CN110616166A

CN110616166A - 一种用于防治茄子青枯病的多粘类芽孢杆菌、应用及茄子栽培方法

Info

Publication number: CN110616166A
Application number: CN201910630594.7A
Authority: CN
Inventors: 张敬泽; 陈婉卿
Original assignee: Zhejiang University ZJU
Current assignee: Zhejiang University ZJU
Priority date: 2019-07-12
Filing date: 2019-07-12
Publication date: 2019-12-27

Abstract

本发明公开了一种用于防治茄子青枯病的多粘类芽孢杆菌、应用及茄子栽培方法。一种用于防治茄子青枯病的多粘类芽孢杆菌，命名为Paenibacillus polymyxa IAM5，保藏号为：CCTCC M2019335。本发明筛选到的多粘类芽孢杆菌Paenibacillus polymyxa IAM5对茄科雷尔氏菌具有高效拮抗作用，能用于茄科雷尔氏菌引起的茄子青枯病的防治，盆栽试验防效达86.95％以上，且植物发病后期，仍具有明显的治疗效果，这一特性说明该菌株作为生物农药应用具有很大的潜力。

Description

一种用于防治茄子青枯病的多粘类芽孢杆菌、应用及茄子栽培方法

技术领域

本发明涉及微生物种质资源的开发与利用领域，特别是涉及一种用于防治茄子青枯病的多粘类芽孢杆菌、应用及茄子栽培方法。

背景技术

茄子青枯病是由茄科雷尔氏菌(Ralstonia solanacearum)引起的，是茄科作物中最具破坏性的病原菌之一。该病原菌寄主范围广，可为害50多个科的200多种植物，其中包括马铃薯、番茄、茄子、辣椒、生姜等主要经济作物。病原菌从植物根部或茎部的伤口或者未受伤的次生根的根冠部位侵入，进入导管系统，破坏植物的维管束系统，并在侵染过程中分泌细胞壁降解酶，导致维管束中空、溃烂，引起作物萎蔫死亡给农业生产带来严重损失。病田土壤、病株残体、带菌肥料、多年生杂草都能带菌传病，病菌随雨水、流水传播，因此茄子青枯病传播蔓延速度快。

由于茄子青枯病的病原菌寄主范围广、种群多样性，造成目前对青枯病防治尚无有效的防控方法。田间管理、轮作、培育抗病品种和转基因抗病植物的等方面的研究仅取得了有限的成功；由于是维管束病害，化学防治(如杀菌剂)的有效性常常不理想，而且生产上大量使用化学药剂不仅对人类健康存在潜在的危害，也对食品和环境的安全以及对非靶标生物造成严重影响，并导致病原菌抗药性的产生。

随着经济的发展和人类生活质量的提高，对农产品安全和农业的可持续发展越来越关注，这也促使了生物防治的发展。几年来国内外大量研究表明，利用拮抗微生物研发生防制剂，具有广阔的前景。一方面，微生物种群丰富，而且可通过生物工程技术大幅度提高目标活性物质的产量，易于实现工业化生产；另一方面，微生物制剂本身来源于自然界，易于降解，对环境友好、安全，已有大量的生防产品应用于植物病害防治。

在病害防治中，研究集中于芽孢杆菌研发和利用。这是因为芽孢杆菌能分泌多种拮抗化合物，能有效抑制多种植物病原菌。由于这类细菌拥有芽孢，它们对辐射、热、干燥、极端 pH值和一些有毒化学物品等有很强的抵抗能力，在一定条件下，内生芽孢在休眠状态下可以保持活力数年至数十年之久；同时，内生芽孢繁殖速度快、营养要求简单和易于在植物根圈定殖的特点，因而利用这些细菌研发的生防制剂已被广泛应用于植物病害的防治方面。我国芽孢杆菌BI30制成的泥炭制剂对生姜青枯病以及枯草芽孢杆菌TG26对烟草青枯病防效达 90％以上。多粘类芽孢杆菌属芽孢杆菌类，其拮抗机制主要是分泌的拮抗化合物、溶菌酶等。然而，不同的种类，甚至同种的不同来源株系间的拮抗效果差异很大。

虽然国内外都已有多粘类芽孢杆菌制剂，但由于菌株的多样性，不同多粘类芽孢杆菌菌株产生的抗菌谱、抗菌活性和防治不同病原菌的拮抗活性是不同的。因此，针对不同病原菌筛选高效菌株仍是现在乃至今后相对长的一段时间内各国科研工作关注的方向。

发明内容

本发明针对现有技术中存在的不足，提供了一种可用于防治茄子青枯病的多粘类芽孢杆菌，该筛选到的菌株对茄科雷尔氏菌具有高效拮抗作用，能用于茄科雷尔氏菌引起的茄子青枯病的防治。

一种用于防治茄子青枯病的多粘类芽孢杆菌，命名为Paenibacillus polymyxaIAM5，该菌株已于2019年5月8日保藏于位于中国武汉武汉大学的中国典型培养物保藏中心，保藏号为： CCTCC NO: M2019335。

本发明又提供了所述多粘类芽孢杆菌在拮抗茄科雷尔氏菌中的应用。

本发明又提供了所述多粘类芽孢杆菌在防治茄子青枯病中的应用。具体应用时，在茄子四叶期，将包含所述多粘类芽孢杆菌的菌剂浇灌于茄子幼苗的根部。具体应用时的步骤包括种子处理和苗期防治。种子处理阶段，将茄子种子放入2％次氯酸钠溶液中灭菌2min，用无菌水冲洗3次，浸于制备好的菌液中8小时，在超净工作台中风干。然后将种子放在用无菌水浸湿的滤纸上，室温培养5天，进行播种。苗期阶段防治，茄子4～5叶期后，将菌液制备到合适浓度约10⁸CFU/mL，浇在苗床上，7天后接种茄科雷尔氏菌，接种35天后，防效在 86.95％以上。

本发明还提供了一种用于防治茄子青枯病的菌剂，包含所述多粘类芽孢杆菌。所述的菌剂，其中，所述多粘类芽孢杆菌的浓度不少于10⁸CFU/ml。

本发明还提供了一种茄子栽培方法，包括以下步骤：在茄子四叶期，将包含所述多粘类芽孢杆菌的菌剂浇灌于茄子幼苗的根部。

本发明筛选到的多粘类芽孢杆菌Paenibacillus polymyxa IAM5对茄科雷尔氏菌具有高效拮抗作用，能用于茄科雷尔氏菌引起的茄子青枯病的防治，盆栽试验防效达86.95％以上，且植物发病后期，仍具有明显的治疗效果，这一特性说明该菌株作为生物农药应用具有很大的潜力。

附图说明

图1为菌株的电镜结果图，其中A为IMA4，B为IMA7，C为IMA11，D-E为IMA3， F为IMA5，G为IMA1，H为IMA2，I为IMA6，J为IMA8，K为IMA9，L为IMA10，图1A、B、C、D、F、I、J和K的比例尺为0.5μm，图1G、H和L的比例尺为1.5μm。

图2为16S rDNA基因序列构建的系统发育树。

图3为gyrA基因序列构建的系统发育树。

图4为rpoB基因序列构建的系统发育树。

图5为IAM3MALDI-TOF-MS脂肽分析图谱。

图6为IAM5MALDI-TOF-MS脂肽分析图谱。

图7为IAM4、IAM7和IAM11MALDI-TOF-MS脂肽分析图谱。

图8为IAM2、IAM6、IAM8和IAM10MALDI-TOF-MS脂肽分析图谱。

图9为IAM2、IAM6、IAM8和IAM10MALDI-TOF-MS脂肽分析图谱。

图10为IAM2、IAM6、IAM8和IAM10MALDI-TOF-MS脂肽显著的系列峰图谱。

图11为IAM6和IAM8MALDI-TOF-MS脂肽强度较低的系列峰图谱。

图12为IAM1和IAM9MALDI-TOF-MS脂肽分析图谱。

具体实施方式

实施例1

一、菌株分离和筛选。

供试土样于2017年6月20日采自浙江省杭州市不同的连作茄子田地，随机采集根系附近土样于无菌袋中，密封后于4℃冰箱中保存。

LB平板筛选土壤中的生防细菌。取适量(1g)土样于无菌水中配制成土壤悬浮液，系列稀释至10^-4～10^-5。将配制的土壤悬浮液均匀涂布在LB平板上，28℃下生长24小时。根据菌落的形状、颜色、大小、规则或不规则、凸或平等性状选择不同的菌落，每个菌落至少纯化 3次，加入20％的甘油保存于-40℃冰箱。

10个土壤样品共筛选出245个菌株。

二、生防菌株对细菌生长的抑制作用。

将初筛得到的候选菌株接种于液体LB培养液，在型号为ZWY-211B的摇床中180rpm， 30℃培养12小时，获得菌液。相似地，将病原菌茄科雷尔氏菌也接种于液体LB培养液，在上述相同条件下培养。取0.5ml茄科雷尔氏菌菌液倒入LB培养基平板中，用玻璃涂布棒涂匀。将灭菌后的小滤纸片放入候选菌株菌液中浸湿，再放到平板中间。30℃培养48小时后，观察有无抑菌圈形成，若有抑菌圈形成，测量并记录抑菌圈直径。

筛选共得到11个候选的菌株，分别命名为IAM1、IAM2、IAM3、IAM4、IAM5、IAM6、IAM7、IAM8、IAM9、IAM10和IAM11。11个菌株对茄科雷尔氏菌生长的抑制效果如表1 所示。其中菌株IAM5的效果最显著，但与菌株IMA2、IAM3、IAM6、IAM8、IAM10无显著差异。

表1生防菌株对细菌生长的抑制作用

实施例2

一、菌株的鉴定。

对筛选出的11个有生防效果的菌株全部进行鉴定。

1、形态学鉴定

将11个株系放在固体LB培养基上生长，通过扫描电镜观察其形态特征，结果如图1显示。株系IMA1、IMA2、IMA6、IMA8(图1G、H、I和J)和IMA9(图1K)的菌落呈乳白色，形状为圆形，表面平滑，边缘起伏。扫描电镜可观察显示，菌体形态为杆状，菌体大小为0.7～0.9×1.8～3.0μm，革兰氏染色阳性，周鞭鞭毛。株系IMA3的菌落呈浅黄绿色，其菌体形态为杆状(图1D-E)，大小为0.8～0.95×2.7～4.0μm，革兰氏染色阴性，有极鞭鞭毛。株系 IMA4(图1A)、IMA7(图1B)的菌落呈乳白色，表面平滑，其菌体形态为方头杆状，菌体大小为0.9～1.1×3～4μm，革兰氏染色阳性，周生鞭毛。IMA11(图1C)周生鞭毛。株系IMA5 (图1F)的菌体形态为杆状，菌体大小为0.56～0.6×2.7～3.0μm，革兰氏染色阳性，周生鞭毛。

2、16S rDNA序列分析

将菌株于NA培养基(NaCl 5g/L，牛肉膏3g/L，蛋白胨10g/L，琼脂20g/L，pH＝7.0～7.5) 中划线培养，30℃培养20～24小时后，挑取单菌落；采用16S通用引物27F和1492R进行的 PCR扩增，获得大约1400bp的电泳条带，加入溴化乙锭染色后，用1％琼脂糖凝胶在紫外光下观察扩增产物，并提交给生工生物技术有限公司(中国上海)进行双向测序。将所测定的 16S rDNA序列与GenBank数据库中序列进行比较分析，确定其分类地位。用MEGA7.0软件通过邻近连接法构建系统发育树，再利用Bootstrap值(1000)对系统发育树进行演化分析。

16S rDNA测序BLAST搜索和比较分析显示，株系IAM3与Pseudomonas putida和P.monteilii(GenBank号：KC207085.1和JN688162.1)一致性为100％；株系IAM5与多粘类芽孢杆菌(Paenibacillus polymyxa)序列(genBank号：MH794236.1)一致性为100％；株系IAM4、IAM7和IAM11的BLAST比对结果完全一致，与B.cereus、B.toyonensis、B.thuringiensis、和B.weihenstephanensis的一致性为99.5～100％，与B.cereus类群非常相似；IAM1、IAM2、IAM6、IAM8、IAM9和IAM10菌株对B.siamensis、B.velezensis和B.amyloliquefaciens的一致性为99.2～100％，与B.amyloliquefaciens类组具有高的特异性(图2)。

3、脂肪酸测定

脂肪酸测定采用全自动微生物鉴定系统(美国Agilent 6890型气相色谱系统)。将菌株放于TSA平板上28℃培养20小时，刮取部分菌体，送至浙江大学农生环学部大型仪器共享平台进行脂肪酸测定。鉴定结果通过专化的微生物鉴定系统软件—按照TSBA6 6.0库微生物鉴定系统的程序，采用Sherlock系统对脂肪酸组成进行分析。把分析结果与数据库中储存的标准菌种的脂肪酸信息进行比对。FAME鉴定结果匹配程度遵循Buyer等的原则：相似性系数 <0.2，结果不可用；相似性系数≥0.2，鉴定到属；相似性系数≥0.5，鉴定到种。

11个菌株的细胞脂肪酸谱如表2所示。株系IAM3的细胞脂肪酸谱主要的指标有10：0 3OH(4.52)，12：O(2.27)，12：0 2OH(4.71)，12：0 3OH(3.32)，16：O(24.58)和17： 0cyclo(1.35)，被鉴定为恶臭假单胞菌(Pseudomonas putida)(相似指数达0.86)；株系IAM5 的细胞脂肪酸主要由iso-C15:0，anteisoC15:0，C16:0，iso-C16:0和anteiso-C17:0组成，被鉴定为多粘类芽孢杆菌(Paenibacillus polymyxa)(相似指数达0.867)；在IAM4、IAM7和IAM11 株系的提取五种，除了有C16:0iso、C15:0anteiso等支链脂肪酸和C17:1w10c、C17:1w5c等不饱和脂肪酸外，主要脂肪酸为C15:0iso、C17:0iso、C13:0iso(表2)三个分离株的脂肪酸组成峰的峰值与蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)相近，区别于B.toyonensis和B.weihenstephanensis，IAM4、IAM7和IAM11株系均被鉴定为蜡样芽孢杆菌(Bacilluscereus) (IAM4、IAM7和IAM11的相似指数分别为0.689、0.639和0.676)；IAM1、IAM2、IAM6、IAM8、IAM9和IAM10这6个株系的细胞脂肪酸由13-甲基十四酸(15:0iso)、12-甲基十四酸(anteiso-C15:0)、14-甲基十六酸(anteoc17:0)和十六酸(16:0)组成，但与B.siamensis、B.velezensis和B.amyloliquefaciens相似度小于5.0。

表2菌株的脂肪酸组成

*数据没有显示：10:0 3OH(4.52％)、12:0 2OH(4.71％)、12:1 3OH(0.60％)、12:03OH(3.32％)和17:0cyclo(1.35％)。

4、gyrA和rpoB基因序列的系统发育分析

由于IAM1、IAM2、IAM6、IAM8、IAM9和IAM10这6个株系的脂肪酸分析相似指数比较低(<0.5)，于是对其的gyrA和rpoB基因序列进一步进行分析。利用25个分类单元邻接法构建gyrA基因系统发育树，将6个分离株与参考株系SQR9(B.velezensis)和BPD1(B.amyloliquefaciens)归属到同一个分枝上，具有97％的bootstrap支持值(图3)。但它们与其姐妹群中的B.amyloliquefaciens、B.velezensis和B.siamensis群区分开。

同样，如图4所示，rpoB的系统发育树显示六个测试分离株(IAM1，IAM2，IAM6，IAM8， IAM9和IAM10)与参考菌株UMAF6639(B.amyloliquefaciens)分钟同一个分枝上，具有 63％的bootstrap支持值。但他们与B.amyloliquefaciens，B.velezensis和B.amyloliquefaciens 种区分开。依据gyrA和rpoB基因分析，六个测试分离株(IAM1，IAM2，IAM6，IAM8， IAM9和IAM10)被鉴定为B.amyloliquefaciens组。其中，IAM5菌株被鉴定为多粘类芽孢杆菌(Paenibacillus polymyxa)，该菌株已于2019年5月8日保藏于位于中国武汉武汉大学的中国典型培养物保藏中心，保藏号为：CCTCC NO:M2019335。

实施例3

一、菌株脂肽化合物的检测

脂肽测定采用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)对11株菌株进行鉴定。将菌株接种NA培养基上在30℃下培养48h后，挑取单菌落溶解于含有基质溶液的离心管(2.0ml)中。基质液含有10mg/mL氰基-4-羟基肉桂酸，70％水，30％乙腈和0.1％三氟醋酸(TFA)。溶液被混匀后在5000r/min下离心2min，然后吸取1μL溶液样品滴加在 MALDI-TOF MTP 384靶盘(Bruker Daltonik GmbH，Leipzig，德国)上，用配置智能光束激光器的ultrafleXtreme^TM MALDI-TOF质谱仪(Bruker公司，德国)记录数据。测量是在反射操作模式和离子源加速电压20kV条件下进行的。质谱贮藏在0.1～2kD间的低质量范围区。依据文献报道和测定的脂肽系列质谱峰，分析不同株系间产生的脂肽化合物及其对茄科雷尔氏菌可能的拮抗机制(表3)。

P.putida IAM3(图5)脂肽的主峰位置在syringafctin A(m/z:1105.602)，强度较低的波峰位置显示nunamycin(m/z 1138.592)，putisolvin II(m/z:1436.7)，penta-acyllipid A(m/z: 1562.846和1693.901)和xantholysin(m/z:1763.976,1802.856)的存在。

P.polymyxa株系IAM5(图6)有一个显著的系列质谱峰，质荷比(m/z)范围在860～1050 间(m/z:883.626、897.661、935.629、954.715、961.686、968.733、982.751和999.641)，它们属于杀镰孢菌素(fusaricidin)然而，株系IAM5还具有另外两个明显的系列质谱峰，质荷比(m/z)范围在1140～1200(m/z:1191.871和1207.836)和1580～1680间(m/z:1640.024、1641.985 和1655.997)，它们分别属于多粘菌素(polymyxin)和tridecaptin。

属于Bacillus cereus的三个株系IAM4、IAM7和IAM11(图7)，未检测到脂肽。

属于B.amyloliquefaciens种组的四个株系IAM2、IAM6、IAM8和IAM10(图8和9)，在m/z1050～1200位置有一个显著的系列峰(图10)，属于iturin(m/z:1065.808、1079.831、1095.816and1109.507)。IAM6和IAM8(图11)还有一个强度较低的系列峰，属于fengycin(m/z:1463.773、1477.787、1485.773、1499.785和1515.769)，但在IAM1和IAM9未检测到该脂肽(图12)。所有的峰及其对应的化合物都列在表3中详细说明。

表3菌株的脂肽分析结果

*开环脂肽。

实施例4

一、菌株对茄子青枯病的温室盆栽试验

依据种的鉴定、活性试验和拮抗化合物的结果，选用具有代表性的五个菌株进行试验，盆栽试验共设置5个处理，1个对照。每个试验组30个植株作一个处理，每个处理3个重复。对照组只接茄科雷尔氏菌，设30个处理(菌株)。茄子选用一种易感品种(杭州农业科学院蔬菜研究所生产的浙菜-3)，进行接种试验育苗是在温室中进行的。将5个菌株和茄科雷尔氏菌菌株E406(Li,B.,Su,T.,Yu,R.R.,Tao,Z.Y.,Wu,Z.Y.,Algam,S.A.E.,Xie, G.L.,Wang,Y.L.,Sun G.C.2010.Inhibitory activity of Paenibacillus macerans andPaenibacillus polymyxa against Ralstonia solanacearum.AJMR,4:2048-2054)接种于液体LB 培养液，在型号为ZWY-211B的摇床中180rpm，30℃培养12小时，获得菌液(约10⁸CFU/ml)。将茄子种子放入2％次氯酸钠溶液中灭菌2min，用无菌水冲洗3次，浸于5个菌株的菌液中8小时，在超净工作台中风干。然后将种子放在用无菌水浸湿的滤纸上，室温培养5天。发芽后的种子播种于含有未消毒农家土壤的混合土(泥炭∶蛭石∶农家土壤，质量比例为2∶1∶1)的穴盘中，移入相对湿度为70～90％、温度为25～30℃的温室。等茄子到四叶期，将5个菌株的菌液(约10⁸CFU/ml)，浇灌于试验组幼苗根部(10ml/株)。菌液接种一周后，采用蘸根法接种茄科雷尔氏菌，即制备茄科雷尔氏菌(约10⁸CFU/ml)，然后将菌液处理的植株和对照组的植株切根处理后在茄科雷尔氏菌菌液中进行蘸根处理(1小时)，处理后植株在相同条件下生长。连续一个月，每天观察这些幼苗，并统计其发病率和严重度和防效。

疾病严重程度的评估采用0～4级评分量表(Lebeau et al.2013)，即：

0＝无症状植物，

1＝一片枯萎的叶子

2＝不到50％枯萎的叶子

3＝超过50％枯萎的叶子

4＝完全枯萎的叶子(死亡的植物)

此外，为了评价不同拮抗菌株对茄子植株生物量的影响，在病害评价后，还测定了不同处理的茄子植株长度和鲜重、干重。

病率(％)＝发病株数/总株数×100

严重度(％)＝Σ(级值×株数)/(4×总株数)×100

防治效果(％)＝(对照病情指数-处理病情指数)/对照病情指数×100。

接种试验表明，它们能延缓叶片症状，显著降低病害发生率和严重程度。

接种试验结果显示，接种从茄子上分离出的茄科雷尔氏菌(R.solanacearum)E406菌株的对照组在接种后10天出现叶片症状，而浇灌试验菌液的处理组植株无任何症状；16天后，同时接种IMA4+E406的植株出现叶片症状；25天后，共接种IMA8+E406、IMA2+E406、IMA3+E406和IMA5+E406的植株出现叶片症状，但与IMA3+E406和IMA5+E406相比，接种IMA8+E406和IMA2+E406的植株症状更为严重。

接种35天后计算疾病发生率、严重程度及防治效果(表4)。不同处理中，接种IMA5+E406 分别降低了66.66％和50.0％的发病率和严重度，防治效果提高了86.95％，但与接种IMA2+E406、IMA3+E406和IMA8+E406无显著差异(P<0.05)。经比较，接种IMA4+E406 发病率高(46.66％)，严重程度(29.16％)，防治效果最低(39.12％)。

表4接种35天后，五种拮抗菌株对茄子青枯病的抑制效果

接种菌株	发病率(％)	严重度(％)	防治效果(％)
				IMA2+E406	30.0±0.0c	23.33±2.6c	60.86c
IMA3+E406	20.0±0.0d	15.0±1.3d	73.91b
				IMA4+E406	46.66±4.7b	29.16±1.6b	39.12d
IMA5+E406	10.00±0.0e	9.16±0.7e	86.95a
				IMA8+E406	33.33±4.7c	25.0±1.8c	56.51c
E406	76.66±4.7a	64.16±1.6a	-

同列数据在P<0.05水平上具有显著差异。

表5拮抗菌株在病害发生过程中对植物生物量的影响

接种菌株

IMA2+E406

IMA3+E406

IMA4+E406

IMA5+E406

IMA8+E406

E406

苗长(cm)

11.8±0.01

12.7±0.01

10.51±0.01

13.79±0.0

11.78±0.0

9.33

GPE*(％)

26.46c

36.11b

12.64d

44.24a

26.32c

-

苗鲜重(g)

7.80±0.09

8.90±0.02

5.50±0.11

9.01±0.01

7.76±0.02

4.7

GPE(％)

67.78b

89.53a

17.01c

91.69a

68.50b

-

苗干重(g)

0.73±0.0

0.89±0.02

0.50±0.01

0.99±0.01

0.72±0.01

0.4

GPE(％)

84.08c

122.50b

25.00d

147.33a

80.00c

-

根长(cm)

9.11±0.03

10.01±0.22

8.00±0.27

10.49±0.01

9.03±0.01

6.2

GPE(％)

47.03c

61.61b

29.02d

69.19a

45.64c

-

根鲜重(g)

0.83±0.01

0.90±0.01

0.67±0.01

0.98±0.01

0.81±0.0

0.52

GPE(％)

59.61c

73.07b

28.84d

88.45a

56.72c

-

根干重(g)

0.13±0.0

0.16±0.0

0.10±0.0

0.17±0.0

0.13±0.0

0.09

GPE(％)

49.99c

77.77b

11.11d

94.42a

44.44c

-

促生长效率(GPE％)＝[处理-对照]/对照]×100％。E406：病原菌株茄科雷尔氏菌(solanacearum Ralstonia)。*苗长、苗鲜重、苗干重、根长、根鲜重、根干重。

二、菌株对茄子植株的促生作用

为了评价不同株系的菌株对植物生长促进(PGP)能力，在温室条件下进行了PGP试验。种子和幼苗的处理与盆栽试验的方法相同，以无菌水接种为对照，每个处理(30株)重复3次。处理后的植株在相同条件下生长，每天观察这些幼苗，45天后测定幼苗长度、根系长度及其鲜重和干重(表6)。

表6拮抗菌株在温室条件下对茄子生长的影响

*苗长、苗鲜重、苗干重、根长、根鲜重、根干重。数据以30个重复的平均值±标准误差表示，每个重复包含一个植株。促生长效率(GPE％)＝[处理-对照]/对照×100％。各列间差异按LSD检验(p<0.05)。

另外，为了揭示五种试验菌体在病害发生过程中对植物生物量的影响，对不同处理间的株长、鲜重和干重进行了评价。

统计拮抗株在病害发生过程中对植物生物量的影响(表5)，经菌株IAM5处理的植株在苗长、苗鲜重、苗干重、根长、根干重方面都优于其他菌株，说明IAM5菌株不但有抗菌效果，还有较好的促进植物生长的作用。

拮抗菌株在温室条件下对茄子生长的影响(表6)，不难看出经菌株IAM5处理的植株对健康植株也有较好的促生长作用。

Claims

1.一种用于防治茄子青枯病的多粘类芽孢杆菌，其特征在于，命名为Paenibacilluspolymyxa IAM5，保藏号为：CCTCC M2019335。

2.如权利要求1所述多粘类芽孢杆菌在拮抗茄科雷尔氏菌中的应用。

3.如权利要求1所述多粘类芽孢杆菌在防治茄子青枯病中的应用。

4.如权利要求3所述的应用，其特征在于，在茄子四叶期，将包含所述多粘类芽孢杆菌的菌剂浇灌于茄子幼苗的根部。

5.一种用于防治茄子青枯病的菌剂，其特征在于，包含如权利要求1所述多粘类芽孢杆菌。

6.如权利要求5所述的菌剂，其特征在于，所述多粘类芽孢杆菌的浓度不少于10⁸CFU/ml。

7.一种茄子栽培方法，其特征在于，包括以下步骤：在茄子四叶期，将包含如权利要求1所述多粘类芽孢杆菌的菌剂浇灌于茄子幼苗的根部。