CN114276973B - 一种添加牛樟树提取物促进樟芝深层发酵产孢及产糖的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种添加牛樟树提取物促进樟芝深层发酵产孢及产糖的方法。该方法通过在樟芝深层发酵培养基中添加微量的牛樟树水提物，然后再接种樟芝进行发酵。与未添加牛樟树水提物的对照组相比，本发明提供的方法可使樟芝深层发酵无性孢子产量提高50％以上，生物量提高20％以上，同时菌丝体中的胞内多糖含量提高100％以上，效果非常显著。本发明的方法可用于樟芝工业生产过程中大量制备种子(樟芝无性孢子)，同时显著提高制备种子过程中所产生樟芝菌丝体的胞内多糖含量，显著提了生产效率及效益，并降低了生产成本。此外，本发明所用的牛樟树水提物添加浓度极低、来源广泛、安全性高、环境友好，极具开发价值及应用前景。
Description
技术领域
本发明属于微生物发酵技术领域，具体涉及一种添加牛樟树提取物促进樟芝深层发酵产孢及产糖的方法。
背景技术
樟芝(Antrodia cinnamomea)，又名牛樟芝或牛樟菇，是一种珍稀药食两用真菌，素有“森林红宝石”之美誉。常用樟芝治疗宿醉、食物中毒、腹痛、腹泻、炎症及皮肤瘙痒等，效果显著。目前，科研工作者们已证实樟芝确有解酒保肝、抗肿瘤、抗癌、抗病毒、抗炎、抗氧化、抗疲劳及调节免疫等多种功效，并从樟芝中分离到百余种活性物质，包括多糖、二萜类、三萜类、甾体类及苯环衍生物等，其中马来酸和琥珀酸衍生物(Antrodin A-E)被认为是继1986年Wagner发现水飞蓟素以来，保肝活性最好的天然产物。有学者认为，樟芝的药用价值显著高于灵芝、人参、冬虫夏草等传统中药，从而被誉为“药王之王”。
出众的生物活性使得樟芝有着极大的市场需求，但野生樟芝子实体生长缓慢，数量稀少，供不应求。因此，大规模人工培养牛樟芝显得尤为必要。目前，常见的樟芝人工培养技术主要有4种：椴木栽培、平皿培养、固态发酵和深层发酵。其中，牛樟树椴木栽培法生产周期长达2-5年，平皿培养法生产周期通常需 3-6个月，固态发酵法的生产周期通常需1个月以上，而采用基于无性孢子接种的深层发酵法生产周期仅需10-14天，生产周期优势非常明显。此外，樟芝深层发酵工艺还具有生产效率较高、生产强度大、生产成本低、易于规模化等优点。因此，基于无性孢子接种的樟芝深层发酵生产已成为目前最高效、最普遍的牛樟芝人工培养方式。
但是，樟芝深层发酵工艺在工业化生产过程中仍然存在一些问题，例如作为种子的樟芝无性孢子产量较低，从而增加了种子制备的时间、人力、物力等成本，大大限制了樟芝深层发酵工业化生产效率。因此，提高樟芝深层发酵过程中的孢子产量，进而提高种子制备效率，是进一步提高樟芝深层发酵工业化生产效率、降低生产成本的关键所在。
目前，提高樟芝深层发酵无性孢子产量及多糖产量主要是通过优化发酵工艺 (培养基组分或发酵条件等)来实现的。但樟芝产孢和产多糖的最适条件通常不一致。例如樟芝在营养匮乏的培养基中更容易大量产孢，但在该条件下樟芝胞内多糖产量极低；而樟芝在营养丰富的培养基中更容易产多糖，但在该条件下樟芝无性孢子产量极低甚至不产孢；发酵条件亦然，黑暗缺氧的条件更适于樟芝无性产孢，而光照充氧的条件更适于樟芝产多糖。因此，在对发酵工艺进行优化时，无性孢子产量及胞内多糖产量往往不可兼顾，通常是根据发酵目的不同而采用不同的培养基配方及发酵条件。