CN114306122B - 一种祛斑美白成分及其制备化妆品的用途 - Google Patents
一种祛斑美白成分及其制备化妆品的用途 Download PDFInfo
- Publication number
- CN114306122B CN114306122B CN202111381537.3A CN202111381537A CN114306122B CN 114306122 B CN114306122 B CN 114306122B CN 202111381537 A CN202111381537 A CN 202111381537A CN 114306122 B CN114306122 B CN 114306122B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- polysaccharide
- solution
- collecting
- freckle
- purified water
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 239000002537 cosmetic Substances 0.000 title claims abstract description 17
- 230000002087 whitening effect Effects 0.000 title claims abstract description 15
- 208000003351 Melanosis Diseases 0.000 title claims abstract description 14
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title abstract description 3
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 claims abstract description 65
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 claims abstract description 64
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 claims abstract description 64
- 241000208680 Hamamelis mollis Species 0.000 claims abstract description 26
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 18
- 229940118846 witch hazel Drugs 0.000 claims abstract description 17
- 239000008213 purified water Substances 0.000 claims abstract description 15
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 10
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 claims abstract description 6
- 239000007787 solid Substances 0.000 claims abstract description 6
- 239000002904 solvent Substances 0.000 claims abstract description 5
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims abstract description 4
- 238000010992 reflux Methods 0.000 claims abstract description 4
- 230000001376 precipitating effect Effects 0.000 claims abstract description 3
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 25
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 16
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 12
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 claims description 12
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 claims description 9
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 claims description 8
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 claims description 8
- 238000010828 elution Methods 0.000 claims description 8
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims description 8
- 238000011068 loading method Methods 0.000 claims description 7
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 7
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 7
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 claims description 6
