CN110974819B - 一种用于上呼吸道感染的组合物及其应用 - Google Patents
一种用于上呼吸道感染的组合物及其应用 Download PDFInfo
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Abstract
本发明提出了一种用于上呼吸道感染的组合物,其特征在于,以重量计,所述组合物包含:绿原酸1‑5份和蒿酮1‑5份。通过实验表明,本发明提出的组合物能够显著抑制LPS或PolyI:C诱导巨噬细胞RAW 264.7的炎症因子的产生,对金黄色葡萄球菌、流感嗜血杆菌、肺炎链球菌和溶血性链球菌都具有有一定的抑菌活性,体内外实验也表明其具有抑制流感病毒的活性。
Description
技术领域
本发明属于涉及医药技术领域,特别是涉及一种用于上呼吸道感染的组合物及其应用。
背景技术
上呼吸道感染是指外鼻孔至环状软骨下缘包括鼻腔、咽或喉部急性炎症的概称。主要病原体是病毒,少数是细菌。发病不分年龄、性别、职业和地区,免疫功能低下者易感。通常病情较轻、病程短、可自愈,预后良好。但是该病发病率高且具有一定的传染性,不仅影响工作和生活,有时还可伴有严重并发症,应积极防治。
急性上感约有70%-80%由病毒引起,包括鼻病毒、冠状病毒、腺病毒、流感病毒和副流感病毒以及呼吸道合胞病毒、埃可病毒和柯萨奇病毒等。另有20%-30%的上感为细菌引起,可单纯发生或继发于病毒感染之后发生,以口腔定植菌溶血性链球菌为多见,其次为流感嗜血杆菌、肺炎链球菌和葡萄球菌等,偶见革兰阴性杆菌。但接触病原体后是否发病,还取决于传播途径和人群易感性。淋雨、受凉、气候突变、过度劳累等可降低呼吸道局部防御功能,致使原存的病毒或细菌迅速繁殖,或者直接接触含有病原体的患者喷嚏、空气以及污染的手和用具诱发本病。老幼体弱,免疫功能低下或有慢性呼吸道疾病如鼻窦炎、扁桃体炎者更易发病。
发明内容
本发明主要目的在于提供一种新的治疗上呼吸道感染的药物,以实现有效治疗上呼吸道感染,其对于细菌和病毒引起的上呼吸道感染,均有良好的治疗效果。具体地,本发明提出了一种用于上呼吸道感染的组合物,以重量计,所述组合物包含:绿原酸1-5份和蒿酮1-5份。
进一步地,以重量计,所述组合物包含:绿原酸1-3份和蒿酮1-3 份。
进一步地,以重量计,所述组合物包含:等比例的绿原酸和蒿酮。
本发明还提出了包含如前任一所述组合物的药物,其特征在于,该药物还包含药学上可接受的辅料。
具体地,该药物选自口服、注射或外用剂型。
进一步地,该药物包括但不限于口服片、含片、咀嚼片、泡腾片、硬胶囊、软胶囊剂、颗粒剂、糖浆、酒剂、口服液、注射剂。
本发明还提出了如前任一所述的组合物在制备用于上呼吸道感染的药物上的应用。
本发明还提出了绿原酸和/或蒿酮在制备用于上呼吸道感染的药物上的应用。
本发明还提出了如前任一所述的组合物在制备抗炎药物上的应用。
本发明还提出了如前任一所述的组合物在制备治疗细菌或病毒引起的感染的药物上的应用。
所述“应用”是指将上述组合物(包括提取物)给予具有相应疾病或该疾病的倾向的受试者,其目的为赋予治疗效果,例如治愈、缓解、改变、影响、改善或预防上述疾病、其症状或其倾向。本领域技术人员,能根据所治疗的疾病的类型、给药途径、赋形剂的使用容易确定具体的有效剂量,该剂量可能会因为同时使用其它药物而有所差异。
本发明提出了一种新的用于上呼吸道感染的组合物,通过实验表明本发明提出的组合物对NO、TNF-α、IL-6、PGE2都有着显著影响,能够显著抑制LPS或PolyI:C诱导巨噬细胞RAW 264.7的炎症因子的产生;而且,绿原酸和蒿酮对金黄色葡萄球菌、流感嗜血杆菌、肺炎链球菌和溶血性链球菌都具有有一定的抑菌活性;体内外实验也表明组合物具有抑制流感病毒的活性。这些都表明了,本发明的组合物对上呼吸道感染具有良好的疗效。
具体实施方式
如前所述,本发明旨在提供一种用于上呼吸道感染的组合物。以下将结合实施例的内容进行具体描述。
