CN114288284A - 千斤拔素在制备治疗预防急性肺炎的药物中的用途 - Google Patents
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Abstract
Description
技术领域
本发明涉及医药技术领域。更具体地说,本发明涉及一种千斤拔素在制备治疗预防急性肺炎的药物中的用途。
背景技术
社区获得性肺炎(Community Acquired Pneumonia,CAP)指终末气道、肺泡和肺间质的炎症,是在院外由病原微生物、理化因素、免疫损伤、过敏及药物所致。支原体和细菌性肺炎是最常见的肺炎,也是最常见的感染性疾病。近年来,随着大气污染PM2.5增加,肺炎发病率有增长的趋势。有学者对肺炎病死率进行了统计,其中门诊患者小于1%~5%,住院患者约为12%,入住重症监护病房者则高达40%。严重的脓毒症和脓毒症休克病因中,肺炎约占一半。呼吸系统疾病是导致我国人口死亡的主要原因之一,占农村人口死亡原因第一位,城市人口第四位,其主要死亡原因是慢性阻塞性肺疾病和肺炎。显然,肺炎严重影响人类的生活质量和生命健康。因此加强治疗肺炎的相关研究,探索治疗肺炎的新方法,具有十分重要的意义。与肺癌症状不同,肺炎一般会出现咳嗽,且咳嗽时间比较短,经过抗感染治疗之后得到好转,而且可以痊愈;而肺癌症状表现为慢性咳嗽、咳血、胸痛等症状,经过治疗症状不能好转。影响学观察不同,肺炎是肺部一些纹理增粗等情况,而肺癌主要会有阴影,根据肿瘤大小情况决定。治疗方法不同,肺炎主要使用抗生素或者对症治疗;而肺癌使用手术、放疗、化疗、靶向治疗来进行对症处理。预后不同,肺炎经过治疗之后可以好转,而肺癌是不能好转且影响人的生命。因此,治疗肺炎的药物与方法对肺癌的治疗具有差异性。
发明内容
本发明的目的是解决至少上述问题,提供一种千斤拔素在制备治疗预防急性肺炎的药物中的用途,其对肺炎模型小鼠具有一定的保护作用。
为了实现根据本发明的这些目的和其它优点,提供了一种千斤拔素在制备治疗预防急性肺炎的药物中的用途,千斤拔素的结构式为式(I):
优选的是,所述急性炎为由上呼吸道感染、慢性支气管炎、肺水肿、肺炎、肺脓肿以及由心脑缺血和器官移植引起的肺组织损伤、炎症和感染。
优选的是,所述急性肺炎由流感病毒感染、细菌感染和/或真菌感染导致。
优选的是,所述药物含有治疗有效量的千斤拔素和药学上可接受的载体。
优选的是,所述药物被制成药学上允许的剂型。
优选的是,所述药物下调急性肺炎受试者中炎症因子的水平。
优选的是,千斤拔素的给药剂量为不低于10mg/kg·d。
本发明至少包括以下有益效果:
本发明千斤拔素对急性肺炎具有治疗作用,能够改善肺损伤,降低白细胞、淋巴细胞和中性粒细胞数、对IL-6、IL-1β、TNF-α炎症因子均具有抑制作用,并且能够提高致死剂量LPS诱导小鼠急性肺炎的存活率。说明千斤拔素通过以上作用机制而发挥对肺炎的治疗作用。
本发明的其它优点、目标和特征将部分通过下面的说明体现,部分还将通过对本发明的研究和实践而为本领域的技术人员所理解。
附图说明
图1为本发明的千斤拔素对雌性小鼠存活率的影响;
图2为本发明的千斤拔素对雌性小鼠体重的影响;
图3为本发明的千斤拔素对肺系数的影响;
图4为本发明的千斤拔素对肺组织损伤的作用(10×20倍);
图5为本发明的千斤拔素对血常规指标的影响;
图6为本发明的千斤拔素对肺组织中炎症因子的影响。
具体实施方式
下面结合附图对本发明做进一步的详细说明,以令本领域技术人员参照说明书文字能够据以实施。
需要说明的是,下述实施方案中所述实验方法,如无特殊说明,均为常规方法,所述试剂和材料,如无特殊说明,均可从商业途径获得。
试验1:千斤拔素对致死剂量脂多糖(LPS)诱导急性肺炎作用研究
1材料和方法
1.1药物与试剂
千斤拔素(实验室提取);LPS(SIGMA公司,批号088M4067V);地塞米松(河南润弘制药股份有限公司,批号:190321);注射用生理盐水(四川科伦药业股份有限公司,批号:L219012211)。
1.2实验动物