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims description 6
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 5
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 claims description 5
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N N-Butanol Chemical compound CCCCO LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 238000000746 purification Methods 0.000 claims description 4
- 241000142952 Hamamelidaceae Species 0.000 claims description 3
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 claims description 3
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 claims description 3
- 238000005238 degreasing Methods 0.000 claims description 3
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 claims description 3
- 238000007605 air drying Methods 0.000 claims description 2
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 claims description 2
- 238000010298 pulverizing process Methods 0.000 claims description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 19
- 102000003425 Tyrosinase Human genes 0.000 abstract description 14
- 108060008724 Tyrosinase Proteins 0.000 abstract description 14
- 230000008099 melanin synthesis Effects 0.000 abstract description 6
- 206010014970 Ephelides Diseases 0.000 abstract description 3
- 101710147108 Tyrosinase inhibitor Proteins 0.000 abstract description 3
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 abstract description 3
- 241000208690 Hamamelis Species 0.000 abstract description 2
- 229920002549 elastin Polymers 0.000 description 11
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 9
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 8
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 8
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 7
- 102000016942 Elastin Human genes 0.000 description 5
- 108010014258 Elastin Proteins 0.000 description 5
- BJRNKVDFDLYUGJ-RMPHRYRLSA-N hydroquinone O-beta-D-glucopyranoside Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1OC1=CC=C(O)C=C1 BJRNKVDFDLYUGJ-RMPHRYRLSA-N 0.000 description 5
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 4
- 210000001626 skin fibroblast Anatomy 0.000 description 4
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 4
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 3
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 3
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 3
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 2
- 239000002033 PVDF binder Substances 0.000 description 2
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 2
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 2
