CN114250316A - 一种从养殖塘水土样本中检测虾肝肠胞虫的方法 - Google Patents

一种从养殖塘水土样本中检测虾肝肠胞虫的方法 Download PDF

Info

Publication number
CN114250316A
CN114250316A CN202111582255.XA CN202111582255A CN114250316A CN 114250316 A CN114250316 A CN 114250316A CN 202111582255 A CN202111582255 A CN 202111582255A CN 114250316 A CN114250316 A CN 114250316A
Authority
CN
China
Prior art keywords
sample
centrifuging
supernatant
ehp
shrimp
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN202111582255.XA
Other languages
English (en)
Inventor
王永伟
金伟波
邱晴
黄雕
蒋文沁
唐玲燕
戚正梁
茅华华
陈夏月
阮关虎
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Zhejiang University Of Science And Technology Shaoxing Biomedical Research Institute Co ltd
Shaoxing Aquatic Technology Promotion Center
Original Assignee
Zhejiang University Of Science And Technology Shaoxing Biomedical Research Institute Co ltd
Shaoxing Aquatic Technology Promotion Center
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Zhejiang University Of Science And Technology Shaoxing Biomedical Research Institute Co ltd, Shaoxing Aquatic Technology Promotion Center filed Critical Zhejiang University Of Science And Technology Shaoxing Biomedical Research Institute Co ltd
Priority to CN202111582255.XA priority Critical patent/CN114250316A/zh
Publication of CN114250316A publication Critical patent/CN114250316A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6876—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
    • C12Q1/6888—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for detection or identification of organisms
    • C12Q1/6895—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for detection or identification of organisms for plants, fungi or algae
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6844—Nucleic acid amplification reactions
    • C12Q1/6851—Quantitative amplification

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

本发明公开了一种从养殖塘水土样本中检测虾肝肠胞虫的方法，包括如下步骤：S1、从对虾养殖塘的水体或土壤中提取核酸；S2、从受到EHP感染的虾肉组织中提取阳性样本，采用PCR体系扩增EHP目的片段，并按梯度稀释进行定量PCR反应，获取不同梯度的Ct平均值，确定临界对照Ct值；S3、对提取的核酸样本进行定量PCR检测，获取荧光定量PCR扩增曲线；S4、将步骤S3的检测结果与步骤S2中的临界对照Ct值进行对比。本发明可以针对养殖户的养殖环境，进行虾肝肠胞虫的病原检测，而且使用定量pcr检测具有更加灵敏和准确的特点。