例如需要大量制备樟芝无性孢子作为种子时，通常采用营养较为匮乏的培养基配方，此时樟芝生物量较小且菌丝体中多糖等活性物质含量极低。因此，在制备种子发酵结束时，过滤收集完樟芝孢子后剩下的樟芝菌丝体就显得很“鸡肋”，直接丢弃有点可惜，但用来提取活性物质又因为产量太低大大增加了提取成本，很不实惠。在此背景下，一种在增加樟芝深层发酵无性孢子产量的同时又能显著提高樟芝胞内多糖产量，且成本低廉、操作方便的方法就显得尤为难能可贵，极具开发价值及应用前景。
发明内容
发明目的：针对目前樟芝深层发酵无性孢子及活性物质产量低，导致樟芝深层发酵种子(无性孢子)制备及活性物质生产效率低、成本高的问题。本发明提供了一种添加牛樟树提取物促进樟芝深层发酵产孢及产糖的方法，该方法通过在樟芝深层发酵培养基中添加终浓度为10～140μg/mL的牛樟树水提物，使得樟芝深层发酵产孢量最大提高50％以上，生物量最大提高20％以上，樟芝菌丝体中的主要活性物质—胞内多糖含量最大提高100％以上。本发明显著提高了樟芝无性孢子制备效率及活性物质生产效率，降低了樟芝深层发酵工业化生产成本，大幅提高了樟芝深层发酵工业化生产效益。
技术方案：为了实现上述目的，本发明所述一种添加牛樟树提取物促进樟芝深层发酵产孢及产糖的方法，在樟芝深层发酵培养基中添加牛樟树水提物，然后再接种樟芝进行发酵。
其中，在樟芝深层发酵培养基中添加终浓度为10～140μg/mL的牛樟树水提物。
其中，所述牛樟树为牛樟树除树叶以外的部分。
作为优选，所述牛樟树包括牛樟树的树干、树枝、树根或者木屑的任意一种或者多种。
其中，所述牛樟树水提物的制备步骤如下：
(1)称取牛樟树木木屑或者切碎的牛樟树木块，加入去离子水煮沸；
(2)过滤，收集滤液并浓缩；
(3)将浓缩后的滤液干燥，既得牛樟树水提物粉末；
(4)将干燥后的牛樟树水提物粉末用水复溶，过滤除菌；
(5)将除菌后牛樟树水提物母液置于冰箱中冷冻保存备用。
其中，步骤(1)所述牛樟树木块为树干、树枝或树根的混合物或者其中一种。
其中，步骤(2)所述滤液浓缩到原体积的5-20倍。作为优选，所述滤液浓缩到原体积的10倍。
其中，步骤(4)所述牛樟树水提物粉末用水复溶，配制成浓度为5-50mg/mL 的母液并用直径0.45μm的滤膜过滤除菌。
作为优选，将干燥后的牛樟树水提物粉末用水复溶，配制成浓度为10mg/mL 的母液并用直径0.45μm的滤膜过滤除菌。
其中，所述樟芝深层发酵培养基配方为：葡萄糖2％、酵母浸出粉0.2％、 MgSO40.15％、KH2PO4 0.3％，初始pH 4.5。
其中，所述樟芝接种按樟芝孢子悬浮液按1×105个/mL-5×106个/mL的接种量接种到培养基中；接种后在24-27℃、50-300r/min条件下振荡培养7-20d。
作为优选，将樟芝孢子悬浮液按1×106个/mL的接种量接种到培养基中；接种后26℃，150r/min振荡培养10d。
在樟芝深层发酵工业生产过程中，大量制备樟芝无性孢子种子时，通常采用营养较为匮乏的培养基(如本发明实施例中使用的培养基配方，因为樟芝在营养丰富的培养基中几乎不产孢或产孢量极低)，此时樟芝生物量较小且菌丝体中多糖等活性物质含量极低。因此，在制备种子发酵结束时，过滤收集完樟芝孢子后剩下的樟芝菌丝体就显得很“鸡肋”，直接丢弃有点可惜，但用来提取活性物质又因为产量太低大大增加了提取成本而显得很不实惠。本发明通过比较牛樟树甲醇提取物、牛樟树乙酸乙酯提取物、牛樟树石油醚提取物及牛樟树水提物对樟芝深层发酵无性产孢的影响，发现只有牛樟树水提物有良好的促进产孢效果，同时也显著促进樟芝产多糖。基于此，本发明通过在樟芝深层发酵培养基中添加牛樟树水提物，显著提高了樟芝深层发酵无性孢子及胞内多糖的产量。若将本发明提供的方法用于大量制备樟芝无性孢子，为樟芝深层发酵生产提供种子，可显著提高种子制备效率，降低生产成本，同时解决了采用深层发酵法制备樟芝种子时所产生的樟芝菌丝体的“鸡肋”问题，变废为宝，显著提高了樟芝包内多糖的生产效益。若将本发明提供的方法用于樟芝深层发酵活性物质生产，可显著提高樟芝胞内多糖产量及生产效益。因此，本发明可显著提高樟芝深层发酵无性孢子及胞内多糖产量，使得樟芝深层发酵种子制备效率及生产效益显著提高、生产成本大幅降低，可极大地推动樟芝深层发酵工业化生产产业的发展，较具有开发价值及应用前景。
有益效果：与现有技术相比本发明具有如下优点：
本发明的方法可使樟芝深层发酵无性孢子产量提高50％以上，显著提高了樟芝无性孢子的制备效率，降低了樟芝深层发酵生产种子(无性孢子)的制备成本，进而显著提高樟芝深层发酵生产效率。此外，本发明还可使樟芝在营养相对匮乏的培养基(即制备樟芝无性孢子的培养基)中进行深层发酵时生物量提高20％以上，同时樟芝菌丝体胞内多糖含量提高100％以上，樟芝胞内多糖产量大幅提高，解决了樟芝深层发酵大量制备种子过程中所产生樟芝菌丝体的“鸡肋”问题，变废为宝，显著提高了樟芝深层发酵工业化生产樟芝多糖的效率及效益。此外，本发明中牛樟树水提物的添加浓度极低，只需添加终浓度为50-60μg/mL的牛樟树水提物就能达到很好的促进效果，而牛樟树水提物的得率可达10％左右，因此本发明提供的方法成本低廉、操作方便、效果显著。此外，牛樟树水提物来源广泛、安全性高、环境友好，具有极大的开发价值及良好的应用前景。
附图说明
图1添加不同牛樟树提取物对樟芝深层发酵无性产孢的影响。其中“CK”为对照组，不添加任何牛樟树提取物；
图2添加不同浓度的牛樟树水提物对樟芝深层发酵无性产孢的影响。其中“CK”为对照组，不添加牛樟树水提物；
图3添加90μg/mL牛樟树水提物对樟芝深层发酵无性产孢的影响；
图4添加60μg/mL牛樟树水提物对樟芝深层发酵无性产孢及产多糖的影响；
图5添加60μg/mL牛樟树水提物组与对照组的生物量及产孢量实物图；
图6添加30μg/mL牛樟树水提物对樟芝深层发酵无性产孢及产多糖的影响。
具体实施方式
以下结合附图和实施例对本发明作进一步说明。
本发明中的原料和试剂如无特殊说明，均为商业化市售。
下述实施例中樟芝深层发酵产孢量及生物量的检测步骤如下：
(1)产孢量检测：将樟芝深层发酵结束后的发酵液在无菌条件下用4层纱布过滤，所得滤液即为孢子悬浮液(可作种子用)。吸取20μL孢子悬浮液用血球计数板于光学显微镜下计数并计算产孢量。
(2)生物量检测：将樟芝深层发酵结束后的发酵液用4层纱布过滤，所得滤渣即为樟芝菌丝体。将樟芝菌丝体置于75℃烘箱中烘至恒重，用分析天平称重并计算生物量。
下述实施例中樟芝深层发酵胞内多糖含量的检测步骤如下：