- REFJWTPEDVJJIY-UHFFFAOYSA-N Quercetin Chemical compound C=1C(O)=CC(O)=C(C(C=2O)=O)C=1OC=2C1=CC=C(O)C(O)=C1 REFJWTPEDVJJIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000003698 anagen phase Effects 0.000 description 2
- 239000006286 aqueous extract Substances 0.000 description 2
- 244000309466 calf Species 0.000 description 2
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 2
- UQLDLKMNUJERMK-UHFFFAOYSA-L di(octadecanoyloxy)lead Chemical compound [Pb+2].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O UQLDLKMNUJERMK-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 2
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 2
- IYRMWMYZSQPJKC-UHFFFAOYSA-N kaempferol Chemical compound C1=CC(O)=CC=C1C1=C(O)C(=O)C2=C(O)C=C(O)C=C2O1 IYRMWMYZSQPJKC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- MWDZOUNAPSSOEL-UHFFFAOYSA-N kaempferol Natural products OC1=C(C(=O)c2cc(O)cc(O)c2O1)c3ccc(O)cc3 MWDZOUNAPSSOEL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 2
- OQUKIQWCVTZJAF-UHFFFAOYSA-N phenol;sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O.OC1=CC=CC=C1 OQUKIQWCVTZJAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920002981 polyvinylidene fluoride Polymers 0.000 description 2
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 238000012827 research and development Methods 0.000 description 2
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 2
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 2
- 238000010998 test method Methods 0.000 description 2
- 208000002874 Acne Vulgaris Diseases 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- UBSCDKPKWHYZNX-UHFFFAOYSA-N Demethoxycapillarisin Natural products C1=CC(O)=CC=C1OC1=CC(=O)C2=C(O)C=C(O)C=C2O1 UBSCDKPKWHYZNX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 102100031181 Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase Human genes 0.000 description 1
- 241000208681 Hamamelis virginiana Species 0.000 description 1
- WTDRDQBEARUVNC-LURJTMIESA-N L-DOPA Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C(O)=C1 WTDRDQBEARUVNC-LURJTMIESA-N 0.000 description 1
- WTDRDQBEARUVNC-UHFFFAOYSA-N L-Dopa Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C(O)=C1 WTDRDQBEARUVNC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000004316 Oxidoreductases Human genes 0.000 description 1
- 108090000854 Oxidoreductases Proteins 0.000 description 1
- ZVOLCUVKHLEPEV-UHFFFAOYSA-N Quercetagetin Natural products C1=C(O)C(O)=CC=C1C1=C(O)C(=O)C2=C(O)C(O)=C(O)C=C2O1 ZVOLCUVKHLEPEV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HWTZYBCRDDUBJY-UHFFFAOYSA-N Rhynchosin Natural products C1=C(O)C(O)=CC=C1C1=C(O)C(=O)C2=CC(O)=C(O)C=C2O1 HWTZYBCRDDUBJY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010042496 Sunburn Diseases 0.000 description 1