健康BALB/c小鼠,雄性60只,SPF级,体重20±2g,由北京维通利华实验动物技术有限公司提供,动物合格证号:SCXK京2016-0006。
1.3仪器
1/1000精密天平(梅特勒-托利多仪器上海有限公司,型号:ME204E)。
1.4实验方法
动物分组、造模及给药:健康BALB/c小鼠,雄性60只,适应性喂养3天,实验室室温为(25±5)℃,相对湿度(40~70)%。常规饲料喂养,自由饮水。于造模前称小鼠体重并随机分为空白对照组、LPS模型对照组(12mg/kg)、LPS+千斤拔素低剂量组(10mg/kg)、LPS+千斤拔素中剂量组(20mg/kg)、LPS+千斤拔素高剂量组(40mg/kg)、LPS+地塞米松阳性对照组(5mg/kg),每组10只,图1-2中为了简述,分别用空白对照组、模型组、千斤拔素低剂量组、千斤拔素中剂量组、千斤拔素高剂量组、地塞米松组表示。
除空白对照组以外,其余五组均按照LPS剂量为12mg/kg,气管滴注(i.t)给药1次复制急性肺炎小鼠模型。造模前各组小鼠腹腔注射0.4%戊巴比妥钠,0.12mL/10g麻醉后,取小鼠仰卧位,于手术台上,用小鼠开口器打开小鼠口腔,用微量注射器加18g注射滞留针软管,从会厌软骨开口处将LPS溶液(6mg/mL)(空白组注入等量无菌生理盐水)注入肺脏50μL,模型即建立完成,待其苏醒后给予水和饲料。千斤拔素组于造模后0h、3h、24h、48h、72h灌胃(i.g)给千斤拔素(10、20、40mg/kg),地塞米松组于造模后0h腹腔(i.p)注射地塞米松(5mg/kg),LPS模型对照组i.g注射等量生理盐水。
2检测指标
2.1小鼠体重及存活率
每天称量并记录每组小鼠体重,计录并统计各组的死亡数以及存活率的动态变化。
2.2统计学分析
多个样本间均数比较。方差齐性数据采用单因素方差分析LSD检验,以P<0.05为差异具有统计学意义。采用SPSS13.0统计软件包,各项指标结果用均数±标准差(X±S)表示,两组间均数比较采用t检验,多组间计量资料比较采用单因素方差分析(one-wayANOVA)和两两比较(LSD法)。P<0.05为差异具有统计学意义。
3实验结果
3.1千斤拔素对小鼠存活率和体重的影响
LPS造模后小鼠开始死亡,LPS模型对照组小鼠在第四天全部死亡,LPS+地塞米松组和LPS+千斤拔素各剂量组存活率高于LPS模型对照组,LPS+地塞米松组存活率约为85%,LPS+千斤拔素低中高剂量组存活率分别为58%、80%、80%,结果说明地塞米松和千斤拔素对致死剂量LPS诱导小鼠肺炎具有治疗和保护作用。
与空白对照组比较,LPS模型对照组体重均显著降低,与LPS模型对照组比较,LPS+地塞米松组和LPS+千斤拔素各剂量组小鼠给药后体重均高于LPS模型对照组。结果显示,LPS(12mg/kg)可导致BALB/c小鼠体重减轻和死亡,而地塞米松和千斤拔素改善LPS所致体重减轻并且提高小鼠存活率的作用,详见图1、图2。
试验2:千斤拔素对脂多糖(LPS)诱导急性肺炎作用研究
1药物与试剂
千斤拔素(实验室提取);地塞米松(河南润弘制药股份有限公司,批号:190321);注射用生理盐水(四川科伦药业股份有限公司,批号:L219012211);IL-6、IL-1β、TNF-αELISA测定试剂盒(欣博盛生物科技有限公司,批号:M190530-102a)。
1.1实验动物
健康雄性BALB/c小鼠,60只,SPF级,体重20±2g,由北京维通利华实验动物技术有限公司提供,动物合格证号:SCXK京2016-0006。
1.2仪器
Mindray血常规检测仪(深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司,型号:BC-5000vet);1/1000精密天平(梅特勒-托利多仪器上海有限公司,型号:ME204E);低温高速离心机(Eppendorf公司,型号:5425R);酶联免疫检测仪(美国BioTek公司,型号:SYNERGYH1);病理图像分析仪(日本OLYMPUS,型号:BX-60);组织研磨机(杰灵仪器制造天津有限公司,型号:TP-24)。
