PKB/AKT等细胞增殖相关的信号通路。IGF1R的活化对刺激肿瘤细胞的生长和存活至关重要。
表3显示了目前在研的以IGF1R受体为靶点的药物的适应症情况,其中并不涉及肾癌。
简单来说,本申请根据已公开的胰岛素样生长因子-1受体IGF1R的mRNA序列BC113610.1作为靶标进行抗肿瘤反义寡核酸的设计,通过与GeneBank联机blast序列比对,所选择的靶序列具有很好的特异性,不会干扰人类其他正常基因的表达。对设计的若干反义寡核苷酸进行了全硫代修饰,以延长在体内的作用时间,并通过固相方法进行合成。细胞增殖抑制实验结果显示,此系列全硫代反义寡核苷酸对肾癌细胞的抑制活性差别很大,在1~32μmol/L浓度范围内,S-ASODN-2~5对人肾透明细胞癌细胞KCC853和786-O无抑制作用,S-ASODN-1活性最高,与阳性对照索拉非尼的效果相当。S-ASODN-1对KCC853和786-O细胞的抑制率在8μmol/L时分别为33.06%和60.02%,在16μmol/L时分别为41.85%和75.73%,在32μmol/L时分别为64.03%和94.30%。人肾癌细胞裸鼠原位移植瘤模型生长抑制实验结果表明,S-ASODN-1对两种人肾癌肿瘤模型的生长均有较强的抑制效应,呈现剂量依赖特征。3.75mg/kg是对各个模型均有效的最小剂量;在剂量3.75~7.5mg/kg范围内,该反义药物对肿瘤的生长抑制作用与阳性药索拉非尼相当。
因此,针对胰岛素样生长因子-1受体IGF1R的具有特定序列的反义寡核苷酸S-ASODN-1可以有效地抑制肾癌细胞增殖和肾癌肿瘤的生长,用于治疗肾癌。
具体来说,本申请提供了如下技术方案:
一方面,本申请涉及治疗有效量的靶向IGFIR基因的硫代反义寡核苷酸或其组合物在制备用于抑制肾癌细胞增殖和在患有肾癌的受试者中治疗肾癌的药物中的用途,所述靶向IGFIR基因的硫代反义寡核苷酸的序列为5’-TCCTCCGGAGCCAGACTTCA-3’或与该序列80%以上的核苷酸同一性的核苷酸序列,优选的为与该序列95%以上的核苷酸同一性的核苷酸序列。
术语“核苷酸同一性”是指两个核苷酸序列中相同的核苷酸数量占其中一个核苷酸序列中核苷酸数量的百分比,比如,序列1为5’-TCCTCCGGAGCCAGACTTCA-3’(20个核苷酸),序列2为TCCTCCGGAGCCAGACTT(18个核苷酸),序列2与序列1具有90%的核苷酸同一性。
在一个优选的实施方案中,在本申请的组合物的用途中,所述反义寡核苷酸还具有其他的化学修饰。
在一个优选的实施方案中,在本申请的组合物的用途中,所述其他的化学修饰选自以下的一种或多种:锁核酸修饰、2位甲氧乙基修饰和2位氧甲基修饰。
在一个优选的实施方案中,在本申请的组合物的用途中,所述组合物进一步包含至少一种另外的活性剂。
在一个优选的实施方案中,在本申请的组合物的用途中,所述至少一种另外的活性剂是治疗剂或非治疗剂,或治疗剂和非治疗剂的组合。
在一个优选的实施方案中,在本申请的组合物的用途中,所述至少一种另外的活性剂是治疗剂,其选自:蛋白激酶抑制剂、PD-1/PDL-1通路抑制剂、关卡抑制剂、铂基抗肿瘤剂、拓扑异构酶抑制剂、核苷代谢抑制剂、烷化剂、插入剂、微管蛋白结合剂及其组合。
在一个优选的实施方案中,在本申请的组合物的用途中,所述治疗剂是蛋白激酶抑制剂。
优选地,所述蛋白激酶抑制剂是帕唑帕尼或索拉非尼,或其组合。
在一个优选的实施方案中,在本申请的组合物的用途中,所述治疗剂是PD-1/PDL-l通路抑制剂。
在一个优选的实施方案中,在本申请的组合物的用途中,所述治疗剂选自帕姆单抗(Keytruda)、阿维鲁单抗、阿特朱单抗(MH)L3280A)、纳武单抗(BMS-936558)、pidilizumab(MK-3475)、MSB0010718C和MEDI4736。