- 206010000496 acne Diseases 0.000 description 1
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- ABVGBHFCFRAMMO-UHFFFAOYSA-N chromen-2-one 3-phenylprop-2-enoic acid Chemical compound OC(=O)C=Cc1ccccc1.O=c1ccc2ccccc2o1 ABVGBHFCFRAMMO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 239000003480 eluent Substances 0.000 description 1
- 235000019441 ethanol Nutrition 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 239000009609 fructus phyllanthi Substances 0.000 description 1
- 108020004445 glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase Proteins 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 235000008777 kaempferol Nutrition 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 1
- PGXWDLGWMQIXDT-UHFFFAOYSA-N methylsulfinylmethane;hydrate Chemical compound O.CS(C)=O PGXWDLGWMQIXDT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UXOUKMQIEVGVLY-UHFFFAOYSA-N morin Natural products OC1=CC(O)=CC(C2=C(C(=O)C3=C(O)C=C(O)C=C3O2)O)=C1 UXOUKMQIEVGVLY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 150000004804 polysaccharides Polymers 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 235000005875 quercetin Nutrition 0.000 description 1
- 229960001285 quercetin Drugs 0.000 description 1
- 238000007430 reference method Methods 0.000 description 1
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 1
- 238000001878 scanning electron micrograph Methods 0.000 description 1
- 210000002374 sebum Anatomy 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 235000020183 skimmed milk Nutrition 0.000 description 1
- 230000037394 skin elasticity Effects 0.000 description 1
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 235000018553 tannin Nutrition 0.000 description 1
- 229920001864 tannin Polymers 0.000 description 1
- 239000001648 tannin Substances 0.000 description 1
- 239000002699 waste material Substances 0.000 description 1
- 230000037303 wrinkles Effects 0.000 description 1
Landscapes
- Cosmetics (AREA)
Abstract
本发明公开了一种祛斑美白成分及其制备化妆品的用途，该成分制备方法如下：取金缕梅花瓣，用无水乙醇热回流提取脱脂脱色，过滤收集固体并挥干溶剂，用纯净水加热提取、醇沉得到粗多糖，并脱蛋白；再用DEAE‑52柱层析得到多糖A，进一步用SephadexG‑100纯化得到精制多糖A。本发明提供的金缕梅精制多糖A为一种有效的酪氨酸酶抑制剂，可以抑制酪氨酸酶活性，进而抑制黑色素合成，具有祛斑美白活性。
Description
技术领域
本发明属于化妆品领域，具体涉及一种祛斑美白成分及其制备化妆品的用途。
背景技术
经过近十年的发展，中国已经成为全球第二大化妆品消费市场，市场规模仅次于美国。2019年国内化妆品市场规模达2444亿元。得益于消费升级和中国市场化妆品消费人群基数大，到2025年，中国化妆品市场规模预计将达到5400亿元，将会超越美国成为全球第一大化妆品市场。其中，以天然来源的成分作为有效成分的化妆品因为其纯净、天然、安全的特点占据了举足轻重的市场地位，且这种需求与日俱增。
金缕梅，别名木里香、牛踏果，为蔷薇目、金缕梅科、金缕梅属落叶灌木或小乔木，多分布于四川、湖北、安徽、浙江、江西、湖南及广西等省区。研究表明，金缕梅内含单宁质、槲皮素、山奈酚等化学成分，具有抑菌、调节皮脂分泌的作用，对龟裂、晒伤、粉刺也有治疗作用，因而常用于适用于青春期少年或是出油状况较严重的皮肤的化妆品中。
目前市面上金缕梅多糖对皮肤的影响研究以及含有金缕梅多糖的化妆品尚属空白。而且，金缕梅目前研究开发较多的是根，花的研究开发较少，资源浪费。