特别需要指出的是,针对本发明所做出的类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的,它们都被视为包括在本发明。相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文所述的方法和应用进行改动或适当变更与组合,来实现和应用本发明技术。显然,所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例,而不是全部的实施例。
需要注意的是,如未注明具体条件者,均按照常规条件或制造商建议的条件进行,所用原料药或辅料,以及所用试剂或仪器未注明生产厂商者,均为可以通过市购获得的常规产品。除非另外说明,否则所有的百分数、比率、比例或份数按重量计。
除非另行定义,文中所使用的所有专业与科学用语与本领域熟练人员所熟悉的意义相同。此外,任何与所记载内容相似或均等的方法及材料皆可应用与本发明。
实施例1绿原酸和蒿酮组合物制备
组合物1:准确称量0.333g绿原酸和0.667g蒿酮,加入10ml生理盐水混匀,过0.22μm滤膜除菌即得。
组合物2:准确称量0.5g绿原酸和0.5g蒿酮,加入10ml生理盐水混匀,过0.22μm滤膜除菌即得。
组合物3:准确称量0.667g绿原酸和0.333g蒿酮,加入10ml生理盐水混匀,过0.22μm滤膜除菌即得。
实施例2组合物抗炎活性
1实验材料
1.1细胞株
小鼠巨噬细胞系RAW 264.7购于中科院上海细胞库。
1.2药品与试剂
DMEM/HIGH GLUCOSE,Gibco;
FBS:Gibco,
LPS:sigma;
Poly I:C:Sigma;
DMSO:sigma;
0.25%Trypsin-EDTA:Gibco;
NO检测试剂盒:碧云天,产品编号:S0021;
小鼠IL-6检测试剂盒:invitrogen,Lot:1913800020;
小鼠TNF-α检测试剂盒:invitrogen,Lot:184786017;
小鼠PGE2检测试剂盒:Enzo Life Sciences,Lot:08211709C。
1.3实验仪器
CO2细胞培养箱:thermo公司;
Nikon TS100型倒置显微镜:尼康公司;
超净工作台:苏州艾克林净化设备有限公司;
酶标仪:Molecular Devices公司;
移液器:Eppendorf公司;
离心机:湖南湘仪实验室仪器开发有限公司,型号:L530。
2实验方法
2.1细胞种板
将RAW 264.7细胞以0.25%胰酶(含0.02%EDTA)消化,离心收集,含血清的DMEM培养基调整细胞密度为2×106个/ml,均匀接种至 96孔板,每孔100μl,接种后放入培养箱培养24h。
2.2细胞给药
培养24小时后,取出96孔板,吸去原来的培养基,治疗组加入以无血清的DMEM配制的含药培养基:同时设3个复孔,加药完毕后将 96孔板放入CO2细胞培养箱培养1h。取出96孔板,模型组和治疗组每孔加入LPS终浓度为1μg/ml,或者加入PolyI:C终浓度为20μg/ml,各治疗组终浓度均为50mg/l。加药完毕后将96孔板放入CO2细胞培养箱培养24小时,取细胞培养液离心取上清。
2.3NO、IL-6、TNF-α、PGE2的ELISA检测
根据ELISA试剂盒的说明书检测细胞上清中炎症因子的浓度。
2.4抑制率计算
抑制率计算公式:
抑制率=(模型组炎症因子平均含量-治疗组炎症因子平均含量)/(模型组炎症因子平均含量-空白对照炎症因子平均含量)×100%
2.5统计学处理
数据均以mean±SD表示,采用SPSS 11.5软件进行统计处理,组间比较用t检验。
3实验结果
表1组合物对LPS诱导的炎症因子产生的影响(mean±SD,n=3)
LPS是细菌的主要成分,LPS刺激RAW 264.7细胞炎症因子分泌模型常用于模拟细菌感染的炎症。以上实验结果表明该组合物和蒿酮对炎症发展过程中的几个重要的细胞因子如NO、TNF-α、IL-6、PGE2都有着显著影响,能够显著抑制LPS诱导巨噬细胞RAW 264.7的炎症因子的产生,绿原酸单独给药对炎症因子分泌有一定的影响,且组合物1、2、 3的抑制作用均强于蒿酮单独给药组。