在一个优选的实施方案中,在本申请的组合物的用途中,所述至少一种另外的活性剂是非治疗剂。
优选地,所述非治疗剂选自:止吐药、抗贫血药和抗黏膜炎药。
在一个优选的实施方案中,在本申请的组合物的用途中,所述非治疗剂选自昂丹司琼、格拉司琼、多拉司琼和帕洛诺司琼。
在一个优选的实施方案中,在本申请的组合物的用途中,所述肾癌对于标准治疗是难以治疗的或所述肾癌是转移性的。
在一个优选的实施方案中,在本申请的组合物的用途中,所述肾癌选自肾透明细胞癌、移形细胞癌、维尔姆斯瘤(肾母细胞瘤)、肾肉瘤和良性(非癌性)肾脏肿瘤、肾腺瘤、嗜酸细胞瘤和血管肌脂瘤。
在一个优选的实施方案中,在本申请的靶向IGFIR基因的硫代反义寡核苷酸或其组合物的用途中,所述组合物被配制为冻干剂或者注射剂。
在一个优选的实施方案中,在本申请的靶向IGFIR基因的硫代反义寡核苷酸或其组合物的用途中,所述靶向IGFIR基因的硫代反义寡核苷酸或其组合物与一种或多种抗癌疗法组合施用。
在一个优选的实施方案中,在本申请的靶向IGFIR基因的硫代反义寡核苷酸或其组合物的用途中,所述抗癌疗法为抗癌放射治疗或/和外科手术切除术。
根据本申请的靶向IGFIR基因的硫代反义寡核苷酸或其组合物或者治疗组合依不同情况包括特定药物的药代动力学、药物动力学、给药模式、给药途径、受者的年龄、体重、肝肾功能状态、疾病的程度及治疗时限等,以适宜的剂量给药。
本申请所取得的有益效果至少如下:
本申请以胰岛素样生长因子-1受体IGF1R的mRNA序列为靶标,设计并合成出的全硫代反义寡核酸具有良好的抑制人肾透明细胞癌细胞株增殖活性和人肾癌细胞裸鼠原位移植瘤模型生长抑制活性。细胞增殖抑制实验结果显示,此系列全硫代反义寡核苷酸对肾癌细胞的抑制活性差别很大,S-ASODN-2~5对人肾透明细胞癌细胞KCC853和786-O基本无抑制作用,S-ASODN-1活性最高,抑制效果与阳性对照索拉非尼在同一水平,S-ASODN-1对KCC853和786-O细胞的抑制率在8μmol/L时分别为33.06%和60.02%,在16μmol/L时分别为41.85%和75.73%,在32μmol/L时分别为64.03%和94.30%。S-ASODN-1对人肾透明细胞癌细胞株KCC-853和786-O裸鼠原位移植瘤模型生长均有较强的抑制效应,各个模型均有效的最小剂量为3.75mg/kg,在剂量3.75~7.5mg/kg范围内,该反义药物对肿瘤的生长抑制作用与阳性药索拉非尼相当。
附图说明
图1为小鼠正常肾脏B超图片。
图2为小鼠肾原位肿瘤B超图片。
图3为S-ASODN-1对人肾透明细胞癌细胞株KCC-853的原位裸鼠体重影响。
图4为S-ASODN-1作用于人肾透明细胞癌细胞株KCC-853原位裸鼠肿瘤模型后肾肿瘤拍照图片。
图5为S-ASODN-1对人肾透明细胞癌细胞株KCC-853的原位裸鼠肿瘤模型瘤重的生长影响。
图6为S-ASODN-1对人肾透明细胞癌细胞株KCC-853的原位裸鼠肿瘤模型生长抑制影响(给药10次)。
图7为S-ASODN-1对人肾透明细胞癌细胞株786-O的原位裸鼠体重影响。
图8为S-ASODN-1作用于人肾透明细胞癌细胞株786-O原位裸鼠肿瘤模型后肾肿瘤拍照图片。
图9为S-ASODN-1对人肾透明细胞癌细胞株786-O的原位裸鼠肿瘤模型瘤体积的生长影响。
图10为S-ASODN-1对人肾透明细胞癌细胞株786-O的原位裸鼠肿瘤模型生长抑制影响(给药10次)。
实施例
实施例1:全硫代反义寡核苷酸的合成