(1)将干燥后的樟芝菌丝体粉碎，准确称取4.0g樟芝菌丝体粉于50mL 比色管中；
(2)加入40mL去离子水，90℃水浴2h后，8000r/min离心10min并收集上清；
(3)将步骤(2)重复提取3次并合并所有上清，再用真空冷冻浓缩仪将上清液浓缩至10mL；
(4)加入30mL无水乙醇，混匀后4℃过夜；
(5)4℃，12000r/min离心10min，弃上清；
(6)将沉淀置于75℃烘箱中烘至恒重后，用分析天平称重并计算樟芝菌丝体中的胞内多糖含量。
实施例1
牛樟树水提物的制备步骤如下：
(1)称取100g牛樟树木屑，加入1L去离子水，煮沸30min；
(2)用2层纱布过滤，收集滤液并用旋转蒸发仪浓缩10倍体积；
(3)将浓缩后的滤液真空冷冻干燥，既得牛樟树水提物粉末；
(4)将干燥后的牛樟树水提物粉末用水复溶，配制成浓度为10mg/mL的母液并用直径0.45μm的滤膜过滤除菌；
(5)将除菌后牛樟树水提物母液分装并置于-20℃冰箱中保存备用。
实施例2
牛樟树甲醇提取物的制备步骤如下：
(1)称取100g牛樟树木屑，加入1L甲醇，300r/min振荡提取2h；
(2)用2层纱布过滤，收集滤液并用旋转蒸发仪浓缩10倍体积；
(3)将浓缩后的滤液置于65℃烘箱中烘至恒重，既得牛樟树甲醇提取物粉末；
(4)将干燥后的牛樟树甲醇提取物粉末用水复溶，配制成浓度为10mg/mL 的母液并用直径0.45μm的滤膜过滤除菌；
(5)将除菌后牛樟树甲醇提取物母液分装并置于-20℃冰箱中保存备用。
实施例3
牛樟树乙酸乙酯提取物的制备步骤如下：
(1)称取100g牛樟树木屑，加入1L乙酸乙酯，300r/min振荡提取2h；
(2)用2层纱布过滤，收集滤液并用旋转蒸发仪浓缩10倍体积；
(3)将浓缩后的滤液置于85℃烘箱中烘至恒重，既得牛樟树乙酸乙酯提取物粉末；
(4)将干燥后的牛樟树乙酸乙酯提取物粉末用水复溶，配制成浓度为10 mg/mL的母液并用直径0.45μm的滤膜过滤除菌；
(5)将除菌后牛樟树乙酸乙酯提取物母液分装并置于-20℃冰箱中保存备用。
实施例4
牛樟树石油醚提取物的制备步骤如下：
(1)称取100g牛樟树木屑，加入1L石油醚，300r/min振荡提取2h；
(2)用2层纱布过滤，收集滤液并用旋转蒸发仪浓缩10倍体积；
(3)将浓缩后的滤液置于65℃烘箱中烘至恒重，既得牛樟树石油醚提取物粉末；
(4)将干燥后的牛樟树石油醚提取物粉末用水复溶，配制成浓度为10 mg/mL的母液并用直径0.45μm的滤膜过滤除菌；
(5)将除菌后牛樟树石油醚提取物母液分装并置于-20℃冰箱中保存备用。
实施例5
牛樟芝深层发酵培养基制备步骤如下：
(1)培养基配制(质量分数)：按葡萄糖2％、酵母浸出粉0.2％、MgSO4 0.15％、KH2PO4 0.3％的配方配制樟芝深层发酵液体培养基，并用1％的HCl 将初始pH调至4.5。
(2)培养基灭菌：将上述培养基按100mL/250mL的装液量分装到250mL 锥形瓶中，121℃灭菌20min，冷却后备用；
实施例6
添加不同牛樟树提取物对樟芝深层发酵无性产孢的影响，实施例5制备的培养基中所添加牛樟树提取物分别为牛樟树甲醇提取物、牛樟树乙酸乙提取物、牛樟树石油醚提取物及牛樟树水提物，添加终浓度均为50μg/mL。即接种前，在每100mL培养基(实施例5配制)中分别添加500μL浓度为10mg/mL的不同牛樟树提取物母液(实施例1、实施例2、实施例3及实施例4配制)，将樟芝孢子悬浮液按1×106个/mL的接种量接种到培养基中；将接种后的摇瓶置于26℃摇床中，150r/min振荡培养12天。