发明内容
本发明是为了提供一种祛斑美白成分及其制备化妆品的用途，该成分为一种金缕梅多糖。
本发明技术方案如下：
一种祛斑美白成分，为一种金缕梅多糖，通过如下步骤制备：
取适量金缕梅花瓣，用无水乙醇热回流提取脱脂脱色，过滤收集固体并挥干溶剂，用纯净水加热提取，水提液离心取上清液，减压浓缩，再加入4倍体积无水乙醇醇沉，收集沉淀得到粗多糖，将粗多糖用纯净水配制成粗多糖水溶液进行Sevag法脱蛋白；
DEAE-52柱层析：取适量脱蛋白粗多糖用纯净水配制成浓度为5mg/mL的溶液，上样于内径2.5cm、柱床高度30cm的DEAE-52纤维素层析柱中，上样体积为2.5mL，依次用0、0.1、0.2、0.3、0.4mol/L的NaCl溶液进行梯度洗脱，流速为2.5mL/min，每5mL收集1管，每个梯度收集20管，合并50～68管，浓缩、透析、冷冻干燥，得到多糖A；
Sephadex G-100纯化：取适量多糖A用纯净水配制成浓度为5mg/mL的溶液，上样于内径2.5cm、柱床高度30cm的Sephadex G-100层析柱中，上样体积为2.5mL，用0.1mol/L的NaCl溶液洗脱，流速为0.5mL/min，每2.5mL收集1管，合并14～30管，浓缩、透析、冷冻干燥，得到精制多糖A。
优选地，脱脂脱色的料液比为1kg：10L，每次提取2.5h，共提取3次。
优选地，纯净水加热提取料液比1kg：5L，提取温度80℃，每次提取2.5h，共提取3次。
优选地，水提液离心后的上清液在进行减压浓缩时优选浓缩至原体积的1/5。
优选地，Sevag法脱蛋白的具体方法为：将粗多糖水溶液与Sevag试剂按照体积比4:1混合，充分振荡，移入分液漏斗中静置0.5h，回收上层水溶液，重复多次直至观察不到明显的中间蛋白层，上层水溶液冷冻干燥。
上述任一祛斑美白成分用于制备祛斑美白化妆品的用途。
有益技术效果：
本发明提供了一种金缕梅多糖JZ-A，该多糖为一种有效的酪氨酸酶抑制剂，可以抑制酪氨酸酶活性，进而抑制黑色素合成，具有祛斑美白活性。
附图说明
图1为DEAE-52、Sephadex G-100纯化曲线和SEM图；
图2为Westernblot测定结果。
具体实施方式
下面通过具体的实施例详细介绍本发明实质性内容，但不能以此限定本发明的保护范围。
实施例1：
于花季收集金缕梅科金缕梅Hamamelis mollis Oliv.的花瓣(即丝缕状部分)，洗净后于阴凉处风干，粉碎备用。取适量金缕梅花瓣，按照料液比1kg：10L用无水乙醇热回流提取2.5h×3次脱脂脱色，过滤收集固体并挥干溶剂，按照料液比1kg：5L用纯净水80℃加热提取2.5h×3次，合并水提液，离心取上清液，减压浓缩至原体积的1/5，再加入4倍体积无水乙醇醇沉，收集沉淀得到粗多糖。
将粗多糖用纯净水配制成质量分数为3％的粗多糖水溶液进行Sevag法脱蛋白，具体方法为：将粗多糖水溶液与Sevag试剂(氯仿与正丁醇按体积比4:1混合而成)按照体积比4:1混合，充分振荡，移入分液漏斗中静置0.5h，回收上层水溶液，重复多次直至观察不到明显的中间蛋白层(通常共重复3次即可)，上层水溶液冷冻干燥得到脱蛋白粗多糖。
DEAE-52柱层析：取适量脱蛋白粗多糖用纯净水配制成浓度为5mg/mL的溶液，上样于DEAE-52纤维素层析柱(内径2.5cm、柱床高度30cm)中，上样体积为2.5mL，依次用0、0.1、0.2、0.3、0.4mol/L的NaCl溶液进行梯度洗脱，流速为2.5mL/min，每5mL收集1管，每个梯度收集20管，苯酚-硫酸法测定洗脱液中多糖含量(490nm吸光度值)，绘制洗脱管数与吸光度值的曲线(如图1)。分别合并50～68管、74～86管，浓缩、透析、冷冻干燥，得到多糖A、多糖B。重复上述过程多次，可以获得更多多糖A、多糖B。
Sephadex G-100纯化：分别取适量多糖A、多糖B用纯净水配制成浓度为5mg/mL的溶液，上样于Sephadex G-100层析柱(内径2.5cm、柱床高度30cm)中，上样体积为2.5mL，用0.1mol/L的NaCl溶液洗脱，流速为0.5mL/min，每2.5mL收集1管，苯酚-硫酸法测定洗脱液中多糖含量(490nm吸光度值)，绘制洗脱管数与吸光度值的曲线(如图1)。对于多糖A，合并14～30管；对于多糖B，合并4～14管。分别浓缩、透析、冷冻干燥，得到精制多糖A(JZ-A)、精制多糖B(JZ-B)。重复上述过程多次，可以获得更多JZ-A、JZ-B。
通过DEAE-52柱层析洗脱曲线可以看出，多糖A、多糖B为不同极性的多糖；通过Sephadex G-100柱层析洗脱曲线可以看出，JZ-A、JZ-B为不同分子量的多糖(洗脱参数一致但洗脱出峰管数不同)。可见，JZ-A、JZ-B为极性不同、分子量不同的两种多糖。从SEM观察到的形貌来看(如图1)，二者均具有片层状结构，但是JZ-A没有JZ-B片层上的孔洞。
实施例2：活性测试实施例
一、酪氨酸酶抑制活性
1、试验材料
金缕梅多糖JZ-A、JZ-B按照实施例1方法制备，干燥保存。
阳性对照β-熊果苷的纯度不低于98％。
实验过程中使用的水为哇哈哈纯净水，化学试剂均为常规试剂。
2、试验方法
参考文献方法(肉桂酸-香豆素酯类似物的合成及抑制酪氨酸酶活性研究，有机化学，Chin.J.Org.Chem.2020,40)测定金缕梅多糖JZ-A、JZ-B和阳性对照对酪氨酸酶的抑制率：
将金缕梅多糖JZ-A、JZ-B和阳性对照β-熊果苷分别用50％DMSO水溶液溶解，并稀释成不同浓度的溶液。将130μL磷酸缓冲溶液(50mM，pH＝6.8)、10μL酪氨酸酶溶液(终浓度33.3U/mL)和10μL待测多糖或阳性对照混匀后，加入50μL L-Dopa(终浓度0.5mM)混匀，10min后于490nm波长下测定OD值。同时设置对照组，对照组加入10μL溶媒代替多糖或阳性对照溶液。各设5个复孔，计算均值，根据如下公式计算不同浓度多糖或阳性对照对酪氨酸酶的抑制率：
抑制率(％)＝(OD对照-OD药物)/OD对照×100％。
3、试验结果
不同浓度金缕梅多糖JZ-A、JZ-B和阳性对照对酪氨酸酶的抑制率如表1所示，金缕梅多糖JZ-A、JZ-B具有较强的酪氨酸酶抑制活性，JZ-A活性明显强于阳性对照β-熊果苷，JZ-B活性略弱于阳性对照β-熊果苷。