1.S-ASODN-1(序列为:5’-TCCTCCGGAGCCAGACTTCA-3’(SEQ ID NO:1))
采用固相合成方法进行合成,所用仪器为美国GE公司OligoPilot400合成仪,合成步骤如下:
1)脱保护
二氯乙酸的甲苯溶液作为脱保护试剂,脱去载体上起始核苷dA(bz)的5'-DMT保护基,游离出5'-羟基。
2)偶联
乙腈为溶剂,使用5-乙硫基四氮唑作为活化剂,对dC(bz)亚磷酰胺单体进行活化,形成活性中间体,再与核苷dA(bz)的5'-羟基发生缩合反应,进行偶联。
3)硫代
氢化黄元素为硫代试剂,将亚磷酸酯氧化成稳定的硫代磷酸酯。
4)羟基保护
乙酸酐为保护试剂,对未发生偶联反应的核苷的5'-羟基进行保护。
重复上述步骤1)-4),直至S-ASODN序列偶联完成。
5)脱保护
二氯乙酸为脱保护试剂,脱去最后一个核苷dT的DMT保护基,得到与载体相连的S-ASODN-1。
6)氨解
加入浓氨水进行氨解反应,水解载体与核苷酸之间的酯键,脱掉磷酸、腺嘌呤、鸟嘌呤和胞嘧啶上的保护基。过滤,用乙醇水溶液淋洗,收集滤液。
7)纯化
滤液用反相柱层析,冻干得产品,纯度93.2%。
2.S-ASODN-2(序列为:5’-TTCATTCCTTTTATTTGGGA-3’(SEQ ID NO:2))、S-ASODN-3(序列为:5’-GGACCCTCCTCCGGAGCC-3’(SEQ ID NO:3))、S-ASODN-4(序列为:5’-GAGAAACAGGAGCCCCCACA-3’(SEQ ID NO:4))和S-ASODN-5(序列为:5’-GCGCGGCTGGAAAGCGCGTT-3’(SEQ ID NO:5))的合成方法同上,纯度分别为91.1%、93.5%、92.4%和92.8%。
实施例2:细胞增殖抑制实验
1实验材料
受试样品:
全硫代反义寡核苷酸S-ASODN-1(序列为:
5’-TCCTCCGGAGCCAGACTTCA-3’)、S-ASODN-2(序列为:
5’-TTCATTCCTTTTATTTGGGA-3’)、S-ASODN-3(序列为:
5’-GGACCCTCCTCCGGAGCC-3’)、S-ASODN-4(序列为:
5’-GAGAAACAGGAGCCCCCACA-3’)和S-ASODN-5(序列为:
5’-GCGCGGCTGGAAAGCGCGTT-3’)
阳性药物:索拉非尼
细胞种类:人肾透明细胞癌细胞株KCC-853、人肾透明细胞癌细胞786-O
2实验方法
采用MTT法检测受试样品对人肾透明细胞癌细胞株KCC-853和786-O的生长抑制情况,索拉非尼为阳性对照。
取传代培养的Kcc853和786-O细胞株,将对数生长的细胞用10%胎牛血清DMEM培养液(补充青、链霉素各100uL/mL)稀释至5~9×104个/mL接种于96孔培养板,每孔200μL,贴壁生长24h。分设不同浓度样品组和对照组(1、2、4、8、16、32μmol/L),各设三个复孔,继续培养48h后吸出培养液,每孔加入200μL用细胞培养液稀释为0.5mg/mL的MTT液,继续培养4h后,去上清。每孔加入200μLDMSO,微量震荡器震荡10min,使甲瓒彻底溶解,用酶标仪检测波长为570nm时的吸光度(OD)值。根据公式:抑制率(%)=[(空白对照组OD值-试验组OD值)/空白对照组OD值]×100%计算抑制率。
3实验结果
表4对人肾透明细胞癌细胞株KCC-853生长的抑制作用
表5对人肾透明细胞癌细胞786-O生长的抑制作用