1.3实验方法
动物分组、造模及给药:健康雄性BALB/c小鼠,60只,适应性喂养3天,实验室室温为(25±5)℃,相对湿度(40~70)%。常规饲料喂养,自由饮水。于造模前称小鼠体重并随机分为空白对照组、LPS模型对照组(4mg/kg)、LPS+千斤拔素低剂量组(10mg/kg)、LPS+千斤拔素中剂量组(20mg/kg)、LPS+千斤拔素高剂量组(40mg/kg)、LPS+地塞米松阳性对照组(5mg/kg),每组10只,图3-6中为了简述,分别用空白对照组、模型对照组、千斤拔素10mg/kg、千斤拔素20mg/kg、千斤拔素40mg/kg、地塞米松5mg/kg表示。
除空白对照组以外,其余五组均按照LPS剂量为4mg/kg,气管滴注(i.t)给药1次复制急性肺炎小鼠模型。造模前各组小鼠腹腔注射0.4%戊巴比妥钠,0.12mL/10g麻醉后,取小鼠仰卧位,于手术台上,用小鼠开口器打开小鼠口腔,用微量注射器加18g注射滞留针软管,从会厌软骨开口处将LPS溶液(2mg/mL)(空白组注入等量无菌生理盐水)注入肺脏50μL,模型即建立完成,待其苏醒后给予水和饲料。千斤拔素组于造模后0h、3h、24h、48h、72h灌胃(i.g)给千斤拔素(10、20、40mg/kg),地塞米松组于造模后0h腹腔(i.p)注射地塞米松(5mg/kg),LPS模型对照组i.g注射等量生理盐水。
2检测指标
2.1肺组织指标测定
每组小鼠于造模后72h处死,摘除肺脏,各组进行以下指标观察和测定。
(1)取右肺中叶,称重并记录湿重后,计算肺系数=湿重/体重。
(2)取右肺下叶,用多聚甲醛固定,常规石蜡包埋,连续切片,进行HE染色,显微镜下观察肺组织病理学改变;
(3)余肺用冰冷生理盐水漂洗后,滤纸吸干表面水分,精密称取重量,用组织研磨机匀浆后,于-80℃冰箱保存,进行检测IL-6、IL-1β、TNF-α含量。
2.2血常规指标测定
小鼠处死前,摘眼球取血于EP管中,吸取25μL血溶于5μL EDTA-K2抗凝剂中,立即用血常规仪器检测小鼠血液中白细胞、中性粒细胞、红细胞、血小板等常规指标。
2.3统计学分析
多个样本间均数比较。方差齐性数据采用单因素方差分析LSD检验,以P<0.05为差异具有统计学意义。采用SPSS13.0统计软件包,各项指标结果用均数±标准差(X±S)表示,两组间均数比较采用t检验,多组间计量资料比较采用单因素方差分析(one-wayANOVA)和两两比较(LSD法)。P<0.05为差异具有统计学意义。
3结果与讨论
3.1千斤拔素对肺组织湿重、肺组织损伤的影响
与空白对照组比较,LPS模型对照组小鼠肺湿重显著升高;与LPS模型对照组比较,LPS+地塞米松组小鼠肺湿重显著降低,LPS+千斤拔素各剂量组小鼠肺湿重显著降低。结果显示,LPS可导致BALB/c小鼠肺湿重升高,而地塞米松和千斤拔素降低LPS所致肺湿重升高的作用,详见图3(与空白对照组比较###P<0.001;与LPS模型对照组比较,**P<0.01,***P<0.001)。
肺组织HE染色结果显示,空白对照组小鼠肺组织气管黏膜平滑,假复层纤毛柱状上皮杯状细胞和纤毛细胞清晰可见,肺泡未见增厚、充血或水肿等改变,肺泡壁薄,分布整齐,边界清晰;LPS模型对照组小鼠肺组织出现明显实变,肺泡损坏萎陷挤压明显,边界不清晰,有明显的炎性细胞浸润;LPS+地塞米松组和LPS+千斤拔素各剂量组肺组织损伤明显改善,肺泡萎陷明显改善,实变明显缓解,边界较清晰,挤压和炎性改变明显减轻,其中以高剂量改善最为明显,详见图4。
3.2千斤拔素对血常规的影响
与空白对照组比较,LPS模型对照组小鼠血液WBC、LYMPH和Neu水平均显著升高;与LPS模型对照组比较,LPS+地塞米松组和LPS+千斤拔素各剂量组小鼠血液WBC、LYMPH和Neu水平均降低。结果显示,LPS可导致BALB/c小鼠血液白细胞指标WBC、LYMPH和Neu水平升高,而地塞米松和千斤拔素降低LPS所致WBC、LYMPH和Neu水平升高的作用,详见图5(与空白对照组比较###P<0.001;与LPS模型对照组比较,***P<0.001)。