表1不同浓度JZ-A、JZ-B和β-熊果苷对酪氨酸酶的抑制率
酪氨酸酶是一种氧化酶，且是调控黑色素生成的限速酶，直接影响黑色素的合成。抑制酪氨酸酶的活性可以有效抑制黑色素的合成。目前市面上大多数美白化妆品中均含有抑制酪氨酸酶活性的成分。上述试验结果说明，金缕梅多糖JZ-A、JZ-B为有效的酪氨酸酶抑制剂，可以抑制酪氨酸酶活性，进而抑制黑色素合成，具有祛斑美白活性。
二、弹性蛋白激活活性
1、试验材料
金缕梅多糖JZ-A、JZ-B按照实施例1方法制备，干燥保存。
人皮肤成纤维细胞(HDF)购自赛默飞，为冻存的HDF-a细胞，来自成人皮肤的正常人皮肤成纤维细胞，于原代培养结束时冻存。
小牛血清、DMEM培养基、青霉素和链霉素购自美国Gibco公司。
2、试验方法
2.1、细胞培养
将HDF细胞用含10％小牛血清、1％青霉素和1％链霉素的DMEM培养基于37℃、5％CO2、相对饱和湿度条件培养，2～3d传代，取对数生长期细胞进行试验。
2.2、Westernblot法测定弹性蛋白(Elasticin)的含量
取对数生长期HDF细胞，消化制成细胞悬液，接种于6孔板中，每孔2×105个细胞，在37℃、5％CO2、饱和湿度条件下培养；24h后，多糖组更换为含有20、40μg/mL金缕梅多糖JZ-A、JZ-B的完全培养基，对照组更换为含有等体积溶媒的完全培养基，各设3个复孔，继续培养72h后，弃去上清液，PBS洗涤收集细胞，裂解，BCA法测定蛋白浓度，取等量蛋白进行SDS-PAGE电泳，浓缩胶80V、30min，分离胶90min，将凝胶湿转到PVDF膜，5％脱脂牛奶常温封闭2h，4℃下一抗Elasticin、GAPDH孵育过夜，PBST洗膜3次，每次约15min，取相应的二抗常温孵育1.5h，PBST洗膜3次，每次15min，PVDF膜采用碧云天ECL发光液，用发光仪进行显影，拍照分析。
3、试验结果
Western blot结果如图2所示，与对照组相比，JZ-B组弹性蛋白含量显著升高，且具有明显的剂量效应；与对照组相比，JZ-A组弹性蛋白含量升高均不明显，说明金缕梅多糖JZ-B可以有效提高HDF细胞中弹性蛋白的含量，金缕梅多糖JZ-A未检测到该活性。
Elasticin是一种直接关系到皮肤弹性的蛋白，人皮肤成纤维细胞中Elasticin蛋白含量的高低直接关系到人皮肤的弹性，Elasticin蛋白含量高的皮肤不易产生皱纹、不易松弛。上述试验结果说明，金缕梅多糖JZ-B可以有效提高人皮肤成纤维细胞中Elasticin蛋白含量，具有提高人皮肤弹性的作用。
Claims (2)
1.一种祛斑美白成分，为一种金缕梅多糖，其特征在于，通过如下步骤制备：
于花季收集金缕梅科金缕梅Hamamelis mollis Oliv.的花瓣，洗净后于阴凉处风干，粉碎备用；取适量金缕梅花瓣，按照料液比1kg：10L用无水乙醇热回流提取2.5h×3次脱脂脱色，过滤收集固体并挥干溶剂，按照料液比1kg：5L用纯净水80℃加热提取2.5h×3次，合并水提液，离心取上清液，减压浓缩至原体积的1/5，再加入4倍体积无水乙醇醇沉，收集沉淀得到粗多糖；
将粗多糖用纯净水配制成质量分数为3%的粗多糖水溶液进行Sevag法脱蛋白，具体方法为：将粗多糖水溶液与Sevag试剂按照体积比4:1混合，充分振荡，移入分液漏斗中静置0.5h，回收上层水溶液，重复多次直至观察不到明显的中间蛋白层，上层水溶液冷冻干燥得到脱蛋白粗多糖；其中，所述Sevag试剂由氯仿与正丁醇按体积比4:1混合而成；
DEAE-52柱层析：取适量脱蛋白粗多糖用纯净水配制成浓度为5mg/mL的溶液，上样于内径2.5cm、柱床高度30cm的DEAE-52纤维素层析柱中，上样体积为2.5mL，依次用0、0.1、0.2、0.3、0.4mol/L的NaCl溶液进行梯度洗脱，流速为2.5mL/min，每5mL收集1管，每个梯度收集20管，合并50~68管，浓缩、透析、冷冻干燥，得到多糖A；
Sephadex G-100纯化：取适量多糖A用纯净水配制成浓度为5mg/mL的溶液，上样于内径2.5cm、柱床高度30cm的Sephadex G-100层析柱中，上样体积为2.5mL，用0.1mol/L的NaCl溶液洗脱，流速为0.5mL/min，每2.5mL收集1管，合并14~30管，浓缩、透析、冷冻干燥，即得。
2.权利要求1所述的祛斑美白成分用于制备祛斑美白化妆品的用途。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202111381537.3A CN114306122B (zh) | 2021-11-21 | 2021-11-21 | 一种祛斑美白成分及其制备化妆品的用途 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202111381537.3A CN114306122B (zh) | 2021-11-21 | 2021-11-21 | 一种祛斑美白成分及其制备化妆品的用途 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN114306122A CN114306122A (zh) | 2022-04-12 |
| CN114306122B true CN114306122B (zh) | 2024-05-10 |
Family
ID=81047600
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202111381537.3A Active CN114306122B (zh) | 2021-11-21 | 2021-11-21 | 一种祛斑美白成分及其制备化妆品的用途 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN114306122B (zh) |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2004035431A (ja) * | 2002-07-01 | 2004-02-05 | Noevir Co Ltd | 皮膚外用剤 |
| CN102940591A (zh) * | 2012-12-03 | 2013-02-27 | 晓健科技（大连）有限公司 | 一种金缕梅保湿抗敏美白面膜 |