从表4和表5可以看出,合成的全硫代反义寡核苷酸序列S-ASODN-2~5在1~32μmol/L浓度范围内,对人肾透明细胞癌细胞株KCC-853和786-O无抑制作用。S-ASODN-1在1μmol/L时即显示出抑制活性,且随着浓度的增加,抑制作用增强。S-ASODN-1的细胞增殖抑制作用最好,对KCC853和786-O细胞的抑制率在8μmol/L时分别为33.06%和60.02%,在16μmol/L时分别为41.85%和75.73%,在32μmol/L时分别为64.03%和94.30%,与对照索拉非尼作用效果相当。
由此可知,以胰岛素样生长因子-1受体IGF1R的mRNA序列作为靶标的反义寡核苷酸序列对肾癌细胞的抑制作用差别很大。并不是针对IGF1R的任何序列的反义寡核苷酸能够治疗肾癌,例如本申请的其他反义寡核苷酸序列S-ASODN-2,S-ASODN-3,S-ASODN-4,S-ASODN-5均不能抑制肾癌细胞增殖和肾癌肿瘤的生长,不能用于治疗肾癌。相反,针对胰岛素样生长因子-1受体IGF1R的具有特定序列的反义寡核苷酸S-ASODN-1可以有效地抑制肾癌细胞增殖,用于治疗肾癌。
实施例3:S-ASODN-1对人肾透明细胞癌细胞株KCC-853裸鼠原位移植瘤模型生长抑制实验
1实验材料
受试样品:全硫代反义寡核苷酸S-ASODN-1(序列为:
5’-TCCTCCGGAGCCAGACTTCA-3’)
阳性药物:索拉非尼
药物溶媒:氯化钠注射液
实验动物:4~6周Nu/Nu裸鼠,体重18.0~20.0g,雄性55只,购自北京维通利华实验动物技术有限公司。受试动物饲养于无菌的独立送风IVC笼中,每笼5~6只。垫料为60Co辐射消毒的玉米芯垫料,粒径4~6mm。饲以专门为小鼠配制的消毒饲料,自由饮用纯净水。动物实验室内温度保持在25℃左右,相对湿度保持在40~70%,每日光照12小时。
2实验方法
2.1细胞培养:
细胞培养于含10%胎牛血清的DMEM细胞培养液中(补充青、链霉素各100μL/mL),置于37℃含5%CO2的细胞培养箱中,每1~2天换液一次。用0.25%胰酶消化传代,1000r/min离心5分钟后,弃上清液,加入新鲜培养基传代培养。
2.2皮下移植瘤模型保种:
将传代培养的肿瘤细胞,在无菌条件下将细胞消化成悬液,以氯化钠注射液冲洗后重悬成悬液,给予裸鼠右前肢腋部皮下接种保种。
2.3肾原位肿瘤模型的建立:
待保种裸鼠皮下肿瘤生长至直径约1~2cm时(体积>1000mm3),无菌条件下取出瘤块,将瘤块切成约1.0×1.0mm大小的瘤块备用。将要手术接种的裸鼠以0.5%戊巴比妥10mL/kg麻醉后,将裸鼠固定在手术台上,消毒背部皮肤,在右侧背部剪开约1cm切口,暴露肾脏,手术洞巾覆盖。将准备好的瘤块放入专用接种套管针内,用套管针将瘤块植入肾脏内,创口出血部位用消毒纱布和无菌棉棒进行止血处理。然后将手术后的肾脏放回小鼠体内,用4/0号手术缝合针依次缝合肌肉和皮肤。
2.4实验分组及处理方案:
实验预设空白模型对照组、S-ASODN-1高剂量(15mg/kg)组、S-ASODN-1中剂量(7.5mg/kg)组、S-ASODN-1低剂量(3.75mg/kg)组及阳性药索拉非尼(20mg/kg)组。
待术后3周,用动物B超检测模型肿瘤生长情况,选取已生长原位肿瘤,且肿瘤大小相似的动物按动物体重随机分组。尾静脉注射给药,每间隔48小时给药一次;阳性药索拉非尼间隔24小时灌胃给药一次。
实验结束后,颈部脱臼处死动物。解剖取肾脏,取出右侧荷瘤肾脏和对侧正常肾脏,分别称重;每个动物右侧荷瘤肾脏重量与左侧正常肾脏重量之差,作为荷瘤肾脏的肿瘤净重量。
2.5数据处理
数据用X±S表示;荷瘤肾脏生长抑制率=(对照组荷瘤肾脏重量-给药组荷瘤肾脏重量)/对照组荷瘤肾脏重量×100%;肿瘤净重量抑制率=(对照组肿瘤净重量-给药组肿瘤净重量)/对照组肿瘤净重量×100%;肾脏系数=肾重/体重×100%。
2.6肾模型B超检查
动物B超检查图例见图1、2。
3实验结果
受试药组的给药剂量为高剂量(15mg/kg)组、中剂量(7.5mg/kg)组、低剂量(3.75mg/kg)组,阳性药为索拉非尼(20mg/kg)组。给药时间为受试间隔48小时静脉注射给药一次,阳性药间隔24小时灌胃给药一次。
各受试药组在给药期间动物体重没有明显下降(见图3)。
受试药共给药10次。与空白模型对照组比较,高剂量(15mg/kg)组荷瘤肾脏生长抑制率为58.4%,肿瘤净重量抑制率为76.8%;中剂量(7.5mg/kg)组荷瘤肾脏生长抑制率为52.1%,肿瘤净重量抑制率为72.6%;低剂量(3.75mg/kg)组荷瘤肾脏生长抑制率为46.9%,肿瘤净重量抑制率为62.5%;阳性组荷瘤肾脏生长抑制率为46.9%,肿瘤净重量抑制率为60.4%(见图4、5、6)。
各给药组对肿瘤生长均有明显的抑制作用,受试药各剂量组对肿瘤生长抑制作用呈现剂量依赖特征。针对胰岛素样生长因子-1受体IGF1R的具有特定序列的反义寡核苷酸S-ASODN-1的低剂量(3.75mg/kg)组对人肾透明细胞癌细胞株KCC-853裸鼠原位移植瘤的生长抑制作用与阳性药索拉非尼相当,可以有效地抑制肾癌肿瘤的生长,用于治疗肾癌。
实施例4:S-ASODN-1对人肾透明细胞癌细胞786-O裸鼠原位移植瘤模型生长抑制实验
1实验材料
同实施例3
2实验方法
2.1~2.4同实施例3
2.5数据处理
数据用X±S表示;荷瘤肾脏生长抑制率=(对照组荷瘤肾脏重量-给药组荷瘤肾脏重量)/对照组荷瘤肾脏重量×100%;肿瘤净重量抑制率=(对照组肿瘤净重量-给药组肿瘤净重量)/对照组肿瘤净重量×100%;肾脏系数=肾重/体重×100%。肿瘤体积公式:V=1/2×长径a×短径b2,计算肿瘤体积(mm3)瘤体积生长抑制率=(对照组肿瘤体积-给药组肿瘤体积)/对照组肿瘤×100%。
3实验结果
受试药组的给药剂量为S-ASODN-1高剂量(15mg/kg)组、S-ASODN-1中剂量(7.5mg/kg)组、S-ASODN-1低剂量(3.75mg/kg)组,阳性药为索拉非尼(20mg/kg)组。给药时间为受试间隔48小时静脉注射给药一次,阳性药间隔24小时灌胃给药一次。
受试药连续给药10次。各受试药组在给药期间动物体重未出现明显下降,没有动物死亡现象(见图7)。
本组实验多数荷瘤在肾实质内生长,遂纵向剖开肾组织,直接用卡尺测量肿瘤的长短径,按照公式V=1/2×长径a×短径b2,计算肿瘤体积(mm3)。肉眼观察,各组手术接种的肾脏中均有无肿瘤形成者,空白模型对照组为8/9,高剂量(15mg/kg)组为4/8,中剂量(7.5mg/kg)组为4/8,低剂量(3.75mg/kg)组为5/8,阳性药物组为8/9。根据瘤体积,分别计算各处理组荷瘤右肾的肿瘤生长抑制率(全部动物数)和计算肉眼可见肿瘤组织肾脏的肿瘤生长抑制率(肉眼可见)(见图8)。
受试药连续给药10次,与空白模型对照组比较,高剂量(15mg/kg)组:肿瘤生长抑制率为82.6%(9vs 9),肉眼可见肿瘤组织的肿瘤生长抑制率65.1%(4vs 8);中剂量(7.5mg/kg)组:肿瘤生长抑制率为88.8%(9vs 9),肉眼可见肿瘤组织的肿瘤生长抑制率77.6%(4vs 8);低剂量(3.75mg/kg)组:肿瘤生长抑制率为83.1%(9vs 9),肉眼可见肿瘤组织的肿瘤生长抑制率为72.9%(5vs 8)。阳性药物组:肿瘤生长抑制率为40.7%(9vs 9),肉眼可见肿瘤组织的肿瘤生长抑制率为40.7%(8vs 8)(见图9,图10)。
高剂量(15mg/kg)组瘤重抑制率为46.9%,7.5mg/kg组瘤重抑制率为29.7%,3.75mg/kg组瘤重制率为35.9%,阳性药物组瘤重抑制率为35.2%(见图10)。
各给药组对肿瘤生长均有明显的抑制作用,受试药各剂量组对人肾透明细胞癌细胞786-O裸鼠原位移植瘤生长抑制作用较好。各受试药组与阳性对照组比较,对原位肿瘤生长的抑制作用均优于阳性药物对照组。因此针对胰岛素样生长因子-1受体IGF1R的具有特定序列的反义寡核苷酸S-ASODN-1对人肾透明细胞癌细胞786-O裸鼠原位移植瘤的生长抑制作用与阳性药索拉非尼相当,可以有效地抑制肿瘤的生长,用于治疗肾癌。
序列表
<110> 杭州天龙药业有限公司
<120> 反义寡核苷酸在制备治疗肾癌药物中的应用
<130> PA211-245
<160> 5
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 1
tcctccggag ccagacttca 20
<210> 2
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 2
ttcattcctt ttatttggga 20
<210> 3
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 3
ggaccctcct ccggagcc 18
<210> 4
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 4
gagaaacagg agcccccaca 20
<210> 5
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 5
gcgcggctgg aaagcgcgtt 20
Claims (18)
1.治疗有效量的靶向IGFIR基因的硫代反义寡核苷酸或其组合物在制备用于抑制肾癌细胞增殖和在患有肾癌的受试者中治疗肾癌的药物中的用途,所述靶向IGFIR基因的硫代反义寡核苷酸的序列为5’-TCCTCCGGAGCCAGACTTCA-3’或与该序列80%以上的核苷酸同一性的核苷酸序列,优选的为与该序列95%以上的核苷酸同一性的核苷酸序列。
2.根据权利要求1所述的用途,其中所述靶向IGFIR基因的硫代反义寡核苷酸还具有其他的化学修饰。
3.根据权利要求2所述的用途,其中所述其他的化学修饰选自以下的一种或多种:锁核酸修饰、2位甲氧乙基修饰和2位氧甲基修饰。
4.根据前述权利要求中任一项所述的用途,其中所述组合物进一步包含至少一种另外的活性剂。
5.根据权利要求4所述的用途,其中所述至少一种另外的活性剂是治疗剂或非治疗剂,或治疗剂和非治疗剂的组合。
6.根据权利要求5所述的用途,其中所述至少一种另外的活性剂是治疗剂,其选自:蛋白激酶抑制剂、PD-1/PDL-1通路抑制剂、关卡抑制剂、铂基抗肿瘤剂、拓扑异构酶抑制剂、核苷代谢抑制剂、烷化剂、插入剂、微管蛋白结合剂及其组合。
7.根据权利要求6所述的用途,其中所述治疗剂是蛋白激酶抑制剂。
8.根据权利要求7所述的用途,其中所述蛋白激酶抑制剂是帕唑帕尼或索拉非尼,或其组合。
9.根据权利要求6所述的用途,其中所述治疗剂是PD-1/PDL-l通路抑制剂。
10.根据权利要求9所述的用途,其中所述治疗剂选自帕姆单抗(Keytruda)、阿维鲁单抗、阿特朱单抗(MH)L3280A)、纳武单抗(BMS-936558)、pidilizumab(MK-3475)、MSB0010718C和MEDI4736。
11.根据权利要求5所述的用途,其中所述至少一种另外的活性剂是非治疗剂。