Description

一种从养殖塘水土样本中检测虾肝肠胞虫的方法
技术领域
本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种从养殖塘水土样本中检测虾肝肠胞虫的方法。
背景技术
南美白对虾是目前世界上最重要的经济虾类之一，也是我国主要的水产养殖品种，具有巨大的经济效益。但是长期以来，白对虾养殖产业一直受到多种传染性疾病的威胁，虾肝肠胞虫就是一种严重的传染性疾病。
感染虾肝肠胞虫(EHP)的对虾会出现生长缓慢的症状甚至停滞生长，严重的会慢性死亡。一旦虾肝肠胞虫大范围流行会造成白对虾养殖产业严重的减产，对养殖户造成巨大的经济损伤。目前,EHP已经在全世界各地的虾养殖场中被检测到,而EHP流行已经对印度、泰国、中国、越南、马来西亚、印度尼西亚等亚洲各国的养殖虾业造成了严重的经济损失。
目前在针对虾肝肠胞虫的研究中，尚无能够有效防治虾肝肠胞虫的报道。因而，为了避免造成经济损失，虾肝肠胞虫的预防就显得极为重要。在此为基础，发展出了以套式PCR(polymerase chain reaction，聚合酶链反应)为主的检测方法。而且在养殖过程中通过优先选育无虾肝肠胞虫亲虾和虾苗、投喂维生素增强对虾体质等手段减少EHP的危害。但是虾肝肠胞虫本身是一种真菌类寄生虫，容易在自然环境中长期存活，一旦有养殖户出现虾肝肠胞虫感染的情况，就疾病反复的现象。因而针对养殖户养殖环境的虾肝肠胞虫疾病检测就显得极为重要。
发明内容
本发明的目的在于，提供一种从养殖塘水土样本中检测虾肝肠胞虫的方法，以解决现有技术存在的技术问题。
为达成上述目的，本发明提供如下技术方案：一种从养殖塘水土样本中检测虾肝肠胞虫的方法，包括如下步骤：
S1、从对虾养殖塘的水体或土壤中提取核酸；
S2、从受到EHP感染的虾肉组织中提取阳性样本，采用PCR体系扩增EHP目的片段，并按梯度稀释进行定量PCR反应，获取不同梯度的Ct平均值，确定临界对照Ct值；
S3、对步骤S1提取的核酸样本进行定量PCR检测，获取荧光定量PCR扩增曲线；
S4、将步骤S3的检测结果与步骤S2中的临界对照Ct值进行对比。
进一步地，所述步骤S1具体步骤如下：
a.将样品与0.1mol/l PH 8.0磷酸缓冲液混匀；
b.在样本中加入溶菌酶，使终浓度为2.5mg/ml,室温振荡15min；
c.4℃冷藏，静置30min；
d.在样本中加20％SDS，振荡处理15min；
e.离心，取上清；
f.在上清液中加入等体积酚-氯仿-异戊醇，12000r·min-1离心10min，取上清液；
g.再加入等体积氯仿-异戊醇，12000r·min-1离心10min，取上清液，重复该步骤1次；
h.加入0.6倍上清体积的异丙醇，-20℃放置1h,12000r·min-1离心15min，弃去上清；
i.用70％乙醇清洗沉淀，12000r·min-1离心5min，弃去上清，晾干5-10min，使用TE缓冲液溶解沉淀。
进一步地，所述步骤a中，所述样品为土样，步骤a具体为：称取土壤样品，加入0.1mol/l PH 8.0磷酸缓冲液，振荡混匀。
进一步地，所述步骤a中，所述样品为水样，步骤a具体为：取水样，离心后弃去上清，用0.1mol/l PH8.0磷酸缓冲液重悬沉淀。
传统的水样提取方法一般采用PowerSoil DNA分离从过滤水样的滤纸上提取，对器材、试剂要求较高，成本也相对较高。而本申请通过溶菌酶-SDS裂解的方法实现了水样提取，成本较低。
进一步地，所述步骤S2的具体步骤如下：
j.称取受到EHP感染的虾肉组织，置于1.5mL的EP管中，加入CTAB裂解液裂解，并于65℃水浴2h；
k.在样本中加等体积酚-氯仿-异戊醇，12000r·min-1离心10min，取上清液；
l.加等体积氯仿-异戊醇，12000r·min-1离心10min，取上清液；
m.加0.6倍上清体积的异丙醇，-20℃沉降1h,12000rpm离心15min，弃去上清；用70％乙醇清洗沉淀，12000r·min-1离心3min，弃去上清，晾干5-10min，使用TE缓冲液溶解沉淀DNA模板，在-20℃保藏备用；
n.采用PCR体系扩增目的EHP SSU rRNA片段；
o.将步骤n中得到的目的片段用2％琼脂糖凝胶电泳分离，并回收；使用第EHP SSUrRNA片段，按照梯度稀释进行定量PCR。
进一步地，所述步骤n中，PCR体系为：
Figure BDA0003426531630000041
进一步地，所述步骤n中，扩增程序如下：
Figure BDA0003426531630000042
进一步地，所述步骤o中，每个梯度为在上一个梯度的基础上稀释10倍。
进一步地，所述步骤S3中，PCR反应程序如下：
热启动：95℃ 10min；
循环：95℃ 15s，
60℃ 30s，
共45个循环；
激活溶解曲线。
本发明与现有技术相对比，其有益效果在于：
1、本发明可以针对养殖户的养殖环境，进行虾肝肠胞虫的病原检测，而且使用定量pcr检测具有更加灵敏和准确的特点。
2、本发明提供了分别从土壤样本和水体中提取核酸的方法，使得取样方式更加多元化，增加了样本的多样性。
附图说明
图1是从水体和土壤中提取DNA的电泳结果。
图2是EHP阳性片段的扩增和回收的电泳结果。
具体实施方式
为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，下面通过实施例本发明作进一步具体的说明。
实施例：一种从养殖塘水土样本中检测虾肝肠胞虫的方法，包括如下步骤：
S1、从对虾养殖塘的水体或土壤中提取核酸，并电泳检测提取效果，参照图1：
a.称取1g土壤样品，加入1ml 0.1mol/l PH 8.0磷酸缓冲液，振荡混匀1min。如果是水样则取水样40ml，7500rpm离心3min，弃去上清后用1ml 0.1mol/l PH8.0磷酸缓冲液重悬沉淀；
b.在样本中加入溶菌酶2.5mg，使终浓度为2.5mg/ml,室温振荡15min；
c.放置于4℃冰箱中，静置30min；
d.在样本中加125μl 20％SDS，振荡处理15min；
e.5 000r·min-1离心10min，取上清；
f.在上清液中加入等体积酚-氯仿-异戊醇(25：24：1体积)，12000r·min-1离心10min，取上清液；
g.再加入等体积氯仿-异戊醇(24：1体积)，12000r·min-1离心10min，取上清液，重复该步骤1次；
h.加入0.6倍上清体积的异丙醇，-20℃放置1h,12000r·min-1离心15min，弃去上清；
i.用70％乙醇清洗沉淀，12000r·min-1离心5min，弃去上清，晾干5-10min，使用50μl TE缓冲液溶解沉淀；
S2、从受到EHP感染的虾肉组织中提取阳性样本，采用PCR体系扩增EHP目的片段，并按梯度稀释进行定量PCR反应，获取不同梯度的Ct平均值，确定临界对照Ct值：
j.称取50mg受到EHP感染的虾肉组织，置于1.5mL的EP管中，加入900μL CTAB裂解液裂解，并于65℃水浴2h；
k.在样本中加等体积酚-氯仿-异戊醇(25：24：1体积)，12000r·min-1离心10min，取上清液；
l.加等体积氯仿-异戊醇(24：1体积)，12000r·min-1离心10min，取上清液；
m.加0.6倍上清体积的异丙醇，-20℃沉降1h,12000rpm离心15min，弃去上清。用70％乙醇清洗沉淀，12000r·min-1离心3min，弃去上清，晾干5-10min，使用50μl TE缓冲液溶解沉淀DNA模板，在-20℃保藏备用；
n.采用PCR体系扩增目的EHP SSU rRNA片段：
PCR体系为：
Figure BDA0003426531630000071
扩增程序如下：
Figure BDA0003426531630000072
Figure BDA0003426531630000081
o.将步骤n中得到的目的片段用2％琼脂糖凝胶电泳分离，并回收，如图2所示；使用第EHP SSU rRNA片段，按照梯度稀释进行定量PCR：
样品初始浓度为7.39ng/微升，然后使用对虾核酸溶液稀释，样品名称带的数字代表样品稀释了10的几次方倍，如样品SSU 5的浓度为7.39x10-5ng/ul。针对EHP SSU rRNA基因目的片段的定量检测结果如下表所示：
Figure BDA0003426531630000082
根据结果，当浓度低于7.39x10-7ng/ul时难以被检测到，此时的Ct平均值即为临界对照Ct值。
S3、对步骤S1提取的核酸样本进行定量PCR检测，获取荧光定量PCR扩增曲线：
使用taqman探针靶向EHP SSU rRNA的定量pcr检测，包括EHPSSU rRNA的PCR检测引物以及taqman探针，所述引物包括上游引物EHP-SSU-qF和下游引物EHP-SSU-qR，这些引物序列如下：
EHP-SSU-qF的序列为5'-AGTAAACTATGCCGACAA-3'；
EHP-SSU-qR的序列为5'-AATTAAGCAGCACAATCC-3'；
探针的序列为5'-FAM-TCCTGGTAGTGTCCTTCCGT-BHQ-3'。
步骤S1得到的每个样品设置三个重复实验，按如下体系配置反应体系：
Figure BDA0003426531630000091
PCR反应条件如下：
热启动：95℃ 10min；
循环： 95℃ 15s，
60℃ 30s(收集荧光)，
共45个循环；
激活溶解曲线。
S4、将步骤S3的检测结果与步骤S2中的临界对照Ct值进行对比：观察实时荧光定量PCR扩增曲线，若获得的荧光扩增曲线Ct值低于临界对照Ct值，则样品有EHP存在。
上述实施例只为说明本发明的技术构思及特点，其目的在于让熟悉此项技术的人士能够了解本发明的内容并据以实施，并不能以此限制本发明的保护范围。凡根据本发明精神实质所作的等效变化或修饰，都应涵盖在本发明的保护范围之内。

Claims (9)

1.一种从养殖塘水土样本中检测虾肝肠胞虫的方法，其特征在于，包括如下步骤：
S1、从对虾养殖塘的水体或土壤中提取核酸；
S2、从受到EHP感染的虾肉组织中提取阳性样本，采用PCR体系扩增EHP目的片段，并按梯度稀释进行定量PCR反应，获取不同梯度的Ct平均值，确定临界对照Ct值；
S3、对步骤S1提取的核酸样本进行定量PCR检测，获取荧光定量PCR扩增曲线；
S4、将步骤S3的检测结果与步骤S2中的临界对照Ct值进行对比。
2.根据权利要求1所述的一种从养殖塘水土样本中检测虾肝肠胞虫的方法，其特征在于，所述步骤S1具体步骤如下：
a.将样品与0.1mol/l PH 8.0磷酸缓冲液混匀；
b.在样本中加入溶菌酶，使终浓度为2.5mg/ml,室温振荡15min；
c.4℃冷藏，静置30min；
d.在样本中加20％SDS，振荡处理15min；
e.离心，取上清；
f.在上清液中加入等体积酚-氯仿-异戊醇，12000r·min-1离心10min，取上清液；
g.再加入等体积氯仿-异戊醇，12000r·min-1离心10min，取上清液，重复该步骤1次；
h.加入0.6倍上清体积的异丙醇，-20℃放置1h,12000r·min-1离心15min，弃去上清；
i.用70％乙醇清洗沉淀，12000r·min-1离心5min，弃去上清，晾干5-10min，使用TE缓冲液溶解沉淀。
3.根据权利要求2所述的一种从养殖塘水土样本中检测虾肝肠胞虫的方法，其特征在于，所述步骤a中，所述样品为土样，步骤a具体为：称取土壤样品，加入0.1mol/l PH 8.0磷酸缓冲液，振荡混匀。
4.根据权利要求2所述的一种从养殖塘水土样本中检测虾肝肠胞虫的方法，其特征在于，所述步骤a中，所述样品为水样，步骤a具体为：取水样，离心后弃去上清，用0.1mol/lPH8.0磷酸缓冲液重悬沉淀。
5.根据权利要求1所述的一种从养殖塘水土样本中检测虾肝肠胞虫的方法，其特征在于，所述步骤S2的具体步骤如下：
j.称取受到EHP感染的虾肉组织，置于1.5mL的EP管中，加入CTAB裂解液裂解，并于65℃水浴2h；
k.在样本中加等体积酚-氯仿-异戊醇，12000r·min-1离心10min，取上清液；
l.加等体积氯仿-异戊醇，12000r·min-1离心10min，取上清液；
m.加0.6倍上清体积的异丙醇，-20℃沉降1h,12000rpm离心15min，弃去上清；用70％乙醇清洗沉淀，12000r·min-1离心3min，弃去上清，晾干5-10min，使用TE缓冲液溶解沉淀DNA模板，在-20℃保藏备用；
n.采用PCR体系扩增目的EHP SSU rRNA片段；
o.将步骤n中得到的目的片段用2％琼脂糖凝胶电泳分离，并回收；使用第EHP SSUrRNA片段，按照梯度稀释进行定量PCR。
6.根据权利要求5所述的一种从养殖塘水土样本中检测虾肝肠胞虫的方法，其特征在于，所述步骤n中，PCR体系为：
Figure FDA0003426531620000031
7.根据权利要求5所述的一种从养殖塘水土样本中检测虾肝肠胞虫的方法，其特征在于，所述步骤n中，扩增程序如下：
Figure FDA0003426531620000032
8.根据权利要求5所述的一种从养殖塘水土样本中检测虾肝肠胞虫的方法，其特征在于，所述步骤o中，每个梯度为在上一个梯度的基础上稀释10倍。
9.根据权利要求1所述的一种从养殖塘水土样本中检测虾肝肠胞虫的方法，其特征在于，所述步骤S3中，PCR反应程序如下：
Figure FDA0003426531620000041
激活溶解曲线。
CN202111582255.XA 2021-12-22 2021-12-22 一种从养殖塘水土样本中检测虾肝肠胞虫的方法 Pending CN114250316A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202111582255.XA CN114250316A (zh) 2021-12-22 2021-12-22 一种从养殖塘水土样本中检测虾肝肠胞虫的方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202111582255.XA CN114250316A (zh) 2021-12-22 2021-12-22 一种从养殖塘水土样本中检测虾肝肠胞虫的方法

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN114250316A true CN114250316A (zh) 2022-03-29

Family

ID=80796837

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202111582255.XA Pending CN114250316A (zh) 2021-12-22 2021-12-22 一种从养殖塘水土样本中检测虾肝肠胞虫的方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN114250316A (zh)

Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102094004A (zh) * 2010-12-15 2011-06-15 南京师范大学 一种用于生态土壤系统基质dna的提取方法
CN104232785A (zh) * 2014-10-11 2014-12-24 中华人民共和国库尔勒出入境检验检疫局 梨小食心虫荧光pcr检测方法与应用
CN105861463A (zh) * 2016-04-12 2016-08-17 南京工业大学 环氧琥珀酸水解酶及其载体和应用
CN105969751A (zh) * 2016-06-14 2016-09-28 南京工业大学 一种β-葡萄糖苷酶基因及其应用
CN106978496A (zh) * 2017-04-25 2017-07-25 扬州宏盛水产科技有限公司 一种黄颡四锚虫的pcr检测引物、荧光定量pcr检测试剂盒及检测方法
CN111471776A (zh) * 2020-04-13 2020-07-31 西南大学 虾肝肠胞虫检测试剂盒及其检测方法
CN111485017A (zh) * 2019-01-29 2020-08-04 广东美格基因科技有限公司 用于检测对虾虾肝肠孢虫的荧光定量pcr方法及相应的试剂盒

Patent Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102094004A (zh) * 2010-12-15 2011-06-15 南京师范大学 一种用于生态土壤系统基质dna的提取方法
CN104232785A (zh) * 2014-10-11 2014-12-24 中华人民共和国库尔勒出入境检验检疫局 梨小食心虫荧光pcr检测方法与应用
CN105861463A (zh) * 2016-04-12 2016-08-17 南京工业大学 环氧琥珀酸水解酶及其载体和应用
CN105969751A (zh) * 2016-06-14 2016-09-28 南京工业大学 一种β-葡萄糖苷酶基因及其应用
CN106978496A (zh) * 2017-04-25 2017-07-25 扬州宏盛水产科技有限公司 一种黄颡四锚虫的pcr检测引物、荧光定量pcr检测试剂盒及检测方法
CN111485017A (zh) * 2019-01-29 2020-08-04 广东美格基因科技有限公司 用于检测对虾虾肝肠孢虫的荧光定量pcr方法及相应的试剂盒
CN111471776A (zh) * 2020-04-13 2020-07-31 西南大学 虾肝肠胞虫检测试剂盒及其检测方法

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
YA-MEI LIU等: "Quantitative detection method of Enterocytozoon hepatopenaei using TaqMan probe real-time PCR", JOURNAL OF INVERTEBRATE PATHOLOGY, vol. 151, pages 191 - 196 *

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN107988325A (zh) 虾肝肠胞虫（ehp）的raa恒温荧光检测方法及试剂
CN104498599B (zh) 一组微孢子虫分子通用检测引物及其试剂盒
CN109486976A (zh) 一种对虾肝肠微孢子虫病的高灵敏度的靶基因、引物对、试剂盒和检测方法
CN107828914A (zh) 传染性皮下及造血组织坏死病毒（ihhnv）的raa恒温荧光检测方法及试剂
CN102304578B (zh) 一种检测猪囊尾蚴、猪旋毛虫、猪弓形虫的试剂盒及应用
CN107287354B (zh) 一种环介导等温扩增法检测对虾白斑综合症病毒的方法
CN103555847B (zh) 一种罗非鱼亲子鉴定的方法
WO2016075277A1 (en) Novel fish virus and method for detection
CN108060265B (zh) 用于检测感染毛蚶的牡蛎疱疹病毒的引物组和探针及其应用
CN109337990A (zh) 一种虾肝肠胞虫可视化快速检测试剂盒
CN105087831A (zh) 牡蛎疱疹病毒i型检测引物、方法与应用
CN116891849A (zh) 一种快速从鼻咽拭子中提取核酸的试剂盒及提取方法
CN107475411A (zh) 一种检测伯氏疏螺旋体核酸的Taqman实时荧光PCR检测方法
CN114250316A (zh) 一种从养殖塘水土样本中检测虾肝肠胞虫的方法
CN110724735B (zh) 一种快速鉴定暗纹东方鲀个体性别的snp位点和引物及其方法
Dutta et al. Experimental evidence for white spot syndrome virus (WSSV) susceptibility linked to a microsatellite DNA marker in giant black tiger shrimp, Penaeus monodon (Fabricius).
CN110564882B (zh) 一种马梨形虫病双重TaqMAN探针荧光定量PCR检测方法
CN109652405A (zh) 一种利用南美白对虾血淋巴直接pcr的方法
CN101575649A (zh) H9型禽流感病毒的快速检测技术
CN106755518B (zh) 一种梭子蟹肌孢虫实时定量pcr检测试剂盒
Messerman et al. Prevalence of the protozoan parasite Haplosporidium nelsoni in the Eastern oyster, Crassostrea virginica, within the Damariscotta River Estuary, in Maine, USA in 2012
CN112458202B (zh) 一种鸭疫里默氏菌烈性噬菌体的pcr检测引物及其试剂盒
CN108070663A (zh) 鉴别长毛对虾幼体和墨吉对虾幼体的分子标记引物及方法
CN104630203A (zh) 制备昆虫肠道菌群dna的方法
CN112831549A (zh) 南美白对虾肝肠孢子虫疾病的防控方法

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination