CN114288284B - 千斤拔素在制备治疗预防急性肺炎的药物中的用途 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种千斤拔素在制备治疗预防急性肺炎的药物中的用途，千斤拔素的结构式为式(I)：本发明对肺炎模型小鼠具有一定的保护作用。

Description

千斤拔素在制备治疗预防急性肺炎的药物中的用途

技术领域

本发明涉及医药技术领域。更具体地说，本发明涉及一种千斤拔素在制备治疗预防急性肺炎的药物中的用途。

背景技术

社区获得性肺炎(Community Acquired Pneumonia,CAP)指终末气道、肺泡和肺间质的炎症，是在院外由病原微生物、理化因素、免疫损伤、过敏及药物所致。支原体和细菌性肺炎是最常见的肺炎，也是最常见的感染性疾病。近年来，随着大气污染PM2.5增加，肺炎发病率有增长的趋势。有学者对肺炎病死率进行了统计，其中门诊患者小于1％～5％，住院患者约为12％，入住重症监护病房者则高达40％。严重的脓毒症和脓毒症休克病因中，肺炎约占一半。呼吸系统疾病是导致我国人口死亡的主要原因之一，占农村人口死亡原因第一位，城市人口第四位，其主要死亡原因是慢性阻塞性肺疾病和肺炎。显然，肺炎严重影响人类的生活质量和生命健康。因此加强治疗肺炎的相关研究，探索治疗肺炎的新方法，具有十分重要的意义。与肺癌症状不同，肺炎一般会出现咳嗽，且咳嗽时间比较短，经过抗感染治疗之后得到好转，而且可以痊愈；而肺癌症状表现为慢性咳嗽、咳血、胸痛等症状，经过治疗症状不能好转。影响学观察不同，肺炎是肺部一些纹理增粗等情况，而肺癌主要会有阴影，根据肿瘤大小情况决定。治疗方法不同，肺炎主要使用抗生素或者对症治疗；而肺癌使用手术、放疗、化疗、靶向治疗来进行对症处理。预后不同，肺炎经过治疗之后可以好转，而肺癌是不能好转且影响人的生命。因此，治疗肺炎的药物与方法对肺癌的治疗具有差异性。

发明内容

本发明的目的是解决至少上述问题，提供一种千斤拔素在制备治疗预防急性肺炎的药物中的用途，其对肺炎模型小鼠具有一定的保护作用。

为了实现根据本发明的这些目的和其它优点，提供了一种千斤拔素在制备治疗预防急性肺炎的药物中的用途，千斤拔素的结构式为式(I)：

优选的是，所述急性炎为由上呼吸道感染、慢性支气管炎、肺水肿、肺炎、肺脓肿以及由心脑缺血和器官移植引起的肺组织损伤、炎症和感染。

优选的是，所述急性肺炎由流感病毒感染、细菌感染和/或真菌感染导致。

优选的是，所述药物含有治疗有效量的千斤拔素和药学上可接受的载体。

优选的是，所述药物被制成药学上允许的剂型。

优选的是，所述药物下调急性肺炎受试者中炎症因子的水平。

优选的是，千斤拔素的给药剂量为不低于10mg/kg·d。

本发明至少包括以下有益效果：

本发明千斤拔素对急性肺炎具有治疗作用，能够改善肺损伤，降低白细胞、淋巴细胞和中性粒细胞数、对IL-6、IL-1β、TNF-α炎症因子均具有抑制作用，并且能够提高致死剂量LPS诱导小鼠急性肺炎的存活率。说明千斤拔素通过以上作用机制而发挥对肺炎的治疗作用。

本发明的其它优点、目标和特征将部分通过下面的说明体现，部分还将通过对本发明的研究和实践而为本领域的技术人员所理解。

附图说明

图1为本发明的千斤拔素对雌性小鼠存活率的影响；

图2为本发明的千斤拔素对雌性小鼠体重的影响；

图3为本发明的千斤拔素对肺系数的影响；

图4为本发明的千斤拔素对肺组织损伤的作用(10×20倍)；

图5为本发明的千斤拔素对血常规指标的影响；

图6为本发明的千斤拔素对肺组织中炎症因子的影响。

具体实施方式

下面结合附图对本发明做进一步的详细说明，以令本领域技术人员参照说明书文字能够据以实施。

需要说明的是，下述实施方案中所述实验方法，如无特殊说明，均为常规方法，所述试剂和材料，如无特殊说明，均可从商业途径获得。

试验1：千斤拔素对致死剂量脂多糖(LPS)诱导急性肺炎作用研究

1材料和方法

1.1药物与试剂

千斤拔素(实验室提取)；LPS(SIGMA公司，批号088M4067V)；地塞米松(河南润弘制药股份有限公司，批号：190321)；注射用生理盐水(四川科伦药业股份有限公司，批号：L219012211)。

1.2实验动物

健康BALB/c小鼠，雄性60只，SPF级，体重20±2g，由北京维通利华实验动物技术有限公司提供，动物合格证号：SCXK京2016-0006。

1.3仪器

1/1000精密天平(梅特勒-托利多仪器上海有限公司，型号：ME204E)。

1.4实验方法

动物分组、造模及给药：健康BALB/c小鼠，雄性60只，适应性喂养3天，实验室室温为(25±5)℃，相对湿度(40～70)％。常规饲料喂养，自由饮水。于造模前称小鼠体重并随机分为空白对照组、LPS模型对照组(12mg/kg)、LPS+千斤拔素低剂量组(10mg/kg)、LPS+千斤拔素中剂量组(20mg/kg)、LPS+千斤拔素高剂量组(40mg/kg)、LPS+地塞米松阳性对照组(5mg/kg)，每组10只，图1-2中为了简述，分别用空白对照组、模型组、千斤拔素低剂量组、千斤拔素中剂量组、千斤拔素高剂量组、地塞米松组表示。

除空白对照组以外，其余五组均按照LPS剂量为12mg/kg，气管滴注(i.t)给药1次复制急性肺炎小鼠模型。造模前各组小鼠腹腔注射0.4％戊巴比妥钠，0.12mL/10g麻醉后，取小鼠仰卧位，于手术台上，用小鼠开口器打开小鼠口腔，用微量注射器加18g注射滞留针软管，从会厌软骨开口处将LPS溶液(6mg/mL)(空白组注入等量无菌生理盐水)注入肺脏50μL，模型即建立完成，待其苏醒后给予水和饲料。千斤拔素组于造模后0h、3h、24h、48h、72h灌胃(i.g)给千斤拔素(10、20、40mg/kg)，地塞米松组于造模后0h腹腔(i.p)注射地塞米松(5mg/kg)，LPS模型对照组i.g注射等量生理盐水。

2检测指标

2.1小鼠体重及存活率

每天称量并记录每组小鼠体重，计录并统计各组的死亡数以及存活率的动态变化。

2.2统计学分析

多个样本间均数比较。方差齐性数据采用单因素方差分析LSD检验，以P＜0.05为差异具有统计学意义。采用SPSS13.0统计软件包，各项指标结果用均数±标准差(X±S)表示，两组间均数比较采用t检验，多组间计量资料比较采用单因素方差分析(one-wayANOVA)和两两比较(LSD法)。P<0.05为差异具有统计学意义。

3实验结果

3.1千斤拔素对小鼠存活率和体重的影响

LPS造模后小鼠开始死亡，LPS模型对照组小鼠在第四天全部死亡，LPS+地塞米松组和LPS+千斤拔素各剂量组存活率高于LPS模型对照组，LPS+地塞米松组存活率约为85％，LPS+千斤拔素低中高剂量组存活率分别为58％、80％、80％，结果说明地塞米松和千斤拔素对致死剂量LPS诱导小鼠肺炎具有治疗和保护作用。

与空白对照组比较，LPS模型对照组体重均显著降低，与LPS模型对照组比较，LPS+地塞米松组和LPS+千斤拔素各剂量组小鼠给药后体重均高于LPS模型对照组。结果显示，LPS(12mg/kg)可导致BALB/c小鼠体重减轻和死亡，而地塞米松和千斤拔素改善LPS所致体重减轻并且提高小鼠存活率的作用，详见图1、图2。

试验2：千斤拔素对脂多糖(LPS)诱导急性肺炎作用研究

1药物与试剂

千斤拔素(实验室提取)；地塞米松(河南润弘制药股份有限公司，批号：190321)；注射用生理盐水(四川科伦药业股份有限公司，批号：L219012211)；IL-6、IL-1β、TNF-αELISA测定试剂盒(欣博盛生物科技有限公司，批号：M190530-102a)。

1.1实验动物

健康雄性BALB/c小鼠，60只，SPF级，体重20±2g，由北京维通利华实验动物技术有限公司提供，动物合格证号：SCXK京2016-0006。

1.2仪器

Mindray血常规检测仪(深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司，型号：BC-5000vet)；1/1000精密天平(梅特勒-托利多仪器上海有限公司，型号：ME204E)；低温高速离心机(Eppendorf公司，型号：5425R)；酶联免疫检测仪(美国BioTek公司，型号：SYNERGYH1)；病理图像分析仪(日本OLYMPUS，型号：BX-60)；组织研磨机(杰灵仪器制造天津有限公司，型号：TP-24)。

1.3实验方法

动物分组、造模及给药：健康雄性BALB/c小鼠，60只，适应性喂养3天，实验室室温为(25±5)℃，相对湿度(40～70)％。常规饲料喂养，自由饮水。于造模前称小鼠体重并随机分为空白对照组、LPS模型对照组(4mg/kg)、LPS+千斤拔素低剂量组(10mg/kg)、LPS+千斤拔素中剂量组(20mg/kg)、LPS+千斤拔素高剂量组(40mg/kg)、LPS+地塞米松阳性对照组(5mg/kg)，每组10只，图3-6中为了简述，分别用空白对照组、模型对照组、千斤拔素10mg/kg、千斤拔素20mg/kg、千斤拔素40mg/kg、地塞米松5mg/kg表示。

除空白对照组以外，其余五组均按照LPS剂量为4mg/kg，气管滴注(i.t)给药1次复制急性肺炎小鼠模型。造模前各组小鼠腹腔注射0.4％戊巴比妥钠，0.12mL/10g麻醉后，取小鼠仰卧位，于手术台上，用小鼠开口器打开小鼠口腔，用微量注射器加18g注射滞留针软管，从会厌软骨开口处将LPS溶液(2mg/mL)(空白组注入等量无菌生理盐水)注入肺脏50μL，模型即建立完成，待其苏醒后给予水和饲料。千斤拔素组于造模后0h、3h、24h、48h、72h灌胃(i.g)给千斤拔素(10、20、40mg/kg)，地塞米松组于造模后0h腹腔(i.p)注射地塞米松(5mg/kg)，LPS模型对照组i.g注射等量生理盐水。

2检测指标

2.1肺组织指标测定

每组小鼠于造模后72h处死，摘除肺脏，各组进行以下指标观察和测定。

(1)取右肺中叶，称重并记录湿重后，计算肺系数＝湿重/体重。

(2)取右肺下叶，用多聚甲醛固定，常规石蜡包埋，连续切片，进行HE染色，显微镜下观察肺组织病理学改变；

(3)余肺用冰冷生理盐水漂洗后，滤纸吸干表面水分，精密称取重量，用组织研磨机匀浆后，于-80℃冰箱保存，进行检测IL-6、IL-1β、TNF-α含量。

2.2血常规指标测定

小鼠处死前，摘眼球取血于EP管中，吸取25μL血溶于5μL EDTA-K2抗凝剂中，立即用血常规仪器检测小鼠血液中白细胞、中性粒细胞、红细胞、血小板等常规指标。

2.3统计学分析

多个样本间均数比较。方差齐性数据采用单因素方差分析LSD检验，以P＜0.05为差异具有统计学意义。采用SPSS13.0统计软件包，各项指标结果用均数±标准差(X±S)表示，两组间均数比较采用t检验，多组间计量资料比较采用单因素方差分析(one-wayANOVA)和两两比较(LSD法)。P<0.05为差异具有统计学意义。

3结果与讨论

3.1千斤拔素对肺组织湿重、肺组织损伤的影响

与空白对照组比较，LPS模型对照组小鼠肺湿重显著升高；与LPS模型对照组比较，LPS+地塞米松组小鼠肺湿重显著降低，LPS+千斤拔素各剂量组小鼠肺湿重显著降低。结果显示，LPS可导致BALB/c小鼠肺湿重升高，而地塞米松和千斤拔素降低LPS所致肺湿重升高的作用，详见图3(与空白对照组比较^###P＜0.001；与LPS模型对照组比较，^**P＜0.01，^***P＜0.001)。

肺组织HE染色结果显示，空白对照组小鼠肺组织气管黏膜平滑，假复层纤毛柱状上皮杯状细胞和纤毛细胞清晰可见，肺泡未见增厚、充血或水肿等改变，肺泡壁薄，分布整齐，边界清晰；LPS模型对照组小鼠肺组织出现明显实变，肺泡损坏萎陷挤压明显，边界不清晰，有明显的炎性细胞浸润；LPS+地塞米松组和LPS+千斤拔素各剂量组肺组织损伤明显改善，肺泡萎陷明显改善，实变明显缓解，边界较清晰，挤压和炎性改变明显减轻，其中以高剂量改善最为明显，详见图4。

3.2千斤拔素对血常规的影响

与空白对照组比较，LPS模型对照组小鼠血液WBC、LYMPH和Neu水平均显著升高；与LPS模型对照组比较，LPS+地塞米松组和LPS+千斤拔素各剂量组小鼠血液WBC、LYMPH和Neu水平均降低。结果显示，LPS可导致BALB/c小鼠血液白细胞指标WBC、LYMPH和Neu水平升高，而地塞米松和千斤拔素降低LPS所致WBC、LYMPH和Neu水平升高的作用，详见图5(与空白对照组比较^###P＜0.001；与LPS模型对照组比较，^***P＜0.001)。

3.3千斤拔素对肺组织中炎症因子的影响

与空白对照组比较，LPS模型对照组小鼠肺泡灌洗液IL-6、TNF-α和IL-1β水平显著升高；与LPS模型对照组比较，LPS+地塞米松组和LPS+千斤拔素各剂量组小鼠肺组织中IL-6、TNF-α和IL-1β水平均降低。结果显示，LPS可导致BALB/c小鼠肺组织中炎症因子IL-6、TNF-α和IL-1β水平升高，而地塞米松和千斤拔素降低LPS所致肺组织炎症因子水平升高的作用，详见图6(与空白对照组比较^###P＜0.001；与LPS模型对照组比较，^***P＜0.001)。

4结论

实验结果表明，千斤拔素对LPS诱导的急性肺炎具有治疗作用，其作用机制可能通过降低肺组织炎症因子如IL-6、IL-1β、TNF-α水平、改善LPS诱导的急性肺组织损伤而发挥治疗肺炎的作用。

总结

本申请利用LPS气管滴注制备小鼠急性肺炎动物模型，探讨千斤拔素对肺炎的保护作用及可能的作用机制，为防治肺炎提供理论依据。

致死实验：将60只健康雄性BALB/c小鼠随机分为6组：空白对照组、模型组、千斤拔素(10，20，40mg/kg)灌胃给药组和阳性对照药(地塞米松，5mg/kg)腹腔注射组，每组10只。将LPS(12mg/kg)气管滴注造致死模型。造模后于0h，3h，24h，48h，72h给药后观察小鼠死亡情况并记录。

肺炎实验：将60只健康雄性BALB/c小鼠随机分为6组：空白对照组、模型组、千斤拔素(10，20，40mg/kg)灌胃给药组和阳性对照药(地塞米松，5mg/kg)腹腔注射组，每组10只。将LPS(4mg/kg)气管滴注造模，每只50μL。造模后于0h，3h，24h，48h，72h给药，在72h给药后，处死小鼠，取血检测血常规指标(白细胞、淋巴细胞和中性粒细胞)，取肺组织称重计算肺系数，一部分肺组织研磨后利用ELISA检测炎症因子(IL-6、TNF-α和IL-1β)，其余肺组用于织病理切片检测。

实验结果提示，(1)LPS(12mg/mL)致死剂量诱导小鼠急性肺炎，小鼠体重下降、在第四天全部死亡。千斤拔素能够改善小鼠体重下降，并且提高小鼠存活率。(2)LPS(4mg/kg)气管滴注给药能够显著诱导小鼠急性肺炎，小鼠呼吸急促、肺组织均将中IL-6、IL-1β、TNF-α含量升高、肺湿重增加、血液中白细胞、淋巴细胞和中性粒细胞数增加，肺组织中炎性细胞浸润、支气管肺泡壁增厚和肺充血。千斤拔素能显著降低肺组织中IL-6、IL-1β、TNF-α的含量，降低小鼠肺湿重、减少白细胞、淋巴细胞和中性粒细胞数、改善肺损伤情况。在本实验条件下，千斤拔素具有治疗肺炎的作用。

这里说明的设备数量和处理规模是用来简化本发明的说明的。对本发明的应用、修改和变化对本领域的技术人员来说是显而易见的。

尽管本发明的实施方案已公开如上，但其并不仅仅限于说明书和实施方式中所列运用，它完全可以被适用于各种适合本发明的领域，对于熟悉本领域的人员而言，可容易地实现另外的修改，因此在不背离权利要求及等同范围所限定的一般概念下，本发明并不限于特定的细节和这里示出与描述的图例。

Claims (6)

1.千斤拔素在制备治疗预防急性肺炎的药物中的用途，其特征在于，千斤拔素为唯一活性成分，千斤拔素的结构式为式(I)：

2.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述急性肺炎为由病原微生物因素、免疫力低下以及呼吸道生理因素引起的肺组织损伤、炎症和感染。

3.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述急性肺炎由流感病毒感染、细菌感染和/或真菌感染导致。

4.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述药物含有治疗有效量的千斤拔素和药学上可接受的载体。

5.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述药物被制成药学上允许的剂型。

6.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述药物下调急性肺炎受试者中炎症因子的水平。