CN114217078A - 一种检测聚集蛋白聚糖的试纸条、试剂盒及检测方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种检测聚集蛋白聚糖的试纸条、试剂盒及检测方法，涉及免疫层析法定量检测技术领域。通过包被的特异性的抗聚集蛋白聚糖的抗体可以与待检样本中聚集蛋白聚糖(抗原)结合的特性，借助于检测示踪物的发光强度可以实现被示踪物标记的相应聚集蛋白聚糖的快速、准确检出。

Description

一种检测聚集蛋白聚糖的试纸条、试剂盒及检测方法

技术领域

本发明涉及免疫层析法定量检测技术领域，具体而言，涉及一种检测聚集蛋白聚糖的试纸条、试剂盒及检测方法。

背景技术

聚集蛋白聚糖(aggrecan)最初是从软骨组织分离得到的一种蛋白聚糖，其核心蛋白质由多种结构域组成，并接有大约100条硫酸软骨素链。聚集蛋白聚糖为关节软骨细胞外基质的主要成分之一，聚集蛋白聚糖酶属于带有血小板反应蛋白结构域单元的裂解素和金属蛋白酶家族，通常认为基质金属蛋白酶在关节软骨的破坏中起决定性的作用。近年研究发现，在骨关节炎软骨破坏中，聚集蛋白聚糖酶引起的关节软骨破坏比基质金属蛋白酶(MMPs)引起的聚集蛋白聚糖核心蛋白降解大约提前3周，同时抑制聚集蛋白聚糖酶-1和聚集蛋白聚糖酶-2能有效防止关节软骨破坏。聚集蛋白聚糖酶在关节软骨破坏中起重要的作用，研究发现对聚集蛋白聚糖酶1和聚集蛋白聚糖酶-2的双重抑制能有效防止关节软骨的破坏。

因此，聚集蛋白聚糖的检测对关节软骨状况的监测具有潜在的重大临床意义。目前国内外临床上检测聚集蛋白聚糖的常用方法有酶联免疫吸附法(ELISA)。该方法存在耗时长、检测灵敏度低、背景值高、操作繁琐、易造成假阳性和假阴性结果等问题，并且需要专业人员进行操作，无法满足临床对聚集蛋白聚糖快速准确定量检测的需要。而国内目前检测聚集蛋白聚糖的产品较少，临床上迫切需要建立一种快速、便捷、准确的检测聚集蛋白聚糖的产品或方法。

鉴于此，特提出本发明。

发明内容

本发明的目的在于提供一种检测聚集蛋白聚糖的试纸条、试剂盒及检测方法以解决上述技术问题。

本发明是这样实现的：

本发明提供了一种检测聚集蛋白聚糖的试纸条，其包括基板，基板上依次设置有样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫，结合垫上固定有示踪物标记的抗聚集蛋白聚糖抗体1和示踪物标记的质控线配体1，硝酸纤维素膜上设置有检测线和质控线，检测线上包被有抗聚集蛋白聚糖的抗体2，质控线上包被有能与质控线配体1特异结合的配体2；

检测线上抗聚集蛋白聚糖的抗体2的包被浓度为1-1.2mg/mL；质控线上配体2的包被浓度为1-1.2mg/mL。在上述包被浓度下可以满足聚集蛋白聚糖的快速高灵敏度检出。

本发明提供的检测试纸条通过包被的特异性的抗聚集蛋白聚糖的抗体可以与待检样本中聚集蛋白聚糖(抗原)结合的特性，借助示踪物标记，检测示踪物的信号可以实现与相应聚集蛋白聚糖的快速、准确检出。

与现有技术相比，本发明提供的检测试纸条具有如下优势：制作方便，体积小、便于携带且制备成本较低，克服了酶联免疫吸附法(ELISA)制作复杂、体积大、不便于携带等缺点，可以实现单人份检测。

上述试纸条具有检测灵敏度高，可以满足定量检测的需求。通过免疫分析仪对结果进行判读，可实现检测的自动化进行，减少主观因素的影响，提供便利、快速、可靠、结果可重复的诊断结果。采用上述试纸条适用于各种医疗现场的检测所需。

上述抗聚集蛋白聚糖的抗体1和抗聚集蛋白聚糖的抗体2是针对聚集蛋白聚糖的两种不同表位的抗体。可以根据需要选择市售的对聚集蛋白聚糖具有高亲和力的两种抗体。

本发明提供的检测试纸条可以满足包括不限于如下试样的检测：滑液、血清、或来自软骨外植块培养或软骨细胞培养的条件培养基的样品或含有它们的样品。

在本发明应用较佳的实施方式中，上述示踪物包括不限于胶体金、量子点、荧光微球、上转发光、时间分辨荧光或金磁纳米。示踪物是一种能发光且能与抗聚集蛋白聚糖抗体1和质控线配体1结合的物质。

示踪物发光的强度可利用特定仪器(任何可以检测示踪物的设备或仪器)定量判读或检测。而通过将示踪物与抗聚集蛋白聚糖抗体1以及质控线配体1偶联，从而对形成的偶联复合物以及示踪，在层析作用下，偶联复合物可以与硝酸纤维膜上的抗体2结合，检测线位置的示踪物含量与待测样本中的聚集蛋白聚糖的浓度成正相关，通过与已知不同浓度的聚集蛋白聚糖在试纸条上检测所制定的标准曲线进行比较分析，实现对聚集蛋白聚糖的定量检测。

在本发明应用较佳的实施方式中，上述质控线配体1和配体2为一对能发生特异性结合的生物材料。

在本发明应用较佳的实施方式中，上述质控线配体1选自如下物质中的任意一种：兔抗牛血清白蛋白与二硝基苯酚偶联物、X抗YIgG，其中X为兔、羊、牛、马、猪、鼠、狗、猫、兔、骆驼、驴、鹿、貂、鸡、鸭或鹅，Y为兔、羊、牛、马、猪、鼠、狗、猫、兔、骆驼、驴、鹿、貂、鸡、鸭或鹅，且X和Y不同；配体2选自如下物质中的任意一种：牛血清白蛋白与二硝基苯酚偶联物、YIgG；

优选地，X为羊，Y为兔。

在本发明应用较佳的实施方式中，上述试纸条还包括外壳，外壳具有腔体，试纸条固定设置在腔体内，在外壳上还设有加样孔和观察窗，加样孔对应样品垫设置，这样设置有助于准确加样于样品垫上。而观察窗对应硝酸纤维素的检测线和质控线设置，从而便于检测设备对检测线和质控线的示踪物发光强度进行检测。

在本发明应用较佳的实施方式中，上述样品垫上还设置有红细胞截留膜；

优选地，红细胞截留膜为滤血膜。样品垫用于过滤样本中的红细胞或其他杂质。

当样本中含有红细胞时，红细胞被滤血膜阻挡，可以减少红细胞对检测结果的影响，提升检测的准确度。因而，本发明提供的试纸条可以满足全血样本的检测。

本发明还提供了一种检测聚集蛋白聚糖的试剂盒，其包括上述的检测聚集蛋白聚糖的试纸条。

在一种可选的实施方式中，上述试剂盒还包括校准标准品(聚集蛋白聚糖)、说明书和样本稀释液。

本发明还提供了一种使用上述的检测聚集蛋白聚糖的试纸条进行聚集蛋白聚糖检测的方法，方法为非疾病的诊断目的，其包括：

上样至样品垫上，采用能对示踪物含量进行定量检测的仪器对试纸条的检测线进行检测，根据已知浓度的聚集蛋白聚糖在试纸条上检测所制定的标准曲线，获得聚集蛋白聚糖的定量结果。

在本发明应用较佳的实施方式中，上述聚集蛋白聚糖的含量根据检测线示踪物含量与质控线示踪物含量的比值来计算。

本发明具有以下有益效果：

本发明通过包被的特异性的抗聚集蛋白聚糖的抗体可以与待检样本中聚集蛋白聚糖(抗原)结合的特性，借助于检测示踪物的发光强度可以实现被示踪物标记的相应聚集蛋白聚糖的快速、准确检出。

本发明提供的检测试纸条具有如下优势：制作方便，体积小、便于携带且成本较低，克服了酶联免疫吸附法(ELISA)制作复杂、体积大、不便于携带等缺点，可以实现单人份检测。

上述试纸条具有检测灵敏度高，可以满足定量检测的需求。通过免疫分析仪对结果进行判读，可实现自动化，减少主观因素的影响，提供便利、快速、可靠、结果可重复的诊断结果。本发明提供的试纸条可以满足聚集蛋白聚糖快速准确定量检测的需要。

附图说明

为了更清楚地说明本发明实施例的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，应当理解，以下附图仅示出了本发明的某些实施例，因此不应被看作是对范围的限定，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他相关的附图。

图1为本发明的试纸条的局部截面结构示意图；

图2为本发明的试纸条的整体截面结构示意图；

图3为实验例1绘制的标准曲线图。

附图标记：1-PVC底板；2-样品垫；3-结合垫；4-硝酸纤维素膜；5-吸水垫；6-外壳。

具体实施方式

为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。

以下结合实施例对本发明的特征和性能作进一步的详细描述。

实施例1

本实施例提供了一种检测聚集蛋白聚糖的试纸条及检测方法。试纸条的结构参照图1所示，其包括PVC底板1(即为基板)，PVC底板1上依次设有样品垫2、结合垫3、硝酸纤维素膜4和吸水垫5。具体地，样品垫2搭接在结合垫3上，结合垫3和吸水垫5分别搭设于硝酸纤维素膜4沿层析方向上的两端。

本实施例在结合垫3上固定有量子点标记的抗聚集蛋白聚糖抗体1和量子点标记的兔抗牛血清白蛋白与二硝基苯酚偶联物(兔抗DNP-BSA)，兔抗DNP-BSA的包被量为3μL/cm，抗聚集蛋白聚糖抗体1的包被量为3μL/cm。量子点标记的方法如下：先用EDC·hcl活化量子点表面羧基，然后把活化后的量子点与标记抗体混匀后反应2小时再使用封闭剂进行封闭出来，每个步骤后都是通过离心的方式进行上清液去除，最后保存在保存溶液中。

抗体1来自Hytest，进行脱盐置换缓冲体系等处理后使用。

硝酸纤维素膜4上设有检测线与质控线，检测线上固定有抗聚集蛋白聚糖另一表位的抗体2，抗体2购买自Hytest，质控线固定有牛血清白蛋白与二硝基苯酚偶联物(DNP-BSA)，DNP-BSA原料来源于北京佰桥瑞景生物科技有限公司。检测线上抗聚集蛋白聚糖的抗体2的包被浓度为1mg/mL；质控线上DNP-BSA的包被浓度为1mg/mL。

NC膜包被前先配制包被缓冲液，将分别将抗聚集蛋白聚糖另一表位的抗体2配制为抗体2包被工作液，用于后续的T线划膜；将DNP-BSA配制为质控线(C线)上抗体的包被工作液。

将上述包被工作液通过划膜仪以1uL/cm的包被量及50mm/s的包被速度包被到NC的相应位置上(C线距NC膜下缘1.6cm，C、T线间距为0.6cm)，送入37℃烘箱烘烤12-24h后装入装有干燥剂的铝箔袋密封，备用。

结合垫的制备如下：

1)探针制备：配制探针制备试剂。

(1)取量子点悬液100μl，分散在200μl反应缓冲液(25mM PB缓冲液(pH6.0±0.2))中，混匀。

(2)加入偶联剂EDC(10mg/ml)12μl，恒温(30度)混匀孵育0.5h。15000rpm离心20min，去上清后，将量子点分散在100μl反应缓冲液中，超声分散均匀。

(3)取100μg抗聚集蛋白聚糖抗体1，分散在200μl反应缓冲液中，将活化后的量子点迅速加入到抗体中，混匀；恒温(30度)混匀孵育1h。

(4)12000rpm离心15min，去除游离的抗体。

(5)加封闭液200μl，充分超声(功率10-20％)分散，恒温(30度)混匀孵育2h。

(6)12000rpm离心15min，去上清后，加入保存液200μl，充分超声(功率10-20％)得到量子点标记的抗聚集蛋白聚糖抗体1探针溶液。采用同样的方法获得量子点标记的兔抗DNP-BSA探针溶液，此处不再赘述。

2)配制探针稀释液，用探针稀释液(0.01M PB缓冲液)分别稀释量子点标记的抗聚集蛋白聚糖抗体1探针溶液和量子点标记的兔抗DNP-BSA探针溶液，配制成探针工作液(其中抗聚集蛋白聚糖抗体1探针溶液的稀释度为1:80，兔抗DNP-BSA探针溶液的稀释度为1:200)，然后通过喷金仪以3ul/cm的包被量及50mm/s的包被速度均匀喷到处理好的结合垫上，重复喷一次，送入45℃烘箱烘烤12-24h后装入装有干燥剂的铝箔袋密封，备用。

参照图2所示，试纸条还包括外壳6，外壳6具有腔体，其上设有加样孔和观察窗，PVC底板1、样品垫2、结合垫3、硝酸纤维素膜4和吸水垫5均固定于腔体内。

使用上述试纸条进行聚集蛋白聚糖检测的方法如下：

从加样孔加入待测样本，样本中的聚集蛋白聚糖经过样品垫2后与结合垫3中的量子点标记的抗聚集蛋白聚糖抗体结合并沿着硝酸纤维素膜4向吸水纸5方向进行侧向流动，流经检测线时被抗聚集蛋白聚糖另一表位的抗体结合并停留在检测线上。结合垫中的量子点标记的兔抗牛血清白蛋白与二硝基苯酚偶联物在经样本中的液体的带动下，沿着硝酸纤维素膜4向吸水纸5方向进行侧向流动，流经质控线时被质控线上的牛血清白蛋白与二硝基苯酚偶联物结合并停留在质控线上。

采用能对量子点含量进行定量检测的YD-YG-01型量子点荧光免疫分析仪从观察窗对试纸条进行检测。检测线位置的量子点荧光强度(T)与待测样本中的聚集蛋白聚糖的浓度成正相关，而质控线上形成的量子点标记的兔抗DNP-BSA与DNP-BSA的结合物的量子点荧光强度(C)在同一批次的试纸条上为基本一致的恒定值。采用已知不同浓度的聚集蛋白聚糖在试纸条上检测，计算相应的T/C值并制定校准曲线，检测时利用样本在试纸条上的T/C值并结合校准曲线，实现对聚集蛋白聚糖的定量检测。

实施例2

在本实施例中，示踪物采用胶体金。结合垫3上固定有胶体金标记的抗聚集蛋白聚糖抗体1和胶体金标记的兔抗牛血清白蛋白与二硝基苯酚偶联物(兔抗DNP-BSA)，包被量为3μL/cm。胶体金标记的抗聚集蛋白聚糖抗体1的标记量同实施例1。胶体金标记的方法已非常成熟，在此不再详述。

与实施例1相比，检测仪器为胶体金免疫分析仪。其余检测方法以及试纸条的制备方法同实施例1。

实施例3

在本实施例中，示踪物采用荧光微球。结合垫3上固定有荧光微球标记的抗聚集蛋白聚糖抗体1和荧光微球标记的兔抗牛血清白蛋白与二硝基苯酚偶联物(兔抗DNP-BSA)，包被量为3μL/cm。荧光微球标记的抗聚集蛋白聚糖抗体1的标记量同实施例1。荧光微球标记的方法如下：荧光微球以二甲亚砜溶解，待标记抗体脱盐置换缓冲体系并检测蛋白浓度，按比例将荧光微球与待标记抗体混合，避光振荡混匀2小时，加氢氧化钠溶液中止反应，再用透析膜脱盐，计算标记比率待用。

与实施例1相比，检测仪器为荧光免疫分析仪。其余检测方法以及试纸条的制备方法同实施例1。

实施例4

在本实施例中，示踪物采用金磁纳米。结合垫3上固定有金磁纳米标记的抗聚集蛋白聚糖抗体1和金磁纳米标记的兔抗牛血清白蛋白与二硝基苯酚偶联物(兔抗DNP-BSA)。包被量为3μL/cm。金磁纳米标记的抗聚集蛋白聚糖抗体1的标记量同实施例1。

与实施例1相比，检测仪器为金磁纳米免疫分析仪。其余检测方法以及试纸条的制备方法同实施例1。

实施例5

在本实施例中，示踪物采用上转发光。结合垫3上固定有上转发光标记的抗聚集蛋白聚糖抗体1和上转发光标记的兔抗牛血清白蛋白与二硝基苯酚偶联物(兔抗DNP-BSA)，包被量为3μL/cm。上转发光标记的抗聚集蛋白聚糖抗体1的标记量同实施例1。

与实施例1相比，检测仪器为上转发光免疫分析仪。其余检测方法以及试纸条的制备方法同实施例1。

实施例6

在本实施例中，示踪物采用时间分辨荧光。结合垫3上固定有时间分辨荧光标记的抗聚集蛋白聚糖抗体1和时间分辨荧光标记的兔抗牛血清白蛋白与二硝基苯酚偶联物(兔抗DNP-BSA)，包被量为3μL/cm。时间分辨荧光标记的抗聚集蛋白聚糖抗体1的标记量同实施例1。

与实施例1相比，检测仪器为时间分辨荧光分析仪。其余检测方法以及试纸条的制备方法同实施例1。

实施例7

在本实施例中，示踪物采用量子点。结合垫3上固定有量子点标记的抗聚集蛋白聚糖抗体1和量子点标记的兔抗牛血清白蛋白与二硝基苯酚偶联物(兔抗DNP-BSA)，包被量为3μL/cm。量子点标记的抗聚集蛋白聚糖抗体1的标记量同实施例1。

本实施例的其余部分与实施例1相同。

实施例8

与实施例1相比，区别仅在于，在样品垫中采用或加入滤血膜，当样本中含有红细胞时，红细胞被滤血膜阻挡，可以减少红细胞对检测结果的影响。本发明提供的试纸条适用于全血样本的检测。

实验例1

采用已知不同浓度的聚集蛋白聚糖在试纸条上检测，计算相应的T/C值并制定校准曲线，检测时利用样本在试纸条上的T/C值并结合校准曲线，实现对聚集蛋白聚糖的定量检测。实际定标时，在检测线性范围内选择5至11个不同浓度的聚集蛋白聚糖校准备品采用试纸条进行检测，计算每个浓度校准品的T/C值，以T/C值为横坐标，浓度为纵坐标，对曲线进行二元多项式拟合，计算Y＝aX²+bX+c的a、b、c的值。检测样本时，将样本检测得到的T/C值代入标准曲线公式，即可得到样本中聚集蛋白聚糖的浓度。

使用工作校准品Q0-Q7进行3次重复检测，记录对应T/C值，计算平均值，以工作校准品浓度为纵坐标，以工作校准品对应的T/C值平均值为横坐标进行曲线拟合。

聚集蛋白聚糖定量检测值参照下表所示，由此绘制的标准曲线参照图3所示。

	Q0	Q1	Q2	Q3	Q4	Q5	Q6	Q7
									浓度(ng/mL)	0	0.2	1.0	2.5	5.0	10	25	50
T/C值	0.007	0.018	0.113	0.242	0.496	0.957	2.301	4.211

本实验例的其余部分与实施例1相同，在本实施例中未解释的特征，均采用实施例1的解释。

由上述测试结果可知，分析灵敏度为0.2ng/mL。线性范围：在0.2-50ng/mL浓度范围内，R²＝1,本试剂盒检测线性相关系数可以满足r≥0.990的要求。

实验例2

对每批次试纸条上的质控线上示踪物光学强度的C值进行检测并计算平均值及SD，在检测时对C值设置一范围，高于或低于此范围时，认为试纸条在检测过程中存在问题，仪器予以报警或不报告结果。可以起到质控的效果。

实验例3

本实验例进行稳定性测试。

经过对201001、201101、201102三批(实施例1制备的检测聚集蛋白聚糖的试纸条)产品的实时稳定性(2-8℃、8-30℃)实验，至20个月时，产品各项性能指标均符合要求。

经过对201001、201101、201102三批(实施例1制备的检测聚集蛋白聚糖的试纸条)产品的开封稳定性试验，结果表明，撕开铝箔袋30分钟内对检测结果无影响。

经过对201001、201101、201102三批(实施例1制备的检测聚集蛋白聚糖的试纸条)产品的加速稳定性试验(37℃)，其结果表明，本发明生产的聚集蛋白聚糖测定试剂盒(量子点荧光免疫层析法)的稳定性可以保证有效期为18个月。

经过对201001、201101、201102三批(实施例1制备的检测聚集蛋白聚糖的试纸条)产品的运输稳定性实验(模拟高低温运输)，其结果表明，上述检测聚集蛋白聚糖的试纸条(量子点荧光免疫层析法)能经受住运输过程中遇到温度过高和过低的极端天气的考验。

经过对血清、血浆、全血样本在2-8℃和-20℃保存条件下的稳定性实验，其结果表明，血清、血浆、全血样本可在2-8℃保存5天，血清、血浆样本可在-20℃保存3个月。

实验例4

本实验例对实施例1提供的试纸条进行分析重复性测试和准确度测试。

重复性

同一批次的检测试剂对检测范围内某个浓度的样本进行重复检测10次，计算10次测量结果的平均值(M)和标准差(SD)，根据公式CV＝SD/M×100％得出变异系数。

批间精密度

三个批次的检测试剂对检测范围内某个浓度的样本各重复检测10次，计算30次测量结果的平均值(M)和标准差(SD)，根据公式CV＝SD/M×100％得出变异系数。

准确度

同一批次的检测试剂对检测范围内某个浓度的样本进行重复检测3次。根据公式(1)计算相对偏差B。

B＝(M-T)/T×100％ (1)

式中：B——相对偏差；

M——测量浓度均值；

T——标定浓度。

结果显示，重复性测试变异系数CV值为8.8％；批间精密度CV值为11.3％。准确度测试相对偏差为7.2％。

另外，本实验例还检测了钩状效应：发现实施例1提供的试纸条在3000ng/mL浓度范围内不会产生钩状效应。

以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种检测聚集蛋白聚糖的试纸条，其特征在于，其包括基板，所述基板上依次设置有样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫，所述结合垫上固定有示踪物标记的抗聚集蛋白聚糖抗体1和示踪物标记的质控线配体1，所述硝酸纤维素膜上设置有检测线和质控线，所述检测线上包被有抗聚集蛋白聚糖的抗体2，所述质控线上包被有能与质控线配体1特异结合的配体2；

所述检测线上抗聚集蛋白聚糖的抗体2的包被浓度为1-1.2mg/mL；所述质控线上所述配体2的包被浓度为1-1.2mg/mL。

2.根据权利要求1所述的检测聚集蛋白聚糖的试纸条，其特征在于，所述示踪物是一种能发光且能与所述抗聚集蛋白聚糖抗体1和所述质控线配体1结合的物质。

3.根据权利要求2所述的检测聚集蛋白聚糖的试纸条，其特征在于，所述示踪物为胶体金、量子点、荧光微球、上转发光、时间分辨荧光或金磁纳米。

4.根据权利要求1所述的检测聚集蛋白聚糖的试纸条，其特征在于，所述质控线配体1和所述配体2为一对能发生特异性结合的生物材料。

5.根据权利要求4所述的检测聚集蛋白聚糖的试纸条，其特征在于，所述质控线配体1选自如下物质中的任意一种：兔抗牛血清白蛋白与二硝基苯酚偶联物、X抗YIgG，其中所述X为兔、羊、牛、马、猪、鼠、狗、猫、兔、骆驼、驴、鹿、貂、鸡、鸭或鹅，所述Y为兔、羊、牛、马、猪、鼠、狗、猫、兔、骆驼、驴、鹿、貂、鸡、鸭或鹅，且所述X和Y不同；所述配体2选自如下物质中的任意一种：牛血清白蛋白与二硝基苯酚偶联物、YIgG；

优选地，所述X为羊，所述Y为兔。

6.根据权利要求1所述的检测聚集蛋白聚糖的试纸条，其特征在于，所述试纸条还包括外壳，所述外壳具有腔体，所述试纸条固定设置在所述腔体内，在所述外壳上还设有加样孔和观察窗，所述加样孔对应所述样品垫设置，所述观察窗对应所述硝酸纤维素的检测线和质控线设置。

7.根据权利要求6所述的检测聚集蛋白聚糖的试纸条，其特征在于，所述样品垫上还设置有红细胞截留膜；

优选地，所述红细胞截留膜为滤血膜。

8.一种检测聚集蛋白聚糖的试剂盒，其特征在于，其包括权利要求1-7任一项所述的检测聚集蛋白聚糖的试纸条。

9.一种使用权利要求1-7任一项所述的检测聚集蛋白聚糖的试纸条进行聚集蛋白聚糖检测的方法，所述方法为非疾病的诊断目的，其特征在于，其包括：

上样至样品垫上，采用能对示踪物含量进行定量检测的仪器对试纸条的检测线进行检测，根据已知浓度的聚集蛋白聚糖在试纸条上检测所制定的标准曲线，获得聚集蛋白聚糖的定量结果。

10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，所述聚集蛋白聚糖的含量根据检测线示踪物含量与质控线示踪物含量的比值来计算。

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