| CN104337725A (zh) * | 2013-08-02 | 2015-02-11 | 中华全国供销合作总社南京野生植物综合利用研究院 | 一种含香水莲花提取物的美白保湿面膜及其制备方法 |
| CN112321741A (zh) * | 2020-11-15 | 2021-02-05 | 南京奥赛斯生物科技有限公司 | 一种植物源成分及其抗皮肤光老化、提高皮肤更新修复能力进而制备相关化妆品的用途 |
-
2021
- 2021-11-21 CN CN202111381537.3A patent/CN114306122B/zh active Active
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2004035431A (ja) * | 2002-07-01 | 2004-02-05 | Noevir Co Ltd | 皮膚外用剤 |
| CN102940591A (zh) * | 2012-12-03 | 2013-02-27 | 晓健科技（大连）有限公司 | 一种金缕梅保湿抗敏美白面膜 |
| CN104337725A (zh) * | 2013-08-02 | 2015-02-11 | 中华全国供销合作总社南京野生植物综合利用研究院 | 一种含香水莲花提取物的美白保湿面膜及其制备方法 |
| CN112321741A (zh) * | 2020-11-15 | 2021-02-05 | 南京奥赛斯生物科技有限公司 | 一种植物源成分及其抗皮肤光老化、提高皮肤更新修复能力进而制备相关化妆品的用途 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN114306122A (zh) | 2022-04-12 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN102451235B (zh) | 油橄榄叶提取物的制备方法 | |
| CN111718430B (zh) | 一种艾蒿多糖及其制备方法和美白、增加皮肤弹性用途 | |
| CN103432193A (zh) | 一种微波辅助双水相提取分离葛根总黄酮的方法 | |
| WO2015103974A1 (zh) | 麦角硫因的提取及纯化方法 | |
| CN101961371A (zh) | 从甜味绞股蓝中提取分离人参皂苷、黄酮、多糖的方法 | |
| CN102526127B (zh) | 蛹虫草中有效成分的闪式提取方法 | |
| CN102105131B (zh) | 含有天然材料的盐-发酵提取物的化妆品组合物 | |
| CN101229335B (zh) | 酶法制备黑刺菝葜总皂苷提取物的方法 | |
| CN112870236A (zh) | 一种黄蜀葵花黄酮类有效部位及其制备方法与应用 | |
| CN113402626A (zh) | 一种香水莲花多糖提取物及其制备方法和应用 | |
| CN108640956A (zh) | 一种从油茶籽中制备黄酮苷的方法 | |
| CN101322693B (zh) | 一种红花黄色素注射剂及其制备工艺 | |
| CN114306122B (zh) | 一种祛斑美白成分及其制备化妆品的用途 | |
| CN114276468B (zh) | 一种天然成分和在美白并增加皮肤弹性中的应用 | |
| CN116919848A (zh) | 一种美白保湿天然组合物和天然化妆品 | |
| CN106086134B (zh) | 一种桑蛋白活性肽的制备方法 | |
| CN108126000A (zh) | 新鲜三七中三七总皂苷提取制备方法 | |
| CN104945533B (zh) | 一种活性玉米须纯多糖的制备方法 | |
| CN112402346A (zh) | 一种祛痘皮肤修复组合物及应用 | |
| KR100901379B1 (ko) | 코로솔릭산 함유물질로부터 고순도의 코로솔릭산을 얻기위한 추출 정제 방법 | |
| CN101481370A (zh) | 一种广藿香酮的制备方法 | |
| CN112250655A (zh) | 两种新的环状二苯基庚烷类化合物及其制备方法和用途 | |
| CN112694538A (zh) | 一种具有美白保湿活性的东方美人茶多糖 | |
| CN110538212A (zh) | 一种从杜仲叶中提取总黄酮的制备方法 | |
| CN109223666B (zh) | 一种植物提取物组合物及其在护肤品中的应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| TA01 | Transfer of patent application right | ||
| TA01 | Transfer of patent application right |
Effective date of registration: 20240415 Address after: 2 / F, no.339-12, Hengjiang Road, Chengjiao street, Conghua District, Guangzhou, Guangdong 510000 Applicant after: Guangzhou Shuanghui Cosmetics Co.,Ltd. Country or region after: China Address before: 223005 East District of Huai'an Economic and Technological Development Zone, qingjiangpu District, Huai'an City, Jiangsu Province Applicant before: Huai'an Weiermei Cosmetics Co.,Ltd. Country or region before: China |
|
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant |