CN114224849A

CN114224849A - 一种儿童用苏黄止咳颗粒及其制备方法

Info

Publication number: CN114224849A
Application number: CN202210090514.5A
Authority: CN
Inventors: 晁恩祥; 晁燕; 张朝鸥
Original assignee: Beijing Oriental Fortune Technology Development Co ltd
Current assignee: Beijing Oriental Fortune Technology Development Co ltd
Priority date: 2022-01-26
Filing date: 2022-01-26
Publication date: 2022-03-25
Also published as: CN116270821A

Abstract

本发明涉及一种儿童用苏黄止咳颗粒及其制备方法。该产品由麻黄、紫苏叶、地龙、枇杷叶、紫苏子、蝉蜕、前胡、牛蒡子和五味子为药材原料，辅以适合的辅料制成颗粒剂，止咳性能优异，安全无刺激，适合小儿使用。

Description

一种儿童用苏黄止咳颗粒及其制备方法

技术领域

本发明涉及中药领域，更具体地，涉及一种儿童用苏黄止咳颗粒及其制备方法。

背景技术

咳嗽常见于呼吸道感染性疾病，也见于某些非呼吸道感染性疾病和全身性疾病，无论是急性发作还是慢性发作均给人们的日常生活带来极大的困扰。尤其儿童的呼吸道对各种刺激都非常敏感，各种刺激物如呼吸道分泌物、异物、有刺激性的气体和气味都容易引起咳嗽，容易出现反复的阵发性咳嗽、长期的慢性咳嗽、咳嗽变异性哮喘等短期或长期的疾病，对儿童的身心发育造成很大影响。

儿童是祖国的花朵，是祖国未来发展的重要力量。我国儿童人口基数庞大，2021年5月发布的第七次全国人口普查结果显示，我国现有儿童人口数为25338万人，占全国总人口的17.95％。随着二胎、三胎政策开放，儿童人口数量持续增加，儿童用药市场需求也将随之增加。一直以来，我国儿童用药都面临专用品种少、适宜剂型少、用药不规范等问题。有数据表明，目前国内市场90％以上的药品无儿童剂型，儿童专用药品不到2％。儿童专用药品并不仅仅只是成人版药物的“缩小版”或“减量版”，而是要根据儿童身体发展的特点和状态，选择合适的剂型、剂量以及给药方式等，在满足儿童顺应性的基础上获得更好的治疗效果。因此，儿童用药的发展刻不容缓。然而，尽管儿童药的市场发展前景一片大好，国内专门生产儿童用药的企业、专门研究儿童用药的研究机构依然少缺。为更好满足儿童临床用药需求，2021年9月底，国务院印发《中国儿童发展纲要(2021-2030)》，鼓励儿童用药研发生产，加快儿童用药申报审批工作。在儿童咳嗽用药方面，根据《国家基本药物名录(2018年版)》中成药部分-儿科用药部分记载，现仅有小儿消积止咳口服液、小儿肺咳颗粒、小儿肺热咳喘颗粒(口服液)、金振口服液等，相对于成人用药而言，不仅品种少选择少，还存在效果因人而异、多年使用后儿童的身体对其敏感性降低导致药效减退的情况，让家长们非常发愁。

苏黄止咳胶囊，是由本申请发明人提出的具有疏风宣肺、止咳利咽作用的中药成方制剂，主要用于风邪犯肺、肺气失宣所致的咳嗽、咽痒、痒时咳嗽，或呛咳阵作，气急、遇冷空气、异味等因素突发或加重，或夜卧晨起咳剧，呈反复性发作、干咳无痰或少痰，舌苔薄白等。临床用于感冒后咳嗽及咳嗽变异性哮喘见上述症候者。在经二期三期临床试验确认有效性和安全性后，现已由扬子江药业投产销售十年余，由于其效果之优异，得到广大人民群众的认可。本发明人在现有苏黄止咳胶囊的基础上，开发儿童用苏黄颗粒产品，以期给儿童止咳用药增添效果优异的新品种。

发明内容

本发明提供了一种儿童用苏黄止咳颗粒及其制备方法。

本发明的儿童用苏黄止咳颗粒的配方为：麻黄417g、紫苏叶417g、地龙417g、枇杷叶417g、紫苏子250g、蝉蜕333g、前胡333g、牛蒡子417g、五味子333g。

本发明的苏黄颗粒的制备方法是由麻黄417g、紫苏叶417g、地龙417g、枇杷叶417g、紫苏子250g、蝉蜕333g、前胡333g、牛蒡子417g、五味子333g，制成1000g颗粒。

更具体地，苏黄颗粒的制备方法为：取药材，紫苏叶、前胡加水浸泡，蒸馏提取挥发油，蒸馏后的水溶液滤过，另器收集；挥发油用倍他环糊精包合，备用；五味子与麻黄、地龙、枇杷叶、紫苏子、蝉蜕、牛蒡子加水浸泡，煎煮三次，每次1.5小时，煎液滤过，合并滤液；将五味子与麻黄、地龙、枇杷叶、紫苏子、蝉蜕、牛蒡子的滤液与紫苏叶、前胡蒸馏后的水溶液合并，离心，取上清液，减压浓缩，静置，加乙醇至含醇量达70％，静置取上清液，回收乙醇至无醇味，减压浓缩至稠膏，加入药材量10％糊精，混匀，减压干燥成干浸膏(水分≤5％)，粉碎，加挥发油包合物、三氯蔗糖、苹果酸，以及糊精适量，混合，85％乙醇适量制粒，14目筛整粒，制得1000g颗粒。

更具体地，制备方法为：

(1)取以上九味药材，其中枇杷叶为经蜜炙的枇杷叶、紫苏子和牛蒡子均为炒制过的紫苏子和牛蒡子；

(2)紫苏叶、前胡加9倍量水浸泡1h，蒸馏提取挥发油8h，蒸馏后的水溶液滤过，另器收集；挥发油用倍他环糊精包合，4℃冷藏静置12h，滤过，收集包合物，40℃以下干燥，粉碎过80目筛，备用；

(3)五味子与麻黄、地龙、枇杷叶、紫苏子、蝉蜕、牛蒡子加水浸泡1h，煎煮三次，每次1.5小时，加水量分别为8、6、6倍，煎液滤过，合并滤液；

(4)将步骤(3)的滤液与上述步骤(2)蒸馏后的水溶液合并，离心(14000转/分钟)，取上清液，减压浓缩至相对密度为1.09～1.12(50℃)，静置至室温，加乙醇至含醇量达70％，室温静置12小时，取上清液，回收乙醇至无醇味，并减压浓缩至相对密度为1.15～1.20(50℃)的稠膏，加入药材量10％糊精，混匀，减压干燥成干浸膏(水分≤5％)，粉碎过80目筛，加挥发油包合物、三氯蔗糖、苹果酸、以及糊精适量，混合30min，85％乙醇适量制粒，过14目，45～50℃干燥(水分≤5％)，14目筛整粒，混匀，制成1000g，即得。

其中，步骤(2)中，倍他环糊精包合的用量为挥发油∶β-CD∶水＝1∶8∶48。

其中，步骤(3)中，五味子破碎成最粗粉。

其中，步骤(4)中，减压浓缩的参数是温度65～70℃，真空度-0.05～-0.07Mpa；减压干燥的参数是温度65～70℃，真空度-0.06～-0.08Mpa。

本发明的儿童用苏黄止咳颗粒是对现有成人用苏黄止咳胶囊在儿童用药上延伸研究的成果，适应少年儿童的体质特点，患儿易于服用，且止咳疗效优异。

具体实施方式

儿童药品通常是指14岁以下未成年人使用的专用药品。由于儿童机体生理代谢与成人相比有较大差别，儿童用药的药物选择、使用剂量及频次、药物剂型等都与成人用药不同。目前，儿童专用药品匮乏，部分患儿在服药时按成人用量酌情缩减，将成人药直接使用，这种做法存在着巨大的安全隐患。儿童本身对于较大的片剂、胶囊剂难以吞咽，部分家长用果汁、汤水等送服药物，擅自联合用药等情况时有发生，不仅可能影响疗效，也无法保证安全性。与之相对的，虽然有旺盛需求，但由于儿童用药对安全性、原辅料质量要求和口感都比成人药更为严格，导致研发成本较高、研发难度大、临床风险大且利润空间小，限制了儿童制药行业的发展。

本发明人提出的苏黄止咳组合物能极大改善感冒后咳嗽和咳嗽变异型哮喘患者的症状，2009年获得了组合物的专利保护(专利号ZL200310100103.7)，2016年获得苏黄混悬剂产品的专利保护(ZL201410249863.2)，2020年获得苏黄胶囊质量检测方法的专利保护(ZL201810173187.3)，2020年以“苏黄止咳胶囊”条目列入《中华人民共和国药典(2020年版)》。在此基础上，为填补中成药治疗儿童感冒后咳嗽及咳嗽变异型哮喘的空白，同时规范儿童用药，增加儿童用药的依从性，本发明人将“苏黄止咳方”二次开发为苏黄止咳颗粒儿童用药。然而，在这个过程中，正如上文所述，儿童用药的开发存在成本高、难度大、临床风险大等难题，发明人面对了现有提取方法不适用需要开发新提取方法、确定给药剂量、确认用药依从性等系列问题，经过长时间探索和研究，最终得以提出本发明的技术方案，并通过实验确认了本发明产品的安全性和有效性。因需要考虑的因素太多，以及筛选过程反复，下文仅提供部分实验结果。

下文所提苏黄止咳胶囊指的是《中华人民共和国药典(2020年版)》记载的“苏黄止咳胶囊”，简称为苏黄胶囊；本发明产品简称为“苏黄颗粒”。

一、剂型的选择

现苏黄胶囊为硬胶囊剂，儿童服用不便；即使将硬胶囊壳拆开，仅服用胶囊内容物，不仅儿童难以接受内容物的口感和气味，给药者也很难确定给药的剂量。因此，对于儿童用产品，需要对苏黄胶囊的剂型进行调整。中药颗粒剂具有汤剂的基本性质，溶出和吸收速度快，显效迅速，溶解后口感适宜等特点，符合传统使用的习惯；同时本品口感微苦，具有一定芳香气味，做成颗粒剂相比胶囊、片剂等其他剂型更适合儿童服用。此外，颗粒剂具有剂量易调整，包装、携带、保存方便，性质稳定，生产自动化高，成本经济等特点，具有广阔的市场前景，故本制剂选择颗粒剂型。

在根据药典苏黄胶囊的方法进行制备儿童用颗粒剂的过程中，发现若干问题：根据现有方法制得的苏黄提取物制粒所得颗粒水溶性差，无法根据常规颗粒剂成型工艺制成符合要求的颗粒剂；在小规模急毒试验中，现有苏黄胶囊按现有给药剂量转换为大鼠剂量后对幼龄大鼠(22日龄)给药，大鼠出现一定比例的不良反应。上述问题均提示现有苏黄胶囊不适合通过常规的改剂型手段直接制备为儿童用颗粒剂，而是需要在其组方配比不变以保证疗效的基础上对药材的提取方法、成型工艺以及给药量进行多方面的综合考量。

二、提取方法的研究

2.1供试品和对照品

2.1.1供试品

2.1.1.1样品1：本发明苏黄颗粒(实验室自制)

制备方法：按苏黄胶囊的药材配比取药材，紫苏叶、前胡加水浸泡，蒸馏提取挥发油，蒸馏后的水溶液滤过，另器收集；挥发油用倍他环糊精包合，4℃冷藏静置，滤过，收集包合物，40℃以下干燥，粉碎过80目筛，备用；五味子与麻黄、地龙、枇杷叶、紫苏子、蝉蜕、牛蒡子加水浸泡，煎液滤过，合并滤液；将滤液与上述蒸馏后的水溶液合并，离心，取上清液，减压浓缩至相对密度为1.09～1.12(50℃)，静置至室温，加乙醇至含醇量达70％，室温静置12小时，取上清液，回收乙醇至无醇味，并减压浓缩至相对密度为1.15～1.20(50℃)的稠膏，继续减压干燥成干浸膏(水分≤5％)，粉碎过80目筛，加挥发油包合物混合30min，85％乙醇适量制粒，即得。

2.1.1.2样品2(实验室自制)

制备方法：将所有药材混合后，加水浸泡，煎煮三次，煎液滤过，合并滤液，离心，取上清液，减压浓缩至相对密度为1.09～1.12(50℃)，静置至室温，加乙醇至含醇量达70％，室温静置12小时，取上清液，回收乙醇至无醇味，并减压浓缩至相对密度为1.15～1.20(50℃)的稠膏，继续减压干燥成干浸膏(水分≤5％)，粉碎过80目筛，85％乙醇适量制粒，即得。

2.1.1.3样品3(实验室自制)

制备方法：同现有苏黄胶囊制备方法，其中用50％乙醇回流提取麻黄、五味子三次。

2.1.1.4样品4(实验室自制)

制备方法：取药材，紫苏叶、前胡、麻黄和紫苏子加9倍量水浸泡，蒸馏提取挥发油，蒸馏后的水溶液滤过，另器收集；挥发油用倍他环糊精包合，4℃冷藏静置，滤过，收集包合物，40℃以下干燥，粉碎过80目筛，备用；地龙与枇杷叶、五味子、蝉蜕、牛蒡子加水浸泡，煎煮三次，煎液滤过，合并滤液；将滤液与上述蒸馏后的水溶液合并，离心，取上清液，减压浓缩至相对密度为1.09～1.12(50℃)，静置至室温，加乙醇至含醇量达70％，室温静置12小时，取上清液，回收乙醇至无醇味，并减压浓缩至相对密度为1.15～1.20(50℃)的稠膏，继续减压干燥成干浸膏(水分≤5％)，粉碎过80目筛，加挥发油包合物混合30min，85％乙醇适量制粒，即得。

2.1.2溶媒

实验动物饮用水(实验室自制蒸馏水)。

2.1.3给药制剂配制方法

分别称取一定量的供试品，至研钵中，研磨，加入溶媒适量，混匀后转移至量筒，用适量溶媒冲洗研钵，转入量筒，继续加溶媒至所需刻度，然后转入适当容器中，用磁力搅拌器混匀后，得所需浓度的制剂样品。给药当天上、下午各配制1次，现用现配。

2.2急毒试验

2.2.1试验对象

品种品系：SD大鼠。

级别：SPF级动物。

仔鼠性别和数量：共100只，雌雄各半。

仔鼠年龄：转入时，21日龄，给药时，22日龄(相当于3岁儿童)。

仔鼠体重：转入时，雄鼠43～64g，雌鼠43～59g。

2.2.2试验方法

本试验分5组，溶媒对照组及样品1-4组，共使用100只22日龄SD大鼠，雌雄各半，每组10雄10雌，剂量设计采用最大给药量法，均采用相当于生药107g/kg的剂量采用灌胃给药，单日给药2次，间隔4h左右，给药体积20ml/kg/次，总给药体积40ml/kg/天，第2次药后1～2h后添加饲料，观察期14天。观察动物外观、行为、分泌物、排泄物等；记录动物毒性反应情况，包括中毒症状、中毒发生时间、持续时间、恢复时间及动物死亡时间；分别于D0给药前、给药后D1、D4、D7、D11、D14进行称重；所有动物均进行大体解剖，观察主要脏器是否出现体积、颜色、质地等改变。

结果评价：试验结束时动物均无出现死亡、处死解剖后内部脏器无异常、试验期间动物活动正常、体重增长正常，则认为给药样品通过急毒试验，符合安全要求。如出现死亡或其它异常，则不符合要求。

2.2.3试验结果

在本次试验条件下，各样品组大鼠均未出现死亡。其中，溶媒对照组、样品1组、样品2组及样品4组大鼠在试验期间活动正常、体重增长正常、解剖后内部脏器无异常。样品3组大鼠在试验期间个别小鼠出现烦躁不安、活动过量现象，解剖后各主要脏器无异常，个别小鼠心脏稍有肥大。提示不仅原苏黄颗粒制法不适于幼龄动物给药，将提取麻黄、五味子的80％乙醇溶剂更改为50％乙醇仍然不适于幼龄动物给药，对其制法的调整不能仅从改变溶剂的角度进行。

2.3药效试验

2.3.1试验对象

品种品系：CD小鼠。

级别：SPF级动物。

仔鼠数量：共50只，雌雄各半。

仔鼠年龄：转入时，21日龄，给药时，22日龄。

仔鼠体重：雄鼠、雌鼠均16～18g。

2.3.2试验方法

本试验分5组，溶媒对照组及样品1-4组，共使用50只CD小鼠，每组10只雌雄各半，体重随机分组。各组分别灌胃给予相应受试样品，每天1次，溶媒对照组灌胃给予相同体积的蒸馏水(0.2ml/10g体重)，连续4天。4天给药后，将小鼠逐只放入YLS-8A诱咳引喘仪中，雾化杯中盛入12.5％氨水10ml，喷雾5秒钟停止，观察并记录引起小鼠出现首次咳嗽所需时间(咳嗽潜伏期)及3分钟内咳嗽次数，以t检验进行组间比较。再连续给药3天后，再次将小鼠逐只放入YLS-8A诱咳引喘仪中，雾化杯中盛入12.5％氨水10mi，喷雾5秒钟停止，观察并记录引起小鼠出现首次咳嗽所需时间(咳嗽潜伏期)及3分钟内咳嗽次数，以t检验进行组间比较。

2.3.3试验结果

给药4天和给药7天后，样品1-4组均可明显减少氨水致小鼠咳嗽次数，延长咳嗽潜伏期，与溶媒对照组相比均具有显著性差异，提示样品组均具有预防咳嗽和止咳作用。从表中还可以看出样品1组的效果优于样品2-4组，原因未明，考虑幼龄小鼠对药物较为敏感，综合考虑急毒试验结果，样品1组的提取方式所得的产品更适合幼龄小鼠。

表1给药4天对氨水喷雾致小鼠咳嗽的影响

注：**表示与对照组比较P＜0.01

表2给药7天对氨水喷雾致小鼠咳嗽的影响

注：**表示与对照组比较P＜0.01

在此基础上，确定采用样品1的提取方法进行产品的制备，更具体是紫苏叶、前胡提取挥发油，得挥发油及水溶液，麻黄、五味子、牛蒡子、紫苏子、地龙、蝉蜕、枇杷叶水煎提取，下面将进一步探讨水提取的具体工艺参数。

2.4水提取工艺参数的确定

2.4.1试验设计

需要将麻黄、五味子、牛蒡子、紫苏子、地龙、蝉蜕、枇杷叶设计为水煎煮提取，本次实验选择盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱、五味子醇甲、牛蒡苷提取总量为指标考察优选水提供工艺参数。提取次数设计1次、2次、3次；提取时间设计0.5h、1h、1.5h；加水量跟据最小加水量考察结果设计6、8、10倍，并且第二次提取时比第一次少加2倍量水，进行L₉(3⁴)正交试验。

2.4.2试验方法

称取麻黄20g、五味子(破碎)16g、牛蒡子20g、紫苏子12g、地龙20g、蝉蜕16g、枇杷叶20g，共18份，每份124g。按表3和表4中的因素水平表和L9(34)正交实验表进行提取，每个试验平行操作2次，减压浓缩(温度≤70℃)，减压干燥(温度≤70℃)，得干膏。其中因素水平表见表3，正交试验表见表4，方差分析表见表5-7。盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱参照《中国药典》2015版麻黄含量测定项下的方法；五味子醇甲的测定方法参照《中国药典》2015版五味子含量测定的方法；牛蒡苷的测定方法参照《中国药典》2015版牛蒡子含量测定的方法。

表3水提工艺因素水平表

表4水提取工艺L₉(3⁴)正交试验表

表5水提工艺方差分析表(盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱总量)

F临界值 F_0.01(1，2)＝99 F_0.05(1，2)＝19

表6水提工艺方差分析表(五味子醇甲总量)

表7水提工艺方差分析表(牛蒡苷总量)

2.4.3试验结果

(1)盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱：以盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱总量为指标，方差分析显示B因素具有显著性影响，A、C因素无显著性差异；直观分析可知，RB＞RC＞RA，各因素的影响作用次序为B、C、A，其中：A因素K2＞K3＞K1，第2水平优于第1、3水平；B因素、C因素K3＞K2＞K1，第3水平优于第1、2水平，选A2B3C3。

(2)五味子醇甲：以五味子醇甲提取总量为指标，方差分析显示B因素具有显著性影响，A、C因素无显著性差异；直观分析可知，RB＞RA＞RC，各因素的影响作用次序为B、A、C：其中A因素K3＞K2＞K1，第3、2水平无明显差异，B因素K3＞K2＞K1，第3水平优于第1、2水平，C因素K1＞K2＞K3，选A2B3C1。

(3)牛蒡苷：以牛蒡苷总量为指标，由方差分析表可知，A、B、C无显著性差异；直观分析：由正交试验结果表可知，RB＞RC＞RA，各因素的影响作用次序为B、C、A：A因素K3＞K2＞K1，第3水平优于第1、2水平，B因素、C因素K3＞K2＞K1，第3水平优于第1、2水平，选A3B3C3。

表8水提工艺综合分析表

综上分析，结合实际生产，确定水提工艺为A2B3C3即加水量8、6、6倍，提取3次，每次1.5小时。

2.4.4水提正交验证试验

对上述优选的正交条件进行验证，过程如下：称取麻黄20g、五味子(破碎)16g、牛蒡子20g、紫苏子12g、地龙20g、蝉蜕16g、枇杷叶20g，共124g。按8，6，6倍水煎煮1.5h煎煮3次，平行操作两次，减压浓缩(温度≤70℃)，减压干燥(温度≤70℃)，得干膏。

表9提取时间单因素考察结果表

结果表明：牛蒡苷总量平均为300.6mg，五味子醇甲总量平均为19.8mg，盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱之和总量平均为90.0mg，与正交试验所得结果基本一致，表明提取工艺稳定可行。

2.4.5提取时间验证

由于提取时间C因素对指标成分具有显著性影响，为了进一步验证提取时间加长是否对各指标提取率有影响，故以出膏率、盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱、五味子醇甲总量和牛蒡苷总量为指标，以A2B3C3与A2B4C3对提取时间进行单因素考察，过程如下：

称取麻黄10g、五味子(破碎)8g、牛蒡子10g、紫苏子6g、地龙10g、蝉蜕8g、枇杷叶10g，共62g，分别按8、6、6倍水煎煮1.5h煎煮3次和8、6、6倍水煎煮2h煎煮3次。减压浓缩(温度≤70℃)，减压干燥(温度≤70℃)，得干膏。

表10提取时间单因素考察结果表

结果表明：当提取时间提高到2小时后，牛蒡苷、五味子醇甲、盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱之和总量与提取1.5小时差别小于5％，结合实际生产，最终确定提取时间为1.5小时。

三、动物试验

3.1供试品：本发明苏黄止咳颗粒(实验室自制)

制备方法：按苏黄胶囊的药材配比取药材，紫苏叶、前胡加9倍量水浸泡1h，蒸馏提取挥发油8h，蒸馏后的水溶液滤过，另器收集；挥发油用倍他环糊精包合，4℃冷藏静置12h，滤过，收集包合物，40℃以下干燥，粉碎过80目筛，备用；五味子与麻黄、地龙、枇杷叶、紫苏子、蝉蜕、牛蒡子加水浸泡1h，煎煮三次，每次1.5小时，加水量分别为8、6、6倍，煎液滤过，合并滤液；将滤液与上述蒸馏后的水溶液合并，离心(14000转/分钟)，取上清液，减压浓缩至相对密度为1.09～1.12(50℃)，静置至室温，加乙醇至含醇量达70％，室温静置12小时，取上清液，回收乙醇至无醇味，并减压浓缩至相对密度为1.15～1.20(50℃)的稠膏，继续减压干燥成干浸膏(水分≤5％)，粉碎过80目筛，加挥发油包合物混合30min，85％乙醇适量制粒，即得。

3.2试验对象

品种品系：CD小鼠。

级别：SPF级动物。

仔鼠数量：共40只，雌雄各半。

仔鼠年龄：转入时，21日龄，给药时，22日龄。

仔鼠体重：雄鼠、雌鼠均16～18g。

3.3剂量确定

原苏黄止咳胶囊，口服一次3粒，一日3次，成人日用量折合生药为40g。因此参考苏黄止咳胶囊的成人给药量转换成小鼠用量，将13.2g/kg、6.6g/kg、3.3g/kg设为高中低剂量组的给药剂量，进行本发明产品的给药。

3.4试验方法

本试验分4组，高中低剂量组和空白对照组，使用40只CD小鼠，每组10只雌雄各半，体重随机分组。按照2.1.3节方法制作受试样品，高中低剂量组分别灌胃给予相应受试样品，每天1次，连续7天；空白对照组同法给予蒸馏水(0.2mL/10g)。试验前禁食不禁水16小时。末次药后1小时，腹腔注射0.5％酚红溶液0.5mL/只，注射30分钟后，处死动物，仰位固定小鼠，剪开颈正中皮肤，分离气管，将7号针头(头部磨平的)插入气管内约0.3cm，用丝线结扎固定后，用注射器吸取5％碳酸氢钠溶液0.5ml，通过针头来回灌洗呼吸道3次，将灌洗液注入试管内，重新吸取5％碳酸氢钠溶液0.5ml，如上再灌洗3次，合并灌洗液，在波长546nm下鼻塞，测定吸光度值，根据酚红标准曲线，计算酚红排出量，以t检验比较组间差异性。

3.5试验结果

高中低剂量组均可明显提高支气管灌洗液中酚红浓度，促进酚红排除，与空白组相比具有显著性差异，提示该种方法制备的苏黄止咳产品对于幼龄小鼠均具有祛痰作用。但中剂量组效果最明显，低剂量组优于高剂量组，考虑与幼龄小鼠的耐受性有关。

表11对小鼠气管段酚红排除的影响

注：*、**表示与对照组比较P＜0.05，0.01

3.6试验结论

根据试验结果并结合剂量转换，最终确定3-7岁儿童的日给药量优选为13.2g。按照一日两次给药，每次一袋颗粒剂计算，每袋颗粒剂含生药6.6g为宜。苏黄止咳胶囊配方中药材总量为4444g，稍有不便，因此，经多次试验最终将配方总量调整为3333g生药，制成1000g颗粒，2g颗粒一袋，满足如上确定的用药标准。

四、制剂工艺研究

取3.1节所述供试品10g加20倍量热水搅拌5min，可溶颗粒全部溶化，液体有轻微混浊，满足颗粒剂对于溶化性的要求。但提取物直接溶解，口味较苦，需在原料经提取得到的干浸膏粉中加入适量辅料帮助成型、改善吸湿性和调配口味。

4.1矫味剂种类及用量的考察

4.1.1材料

(1)3.1节所述供试品中最终得到的稠膏，磨粉，以及环糊精包合物。

(2)三氯蔗糖

(3)苹果酸

4.1.2方法

按处方比例取混合膏粉、挥发油的倍他环糊精包合物，共6份，分别加入不同种类及用量三氯蔗糖、苹果酸，加200ml热水冲调，品尝口感，以苦味、酸、甜度为指标，考察各种矫味剂用量。

4.1.2结果

表12矫味剂用量考察表

结果表明：随着三氯蔗糖和苹果酸算用量增大，掩盖苦味作用明显。当三氯蔗糖用量0.05g、苹果酸用量0.08g时，以及三氯蔗糖用量0.09g、苹果酸用量0.10g时酸甜味适中，苦味基本掩盖，味道能被接受；但考虑到幼儿服用顺应性差，需考虑在减小服用量的基础上添加适宜辅料来改善口味，因此通过上述实验结果确定，三氯蔗糖的用量为0.05g、苹果酸的用量为0.08g。

4.2填充剂筛选

4.2.1材料

(1)3.1节所述供试品中最终得到的稠膏，磨粉，以及环糊精包合物

(2)三氯蔗糖、苹果酸

(3)麦芽糊精、甘露醇、糊精

4.2.2方法

取10倍日处方量的混合膏粉84g、倍他环糊精包合物1.65g、苹果酸0.8g、三氯蔗糖0.5g，混合均匀，成浸膏混合粉86.95g，加入不同种类的填充剂40g，混合均匀，加润湿剂适量制粒，测定制粒现象、成品率、颗粒粒度。结果见表13。

4.2.3结果

表13填充剂种类考察结果表

结果表明，糊精以及甘露醇：糊精(1∶1)为辅料时得到颗粒收率高，符合要求，但糊精易制成软材，粒度均匀，故确定糊精为赋型剂。

4.3小试工艺总结

4.3.1确定工艺

根据研究结果，确定苏黄止咳颗粒小试工艺：挥发油用倍他环糊精包合(挥发油∶β-CD∶水＝1∶8∶48)，研磨30min，冷藏静置12h，收集包合物，置40℃以下干燥，粉碎过80目筛，备用。原料提取干浸膏粉碎过80目筛，加入已经过80目筛的挥发油包合物、糊精、三氯蔗糖和苹果酸，混合30min，加入85％乙醇制软才，14筛制粒，45℃-50℃温度干燥，颗粒水分≤5％，包装，每袋2g，即得。

4.3.2小试结果

表14制剂小试放大验证实验结果表

三批试验结果显示，本制剂工艺制备颗粒平均收率在95％以上，工艺稳定，可行。

五、临床试验

5.1一般资料

按以下病例纳入标准纳入病例100例，口服给药实施例1所制得颗粒产品。给药剂量为：3-7岁每天服用2次，每次1袋，8-14岁每天服用2次，每次2袋，1-3岁每天服用1次，每次1袋。7天为一疗程，给药2个疗程。

5.2病例纳入情况

5.2.1感冒后咳嗽诊断标准：参照中华医学会呼吸病学分会哮喘学组发布的《咳嗽的诊断与治疗指南》(2015)。

(1)有明确的呼吸道感染史；

(2)急性期症状消失后，咳嗽迁延不愈，干咳少痰，持续≥3周；

(3)X线胸片检查无异常；

(4)排除其他引起咳嗽的原因。

5.2.2风邪犯肺，肺气失宣证辨证

风邪犯肺，肺气失宣证：咳嗽，咽痒，或呛咳阵作，气急，遇冷空气、异味等因素突发或加重，或夜卧晨起加剧，多呈反复性发作，干咳无痰或少痰。舌苔薄白，脉浮，或紧，或弦。

主症：咳嗽；

次症：咽痒；咯痰；急；

舌象：舌苔薄白；脉象：脉浮，或紧，或弦；

主症必备，兼具次症至少1项，同时参考舌象、脉象，即可诊断为风邪犯肺，肺气失宣证。

5.2.3纳入病例标准

以下标准筛选时必须全部符合方可纳入试验

(1)符合感冒后咳嗽诊断标准；

(2)符合风邪犯肺，肺气失宣证的辨证标准；

5.2.4排除病例标准：年龄14岁以上者；有严重并发症或恢复期病例；合并有严重心血管、脑血管、造血系统等严重疾病；近1个月内参加过其他临床试验；严重营养不良者。

5.2.5最终确认纳入病例：均在1-14岁之间，其中1-3岁15例、3-7岁62例、8-14岁23例。

5.2疗效判定标准

5.2.1中医症状评价

中医症状评分标准

5.2.2中医症候疗效

疗效指数(n)＝[(疗前积分-疗后积分)/疗前积分]*100％

临床控制：治疗后中医症状积分减少≥95％

显效：治疗后中医症状积分减少≥70％

有效：治疗后中医症状积分减少≥30％

无效：治疗后中医症状积分减少＜30％

5.3试验结果

5.3.1中医症状积分结果

中医症状总积分：入组受试者基线中医症状总积分为14.13±3.27分，入组第7天治疗后中医症状总积分相对于基线变化的差值(入组第7天-基线)为-5.74±3.84分，入组第14天治疗后中医症状总积分相对于基线变化的差值(入组第14天-基线)为-10.09±3.19分；经配对t检验，差别均具有统计学意义(P＜0.0001)。

咳嗽次数：入组受试者基线咳嗽次数0分、3分、6分和9分占比分别为0.00％、35.94％、54.10％、9.96％，入组第7天占比为14.37％、76.03％、9.19％、0.42％，入组第14天占比分别为62.54％、36.11％、1.13％、0.22％；经符号秩检验咳嗽次数中医症状评分较基线变化均具有统计学差异(P＜0.0001)。

咳嗽程度：入组受试者基线咳嗽程度0分、3分、6分和9分占比分别为0.00％、30.15％、56.81％、13.04％，入组第7天占比分别为16.36％、70.82％、12.25％、0.57％，入组第14天占比分别为63.05％、35.66％、1.05％、0.24％；经符号秩检验咳嗽程度中医症状评分较基线变化均具有统计学差异(P＜0.0001)。

咽痒：入组受试者基线咽痒0分、1分、2分和3分占比分别为5.27％、41.35％、40.99％、12.39％，入组第7天占比分别为29.28％、53.45％、16.29％、0.98％，入组第14天占比分别为73.43％、20.17％、5.92％、0.48％；经符号秩检验咽痒中医症状评分较基线变化均具有统计学差异(P＜0.0001)。

咯痰：入组受试者基线咯痰0分、1分、2分和3分占比分别为20.98％、42.74％、29.21％、7.07％，入组第7天占比分别为49.62％、41.53％、6.95％、1.90％，入组第14天占比分别为83.95％、12.37％、3.16％、0.52％；经符号秩检验咯痰中医症状评分较基线变化均具有统计学差异(P＜0.0001)。

气急：入组受试者基线气急0分、1分、2分和3分占比分别为52.12％、36.28％、7.11％、4.49％，入组第7天占比分别为79.25％、15.31％、4.93％、0.51％，入组第14天占比分别为91.55％、8.21％、0.24％、0.00％；经符号秩检验气急中医症状评分较基线变化均具有统计学差异(P＜0.0001)。

5.3.2中医症候疗效

受试者入组第7天治疗效果为临床控制的比例为19.21％，显效为20.59％，有效为35.88％，总有效率为75.68％，无效率为24.32％；入组第14天，临床控制的比例为55.12％，显效为23.98％，有效为14.52％，总有效率为93.62％，无效率为6.38％。

5.3.3小结

临床应用结果显示，本发明产品能够降低儿童患者全天、日间及夜间咳嗽症状积分的作用；能够改善患者的咳嗽症状；本发明产品能显著降低患者的中医症状总积分，改善总体中医症状；能够减少患者的咳嗽次数，减轻咳嗽程度，改善咽痒、咯痰、气急症状；治疗后14天中医证候疗效的总有效率为93.62％。本发明的产品对于患儿感冒后咳嗽和咳嗽变异型哮喘所致咳嗽有很好的治疗效果，并且由于服用方便，患儿依从性高，更容易被接受。

实施例

通过以下实施例来进一步说明本发明，但是实施例的内容对本发明没有限制。

实施例1

取麻黄、紫苏叶、地龙、枇杷叶(蜜炙)及牛蒡子(炒)各417g，紫苏子(炒)250g，蝉蜕、前胡及五味子各333g，紫苏叶、前胡加9倍量水浸泡1h，蒸馏提取挥发油8h，蒸馏后的水溶液滤过，另器收集；挥发油用倍他环糊精包合(挥发油∶β-CD∶水＝1∶8∶48)，4℃冷藏静置12h，滤过，收集包合物，40℃以下干燥，粉碎过80目筛，备用。五味子(破碎成最粗粉)与麻黄、紫苏叶、地龙、枇杷叶、紫苏子、蝉蜕、牛蒡子加水浸泡1h，煎煮三次，每次1.5小时，加水量分别为8，6，6倍，煎液滤过，合并滤液，与上述蒸馏后的水溶液合并，离心(14000转/分钟)，取上清液，减压浓缩(温度65～70℃，真空度-0.05～-0.07Mpa)至相对密度为1.09～1.12(50℃)，静置至室温，加乙醇至含醇量达70％，室温静置12小时，取上清液，回收乙醇至无醇味，并减压浓缩(温度65～70℃，真空度-0.05～-0.07Mpa)至相对密度为1.15～1.20(50℃)的稠膏，加入药材量10％糊精，混匀，减压干燥(温度65～70℃，真空度-0.06～-0.08Mpa)成干浸膏(水分≤5％)，粉碎过80目筛，加挥发油包合物、三氯蔗糖、苹果酸、以及糊精适量，混合30min，85％乙醇适量制粒，过14目，45～50℃干燥(水分≤5％)，14目筛整粒，制成1000g，即得。

Claims

1.一种儿童用苏黄止咳颗粒及其制备方法，其特征在于由麻黄417g、紫苏叶417g、地龙417g、枇杷叶417g、紫苏子250g、蝉蜕333g、前胡333g、牛蒡子417g、五味子333g，制成1000g颗粒。

2.如权利要求1所述的儿童用苏黄止咳颗粒及其制备方法，其特征在于颗粒的制备方法为：取药材，紫苏叶、前胡加水浸泡，蒸馏提取挥发油，蒸馏后的水溶液滤过，另器收集；挥发油用倍他环糊精包合，备用；五味子与麻黄、地龙、枇杷叶、紫苏子、蝉蜕、牛蒡子加水浸泡，煎煮三次，每次1.5小时，煎液滤过，合并滤液；将五味子等药材的滤液与紫苏叶、前胡蒸馏后的水溶液合并，离心，取上清液，减压浓缩，静置，加乙醇至含醇量达70％，静置取上清液，回收乙醇至无醇味，减压浓缩至稠膏，加入药材量10％糊精，混匀，减压干燥成干浸膏(水分≤5％)，粉碎，加挥发油包合物、三氯蔗糖、苹果酸，以及糊精适量，混合，85％乙醇适量制粒，14目筛整粒，制得1000g颗粒。

3.如权利要求2所述的儿童用苏黄止咳颗粒及其制备方法，其特征在于更具体地，制备方法为：

(4)将步骤(3)的滤液与上述步骤(2)蒸馏后的水溶液合并，离心(14000转/分钟)，取上清液，减压浓缩至相对密度为1.09～1.12(50℃)，静置至室温，加乙醇至含醇量达70％，室温静置12小时，取上清液，回收乙醇至无醇味，并减压浓缩至相对密度为1.15～1.20(50℃)的稠膏，加入药材量10％糊精，拌匀，减压干燥成干浸膏(水分≤5％)，粉碎过80目筛，加挥发油包合物、三氯蔗糖、苹果酸，以及糊精适量，混合30min，85％乙醇适量制粒，过14目，45～50℃干燥(水分≤5％)，14目筛整粒，混匀，制成1000g，即得。

4.如权利要求2或3所述的儿童用苏黄止咳颗粒及其制备方法，其特征在于其中，倍他环糊精包合的用量为挥发油∶β-CD∶水＝1∶8∶48。

5.如权利要求2或3所述的儿童用苏黄止咳颗粒及其制备方法，其特征在于五味子破碎成最粗粉。

6.如权利要求2或3所述的儿童用苏黄止咳颗粒及其制备方法，其特征在于其中，减压浓缩的参数是温度65～70℃，真空度-0.05～-0.07Mpa；减压干燥的参数是温度65～70℃，真空度-0.06～-0.08Mpa。

7.如权利要求1-6所述的儿童用苏黄止咳颗粒用于制备儿童止咳产品的用途。