CN114250306A - 一种利用GLRX3基因评估猪达100kg体重日龄的方法及应用 - Google Patents

一种利用GLRX3基因评估猪达100kg体重日龄的方法及应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种利用GLRX3基因评估猪达100kg体重日龄的方法、与猪达100kg体重相关的SNP标记及其应用、猪育种方法，所述SNP标记位于猪基因组10.2版本参考序列猪14号染色体第151,219,997核苷酸处，具有C/T多态性。本发明提供的利用GLRX3基因评估猪达100kg体重日龄的方法，有利于缩短育种周期、降低育种成本，提高育种精准度，所得达100kg体重日龄低的种猪具有更高的生长速率，具有更大的经济效益与社会价值。

Description

一种利用GLRX3基因评估猪达100kg体重日龄的方法及应用
技术领域
本发明属于分子生物学技术领域，具体涉及一种与猪达 100kg体重日龄相关的SNP标记、利用GLRX3基因评估猪达 100kg体重日龄的方法及应用。
背景技术
我国作为全球猪肉消费第一大国，猪肉是我国居民最主要的动物蛋白来源，猪肉消费长期占肉类消费比重60％以上。因此，如何提高猪肉产量与质量，降低养猪成本，增加养猪业经济效益成为日益关注的问题。
猪骨骼肌生长发育分子机制的研究有助于开展猪产肉性状的遗传改良。猪产肉性状主要包括背膘厚度、眼肌面积和达 100kg体重日龄等性状。其中，眼肌面积是指家畜倒数第一、二胸椎间之间背腰最长肌的横断面面积，眼肌面积大小与猪的产肉性能呈显著正相关性，是现代生猪产业中非常重要的一个指标；达100kg体重日龄，是待测目标猪群体重在80-105kg范围内时，对其体重进行测量，然后按照达100kg体重日龄校正公式计算得到，达100kg体重日龄可以反映猪个体生长速度，同时也可以作为养猪效益的重要评价指标。
单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism，SNP)，指基因组内特定核苷酸位置上存在两种不同的碱基，且最少一种在群体的频率不小于1％。由于其含量丰富、遗传性稳定和易实现自动化等优势，众多科研机构已经鉴定了大量的SNP位点并建立了公共SNP数据库。SNP作为一种全新的分子标记，目前已广泛应用于基因组分析、群体进化分析、全基因组关联分析和动植物育种等领域。
但是，目前与猪达100kg体重日龄的SNP发现不足，对猪育种形成制约，开发功能明确、效应显著且可直接用于评估猪达 100kg体重日龄的SNP标记对猪育种及生产具有重要意义。
发明内容
为了克服上述问题，本发明人进行了锐意研究，首次在 GLRX3基因内发现了与猪达100kg体重日龄相关的SNP标记及其应用，该SNP标记位于猪基因组10.2版本参考序列猪14号染色体第151,219,997核苷酸处，具有C/T多态性；还提出了利用 GLRX3基因评估猪达100kg体重日龄的方法和猪育种方法，丰富了分子标记的密度，缩短了育种周期，提高了育种精准度，为猪生长性状的遗传改良提供了新的分子标记资源，从而完成了本发明。
具体来说，本发明的目的在于提供以下方面：
本发明提供了一种利用GLRX3基因评估猪达100kg体重日龄的方法，其中，所述方法包括检测猪GLRX3基因内、与猪达 100kg体重相关的SNP标记的基因型的步骤。
其中，所述SNP标记位于猪基因组10.2版本参考序列猪14 号染色体第151,219,997核苷酸处。
其中，所述SNP标记选自SEQ ID NO：1所示的核苷酸序列的第151位核苷酸。
其中，所述位于猪基因组10.2版本参考序列猪14号染色体第151,219,997核苷酸处SNP标记的等位基因为C和T，具有两种基因型，分别为CC和TC，
基因型为TC的猪相较于基因型为CC的猪，具有较低的达100kg体重日龄。
其中，所述方法包括以下步骤：
步骤1，提取待测猪的基因组DNA；
步骤2，以基因组DNA为模板，进行PCR扩增；
步骤3，确定待测猪所述SNP标记的基因型；
步骤4，根据基因型评估猪的达100kg体重日龄。
其中，步骤2中，所述扩增采用的引物为P6和P7，分别包括如SEQ ID NO：7所示和SEQ ID NO：8所示的核苷酸序列。
本发明还提供了一种与猪达100kg体重相关的SNP标记。
本发明还提供了一种与猪达100kg体重相关的SNP标记在种猪生长性状遗传改良中的应用。
本发明还提供了一种猪育种方法，其中，所述方法包括种猪继代选育位于猪14号染色体上的SEQ ID NO:1上的第151位位点的TC基因型个体，淘汰SEQ ID NO:1上的第151位位点的 CC基因型个体的步骤。
本发明所具有的有益效果包括：
本发明提供的SNP标记与猪达100kg体重日龄显著相关，可以通过鉴定该SNP标记的基因型来筛选不同达100kg体重日龄的种猪，有利于缩短育种周期、降低育种成本，提高育种精准度，同时，丰富了分子标记辅助育种的SNP标记，所得达100kg 体重日龄低的种猪具有更高的生长速率，具有更大的经济效益与社会价值。
具体实施方式
下面通过优选实施方式和实施例对本发明进一步详细说明。通过这些说明，本发明的特点和优点将变得更为清楚明确。
在这里专用的词“示例性”意为“用作例子、实施例或说明性”。这里作为“示例性”所说明的任何实施例不必解释为优于或好于其它实施例。
本发明人研究发现：GLRX3基因与凋亡抑制因子、恶性肿瘤的发生发展密切相关，推测其可能影响到猪的生长发育。但是，现有技术中缺乏对该基因与猪生长性状的深入研究，GLRX3 基因对猪生长性能调控的分子机制有待揭示。
因此，本发明人以猪为研究对象，通过基因分型和群体性状关联分析，首次在该基因内确定了与猪达100kg体重日龄相关的SNP标记。所述SNP标记位于国际猪基因组10.2版本参考序列 14号染色体第151,219,997核苷酸处，具有T/C多态性。
其中，所述SNP标记在Ensembl上对应的位点号为 rs81217795。
在本发明中，所述猪达100kg体重日龄优选为猪校正达 100kg体重日龄，优选按照以下步骤进行测定和校正：称重前进食12小时，采用电子称重台称重，记录猪的体重和测定时的实际日龄。然后对猪达100kg体重的实际日龄进行校正，利用河北省地方标准(DB-13/T2065-2014)文件《种猪场场内生产性能测定技术规程》的遗传评估性状测定规程对采集的数据进行表型数据校正，
具体按下述校正公式进行：
校正日龄＝测定日龄(d)-[(实测体重(kg)-100)/CF]
其中，公猪CF值＝[实测体重(kg)/测定日龄(d)]×1.826040；
母猪CF值＝[实测体重(kg)/测定日龄(d)]×1.714615。
根据本发明一种优选的实施方式，所述与猪达100kg体重日龄相关的SNP标记选自SEQ ID NO：1所示的核苷酸序列的第 151位核苷酸，为碱基C或T。
其中，上述位置的碱基类型的差异导致猪达100kg体重日龄不同。
在进一步优选的实施方式中，所述与猪达100kg体重日龄相关的SNP位点的等位基因为C和T，具有两种基因型，分别为CC 和TC，
与猪达100kg体重日龄相关的SNP位点的基因型为TC的猪相较于与猪达100kg体重日龄相关的SNP位点的基因型为CC的猪，具有较低的达100kg体重日龄。
其中，基因型为CC表示该SNP位点为C的纯合子，基因型为TC表示该SNP位点为杂合子。
在本发明中，由于与猪达100kg体重日龄相关的SNP位点的基因型为TC的猪相对于基因型为CC的猪，具有较低的达100kg 体重日龄，可以根据该SNP位点的基因型对猪的生长性状进行遗传评估和早期筛选，通过选育位于国际猪基因组10.2版本参考序列14号染色体第151,219,997核苷酸处的SNP位点的TC基因型个体作为种猪，筛选获得达100kg体重日龄低的猪个体。
在本发明中，对SNP位点进行基因分型可以在一定程度上排除表型选择中的饲养环境、饲料、疾病等因素对猪优良基因的误淘和误选，增强目标性状选择准确性。
对基因型的检测可以采用现有技术中常用的方法，如基因芯片技术、基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱技术等，本发明中优选采用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱技术进行基因分型。
质谱技术的主要步骤为：首先PCR扩增目标序列，然后加入SNP序列特异延伸引物，在SNP位点上延伸1个碱基。将制备的样品分析物与芯片基质共结晶后在质谱仪的真空管经瞬时纳秒(10-9s)强激光激发，核酸分子解吸附并转变为亚稳态离子，电场中离子飞行时间与离子质量成反比，通过飞行时间检测器检测核酸分子在真空管中的飞行时间而获得样品分析物的精确分子量，从而检测出SNP位点信息。
由于多态性位点碱基不同，延伸产物不同的末端碱基将导致延伸后的产物分子量的差异，因此由SNP多态性引起的碱基差异通过分子量的差异而体现。
由上述可知，在对SNP位点进行基因分型的过程中涉及猪基因组DNA的提取、PCR扩增反应和单碱基延伸反应等步骤。
根据本发明一种优选的实施方式，所述PCR扩增反应的扩增引物为P1和P2，其核苷酸序列分别如SEQ ID NO：2和SEQ ID NO：3所示。
在进一步有优选的实施方式中，所述单碱基延伸引物为P3、 P4和P5，其核苷酸序列分别如SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：5 和SEQ ID NO：6所示。
在本发明中，SNP标记的单碱基引物具有3条，分别为UEP (P3)、EXT1(P4)和EXT2(P5)，其中，UEP为延伸引物， EXT1和EXT2为针对位点不同基因型设计的检测引物。
上述引物对优选采用Sequenom公司的引物设计软件Assay design3.1，综合考虑引物设计的各项原则设计得到。
根据本发明一种优选的实施方式，所述基因分型采用基因分型试剂盒进行，所述试剂盒包括PCR扩增引物和单碱基延伸引物，
其中，所述PCR扩增引物为P1和P2，所述单碱基延伸引物为P3、P4和P5。
在进一步优选的实施方式中，所述基因分型试剂盒还包括 PCR扩增缓冲液、MgCl2、dNTP、DNA聚合酶、SAP缓冲液和SAP(碱性磷酸酶)。
本发明还提供了上述SNP标记的获得方法，所述方法包括以下步骤：
步骤i，选择猪群体，提取基因组DNA；
步骤ii，测定猪达100kg体重日龄；
步骤iii，进行基因分型；
步骤iv，进行猪达100kg体重日龄的关联分析。
其中，所述关联分析优选采用GEMMA统计分析软件的混合线性模型进行，具体模型如下式所述：
y＝Wa+xβ+μ+ε
其中，y代表个体表型值；W代表协变量；a代表对应系数； x代表SNP基因型；β代表对应的SNP效应；μ代表剩余多基因效应；ε代表剩余残差效应。
本发明的另一方面，提供了一种用于检测上述SNP标记的引物对，所述引物对的上游引物为P6，其包括如SEQ ID NO：7 所示的核苷酸序列；所述引物对的下游引物为P7，其包括如SEQ ID NO：8所示的核苷酸序列；
优选地，所述上游引物P6的核苷酸序列如SEQ ID NO：7 所示，所述下游引物P7的核苷酸序列如SEQ ID NO：8所示。
在本发明中，采用上述引物对能够有效对待测猪个体中含有与猪达100kg体重日龄相关的SNP标记的核苷酸片段进行 PCR扩增，进而确定SNP位点的基因型，获得待测猪个体的达 100kg体重日龄。
本发明的另一方面，提供了一种用于检测上述SNP标记的试剂盒，所述试剂盒包括上述的引物对，还包括PCR扩增体系，优选包括PCR缓冲液、dNTP和DNA聚合酶。
本发明的另一方面，提供了一种利用GLRX3基因评估猪达 100kg体重日龄的方法，所述方法包括检测猪GLRX3基因内、位于猪基因组10.2版本参考序列猪14号染色体第151,219,997核苷酸处SNP标记的基因型的步骤。
优选地，所述方法包括以下步骤：
步骤1，提取待测猪的基因组DNA。
采用现有技术中常用的方法或试剂盒提取猪的基因组 DNA，优选采集猪耳组织进行基因组DNA的提取，用紫外分光光度计和凝胶电泳进行DNA质量检测，将检测合格的DNA放置于-20℃保存，以用于后续分型测定。
在本发明中，待测猪可以为杜洛克猪、长白猪、约克夏猪，优选为约克夏猪。
步骤2，以基因组DNA为模板，进行PCR扩增。
其中，利用上述检测SNP标记的引物对或包含该引物对的试剂盒进行PCR扩增，所得到的扩增产物包含位于国际猪基因组10.2版本参考序列14号染色体第151,219,997核苷酸处的SNP 标记。
步骤3，确定待测猪所述SNP标记的基因型。
其中，对SNP标记的基因型检测方法不做特别限定，可以采用现有技术中常用的直接测序法、基因芯片技术、单链构象多态性聚合酶链式反应(PCR-SSCP)、限制性片段长度多态性聚合酶链式反应(PCR-RFLP)及飞行时间质谱等技术。
步骤4，根据基因型评估猪的达100kg体重日龄。
若待测猪的位于国际猪参考基因组10.2版本参考序列14号染色体第151,219,997核苷酸处的SNP标记的基因型为TC，则其具有较低的达100kg体重日龄；若待测猪的位于国际猪参考基因组10.2版本参考序列14号染色体第151,219,997核苷酸处的SNP 标记的基因型为CC，则其具有较高的达100kg体重日龄。
本发明的另一方面，提供了一种上述SNP标记、引物对或试剂盒在种猪生长性状遗传改良中的应用，
优选地，所述种猪生长性状遗传改良能够降低猪达100kg 体重日龄。
更优选地，所述种猪选自杜洛克猪、长白猪和约克夏猪，优选为约克夏猪。
在本发明中，利用SNP标记开展种猪选育，利用分子标记辅助育种选择有利基因型个体留种生产，以降低达100kg体重日龄，改良生长性状。
本发明的另一方面，提供了一种猪育种方法，所述方法包括种猪继代选育位于猪14号染色体上的SEQ ID NO:1上的第 151位位点的TC基因型个体，淘汰SEQ ID NO:1上的第151位位点的CC基因型个体的步骤。
优选地，所述猪育种方法利用了上述的SNP标记、引物对和/或试剂盒。
实施例
以下通过具体实例进一步描述本发明，不过这些实例仅仅是范例性的，并不对本发明的保护范围构成任何限制。
实施例1
1、试验猪群体
本实施例所采用的试验猪群体为来自于河北衡水种猪场的约克夏纯种母猪，共384头。
2、基因组DNA提取
采集384头猪耳组织，参考天根生物科技公司组织DNA提取试剂盒说明书，按以下步骤顺序进行DNA提取：
(1)先在缓冲液GD和漂洗液PW中分别加入68mL和 200mL无水乙醇，充分混匀。
(2)采集组织样约100mg置于2mL EP管内，完全剪碎后加 200μL缓冲液GA，振荡至彻底悬浮。
(3)加入20μL蛋白酶K溶液，混匀后放在56℃金属浴中消化过夜，直至耳样组织溶解，简短离心以去除管盖内壁的水珠。
(4)加入200μL缓冲液GB，充分颠倒混匀，放在70℃金属浴10min，溶液应变清亮，简短离心以去除管盖内壁的水珠。
(5)加人200μL无水乙醇，充分振荡混匀15sec，此时可能会出现絮状沉淀，简短离心以去除管盖内壁的水珠。
(6)将上一步所得溶液和絮状沉淀都加入一个吸附柱CB3 中，吸附柱放入收集管中，随后以12,000rpm离心30sec，倒掉废液，将吸附柱CB3放回收集管中。
(7)向吸附柱CB3中加入500μL缓冲液GD，12,000rpm离心30sec，倒掉废液，将吸附柱CB3放入收集管中。
(8)向吸附柱CB3中加入600μL漂洗液PW，以12,000rpm 离心30sec，倒掉废液，将吸附柱CB3放入收集管中。
(9)重复操作步骤(8)。
(10)将吸附柱CB3放回收集管中，12,000rpm离心2min，倒掉废液；将吸附柱CB3置于室温放置数分钟，以彻底晾干吸附材料中残余的漂洗液。
(11)将吸附柱CB3转入一个干净的离心管中，向吸附膜的中间部位悬空滴加100μL洗脱缓冲液TE，室温放置2-5min， 12,000rpm离心2min，将溶液收集到离心管中，将离心得到的溶液再加入吸附柱CB3中，室温放置2min，12,000rpm离心2min 将溶液收集到离心管中。
(12)经过Nanodrop-100分光光度计检测质量与浓度后将浓度同一稀释到50ng/μL于-20℃下保存备用。
3、猪达100kg体重日龄的测定
称重前禁食12小时，采用电子称重台称重，记录猪的体重和测定时的实际日龄。然后对猪达100kg体重的实际日龄进行校正，利用河北省地方标准(DB-13/T 2065-2014)文件《种猪场场内生产性能测定技术规程》的遗传评估性状测定规程对采集的数据进行表型数据校正，
具体按下述校正公式进行：
校正日龄＝测定日龄(d)-[(实测体重(kg)-100)/CF]
其中，
母猪CF值＝[实测体重(kg)/测定日龄(d)]×1.714615。
对测定后的表型数据进行质量控制：清除表型值缺失的个体，清除与平均值的偏差大于3倍标准差的个体。
4、基因分型检测
基于Sequenom平台，采用基因分型384孔试剂盒Complete iPLEX GoldGenotyping Reagent Set 384Kit进行分型检测。
(1)以提取的384个约克夏纯种猪的DNA为模板，采用如 SEQ ID NO：2和SEQ IDNO：3所示的引物序列进行扩增，扩增体系(384孔PCR板+38％的试剂损耗)如表1所示：
表1
Figure BDA0002697403770000111
Figure BDA0002697403770000121
扩增反应的循环参数如表2所示：
表2
Figure BDA0002697403770000122
(2)对PCR扩增产物进行SAP消化处理，反应体系(384 孔PCR板+38％的试剂损耗)如表3：
表3
试剂 浓度 体积(ul)
水 NA 810.9
SAP Buffer 10x 90.1
SAP 1.7U/ul 159.0
Total 2/孔
将上述体系混匀，离心后加入PCR反应检测板中，置于PCR 仪中，反应条件为：37℃孵育40min，85℃孵育5min，4℃维持。
(3)向消化处理后的体系中加入单碱基延伸引物，进行延伸反应，反应体系如表4：
表4
试剂 浓度 体积(ul)
水 NA 400.2
iPLEX buffer plus 10x 106
iPLEX terminator NA 106
引物混合物 0.6-1.3uM 426.1
iPlex酶 NA 21.7
total 2/孔
其中，单碱基延伸的引物分别如SEQ ID NO：4、SEQ ID NO： 5和SEQ ID NO：6所示。
反应的循环参数如表5所示：
表5
Figure BDA0002697403770000131
(4)将反应产物(共9μL)稀释3倍，使用树脂进行脱盐，将脱盐处理后的样品点在样品靶上，自然结晶；上机进行质谱检测，收集数据，判读rs81217795位点的基因型。
清除最小等位基因频率(Minimum Allele Frequency，MAF) 小于1％的个体，并且检验Hardy-Weinberg平衡。
5、rs81217795分子标记分型结果与猪达100kg体重关联分析
采用GEMMA统计分析软件的混合线性模型进行统计分析，具体模型为：
y＝Wa+xβ+μ+ε
其中，y代表个体表型值；W代表协变量；a代表对应系数； x代表SNP基因型；β代表对应的SNP效应；μ代表剩余多基因效应；ε代表剩余残差效应。
6、结果
(1)采用PopGene 3.2计算SNP标记位点的基因型频率和等位基因频率，结果如表6所示：
表6
Figure BDA0002697403770000141
由表6可知，rs81217795位点检测到两种基因型：CC和TC，其中，C的等位基因频率为97.1％，T的等位基因频率为2.9％。
(2)rs81217795位点不同基因型在约克夏猪群体中对猪达 100kg体重日龄的影响如表7所示：
表7
Figure BDA0002697403770000142
Figure BDA0002697403770000151
由表7可以看出，rs81217795位点与猪校正达100kg体重日龄之间存在显著相关(P<0.05)。在rs81217795突变个体中，TC 型个体在达100kg体重日龄方面显著优于CC型个体。由此可见，在猪群体中，继代选育rs81217795位点的TC型个体，可逐步提高猪群体生长性能，降低达100kg体重日龄。
以上结合具体实施方式和范例性实例对本发明进行了详细说明，不过这些说明并不能理解为对本发明的限制。本领域技术人员理解，在不偏离本发明精神和范围的情况下，可以对本发明技术方案及其实施方式进行多种等价替换、修饰或改进，这些均落入本发明的范围内。
SEQUENCE LISTING
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<120> 一种利用GLRX3基因评估猪达100kg体重日龄的方法及应用
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<213> 核苷酸片段（人工序列）
<400> 1
tctaacctga tgttgtccag agaaaactcc agataaatgt gtatcttgag atgacttact 60
ctgtggtacc tgacggatta agaagtaaaa tcacctccag ttttgcacag gacattttgt 120
tagcaacaaa atagtattac ttttctgcac taattttgaa acatcaaata ggttttgtga 180
tttttgtgta aaactctttc ttttctcgtt aagatgcttt tcctttttgc agtgtcgact 240
acgagacgtt cgacatactg gaggatgagg aagtaagagc cgtgttttat gtttcgtcct 300
gcgtcttagc tttagtcacg agggcccgag aggcaggtct cagggttcct gttgtttccg 360
taggtccgac agggattgaa aacctactcc aactggccga cgtaccctca gctgtatgtg 420
aaaggggagc tggtcggagg cctggatatt gttaaggtaa gggtggagtt cccctgccat 480
tccggagagc tgaaaactcg ggcgtgtttg aaacggtccc ttccgtgggc tcgttcttgt 540
ctagcctcgt gtctaatcac ttctggacct gcgccaccac ctctgtggct gacgtacccc 600
ggcccgccct cacctcccct gagccggccc ggtcagctgc cttactgctc ggcctcttct 660
gcaggctggt cctttcagaa cctcgtccag cgtggggtcg ctgccggccc cgatcccaag 720
ggtaactcgg cattcagagc agctcggggt gtggccaggc tcagagctgt gccaagccct 780
aacgcgcctc agccttcctt c 801
<210> 2
<211> 30
<212> DNA
<213> 扩增引物P1（人工序列）
<400> 2
acgttggatg agctcccctt tcacatacag 30
<210> 3
<211> 30
<212> DNA
<213> 扩增引物P2（人工序列）
<400> 3
acgttggatg tcctgttgtt tccgtaggtc 30
<210> 4
<211> 27
<212> DNA
<213> 单碱基延伸引物P3（人工序列）
<400> 4
tcccctttca catacagctg agggtac 27
<210> 5
<211> 28
<212> DNA
<213> 单碱基延伸引物P4（人工序列）
<400> 5
tcccctttca catacagctg agggtaca 28
<210> 6
<211> 28
<212> DNA
<213> 单碱基延伸引物P5（人工序列）
<400> 6
tcccctttca catacagctg agggtacg 28
<210> 7
<211> 20
<212> DNA
<213> 引物P6（人工序列）
<400> 7
ttgtttccgt aggtccgaca 20
<210> 8
<211> 21
<212> DNA
<213> 引物P7（人工序列）
<400> 8
agctcccctt tcacatacag c 21

Claims (10)

1.一种利用GLRX3基因评估猪达100kg体重日龄的方法，其特征在于，所述方法包括检测猪GLRX3基因内、与猪达100kg体重相关的SNP标记的基因型的步骤。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述SNP标记位于猪基因组10.2版本参考序列猪14号染色体第151,219,997核苷酸处。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述SNP标记选自SEQ ID NO：1所示的核苷酸序列的第151位核苷酸。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述位于猪基因组10.2版本参考序列猪14号染色体第151,219,997核苷酸处SNP标记的等位基因为C和T，具有两种基因型，分别为CC和TC，
基因型为TC的猪相较于基因型为CC的猪，具有较低的达100kg体重日龄。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：
步骤1，提取待测猪的基因组DNA；
步骤2，以基因组DNA为模板，进行PCR扩增；
步骤3，确定待测猪所述SNP标记的基因型；
步骤4，根据基因型评估猪的达100kg体重日龄。
6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，步骤2中，所述扩增采用的引物为P6和P7，分别包括如SEQ ID NO：7所示和SEQ ID NO：8所示的核苷酸序列。
7.权利要求1至4之一所述的与猪达100kg体重相关的SNP标记。
8.权利要求1至4之一所述的与猪达100kg体重相关的SNP标记在种猪生长性状遗传改良中的应用。
9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述种猪选自杜洛克猪、长白猪和约克夏猪。
10.一种猪育种方法，其特征在于，所述方法包括种猪继代选育位于猪14号染色体上的SEQ ID NO:1上的第151位位点的TC基因型个体，淘汰SEQ ID NO:1上的第151位位点的CC基因型个体的步骤。
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