12.根据权利要求9所述的用途,其中所述非治疗剂选自:止吐药、抗贫血药和抗黏膜炎药。
13.根据权利要求12所述的用途,其中所述非治疗剂选自昂丹司琼、格拉司琼、多拉司琼和帕洛诺司琼。
14.根据前述权利要求中任一项所述的用途,其中所述肾癌对于标准治疗是难以治疗的或所述肾癌是转移性的。
15.根据前述权利要求中任一项所述的用途,其中所述肾癌选自肾透明细胞癌、移形细胞癌、维尔姆斯瘤(肾母细胞瘤)、肾肉瘤和良性(非癌性)肾脏肿瘤、肾腺瘤、嗜酸细胞瘤和血管肌脂瘤。
16.根据前述权利要求中任一项所述的用途,其中所述靶向IGFIR基因的硫代反义寡核苷酸或其组合物被配制为冻干剂或者注射剂。
17.根据前述权利要求中任一项所述的用途,其中所述靶向IGFIR基因的硫代反义寡核苷酸或其组合物与一种或多种抗癌疗法组合施用。
18.根据权利要求17的用途,其中所述抗癌疗法为抗癌放射治疗或/和外科手术切除术。
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Citations (4)
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---|---|---|---|---|
CN1358859A (zh) * | 2000-12-11 | 2002-07-17 | 中国人民解放军军事医学科学院放射医学研究所 | 细胞增殖受体igfir基因靶标的反义寡核苷酸结构和用途 |
CN107249638A (zh) * | 2014-11-07 | 2017-10-13 | 拉姆医疗公司 | 阿匹莫德用于治疗肾癌 |
WO2021142454A1 (en) * | 2020-01-11 | 2021-07-15 | Oncolmmunin, Inc. | Targeted and localized in vivo delivery of oligonucleotides |
CN113150041A (zh) * | 2021-03-31 | 2021-07-23 | 北京悦康科创医药科技股份有限公司 | 一种硫代寡核苷酸的制备方法 |
-
2021
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Patent Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN1358859A (zh) * | 2000-12-11 | 2002-07-17 | 中国人民解放军军事医学科学院放射医学研究所 | 细胞增殖受体igfir基因靶标的反义寡核苷酸结构和用途 |
CN107249638A (zh) * | 2014-11-07 | 2017-10-13 | 拉姆医疗公司 | 阿匹莫德用于治疗肾癌 |
WO2021142454A1 (en) * | 2020-01-11 | 2021-07-15 | Oncolmmunin, Inc. | Targeted and localized in vivo delivery of oligonucleotides |
CN113150041A (zh) * | 2021-03-31 | 2021-07-23 | 北京悦康科创医药科技股份有限公司 | 一种硫代寡核苷酸的制备方法 |
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
苏影等: "胰岛素样生长因子1在肾癌组织中的表达研究进展", 中国医药导报 * |
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