CN114223426A - 一种单子叶植物叶片液体注射方法 - Google Patents
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Abstract
本发明属生物技术领域，涉及一种单子叶植物叶片液体注射方法，包括带槽硅胶垫片制作、加压注射器制作和叶片注射三个环节。本发明工艺简单，操作方便，以硅胶垫片为辅助手段、以加压注射的方式，能够将溶液直接注射到正常生长的单子叶植物活体叶片内，可以轻松实现水稻、玉米、小麦、香蕉等单子叶植物的叶片注射，解决了现有单子叶植物叶片因表面角质较厚而难于注射液体的问题，改变了单子叶植物在蛋白荧光定位分析、体外表达蛋白的功能鉴定等研究方向的模式，提高功能鉴定(验证)的准确性，可以应用于病原接种、农杆菌注射、外源蛋白注射等多种科研用途。
Description
技术领域
本发明属生物技术领域，涉及一种植物叶片液体注射方法，具体是一种用于单子叶植物叶片进行液体加压注射的方法。
背景技术
在科学研究中，常常需要将溶液或悬液(如抑制剂、诱导剂、病原物等)直接注射到正常生长的植物活体叶片内以便鉴定其功能，如，在叶片上进行病原接种、农杆菌注射，或者，核酸、蛋白注射，等等。
所有的被子植物可分为双子叶植物和单子叶植物，双子叶植物叶片的表皮(角质层)薄，叶片注射的常规操作是用无针头注射器轻轻抵压叶片背面便可以实现液体的注射，有利于后续的科学研究。单子叶植物表皮(角质层)厚，常规双子叶植物叶片液体注射方法并不适用于叶片表面角质较厚的单子叶植物，很难依靠注射器将液体注射进入叶片中。
目前，对单子叶植物进行功能鉴定时，由于单子叶植物叶片的结构特性，难以将液体直接注射到活体叶片中，常规操作是选择在双子叶植物中完成(将液体注射至双子叶植物的叶片中)，如，一些单子叶植物蛋白荧光定位分析、体外表达蛋白的功能鉴定，等等，多数选择在双子叶植物，如烟草、拟南芥中完成。由此导致所鉴定的基因或蛋白来源与载体植物不匹配，不仅功能鉴定(验证)过程的合理性有待商榷，还影响功能鉴定(验证)的准确性。
发明内容
本发明的目的是针对现有技术的不足而提供一种单子叶植物叶片液体注射方法，以硅胶垫片为辅助手段、以加压注射的方式，能够将溶液直接注射到叶片内，解决了现有单子叶植物叶片因表面角质较厚而难于注射液体的问题，改变了单子叶植物在蛋白荧光定位分析、体外表达蛋白的功能鉴定等研究方向的模式，提高功能鉴定(验证)的准确性，可以应用于病原接种、农杆菌注射、外源蛋白注射等多种科研用途。
本发明所采用的技术方案：
一种单子叶植物叶片液体注射方法，其步骤如下：
S1、带槽硅胶垫片制作：取一个硅胶圆片，在硅胶圆片上划开一个凹槽，备用；
所述硅胶圆片的规格为直径1.5～2.5cm、厚度2.5～3.5mm。
所述凹槽的规格为长2～5mm、宽0.8～1.2mm、深1.3～1.7mm。
S2、加压注射器制作：将小容量注射器针头从带槽硅胶垫片的侧面中间穿入硅胶片中，使针尖到达并裸露于凹槽开口处；
所述小容量注射器针头是4.5号或5号针头。
S3、叶片注射：在目标叶片背面划破表皮2～5mm的长度，注射器吸取准备注射的液体；将加压注射器的硅胶垫片贴着目标叶片背面并使凹槽正对叶片背面表皮划破处，对准加压注射器硅胶垫片的位置在叶片正面放置一块同样大小未开槽的硅胶垫片，前后用力摁住目标叶片两侧的硅胶垫片中间，夹紧目标叶片，缓慢推动注射器，将液体注射进入凹槽内，凹槽内的液体在压力作用下缓慢渗入目标叶片中，完成叶片注射过程。
本发明工艺简单，操作方便，以硅胶垫片为辅助手段、以加压注射的方式，能够将溶液直接注射到正常生长的单子叶植物活体叶片内，可以轻松实现水稻、玉米、小麦、香蕉、菠萝等单子叶植物的叶片注射，解决了现有单子叶植物叶片因表面角质较厚而难于注射液体的问题，改变了单子叶植物在蛋白荧光定位分析、体外表达蛋白的功能鉴定等研究方向的模式，提高功能鉴定(验证)的准确性，可以应用于病原接种、农杆菌注射、外源蛋白注射等多种科研用途。
附图说明
图1是本发明的叶片注射操作流程。A：划破叶片背面表皮；B：带槽硅胶垫片贴着叶片背面；C：在叶片正面放置一块同样大小的硅胶片；D：摁住两侧硅胶片中部，夹紧叶片，缓慢推动注射器。
图2是不同单子叶植物叶片加压注射效果。线圈表示注射范围，线段标尺表示1cm。a、水稻叶片；b、小麦叶片；c、玉米叶片；d、香蕉叶片；e、菠萝叶片。
具体实施方式
下面结合实施例，对本发明的具体实施方式作进一步详细描述。以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法,通常按照常规条件,或按照制造厂商所建议的条件。
实施例
1、带槽硅胶垫片制作：购买直径大约2cm、厚度大约3mm的硅胶圆片，以及美工刀1把或者雕刻用的1mm方槽刀一把。用小刀在硅胶圆片中部划开一个长2～5mm，宽0.8～1.2mm、深1.3～1.7mm的凹槽，备用；
2、加压注射器制作：取1ml注射器并将针头(4.5号或5号针头)从带槽硅胶垫片的侧面中间穿入硅胶片中，使针尖到达并裸露于凹槽开口处；
3、叶片注射：用普通注射器针尖划破目标叶片背面表皮2-5mm的长度(根据需要注射的叶片的大小和注射面积决定具体长度)(图1A)；用1ml注射器吸取适量准备注射的液体，将加压注射器的硅胶垫片贴着目标叶片背面并使凹槽正对叶片背部表皮划破处(图1B)；对准叶片背部加压注射器硅胶垫片的位置在叶片正面放置一块同样大小的硅胶垫片(图1C)；前后用力摁住叶片两侧的硅胶垫片中间，夹紧叶片，缓慢推动注射器，将液体注射进入凹槽内，凹槽内的液体在压力作用下缓慢渗入叶片中，完成叶片注射过程(图1D)。
本发明中所采用的目标叶片分别是水稻叶片、小麦叶片、玉米叶片、香蕉叶片和菠萝叶片，叶片加压注射效果如图2所示。结果显示，本发明以硅胶垫片为辅助手段、以加压注射的方式，可以将溶液直接注射到正常生长的单子叶植物活体叶片内，能够满足病原接种、农杆菌注射、外源蛋白注射等多种科研用途。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明技术原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
Claims (4)
1.一种单子叶植物叶片液体注射方法，其特征在于，其步骤如下：
S1、带槽硅胶垫片制作：取一个硅胶圆片，在硅胶圆片上划开一个凹槽，备用；
S2、加压注射器制作：将小容量注射器针头从带槽硅胶垫片的侧面中间穿入硅胶片中，使针尖到达并裸露于凹槽开口处；
S3、叶片注射：在目标叶片背面划破表皮2～5mm的长度，注射器吸取准备注射的液体；将加压注射器的硅胶垫片贴着目标叶片背面并使凹槽正对叶片背面表皮划破处，对准加压注射器硅胶垫片的位置在叶片正面放置一块同样大小未开槽的硅胶垫片，前后用力摁住目标叶片两侧的硅胶垫片中间，夹紧目标叶片，缓慢推动注射器，将液体注射进入凹槽内，凹槽内的液体在压力作用下缓慢渗入目标叶片中，完成叶片注射过程。
2.根据权利要求1所述的单子叶植物叶片液体注射方法，其特征在于：所述硅胶圆片的规格为直径1.5～2.5cm、厚度2.5～3.5mm。
3.根据权利要求1所述的单子叶植物叶片液体注射方法，其特征在于：所述凹槽的规格为长2～5mm、宽0.8～1.2mm、深1.3～1.7mm。
4.根据权利要求1所述的单子叶植物叶片液体注射方法，其特征在于：所述小容量注射器针头是4.5号或5号针头。
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
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| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
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| WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication | ||
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Application publication date: 20220325 |