CN114181865A - 一种对茄雷尔氏菌有高效拮抗作用的芽孢菌及其应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种对茄雷尔氏菌有高效拮抗作用的芽孢菌及其应用，属于菌株研究技术领域，以番茄为寄主植物，检测菌株编号为HNU24的芽孢菌对茄雷尔氏菌的防治效果，在接种茄雷尔氏菌前，将番茄幼苗从土中轻轻取出后，在HNU24的菌悬液中浸泡5分钟后，再将其置于具强致病力的茄雷尔氏菌菌悬液中浸泡5min，然后将幼苗再移栽回无菌土中，于28℃温室条件下每天观察并统计番茄青枯病的发病情况。该对茄雷尔氏菌有高效拮抗作用的芽孢菌及其应用，结果表明，接种茄雷尔氏菌前经过蘸取生防菌HNU24，青枯病的发病率可下降50％左右，从而保证了该芽孢菌对茄雷尔氏菌具有高效拮抗作用。
Description
技术领域
本发明属于菌株研究技术领域，具体为一种对茄雷尔氏菌有高效拮抗作用的芽孢菌及其应用。
背景技术
茄雷尔氏菌即茄科雷尔氏菌，是一种引发植物细菌性青枯病的毁灭性细菌病害，茄雷尔氏菌的分布范围广泛，在我国南方各省市均有严重发生。茄雷尔氏菌的寄主广泛，可以侵染44个科数百种植物，对农业造成了重大的经济损失。
为此，我们选用了一种芽孢菌，并检测其对茄雷尔氏菌是否有高效拮抗作用，来挽回茄雷尔氏菌对农业造成的经济损失。
发明内容
针对现有技术的不足，本发明提供了一种对茄雷尔氏菌有高效拮抗作用的芽孢菌及其应用，以解决上述背景技术中提出的问题。
为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种对茄雷尔氏菌有高效拮抗作用的芽孢菌，该芽孢菌平板拮抗的方法包括以下步骤：
S1、将融化后的TTC培养基降至一定温度后将一定量茄雷尔氏菌与培养基一起混合；
S2、在每一个平皿上均倒入25ml混合后的培养基；
S3、待平板彻底凝固后在平板上打孔；
S4、在每个孔中加入20μL的芽孢菌生防菌液，生防菌液的菌株编号为 HNU24；
S5、将平板放置于28℃恒温培养箱进行培养；
S6、培养后设置进行3次重复测量，测定抑菌圈的直径；
S7、经过多次平板拮抗实验，观察HNU24对茄雷尔氏菌的拮抗效果；
S8、对HNU24使用16S rDNA通用引物进行基因测序。
进一步优化本技术方案，所述S3中，打孔工作采用打孔器进行，所述打孔器的打孔直径为7mm。
进一步优化本技术方案，所述S5中，恒温培养箱的培养时间为48h。
进一步优化本技术方案，所述S8中，将测序结果置于NCBI数据库中进行序列比对，HNU24属于Bacillus sp.。
一种对茄雷尔氏菌有高效拮抗作用的芽孢菌的应用，选用上述的一种对茄雷尔氏菌有高效拮抗作用的芽孢菌，以番茄为寄主植物，检测菌株编号为 HNU24的芽孢菌对茄雷尔氏菌的防治效果，在接种茄雷尔氏菌前，将番茄幼苗从土中轻轻取出后，在HNU24的菌悬液中浸泡5分钟后，再将其置于具强致病力的茄雷尔氏菌菌悬液中浸泡5min，然后将幼苗再移栽回无菌土中，于28℃温室条件下每天观察并统计番茄青枯病的发病情况。
进一步优化本技术方案，所述的番茄幼苗为出苗后30天的番茄苗。
与现有技术相比，本发明提供了一种对茄雷尔氏菌有高效拮抗作用的芽孢菌及其应用，具备以下有益效果：
该对茄雷尔氏菌有高效拮抗作用的芽孢菌及其应用，通过多次的平板拮抗实验验证以及以番茄为寄主植物，检测HNU24对茄雷尔氏菌的防治效果，结果表明，接种茄雷尔氏菌前经过蘸取生防菌HNU24，青枯病的发病率可下降 50％左右，从而保证了该芽孢菌对茄雷尔氏菌具有高效拮抗作用。
附图说明
图1为本发明提出的一种对茄雷尔氏菌有高效拮抗作用的芽孢菌的拮抗茄雷尔氏菌效果图；
图2为本发明提出的一种对茄雷尔氏菌有高效拮抗作用的芽孢菌应用的无菌水处理的效果图；
图3为本发明提出的一种对茄雷尔氏菌有高效拮抗作用的芽孢菌应用的只接种茄雷尔氏菌的效果图；
图4为本发明提出的一种对茄雷尔氏菌有高效拮抗作用的芽孢菌应用的接种茄雷尔氏菌前蘸取HNU24的效果图。
具体实施方式
下面将结合本发明的实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例一：
一种对茄雷尔氏菌有高效拮抗作用的芽孢菌，该芽孢菌平板拮抗的方法包括以下步骤：
S1、将融化后的TTC培养基降至一定温度后将一定量茄雷尔氏菌与培养基一起混合；
S2、在每一个平皿上均倒入25ml混合后的培养基；
S3、待平板彻底凝固后在平板上打孔；
S4、在每个孔中加入20μL的芽孢菌生防菌液，生防菌液的菌株编号为 HNU24；
S5、将平板放置于28℃恒温培养箱进行培养；
S6、培养后设置进行3次重复测量，测定抑菌圈的直径；
S7、经过多次平板拮抗实验，观察HNU24对茄雷尔氏菌的拮抗效果，如图1所示，图1为分离菌株平板上生防菌株拮抗茄雷尔氏菌效果图(48h)，图中所示透明圈即为该菌株对青枯菌的拮抗圈，拮抗直径达到20mm，其拮抗茄雷尔氏菌的能力稳定；
S8、对HNU24使用16S rDNA通用引物进行基因测序。
进一步优化本技术方案，所述S3中，打孔工作采用打孔器进行，所述打孔器的打孔直径为7mm。
进一步优化本技术方案，所述S5中，恒温培养箱的培养时间为48h。
进一步优化本技术方案，所述S8中，将测序结果置于NCBI数据库中进行序列比对，HNU24属于Bacillus sp.。
其中，在S8中，提取HNU24的基因组DNA，使用16S rDNA通用引物27F (5’-AGAGTTTGATCMTGGCTCAG-3’)和1492R(5’-TACCTTGTTACGACTT-3’)进行PCR反应。总体系为50μL：
PCR反应程序为：
PCR产物经琼脂糖电泳检测后，将有清晰扩增目的条带的产物进行测序分析。
一种对茄雷尔氏菌有高效拮抗作用的芽孢菌的应用，选用上述的一种对茄雷尔氏菌有高效拮抗作用的芽孢菌，以番茄为寄主植物，检测菌株编号为 HNU24的芽孢菌对茄雷尔氏菌的防治效果，在接种茄雷尔氏菌前，将番茄幼苗从土中轻轻取出后，在HNU24的菌悬液中浸泡5分钟后，再将其置于具强致病力的茄雷尔氏菌菌悬液中浸泡5min，然后将幼苗再移栽回无菌土中，于28℃温室条件下每天观察并统计番茄青枯病的发病情况。
进一步优化本技术方案，所述的番茄幼苗为出苗后30天的番茄苗。
如图2-4所示，结果表明，接种茄雷尔氏菌前经过蘸取生防菌HNU24，青枯病的发病率可下降50％左右。
实施例二：
一种对茄雷尔氏菌有高效拮抗作用的芽孢菌，该芽孢菌平板拮抗的方法包括以下步骤：
S1、将融化后的TTC培养基降至一定温度后将一定量茄雷尔氏菌与培养基一起混合；
S2、在每一个平皿上均倒入50ml混合后的培养基；
S3、待平板彻底凝固后在平板上打孔；
S4、在每个孔中加入40μL的芽孢菌生防菌液，生防菌液的菌株编号为 HNU24；
S5、将平板放置于28℃恒温培养箱进行培养；
S6、培养后设置进行3次重复测量，测定抑菌圈的直径；
S7、经过多次平板拮抗实验，观察HNU24对茄雷尔氏菌的拮抗效果，如图1所示，图1为分离菌株平板上生防菌株拮抗茄雷尔氏菌效果图(48h)，图中所示透明圈即为该菌株对青枯菌的拮抗圈，拮抗直径达到20mm，其拮抗茄雷尔氏菌的能力稳定；
S8、对HNU24使用16S rDNA通用引物进行基因测序。
进一步优化本技术方案，所述S3中，打孔工作采用打孔器进行，所述打孔器的打孔直径为7mm。
进一步优化本技术方案，所述S5中，恒温培养箱的培养时间为48h。
进一步优化本技术方案，所述S8中，将测序结果置于NCBI数据库中进行序列比对，HNU24属于Bacillus sp.。
其中，在S8中，提取HNU24的基因组DNA，使用16S rDNA通用引物27F (5’-AGAGTTTGATCMTGGCTCAG-3’)和1492R(5’-TACCTTGTTACGACTT-3’)进行PCR反应。总体系为50μL：
PCR反应程序为：
PCR产物经琼脂糖电泳检测后，将有清晰扩增目的条带的产物进行测序分析。
一种对茄雷尔氏菌有高效拮抗作用的芽孢菌的应用，选用上述的一种对茄雷尔氏菌有高效拮抗作用的芽孢菌，以番茄为寄主植物，检测菌株编号为 HNU24的芽孢菌对茄雷尔氏菌的防治效果，在接种茄雷尔氏菌前，将番茄幼苗从土中轻轻取出后，在HNU24的菌悬液中浸泡5分钟后，再将其置于具强致病力的茄雷尔氏菌菌悬液中浸泡5min，然后将幼苗再移栽回无菌土中，于28℃温室条件下每天观察并统计番茄青枯病的发病情况。
进一步优化本技术方案，所述的番茄幼苗为出苗后30天的番茄苗。
如图2-4所示，结果表明，接种茄雷尔氏菌前经过蘸取生防菌HNU24，青枯病的发病率可下降50％左右。
本发明的有益效果是：该对茄雷尔氏菌有高效拮抗作用的芽孢菌及其应用，通过多次的平板拮抗实验验证以及以番茄为寄主植物，检测HNU24对茄雷尔氏菌的防治效果，结果表明，接种茄雷尔氏菌前经过蘸取生防菌HNU24，青枯病的发病率可下降50％左右，从而保证了该芽孢菌对茄雷尔氏菌具有高效拮抗作用。
尽管已经示出和描述了本发明的实施例，对于本领域的普通技术人员而言，可以理解在不脱离本发明的原理和精神的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由所附权利要求及其等同物限定。
Claims (6)
1.一种对茄雷尔氏菌有高效拮抗作用的芽孢菌，其特征在于，该芽孢菌平板拮抗的方法包括以下步骤：
S1、将融化后的TTC培养基降至一定温度后将一定量茄雷尔氏菌与培养基一起混合；
S2、在每一个平皿上均倒入25ml混合后的培养基；
S3、待平板彻底凝固后在平板上打孔；
S4、在每个孔中加入20μL的芽孢菌生防菌液，生防菌液的菌株编号为HNU24；
S5、将平板放置于28℃恒温培养箱进行培养；
S6、培养后设置进行3次重复测量，测定抑菌圈的直径；
S7、经过多次平板拮抗实验，观察HNU24对茄雷尔氏菌的拮抗效果；
S8、对HNU24使用16S rDNA通用引物进行基因测序。
2.根据权利要求1所述的一种对茄雷尔氏菌有高效拮抗作用的芽孢菌，其特征在于，所述S3中，打孔工作采用打孔器进行，所述打孔器的打孔直径为7mm。
3.根据权利要求1所述的一种对茄雷尔氏菌有高效拮抗作用的芽孢菌，其特征在于，所述S5中，恒温培养箱的培养时间为48h。
4.根据权利要求1所述的一种对茄雷尔氏菌有高效拮抗作用的芽孢菌，其特征在于，所述S8中，将测序结果置于NCBI数据库中进行序列比对，HNU24属于Bacillus sp.。
5.一种对茄雷尔氏菌有高效拮抗作用的芽孢菌的应用，选用权利要求1-4所述的一种对茄雷尔氏菌有高效拮抗作用的芽孢菌，其特征在于，以番茄为寄主植物，检测菌株编号为HNU24的芽孢菌对茄雷尔氏菌的防治效果，在接种茄雷尔氏菌前，将番茄幼苗从土中轻轻取出后，在HNU24的菌悬液中浸泡5分钟后，再将其置于具强致病力的茄雷尔氏菌菌悬液中浸泡5min，然后将幼苗再移栽回无菌土中，于28℃温室条件下每天观察并统计番茄青枯病的发病情况。
6.根据权利要求1所述的一种对茄雷尔氏菌有高效拮抗作用的芽孢菌的应用，其特征在于，所述的番茄幼苗为出苗后30天的番茄苗。
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