实施例7
添加不同浓度牛樟树水提物对樟芝深层发酵无性产孢的影响，添加终浓度分别为10μg/mL、20μg/mL、40μg/mL、60μg/mL、80μg/mL、100μg/mL、120μg/mL 及140μg/mL。即接种前，在每100mL培养基(实施例5配制)中分别添加0.1 mL、0.2mL、0.4mL、0.6mL、0.8mL、1.0mL、1.2mL及1.4mL浓度为10mg/mL 的牛樟树水提物母液(实施例1配制)，将樟芝孢子悬浮液按1×106个/mL的接种量接种到培养基中；将接种后的摇瓶置于26℃摇床中，150r/min振荡培养10 天。
实施例8
添加牛樟树提取物促进樟芝深层发酵产孢及产糖的方法，牛樟树提取物为牛樟树水提物，添加终浓度为90μg/mL。即接种前，在每100mL培养基(实施例 5配制)中添加900μL浓度为10mg/mL的牛樟树水提物母液(实施例1配制)，将樟芝孢子悬浮液按1×106个/mL的接种量接种到培养基中；将接种后的摇瓶置于26℃摇床中，150r/min振荡培养10天。
实施例9
添加牛樟树提取物促进樟芝深层发酵产孢及产糖的方法，牛樟树提取物为牛樟树水提物，添加浓度为60μg/mL。即接种前，在每100mL培养基(实施例5 配制)中添加600μL浓度为10mg/mL的牛樟树水提物母液(实施例1配制)，将樟芝孢子悬浮液按1×106个/mL的接种量接种到培养基中；将接种后的摇瓶置于26℃摇床中，150r/min振荡培养10d。
实施例10
添加牛樟树提取物促进樟芝深层发酵产孢及产糖的方法，所述牛樟树提取物为牛樟树水提物，添加浓度为30μg/mL。即接种前，在每100mL培养基(实施例5配制)中添加300μL浓度为10mg/mL的牛樟树水提物母液(实施例1配制)，将樟芝孢子悬浮液按1×106个/mL的接种量接种到培养基中；将接种后的摇瓶置于26℃摇床中，150r/min振荡培养10d。
试验例1(实施例6-10的结果分析)
按实施例6的方法，同时将培养基中不添加任何牛樟树提取物的发酵组设为对照组，每组设置3个重复。培养过程中，分别在6～12d期间每天取样进行孢子计数，测定产孢量，实验结果如图1所示。
由图1的结果可知：(1)在所有发酵批次中，产孢量均在发酵10d时达到最大值，因此后续试验均选取发酵10d的样品进行相关指标的检测；(2)所添加的4种牛樟树提取物，只有添加终浓度50μg/mL的牛樟树水提物对樟芝深层无性产孢有显著促进作用，其产孢量一直显著高于对照组且最大产孢量较对照组提高了41.2％；(3)添加相同浓度的牛樟树甲醇提取物、乙酸乙酯提取物及石油醚提取物均对樟芝深层发酵无性产孢有显著抑制作用，其产孢量始终明显低于对照组。以上结果说明牛樟树水提物能显著促进樟芝深层发酵无性产孢，而牛樟树其他有机溶剂提取物则表现出抑制樟芝无性产孢的效果。
按实施例7的方法，同时将培养基中不添加任何牛樟树提取物的发酵组设为对照组，每组设置3个重复。培养10d时取样进行孢子计数，测定产孢量，实验结果如图2所示。
