CN114246176B - 一种植物悬浮细胞的保存方法 - Google Patents

一种植物悬浮细胞的保存方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种植物悬浮细胞的保存方法，涉及植物细胞工程技术领域。方法步骤为：在植物悬浮细胞液中加入甘露糖醇、海藻糖、甘油、卵磷脂、麦芽糊精、脱脂奶粉和γ‑聚谷氨酸，随后进行冷冻干燥，冻干程序包括三次冷冻、抽真空、三次干燥和二次解析操作，三次冷冻温度依次为0℃～5℃、‑18℃～‑25℃和‑50℃，三次干燥温度依次为‑30～‑25℃、‑15～‑10℃和‑5～0℃；二次解析干燥温度依次为10～15℃、20～25℃。本申请通过在植物细胞悬浮液中添加保存剂，同时冻干过程通过多个阶段性降温和升温干燥处理，让植物细胞长时间缓慢适应外界温度，保护细胞的活性，使得细胞复苏时间短、细胞活性高且保存时间长。

Description

一种植物悬浮细胞的保存方法
技术领域
本发明涉及植物细胞工程技术领域，尤其涉及一种植物悬浮细胞的保存方法。
背景技术
植物细胞的保存极具价值，其意义在于(1)保持细胞培养物的遗传稳定性；(2)长期保存植物的种质资源；(3)长期保存植物优良遗传基因；(4)建立长期保存的愈伤组织库；(5)保存实验材料，不用反复诱导或分离植物细胞。目前的保存技术包括有液氮冷冻保存、超低温(-70℃)冷冻保存、冷藏(4℃)保存的方式保存。
采用液氮储存的方法，细胞最高的活性高达90％，经过低温储藏在二甲基亚砜、山梨醇的拟南芥和烟草细胞，不过即使在这种情况下，至少需要一个星期解冻后的细胞才能恢复正常生长和完全重建，解冻后的细胞在植物细胞培养生长完全恢复之前细胞生长能力通常低下且处于较长的停歇阶段。超低温(-70℃)冷冻保存的细胞可在一定时间内保持细胞活性，但保存时间有限。冷藏(4℃)保存的方式保存可短时间内保持植物细胞，保存时间通常在3个月左右，保存时间较短。
因此，建立保存时间长，且高活性的、恢复快的保存植物的细胞方法具有重要意义。
发明内容
本发明提供了一种植物悬浮细胞的保存方法，以解决目前植物细胞保存时间短、细胞复苏时间长、细胞活性低的技术问题。
为了解决上述技术问题，本发明实施例提供了一种植物悬浮细胞的保存方法，包括以下步骤：
(1)在植物悬浮细胞液中加入3wt％-6wt％甘露糖醇、1wt％-3wt％海藻糖、1wt％-10wt％甘油、2wt％-4wt％卵磷脂、0.5wt％-2.5wt％麦芽糊精、5wt％-10wt％脱脂奶粉和0.1wt％-5wt％γ-聚谷氨酸，获得冻干液；
(2)将所述冻干液进行冷冻干燥，冻干程序如下：
第一步：一次冷冻温度0℃～5℃，持续60min-100min；二次冷冻温度-18℃～-25℃，持续60min-120min；三次冷冻温度-50℃，持续120min～180min；
第二步：抽真空，真空度0.1mbar～0.5mbar；
第三步：一次干燥温度-30～-25℃，持续时间2～4h；二次干燥温度-15～-10℃，持续时间2～4h；三次干燥温度-5～0℃，持续时间2～4h；
第四步：一次解析干燥温度10～15℃，持续时间4～6h；二次解析干燥温度20～25℃，持续时间4～6h。
通过采用上述方案，本申请通过在植物细胞悬浮液中添加保存剂，保护细胞的活性，同时冻干程序在降温的过程中，通过多个阶段性降温和升温干燥处理，让植物细胞长时间缓慢适应外界温度，调整自身机能，有利于保护细胞的活性，避免温度变化幅度较大而造成复苏后细胞活性的下降。相比于液氮保存和-70℃保存的方式，本申请方案处理的细胞复苏时间短、细胞活性高，相比于4℃保存的方式，本申请方案处理的细胞保存时间长，细胞活性长时间保持较高。
作为优选方案，在步骤(2)中第三步，一次干燥、二次干燥和三次干燥的升温速度均为0.2℃/min～1℃/min；在步骤(2)中第四步，一次解析干燥和二次解析干燥的升温速度均为0.2℃/min～1℃/min。
作为优选方案，在步骤(1)中，在植物悬浮细胞液中加入4wt％甘露糖醇、3wt％海藻糖、10wt％甘油、2wt％卵磷脂、0.5wt％麦芽糊精、10wt％脱脂奶粉和2.5wt％γ-聚谷氨酸，获得冻干液。
作为优选方案，在步骤(2)中，在冻干程序第一步中：一次冷冻温度0℃，持续100min；二次冷冻温度-25℃，持续120min，三次冷冻温度-50℃，持续180min。
作为优选方案，在步骤(2)中，在冻干程序第三步中：一次干燥温度-25℃，升温速度0.2℃/min，持续时间4h；二次干燥温度-10℃，升温速度0.2℃/min，持续时间4h；三次干燥温度0℃，升温速度0.2℃/min，持续时间4h。
作为优选方案，在步骤(2)中，在冻干程序第四步中：一次解析干燥温度10℃，升温速度0.2℃/min，持续时间6h；二次解析干燥温度25℃，升温速度0.2℃/min，持续时间6h。
作为优选方案，所述植物悬浮细胞为番茄悬浮细胞。
相比于现有技术，本发明实施例具有如下有益效果：
本申请通过在植物细胞悬浮液中添加保存剂，保护细胞的活性，同时冻干程序在处理过程中，通过多个阶段性降温和升温干燥处理，让植物细胞长时间缓慢适应外界温度，有利于保护细胞的活性，最终保存后的植物悬浮细胞复苏时间短、细胞活性高且保存时间长。
附图说明
图1-为本发明实施例一中的一种植物悬浮细胞的保存方法、液氮保存、-70℃保存和4℃保存在第0个月的细胞生长曲线；
图2-为本发明实施例一中的一种植物悬浮细胞的保存方法、液氮保存、-70℃保存和4℃保存在第6个月的细胞生长曲线；
图3-为本发明实施例一中的一种植物悬浮细胞的保存方法、液氮保存、-70℃保存和4℃保存在第12个月的细胞生长曲线；
图4-为本发明实施例一中的一种植物悬浮细胞的保存方法、液氮保存、-70℃保存和4℃保存在第24个月的细胞生长曲线。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
制备例一
一种番茄悬浮细胞的制备方法，包括以下步骤：
(1)取番茄种子，75％酒精浸泡消毒90s，灭菌水清洗2-3次，2.5％NaClO消毒10min，灭菌水清洗5-6次。
(2)在MS固体培养基培养，黑暗处理3-5d，发芽后转入光培养，光强2000lux，光周期16/8h，温度25±2℃；
(3)培养2个月后，取无菌番茄苗叶片，切成0.5cm×0.5cm的小块，放在添加有0.1mg/L 2,4-D和0.05mg/L 6-BA的1/2MS固体培养基中培养，培养温度25℃±2℃，光强2000lux，光周期16/8h培养4周观察愈伤组织生长情况；
(4)取生长状态良好的胚性愈伤组织，在添加0.1mg/L 2,4-D和0.05mg/L6-BA的1/2MS液体培养基中培养，培养温度25℃±2℃，转数120-150rpm/min，光强2000lux，光周期16/8h培养2周；
(5)通过0.25％果胶酶使培养获得的悬浮细胞团分散，用血球计数板进行计数；
(6)取悬浮细胞继代培养，在添加0.1mg/L 2,4-D和0.05mg/L 6-BA的1/2MS液体培养基中培养，培养温度25℃±2℃，转数120-150rpm，光强2000lux，光周期16/8h，培养2周，得到番茄悬浮细胞。
实施例一
一种植物悬浮细胞的保存方法，包括以下步骤：
(1)将甘露糖醇、海藻糖、甘油、卵磷脂、麦芽糊精、脱脂奶粉和γ-聚谷氨酸混合后制得保护剂，加入制备例一获得的含番茄悬浮细胞的悬浮液中，其中各组分在悬浮液中占比如表1所示，获得冻干液；
(2)将步骤(1)获得的冻干液进行冷冻干燥，冻干程序如下：
第一步：预冻，一次冷冻温度0℃，持续100min；二次冷冻温度-25℃，持续120min，温度-50℃，持续180min；
第二步：抽真空，真空度0.5mbar；
第三步：干燥，一次干燥温度-25℃，升温速度0.2℃/min，持续时间4h；二次干燥温度-10℃，升温速度0.2℃/min，持续时间4h；三次干燥温度0℃，升温速度0.2℃/min，持续时间4h；
第四步：解析干燥，一次解析干燥温度10℃，升温速度0.2℃/min，持续时间6h；二次解析干燥温度25℃，升温速度0.2℃/min，持续时间6h。
实施例二
一种植物悬浮细胞的保存方法，包括以下步骤：
(1)将甘露糖醇、海藻糖、甘油、卵磷脂、麦芽糊精、脱脂奶粉和γ-聚谷氨酸混合后制得保护剂，加入制备例一获得的含番茄悬浮细胞的悬浮液中，其中各组分在悬浮液中占比如表1所示，获得冻干液；
(2)将步骤(1)获得的冻干液进行冷冻干燥，冻干程序如下：
第一步：预冻，一次冷冻温度5℃，持续60min；二次冷冻温度-20℃，持续60min，三次冷冻温度-50℃，持续120min；
第二步：抽真空，真空度0.1mbar；
第三步：一次干燥温度-25℃，升温速度0.5℃/min，持续时间3h；二次干燥温度-15℃，升温速度0.5℃/min，持续时间3h；三次干燥温度-5℃，升温速度0.5℃/min，持续时间3h；
第四步：解析干燥，一次解析干燥温度15℃，升温速度1℃/min，持续时间4h；二次解析干燥温度20℃，升温速度1℃/min，持续时间4h。
细胞活性测试：保存的细胞进行复苏培养，通过测定培养15天时的鲜重增殖倍数，来测定细胞活性，结果如表2所示。
实施例三
一种植物悬浮细胞的保存方法，包括以下步骤：
(1)将甘露糖醇、海藻糖、甘油、卵磷脂、麦芽糊精、脱脂奶粉和γ-聚谷氨酸混合后制得保护剂，加入制备例一获得的含番茄悬浮细胞的悬浮液中，其中各组分在悬浮液中占比如表1所示，获得冻干液；
(2)将步骤(1)获得的冻干液进行冷冻干燥，冻干程序如下：
第一步：预冻，一次冷冻温度0℃，持续80min；二次冷冻温度-18℃，持续80min，温度-50℃，持续150min；
第二步：抽真空，真空度0.2mbar；
第三步：一次干燥温度-30℃，升温速度1℃/min，持续时间2h；二次干燥温度-15℃，升温速度1℃/min，持续时间2h；三次干燥温度-5℃，升温速度1℃/min，持续时间2h；
第四步：解析干燥，一次解析干燥温度15℃，升温速度0.5℃/min，持续时间4h；二次解析干燥温度20℃，升温速度0.5℃/min，持续时间4h。
细胞活性测试：保存的细胞进行复苏培养，通过测定培养15天时的鲜重增殖倍数，来测定细胞活性，结果如表2所示。
实施例四
一种植物悬浮细胞的保存方法，各步骤及各步骤使用的试剂、参数均与实施例一相同，不同的地方在于，甘露糖醇、海藻糖、甘油、卵磷脂、麦芽糊精、脱脂奶粉和γ-聚谷氨在悬浮液中的占比如表1所示。
实施例五
一种植物悬浮细胞的保存方法，各步骤及各步骤使用的试剂、参数均与实施例一相同，不同的地方在于，甘露糖醇、海藻糖、甘油、卵磷脂、麦芽糊精、脱脂奶粉和γ-聚谷氨在悬浮液中的占比如表1所示。
对比例一
一种植物悬浮细胞的保存方法，各步骤及各步骤使用的试剂、参数均与实施例一相同，不同的地方在于，甘露糖醇、海藻糖、甘油、卵磷脂、麦芽糊精、脱脂奶粉和γ-聚谷氨在悬浮液中的占比如表1所示。
对比例二
一种植物悬浮细胞的保存方法，各步骤及各步骤使用的试剂、参数均与实施例一相同，不同的地方在于，甘露糖醇、海藻糖、甘油、卵磷脂、麦芽糊精、脱脂奶粉和γ-聚谷氨酸在悬浮液中的占比如表1所示。
对比例三
一种植物悬浮细胞的保存方法，各步骤及各步骤使用的试剂、参数均与实施例一相同，不同的地方在于，甘露糖醇、海藻糖、甘油、卵磷脂、麦芽糊精、脱脂奶粉和γ-聚谷氨酸在悬浮液中的占比如表1所示。
对比例四
一种植物悬浮细胞的保存方法，各步骤及各步骤使用的试剂、参数均与实施例一相同，不同的地方在于，甘露糖醇、海藻糖、甘油、卵磷脂、麦芽糊精、脱脂奶粉和γ-聚谷氨酸在悬浮液中的占比如表1所示。
对比例五
一种植物悬浮细胞的保存方法，各步骤及各步骤使用的试剂、参数均与实施例一相同，不同的地方在于，在步骤(2)中，冻干程序如下：
第一步：预冻，一次冷冻温度0℃，持续100min；二次冷冻温度-50℃，持续250min；
第二步：抽真空，真空度0.5mbar；
第三步：一次干燥温度-15℃，升温速度2℃/min，持续时间6h；二次干燥温度0℃，升温速度2℃/min，持续时间6h；
第四步：解析干燥，干燥温度25℃，升温速度2℃/min，持续时间8h。
对比例六
一种植物悬浮细胞的保存方法，各步骤及各步骤使用的试剂、参数均与实施例一相同，不同的地方在于，在步骤(2)中，冻干程序如下：
第一步：预冻，一次冷冻温度-25℃，持续150min，二次冷冻温度-50℃，持续180min；
第二步：抽真空，真空度0.5mbar；
第三步：一次干燥温度-15℃，升温速度1℃/min，持续时间8h；二次干燥温度0℃，升温速度1℃/min，持续时间6h；
第四步：解析干燥，一次解析干燥温度10℃，升温速度1℃/min，持续时间6h；二次解析干燥温度25℃，升温速度1℃/min，持续时间6h。
表1-实施例1-5和对比例1-4中各组分含量及工艺参数
Figure BDA0003407528470000081
性能检测试验：
1、15天细胞活性测试：将实施例1-5和对比例1-6保存的细胞进行复苏培养，通过测定培养15天时的鲜重增殖倍数，来测定细胞活性，结果如表2所示。
表2-实施例1-5和对比例1-6的15天鲜重增长倍数
Figure BDA0003407528470000082
结合表2中实施例3和对比例4-5的检测结果可知，本申请的冻干程序在降温的过程中，通过多个阶段性降温处理，让植物细胞长时间缓慢适应外界温度，调整自身机能，有利于保护细胞的活性，避免温度变化幅度较大而造成复苏后细胞活性的下降，同时在低温阶段迅速抽干水分，保持细胞活力。
2、24月细胞活性测试：将制备例一获得的番茄悬浮细胞分别通过本申请实施例一的冷冻干燥保存、液氮保存、-70℃保存、4℃保存方式处理，在0月、6个月、12个月、24个月时取出一支样品，进行复苏，测定细胞活性，通过测定不同保存方法的生长曲线，分别在取出样品当月的0天、1天、3天、5天、7天、9天、11天、13天、15天取样，通过测量植物鲜重的增殖倍数，绘制生长曲线，统计结果如图1-4所示。
统计结果如图1-4所示，液氮保存和-70℃保存的悬浮细胞复苏最慢；4℃保存样品仅能保存在6个月左右，超过6个月后活性下降，保存24个月后几乎无活性；本申请实施例一的冷冻干燥保存的悬浮细胞样品在第6个月之后仍保持较高的细胞活性，复苏最快。综合比较，冷冻干燥法保存时间最久，且复苏时间最短，细胞活性保持较好。
以上所述的具体实施例，对本发明的目的、技术方案和有益效果进行了进一步的详细说明，应当理解，以上所述仅为本发明的具体实施例而已，并不用于限定本发明的保护范围。特别指出，对于本领域技术人员来说，凡在本发明的精神和原则之内，所做的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (5)

1.一种番茄悬浮细胞的保存方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)在番茄悬浮细胞液中加入3wt％-6wt％甘露糖醇、1wt％-3wt％海藻糖、1wt％-10wt％甘油、2wt％-4wt％卵磷脂、0.5wt％-2.5wt％麦芽糊精、5wt％-10wt％脱脂奶粉和0.1wt％-5wt％γ-聚谷氨酸，获得冻干液；
(2)将所述冻干液进行冷冻干燥，冻干程序如下：
第一步：一次冷冻温度0℃～5℃，持续60min-100min；二次冷冻温度-18℃～-25℃，持续60min-120min；三次冷冻温度-50℃，持续120min～180min；
第二步：抽真空，真空度0.1mbar～0.5mbar；
第三步：一次干燥温度-30～-25℃，持续时间2～4h；二次干燥温度-15～-10℃，持续时间2～4h；三次干燥温度-5～0℃，持续时间2～4h；
第四步：一次解析干燥温度10～15℃，持续时间4～6h；二次解析干燥温度20～25℃，持续时间4～6h；
在步骤(2)中第三步，一次干燥、二次干燥和三次干燥的升温速度均为0.2℃/min～1℃/min；
在步骤(2)中第四步，一次解析干燥和二次解析干燥的升温速度均为0.2℃/min～1℃/min。
2.如权利要求1所述的一种番茄悬浮细胞的保存方法，其特征在于，在步骤(1)中，在番茄悬浮细胞液中加入4wt％甘露糖醇、3wt％海藻糖、10wt％甘油、2wt％卵磷脂、0.5wt％麦芽糊精、10wt％脱脂奶粉和2.5wt％γ-聚谷氨酸，获得冻干液。
3.如权利要求1所述的一种番茄悬浮细胞的保存方法，其特征在于，在步骤(2)中，在冻干程序第一步中：一次冷冻温度0℃，持续100min；二次冷冻温度-25℃，持续120min，三次冷冻温度-50℃，持续180min。
4.如权利要求1所述的一种番茄悬浮细胞的保存方法，其特征在于，在步骤(2)中，在冻干程序第三步中：一次干燥温度-25℃，升温速度0.2℃/min，持续时间4h；二次干燥温度-10℃，升温速度0.2℃/min，持续时间4h；三次干燥温度0℃，升温速度0.2℃/min，持续时间4h。
5.如权利要求1所述的一种番茄悬浮细胞的保存方法，其特征在于，在步骤(2)中，在冻干程序第四步中：一次解析干燥温度10℃，升温速度0.2℃/min，持续时间6h；二次解析干燥温度25℃，升温速度0.2℃/min，持续时间6h。
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Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5965438A (en) * 1995-06-07 1999-10-12 Phyton, Inc. Cryopreservation of plant cells
JP2001178427A (ja) * 2000-11-13 2001-07-03 Kurorera Kogyo Kk 植物の乾燥物とそれを使用した飲料物、着色料、動物性プランクトン用飼料、及び植物の乾燥物の製造方法
CN109520213A (zh) * 2018-12-03 2019-03-26 九州天润（武汉）中药研究院有限公司 一种真空冷冻干燥白及的冻干工艺
CN111494449A (zh) * 2020-06-23 2020-08-07 山东中医药大学 一种金银花真空冷冻干燥工艺

Family Cites Families (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20050158699A1 (en) * 1995-06-07 2005-07-21 Kadkade Prakash G. Cryopreservation of plant cells
US20020081565A1 (en) * 2000-10-30 2002-06-27 Sigma-Aldrich Co. Process for producing freeze dried competent cells and use thereof in cloning
US9930883B2 (en) * 2014-12-15 2018-04-03 University Of North Carollina Charlotte Compositions and methods for preservation of materials in the amorphous state

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5965438A (en) * 1995-06-07 1999-10-12 Phyton, Inc. Cryopreservation of plant cells
JP2001178427A (ja) * 2000-11-13 2001-07-03 Kurorera Kogyo Kk 植物の乾燥物とそれを使用した飲料物、着色料、動物性プランクトン用飼料、及び植物の乾燥物の製造方法
CN109520213A (zh) * 2018-12-03 2019-03-26 九州天润（武汉）中药研究院有限公司 一种真空冷冻干燥白及的冻干工艺
CN111494449A (zh) * 2020-06-23 2020-08-07 山东中医药大学 一种金银花真空冷冻干燥工艺

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
A Comparison of Evaporative and Conventional Freezing Prior to Freeze-drying of Fruits and Vegetables;S. GHIO等;《Trans IChemE》;20001231;第78卷;全文 *
番茄冻干过程的传热传质研究;李蔚等;《西安公路交通大学学报》;19990330(第01期);全文 *
真空冷冻干燥在花卉方面的应用;温广宇等;《河南科技大学学报(农学版)》;20030927(第03期);全文 *

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