表2组合物对PolyI:C诱导的炎症因子产生的影响(mean±SD,n=3)
PolyI:C刺激RAW 264.7细胞炎症因子分泌模型常用于模拟病毒感染的炎症,应用筛选抑制病毒感染导致的炎症药物。以上实验结果表明蒿酮和这几种组合物对炎症发展过程中的几个重要的细胞因子如NO、 TNF-α、IL-6、PGE2有着显著影响,能够显著抑制PolyI:C诱导巨噬细胞RAW 264.7的炎症因子的产生,组合物1、2、3抑制作用强于绿原酸和蒿酮单独给药。
实施例3组合物的抑菌活性
1、实验材料
1.1菌株
溶血性链球菌ATCC32210;
流感嗜血杆菌,ATCC49247;
肺炎链球菌ATCC49619;
金黄色葡萄球菌ATCC25923;
1.2药品与试剂
营养肉汤培养基,用于金黄色葡萄球菌培养;
脑心浸液肉汤(BHI)培养基,用于流感嗜血杆菌培养;
Mueller-Hinton培养基,用于溶血性链球菌和肺炎链球菌培养;
1.3实验仪器
CO2细胞培养箱:thermo公司;
超净工作台:苏州艾克林净化设备有限公司;
酶标仪:Molecular Devices公司;
移液器:Eppendorf公司;
2实验步骤
2.1最低抑菌浓度检测
采用微量稀释法测定。用棉签刮取平板生长的新鲜菌落,在无菌生理盐水中稀释成105CFU/ml菌悬液,在96孔板中加入100μl菌悬液,同时加入100μl含有不同浓度药物的培养基。于35℃、5%CO2培养箱培养18小时后观察结果,选择无色透明,无细菌生长的最低浓度视为该样品的对该细菌的MIC。
3实验结果
表3组合物对细菌的MIC
从以上实验结果可以看出绿原酸、蒿酮及组合物1、2、3组对金黄色葡萄球菌、流感嗜血杆菌、肺炎链球菌和溶血性链球菌都具有一定的抑菌活性,且组合物1、2、3组抑菌活性强于绿原酸和蒿酮单独给药组,表明这两种成分可能通过协同作用来抑制这几种细菌的增殖。
实施例4组合物的体外抑制流感病毒活性
1实验材料
1.1细胞和病毒株
MDCK细胞购于上海细胞库;
A/Puerto Rico/8/1934H1N1;
A/Beijing/32/92(H3N2);
1.2药品与试剂
1640:Gibco;
FBS:Gibco;
DMSO:sigma公司;
奥司他韦羧酸:sigma公司;
0.25%Trypsin-EDTA:Gibco,
1.3实验仪器
CO2细胞培养箱:thermo公司;
超净工作台:苏州艾克林净化设备有限公司;
酶标仪:Molecular Devices公司;
移液器:eppendorf公司;
2实验方法
2.1细胞处理
取生长胰酶分散后的MDCK细胞,按5000个/孔接种于96孔板中,生长过夜。取病毒尿囊液用无血清无抗生素的培养基稀释为100 TCID50/100μl。用无血清培养基清洗细胞一次。每孔加入100μl病毒稀释液,于培养箱中孵育2小时。弃去病毒液,每孔加入含TPCK-胰酶(终浓度为2.5μg/ml)和BSA(终浓度为1%)和样品的培养基,于培养箱中孵育48小时,每孔加入10μl CellTiterAQueous One Solution试剂,孵育1.5小时后,于490nm处检测吸光度。
2.2抑制率计算
抑制率(%)=(样品孔吸光度-模型孔吸光度)/(空白孔吸光度 -模型孔吸光度)*100。
2.3统计学处理
数据均以mean±SD表示,采用SPSS 11.5软件进行统计处理,组间比较用t检验。
3实验结果
表4组合物体外对流感病毒的抑制作用
-表示未检测到活性。
实验结果表明绿原酸对H1N1和H3N2都具有明显的抑制活性,组合物1、2、3对这两株病毒都显示出不同程度的抑制活性,其中组合物2、3优于绿原酸单独给药。
实施例5组合物的体内抑制流感病毒活性
1、实验材料
1.1动物、细胞和病毒株
ICR小鼠购于青龙山动物繁殖场;
MDCK细胞购于上海细胞库;
A/Puerto Rico/8/1934H1N1;
1.2药品与试剂
乙醚:南京化学试剂厂;
1640培养基:Gibco;
FBS:Gibco;
0.25%Trypsin-EDTA:Gibco,
奥司他韦:Sigma;
羧甲基纤维素钠:Sigma;
1.3实验仪器
CO2细胞培养箱:thermo公司;
超净工作台:苏州艾克林净化设备有限公司;
酶标仪:Molecular Devices公司;
移液器:eppendorf公司;
2实验方法
2.1药物配制
奥司他韦:分别准确称量45mg奥司他韦溶解到10ml 0.5%的羧甲基纤维素钠溶液中;
绿原酸:分别准确称量45mg绿原酸溶解到10ml 0.5%的羧甲基纤维素钠溶液中;
蒿酮:分别准确称量45mg蒿酮分散到10ml 0.5%的羧甲基纤维素钠溶液中;
组合物1:准确称量15mg绿原酸和30mg蒿酮分散于10ml 0.5%的羧甲基纤维素钠溶液中;
组合物2:准确称量22.5mg绿原酸和22.5mg蒿酮分散于10ml 0.5%的羧甲基纤维素钠溶液中;
组合物1:准确称量30mg绿原酸和15mg蒿酮分散于10ml 0.5%的羧甲基纤维素钠溶液中;
2.2动物分组
将从青龙山动物繁殖场采购来的18-20g的小鼠适应性培养3天。随机抽取15只作为空白组,其余小鼠按8倍LD50接种H1N1流感病毒,随机分为模型组,给药组(50mg/kg/day)和阳性药组(奥司他韦50mg/kg/day),每组15只。接种病毒1小时后开始给药,每天记录体重和死亡情况。连续给药8天后,每组抽取5只小鼠,麻醉处死,摘取肺组织,称重,统计肺指数,并将肺组织研磨,取匀浆液在MDCK 细胞模型上检测病毒滴度。其余小鼠连续给药15天。
2.3肺指数计算
肺指数=肺重(mg)/体重(g)
2.4统计学处理
数据均以mean±SD表示,采用SPSS 11.5软件进行统计处理,组间比较用t检验。
3实验结果
表5组合物对小鼠生存率、肺指数和肺组织病毒滴度的影响
与空白组相比有统计学差异,##P<0.01;
与模型组相比有统计学差异,*P<0.05,**P<0.01。
通过实验结果可以发现,模型组小鼠的15日生存率为0%,奥司他韦、绿原酸和组合物1、2、3组能够明显提高小鼠的生存率,第8 日解剖小鼠后发现相比于模型组小鼠的肺指数、肺组织内病毒滴度有明显降低;并且组合物1、2、3在提高生存率、降低肺指数和肺组织病毒滴度方面优于绿原酸和蒿酮单独给药组。
综合以上实验,组合物1、2、3对引发上呼吸道感染的常见细菌如黄色葡萄球菌、流感嗜血杆菌、肺炎链球菌和溶血性链球菌的增殖都有较好的抑制作用,在体内外模型中对流感病毒H1N1和H3N2都具有明显的抑制活性,在LPS或PolyI:C诱导的巨噬细胞RAW 264.7的炎症模型上,对NO、TNF-α、IL-6、PGE2的产生都有着显著影响。
且组合物1、2、3在体内实验中的药效均优于绿原酸、蒿酮单独给药组,即绿原酸和蒿酮可能通过协同作用来提高小鼠的生存率,降低肺指数和肺组织病毒滴度。
以上仅是本发明的优选实施方式,应当指出,对于本技术领域的普通技术人员来说,在不脱离本发明原理的前提下,还可以做出若干改进和润饰,这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
Claims (8)
1.一种用于上呼吸道感染的组合物,其特征在于,以重量计,所述组合物由以下组分组成:绿原酸1-3份和蒿酮1-3份。
2.根据权利要求1所述的组合物,其特征在于,以重量计,所述组合物由以下组分组成:等比例的绿原酸和蒿酮。
3.一种用于上呼吸道感染的药物,其特征在于,所述药物由权利要求1或2所述的组合物和药学上可接受的辅料组成。
4.如权利要求3所述的药物,其特征在于,该药物选自口服或注射剂型。
5.如权利要求3所述的药物,其特征在于,该药物包括口服片、硬胶囊剂、软胶囊剂、颗粒剂、糖浆、酒剂、口服液、注射剂。
6.如权利要求1或2所述的组合物在制备用于上呼吸道感染的药物中的应用。
7.如权利要求1或2所述的组合物在制备抗炎药物中的应用。
8.如权利要求1或2所述的组合物在制备治疗细菌或病毒引起的感染的药物中的应用。
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