由图2的结果可知，牛樟树水提物对樟芝深层发酵无性产孢的促进作用呈现出明显的浓度依赖性，且促进效果最为显著的添加终浓度为60μg/mL，此时产孢量较对照组提高了54％左右；当牛樟树水提物添加终浓度低于60μg/mL时，对樟芝深层无性产孢的促进效果随浓度的增加而增加，当牛樟树水提物添加终浓度高于60μg/mL时，对樟芝深层无性产孢的促进效果随浓度的增加而降低。说明牛樟树水提物的最佳添加终浓度为60μg/mL，并非添加浓度越高约好。
按实施例8的方法，同时将培养基中不添加牛樟树水提物的发酵组设为对照组，每组设置3个重复。培养10d时，取样按上述方法测定发酵产物中的产孢量、生物量及胞内多糖含量，实验结果如图3所示。
由图3的结果可知，发酵培养10d时，与培养基中未添加牛樟树水提物的对照组相比，添加90μg/mL牛樟树水提物后，产孢量从4.71×107个/mL增加至 6.88×107个/mL，提高了46％；生物量从5.27g/L增加至6.22g/L，提高了18％；樟芝菌丝体胞内多糖含量从9.21％增加至17.32％，提高了88％。可见，添加90 μg/mL牛樟树水提可显著促进樟芝深层发酵过程中无性产孢，产孢量显著提高；同时，还显著促进樟芝生长及产活性物质，显著提高了樟芝深层发酵生物量及樟芝菌丝体中的胞内多糖含量。
按实施例9的方法，同时将培养基中不添加牛樟树水提物的发酵组设为对照组，每组设置3个重复。在发酵培养10d时，取样按上述方法测定发酵产物中的产孢量、生物量及胞内多糖含量，实验结果如图4所示。同时，对两组样品的发酵摇瓶及孢子计数镜头进行实物拍照，结果如图5所所示。
由图4的结果可知，发酵培养10d时，与培养基中未添加牛樟树水提物的对照组相比，添加60μg/mL牛樟树水提物后，产孢量从4.81×107个/mL增加至 7.41×107个/mL，提高了54％；生物量从5.28g/L增加至6.48g/L，提高了约23％；樟芝菌丝体胞内多糖含量从9.24％增加至18.68％，提高了102％。可见，添加60 μg/mL牛樟树水提可显著促进樟芝深层发酵过程中无性产孢，大幅提高了产孢量；同时，还非常显著地促进樟芝生长及产活性物质，显著提高了樟芝深层发酵生物量及樟芝菌丝体中的胞内多糖含量。此外，由图5的发酵摇瓶及显微镜下血球计数板中的孢子实物图也能看出，与培养基中未添加牛樟树水提物的对照组相比，添加60μg/mL牛樟树水提物后，生物量及孢子浓度的增加趋势都非常明显。
按实施例10的方法，同时将培养基中不添加牛樟树水提物的发酵组设为对照组，每组设置3个重复。在发酵培养10d时，按上述方法测定发酵产物中的产孢量、生物量及胞内多糖含量，实验结果如图6所示。
由图6的结果可知，发酵培养10d时，与培养基中未添加牛樟树水提物的对照组相比，添加30μg/mL牛樟树水提物后，产孢量从4.76×107个/mL增加至 6.23×107个/mL，提高了约31％；生物量从5.26g/L增加至6.05g/L，提高了15％；樟芝菌丝体胞内多糖含量从9.23％增加至14.86％，提高了约61％。可见，添加 30μg/mL牛樟树水提亦可显著促进樟芝深层发酵过程中无性产孢，产孢量显著增加；同时，还可显著促进樟芝生长及产活性物质，显著提高了樟芝深层发酵生物量及樟芝菌丝体中的胞内多糖含量。
实施例11
牛樟树水提物的制备步骤如下：
(1)称取100g切碎的牛樟树树干，加入1L去离子水，煮沸30min；
(2)用2层纱布过滤，收集滤液并用旋转蒸发仪浓缩5倍体积；
(3)将浓缩后的滤液真空冷冻干燥，既得牛樟树水提物粉末；
(4)将干燥后的牛樟树水提物粉末用水复溶，配制成浓度为5mg/mL的母液并用直径0.45μm的滤膜过滤除菌；
(5)将除菌后牛樟树水提物母液分装并置于-20℃冰箱中保存备用。
实施例12
牛樟树水提物的制备步骤如下：
(1)称取100g切碎的牛樟树树根，加入1L去离子水，煮沸30min；
(2)用2层纱布过滤，收集滤液并用旋转蒸发仪浓缩20倍体积；
(3)将浓缩后的滤液真空冷冻干燥，既得牛樟树水提物粉末；
(4)将干燥后的牛樟树水提物粉末用水复溶，配制成浓度为50mg/mL的母液并用直径0.45μm的滤膜过滤除菌；
(5)将除菌后牛樟树水提物母液分装并置于-20℃冰箱中保存备用。
实施例13
实施例13与实施例6方法相同，不同之处在于：樟芝接种按樟芝孢子悬浮液按1×105个/mL的接种量接种到培养基中；接种后在24℃、50r/min条件下振荡培养20d。
实施例14
实施例14与实施例6方法相同，不同之处在于：樟芝接种按樟芝孢子悬浮液按5×106个/mL的接种量接种到培养基中；接种后在27℃、300r/min条件下振荡培养7d。
Claims (8)
1.一种添加牛樟树水提物促进樟芝深层发酵产孢及产糖的方法，其特征在于，在樟芝深层发酵培养基中添加牛樟树水提物，然后再接种樟芝进行发酵；在樟芝深层发酵培养基中添加终浓度为20~120 µg/mL的牛樟树水提物；所述牛樟树为牛樟树除树叶以外的部分。
2.根据权利要求1所述的添加牛樟树水提物促进樟芝深层发酵产孢及产糖的方法，其特征在于，所述牛樟树为牛樟树的树干、树枝或者树根。
3.根据权利要求1所述的添加牛樟树水提物促进樟芝深层发酵产孢及产糖的方法，其特征在于，所述牛樟树为牛樟树的木屑。
4.根据权利要求1所述的添加牛樟树水提物促进樟芝深层发酵产孢及产糖的方法，其特征在于，所述牛樟树水提物的制备步骤如下：
（1）称取牛樟树木屑或者切碎的牛樟树木块，加入去离子水煮沸；
（2）过滤，收集滤液并浓缩；
（3）将浓缩后的滤液干燥，即得牛樟树水提物粉末；
（4）将干燥后的牛樟树水提物粉末用水复溶，过滤除菌；
（5）将除菌后的牛樟树水提物母液置于冰箱中冷冻保存备用。
5.根据权利要求4所述的添加牛樟树水提物促进樟芝深层发酵产孢及产糖的方法，其特征在于，步骤（1）所述牛樟树木块为树干、树枝或树根的混合物或者其中一种。
6.根据权利要求4所述的添加牛樟树水提物促进樟芝深层发酵产孢及产糖的方法，其特征在于，步骤（2）所述滤液浓缩到原体积的5-20倍。
7.根据权利要求4所述的添加牛樟树水提物促进樟芝深层发酵产孢及产糖的方法，其特征在于，步骤（4）所述牛樟树水提物粉末用水复溶，配制成浓度为5-50 mg/mL的母液并用滤膜过滤除菌。
8.根据权利要求1所述的添加牛樟树水提物促进樟芝深层发酵产孢及产糖的方法，其特征在于，所述接种樟芝种按樟芝孢子悬浮液以1×105 个/mL -5×106 个/mL的接种量接种到培养基中；接种后在24-27℃、50-300 r/min条件下振荡培养7- 20 d。
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