CN114196655B

CN114196655B - 耐热性昆布多糖降解酶OUC-SaLam66及其应用

Info

Publication number: CN114196655B
Application number: CN202111568030.9A
Authority: CN
Inventors: 毛相朝; 姜宏; 全永奕; 董悦阳; 邱艳君
Original assignee: Ocean University of China
Current assignee: Ocean University of China
Priority date: 2021-12-21
Filing date: 2021-12-21
Publication date: 2022-11-15
Anticipated expiration: 2041-12-21
Also published as: CN114196655A

Abstract

本发明公开了耐热性昆布多糖降解酶OUC‑SaLam66，氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。编码耐热性昆布多糖降解酶OUC‑SaLam66的基因，核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。所述耐热性昆布多糖降解酶OUC‑SaLam66在降解昆布多糖/制备昆布寡糖中的应用。本发明还公开了包含有耐热性昆布多糖降解酶OUC‑SaLam66的酶制剂。本发明还公开了携带有编码耐热性昆布多糖降解酶OUC‑SaLam66的基因的重组表达载体和重组工程菌。本发明的耐热性昆布多糖降解酶OUC‑SaLam66，可作用昆布多糖底物，终产物昆布寡糖聚合度为2～6，具有较高的耐热性，具有优良的酶学性质和特异性，在酶法制备昆布寡糖中具有重要的工业应用价值以及经济价值。

Description

耐热性昆布多糖降解酶OUC-SaLam66及其应用

技术领域

本发明涉及耐热性昆布多糖降解酶OUC-SaLam66的重组表达、制备及其应用，属于功能酶技术领域。

背景技术

昆布多糖也被称为褐藻淀粉，是来源于褐藻的一种重要海藻多糖，位于细胞内的液泡中。昆布多糖结构主要由D-吡喃葡萄糖残基通过β-1,3-糖苷键连接与部分β-1,6-糖苷键连接的支链共同构成，其末端往往含有一定的硫酸化修饰。昆布多糖属于β-葡聚糖家族，昆布多糖的分支结构决定了其水溶性。昆布多糖具有广泛的生物活性，是一种功能性海藻多糖，具体的活性功能包括抗氧化、抗炎症、抗肿瘤、抗凝血等。

昆布寡糖是由昆布多糖经降解所获得的产物，不仅具有提高机体的免疫力、调节肠道菌群、改善糖尿病症状等一系列重要生理活性，并且相较于昆布多糖在抗肿瘤、抗氧化性方面呈现更优的活性，具有巨大的研究潜力。随着社会不断发展和生活节奏的不断加快，近年来人们的生活水平不断提高，伴随而来的是持续上升的高血压、高血脂患病率和不断低龄化的患病人群分布，这些现象促使人们将眼光放在了天然食品的健康活性成分的研究上。昆布寡糖作为一种能够改善人体健康的活性物质也备受关注，其提取原料昆布资源丰富，产量大，研究潜力巨大。

昆布寡糖成熟的制备技术主要为利用昆布多糖酶酶解昆布多糖以获得昆布寡糖。但在目前，能够对昆布多糖进行酶解作用的昆布多糖降解酶酶活力普遍较差，这不仅导致了昆布多糖降解时的低利用率，也影响了昆布寡糖产出时间长，而这些问题使得昆布寡糖的药物研究开发和生产受到严重阻碍，急需要进行改善。因此，发掘新的昆布多糖降解酶并构筑相应工程菌具有重大意义。

发明内容

针对上述现有技术，本发明提供了一种可以降解昆布多糖的新型降解酶——耐热性昆布多糖降解酶OUC-SaLam66，弥补了现有酶基因库的不足。

本发明是通过以下技术方案实现的：

耐热性昆布多糖降解酶OUC-SaLam66，其氨基酸序列如下所示，如SEQ ID NO.1所示.

所述耐热性具体是指：对该酶进行煮沸实验，结果发现：煮沸1h时酶活性仍有76.9％，煮沸3h时酶活性仍有38.3％，耐热效果显著；该酶在100℃的高温条件下仍然具有较高的降解昆布多糖的活性，可在高温条件(50～100℃)下用于降解昆布多糖。

耐热性昆布多糖降解酶OUC-SaLam66的氨基酸序列(已经去掉前面信号肽对应的氨基酸)(SEQ ID NO.1)：

MTVPSWRNRRARRRPRWLLPLFAAALAVLCATGATAPVPDASPAAGPTAAGGKGVSVTPVDGAGAALADVGASWYYDWSPSTGEIARPEGAEFVPMIWGAGAVNDADLARAKEEGQQLLGFNEPDMAGQADMPVEQALDLWPRLQDTGLRLGAPAVAFGGDTPGGWLDRFMTGAAERGLRVDFIPLHWYGGDFGPAAVDQLRGYLQAVYDRYHKPVWLTEYALTDFSGPTPRYPSEQEQTDFARGSAEMLGQLPFVERYAWFTLSTGTAPTGLYDGTTPNATGLAYREAG。

一种编码上述耐热性昆布多糖降解酶OUC-SaLam66的基因，其核苷酸序列如下所示，如SEQ ID NO.2所示。

编码耐热性昆布多糖降解酶OUC-SaLam66的基因的核苷酸序列(去掉前33个信号肽＝33个氨基酸，即99个碱基)(SEQ ID NO.2)：

5’-ATGACCGTGCCCTCTTGGCGGAACCGCCGTGCGCGGCGCCGTCCGCGGTGGCTGCTGCCCCTGTTCGCCGCGGCCCTCGCCGTGCTCTGCGCCACCGGCGCCACCGCCCCCGTACCGGATGCCTCCCCGGCGGCGGGCCCAACTGCCGCCGGGGGCAAGGGAGTCAGCGTGACGCCGGTCGATGGGGCCGGTGCGGCGCTGGCCGATGTCGGGGCGTCCTGGTACTACGACTGGTCCCCGTCCACCGGTGAGATCGCGCGGCCCGAGGGTGCCGAGTTCGTGCCGATGATCTGGGGCGCGGGCGCGGTCAACGACGCCGATCTGGCCCGCGCCAAGGAGGAGGGGCAGCAACTGCTCGGCTTCAACGAGCCGGACATGGCGGGCCAGGCGGACATGCCGGTGGAGCAGGCGCTCGATCTGTGGCCCCGGCTCCAGGACACCGGGCTGCGGCTCGGCGCGCCCGCCGTCGCCTTCGGCGGGGACACCCCGGGCGGCTGGCTCGACCGCTTCATGACCGGCGCCGCCGAACGCGGGCTGCGCGTCGACTTCATCCCGCTGCACTGGTACGGCGGCGACTTCGGCCCGGCCGCCGTCGACCAGCTGCGCGGCTATCTGCAGGCGGTGTACGACCGCTACCACAAGCCCGTCTGGCTCACCGAGTACGCCCTGACCGACTTCTCCGGACCCACGCCCCGCTACCCGAGCGAGCAGGAGCAGACCGACTTCGCGCGGGGCTCCGCCGAGATGCTGGGGCAACTGCCGTTCGTGGAGCGGTACGCCTGGTTCACACTCTCCACCGGGACCGCACCGACCGGCCTCTACGACGGGACCACACCCAACGCCACCGGTCTCGCCTACCGCGAGGCGGGCTGA-3’。

所述耐热性昆布多糖降解酶OUC-SaLam66在降解昆布多糖/制备昆布寡糖中的应用，在高温条件(100℃)下降解昆布多糖/制备昆布寡糖中的应用。

一种降解昆布多糖/制备昆布寡糖的方法：采用上述耐热性昆布多糖降解酶OUC-SaLam66降解昆布多糖，得到昆布寡糖产物，产物中包含四糖、五糖、六糖，主产物为二糖和三糖。

进一步地，所述降解的条件为：昆布多糖溶液的浓度为1％～3％(质量体积比，单位mg/ml)，优选2％；加酶量为3.022～3.030U，优选3.022U；温度30～100℃，优选45℃或80～100℃或100℃；pH值3.0～10.0，优选4.0；时间30分钟以上，优选1小时以上，更优选1～3小时。优选的，降解条件为：昆布多糖溶液的浓度为2％，加酶量为3.022U，温度45℃，pH值4.0，时间30分钟。优选的，降解条件也可以为：昆布多糖溶液的浓度为2％，加酶量为3.022U，温度80～100℃，pH值4.0，时间1～3小时。尤其是，在100℃条件下可持续降解3小时。

所述编码耐热性昆布多糖降解酶OUC-SaLam66的基因，在制备降解昆布多糖/制备昆布寡糖的酶制剂中的应用。

一种酶制剂，包括上述耐热性昆布多糖降解酶OUC-SaLam66。该酶制剂具有高耐热性。

所述酶制剂在降解昆布多糖/制备昆布寡糖中的应用，在高温条件(100℃)下降解昆布多糖/制备昆布寡糖中的应用。

一种重组表达载体，其携带有上述编码耐热性昆布多糖降解酶OUC-SaLam66的基因。

一种重组工程菌，其基因组中插入有上述编码耐热性昆布多糖降解酶OUC-SaLam66的基因，能表达耐热性昆布多糖降解酶OUC-SaLam66。

所述重组工程菌在制备耐热性昆布多糖降解酶OUC-SaLam66中的应用。

本发明的耐热性昆布多糖降解酶OUC-SaLam66，在45℃和pH＝4条件下，比酶活可达14.529U/mg。可作用于昆布多糖，终产物昆布寡糖聚合度为2～6。本发明的耐热性昆布多糖降解酶OUC-SaLam66，具有优异的耐热性，即可在高温条件下用于降解昆布多糖或制备昆布寡糖，又可耐受高温存储。本发明构建了含昆布多糖降解酶基因的重组载体，实现了在大肠杆菌中的异源表达，同时为该酶的工业化生产和应用提供了良好的基础。表达的昆布多糖降解酶反应条件温和，对昆布多糖有较好的降解效果，降解昆布多糖生成二糖、三糖等，可在制备糖尿病治疗剂，免疫调节剂，肠道菌群调节剂，抗氧化剂等中应用。

本发明使用的各种术语和短语具有本领域技术人员公知的一般含义。

附图说明

图1：本发明的昆布多糖降解酶纯化后的纯酶SDS-PAGE电泳图。

图2：温度变化对相对酶活的影响示意图。

图3：pH变化对相对酶活的影响示意图。

图4：煮沸时间对相对酶活的影响示意图。

图5：本发明的昆布多糖降解酶酶解产物的液相图。

图6：本发明的不同聚合度昆布寡糖降解酶解产物的液相图。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明作进一步的说明。然而，本发明的范围并不限于下述实施例。本领域的专业人员能够理解，在不背离本发明的精神和范围的前提下，可以对本发明进行各种变化和修饰。

下述实施例中所涉及的仪器、试剂、材料等，若无特别说明，均为现有技术中已有的常规仪器、试剂、材料等，可通过正规商业途径获得。下述实施例中所涉及的实验方法，检测方法等，若无特别说明，均为现有技术中已有的常规实验方法，检测方法等。

实施例1耐热性昆布多糖降解酶基因OUC-SaLam66基因的设计

本发明的这个基因为全基因合成所得，是在NCBI中挖掘到的，基因来源为白色链霉菌Streptomyces albus(之所以选择白色链霉菌的原因是：其基因库中发现有许多可能为昆布多糖降解酶的片段)。本发明从白色链霉菌Streptomyces albus中挖掘到了一段有可能编码具有降解昆布多糖酶活性的蛋白的片段，基因库编号AJE84766.1，将其信息下载后设计引物并通过华大公司制备得到了相应的质粒片段，骨架为pET-28a克隆载体，其储存载体为E.coli DH5α感受态细胞。本发明的昆布多糖降解酶基因包含有873个碱基序列，如SEQ ID NO.2所示，编码290个氨基酸，如SEQ ID NO.1所示。根据NCBI的序列比对，该基因片段与已表征的糖苷水解酶第128家族(GH128)酶(基因库编号AEK42318.1)相似度可达68.85％，故可判定该昆布多糖降解酶属于糖苷水解酶第128家族(GH128)。本发明首次将该酶表达、纯化并进行制备相关研究。

PCR反应体系为：KOD Buffer 25μl，dNTP 10μl，引物各1.5μl，模板2μl，KOD酶1μl，无菌水9μl，总体系50ul。

PCR的反应条件为：94℃预变性5min，95℃变性20s，60℃退火30s，72℃延伸60s，反应30个循环，72℃后延伸10min。

实施例2含昆布多糖降解酶基因的质粒提取

将实施例1中获得的E.coli DH5α感受态细胞接种至含有50μg/mL卡那霉素LB液体培养基中，在转速为220rpm的37℃恒温摇床中连续培养8h。收集部分菌液并离心通过提取质粒小盒提取质粒。提取到的质粒保存在-20℃备用。

实施例3含昆布多糖降解酶的重组质粒及工程菌的构建及阳性克隆验证

将实施例2中抽提的质粒转化至宿主E.coli BL21感受态细胞中，构建好的工程菌涂布于LB培养基固体平板(含有50μg/mL卡那霉素)上。待工程菌在卡那霉素抗性平板上长出，得到重组表达菌株。挑取单菌落进行阳性克隆验证，使用KOD的PCR反应体系，引物为pET-28a骨架通用引物，并对验证正确的样品进行测序，命名为pET28a-OUC-Sa-GH128-66。对样品继续在含有50μg/mL卡那霉素LB液体培养基培养并提取部分菌液保菌，保存在-20℃备用。

阳性克隆验证的PCR反应体系为：KOD Buffer 25μl，dNTP 10μl，引物各1.5μl，模板2μl，KOD酶1μl，无菌水9μl，总体系50ul。

实施例4利用大肠杆菌工程菌制备重组昆布多糖降解酶

大肠杆菌重组菌株经在5ml LB液体培养基(含有50μg/mL卡那霉素)中形成种子液后，按1％的接种量接入到含有卡那霉素(50μg/mL)的ZYP-5052自诱导培养基中，20℃，220rpm培养48h，获得已表达昆布多糖降解酶的工程菌。

发酵结束后，4℃条件下8000×g离心10分钟收集菌体后，细胞重悬于50mM的pH＝8.0的Tirs-HCl缓冲液中，然后于冰水浴中超声破碎30min(200W,3s开，3s关)，然后8000×g再次离心10min，收集上清液，即为粗酶液。基于His标签融合的蛋白，粗酶液使用Ni-NTA柱进行亲和层析纯化，使用低浓度的10mM咪唑溶液(500mM NaCl,50mM Tris-HCl)平衡柱子，然后用20mM咪唑溶液(500mM NaCl,50mM Tris-HCl)洗脱结合力弱的杂蛋白，100mM咪唑溶液洗脱目的蛋白，收集此部分的缓冲液洗脱成分，得到纯化的重组昆布多糖降解酶的溶液(酶浓度5.2mg/ml)。经SDS-PAGE检测蛋白纯度和分子量(图1)，结果显示重组蛋白经亲和柱纯化可得电泳纯蛋白，分子量大小约为32.16KDa。之后对获取的酶液进行脱咪唑，将收集到的酶液通过10KDa超滤管在4000×g、4℃条件下离心脱除咪唑，最终获得高浓度酶液。

实施例5重组昆布多糖降解酶比酶活测定

耐热性昆布多糖降解酶OUC-SaLam66活性的标准测定方法为：240μL的反应体系中，包含40μL酶液(稀释20倍)、200μL pH 4的柠檬酸盐缓冲液溶解的2％的昆布多糖，在45℃下反应30min，反应样提取180μL与270μL的DNS试剂混合，并在沸水浴中煮沸5min进行显色，在OD540下检测其吸光度。酶活力定义为在标准条件下每min产生1μM还原糖所需要的酶量。经测定，纯化后的昆布多糖降解酶酶活力可达14.529U/mg。相比而言，来自于产酶溶杆菌Lysobacter enzymogenes中的昆布多糖降解酶GluB纯酶的酶活为0.7U/mg，来自于珊瑚球粘细菌Corallococcus sp.EGB中的多元β-(1，3)-葡聚糖酶(昆布多糖降解酶)纯酶的酶活为10.8U/mg，本发明的昆布多糖降解酶OUC-SaLam66显示出了较好的催化活力。

实施例6测定昆布多糖降解酶的最适反应条件

将实施例4中得到的纯化昆布多糖降解酶液在不同温度和pH下反应，测定温度和pH对酶活力的影响。选取30℃、35℃、40℃、45℃、50℃、60℃、70℃的温度，按照实施例5昆布多糖降解酶比酶活测定方法反应30min测定最适温度。在35℃下，选用pH为3.0～10.0的缓冲液作为酶反应的不同测定pH缓冲液，根据昆布多糖降解酶的酶活力，确定昆布多糖降解酶的最适pH。以最高酶活力为100％，计算在不同条件下的相对酶活力，结果如图2，图3所示，昆布多糖降解酶的最适反应温度为45℃，最适pH为4，磷酸盐缓冲液可能对酶蛋白活性有不良影响。

实施例7测定昆布多糖降解酶的比酶活

将实施例4中得到的纯化昆布多糖降解酶液经稀释20倍后取40μl与200μl的2％的昆布多糖在45℃下反应30min，该酶酶活经还原糖浓度测定计算得到为3.022U(未稀释酶液)，之后对稀释20倍的40μl酶液进行蛋白质测定，得到未稀释酶液蛋白含量为0.208mg，计算得到比酶活为14.529U/mg。

实施例8测定昆布多糖降解酶的降解产物

将实施例4中得到的纯化昆布多糖降解酶液稀释20倍后进行煮沸，分别煮沸10min、20min、40min、1h、2h、3h并测定其酶活性。如图4所示，结果表明1h内的煮沸对该酶影响较小，1h煮沸仅使该酶酶活降低至76.9％，3h煮沸仍有部分酶活，为38.3％，具有显著的耐热性。

一般的蛋白酶在煮沸10min后就会失活，比如：珊瑚球粘细菌Corallococcussp.EGB中的多元β-(1，3)-葡聚糖酶(昆布多糖降解酶)纯酶，在70℃浸泡1h即会几乎完全失活。热纤梭菌(Clostridium thermocellum)的Lic16A昆布多糖降解酶纯酶，在70℃浸泡30min后会失去50％活性。

实施例9测定昆布多糖降解酶的降解产物

将实施例4中纯化所得耐热性昆布多糖降解酶OUC-SaLam66酶液经稀释20倍后与2％的昆布多糖在45℃下反应12h，然后通过高效液相色谱检测产物，并于聚合度为2-6的昆布寡糖标准品做对照。如图5所示，结果表明产物中明显含有二糖、三糖、四糖、五糖、六糖。

实施例10测定昆布多糖降解酶对不同聚合度昆布寡糖的降解产物

将实施例4中纯化所得耐热性昆布多糖降解酶OUC-SaLam66酶液经稀释20倍后与2％的昆布多糖在45℃下反应过夜反应，然后通过高效液相色谱检测产物。如图6所示，结果表明昆布多糖无法降解二糖、三糖，且降解四糖、五糖及六糖的产物主要为二糖和三糖。

实施例11利用重组昆布多糖降解酶制备制剂

利用实施例4制备的重组昆布多糖降解酶酶制剂：将发酵破碎后的溶液纯化后，用缓冲液置换咪唑，获得纯酶液酶制剂。

给本领域技术人员提供上述实施例，以完全公开和描述如何实施和使用所主张的实施方案，而不是用于限制本文公开的范围。对于本领域技术人员而言显而易见的修饰将在所附权利要求的范围内。

序列表

<110> 中国海洋大学

<120> 耐热性昆布多糖降解酶OUC-SaLam66及其应用

<141> 2021-12-16

<160> 2

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 290

<212> PRT

<213> Streptomyces albus

<400> 1

Met Thr Val Pro Ser Trp Arg Asn Arg Arg Ala Arg Arg Arg Pro Arg

1 5 10 15

Trp Leu Leu Pro Leu Phe Ala Ala Ala Leu Ala Val Leu Cys Ala Thr

20 25 30

Gly Ala Thr Ala Pro Val Pro Asp Ala Ser Pro Ala Ala Gly Pro Thr

35 40 45

Ala Ala Gly Gly Lys Gly Val Ser Val Thr Pro Val Asp Gly Ala Gly

50 55 60

Ala Ala Leu Ala Asp Val Gly Ala Ser Trp Tyr Tyr Asp Trp Ser Pro

65 70 75 80

Ser Thr Gly Glu Ile Ala Arg Pro Glu Gly Ala Glu Phe Val Pro Met

85 90 95

Ile Trp Gly Ala Gly Ala Val Asn Asp Ala Asp Leu Ala Arg Ala Lys

100 105 110

Glu Glu Gly Gln Gln Leu Leu Gly Phe Asn Glu Pro Asp Met Ala Gly

115 120 125

Gln Ala Asp Met Pro Val Glu Gln Ala Leu Asp Leu Trp Pro Arg Leu

130 135 140

Gln Asp Thr Gly Leu Arg Leu Gly Ala Pro Ala Val Ala Phe Gly Gly

145 150 155 160

Asp Thr Pro Gly Gly Trp Leu Asp Arg Phe Met Thr Gly Ala Ala Glu

165 170 175

Arg Gly Leu Arg Val Asp Phe Ile Pro Leu His Trp Tyr Gly Gly Asp

180 185 190

Phe Gly Pro Ala Ala Val Asp Gln Leu Arg Gly Tyr Leu Gln Ala Val

195 200 205

Tyr Asp Arg Tyr His Lys Pro Val Trp Leu Thr Glu Tyr Ala Leu Thr

210 215 220

Asp Phe Ser Gly Pro Thr Pro Arg Tyr Pro Ser Glu Gln Glu Gln Thr

225 230 235 240

Asp Phe Ala Arg Gly Ser Ala Glu Met Leu Gly Gln Leu Pro Phe Val

245 250 255

Glu Arg Tyr Ala Trp Phe Thr Leu Ser Thr Gly Thr Ala Pro Thr Gly

260 265 270

Leu Tyr Asp Gly Thr Thr Pro Asn Ala Thr Gly Leu Ala Tyr Arg Glu

275 280 285

Ala Gly

290

<210> 2

<211> 873

<212> DNA

<213> Streptomyces albus

<400> 2

atgaccgtgc cctcttggcg gaaccgccgt gcgcggcgcc gtccgcggtg gctgctgccc 60

ctgttcgccg cggccctcgc cgtgctctgc gccaccggcg ccaccgcccc cgtaccggat 120

gcctccccgg cggcgggccc aactgccgcc gggggcaagg gagtcagcgt gacgccggtc 180

gatggggccg gtgcggcgct ggccgatgtc ggggcgtcct ggtactacga ctggtccccg 240

tccaccggtg agatcgcgcg gcccgagggt gccgagttcg tgccgatgat ctggggcgcg 300

ggcgcggtca acgacgccga tctggcccgc gccaaggagg aggggcagca actgctcggc 360

ttcaacgagc cggacatggc gggccaggcg gacatgccgg tggagcaggc gctcgatctg 420

tggccccggc tccaggacac cgggctgcgg ctcggcgcgc ccgccgtcgc cttcggcggg 480

gacaccccgg gcggctggct cgaccgcttc atgaccggcg ccgccgaacg cgggctgcgc 540

gtcgacttca tcccgctgca ctggtacggc ggcgacttcg gcccggccgc cgtcgaccag 600

ctgcgcggct atctgcaggc ggtgtacgac cgctaccaca agcccgtctg gctcaccgag 660

tacgccctga ccgacttctc cggacccacg ccccgctacc cgagcgagca ggagcagacc 720

gacttcgcgc ggggctccgc cgagatgctg gggcaactgc cgttcgtgga gcggtacgcc 780

tggttcacac tctccaccgg gaccgcaccg accggcctct acgacgggac cacacccaac 840

gccaccggtc tcgcctaccg cgaggcgggc tga 873

Claims

1.耐热性昆布多糖降解酶OUC-SaLam66在降解昆布多糖/制备昆布寡糖中的应用，所述耐热性昆布多糖降解酶OUC-SaLam66的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。

2.一种降解昆布多糖/制备昆布寡糖的方法，其特征在于：采用耐热性昆布多糖降解酶OUC-SaLam66降解昆布多糖，得到昆布寡糖；所述耐热性昆布多糖降解酶OUC-SaLam66的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。

3.根据权利要求2所述的降解昆布多糖/制备昆布寡糖的方法，其特征在于，所述降解的条件为：昆布多糖的浓度为1%～3%，加酶量为3.022～3.030 U，温度30～100℃，pH值3.0～10.0，时间30分钟以上。

4.根据权利要求3所述的降解昆布多糖/制备昆布寡糖的方法，其特征在于，所述降解的条件为：温度45℃，pH值4.0。

5.根据权利要求3所述的降解昆布多糖/制备昆布寡糖的方法，其特征在于，所述降解的条件为：温度80～100℃，pH值4.0，时间1～3小时。

6.根据权利要求3所述的降解昆布多糖/制备昆布寡糖的方法，其特征在于，所述降解的条件为：在100℃条件下持续降解3小时。