CN114272194A - 一种用于淡化痘印的骨髓间充质干细胞组合物 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种用于淡化痘印的骨髓间充质干细胞组合物，由以下原料组成：骨髓间充质干细胞培养产物、水杨酸、尿囊素、维生素C、乳化剂、去离子水。本发明还限定了骨髓间充质干细胞培养产物的制备过程，在该细胞培养产物的制备过程中过程中不添加胎牛血清等外源性成分，添加黄葵内酯、邻磺酰苯甲酰亚胺钠、人参寡肽等协同作用，制备的细胞培养产物能加速淡化痘印，提高细胞培养产物对痘印的祛除效果，使皮肤快速恢复健康状态。添加的黄葵内酯、邻磺酰苯甲酰亚胺钠、人参寡肽、成纤维细胞生长因子、透明质酸钠均是安全无毒性，得到的组合物用于面部皮肤时，再结合水杨酸、尿囊素、维生素C等共同作用，安全稳定，实现痘印皮肤的快速恢复。
Description
技术领域
本发明涉及干细胞领域，尤其涉及一种用于淡化痘印的骨髓间充质干细胞组合物。
背景技术
间充质干细胞(MSCs)是干细胞家族的重要成员，广泛存在于骨髓、脂肪、脐血和外周血中。目前研究较多的干细胞之一为骨髓间充质干细胞(BMSCs)，骨髓间充质干细胞是骨髓基质的主要成份，具有较强的自我更新能力，在体内可增殖形成组织并维持自身的数量，在体外可扩增培养。
骨髓间充质干细胞具有自我复制、多向分化潜能的成体干细胞。在一定诱导条件下具有向成骨细胞、成软骨细胞、成肌细胞、肌腱细胞、脂肪细胞以及基质细胞等中胚层细胞分化的能力，是未来干细胞在医疗应用上的理想种子细胞，在皮肤护理领域应用较少。
随着生活水平的提高，人们对面部皮肤的护理关注度也越来越高。正常情况下人体面部皮肤的皮脂腺会分泌适量的皮脂，这些皮脂经由毛囊、皮脂管排送至皮肤表面，发挥滋润肌肤及防止水分蒸发的功能，使肌肤光滑靓丽；但在青春期，由于体内分泌功能紊乱，皮脂腺活性异常，导致皮脂分泌增加，使其皮脂外流不畅，淤积于皮脂腺内，堵塞毛孔就会形成粉刺、黑头或者青春痘。这些淤积在毛囊内的油性皮脂是微生物的极好营养，易造成微生物的大量繁殖，进而出现红肿化脓的情况，待青春痘消失后会在面部皮肤表面形成深深浅浅的痘印，短时间内很难消退，不仅有碍美观，还严重影响心情。
现有各种祛痘印的产品存在诸多问题，如刺激性较大，造成皮肤过敏等进一步恶化面皮皮肤的状态，或者效果不明显，需要连续使用较长时间，增加患者的心理负担和经济负担。因此需要研究一种可快速消退痘印的护理产品，减少因痘印残留对青少年造成的困扰。
发明内容
为了克服现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种淡化痘印的骨髓间充质干细胞组合物，在该组合物中添加骨髓间充质干细胞培养产物，能快速淡化痘印，使皮肤恢复健康状态。
本发明的目的采用如下技术方案实现：
一种用于淡化痘印的骨髓间充质干细胞组合物，由以下重量份的原料组成：骨髓间充质干细胞培养产物0.7-1.3份、水杨酸0.5-1.5份、尿囊素1.5-4.5份、维生素C 5-10份、乳化剂0.3-0.5份、去离子水20-30份。
所述骨髓间充质干细胞培养产物通过以下方法制备：
（1）取传代培养至对数期的骨髓间充质干细胞接种于培养瓶的诱导培养基中，所述诱导培养基由基础培养基和添加在基础培养基中的黄葵内酯、邻磺酰苯甲酰亚胺钠、人参寡肽、成纤维细胞生长因子、透明质酸钠组成；
（2）将接种骨髓间充质干细胞的培养瓶置于5%CO2，37℃的培养箱中进行培养，每隔1天进行半量换液，连续培养7天；
（3）收集步骤（2）中培养瓶中的培养液，离心去除培养基，细胞清洗后进行匀浆，离心取上清，将上清液过滤除菌后冻干，即得骨髓间充质干细胞培养产物。
进一步地，所述基础培养基为DMEM/F12培养基，诱导培养基中各组分的终浓度为：黄葵内酯2.3-3.7ng/mL、邻磺酰苯甲酰亚胺钠1.5-2.8 ng/mL、人参寡肽1-3μg/mL、成纤维细胞生长因子5-10μg/mL、透明质酸钠1-5μg/mL。
进一步地，诱导培养基中各组分的终浓度为：黄葵内酯3.2ng/mL、邻磺酰苯甲酰亚胺钠2.1 ng/mL、人参寡肽2μg/mL、成纤维细胞生长因子7μg/mL、透明质酸钠3μg/mL。
进一步地，所述用于淡化痘印的骨髓间充质干细胞组合物由以下重量份的原料组成：骨髓间充质干细胞培养产物0.9份、水杨酸1.2份、尿囊素3份、维生素C 8份、乳化剂0.4份、去离子水25份。
进一步地，步骤（1）中取传代培养至P2-P10代处于对数期的骨髓间充质干细胞接种在诱导培养基中。
进一步地，步骤（1）中诱导培养基中的细胞密度为2-5×104个/mL。
进一步地，步骤（3）中上清液经0.22μm滤膜过滤除菌。
进一步地，所述乳化剂为氢化卵磷脂、甘油肉桂酸酯和甘油肉豆蔻酸酯中的一种。
相比现有技术，本发明的有益效果在于：本发明提供一种淡化痘印的骨髓间充质干细胞组合物，在该组合物中添加了骨髓间充质干细胞培养产物，在该细胞培养产物的制备过程中添加黄葵内酯、邻磺酰苯甲酰亚胺钠、人参寡肽等协同作用，能加速淡化痘印，提高细胞培养产物对痘印的祛除效果，使皮肤快速恢复健康状态。
本发明骨髓间充质干细胞培养产物的制备过程中不添加胎牛血清等外源性成分，添加的黄葵内酯、邻磺酰苯甲酰亚胺钠、人参寡肽、成纤维细胞生长因子、透明质酸钠均是安全无毒性，得到的组合物用于面部皮肤时，再结合水杨酸、尿囊素、维生素C等共同作用，安全稳定，实现痘印皮肤的快速恢复。
具体实施方式
下面，结合具体实施方式，对本发明做进一步描述，需要说明的是，在不相冲突的前提下，以下描述的各实施例之间或各技术特征之间可以任意组合形成新的实施例。
实施例1
一种用于淡化痘印的骨髓间充质干细胞组合物，由以下重量份的原料组成：骨髓间充质干细胞培养产物0.9份、水杨酸1.2份、尿囊素3份、维生素C 8份、氢化卵磷脂0.4份、去离子水25份。
上述骨髓间充质干细胞培养产物通过以下方法制备：
（1）取传代培养至P3代处于对数期的骨髓间充质干细胞接种于培养瓶的诱导培养基中，细胞密度为2×104个/mL，诱导培养基由基础培养基和添加在基础培养基中的黄葵内酯、邻磺酰苯甲酰亚胺钠、人参寡肽、成纤维细胞生长因子、透明质酸钠组成；诱导培养基中各组分的终浓度为：黄葵内酯3.2ng/mL、邻磺酰苯甲酰亚胺钠2.1ng/mL、人参寡肽2μg/mL、成纤维细胞生长因子7μg/mL、透明质酸钠3μg/mL；
（2）将接种骨髓间充质干细胞的培养瓶置于5%CO2，37℃的培养箱中进行培养，每隔1天进行半量换液，连续培养7天；
（3）收集步骤（2）中培养瓶中的培养液，离心去除培养基，细胞用PBS清洗后在4℃进行匀浆，将匀浆液在-20℃冻存4h，取出后在37℃水浴中融化，离心取上清，将上清液经0.22μm滤膜除菌后冻干，即得骨髓间充质干细胞培养产物。
实施例2
一种用于淡化痘印的骨髓间充质干细胞组合物，由以下重量份的原料组成：骨髓间充质干细胞培养产物0.7份、水杨酸0.5份、尿囊素1.5份、维生素C 5份、甘油肉桂酸酯0.3份、去离子水20份。
上述骨髓间充质干细胞培养产物通过以下方法制备：
（1）取传代培养至P5代处于对数期的骨髓间充质干细胞接种于培养瓶的诱导培养基中，细胞密度为3×104个/mL，诱导培养基由基础培养基和添加在基础培养基中的黄葵内酯、邻磺酰苯甲酰亚胺钠、人参寡肽、成纤维细胞生长因子、透明质酸钠组成；诱导培养基中各组分的终浓度为：黄葵内酯2.3ng/mL、邻磺酰苯甲酰亚胺钠1.5 ng/mL、人参寡肽1μg/mL、成纤维细胞生长因子5μg/mL、透明质酸钠1μg/mL；
（2）将接种骨髓间充质干细胞的培养瓶置于5%CO2，37℃的培养箱中进行培养，每隔1天进行半量换液，连续培养7天；
（3）收集步骤（2）中培养瓶中的培养液，离心去除培养基，细胞用PBS清洗后在4℃进行匀浆，将匀浆液在-20℃冻存4h，取出后在37℃水浴中融化，离心取上清，将上清液经0.22μm滤膜除菌后冻干，即得骨髓间充质干细胞培养产物。
实施例3
一种用于淡化痘印的骨髓间充质干细胞组合物，由以下重量份的原料组成：骨髓间充质干细胞培养产物1.3份、水杨酸1.5份、尿囊素4.5份、维生素C 10份、甘油肉豆蔻酸酯0.5份、去离子水30份。
上述骨髓间充质干细胞培养产物通过以下方法制备：
（1）取传代培养至P10代处于对数期的骨髓间充质干细胞接种于培养瓶的诱导培养基中，细胞密度为5×104个/mL，诱导培养基由基础培养基和添加在基础培养基中的黄葵内酯、邻磺酰苯甲酰亚胺钠、人参寡肽、成纤维细胞生长因子、透明质酸钠组成；诱导培养基中各组分的终浓度为：黄葵内酯3.7ng/mL、邻磺酰苯甲酰亚胺钠2.8 ng/mL、人参寡肽3μg/mL、成纤维细胞生长因子10μg/mL、透明质酸钠5μg/mL；
（2）将接种骨髓间充质干细胞的培养瓶置于5%CO2，37℃的培养箱中进行培养，每隔1天进行半量换液，连续培养7天；
（3）收集步骤（2）中培养瓶中的培养液，离心去除培养基，细胞用PBS清洗后在4℃进行匀浆，将匀浆液在-20℃冻存4h，取出后在37℃水浴中融化，离心取上清，将上清液经0.22μm滤膜除菌后冻干，即得骨髓间充质干细胞培养产物。
对比例1
对比例1提供一种用于淡化痘印的骨髓间充质干细胞组合物，和实施例1的区别为：省去黄葵内酯，其余均和实施例1相同。
对比例2
对比例2提供一种用于淡化痘印的骨髓间充质干细胞组合物，和实施例1的区别为：省去邻磺酰苯甲酰亚胺钠，其余均和实施例1相同。
对比例3
对比例3提供一种用于淡化痘印的骨髓间充质干细胞组合物，和实施例1的区别为：省去邻磺酰苯甲酰亚胺钠，将黄葵内酯的用量调整为5.3ng/mL、其余均和实施例1相同。
对比例4
对比例4提供一种用于淡化痘印的骨髓间充质干细胞组合物，和实施例1的区别为：省去黄葵内酯，将邻磺酰苯甲酰亚胺钠的用量调整为5.3ng/mL、其余均和实施例1相同。
对比例5
对比例5提供一种用于淡化痘印的骨髓间充质干细胞组合物，和实施例1的区别为：省去人参寡肽，其余均和实施例1相同。
对比例6
对比例6提供一种用于淡化痘印的骨髓间充质干细胞组合物，和实施例1的区别为：将骨髓间充质干细胞培养产物替换为人参寡肽，其余均和实施例1相同。
试验例
选取24个受试者，年龄在20-30岁之间，平均年龄26岁，随机分为三组，每组8人，以封闭型斑贴试验方法，将实施例1至3的组合物置于斑试器内，采用医用胶带贴敷于受试者上臂内侧，24小时后去除，分别于移除斑贴后1h、24h、48h观察皮肤反应，具体的反应程度评分等级见表1，实验结果见表2。
表1
| 等级 | 皮肤反应 |
| 0 | 阴性反应：皮肤无不适出现 |
| 1 | 弱阳性反应：皮肤出现红斑，浸润等，移除班贴后能快速消退 |
| 2 | 强阳性反应：皮肤出现水肿，丘疹，疱疹等，移除斑贴后消退较慢 |
表2
| 等级 | 0（/人） | 1（/人） | 2（/人） |
| 实施例1 | 8 | 0 | 0 |
| 实施例2 | 8 | 0 | 0 |
| 实施例3 | 8 | 0 | 0 |
由表2可知实施例1至3的组合物在实验中受试者均为阴性反应，说明本发明的组合物对皮肤温和无刺激性，使用安全。
选取青春痘已经消退但是面部皮肤残留大量红色痘印和黑色痘印的志愿者90人，男女各半，年龄在18-28岁之间，随机分为9组，每组10人，分别涂抹实施例1至3，对比例1至6中的组合物，使用方法为：在痘印位置涂抹适量本发明提供的组合物，每天早晚各一次，在此期间不用其他护肤品，连续使用18天，观察痘印淡化的效果，通过皮肤面部分析仪VISIACR和面部图像分析软件Image-Pro Plus对受试者试用前和使用18天后进行拍照分析，观察分析痘印消除面积和淡化程度，判断标准如表3所示，统计每组中各级别的人数所占比例，结果如表4所示。
表3
| 级别 | 判断标准 |
| 显效 | 90%以上痘印都消除，剩余痘印颜色明显变浅 |
| 有效 | 60%-90%的痘印消失或只留下很浅的痘印，未完全消失的痘印颜色明显变浅 |
| 无效 | 痘印消失面积小于60%，未消除部分颜色没有明显变浅，仍有大量黑色或红色痘印残留 |
表4
| 组别 | 显效（%） | 有效（%） | 无效（%） |
| 实施例1 | 100 | 0 | 0 |
| 实施例2 | 80 | 20 | 0 |
| 实施例3 | 90 | 10 | 0 |
| 对比例1 | 20 | 60 | 20 |
| 对比例2 | 30 | 70 | 0 |
| 对比例3 | 10 | 60 | 30 |
| 对比例4 | 20 | 60 | 20 |
| 对比例5 | 40 | 50 | 10 |
| 对比例6 | 0 | 40 | 60 |
由表4可以看出实施例1至3中在应用时显效人数所占比例较高，其中实施例的产品对所有受试者均均有显效的效果。对比例1至6中痘印淡化的效果不及实施例1至3。
对比例1至4中分别省去黄葵内酯、邻磺酰苯甲酰亚胺钠的一种，无论是否调整剩余成分的用量，组合物在淡化痘印的效果上均不及实施例1至3，说明通过在骨髓间充质干细胞培养产物的制备过程中添加上述成分有助于提高细胞培养物淡化痘印的效果。
对比例5和对比例6中分别在骨髓间充质干细胞培养产物的制备过程中省去人参寡肽，或者直接将骨髓间充质干细胞培养产物替换为人参寡肽，在应用效果上也不及实施例1至3，说明人参寡肽添加在骨髓间充质干细胞培养产物的制备过程中更有利于发挥祛除痘印的效果，使皮肤快速恢复健康。
上述实施方式仅为本发明的优选实施方式，不能以此来限定本发明保护的范围，本领域的技术人员在本发明的基础上所做的任何非实质性的变化及替换均属于本发明所要求保护的范围。
Claims (8)
1. 一种用于淡化痘印的骨髓间充质干细胞组合物，其特征在于，由以下重量份的原料组成：骨髓间充质干细胞培养产物0.7-1.3份、水杨酸0.5-1.5份、尿囊素1.5-4.5份、维生素C 5-10份、乳化剂0.3-0.5份、去离子水20-30份。
所述骨髓间充质干细胞培养产物通过以下方法制备：
（1）取传代培养至对数期的骨髓间充质干细胞接种于培养瓶的诱导培养基中，所述诱导培养基由基础培养基和添加在基础培养基中的黄葵内酯、邻磺酰苯甲酰亚胺钠、人参寡肽、成纤维细胞生长因子、透明质酸钠组成；
（2）将接种骨髓间充质干细胞的培养瓶置于5%CO2，37℃的培养箱中进行培养，每隔1天进行半量换液，连续培养7天；
（3）收集步骤（2）中培养瓶中的培养液，离心去除培养基，细胞清洗后进行匀浆，离心取上清，将上清液过滤除菌后冻干，即得骨髓间充质干细胞培养产物。
2.根据权利要求1所述用于淡化痘印的骨髓间充质干细胞组合物，其特征在于，所述基础培养基为DMEM/F12培养基，诱导培养基中各组分的终浓度为：黄葵内酯2.3-3.7ng/mL、邻磺酰苯甲酰亚胺钠1.5-2.8 ng/mL、人参寡肽1-3μg/mL、成纤维细胞生长因子5-10μg/mL、透明质酸钠1-5μg/mL。
3. 根据权利要求2所述用于淡化痘印的骨髓间充质干细胞组合物，其特征在于，诱导培养基中各组分的终浓度为：黄葵内酯3.2ng/mL、邻磺酰苯甲酰亚胺钠2.1 ng/mL、人参寡肽2μg/mL、成纤维细胞生长因子7μg/mL、透明质酸钠3μg/mL。
4. 根据权利要求1所述用于淡化痘印的骨髓间充质干细胞组合物，其特征在于，由以下重量份的原料组成：骨髓间充质干细胞培养产物0.9份、水杨酸1.2份、尿囊素3份、维生素C 8份、乳化剂0.4份、去离子水25份。
5.根据权利要求1所述用于淡化痘印的骨髓间充质干细胞组合物，其特征在于，步骤（1）中取传代培养至P2-P10代处于对数期的骨髓间充质干细胞接种在诱导培养基中。
6.根据权利要求1所述用于淡化痘印的骨髓间充质干细胞组合物，其特征在于，步骤（1）中诱导培养基中的细胞密度为2-5×104个/mmL。
7.根据权利要求1所述用于淡化痘印的骨髓间充质干细胞组合物，其特征在于，步骤（3）中上清液经0.22μm滤膜过滤除菌。
8.根据权利要求8所述用于淡化痘印的骨髓间充质干细胞组合物，其特征在于，所述乳化剂为氢化卵磷脂、甘油肉桂酸酯和甘油肉豆蔻酸酯中的一种。
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