CN114272435A - 皮肤修复用胶原蛋白敷料原液、皮肤修复用胶原蛋白敷料及制备方法 - Google Patents
皮肤修复用胶原蛋白敷料原液、皮肤修复用胶原蛋白敷料及制备方法 Download PDFInfo
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Abstract
本发明涉及生物医学技术领域，本发明公开了一种皮肤修复用胶原蛋白敷料原液、皮肤修复用胶原蛋白敷料制备方法，原液按照质量百分含量计包括如下组分：I型胶原0.1‑0.3％，胶原蛋白多肽混合物0.2‑0.5％(胶原蛋白多肽混合物为两种不同分子量胶原肽的混合物)，多元醇3‑5％，防腐剂0.2‑0.6％，余量为纯化水；包括如下步骤：第一混合液：将I型胶原加水溶胀；将胶原蛋白多肽混合物加入到胶原溶液中搅拌；第二共混液：多元醇和防腐剂加入水中加热至60‑70℃搅拌至防腐剂完全溶解；共混：将第二混合液冷却至室温，加入到第一混合液中，搅拌，使溶液充分混匀得到皮肤修复用胶原蛋白敷料原液。本发明的敷料不仅起来保湿补水，保障皮肤术后的微环境，而且极大提高了皮肤修复作用。
Description
技术领域
本发明涉及生物医学技术领域，尤其涉及皮肤修复用胶原蛋白敷料原液、皮肤修复用胶原蛋白敷料及制备方法。
背景技术
随着经济基础的提升和审美的提升，大众对美的追求使整形的需求与日俱增，随着医疗技术的发展，更安全的医美疗程和更显著的效果也吸引了更多的消费者。这些医疗美容术都会导致皮肤的炎症、过敏、创面愈合期疤痕的形成或色素沉着等反应，因此在术后需要皮肤修复的产品对皮肤进行修复和促进愈合。
胶原是细胞外基质四大组分之一，而且是主要成分，胶原是结缔组织极其重要的结构蛋白，起着支撑器官、保护机体的功能，是决定结缔组织韧性的主要因素。胶原有三条肽链构成的螺旋形纤维状，具有四级结构，人体内蛋白质中约16％为胶原蛋白，胶原蛋白占皮肤蛋白总量的70％。其中皮肤中约85％的胶原蛋白属于Ⅰ型，它能促进表皮细胞正常生长，引导上皮细胞迁入缺损去，刺激细胞分裂，使其降解物能被新生细胞利用合成新的胶原，填充在新生细胞之间的胶原能减少生长细胞的接触性抑制，起到自我修复。
胶原蛋白经水解后，其功能特性和生理活性功能被改善，胶原蛋白水解物具有较强的皮肤渗透能力及易吸收的特性，并能有效的提供皮肤新陈代谢所需要的氨基酸。有实验表明，胶原多肽能够促进皮肤成纤维皮肤细胞分化，增强细胞增殖，促进胶原和透明质酸的合成。
现在市场的胶原贴敷料，大多采用的是大分子胶原，分子量在300KDa左右，分子量太大，不易被皮肤吸收。分子量较小的寡肽能够通过皮肤直接吸收，能透过皮肤的角质层，表皮层到达真皮层，刺激皮肤内纤维细胞促进胶原的合成，达到皮肤修复的作用。不同分子量的胶原肽有不同的作用，胶原肽能抑制黑色素细胞分泌黑色素而减少瘢痕和黑色素的沉积。
发明内容
本发明要解决的技术问题在于，针对现有技术中的缺陷，提供皮肤修复用胶原蛋白敷料原液、皮肤修复用胶原蛋白敷料及制备方法。
为了解决上述技术问题，本发明提供了皮肤修复用胶原蛋白敷料原液、皮肤修复用胶原蛋白敷料及制备方法。
第一方面，皮肤修复用胶原蛋白敷料原液的制备方法，所述的皮肤修复用胶原蛋白敷料原液按照质量百分含量计包括如下组分：
I型胶原：0.1-0.3％，胶原蛋白多肽混合物0.2-0.5％，多元醇3-5％，防腐剂0.2-0.6％，余量为纯化水；
包括如下步骤：
胶原溶胀：将I型胶原蛋白修剪成3mm-10mm方形的小块，添加纯化水，纯化水的添加量为总纯化水质量的70％-80％，搅拌溶胀时间8-12h得到胶原溶液；
共混：将0.2-0.5份胶原蛋白多肽混合物加入到胶原溶液中，搅拌4-8h胶原蛋白多肽混合物完全溶解后得到第一混合液；