3.3千斤拔素对肺组织中炎症因子的影响
与空白对照组比较,LPS模型对照组小鼠肺泡灌洗液IL-6、TNF-α和IL-1β水平显著升高;与LPS模型对照组比较,LPS+地塞米松组和LPS+千斤拔素各剂量组小鼠肺组织中IL-6、TNF-α和IL-1β水平均降低。结果显示,LPS可导致BALB/c小鼠肺组织中炎症因子IL-6、TNF-α和IL-1β水平升高,而地塞米松和千斤拔素降低LPS所致肺组织炎症因子水平升高的作用,详见图6(与空白对照组比较###P<0.001;与LPS模型对照组比较,***P<0.001)。
4结论
实验结果表明,千斤拔素对LPS诱导的急性肺炎具有治疗作用,其作用机制可能通过降低肺组织炎症因子如IL-6、IL-1β、TNF-α水平、改善LPS诱导的急性肺组织损伤而发挥治疗肺炎的作用。
总结
本申请利用LPS气管滴注制备小鼠急性肺炎动物模型,探讨千斤拔素对肺炎的保护作用及可能的作用机制,为防治肺炎提供理论依据。
致死实验:将60只健康雄性BALB/c小鼠随机分为6组:空白对照组、模型组、千斤拔素(10,20,40mg/kg)灌胃给药组和阳性对照药(地塞米松,5mg/kg)腹腔注射组,每组10只。将LPS(12mg/kg)气管滴注造致死模型。造模后于0h,3h,24h,48h,72h给药后观察小鼠死亡情况并记录。
肺炎实验:将60只健康雄性BALB/c小鼠随机分为6组:空白对照组、模型组、千斤拔素(10,20,40mg/kg)灌胃给药组和阳性对照药(地塞米松,5mg/kg)腹腔注射组,每组10只。将LPS(4mg/kg)气管滴注造模,每只50μL。造模后于0h,3h,24h,48h,72h给药,在72h给药后,处死小鼠,取血检测血常规指标(白细胞、淋巴细胞和中性粒细胞),取肺组织称重计算肺系数,一部分肺组织研磨后利用ELISA检测炎症因子(IL-6、TNF-α和IL-1β),其余肺组用于织病理切片检测。
实验结果提示,(1)LPS(12mg/mL)致死剂量诱导小鼠急性肺炎,小鼠体重下降、在第四天全部死亡。千斤拔素能够改善小鼠体重下降,并且提高小鼠存活率。(2)LPS(4mg/kg)气管滴注给药能够显著诱导小鼠急性肺炎,小鼠呼吸急促、肺组织均将中IL-6、IL-1β、TNF-α含量升高、肺湿重增加、血液中白细胞、淋巴细胞和中性粒细胞数增加,肺组织中炎性细胞浸润、支气管肺泡壁增厚和肺充血。千斤拔素能显著降低肺组织中IL-6、IL-1β、TNF-α的含量,降低小鼠肺湿重、减少白细胞、淋巴细胞和中性粒细胞数、改善肺损伤情况。在本实验条件下,千斤拔素具有治疗肺炎的作用。
这里说明的设备数量和处理规模是用来简化本发明的说明的。对本发明的应用、修改和变化对本领域的技术人员来说是显而易见的。
尽管本发明的实施方案已公开如上,但其并不仅仅限于说明书和实施方式中所列运用,它完全可以被适用于各种适合本发明的领域,对于熟悉本领域的人员而言,可容易地实现另外的修改,因此在不背离权利要求及等同范围所限定的一般概念下,本发明并不限于特定的细节和这里示出与描述的图例。
Claims (7)
2.如权利要求1所述的用途,其特征在于,所述急性肺炎为由病原微生物因素、免疫力低下以及呼吸道生理因素引起的肺组织损伤、炎症和感染。
3.如权利要求1所述的用途,其特征在于,所述急性肺炎由流感病毒感染、细菌感染和/或真菌感染导致。
4.如权利要求1所述的用途,其特征在于,所述药物含有治疗有效量的千斤拔素和药学上可接受的载体。
5.如权利要求1所述的用途,其特征在于,所述药物被制成药学上允许的剂型。
6.如权利要求1所述的用途,其特征在于,所述药物下调急性肺炎受试者中炎症因子的水平。
7.如权利要求1所述的用途,其特征在于,千斤拔素的给药剂量为不低于10mg/kg·d。
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严东等: ""千斤拔属药用植物的研究进展"" * |
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