添加多元醇：将所述的多元醇缓慢加入到剩余的纯化水中，充分共混得到多元醇溶液；
添加防腐剂：将所述的防腐剂加入多元醇溶液中，加热至60-70℃，搅拌溶解，将防腐剂完全溶解得到第二混合液；
共混：将第二混合液冷却至室温，加入到第一混合液中，再次搅拌2-4h，使溶液充分混匀得到所述的皮肤修复用胶原蛋白敷料原液。
进一步的：所述的皮肤修复用胶原蛋白敷料原液按照质量百分含量计包括如下组分：I型胶原0.2％，分子量5-3KDa胶原肽0.2％，分子量为10-5KDa胶原肽0.2％，多元醇4％，防腐剂0.2％，纯化水95.2％。
进一步的：所述的I型胶原蛋白是由牛跟腱经过酶解提取的，分子量在300KDa；所述的胶原蛋白多肽混合物是由牛跟腱经过复合酶经过酶解制成；复合酶为胰蛋白酶、木瓜蛋白酶、风味蛋白酶、碱性蛋白酶、酸性蛋白酶和中性蛋白酶的两种以及两种以上的任意混合物；所述的胶原蛋白多肽混合物的分子量小于10KDa；所述的胶原蛋白多肽混合物与所述的I型胶原蛋白具有同源性，由牛跟腱经过酶解提取。
进一步的：所述的胶原蛋白多肽混合物酶解所需的酶是由木瓜蛋白酶、酸性蛋白酶、碱性蛋白酶、动物蛋白酶、胰蛋白酶和动物蛋白酶中的两种或者两种以上的酶参与；所述的胶原蛋白多肽混合物的酶解温度为50-70℃，优选为55-60℃；所述的胶原蛋白多肽混合物的酶解pH值酸性蛋白酶酶解时pH值为4-6，优选的pH值5-5.5；碱性蛋白酶酶解时pH值为8-10，优选为8.5-9.5；所述的胶原蛋白多肽混合物的酶解时间为8-12h。
进一步的：胶原蛋白多肽混合物纯化方法采用超滤膜过滤的方法，截取不同分子量的胶原蛋白肽，截留分子量小于3KDa，5-3KDa，10-5KDa，优选的10-5KDa。
进一步的：所述的多元醇为丙三醇、丁二醇和聚乙二醇的一种或两种的任意混合物。
进一步的：所述的防腐剂由苯甲酸钠、山梨酸钾、山梨酸或羟苯甲酯的一种或两种混合组成。
第二方面，皮肤修复用胶原蛋白敷料原液，所述的皮肤修复用胶原蛋白敷料原液由上述的制备方法制备而得。
第三方面，皮肤修复用胶原蛋白敷料的制备方法，皮肤修复用胶原蛋白敷料原液量取25-30ml注入到装入包装袋中的无纺布上，充分吸收，封口。
进一步的，皮肤修复用胶原蛋白敷料的制备方法，将以吸附皮肤修复用胶原蛋白敷料原液的无纺布包装封口后在-24℃的冰箱中冷冻24-48h，装入保温箱中，保温箱中装入经过冷冻的冰袋或冰盒，使温度维持在5℃以下采用15-38KGY剂量辐照灭菌。使复合胶原贴敷料达到无菌(无菌保证水平SAL＝10-6)同时，在低温环境下，可避免胶原在辐照过程中变性或者发证交联反应，保证了胶原的活性。
第四方面，皮肤修复用胶原蛋白敷料，所述的皮肤修复用胶原蛋白敷料由上述方法制备而得。
实施本发明的方法，具有以下有益效果：
本发明复合胶原贴敷料，是在I型胶原蛋白基础上添加I型胶原蛋白的水解产物胶原蛋白多肽混合物，不仅起来保湿补水，保障皮肤术后的微环境，而且极大提高了皮肤修复作用。胶原蛋白多肽混合物的加入可以渗透到皮肤深处，促进皮肤纤维细胞的分化，增强细胞的增殖，促进皮肤胶原的生产，为皮肤中胶原的生产提供原料，对术后皮肤的修复起到积极的治疗作用。添加不同分子量的胶原肽有不同的作用，胶原肽能抑制黑色素细胞分泌黑色素而减少术后瘢痕的产生和黑色素的沉积。
具体实施方式
为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合本发明实施例对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本发明的一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动的前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
申请人在大分子胶原的敷料贴的基础上，复合有Ⅰ型胶原经过水解后的多肽。该复合的胶原敷料贴对激光，光子嫩肤等美容术后皮肤具有较好的修复作用。
第一方面，皮肤修复用胶原蛋白敷料原液的制备方法，所述的皮肤修复用胶原蛋白敷料原液按照质量百分含量计包括如下组分：
I型胶原：0.1-0.3％，胶原蛋白多肽混合物0.2-0.5％，份多元醇3-5％，的防腐剂0.2-0.6％，余量为纯化水；
包括如下步骤：
胶原溶胀：将I型胶原蛋白修剪成3mm-10mm方形的小块，添加纯化水，纯化水的添加量为总纯化水质量的70％-80％，溶胀时间8-12h得到胶原溶液；
胶原蛋白肽制备：将牛跟腱剔除筋膜，脂肪和肌肉，经过-20℃--10℃的冰箱中冷冻后切成1-3mm的薄片，在水浴条件下加热至85-95℃，保持5-10min使其胶原失活，牛跟腱变成白色；按照牛跟腱：纯化水＝1g:60-100ml的比例加入纯化水，加入酸性蛋白酶，胶原蛋白与蛋白酶的分数比为100-500:1.水浴加热至50-70℃，调节pH值4-6，酶解4-8h，至牛跟腱全部溶解。调节酶解液pH值至8-10，按照胶原蛋白与蛋白酶的分数比为100-800:1加入碱性蛋白酶，水浴加热至60-70℃，酶解4-8h。将酶解液冷却至室温后，将酶解液经过离心机3000-4000r/min离心10-20min，取上清液，将上清液稀释至40-60g/L，超滤压强为0.2-0.5MPa，利用Millipore Pellicon超滤系统，将上清液截留分子量小于3KDa,5-3KDa和10-5KDa的滤液。滤液经过旋转蒸发浓缩后，冷冻干燥得到胶原分子多肽。
共混：将0.2-0.5％胶原蛋白多肽混合物加入到胶原溶液中，搅拌4-8h得到第一混合液；
添加多元醇：将所述的多元醇缓慢加入到剩余的纯化水中，充分共混得到多元醇溶液；
添加防腐剂：将所述的防腐剂加入多元醇溶液中，加热至60-70℃，将防腐剂完全溶解得到第二混合液；
共混：将第二混合液冷却至室温，加入到第一混合液中，再次搅拌2-4h，使溶液充分混匀得到所述的皮肤修复用胶原蛋白敷料原液。
相比于简单的混合，先将胶原溶胀后与胶原蛋白多肽混合物共混，多元醇与防腐剂进行加热溶解之后将两种溶液共混，这样做有以下优点：1、避免溶解过程的高温使得胶原变性失去活性；2、防腐剂能更好的完全溶解在溶液中起到抑制微生物的生长；3、溶液混合更均匀不产生分层。
在本发明的一些实施例中，所述的I型胶原蛋白是由牛跟腱经过酶解提取的，分子量在300KDa。
在本发明的一些实施例中，所述的皮肤修复用胶原蛋白敷料原液按照质量百分含量计包括如下组分：I型胶原0.2％，分子量5-3KDa胶原肽0.2％的，分子量为10-5KDa胶原肽0.2％，多元醇4％，防腐剂0.2％，纯化水95.2％。
在本发明的一些实施例中，所述的胶原蛋白多肽混合物是由牛跟腱经过复合酶经过酶解制成。复合酶为胰蛋白酶、木瓜蛋白酶、风味蛋白酶、碱性蛋白酶、酸性蛋白酶和中性蛋白酶的两种以及两种以上的任意混合物。
在本发明的一些实施例中，所述的胶原蛋白多肽混合物的分子量小于10KDa。
在本发明的一些实施例中，所述的多元醇为丙三醇、丁二醇和聚乙二醇的一种或两种的任意混合物。
在本发明的一些实施例中，所述的防腐剂由苯甲酸钠、山梨酸或羟苯甲酯的一种或两种混合组成。
第二方面，皮肤修复用胶原蛋白敷料原液，所述的皮肤修复用胶原蛋白敷料原液由上述的制备方法制备而得。
第三方面，皮肤修复用胶原蛋白敷料的制备方法，由无纺布吸收皮肤修复用胶原蛋白敷料原液得到，所述的皮肤修复用胶原蛋白敷料原液为上述的皮肤修复用胶原蛋白敷料原液。
第四方面，皮肤修复用胶原蛋白敷料，所述的皮肤修复用胶原蛋白敷料由上述方法制备而得。
本发明利用胶原蛋白的生物活性促进损伤皮肤的修复，利用胶原蛋白分子中含有大量的酰胺基团和羧基，具有较强的吸湿和保水性能，提供微环境促进细胞的增殖，隔绝外部污染物的侵扰减少感染；本发明中同源的胶原蛋白肽与胶原蛋白具有相同的氨基酸，由于胶原蛋白肽的分子量小，透皮性能好，胶原蛋白肽中的氨基酸能对真皮细胞起到营养、保湿的作用，同时为损伤皮肤胶原蛋白的合成提供原料，能够促进人成纤维细胞的增殖，有助于恢复皮肤的损伤。本发明的敷料不仅起来保湿补水，保障皮肤术后的微环境，而且极大提高了皮肤修复作用。
本发明的皮肤修复用胶原蛋白敷料原液、皮肤修复用胶原蛋白敷料的制备方法中I型胶原蛋白和胶原蛋白多肽混合物均来源于牛跟腱，来源统一，I型胶原蛋白所具有的的氨基酸在胶原蛋白多肽混合物中均能找到，胶原蛋白多肽混合物是由I型胶原蛋白再次酶解得到。提高皮肤修复用胶原蛋白敷料原液中氨基酸的含量。同时选择牛跟腱作为I型胶原蛋白和胶原蛋白多肽混合物的来源组织是因为牛跟腱中Ⅰ型胶原蛋白含量高达95％，相比于，其他动物如鸡、猪、兔子等哺乳动物的皮质以及海洋生物鱼皮、海参等含量要高；而且动物的皮组织有许多其他成分，包括血管、淋巴、毛囊和汗腺等，跟腱则相对成分单一，提取胶原较容易。
实施案例1：皮肤修复用胶原蛋白敷料的制备方法：I型胶原：0.1％，胶原蛋白多肽混合物0.2％，其中胶原蛋白多肽混合物胶原蛋白多肽混合物为0.1％的分子量5-3KDa胶原肽和0.1％的分子量小于3KDa胶原肽共混物，多元醇3％，防腐剂0.2％，纯化水96.5％；其中多元醇为丙三醇；防腐剂为山梨酸。
胶原蛋白肽的制备：将牛跟腱剔除筋膜，脂肪和肌肉，经过-20℃--10℃的冰箱中冷冻后切成1-3mm的薄片，在水浴条件下加热至90℃，保持10min使其胶原失活，牛跟腱变成白色；按照牛跟腱：纯化水＝1g:60-100ml的比例加入纯化水，加入酸性蛋白酶，胶原蛋白与蛋白酶的分数比为100-500:1.水浴加热至60℃，调节pH值5，酶解8h，至牛跟腱全部溶解。调节酶解液pH值至9，按照胶原蛋白与蛋白酶的分数比为100-800:1加入碱性蛋白酶，水浴加热至60℃，酶解6h。将酶解液冷却至室温后，将酶解液经过离心机4000r/min离心20min，取上清液，将上清液稀释至40g/L，超滤压强为0.3MPa，利用Millipore Pellicon超滤系统，将上清液截留分子量10-5KDa和5-3KDa的滤液。滤液经过旋转蒸发浓缩后，冷冻干燥得到胶原分子多肽。
复合胶原敷料贴的制备方法：将I型胶原蛋白修剪成3mm方形的小块，添加纯化水，纯化水的添加量为总纯化水质量的70％，溶胀时间8h得到胶原溶液；将0.2份胶原蛋白多肽混合物加入到胶原溶液中，搅拌4h得到第一混合液；多丙三醇缓慢加入到剩余的纯化水中，充分共混得到多元醇溶液；将防腐剂山梨酸加入多元醇溶液中，加热至60℃，将防腐剂完全溶解得到第二混合液；将第二混合液冷却至室温，加入到第一混合液中，再次搅拌4h，使溶液充分混匀得到所述的皮肤修复用胶原蛋白敷料原液。量取25ml皮肤修复用胶原蛋白敷料原液注入到装入包装袋中的无纺布上，充分吸收，封口。将以吸附皮肤修复用胶原蛋白敷料原液的无纺布包装封口后在-24℃的冰箱中冷冻24h，装入保温箱中，保温箱中装入经过冷冻的冰袋或冰盒，采用15-25KGY剂量辐照灭菌。
实施案例2：皮肤修复用胶原蛋白敷料的制备方法：I型胶原：0.2％，胶原蛋白多肽混合物0.4％，胶原蛋白多肽混合物为0.2％的分子量5-3KDa胶原肽和0.2％的分子量为10-5KDa胶原肽共混物。多元醇4％，防腐剂0.2％，纯化水95.2％；
复合胶原敷料贴的制备方法：除胶原蛋白肽制备方法中利用Millipore Pellicon超滤系统，将上清液截留分子量5-3KDa的滤液。滤液经过旋转蒸发浓缩后，冷冻干燥得到胶原分子多肽，其余步骤同实施案例1.
实施案例3：皮肤修复用胶原蛋白敷料的制备方法：I型胶原：0.3％，胶原蛋白多肽混合物0.5％，胶原蛋白多肽混合物为0.3％的分子量5-3KDa胶原肽和0.2％的分子量为小于3KDa胶原肽共混物。多元醇5％，防腐剂0.2％，纯化水94％；
复合胶原敷料贴的制备方法：除胶原蛋白肽制备方法中利用Millipore Pellicon超滤系统，将上清液截留分子量小于3KDa的滤液。滤液经过旋转蒸发浓缩后，冷冻干燥得到胶原分子多肽，同实施案例1.
对比案例1：皮肤修复用胶原蛋白敷料的制备方法：I型胶原：0.2％，多元醇4％，防腐剂0.2％，纯化水95.6％；
实验测试：
持水性测试：准确称取M0＝1.0g实施案例1-实施案例3和对比案例中皮肤修复用胶原蛋白敷料的三组样品，均匀平铺在干燥恒重的培养皿中，称其与培养皿总重为M1。然后放在温度30℃，相对湿度在60％的恒温恒湿培养箱中，每20min后称取培养皿的质量记为M2持续记录5次。
持水性计算：
持水性(％)＝(M2-M1)/M0×100％
结果如表1所示
表1
| 持水性(％) | 20min | 40min | 60min | 80min | 100min |
| 实施例1 | 95 | 80 | 72 | 55 | 40 |
| 实施例2 | 97 | 87 | 80 | 68 | 60 |
| 实施例3 | 97 | 90 | 85 | 74 | 65 |
| 对比例 | 92 | 78 | 69 | 53 | 35 |
补水性测试：测试者在温度18-22℃，相对湿度在40-60％的房间内放松休息30min。在测试者前臂内侧标记出4×4cm的测试区域，每个区域间隔2cm。用皮肤水分含量测试仪测出测试区域的空白值，将实施案例1-3的样品和对比例的样品裁剪出4×4cm的样品分别贴敷在测试区域，在贴敷20min后测量测试区域的水分含量。结果如表2所示
表2
实验条件：选取4只实验小鼠，在小鼠的背部相同位置去毛，用激光对小鼠背部进行扫描，形成10mm×10mm的创面。将实施案例1-3和对比案例1的胶原贴敷料，裁剪成15mm×15mm的尺寸，对创面进行覆盖，每天1次，1次15-20min。观察1周、2周和3周后创面的愈合状况。结果如表3所示：
表3
由以上的检测结果可知，本发明皮肤修复用胶原蛋白敷料，在持水，补水的性能上均比不含胶原蛋白的肽得到性能要好。
由上表可知本发明肤修复用胶原蛋白敷料对伤口的愈合速度有明显的提高，减少红肿和感染的出现，并且减少疤痕的形成。
由实施案例1-3可知，优选的I型胶原：0.2％，胶原蛋白多肽混合物0.4％，胶原蛋白多肽混合物为0.2％的分子量5-3KDa胶原肽和0.2％的分子量为10-5KDa胶原肽共混物。。多元醇4％，防腐剂0.2％，纯化水95.2％；
本发明复合胶原贴敷料，是在I型胶原蛋白基础上添加I型胶原蛋白的水解产物胶原蛋白多肽混合物，不仅起来保湿补水，保障皮肤术后的微环境，而且极大提高了皮肤修复作用。胶原蛋白多肽混合物的加入可以渗透到皮肤深处，促进皮肤纤维细胞的分化，增强细胞的增殖，促进皮肤胶原的生产，为皮肤中胶原的生产提供原料，对术后皮肤的修复起到积极的治疗作用。
最后应说明的是：以上实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的精神和范围。
Claims (10)
1.一种皮肤修复用胶原蛋白敷料原液的制备方法，其特征在于：所述的皮肤修复用胶原蛋白敷料原液按照质量百分含量计包括如下组分：
I型胶原0.1-0.3％，胶原蛋白多肽混合物0.2-0.5％，多元醇3-5％，防腐剂0.2-0.6％，余量为纯化水；所述制备方法包括如下步骤：
胶原溶胀：将I型胶原蛋白修剪成3mm-10mm方形的小块，添加纯化水，纯化水的添加量为总纯化水质量的70％-80％，溶胀时间12-24h得到胶原溶液；
共混：将0.2-0.5％胶原蛋白多肽混合物加入到胶原溶液中，搅拌4-8h得到第一混合液；
添加多元醇：将所述的多元醇缓慢加入到剩余的纯化水中，充分共混得到多元醇溶液；
添加防腐剂：将所述的防腐剂加入多元醇溶液中，加热至60-70℃，将防腐剂完全溶解得到第二混合液；
共混：将第二混合液冷却至室温，加入到第一混合液中，再次搅拌2-4h，使溶液充分混匀得到所述的皮肤修复用胶原蛋白敷料原液。
2.根据权利要求1所述的皮肤修复用胶原蛋白敷料原液的制备方法，其特征在于：所述的皮肤修复用胶原蛋白敷料原液按照质量百分含量计包括如下组分：I型胶原0.2％，分子量5-3KDa胶原肽0.2％，分子量为10-5KDa胶原肽0.2％，多元醇4％，防腐剂0.2％，纯化水95.2％。
3.根据权利要求1所述的皮肤修复用胶原蛋白敷料原液的制备方法，其特征在于：所述的I型胶原蛋白是由牛跟腱经过酶解提取的，分子量在300KDa；所述的胶原蛋白多肽混合物是由牛跟腱经过复合酶经过酶解制成；复合酶为胰蛋白酶、木瓜蛋白酶、风味蛋白酶、碱性蛋白酶、酸性蛋白酶和中性蛋白酶的两种以及两种以上的任意混合物；所述的胶原蛋白多肽混合物的分子量小于10KDa；所述的胶原蛋白多肽混合物与所述的I型胶原蛋白具有同源性，由牛跟腱经过酶解提取。
4.根据权利要求3所述的皮肤修复用胶原蛋白敷料原液的制备方法，其特征在于：所述的胶原蛋白多肽混合物酶解所需的酶是由木瓜蛋白酶、酸性蛋白酶、碱性蛋白酶、动物蛋白酶、胰蛋白酶和动物蛋白酶中的两种或者两种以上的酶参与；所述的胶原蛋白多肽混合物的酶解温度为50-70℃，优选为55-60℃；所述的胶原蛋白多肽混合物的酶解pH值酸性蛋白酶酶解时pH值为4-6，优选的pH值5-5.5；碱性蛋白酶酶解时pH值为8-10，优选为8.5-9.5；所述的胶原蛋白多肽混合物的酶解时间为8-12h。
5.根据权利要求4所述的皮肤修复用胶原蛋白敷料原液的制备方法，其特征在于：胶原蛋白多肽混合物纯化方法采用超滤膜过滤的方法，截取不同分子量的胶原蛋白肽，截留分子量小于3KDa，5-3KDa，10-5KDa，优选的10-5KDa。
6.根据权利要求1所述的皮肤修复用胶原蛋白敷料原液的制备方法，其特征在于：所述的多元醇为丙三醇、丁二醇和聚乙二醇的一种或两种的任意混合物。
7.根据权利要求1所述的皮肤修复用胶原蛋白敷料原液的制备方法，其特征在于：所述的防腐剂由苯甲酸钠、山梨酸钾、山梨酸或羟苯甲酯的一种或两种混合组成。
8.一种皮肤修复用胶原蛋白敷料原液，其特征在于，所述的皮肤修复用胶原蛋白敷料原液由权利要求1-7任一项所述的制备方法制备而得。
9.一种皮肤修复用胶原蛋白敷料的制备方法，其特征在于：由无纺布吸收皮肤修复用胶原蛋白敷料原液得到，所述的皮肤修复用胶原蛋白敷料原液为权利要求8所述的皮肤修复用胶原蛋白敷料原液。
10.一种皮肤修复用胶原蛋白敷料，其特征在于，所述的皮肤修复用胶原蛋白敷料由权利要求9所述的方法制备而得。
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Legal Events
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|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
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| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
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| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20220405 |
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