CN114174300A - 二氢嘧啶衍生物及其在治疗hbv感染或hbv诱发疾病中的用途 - Google Patents

二氢嘧啶衍生物及其在治疗hbv感染或hbv诱发疾病中的用途 Download PDF

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Abstract

本文提供了可用于治疗或预防HBV感染或HBV诱发疾病，更特别地HBV慢性感染或由HBV慢性感染诱发的疾病的二氢嘧啶衍生物，及其制药或医学应用。

Description

二氢嘧啶衍生物及其在治疗HBV感染或HBV诱发疾病中的用途
背景技术
慢性乙型肝炎病毒(HBV)感染是重大的全球健康问题，影响超过5％的世界人口(全球超过3.5亿人，美国有125万人)。
尽管有预防性HBV疫苗可供使用，但慢性HBV感染的负担仍然是重大的全球医学问题，原因是发展中国家大多数地区的治疗选择并不理想，而且新感染率持续不变。
目前的治疗不能治愈，并仅限于两类药剂(干扰素α和核苷类似物/病毒聚合酶抑制剂)；抗药性、疗效低和耐受性问题限制了其影响。HBV的治愈率低至少部分归因于用单一抗病毒剂难以完全遏制病毒产生的事实。然而，持续遏制HBV DNA减缓了肝脏疾病的进展并有助于预防肝细胞癌。目前HBV感染患者的治疗目标是将血清HBV DNA降至低水平或不可检测水平，并最终减少或预防肝硬化和肝细胞癌的发展。
HBV衣壳蛋白在病毒的生命周期中起着重要的作用。HBV衣壳/核心蛋白形成亚稳病毒颗粒或蛋白质壳，其在细胞间传代期间保护病毒基因组，并还在病毒复制过程中发挥核心作用，包括基因组衣壳化、基因组复制和病毒体形态发生和外出。
衣壳结构还对环境提示作出反应，以便在病毒进入后允许不包被。
一致地，已经发现衣壳组装和拆卸的适当时机、适当的衣壳稳定性和核心蛋白的功能对于病毒感染性是至关重要的。
关于在治疗HBV感染中的二氢嘧啶衍生物的背景参考文献包括WO 2014/029193、CN 103664899、CN 103664925、和CN 103664897。
本领域需要可增加对病毒产生的抑制并可治疗、改善或预防HBV感染的治疗剂。将此类治疗剂作为单一疗法或与其他HBV治疗或辅助治疗组合施用至HBV感染患者将导致显著降低的病毒负荷、改善的预后、减少的疾病进展和增强的血清转化率。
发明内容
在一方面，提供了具有式(I)的化合物
Figure BDA0003486886640000021
包括其氘化的、立体异构或互变异构形式，其中：
R1、R2和R3各自独立地选自由以下组成的组：H、卤代、OH和C1-3烷基；
R4选自由以下组成的组：噻唑基、咪唑基、噁唑基和吡啶基，其各自可以任选地被各自独立地选自甲基或卤代的一个或多个取代基取代；
R5是C1-4烷基；
R6和R7各自独立地选自由H和卤代组成的组；
R8和R9各自独立地选自由H和卤代组成的组；或者R8和R9连同它们所附接的碳原子一起形成C(＝O)；
X选自由以下组成的组：CHR10a、C(＝O)和NR10b；
Y选自由以下组成的组：CHR11a、C(＝O)和NR11b；
Z选自由以下组成的组：CHR12a、C(＝O)、NR12b和O；其中
R10a、R10b、R11a、R11b、R12a和R12b各自独立地选自由以下组成的组：H；-CN；-C1-9烷基-COORx；-Cy-COORx；-C1-6烷基-Cy-COORx；-Cy-C1-6烷基-COORx；-C(＝O)-C1-6烷基-COORx；-Cy-OH；-C1-6烷基-O-C1-6烷基-COORx；-C(＝O)-NRaRb；和-S(＝O)2-NRc-C(＝O)-C1-6烷基；其中
在每种情况下，C1-6烷基和C1-9烷基可以任选地被各自独立地选自卤代和羟基的一个或多个取代基取代；
Rx选自H和-C1-6烷基；特别地，H和-C1-4烷基；
Ra、Rb和Rc各自独立地选自H和-C1-4烷基；并且
Cy表示任选地被C1-4烷基取代基取代的C3-7环烷基；
条件是CR8R9、Y或Z中高达两个可以是C(＝O)，条件是CR8R9和X、或X和Y、或Y和Z不同时是C(＝O)；
或其药学上可接受的盐或溶剂化物。
在另一个方面，本文提供了药物组合物，该药物组合物包含至少一种具有式(I)的化合物或其药学上可接受的盐以及药学上可接受的载体。
在另一个方面，本文提供了药物组合物，该药物组合物包含至少一种披露的化合物以及药学上可接受的载体。在另一个方面，本文提供了治疗有需要的个体的HBV感染的方法，该方法包括向该个体施用治疗有效量的具有式(I)的化合物或其药学上可接受的盐。在另一个方面，本文提供了本文所述的任何化合物、或本发明的药物组合物，用做药物。在另外的方面，本文提供了本文所述的任何化合物或本发明的药物组合物，用于在有需要的哺乳动物的HBV感染或HBV诱发的疾病的预防或治疗中使用。
在又另外的方面，本文提供了包含第一化合物和第二化合物的产品，该第一化合物和第二化合物作为组合制剂用于在有需要的哺乳动物的HBV感染或HBV诱发的疾病的预防或治疗中同时、分开或顺序使用，其中所述第一化合物不同于所述第二化合物，其中所述第一化合物是如本文所述的具有(I)的化合物或根据本发明的药物组合物，并且其中所述第二化合物是HBV抑制剂。所述第二HBV抑制剂可以选自：
-具有HBV复制抑制活性的细胞因子，
-具有免疫检查点调节活性的抗体，
-具有HBV衣壳组装抑制活性或具有TLR激动剂活性的取代的嘧啶，
-抗逆转录病毒核苷类似物，以及
-其组合。
在另一个方面，本文提供了抑制或减少有需要的个体的含HBV DNA颗粒或含HBVRNA颗粒的形成或存在的方法，该方法包括向该个体施用治疗有效量的具有式(I)的化合物或其药学上可接受的盐。
在实施例中，本文提供的任何方法可以进一步包括向该个体施用选自下组的至少一种另外的治疗剂，该组由以下组成：HBV聚合酶抑制剂、免疫调节剂、干扰素、病毒进入抑制剂、病毒成熟抑制剂、衣壳组装调节剂、逆转录酶抑制剂、亲环蛋白/TNF抑制剂、TLR激动剂、HBV疫苗及其任何组合。
在仍另外的方面，提供了用于产生具有式(I)的化合物的方法，其中，该方法包括：
使具有式(VI)的化合物
Figure BDA0003486886640000031
其中R1-R5是如在式(I)中所定义的并且LG表示合适的离去基团(如例如溴)；与具有式(VII)的化合物
Figure BDA0003486886640000041
其中R6-R9是如在式(I)中所定义的；
在合适的亲核取代条件下(例如，在合适的碱如例如三乙醇胺的存在下)反应。
具体实施方式
本文提供了可用于治疗和预防受试者的HBV感染的化合物，例如具有式(I)的化合物，或其药学上可接受的盐。
不受限于任何特定的作用机制，认为这些化合物调节或破坏HBV复制或感染性颗粒产生所必需的HBV组装和其他HBV核心蛋白功能和/或可以破坏HBV衣壳组装，产生具有大大降低的感染性或复制能力的空衣壳。换句话说，本文提供的化合物可以充当衣壳组装调节剂。
仍然需要具有HBV抗病毒活性与有利的性质平衡(例如有效的抗病毒活性、有利的代谢性质、组织分布、安全性和药物特性)、并适合在人中使用的化合物。因此，本发明的目的是提供克服这些问题中的至少一些问题的化合物。披露的化合物可以调节(例如，加速、延迟、抑制、破坏或减少)正常病毒衣壳组装或拆卸，结合衣壳或改变细胞多蛋白和前体的代谢。当衣壳蛋白成熟时或在病毒感染期间可以进行调节。披露的化合物可以用于调节HBVcccDNA的活性或特性、或HBV RNA颗粒从感染细胞内产生或释放的方法中。
在一个实施例中，本文所述的化合物可以适用于单一疗法，并针对自然或天然HBV株和对当前已知药物具有抗性的HBV株可以有效的。在另一个实施例中，本文所述的化合物可以适用于在组合疗法中使用。
定义
下文列出了用于描述本发明的各个术语的定义。除非另外限定于具体的情况，无论单独的还是作为一个更大的基团的一部分，这些定义适用于整个说明书和权利要求书中使用的术语。
除非另外定义，本文使用的所有技术和科学术语通常具有与本发明所属领域的普通技术人员通常理解的含义相同的含义。通常，本文使用的命名法和细胞培养、分子遗传学、有机化学和肽化学中的实验室程序是本领域众所周知且常用的那些。
如本文所用，冠词“一个/种(a和an)”是指一个/种或多于一个/种(即，至少一个/种)该冠词的语法宾语。举例来说，“元素(an element)”意指一个元素或多于一个元素。此外，术语“包括(including)”以及其他形式如“包括(include)”、“包括(includes)”和“包括(included)”的使用不是限制性的。
如本文所用，术语“约”将是本领域普通技术人员所理解的，并将在一定程度上根据其使用的上下文而变化。如本文所用，当涉及如量、持续时间等的可测量值时，术语“约”意在涵盖相对于指定值的±20％或±10％(包括±5％、±1％和±0.1％)的变化，因为此类变化适于执行披露的方法。
如本文所用，术语“衣壳组装调节剂”是指破坏或加速或抑制或阻碍或延迟或减少或修饰正常衣壳组装(例如，在成熟期间)或正常衣壳拆卸(例如，在感染期间)或扰动衣壳稳定性从而诱导异常的衣壳形态和功能的化合物。在一个实施例中，衣壳组装调节剂加速衣壳组装或拆卸，从而诱导异常的衣壳形态。在另一个实施例中，衣壳组装调节剂与主要的衣壳组装蛋白(CA)相互作用(例如在活性位点与其结合，在变构位点与其结合，修改或阻碍折叠等)，从而破坏衣壳组装或拆卸。在又另一个实施例中，衣壳组装调节剂引起CA的结构或功能(例如，CA组装、拆卸、与底物结合、折叠成合适构象等的能力)的扰动，这减弱了病毒感染性或对病毒是致命的。
如本文所用，术语“治疗(treatment或treating)”被定义为向患者应用或施用治疗剂，即披露的化合物(单独地或与另一种药剂组合)，或向来自患者的分离的组织或细胞系应用或施用治疗剂(例如，用于诊断或离体应用)，该患者患有HBV感染、HBV感染的症状或患上HBV感染的可能性，目的是治愈、痊愈、减轻、缓解、改变、补救、改善、改进或影响HBV感染、HBV感染的症状或患上HBV感染的可能性。基于从药物基因组学领域获得的知识，此类治疗可以特别定制或修改。
如本文所用，术语“预防(prevent或prevention)”意指没有障碍或疾病发展(如果没有发生障碍或疾病)、或没有进一步的障碍或疾病发展(如果已经患上了该障碍或疾病)。还考虑到了预防与障碍或疾病相关的一些或全部症状的能力。
如本文所用，术语“患者”、“个体”或“受试者”是指人或非人哺乳动物。非人哺乳动物包括例如家畜以及宠物，如绵羊、牛、猪、犬、猫和鼠哺乳动物。优选地，患者、受试者或个体是人。
如本文所用，术语“有效量”、“药学有效量”和“治疗有效量”是指无毒但足够提供期望的生物学结果的药剂量。该结果可以是疾病征象、症状或原因的减少或减轻，或任何其他期望的生物学系统变化。本领域普通技术人员使用常规实验可以确定任何个体情况下的适当治疗量。
如本文所用，术语“药学上可接受的”是指不消除化合物的生物学活性或特性且相对无毒的材料(如载体或稀释剂)，即该材料可以向个体施用而不会引起不希望的生物学效应或以有害的方式与包含该材料的组合物的任何组分相互作用。
如本文所用，术语“药学上可接受的盐”是指披露的化合物的衍生物，其中通过将现存的酸或碱部分转化为其盐形式而对母体化合物进行修饰。药学上可接受的盐的实例包括但不限于碱性残基如胺的矿物酸盐或有机酸盐；酸性残基如羧酸的碱金属盐或有机盐；等。本发明的药学上可接受的盐包括例如从无毒的无机酸或有机酸形成的母体化合物的常规无毒盐。本发明的药学上可接受的盐可以通过常规化学方法从含有碱性或酸性部分的母体化合物合成。通常，此类盐可以通过使这些化合物的游离酸或碱形式与化学计算量的适当的碱或酸在水中或在有机溶剂中或者在两者的混合物中反应来制备；通常，非水性介质像醚、乙酸乙酯、乙醇、异丙醇或乙腈是优选的。合适的盐的清单见于Remington'sPharmaceutical Sciences[雷明顿药物科学],第18版,Mack Publishing Company[马克出版公司],伊斯顿,宾夕法尼亚州,1990,第1445页和Journal of Pharmaceutical Science[药物科学杂志],66,1-19(1977)中，将其各自通过援引以其全文并入本文。
如本文所用，术语“组合物”或“药物组合物”是指可用于本发明的至少一种化合物与药学上可接受的载体的混合物。药物组合物有助于将化合物向患者或受试者施用。本领域存在多种施用化合物的技术，包括但不限于静脉内、口服、气雾剂、肠胃外、眼部、肺部和局部施用。
如本文所用，术语“药学上可接受的载体”意指药学上可接受的材料、组合物或载体，如液体或固体填充剂、稳定剂、分散剂、悬浮剂、稀释剂、赋形剂、增稠剂、溶剂或囊封材料，这些材料涉及将可用于本发明的化合物在患者体内载运或输送或载运或输送到患者体内，使得它可以发挥预期功能。典型地，此类构建体从身体的一个器官或部分载运或输送到身体的另一个器官或部分。每种载体在与配制品的其他成分(包括可用于本发明的化合物)相容且对患者无害的意义上必须是“可接受的”。可充当药学上可接受的载体的材料的一些实例包括：糖，如乳糖、葡萄糖和蔗糖；淀粉，如玉米淀粉和马铃薯淀粉；纤维素及其衍生物，如羧甲基纤维素钠、乙基纤维素和乙酸纤维素；粉状黄蓍胶；麦芽；明胶；滑石；赋形剂，如可可脂和栓剂蜡；油，如花生油、棉籽油、红花油、芝麻油、橄榄油、玉米油和大豆油；二醇，如丙二醇；多元醇，如甘油、山梨醇、甘露醇和聚乙二醇；酯，如油酸乙酯和月桂酸乙酯；琼脂；缓冲剂，如氢氧化镁和氢氧化铝；表面活性剂；海藻酸；无热原水；等渗盐水；林格氏溶液；乙醇；磷酸盐缓冲溶液；以及药物配制品中使用的其他无毒相容物质。
如本文所用，“药学上可接受的载体”还包括与可用于本发明的化合物的活性相容并对于患者来说在生理上是可接受的任何和所有的涂层剂、抗细菌剂和抗真菌剂以及吸收延迟剂等。补充活性化合物也可以掺入组合物中。“药学上可接受的载体”可以进一步包括可用于本发明的化合物的药学上可接受的盐。可以包括在用于实践本发明的药物组合物中的其他另外成分在本领域是已知的，并例如描述于Remington's PharmaceuticalSciences[雷明顿药物科学](Genaro编辑,Mack Publishing Co.[马克出版公司],1990,伊斯顿,宾夕法尼亚州)，将其通过援引并入本文。
如本文所用，除非另有说明，否则术语“烷基”通过其本身或作为另一个取代基的部分意指具有指定的碳原子数的直链或支链烃(即，C1-3烷基意指具有一至三个碳原子的烷基、C1-4烷基意指具有一至四个碳原子的烷基并且包括直链和支链、C1-6烷基意指具有一至六个碳原子的烷基并且包括直链和支链、C1-C9烷基意指具有一至九个碳原子的烷基并且包括直链和支链)。实例包括甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、叔丁基。烷基的实施例包括但不限于C1-9烷基、C1-6烷基、C1-4烷基。
如本文所用，除非另有说明，否则术语“卤基”或“卤素”单独或作为另一个取代基的一部分意指氟、氯、溴或碘原子，优选地氟、氯或溴，更优选地氟或氯。
如本文所用，单独使用或作为另一个基团的部分的符号“C3-7环烷基”定义了具有从3至7个碳原子的饱和环烃，如环丙基、环丁基、环戊基、环己基和环庚基。特别地，C3-7环烷基基团是环丙基、环丁基、环戊基、环己基和环庚基。如本文所用，符号“Cy”定义任选地被C1-4烷基取代基取代的，如本文所定义的C3-7环烷基基团。当Cy用作另一个基团的部分时，将理解该符号将是指作为单基团或双基团键合的提供稳定结构的饱和环烃。
每当术语“取代”用于本发明时，除非另外指示或从上下文中是明确的，否则意在表明在使用“取代”的表述中指示的原子或基团上的一个或多个氢(特别地是1至3个氢、优选地1或2个氢、更优选地1个氢)被来自所指示群组的选择项替换，条件是未超过正常的化合价，并且该取代导致了化学稳定的化合物(即足够稳健以承受从反应混合物分离至有用程度的纯度并且配制成治疗剂的化合物)。
当一个部分上存在两个或更多个取代基时，除非另外指示或从上下文中是明确的，否则这些取代基可以替换同一原子上的氢，或者这些取代基可以替换该部分中不同原子上的氢原子。
如本文所用，术语“选自……”(例如，“R1选自A、B和C”)应理解为等同于术语“选自由以下组成的组：……”(例如，“R1选自由以下组成的组：A、B和C”)。
在实施例中，本发明涉及如前文所定义的具有式(I)的化合物，其中：
R1、R2和R3各自独立地选自由以下组成的组：H、卤代和C1-3烷基；
R4选自由以下组成的组：噻唑基、咪唑基、噁唑基和吡啶基，其各自可以任选地被各自独立地选自甲基或卤代的一个或多个取代基取代；
R5是C1-4烷基；
R6和R7各自独立地选自由H和卤代组成的组；
R8和R9各自独立地选自由H和卤代组成的组；或者R8和R9连同它们所附接的碳原子一起形成C(＝O)；
X选自由以下组成的组：CHR10a、C(＝O)和NR10b；
Y选自由以下组成的组：CHR11a、C(＝O)和NR11b；
Z选自由以下组成的组：CHR12a 2、C(＝O)、NR12b和O；其中
R10a、R10b、R11a、R11b、R12a、和R12b各自独立地选自由以下组成的组：H；-C1-9烷基-COORx；-Cy-COORx；-C1-6烷基-Cy-COORx；-C(＝O)-C1-6烷基-COORx；-Cy-OH；和-C1-6烷基-O-C1-6烷基-COORx；其中
在每种情况下，C1-6烷基可以任选地被各自独立地选自卤代和羟基的一个或多个取代基取代；
Rx选自H和-C1-6烷基；特别地，H和-C1-4烷基；并且
Cy表示任选地被C1-4烷基取代基取代的C3-7环烷基。
在实施例中，本发明涉及如前文所定义的具有式(I)的化合物，其中
R1、R2和R3各自独立地选自由以下组成的组：H、卤代和C1-3烷基；
R4选自由以下组成的组：噻唑基、咪唑基、和噁唑基，其各自可以任选地被一个甲基取代基取代；
R5是C1-4烷基；
R6和R7各自独立地选自由H和卤代组成的组；
R8和R9各自独立地选自由H和卤代组成的组；或者R8和R9连同它们所附接的碳原子一起形成C(＝O)；
X选自由以下组成的组：CH2、C(＝O)和NR10b；
Y选自由以下组成的组：CH2、C(＝O)和NR11b；
Z选自由以下组成的组：CH2、C(＝O)、NR12b和O；其中
R10b、R11b和R12b各自独立地选自由以下组成的组：H；-C1-9烷基-COORx；-Cy-COORx；-C1-6烷基-Cy-COORx；和-C(＝O)-C1-6烷基-COORx；其中
Cy表示C3-7环烷基。
在特别的实施例中，R1、R2和R3各自独立地选自由以下组成的组：H、卤代、OH、和甲基；并且其余的变量是如本文所定义的。在另一实施例中，R1是氢或氟；R2是氢或氟；R3选自氯和甲基；并且其余的变量是如本文所定义的。
在特别的实施例中，R4选自由以下组成的组：噻唑基、咪唑基、噁唑基和吡啶基，其各自可以任选地被一个甲基取代基取代；并且其余的变量是如本文所定义的。在另外的实施例中，R4选自由以下组成的组：噻唑基、咪唑基、噁唑基，其各自可以任选地被一个甲基取代基取代；并且其余的变量是如本文所定义的。在另外的实施例中，R4选自由以下组成的组：噻唑-2-基、1-甲基-咪唑-2-基和5-甲基-噁唑-4-基；更特别地，噻唑-2-基和5-甲基-噁唑-4-基；并且其余的变量是如本文所定义的。
在另一实施例中，R5是甲基、乙基或异丙基；特别地R5是甲基或乙基；并且其余的变量是如本文所定义的。
在另一实施例中，R6和R7各自独立地选自氢和氟；并且其余的变量是如本文所定义的。在另一实施例中，R6和R7各自为氟；并且其余的变量是如本文所定义的。
在另外的实施例中，R8和R9各自独立地选自氢和卤代；或者R8和R9连同它们所附接的碳原子一起形成C(＝O)；并且其余的变量是如本文定义的。在另外的实施例中，R8和R9均是氢；或者R8和R9连同它们所附接的碳原子一起形成C(＝O)；并且其余的变量是如本文定义的。
在实施例中，X选自由以下组成的组：CHR10a、C(＝O)和NR10b；Y选自由以下组成的组：CHR11a、C(＝O)和NR11b；并且
Z选自由以下组成的组：CHR12a、C(＝O)、NR12b和O；其中
R10a、R10b、R11a、R11b、R12a和R12b各自独立地选自由以下组成的组：H；-CN；-C1-9烷基-COOH；-Cy-COOH；-C1-6烷基-Cy-COOH；-Cy-C1-6烷基-COOH；-C(＝O)-C1-6烷基-COOH；-Cy-OH；-C1-6烷基-O-C1-6烷基-COOH；-C(＝O)-NRaRb；和-S(＝O)2-NRc-C(＝O)-C1-6烷基；其中在每种情况下，C1-6烷基和C1-9烷基可以任选地被各自独立地选自卤基和羟基的一个或多个取代基取代；
Ra、Rb和Rc各自独立地选自H和-C1-4烷基；并且
Cy表示任选地被C1-4烷基取代基取代的C3-7环烷基；并且其余的变量是如本文所定义的。在一个更特别的实施例中，R10a、R11a和R12a各自是H。
在另一实施例中，X选自由以下组成的组：CH2、C(＝O)和NR10b；Y选自由以下组成的组：CH2、C(＝O)和NR11b；并且Z选自由以下组成的组：CH2、C(＝O)、NR12b和O；其中
R10b、R11b和R12b各自独立地选自由以下组成的组：
-C1-9烷基-COOH；-Cy-COOH；-C1-6烷基-Cy-COOH；-C(＝O)-C1-6烷基-COOH；-Cy-OH；和-C1-6烷基-O-C1-6烷基-COOH；其中
在每种情况下，C1-6烷基可以任选地被各自独立地选自卤代和羟基的一个或多个取代基取代；并且
Cy表示任选地被C1-4烷基取代基取代的C3-7环烷基并且其余的变量是如本文所定义的。
在另一实施例中，具有式(I)的化合物选自满足以下式(I-A)至(I-E)的化合物：
Figure BDA0003486886640000101
其中
R13和R14各自是H；或者R13和R14连同它们所附接的碳原子一起形成C(＝O)；
R15和R16，当存在时，各自是H；或者R15和R16连同它们所附接的碳原子一起形成C(＝O)；
Z，当存在时，选自由以下组成的组：CH2、NH和O；更特别地Z是CH2；并且所有其他变量是如本文所定义的。
在另一实施例中，本发明涉及具有式(I-A)、(I-B)或(I-C)的化合物，其中
R1、R2和R3各自独立地选自由以下组成的组：H、卤代和C1-3烷基；
R4选自由以下组成的组：噻唑基、咪唑基、噁唑基和吡啶基，其各自可以任选地被一个甲基取代基取代；
R5是C1-4烷基；
R6和R7各自独立地选自由H和卤代组成的组；
R8和R9各自是H；或者R8和R9连同它们所附接的碳原子一起形成C(＝O)；
R13和R14各自是H；或者R13和R14连同它们所附接的碳原子一起形成C(＝O)；
R15和R16，当存在时，各自是H；或者R15和R16连同它们所附接的碳原子一起形成C(＝O)；
Z，当存在时，选自由以下组成的组：CH2、NH和O；更特别地Z是CH2；并且
R10b、R11b和R12b各自独立地选自由以下组成的组：-C1-9烷基-COOH、-Cy-COOH、-Cy-OH、-C1-6烷基-O-C1-6烷基-COOH和-C(＝O)-C1-6烷基-COOH。
明确包括前述实施例的所有组合。
根据本发明的优选的化合物是具有如化合物合成部分和表1中表示的式的化合物或其立体异构体或互变异构形式，并且它们的活性展示于表3中。
披露的化合物可以具有一个或多个立构中心，并且每个立构中心可以独立地以R或S构型存在。尽管该化合物本身已被分离为单一立体异构体且为对映异构体/非对映异构体纯的，但是当立构中心的绝对立体化学尚未确定时，可以将在指定中心的立体构型指定为(*)。
在一个实施例中，本文所述的化合物以光学活性或外消旋形式存在。应当理解，本文所述的化合物涵盖具有本文所述的治疗上有用的特性的外消旋、光学活性、区域异构和立体异构形式或其组合。
光学活性形式的制备以任何合适的方式实现，包括作为非限制性实例，通过用重结晶技术拆分外消旋形式、由光学活性起始材料合成、手性合成或使用手性固定相的色谱分离。在一个实施例中，一种或多种异构体的混合物用作本文所述的披露的化合物。在另一个实施例中，本文所述的化合物含有一个或多个手性中心。这些化合物通过任何方式制备，包括立体选择性合成、对映体选择性合成或对映体或非对映体混合物的分离。化合物及其异构体的拆分通过任何方式实现，包括作为非限制性实例，化学方法、酶促方法、分步结晶、蒸馏以及色谱法。
当不能确定化合物的绝对R或S立体化学时，可以通过如由色谱柱、洗脱液等确定的具体色谱条件下的色谱法之后的保留时间来确定。
在一个实施例中，披露的化合物可以作为互变异构体存在。所有互变异构体都包括在本文提供的化合物的范围内。
本文所述的化合物还包括同位素标记的化合物，其中一个或多个原子被具有相同原子序数，但原子质量或质量数不同于自然界中常见的原子质量或质量数的原子替换。适合包含在本文所述化合物中的同位素的实例包括但不限于2H、3H、11C、13C、14C、36Cl、18F、123I、125I、13N、15N、15O、17O、18O、32P和35S。在一个实施例中，同位素标记的化合物可用于药物和/或底物组织分布研究。在另一个实施例中，用较重的同位素如氘取代提供了较高的代谢稳定性(例如，增加的体内半衰期或降低的剂量需求)。
在又另一个实施例中，用正电子发射同位素如11C、18F、15O和13N取代可用于检查底物受体占据的正电子发射断层成像(PET)研究。同位素标记的化合物通过任何合适的方法或通过使用适当的同位素标记的试剂代替另外使用的未标记的试剂的方法来制备。
在一个实施例中，本文所述的化合物通过其他手段标记，包括但不限于使用发色团或荧光部分、生物发光标记或化学发光标记。
使用本文所述的技术和材料以及本领域技术人员已知的技术合成本文所述的化合物和具有不同取代基的其他相关化合物。用于制备本文所述的化合物的通用方法通过使用适当的试剂和条件来修改，以便引入如本文提供的式中所示的各个部分。
由可从商业来源获得或者使用本文所述的程序制备的化合物开始，使用任何合适的程序合成本文所述的化合物。通用合成方案在下文的实例中给出。
因此，提供了产生具有式(I)的化合物的方法，其中所述方法包括
使具有式(VI)的化合物
Figure BDA0003486886640000121
其中R1-R5是如在式(I)中所定义的并且LG表示合适的离去基团(如例如溴)；与具有式(VII)的化合物
Figure BDA0003486886640000122
其中R6-R9是如在式(I)中所定义的；
在合适的亲核取代条件下(例如，在合适的碱如例如三乙醇胺的存在下)反应。
方法和用途
本文提供了治疗有需要的个体的HBV感染的方法，该方法包括向该个体施用治疗有效量的披露的化合物。
本文还提供了根除有需要的个体的HBV感染的方法，该方法包括向该个体施用治疗有效量的披露的化合物。
本文提供了减少有需要的个体的与HBV感染相关的病毒载量的方法，该方法包括向该个体施用治疗有效量的披露的化合物。
另外，本文提供了减少有需要的个体的HBV感染复发的方法，该方法包括向该个体施用治疗有效量的披露的化合物。
本文提供了抑制或减少有需要的个体的含HBV DNA颗粒或含HBV RNA颗粒的形成或存在的方法，该方法包括向该个体施用治疗有效量的披露的化合物。
当据说本发明涉及治疗个体的方法时，应当理解，这种方法在某些司法管辖范围内应解释为医学用途，例如根据本发明的化合物或组合物用于在治疗个体中使用；或者根据本发明的化合物或组合物用于制造药物的用途(特别地用于治疗个体)。因此，例如，本发明还涉及如本文所披露的化合物或药物组合物，其用于在预防或治疗HBV感染中使用。本文还提供了如本文所披露的化合物或药物组合物，其用于在减少与HBV感染相关的病毒载量中使用。本文进一步提供了如本文所披露的化合物或药物组合物，其用于在减少个体中HBV感染的复发中使用。本文还提供了如本文所披露的化合物或药物组合物，其用于在抑制或减少个体中含HBV DNA的颗粒或含HBV RNA的颗粒的形成或存在中使用。
在某些方面，本文所述的方法、用途和/或组合物对于抑制或减少体外或体内(例如，在细胞中、在组织中、在器官中(例如，在肝脏中)、在生物体等中)HBV相关颗粒的形成或存在是有效的。HBV相关颗粒可以含有HBV DNA(即，线性和/或共价闭合环状DNA(cccDNA))和/或HBV RNA(即，前基因组RNA和/或亚基因组RNA)。因此，HBV相关颗粒包括含HBV DNA颗粒或含HBV RNA颗粒。
如本文所用，“HBV相关颗粒”是指感染性HBV病毒体(即，丹氏粒)和非感染性HBV亚病毒颗粒(即，HBV丝和/或HBV球)两者。HBV病毒体包含包括表面蛋白的外包膜、包含核心蛋白的核衣壳、至少一种聚合酶蛋白和HBV基因组。HBV丝和HBV球包含HBV表面蛋白，但缺乏核心蛋白、聚合酶和HBV基因组。HBV丝和HBV球也统称为表面抗原(HBsAg)颗粒。HBV球包含中和小HBV表面蛋白。HBV丝还包括中、小和大HBV表面蛋白。
HBV亚病毒颗粒可以包括非颗粒状或分泌型HBeAg，其作为HBV活性复制的标记。
本文提供了减少有需要的个体的HBV感染的不良生理影响的方法，该方法包括向该个体施用治疗有效量的披露的化合物。
本文还提供了减少、减慢或抑制有需要的个体的HBV感染的方法，该方法包括向该个体施用治疗有效量的披露的化合物。
本文提供了在有需要的个体中诱导来自HBV感染的肝损伤逆转的方法，该方法包括向该个体施用治疗有效量的披露的化合物。
本文提供了减少有需要的个体的HBV感染的长期抗病毒疗法的生理影响的方法，该方法包括向该个体施用治疗有效量的披露的化合物。
本文提供了预防性地治疗有需要的个体的HBV感染的方法，其中该个体患有潜伏性HBV感染，该方法包括向该个体施用治疗有效量的披露的化合物。
本文还提供了如本文所披露的化合物或药物组合物，其用于在减少个体的HBV感染的不利生理影响中使用。本文还提供了如本文所披露的化合物或药物组合物，其用于在减少、减慢或抑制个体的HBV感染中使用。
本文还提供了如本文所披露的化合物或药物组合物，其用于在个体中诱导HBV感染引起的肝损伤的逆转中使用。
本文还提供了如本文所披露的化合物或药物组合物，其用于在减少个体的HBV感染的长期抗病毒疗法的生理影响中使用。本文进一步提供了如本文所披露的化合物或药物组合物，其用于在预防性治疗个体的HBV感染中使用，其中该个体患有潜在的HBV感染。
在一个实施例中，该个体是其他治疗类别的HBV药物(例如，HBV聚合酶抑制剂、干扰素、病毒进入抑制剂、病毒成熟抑制剂、文献描述的衣壳组装调节剂、不同或未知机制的抗病毒化合物等或其组合)难治的。在另一个实施例中，与其他治疗类别的HBV药物减少患有HBV感染的个体中的病毒载量的程度相比，所披露的方法或用途以更大的程度或以更快的速度减少该个体中的病毒载量。
在一个实施例中，与在预防性地治疗有需要的个体的HBV感染中获得相似结果所需的至少一种另外的治疗剂的单独施用相比，披露的化合物或其药学上可接受的盐的施用允许以更低的剂量或频率施用至少一种另外的治疗剂。
在一个实施例中，与选自下组的化合物的施用相比，披露的化合物或其药学上可接受的盐的施用以更大的程度或以更快的速度减少该个体的病毒载量，该组由以下组成：HBV聚合酶抑制剂、干扰素、病毒进入抑制剂、病毒成熟抑制剂、不同的衣壳组装调节剂、不同或未知机制的抗病毒化合物及其任何组合。
在一个实施例中，披露的方法或用途减少患有HBV感染的个体的病毒载量，从而允许使用较低的剂量或不同方案的组合疗法。
在一个实施例中，与其他类别的HBV药物相比，披露的方法或用途使得病毒突变或病毒抗性的发生率更低，从而允许长期治疗并最小化对治疗方案改变的需要。
在一个实施例中，与选自下组的化合物的施用相比，本发明的化合物或其药学上可接受的盐的施用使得病毒突变或病毒抗性的发生率更低，该组由以下组成：HBV聚合酶抑制剂、干扰素、病毒进入抑制剂、病毒成熟抑制剂、不同的衣壳组装调节剂、不同或未知机制的抗病毒化合物及其组合。
在一个实施例中，披露的方法或用途将从HBV感染至非HBV感染或从可检测HBV病毒载量至不可检测HBV病毒载量的血清转化率提高至超出当前治疗方案的血清转化率。如本文所用，“血清转化”是指产生HBV抗体并变得可检测的时间段。
在一个实施例中，披露的方法或用途增加或正常化或恢复正常健康，引起正常健康的完全恢复，恢复预期寿命，或解决有需要的个体的病毒感染。
在一个实施例中，披露的方法或用途消除或减少从HBV感染的细胞释放的HBV RNA颗粒的数量，从而增强、延长或增加披露的化合物的治疗益处。
在一个实施例中，披露的方法或用途根除被HBV感染的个体的HBV，从而避免了长期或终身治疗的需要，或缩短了治疗的持续时间，或允许减少其他抗病毒剂的给药。
在另一个实施例中，披露的方法或用途进一步包括监测或检测受试者的HBV病毒载量，并且其中将该方法进行一段时间，包括直到HBV病毒不可检测为止。
因此，在一个实施例中，本文提供了治疗有需要的个体的HBV感染的方法，该方法包括向该个体施用治疗有效量的具有式(I)的化合物或其药学上可接受的盐。
因此，在一个实施例中，本文提供了治疗有需要的个体的HBV感染的方法，该方法包括向该个体施用治疗有效量的具有式(I)的化合物或其药学上可接受的盐。
在另一个实施例中，本文提供了治疗有需要的个体的HBV感染的方法，该方法包括向该个体施用治疗有效量的表1的化合物或其药学上可接受的盐。
在本文提供的任何方法的实施例中，该方法或用途可以进一步包括监测受试者的HBV病毒载量，其中将该方法进行一段时间，使得HBV病毒不可检测。
组合疗法
披露的化合物可以与用于治疗HBV感染的一种或多种另外的化合物组合使用。这些另外的化合物可以包括其他披露的化合物和/或已知用于治疗、预防或减少HBV感染的症状或影响的化合物。此类化合物包括但不限于HBV聚合酶抑制剂、干扰素、病毒进入抑制剂、病毒成熟抑制剂、文献描述的衣壳组装调节剂、逆转录酶抑制剂、免疫调节剂(immunomodulatory agent)、TLR激动剂和具有影响HBV生命周期或影响HBV感染后果的不同或未知机制的其他药剂，例如，另外的化合物可以包含HBV复方药物、HBV疫苗、HBV DNA聚合酶抑制剂、免疫调节剂(immunomodulator)、toll样受体(TLR)调节剂、干扰素α受体配体、透明质酸酶抑制剂、乙型肝炎表面抗原(HBsAg)抑制剂、细胞毒性T淋巴细胞相关蛋白4(ipi4)抑制剂、亲环蛋白抑制剂、HBV病毒进入抑制剂、反义寡核苷酸靶向病毒mRNA、短干扰RNA(siRNA)和ddRNAi内切核酸酶调节剂、核糖核苷酸还原酶抑制剂、HBV E抗原抑制剂、共价闭合环状DNA(cccDNA)抑制剂、类法尼醇X受体激动剂、HBV抗体、CCR2趋化因子拮抗剂、胸腺肽激动剂、细胞因子、核蛋白调节剂、维甲酸诱导基因1刺激因子、NOD2刺激因子、磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)抑制剂、吲哚胺-2,3-双加氧酶(IDO)途径抑制剂、PD-1抑制剂、PD-L1抑制剂、重组胸腺肽α-1、布鲁顿酪氨酸激酶(BTK)抑制剂、KDM抑制剂、HBV复制抑制剂、精氨酸酶抑制剂以及其他HBV药物。
在非限制性实例中，披露的化合物可以与选自下组的一种或多种药物(或其盐)组合使用，该组包括：
HBV逆转录酶抑制剂、和DNA及RNA聚合酶抑制剂。
在一个实施例中，另外的治疗剂是干扰素。术语“干扰素”或“IFN”是指抑制病毒复制和细胞增殖并调节免疫应答的高度同源物种特异性蛋白的家族中的任何成员。人干扰素分为三类：I型、II型、和III型。如本文所用的术语“干扰素”包括已经开发并且可商购的干扰素的重组形式。如本文所用的术语“干扰素”还包括干扰素的亚型，如化学修饰或突变的干扰素。
因此，在一个实施例中，可以将具有式(I)的化合物与干扰素组合施用。
在另一个实施例中，另外的治疗剂选自免疫调节剂或免疫刺激剂疗法，其包括属于干扰素类别的生物药剂。
此外，另外的治疗剂可以是不同或未知机制的药剂，包括破坏HBV复制或持久性所需的其他一种或多种必需病毒蛋白或宿主蛋白的功能的药剂。
在另一个实施例中，另外的治疗剂是阻断病毒进入或成熟或靶向HBV聚合酶的抗病毒剂，如核苷或核苷酸或非核苷(核苷酸)聚合酶抑制剂。
在实施例中，另外的治疗剂是免疫调节剂，其诱导天然的有限的免疫应答，导致诱导针对不相关病毒的免疫应答。换句话说，免疫调节剂可以影响抗原呈递细胞的成熟、T细胞的增殖和细胞因子释放(例如，IL-12、IL-18、IFN-α、IFN-β和IFN-γ及TNF-α等)。
在另一实施例中，另外的治疗剂是TLR调节剂或TLR激动剂，如TLR-7激动剂或TLR-9激动剂。
在本文提供的任何方法中，该方法可进一步包括向该个体施用至少一种HBV疫苗、核苷HBV抑制剂、干扰素或其任何组合。
在一个实施例中，本文所述的方法进一步包括施用至少一种选自下组的另外的治疗剂，该组由以下组成：核苷酸/核苷类似物、进入抑制剂、融合抑制剂以及这些或其他抗病毒机制的任何组合。
在另一个方面，本文提供了治疗有需要的个体的HBV感染的方法，该方法包括通过以下方式减少HBV病毒载量：向该个体施用治疗有效量的披露的化合物，单独地或与逆转录酶抑制剂组合；并且向该个体进一步施用治疗有效量的HBV疫苗。
在另一个方面，本文提供了治疗有需要的个体的HBV感染的方法，该方法包括通过以下方式减少HBV病毒载量：向该个体施用治疗有效量的披露的化合物，单独地或与靶向HBV核酸的反义寡核苷酸或RNA干扰剂组合；并且向该个体进一步施用治疗有效量的HBV疫苗。反义寡核苷酸或RNA干扰剂与靶HBV核酸具有足够的互补性以抑制病毒基因组的复制、病毒RNA的转录或病毒蛋白的翻译。
在另一个实施例中，披露的化合物和至少一种另外的治疗剂是共配制的。在又另一个实施例中，披露的化合物和至少一种另外的治疗剂是共施用的。
对于本文描述的任何组合疗法，可以使用合适的方法计算协同效应，例如，Sigmoid-Emax方程(Holford和Scheiner,19981,Clin.Pharmacokinet.[临床药物动力学]6:429-453)、Loewe可加性方程(Loewe和Muischnek,1926,Arch.Exp.Pathol Pharmacol.[实验病理学与药理学档案]114:313-326)和中值效应方程(Chou和Talalay,1984,Adv.EnzymeRegul.[酶调控研究进展]22:27-55)。上文提到的每个方程都可以应用于实验数据，以生成相应的图表以帮助评估药物组合的效果。与上述方程相关的对应图表分别是浓度-效应曲线、等效线图曲线和联合指数曲线。
在本文提供的施用组合疗法的任何方法的实施例中，该方法可以进一步包括监测或检测受试者的HBV病毒载量，其中将该方法进行一段时间，包括直到使得HBV病毒不可检测的时间为止。
施用/剂量/配制品
在另一个方面，本文提供了药物组合物，该药物组合物包含至少一种披露的化合物或其药学上可接受的盐以及药学上可接受的载体。
本发明的药物组合物中的活性成分的实际剂量水平可以改变，以便获得对于具体患者、组合物和施用方式有效实现所希望的治疗应答而对该患者无毒的活性成分的量。
特别地，选择的剂量水平将取决于多种因素，包括所利用的具体化合物的活性、施用时间，该化合物的排泄速率，治疗持续时间，与该化合物组合使用的其他药物、化合物或材料，所治疗的患者的年龄、性别、体重、病状、一般健康状况和以前病史以及医学领域熟知的类似因素。
具有本领域普通技能的医生(例如，医师或兽医)可以容易地确定并且开出所需药物组合物的有效量。例如，医师或兽医能以低于实现期望的治疗效果所需的水平开始施用药物组合物以施用披露的化合物，并且逐渐增加剂量直到实现期望的效果。
在特别的实施例中，以便于施用和剂量均一性的剂量单位形式来配制化合物是特别有利的。如本文所用剂量单位形式是指作为针对待治疗的患者的单一剂量适合的物理上离散的单位；每一单位含有经计算以产生期望的治疗效果的预定量的披露的化合物与所需药物媒介物的结合。本发明的剂量单位形式由以下因素决定并直接取决于以下因素：(a)披露的化合物的独特特征和待实现的特定治疗效果、和(b)混配/配制用于治疗患者的HBV感染的这种披露的化合物的领域中固有的限制。
在一个实施例中，使用一种或多种药学上可接受的赋形剂或载体来配制本发明的组合物。在一个实施例中，本发明的药物组合物包含治疗有效量的披露的化合物以及药学上可接受的载体。因此，说明本发明的是制备药物组合物的方法，该方法包括将至少一种药学上可接受的载体与治疗有效量的披露的化合物混合。
在一些实施例中，披露的化合物的剂量是从约1mg至约2,500mg。类似地，在一些实施例中，如本文所述的第二化合物(即，用于HBV治疗的另一种药物)的剂量小于约1,000mg。
在一个实施例中，本发明涉及包装的药物组合物，该药物组合物包含容纳治疗有效量的披露的化合物的容器，该化合物是单独的或与第二药剂组合；以及使用该化合物治疗、预防或减少患者的HBV感染的一种或多种症状的说明书。
本发明任何组合物的施用途径包括口服、鼻腔、直肠、阴道内、肠胃外、口腔、舌下或局部。用于在本发明中使用的化合物可以配制用于通过任何合适的途径施用，如用于口服或肠胃外，例如经皮、经粘膜(例如，舌下、舌、(经)口腔、(经)尿道、阴道(例如，经阴道和阴道周围)、鼻(内)和(经)直肠)、膀胱内、肺内、十二指肠内、胃内、鞘内、皮下、肌肉内、皮内、动脉内、静脉内、支气管内、吸入和局部施用。
合适的组合物和剂型包括例如片剂、胶囊、囊片、丸剂、胶丸、锭剂、分散剂、悬浮剂、溶液剂、糖浆剂、颗粒剂、珠剂、经皮贴剂、凝胶剂、散剂、丸粒、乳浆剂、糖锭、乳膏、糊剂、膏药、洗剂、圆片、栓剂、用于鼻或口服施用的液体喷雾剂、用于吸入的干粉或雾化配制品、用于膀胱内施用的组合物和配制品等。应该理解，可用于本发明的配制品和组合物不限于本文所述的具体配制品和组合物。
对于口服施用，特别合适的是片剂、糖衣丸、液体、滴剂、栓剂或胶囊、囊片和胶丸。旨在用于口服的组合物可以根据本领域已知的任何方法制备，并且此类组合物可以含有选自下组的一种或多种药剂，该组由以下组成：适合于制造片剂的惰性、无毒的药学赋形剂。此类赋形剂包括例如惰性稀释剂，如乳糖；造粒剂和崩解剂，如玉米淀粉；粘合剂，如淀粉；以及润滑剂，如硬脂酸镁。片剂可以是未包衣的或者它们可以通过已知的技术包衣以精致或延迟活性成分的释放。用于口服的配制品也可以呈现为硬明胶胶囊，其中活性成分与惰性稀释剂混合。
对于肠胃外施用，可以将披露的化合物配制成用于注射或输注，例如静脉内、肌肉内或皮下注射或输注，或用于以推注剂量或连续输注施用。可以使用任选地含有其他配制剂(如悬浮剂、稳定剂或分散剂)的油性或水性媒介物中的悬浮液、溶液或乳液。
本领域的技术人员将认识到，或仅仅使用例行实验就能够确定本文所述的具体程序、实施例、权利要求和实例的许多等效物。此类等效物被认为在本发明的范围内，并且由所附的权利要求书涵盖。例如，应当理解，仅仅使用例行实验并用本领域认可的替代物对于反应条件(包括但不限于反应时间、反应大小/体积和实验试剂(如溶剂、催化剂、压力、气氛条件(例如氮气气氛)和还原剂/氧化剂))进行修改，在本申请的范围内。
应当理解，无论在本文何处提供数值和范围，这些值和范围所涵盖的所有值和范围都意图被包括在本发明的范围内。此外，落入这些范围内的所有值以及值范围的上限或下限也是本申请所预期的。
以下实例进一步说明本发明的方面。然而，它们决不是对本文所述的本发明的教导或披露的限制。
实施例涉及化合物，该化合物选自由满足以下式的化合物组成的组：
Figure BDA0003486886640000191
实例
实例1：
通用方案1
Figure BDA0003486886640000201
化合物I的制备在以上方案1中示出。
化合物V可在碱(如NaOAc)存在下通过醛II、乙酰乙酸盐III和脒IV缩合来制备(方法A)。化合物VI(其中LG表示离去基团(如溴))可以使用溴化试剂(如N-溴代琥珀酰亚胺)由化合物V来制备。在碱(如三乙醇胺)存在下偶联化合物VI和化合物VII得到化合物I。可替代地，化合物V可以进行手性分离以给出其单一立体异构体化合物Va和化合物Vb，化合物VIa可以使用溴化试剂(如N-溴代琥珀酰亚胺)由化合物Va来制备(方法B)。在碱(如三乙醇胺)存在下偶联化合物VIa和化合物VII得到化合物Ia(方法C)。
方法A：
Figure BDA0003486886640000211
向溶剂(如乙醇)中的具有通式III的酮酯(1当量)的溶液中添加具有通式II的醛(1当量)、具有通式IV的盐酸甲脒(1当量)和碱如乙酸钠(1-1.2当量)。将混合物升温至70℃-100℃并在氮气气氛下搅拌六小时至过夜。冷却至室温后，将其浓缩至干燥。将残余物从二氯甲烷或乙酸乙酯萃取，用水、盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥并过滤。将滤液在减压下浓缩以给出残余物，将该残余物通过硅胶柱色谱法纯化以提供具有通式V的二氢嘧啶产物。当适用时，将具有通式V的二氢嘧啶产物的立体异构体分离并且使用手性色谱法纯化以给出具有通式Va和通式Vb的二氢嘧啶产物。
方法B：
Figure BDA0003486886640000212
在室温和在氮气氛下向溶剂(如四氯化碳)中的具有通式Va的二氢嘧啶(1当量)的溶液中添加溴化试剂如N-溴代琥珀酰亚胺(0.9至1.1当量)。将混合物升温至60℃并在氮气气氛下搅拌1小时。冷却至室温后，将其浓缩至干燥。将残余物从二氯甲烷或乙酸乙酯萃取，用水、盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥并过滤。将滤液在减压下浓缩以给出残余物，将该残余物通过硅胶柱色谱法纯化以提供具有通式VIa的二氢嘧啶产物。
方法C：
Figure BDA0003486886640000221
在室温下向溶剂(如二氯甲烷)中的具有通式VII的溶液(1当量)中添加碱如三乙醇胺(10当量)。将混合物在35℃下搅拌0.5小时并且然后在氮气氛下添加溶剂(如二氯甲烷)中的具有通式VIa的二氢嘧啶溶液(1当量)。将混合物升温至40℃并在氮气气氛下搅拌2小时。在降温至0℃后，将反应混合物倒入冰水和盐酸水溶液(1.0M)的混合物中。将所得混合物从二氯甲烷或乙酸乙酯萃取，用水、盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥并过滤。将滤液在减压下浓缩以给出残余物，将该残余物通过C18柱纯化，以提供具有通式I的二氢嘧啶产物。
化学
在以下中说明了用于制备本发明的化合物的几种方法。除非另外指出，否则所有起始材料都从商业供应商获得并且不经进一步纯化而使用。
在下文中，ACN意指乙腈，AcOH意指乙酸，Boc意指叔丁基氧基羰基，Bn意指苄基，calcd.意指计算出的，Cbz意指苄氧基羰基，col.意指柱，conc.意指浓缩，m-CPBA意指3-氯过氧苯甲酸，DAST意指(二乙基氨基)三氟化硫，DCM意指二氯甲烷，DEA意指二乙醇胺，DIEA意指N,N-二异丙基乙胺，DMAP意指4-(二甲基氨基)吡啶，DMF意指二甲基甲酰胺，DMP意指戴斯-马丁高碘烷，EA意指乙酸乙酯，ee意指对映异构体过量，ESI意指电喷雾离子化，HATU意指2-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N’,N’-四甲基脲鎓六氟磷酸盐，Hex意指己烷，HNMR意指1H NMR，HPLC意指高效液相色谱法，IPA意指异丙醇，LC-MS或LCMS意指液相色谱-质谱法，LDA意指二异丙基氨基锂，Ms意指甲磺酰基，PE意指石油醚，PMB意指4-甲氧基苄基，prep.意指制备型，Prep-HPLC意指制备型HPLC，RT或Rt意指保留时间，(s)或(s)意指固体，sat.意指饱和，TBAF意指四丁基氟化铵，TBS意指叔丁基二甲基甲硅烷基，TEA意指三乙胺，THF意指四氢呋喃，T或Temp意指温度，TsCl意指4-甲苯磺酰氯，t-BuOK意指叔丁醇钾，W意指波长。
化合物VIa-1：乙基(S)-6-(溴甲基)-4-(3-氟-2-甲基苯基)-2-(噻唑-2-基)-1,4-二氢嘧啶-5-甲酸酯(单一立体异构体)
中间体V-1：乙基4-(3-氟-2-甲基苯基)-6-甲基-2-(噻唑-2-基)-1,4-二氢嘧啶-5-甲酸酯(2种立体异构体的混合物)(用方法A例示)：
在室温下，向3-氟-2-甲基苯甲醛(4.00g，28.9mmol)、乙酰乙酸乙酯(3.77g，28.9mmol)和噻唑-2-甲脒盐酸盐(4.74g，28.9mmol)在甲醇(50mL)中的溶液中添加乙酸钠(2.37g，28.9mmol)。将反应混合物在75℃搅拌12小时。将它冷却至室温，用乙酸乙酯萃取，用盐水洗涤，经Na2SO4干燥并通过硅胶柱色谱法(石油醚:乙酸乙酯＝10:1至1:1)纯化以给出呈黄色固体的标题化合物V-1(6.00g，58％产率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.86(s,0.8H),9.52(d,J＝2.8Hz,0.2H),8.00-7.98(m,0.4H),7.96(d,J＝3.2Hz,0.8H),7.88(d,J＝2.8Hz,0.8H),7.20-7.15(m,1.2H),7.06-6.99(m,1.8H),5.83(s,0.8H),5.73(d,J＝3.2Hz,0.2H),3.99-3.93(m,2H),2.48(s,2.4H),2.45(s,1.2H),2.44(s,1.2H),2.41(s,0.3H),2.40(s,0.3H),2.37(s.0.6H),1.08-1.02(m,3H)。
将乙基4-(3-氟-2-甲基苯基)-6-甲基-2-(噻唑-2-基)-1,4-二氢嘧啶-5-甲酸酯V-1(6.00g，16.7mmol)的外消旋混合物通过手性制备型HPLC(分离条件：柱：Chiralpak OJ-H 5μm 20*250mm；流动相：Hex:EtOH:DEA＝90:10:0.3，以15mL/min；温度：30℃；波长：214nm)分离以提供呈黄色固体的化合物Va-1(1.60g，27％产率，100％ee)和化合物Vb-1(1.70g，28％产率，100％ee)。
中间体Va-1：手性分析(柱：Chiralpak OJ-H 5μm 4.6*250mm；流动相：Hex:EtOH:DEA＝85:15:0.2，以1.0mL/min；温度：30℃；波长：230nm，RT＝7.251min)。通过以下与报告数据一致的化学拆分，Va-1被指定为绝对S立体化学(J.Med.Chem.[医药化学杂志],2017,60(8),第3352-3371页)。旋光度：[a]D 20-24°(c 0.10，MeOH)。
中间体Vb-1：手性分析(柱：Chiralpak OJ-H 5μm 4.6*250mm；流动相：Hex:EtOH:DEA＝85:15:0.2，以1.0mL/min；温度：30℃；波长：230nm，RT＝9.072min)。旋光度：[a]D 20+35°(c 0.10，MeOH)。
化合物VIa-1：乙基(S)-6-(溴甲基)-4-(3-氟-2-甲基苯基)-2-(噻唑-2-基)-1,4-二氢嘧啶-5-甲酸酯(单一立体异构体)(用方法B例示)：
在室温下在氮气气氛下，向(S)-乙基4-(3-氟-2-甲基苯基)-6-甲基-2-(噻唑-2-基)-
1,4-二氢嘧啶-5-甲酸酯Va-1(10g，99％纯度，27.6mmol)在四氯化碳(300mL)中的溶液中添加N-溴代琥珀酰亚胺(4.9g，27.5mmol)。在60℃下搅拌过夜后，将反应混合物浓缩以给出残余物，将该残余物在乙酸乙酯(100mL)中稀释并用水(50mL)洗涤两次，然后将合并的水层用乙酸乙酯(50mL)萃取两次。将合并的有机层用水(20mL)洗涤两次并用盐水(20mL)洗涤，经Na2SO4(固体)干燥并过滤。将滤液在减压下浓缩以提供残余物，将该残余物通过硅胶柱色谱法(石油醚:乙酸乙酯＝10:1至5:1)纯化以给出呈黄色固体的标题化合物(6.5g，得自NMR的95％纯度，51％产率)。LC-MS(ESI)：RT＝1.84min，C18H17BrFN3O2S的计算质量437.0，m/z实测值440.0[M+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.22(s,0.5H),7.82(d,J＝3.2Hz,1H),7.53(s,0.4H),7.44(s,0.6H),7.25-7.08(m,2.5H),6.96-6.92(s,1H),5.99(s,0.6H),5.93(s,0.4H),4.92-4.77(m,1.6H),4.67-4.65(m,0.4H),4.13-4.07(m,2H),2.53(s,1.7H),2.41(s,1.3H),1.14(t,J＝7.2Hz,3H)。旋光度：[a]D 20+0.093°o(c 0.10,MeOH)。
通过顺序反应联合使用芳基醛(II)、酮酯(III)和甲脒(IV)制备具有通式Va/VIa的二氢嘧啶示于下表1中：
表1：
Figure BDA0003486886640000241
化合物I-1：
3-((3aS*,7aS*)-1-(((S)-5-(乙氧基羰基)-6-(3-氟-2-甲基苯基)-2-(噻唑-2-基)-3,6-二氢嘧啶-4-基)甲基)-3,3-二氟-7-氧代六氢-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-6(2H)-基)-2,2-二甲基丙酸(单一立体异构体)
Figure BDA0003486886640000242
Figure BDA0003486886640000251
中间体I-1-2:
4-甲氧基苄基3-羟基-2,2-二甲基丙酸酯
在0℃下，向3-羟基-2,2-二甲基-丙酸I-1-1(8.0g，67.7mmol)和碳酸钾(28.1g，203mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(100mL)中的溶液中添加4-甲氧基苄基氯(12.7g，81.1mmol)。在0℃下搅拌1小时并且在室温下搅拌1小时后，将反应混合物倒入水(300mL)中并用乙酸乙酯(100mL)萃取两次。将合并的有机层用水(100mL)洗涤三次，经Na2SO4(固体)干燥并过滤。将滤液浓缩并通过硅胶柱色谱法(石油醚:乙酸乙酯＝2:1)纯化以给出呈黄色油状物的标题化合物(13g，81％产率)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.29-7.26(m,2H),6.90-6.86(m,2H),5.07(s,2H),3.80(s,3H),3.55(s,2H),1.19(s,6H)。
中间体I-1-3：
4-甲氧基苄基2,2-二甲基-3-氧代丙酸酯
在-65℃下，向二甲亚砜(14.5mg，186mmol)在二氯甲烷(100mL)中的溶液中添加草酰氯(11.84mg，93.2mmol)在二氯甲烷(20mL)中的溶液。将混合物在-65℃下搅拌0.5h并且然后添加4-甲氧基苄基3-羟基-2,2-二甲基丙酸酯I-1-2(14.8g，62.1mmol)。将所得混合物在-65℃下搅拌0.5h，并且然后添加三乙胺(37.68g，373mmol)。在-65℃下搅拌0.5h并且在室温下搅拌0.5h后，将反应混合物倒入水(100mL)中，并且用二氯甲烷(100mL)萃取两次。将合并的有机层用水(100mL)和盐水(100mL)洗涤，经Na2SO4(固体)干燥并过滤。将滤液浓缩并通过硅胶柱色谱法(石油醚:乙酸乙酯＝10:1)纯化以给出呈黄色油状物的标题化合物(12g，82％产率)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ9.63(s,1H),7.27(d,J＝8.8Hz,2H),6.88(d,J＝8.8Hz,2H),5.11(s,2H),3.80(s,3H),1.34(s,6H)。
中间体I-1-5：
叔丁基3-甲酰基-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-1-甲酸酯
在0℃下在氮气气氛下，向1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-3-甲醛I-1-4(5g，34.2mmol)在乙腈(80mL)中的溶液中添加二碳酸二叔丁酯(9g，41.2mmol)和4-二甲基氨基吡啶(100mg，0.819mmol)。在30℃下搅拌2小时后，将反应混合物在减压下浓缩以给出残余物。将残余物用水(100mL)稀释，并用乙酸乙酯(60mL)萃取两次。将合并的有机层用盐水(50mL)洗涤，经Na2SO4(固体)干燥并过滤。将滤液浓缩以给出呈黄色固体的标题化合物(8g，95％产率)，将其不经进一步纯化而直接用于后续步骤中。LC-MS(ESI)：RT＝1.50min，C13H14N2O3的计算质量246.1，m/z实测值247.0[M+H]+。
中间体I-1-6：
叔丁基3-(羟基甲基)-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-1-甲酸酯
在0℃下在氮气气氛下，向叔丁基3-甲酰基-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-1-甲酸酯I-1-5(8g，32.5mmol)在甲醇(30mL)和四氢呋喃(90mL)中的溶液中添加硼氢化钠(600mg，15.8mmol)。在0℃下搅拌2小时后，将反应混合物用水(200mL)淬灭并且然后用1M盐酸水溶液(约10mL)酸化至pH约7。将有机相分离，并且将水层用乙酸乙酯(100mL)萃取两次。将合并的有机层用盐水(200mL)洗涤，经Na2SO4(固体)干燥并过滤。将滤液在减压下浓缩以给出呈黄色固体的标题化合物(8g，得自LC-MS的98％纯度，97％产率)，将其不经进一步纯化而直接用于下一步。LC-MS(ESI)：RT＝1.32min，C13H16N2O3的计算质量248.1，m/z实测值249.0[M+H]+。
中间体I-1-7：
叔丁基3-(羟基甲基)-2,3-二氢-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-1-甲酸酯
在室温下，向叔丁基3-(羟基甲基)-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-1-甲酸酯I-1-6(1.2g，98％纯度，4.74mmol)在乙醇(30mL)中的溶液中添加20％氢氧化钯炭(300mg)。在40℃下在氢气气氛下(3MPa)搅拌过夜后，将混合物过滤并浓缩以给出呈浅黄色油状物的标题化合物(1.1g，93％产率)，将其不经进一步纯化而直接用于后续步骤中。LC-MS(ESI)：RT＝1.32min，C13H18N2O3的计算质量250.1，m/z实测值251.1[M+H]+。
中间体I-1-8：
(顺式)-叔丁基3-(羟基甲基)八氢-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-1-甲酸酯(2种立体异构体的混合物)
在室温下，向叔丁基3-(羟基甲基)-2,3-二氢-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-1-甲酸酯I-1-7(1.1g，4.40mmol)在乙醇(20mL)和乙酸(4mL)中的溶液中添加氧化铂(IV)(400mg)。在40℃下在氢气气氛(3MPa)下搅拌过夜后，将混合物过滤并浓缩以给出呈浅黄色油状物的标题化合物(1.1mg，得自1H NMR的95％纯度，93％产率)，将其不经进一步纯化而直接用于下一步。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ4.30-4.07(m,1H),3.83(s,0.5H),3.72-3.55(m,3H),3.44-3.34(m,1H),3.19-2.82(m,3.5H),2.50-2.38(m,1.5H),2.33-2.23(m,0.5H),2.10-1.94(m,1H),1.77-1.68(m,1H),1.45(s,4.5H),1.44(s,4.5H)。
中间体I-1-9：
(顺式)-6-苄基1-叔丁基3-(羟基甲基)六氢-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-1,6(2H)-二甲酸酯(2种立体异构体的混合物)
在0℃下在氮气气氛下，向(顺式)-叔丁基3-(羟基甲基)八氢-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-1-甲酸酯I-1-8(1.1g，95％纯度，4.08mmol)在饱和碳酸氢钠水溶液(6mL)和四氢呋喃(14mL)中的溶液中滴加氯甲酸苄酯(850mg，4.98mmol)。在室温下搅拌过夜后，将混合物在减压下浓缩，用水(50mL)稀释并用乙酸乙酯(60mL)萃取三次。将合并的有机层用盐水(100mL)洗涤，经Na2SO4(固体)干燥并过滤。将滤液浓缩并通过硅胶柱色谱法(石油醚:乙酸乙酯＝4:1)纯化以给出呈无色油状物的标题化合物(1.5g，得自1H NMR的95％纯度，90％产率)。LC-MS(ESI)：RT＝1.58min，C21H30N2O5的计算质量390.2，m/z实测值391.1[M+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.34-7.28(m,5H),5.14-5.04(m,2H),4.32-4.18(m,1H),3.96-3.56(m,5H),3.24-2.80(m,3H),2.44-2.33(m,1.5H),2.26-2.18(m,0.5H),1.90-1.70(m,1H),1.54-1.35(m,10H)。
中间体I-1-10：
(顺式)-6-苄基1-叔丁基3-(碘甲基)六氢-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-1,6(2H)-二甲酸酯(2种立体异构体的混合物)
在0℃下，向三苯基膦(300mg，1.14mmol)和咪唑(150mg，2.20mmol)在甲苯(15mL)中的溶液中添加碘(300mg，1.18mmol)。在0℃下搅拌0.5h后，滴加(顺式)-6-苄基1-叔丁基3-(羟基甲基)六氢-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-1,6(2H)-二甲酸酯I-1-9(400mg，95％纯度，0.973mmol)在甲苯(5mL)中的溶液。在室温下搅拌过夜后，将混合物用饱和亚硫酸钠水溶液(20mL)淬灭，将有机层分离并将水层用乙酸乙酯(30mL)萃取两次。将合并的有机层用盐水(50mL)洗涤，经Na2SO4(固体)干燥并过滤。将滤液浓缩并通过硅胶柱色谱法(石油醚:乙酸乙酯＝15:1至8:1)纯化以给出呈白色固体的标题化合物(500mg，得自1H NMR的95％纯度，98％产率)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.35-7.29(m,5H),5.14-5.10(m,2H),4.32-3.69(m,4H),3.56-3.30(m,0.5H),3.14-2.96(m,3.5H),2.79-2.53(m,1H),2.39-2.27(m,1H),2.16-2.09(m,0.5H),1.88-1.78(m,0.5H),1.68-1.62(m,1H),1.54-1.33(m,10H)。
中间体I-1-11：
(顺式)-6-苄基1-叔丁基3-亚甲基六氢-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-1,6(2H)-二甲酸酯(2种立体异构体的混合物)
在0℃下在氮气气氛下，向(顺式)-6-苄基1-叔丁基3-(碘甲基)六氢-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-1,6(2H)-二甲酸酯I-1-10(500mg，95％纯度，0.949mmol)在四氢呋喃(10mL)中的溶液中添加叔丁醇钾(150g，1.34mmol)。在0℃下搅拌2小时后，将混合物用水(50mL)淬灭，并用乙酸乙酯(60mL)萃取三次。将合并的有机层用盐水(100mL)洗涤，经Na2SO4(固体)干燥并过滤。将滤液浓缩并通过硅胶柱色谱法(石油醚:乙酸乙酯＝4:1)纯化以给出呈无色油状物的标题化合物(390mg，得自1H NMR的90％纯度，99％产率)。LC-MS(ESI)：RT＝1.69min，C21H28N2O4的计算质量372.2，m/z实测值373.1[M+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.38-7.30(m,5H),5.17-5.07(m,3H),4.97(s,1H),4.23-4.06(m,2H),3.99-3.68(m,3H),3.04-2.86(m,2.3H),2.62-2.56(m,0.7H),1.94(s,2H),1.45-1.37(m,9H)。
中间体I-1-12：
(顺式)-6-苄基1-叔丁基3-氧代六氢-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-1,6(2H)-二甲酸酯(2种立体异构体的混合物)
将(顺式)-6-苄基1-叔丁基3-亚甲基六氢-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-1,6(2H)-二甲酸酯I-1-11(390mg，90％纯度，0.942mmol)在二氯甲烷(30mL)中的溶液冷却至-78℃并用臭氧处理。一旦溶液变蓝(约30分钟)，将反应混合物用氮气吹扫，用二甲基硫烷(2mL)处理并且然后允许升温至室温。在室温下搅拌过夜后，将反应混合物在减压下浓缩以给出呈无色油状物的标题化合物(350mg，得自1HNMR的90％纯度，89％产率)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.38-7.30(m,5H),5.22-5.05(m,2H),4.55-4.36(m,1H),4.21-3.92(m,2H),3.83-3.59(m,2H),3.21-2.73(m,3H),2.25-2.21(m,1H),1.89-1.76(m,1H),1.46(br s,9H)。
中间体I-1-13：
(顺式)-6-苄基1-叔丁基3,3-二氟六氢-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-1,6(2H)-二甲酸酯(2种立体异构体的混合物)
在-78℃下，向(顺式)-6-苄基1-叔丁基3-氧代六氢-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-1,6(2H)-二甲酸酯I-1-12(850mg，90％纯度，2.04mmol)在二氯甲烷(35mL)中的溶液中添加二乙基氨基三氟化硫(1.5mL，11.2mmol)。在-78℃搅拌1小时后，将混合物温热至室温并且在室温下搅拌过夜。然后将混合物用碳酸氢钠水溶液碱化至pH约8并且然后用二氯甲烷(80mL)萃取两次。将合并的有机层用盐水(80mL)洗涤，经Na2SO4(固体)干燥并过滤。将滤液浓缩并通过硅胶柱色谱法(石油醚:乙酸乙酯＝20:1至15:1)纯化以给出呈浅黄色油状物的标题化合物(600mg，97％纯度，72％产率)。LC-MS(ESI)：RT＝1.82min，C20H26F2N2O4的计算质量396.2，m/z实测值397.1[M+H]+。
中间体I-1-14：
(顺式)-叔丁基3,3-二氟八氢-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-1-甲酸酯(2种立体异构体的混合物)
在室温下，向(顺式)-6-苄基1-叔丁基3,3-二氟六氢-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-1,6(2H)-二甲酸酯I-1-13(2.4g，95％纯度，5.75mmol)在异丙醇(40mL)中的溶液中添加20％氢氧化钯炭(300mg)。在40℃下在氢气气氛(60psi)下搅拌过夜后，将混合物过滤并浓缩以给出呈浅黄色油状物的标题化合物(1.4g，得自LC-MS的55％纯度，51％产率)。LC-MS(ESI)：RT＝1.38min，C12H20F2N2O2的计算质量262.1，m/z实测值263.1[M+H]+。
中间体I-1-15：
(顺式)-叔丁基3,3-二氟-6-(3-((4-甲氧基苄基)氧基)-2,2-二甲基-3-氧代丙基)八氢-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-1-甲酸酯(2种立体异构体的混合物)
在室温下，向(顺式)-叔丁基3,3-二氟八氢-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-1-甲酸酯I-1-14(1.4g，55％纯度，2.94mmol)在二氯甲烷(50mL)中的溶液中添加乙酸(3mL)、三异丙氧基氯化钛(IV)(3.7g，14.2mmol)和4-甲氧基苄基2,2-二甲基-3-氧代丙酸酯I-1-3(3.5g，90％纯度，13.3mmol)。将所得混合物在氮气气氛下在室温下搅拌2小时并且然后添加三乙酰氧基硼氢化钠(6g，28.3mmol)。在室温下在氮气气氛下搅拌过夜后，将反应混合物用冰水(100mL)淬灭并用二氯甲烷(80mL)萃取三次。将合并的有机层用盐水(150mL)洗涤，经Na2SO4(固体)干燥并过滤。将滤液浓缩并通过硅胶柱色谱法(石油醚:乙酸乙酯＝15:1至10:1)纯化以给出呈浅黄色油状物的标题化合物(900mg，得自1H NMR的95％纯度，60％产率)。LC-MS(ESI)：RT＝2.04min，C25H36F2N2O5的计算质量482.3，m/z实测值483.4[M+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.29-7.28(m,2H),6.89-6.87(m,2H),5.08-5.00(m,2H),4.02-3.94(m,1H),3.81(s,3H),3.74-3.63(m,2H),2.98-2.88(m,1H),2.58-2.35(m,5.5H),2.22-2.16(m,0.5H),1.84-1.78(m,0.5H),1.70-1.69(m,1.5H),1.46(s,9H),1.16-1.13(m,6H)。
中间体I-1-16B(单一立体异构体)、I-1-16C(单一立体异构体)和I-1-16A：
(3aR*,7aR*)-叔丁基3,3-二氟-6-(3-((4-甲氧基苄基)氧基)-2,2-二甲基-3-氧代丙基)-7-氧代八氢-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-1-甲酸酯(单一立体异构体)
(3aS*,7aS*)-叔丁基3,3-二氟-6-(3-((4-甲氧基苄基)氧基)-2,2-二甲基-3-氧代丙基)-7-氧代八氢-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-1-甲酸酯(单一立体异构体)
(顺式)-叔丁基3,3-二氟-6-(3-((4-甲氧基苄基)氧基)-2,2-二甲基-3-氧代丙基)-5-氧代八氢-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-1-甲酸酯(2种立体异构体的混合物)
在0℃下在氮气气氛下，向(顺式)-叔丁基3,3-二氟-6-(3-((4-甲氧基苄基)氧基)-2,2-二甲基-3-氧代丙基)八氢-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-1-甲酸酯I-1-15(900mg，95％纯度，1.77mmol)在高氯甲烷(15mL)和水(15mL)中的溶液中添加氯化钌(III)三水合物(250mg，37％纯度，0.354mmol)和高碘酸钠(1.9g，8.88mmol)。在20℃下搅拌2小时后，将混合物用水(50mL)稀释并用二氯甲烷(60mL)萃取三次。将合并的有机层用盐水(100mL)洗涤，经Na2SO4(固体)干燥并过滤。将滤液浓缩并通过硅胶柱色谱法(石油醚:乙酸乙酯＝4:1)纯化以给出呈无色油状物的4种异构体的混合物(370mg，97％纯度，41％产率)。LC-MS(ESI)：RT＝1.71min，C25H34F2N2O6的计算质量496.2，m/z实测值497.4[M+H]+。
将4种异构体的混合物(370mg，0.723mmol，97％纯度)通过手性制备型HPLC(分离条件：柱：Chiralpak IB 5um 20*250mm；流动相：Hex:IPA＝60:40，以12ml/min；温度：30℃；波长：214nm)分离以给出呈黄色固体的I-1-16A(140mg，得自1H NMR的95％纯度，37％产率)、I-1-16B(80mg，得自1H NMR的95％纯度，21％产率，100％ee)和I-1-16C(80mg，得自1HNMR的95％纯度，21％产率，97.6％ee)。
中间体I-1-16A：手性分析(柱：Chiralpak IE 5μm 4.6*250nm；流动相：Hex:IPA＝60:40，以1mL/min；温度：30℃；波长：214nm，RT＝7.032min，7.264min)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.33-7.28(m,2H),6.89-6.87(m,2H),5.10-5.01(m,2H),4.26-4.11(m,1H),3.92-3.75(m,4H),3.69-3.36(m,4.7H),3.26-3.20(m,0.3H),2.92-2.83(m,1H),2.61-2.55(m,1H),2.49-2.43(m,1H),1.50-1.47(m,9H),1.19(s,6H)。
中间体I-1-16B：手性分析(柱：Chiralpak IE 5μm 4.6*250nm；流动相：Hex:IPA＝60:40，以1mL/min；温度：30℃；波长：214nm，RT＝8.887min)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.31(d,J＝8.8Hz,2H),6.89(d,J＝8.8Hz,2H),5.11-5.03(m,2H),4.49-4.30(m,1H),3.98-3.89(m,0.5H),3.81-3.72(m,5H),3.63-3.49(m,1H),3.34-3.22(m,0.5H),3.15-2.95(m,3H),1.88-1.79(m,1H),1.73-1.66(m,1H),1.46(s,9H),1.20(s,3H),1.17(s,3H)。
中间体I-1-16C：手性分析(柱：Chiralpak IE 5μm 4.6*250nm；流动相：Hex:IPA＝60:40，以1mL/min；温度：30℃；波长：214nm，RT＝10.716min)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.31(d,J＝8.8Hz,2H),6.89(d,J＝8.8Hz,2H),5.11-5.03(m,2H),4.49-4.30(m,1H),4.03-3.90(m,0.5H),3.81-3.72(m,5H),3.64-3.45(m,1H),3.34-3.20(m,0.5H),3.15-2.95(m,3H),1.88-1.79(m,1H),1.73-1.66(m,1H),1.46(s,9H),1.20(s,3H),1.17(s,3H)。
中间体I-1-17：
3-((3aS*,7aS*)-1-(叔丁氧基羰基)-3,3-二氟-7-氧代六氢-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-6(2H)-基)-2,2-二甲基丙酸(单一立体异构体)
在室温下，向(3aS*,7aS*)-叔丁基3,3-二氟-6-(3-((4-甲氧基苄基)氧基)-2,2-二甲基-3-氧代丙基)-7-氧代八氢-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-1-甲酸酯I-1-16C(80mg，95％纯度，0.153mmol)在异丙醇(6mL)中的溶液中添加20％氢氧化钯炭(20mg)。在40℃下在氢气气氛(15psi)下搅拌过夜后，将混合物过滤并浓缩以给出呈浅黄色油状物的标题化合物(55mg，95％产率)。LC-MS(ESI)：RT＝1.24min，C17H26F2N2O5的计算质量376.2，m/z实测值375.1[M-H]-。
中间体I-1-18：
3-((3aS*,7aS*)-3,3-二氟-7-氧代六氢-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-6(2H)-基)-2,2-二甲基丙酸(单一立体异构体)
在室温下，将3-((3aS*,7aS*)-1-(叔丁氧基羰基)-3,3-二氟-7-氧代六氢-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-6(2H)-基)-2,2-二甲基丙酸I-1-17(55mg，0.146mmol)在二噁烷(5mL)中的4M盐酸中的溶液搅拌3小时。将反应混合物浓缩以给出呈白色固体的标题化合物(45mg，98％产率)，将其不经进一步纯化而直接用于下一步。LC-MS(ESI)：RT＝0.29min，C12H18F2N2O3的计算质量276.1，m/z实测值275.1[M-H]-。
化合物I-1：
3-((3aS*,7aS*)-1-(((S)-5-(乙氧基羰基)-6-(3-氟-2-甲基苯基)-2-(噻唑-2-基)-3,6-二氢嘧啶-4-基)甲基)-3,3-二氟-7-氧代六氢-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-6(2H)-基)-2,2-二甲基丙酸(单一立体异构体)(用方法C例示)：
在室温下，向3-((3aS*,7aS*)-3,3-二氟-7-氧代六氢-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-6(2H)-基)-2,2-二甲基丙酸I-1-18(45mg，0.144mol)在二氯甲烷(2mL)中的溶液中添加三乙醇胺(100mg，0.67mol)。将混合物在35℃下搅拌0.5小时并且然后添加(S)-乙基6-(溴甲基)-4-(3-氟-2-甲基苯基)-2-(噻唑-2-基)-1,4-二氢嘧啶-5-甲酸酯VIa-1(70mg，95％纯度，0.152mol)在二氯甲烷(1mL)中的溶液。在40℃下搅拌2小时后，将反应混合物冷却至0℃并倒入冰水(30mL)和1M盐酸水溶液(1.5mL)的混合物中。将所得混合物用二氯甲烷(20mL)萃取三次。将合并的有机层用水(50mL)洗涤两次并用盐水(50mL)洗涤，经Na2SO4(固体)干燥并过滤。将滤液浓缩并通过C18柱(乙腈:水＝5％至85％)纯化以给出呈黄色固体的标题化合物(40mg，99.3％纯度，44％产率)。LC-MS(ESI)：RT＝3.391min，C30H34F3N5O5S的计算质量633.2，m/z实测值634.3[M+H]+。1HNMR(400MHz,CDCl3+D2O(一滴))δ7.84(d,J＝3.2Hz,1H),7.41(d,J＝2.8Hz,1H),7.12-7.05(m,2H),6.93-6.86(m,1H),6.00(s,1H),4.53(d,J＝15.6Hz,1H),4.38(d,J＝15.2Hz,1H),4.11-3.99(m,3H),3.71-3.65(m,1H),3.59(d,J＝8.4Hz,1H),3.44-3.32(m,2H),3.20(d,J＝13.6Hz,1H),3.02-2.91(m,1H),2.88-2.80(m,1H),2.53(s,3H),2.19-2.10(m,1H),1.95-1.87(m,1H),1.31(s,3H),1.30(s,3H),1.12(t,J＝6.8Hz,3H)。
化合物I-2：
3-((3aS*,7aS*)-1-(((S)-5-(乙氧基羰基)-6-(3-氟-2-甲基苯基)-2-(噻唑-2-基)-3,6-二氢嘧啶-4-基)甲基)-3,3-二氟-5-氧代六氢-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-6(2H)-基)-2,2-二甲基丙酸(单一立体异构体)
Figure BDA0003486886640000321
Figure BDA0003486886640000331
中间体I-2-1：
3-((顺式)-1-(叔丁氧基羰基)-3,3-二氟-5-氧代六氢-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-6(2H)-基)-2,2-二甲基丙酸(2种立体异构体的混合物)
在室温下，向(顺式)-叔丁基3,3-二氟-6-(3-((4-甲氧基苄基)氧基)-2,2-二甲基-3-氧代丙基)-5-氧代八氢-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-1-甲酸酯I-1-16A(140mg，95％纯度，0.268mmol)在异丙醇(8mL)中的溶液中添加20％氢氧化钯炭(20mg)。在40℃下在氢气气氛(15psi)下搅拌过夜后，将混合物过滤并浓缩以给出呈浅黄色油状物的标题化合物(100mg，99.2％产率)。LC-MS(ESI)：RT＝1.23min，C17H26F2N2O5的计算质量376.2，m/z实测值375.2[M-H]-。
中间体I-2-2：
3-((顺式)-3,3-二氟-5-氧代六氢-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-6(2H)-基)-2,2-二甲基丙酸盐酸盐(2种立体异构体的混合物)
在室温下，将(顺式)-1-(叔丁氧基羰基)-3,3-二氟-5-氧代六氢-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-6(2H)-基)-2,2-二甲基丙酸I-2-1(100mg，0.266mmol)在二噁烷(5mL)中的4M盐酸中的溶液搅拌3小时。将反应混合物浓缩以给出呈白色固体的标题化合物(80mg，100％纯度，95％产率)，将其不经进一步纯化直接用于下一步。LC-MS(ESI)：RT＝0.29min，C12H18F2N2O3的计算质量276.1，m/z实测值275.1[M-H]-。
中间体I-2-3：
3-((顺式)-1-(((S)-5-(乙氧基羰基)-6-(3-氟-2-甲基苯基)-2-(噻唑-2-基)-3,6-二氢嘧啶-4-基)甲基)-3,3-二氟-5-氧代六氢-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-6(2H)-基)-2,2-二甲基丙酸(2种立体异构体的混合物)
从化合物I-2-2和VIa-1转化而来。通过利用方法C的类似程序，合成呈黄色固体的标题化合物。LC-MS(ESI)：RT＝3.739min，C30H34F3N5O5S的计算质量633.2，m/z实测值634.3[M+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3+D2O(一滴))δ7.82-7.81(m,1H),7.45-7.43(m,1H),7.14-7.08(m,1H),7.04-6.98(m,1H),6.95-6.90(m,1H),6.02(s,0.5H),6.01(s,0.5H),4.41(d,J＝15.6Hz,0.5H),4.29(d,J＝14.4Hz,0.5H),4.12-3.92(m,3H),3.73-3.64(m,1H),3.59-3.30(m,5H),3.25-3.15(m,0.5H),3.02-2.93(m,1.5H),2.76-2.69(m,1H),2.53(s,3H),2.47-2.41(m,1H),1.27-1.20(m,6H),1.14-1.07(m,3H)。
中间体I-2-4：
(S)-乙基6-(((顺式)-6-(3-(烯丙基氧基)-2,2-二甲基-3-氧代丙基)-3,3-二氟-5-氧代八氢-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-1-基)甲基)-4-(3-氟-2-甲基苯基)-2-(噻唑-2-基)-1,4-二氢嘧啶-5-甲酸酯(2种立体异构体的混合物)
在0℃下，向3-((顺式)-1-(((S)-5-(乙氧基羰基)-6-(3-氟-2-甲基苯基)-2-(噻唑-2-基)-3,6-二氢嘧啶-4-基)甲基)-3,3-二氟-5-氧代六氢-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-6(2H)-基)-2,2-二甲基丙酸I-2-3(50mg，99.8％纯度，0.079mmol)和烯丙基溴(10mg，0.083mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(2mL)中的溶液中添加碳酸钾(20mg，0.145mmol)。在0℃下搅拌后4小时，将混合物过滤并在减压下浓缩以给出残余物，将该残余物通过C18柱(乙腈:水＝5％至100％)纯化以给出呈黄色油状物的标题化合物(50mg，94％产率)。LC-MS(ESI)：RT＝1.81min，C33H38F3N5O5S的计算质量673.3，m/z实测值674.1[M+H]+。
中间体I-2-4A和I-2-4B：
(S)-乙基6-(((3aR*,7aR*)-6-(3-(烯丙基氧基)-2,2-二甲基-3-氧代丙基)-3,3-二氟-5-氧代八氢-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-1-基)甲基)-4-(3-氟-2-甲基苯基)-2-(噻唑-2-基)-1,4-二氢嘧啶-5-甲酸酯(单一立体异构体)
(S)-乙基6-(((3aS*,7aS*)-6-(3-(烯丙基氧基)-2,2-二甲基-3-氧代丙基)-3,3-二氟-5-氧代八氢-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-1-基)甲基)-4-(3-氟-2-甲基苯基)-2-(噻唑-2-基)-1,4-二氢嘧啶-5-甲酸酯(单一立体异构体)
将(S)-乙基6-(((顺式)-6-(3-(烯丙基氧基)-2,2-二甲基-3-氧代丙基)-3,3-二氟-5-氧代八氢-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-1-基)甲基)-4-(3-氟-2-甲基苯基)-2-(噻唑-2-基)-1,4-二氢嘧啶-5-甲酸酯I-2-4(50mg，0.074mmol)的混合物通过手性制备型HPLC(分离条件：柱：Chiralpak IC 5um 20*250mm；流动相：Hex:EtOH＝70:30，以18ml/min；温度：30℃；波长：254nm)分离以给出呈黄色固体的I-2-4A(20mg，40％产率，100％立体纯度)和I-2-4B(20mg，40％产率，99.9％立体纯度)。
中间体I-2-4A：LC-MS(ESI)：RT＝1.81min，C33H38F3N5O5S的计算质量673.3，m/z实测值674.5[M+H]+。手性分析(柱：Chiralpak IC 5μm 4.6*250nm；流动相：Hex:EtOH＝70:30，以1mL/min；温度：30℃；波长：254nm，RT＝6.247min)。
中间体I-2-4B：LC-MS(ESI)：RT＝1.82min，C33H38F3N5O5S的计算质量673.3，m/z实测值675.0[M+H]+。手性分析(柱：Chiralpak IC 5μm 4.6*250nm；流动相：Hex:EtOH＝70:30，以1mL/min；温度：30℃；波长：254nm，RT＝9.269min)。
化合物I-2：
3-((3aS*,7aS*)-1-(((S)-5-(乙氧基羰基)-6-(3-氟-2-甲基苯基)-2-(噻唑-2-基)-3,6-二氢嘧啶-4-基)甲基)-3,3-二氟-5-氧代六氢-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-6(2H)-基)-2,2-二甲基丙酸(单一立体异构体)
在0℃下，向(S)-乙基6-(((3aS*,7aS*)-6-(3-(烯丙基氧基)-2,2-二甲基-3-氧代丙基)-3,3-二氟-5-氧代八氢-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-1-基)甲基)-4-(3-氟-2-甲基苯基)-2-(噻唑-2-基)-1,4-二氢嘧啶-5-甲酸酯I-2-4B(20mg，0.030mol)在二氯甲烷(2mL)和吡咯烷(0.2mL)中的溶液中添加四(三苯基膦)钯(5mg，0.004mmol)。在30℃下搅拌3小时后，将反应混合物用水(20mL)淬灭并用二氯甲烷(30mL)萃取两次。将合并的有机层用盐水(60mL)洗涤，经Na2SO4(固体)干燥并过滤。将滤液浓缩并通过C18柱(乙腈:水＝5％至100％)纯化以给出呈浅黄色固体的标题化合物(10mg，99.9％纯度，53％产率)。LC-MS(ESI)：RT＝3.413min，C30H34F3N5O5S的计算质量633.2，m/z实测值634.3[M+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ9.26(s,1H),7.82(d,J＝2.8Hz,1H),7.48-7.42(m,1H),7.13-7.08(m,1H),7.05-7.03(m,1H),6.95-6.91(m,1H),6.01(s,1H),4.48-4.44(m,1H),4.08-3.99(m,2H),3.97-3.92(m,1H),3.74-3.70(m,1H),3.61(d,J＝13.6Hz,1H),3.51-3.28(m,4H),3.04-2.89(m,2H),2.73(dd,J＝16.8Hz,4.8Hz,1H),2.52(s,3H),2.41(dd,J＝16.0Hz,9.2Hz,1H),1.29(s,3H),1.22(s,3H),1.09(t,J＝7.6Hz,3H)。
化合物I-3：
3-((3aS*,7aS*)-1-(((S)-5-(乙氧基羰基)-6-(3-氟-2-甲基苯基)-2-(噻唑-2-基)-3,6-二氢嘧啶-4-基)甲基)-3,3-二氟六氢-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-6(2H)-基)-2,2-二甲基-3-氧代丙酸(单一立体异构体)
Figure BDA0003486886640000351
Figure BDA0003486886640000361
中间体I-3-2：
1-叔丁基4-乙基3-(苄基氨基)-5,6-二氢吡啶-1,4(2H)-二甲酸酯
在室温下，向1-叔丁基4-乙基3-氧代哌啶-1,4-二甲酸酯I-3-1(15g，55.3mmol)和苄胺(7mL，64.1mmol)在甲苯(300mL)中的溶液中添加对甲苯磺酸一水合物(1g，5.26mmol)。在130℃下搅拌过夜后，将反应混合物冷却降至室温并在减压下浓缩以给出呈棕色固体的标题化合物(22g，88％纯度，97％产率)，将其不经进一步纯化而直接用于下一步。LC-MS(ESI)：RT＝1.94min，C20H28N2O4的计算质量360.2，m/z实测值361.1[M+H]+。
中间体I-3-3：
(顺式)-1-叔丁基4-乙基3-(苄基氨基)哌啶-1,4-二甲酸酯(2种立体异构体的混合物)
在0℃下，向1-叔丁基4-乙基3-(苄基氨基)-5,6-二氢吡啶-1,4(2H)-二甲酸酯I-3-2(28g，88％纯度，68.4mmol)在乙腈(300mL)和乙酸(100mL)中的溶液中添加三乙酰氧基硼氢化钠(40g，189mmol)。在0℃下搅拌2小时后，将混合物在减压下浓缩以给出残余物，将残余物用5.0M氢氧化钠水溶液(200mL)和乙酸乙酯(200mL)稀释。将所得溶液在0℃下伴随剧烈搅拌用1.0M氢氧化钠水溶液酸化至pH约10并用乙酸乙酯(200mL)萃取两次。将合并的有机层用水(100mL)洗涤两次并用盐水(100mL)洗涤，经Na2SO4(固体)干燥并过滤。将反应混合物在减压下浓缩以给出呈黄色油状物的标题化合物(28g，85％纯度，96％产率)，将其不经进一步纯化直接用于后续步骤中。LC-MS(ESI)：RT＝1.81min，C20H30N2O4的计算质量362.2，m/z实测值363.2[M+H]+。
中间体I-3-4：
(顺式)-1-叔丁基4-乙基3-(苄基(2-乙氧基-2-氧代乙基)氨基)哌啶-1,4-二甲酸酯(2种立体异构体的混合物)
在0℃下，向(顺式)-1-叔丁基4-乙基3-(苄基氨基)哌啶-1,4-二甲酸酯I-3-3(28g，85％纯度，65.7mmol)和乙基2-溴乙酸酯(32g，192mmol)在乙腈(400mL)中的溶液中添加碳酸钾(27g，195mmol)。在90℃下搅拌过夜后，将反应混合物冷却至室温并过滤。将滤液浓缩并通过C18柱(乙腈:水＝5％至100％)纯化以给出呈黄色油状物的标题化合物(10g，得自1H NMR的95％纯度，32％产率)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.28-7.27(m,4H),7.24-7.20(m,1H),4.21-4.10(m,4H),4.05-4.02(m,1H),3.97-3.90(m,2H),3.76-3.67(m,1H),3.63-3.57(m,1H),3.47-3.40(m,1H),3.36-3.29(m,3H),2.97-2.93(m,1H),2.00-1.92(m,1H),1.84-1.72(m,1H),1.46(s,9H),1.26-1.23(m,6H)。
中间体I-3-5：
6-叔丁基3a-乙基1-苄基-3-氧代六氢-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-3a,6(2H)-二甲酸酯(2种立体异构体的混合物)
在0℃下，向(顺式)-1-叔丁基4-乙基3-(苄基(2-乙氧基-2-氧代乙基)氨基)哌啶-1,4-二甲酸酯I-3-4(10g，95％纯度，21.2mmol)在甲苯(100mL)中的溶液中添加叔丁醇钾(3g，26.7mmol)。在0℃下搅拌2小时后，将反应混合物用水(100mL)淬灭并用乙酸乙酯(100mL)萃取三次。将合并的有机层用盐水(200mL)洗涤，经Na2SO4(固体)干燥并过滤。将滤液浓缩并通过硅胶柱(石油醚:乙酸乙酯＝20:1至3:1)纯化以给出呈浅黄色油状物的标题化合物(5.6g，94％纯度，62％产率)。LC-MS(ESI)：RT＝1.77min，1.81min，C22H30N2O5的计算质量402.2，m/z实测值403.1[M+H]+。
中间体I-3-6：
(顺式)-叔丁基1-苄基-3-氧代六氢-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-6(2H)-甲酸酯(2种立体异构体的混合物)
在室温下向6-叔丁基3a-乙基1-苄基-3-氧代六氢-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-3a,6(2H)-二甲酸酯I-3-5(680mg，78％纯度，1.32mmol)在12M盐酸水溶液(10mL)中的溶液。在100℃下搅拌过夜后，将混合物在减压下浓缩至干燥以给出残余物。在0℃下，向该残余物在二氯甲烷(20mL)中的溶液中添加三乙胺(1.3g，12.8mmol)和二碳酸二叔丁酯(600mg，2.75mmol)。在室温下搅拌2小时后，将混合物浓缩并通过硅胶柱(石油醚:乙酸乙酯＝20:1至3:1)纯化以给出呈浅黄色油状物的标题化合物(350mg，得自1H NMR的90％纯度，72％产率)。LC-MS(ESI)：RT＝1.76min，C19H26N2O3的计算质量330.2，m/z实测值331.2[M+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.31-7.20(m,5H),4.23(d,J＝13.2Hz,1H),4.15-4.01(m,1H),3.81-3.52(m,1H),3.38(d,J＝12.8Hz,1H),3.32(dd,J＝14.4Hz,3.2Hz,1H),3.27-3.01(m,3H),2.83(d,J＝18.0Hz,1H),2.56-2.51(m,1H),1.97-1.88(m,1H),1.75-1.67(m,1H),1.53-1.45(m,9H)。
中间体I-3-7：
(顺式)-叔丁基1-苄基-3,3-二氟六氢-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-6(2H)-甲酸酯(2种立体异构体的混合物)
在-78℃下，向(顺式)-叔丁基1-苄基-3-氧代六氢-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-6(2H)-甲酸酯I-3-6(2.6g，95％纯度，7.48mmol)在二氯甲烷(70mL)中的溶液中添加二乙基氨基三氟化硫(5mL，37.8mmol)在二氯甲烷(5mL)中的溶液。在室温下搅拌过夜后，将反应混合物用饱和碳酸氢钠水溶液(50mL)淬灭，并用二氯甲烷(50mL)萃取两次。将合并的有机层用盐水(50mL)洗涤，经Na2SO4(固体)干燥并过滤。将滤液浓缩并通过硅胶色谱法(石油醚:乙酸乙酯＝20:1至5:1)纯化以给出呈浅黄色油状物的标题化合物(1.3g，77％纯度，38％产率)。LC-MS(ESI)：RT＝1.93min，C19H26F2N2O2的计算质量352.2，m/z实测值353.1[M+H]+。
中间体I-3-8：
(顺式)-1-苄基-3,3-二氟八氢-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶盐酸盐(2种立体异构体的混合物)
在室温下，将(顺式)-叔丁基1-苄基-3,3-二氟六氢-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-6(2H)-甲酸酯I-3-7(1.2g，77％纯度，2.62mmol)在乙酸乙酯(10mL)中的4M盐酸中的溶液搅拌1小时。将混合物浓缩以给出呈白色固体的标题化合物(950mg，得自1H NMR的70％纯度，97％产率)。LC-MS(ESI)：RT＝1.53min，C14H18F2N2的计算质量252.1，m/z实测值253.0[M+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ10.9(s,1H),9.71(s,1H),7.72-7.71(m,2H),7.43-7.39(m,3H),5.22-5.05(m,1H),4.70-4.59(m,1H),4.51-4.21(m,3H),3.84-3.72(m,1H),3.63-3.52(m,2H),3.44-3.32(m,2H),2.36-2.25(m,1H),2.20-2.12(m,1H)。
中间体I-3-9：
苄基3-((顺式)-1-苄基-3,3-二氟六氢-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-6(2H)-基)-2,2-二甲基-3-氧代丙酸酯(2种立体异构体的混合物)
向3-(苄氧基)-2,2-二甲基-3-氧代丙酸(180mg，0.810mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(5mL)中的溶液中添加N,N-二异丙基乙胺(0.5mL，3.03mmol)和2-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基脲鎓六氟磷酸盐(380mg，0.999mmol)。将混合物在室温下搅拌30分钟并且然后添加1-苄基-3,3-二氟八氢-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶盐酸盐I-3-8(300mg，70％纯度，0.727mmol)。在室温下搅拌过夜后，将混合物倒入水(20mL)中，并用乙酸乙酯(20mL)萃取两次。将合并的有机层用盐水(30mL)洗涤，经Na2SO4(固体)干燥并过滤。将滤液浓缩并通过硅胶柱色谱法(石油醚:乙酸乙酯＝10:1至5:1)纯化以给出呈无色油状物的标题化合物(250mg，得自1H NMR的80％纯度，60％产率)。LC-MS(ESI)：RT＝1.76min，1.78min，C26H30F2N2O3的计算质量456.2，m/z实测值457.2[M+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.34-7.20(m,10H),5.27(d,J＝11.2Hz,1H),5.08(d,J＝12.4Hz,1H),4.83-4.78(m,1H),4.23-4.20(m,1H),3.61-3.54(m,1H),3.47-3.35(m,2H),3.19-3.02(m,2H),2.92-2.83(m,2H),2.74-2.59(m,2H),2.34-2.26(m,1H),1.46(s,6H)。
中间体I-3-10：
3-((顺式)-3,3-二氟六氢-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-6(2H)-基)-2,2-二甲基-3-氧代丙酸(2种立体异构体的混合物)
向苄基3-((顺式)-1-苄基-3,3-二氟六氢-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-6(2H)-基)-2,2-二甲基-3-氧代丙酸酯I-3-9(160mg，80％纯度，1.58mmol)在异丙醇(3mL)中的溶液中添加活性炭(200mg，12.5mmol)和二乙酸钯(12mg，0.053mmol)。在50℃下在氢气气氛(气囊)下搅拌2小时后，将混合物过滤并将滤液浓缩以给出呈白色固体的标题化合物(75mg，97％产率)。LC-MS(ESI)：RT＝0.22min，C12H18F2N2O3的计算质量276.1，m/z实测值277.0[M+H]+。
化合物I-3-11和I-3：
3-((3aR*,7aR*)-1-(((S)-5-(乙氧基羰基)-6-(3-氟-2-甲基苯基)-2-(噻唑-2-基)-3,6-二氢嘧啶-4-基)甲基)-3,3-二氟六氢-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-6(2H)-基)-2,2-二甲基l-3-氧代丙酸(单一立体异构体)
3-((3aS*,7aS*)-1-(((S)-5-(乙氧基羰基)-6-(3-氟-2-甲基苯基)-2-(噻唑-2-基)-3,6-二氢嘧啶-4-基)甲基)-3,3-二氟六氢-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-6(2H)-基)-2,2-二甲基-3-氧代丙酸(单一立体异构体)
向3-((顺式)-3,3-二氟六氢-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-6(2H)-基)-2,2-二甲基-3-氧代丙酸I-3-10(75mg，0.24mmol)在二氯甲烷(2mL)中的溶液中添加三乙醇胺(200mg，1.34mmol)。在40℃下，添加(S)-乙基6-(溴甲基)-4-(3-氟-2-甲基苯基)-2-(噻唑-2-基)-1,4-二氢嘧啶-5-甲酸酯VIa-1(130mg，95％纯度，0.282mmol)在二氯甲烷(1mL)中的溶液。在40℃下搅拌过夜后，将混合物浓缩并通过制备型HPLC(柱：水-3Xbridge C18(5μm 19*150mm)，流动相A：水(0.1％碳酸氢铵)，流动相B：乙腈，UV：214nm，流速：20mL/min，梯度：35％-70％(％B))纯化以给出呈黄色固体的I-3-11(30mg，97.9％纯度，16％产率)和I-3(35mg，99.3％纯度，19％产率)。
化合物I-3-11：LC-MS(ESI)：RT＝3.499min，C30H34F3N5O5S的计算质量633.2，m/z实测值634.3[M+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.89(s,1H),7.48(d,J＝2.8Hz,1H),7.15-7.10(m,1H),6.98-6.91(m,2H),5.98(s,1H),4.39(d,J＝13.2Hz,1H),4.06-3.80(m,4H),3.55-3.45(m,1H),3.22-2.73(m,4H),2.59-2.54(m,1H),2.50(s,3H),2.04-1.70(m,3H),1.49(s,3H),1.48(s,3H),1.08(t,J＝7.2Hz,3H)。
化合物I-3：LC-MS(ESI)：RT＝3.519min，C30H34F3N5O5S的计算质量633.2，m/z实测值634.3[M+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.53(s,1H),7.93(s,1H),7.48(d,J＝2.8Hz,1H),7.17-7.12(m,1H),7.05-7.03(m,1H),6.94-6.90(m,1H),6.01(s,1H),4.97-4.85(m,1H),4.87(d,J＝14.8Hz,1H),4.09-4.01(m,2H),3.94-3.90(m,2H),3.27-3.12(m,3H),2.93-2.85(m,1H),2.77-2.70(m,1H),2.53(s,3H),2.49-2.43(m,1H),2.05-2.00(m,1H),1.76-1.72(m,1H),1.49(s,3H),1.47(s,3H),1.12(t,J＝7.2Hz,3H)。
化合物I-4：
3-((顺式)-1-(((S)-5-(乙氧基羰基)-6-(3-氟-2-甲基苯基)-2-(噻唑-2-基)-3,6-二氢嘧啶-4-基)甲基)-3,3-二氟六氢-1H-吡咯并[3,2-c]吡啶-5(6H)-基)-2,2-二甲基-3-氧代丙酸(2种立体异构体的混合物)
Figure BDA0003486886640000401
中间体I-4-2：
1-叔丁基3-乙基4-(苄基氨基)-2,3-二氢吡啶-1,3(6H)-二甲酸酯
在室温下，向1-叔丁基3-乙基4-氧代哌啶-1,3-二甲酸酯I-4-1(15g，55.3mmol)和苄胺(6.0g，56.0mmol)在甲苯(150mL)中的溶液中添加对甲苯磺酸一水合物(150mg，0.79mmol)。在140℃下搅拌过夜后，将混合物在减压下浓缩以给出呈棕色固体的标题化合物(16.0g，91％纯度，73％产率)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ9.22(s,1H),7.35-7.32(m,2H),7.27-7.24(m,3H),4.39(d,J＝6.4Hz,2H),4.15(q,J＝7.2Hz,2H),4.10(s,2H),3.47(t,J＝5.6Hz,2H),2.37-2.35(m,2H),1.46(s,9H),1.27(t,J＝7.2Hz,3H)。
中间体I-4-3：
(顺式)-1-叔丁基3-乙基4-(苄基氨基)哌啶-1,3-二甲酸酯(2种立体异构体的混合物)
在0℃下，向1-叔丁基3-乙基4-(苄基氨基)-2,3-二氢吡啶-1,3(6H)-二甲酸酯I-4-2(16.0g，91％纯度，40.4mmol)在乙腈(80mL)和乙酸(60mL)中的溶液中添加三乙酰氧基硼氢化钠(32.0g，151mmol)。在室温下搅拌5小时后，将混合物在减压下浓缩以给出残余物，将该残余物用5.0M氢氧化钠水溶液(200mL)和乙酸乙酯(200mL)稀释。将所得溶液在0℃下伴随剧烈搅拌用1.0M水性氢氧化钠酸化至pH约10并用乙酸乙酯(200mL)萃取两次。将合并的有机层用水(100mL)洗涤两次并用盐水(100mL)洗涤，经Na2SO4(固体)干燥并过滤。将滤液在减压下浓缩以给出呈无色油状物的标题化合物(14.0g，96％产率)。LC-MS(ESI)：RT＝1.78min，C20H30N2O4的计算质量362.5，m/z实测值363.2[M+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.33-7.22(m,5H),4.20-4.07(m,2H),3.87-3.47(m,4H),3.32-3.25(m,1H),3.08-3.04(m,1H),2.95-2.32(m,2H),1.93-1.80(m,1H),1.71-1.60(m,1H),1.46(s,2H),1.44(s,7H),1.30-1.23(m,3H)。
中间体I-4-4：
(顺式)-1-叔丁基-3-乙基-4-(苄基(2-乙氧基-2-氧代乙基)氨基)哌啶-1,3-二甲酸酯(2种立体异构体的混合物)
在室温下，向(顺式)-1-叔丁基3-乙基4(苄基氨基)哌啶-1,3-二甲酸酯I-4-3(14.0g，38.6mmol)和乙基2-溴乙酸酯(14.0g，83.8mmol)在乙腈(250mL)中的溶液中添加碳酸钾(15.0g，108.5mmol)。在85℃下搅拌过夜后，将混合物在减压下浓缩以给出残余物，将该残余物用水(150mL)和乙酸乙酯(200mL)稀释。将有机层分离，并且将水层用乙酸乙酯(200mL)萃取两次。将合并的有机层用水(100mL)洗涤两次并用盐水(100mL)洗涤，经Na2SO4(固体)干燥并过滤。将滤液浓缩并通过硅胶柱色谱法(石油醚:乙酸乙酯＝10:1至5:1)纯化以给出呈无色油状物的标题化合物(17.0g，98％产率)。LC-MS(ESI)：RT＝1.93min，C24H36N2O6的计算质量448.3，m/z实测值449.2[M+H]+。
中间体I-4-5：
(顺式)-5-叔丁基-3a-乙基-1-苄基-3-氧代六氢-1H-吡咯并[3,2-c]吡啶-3a,5(6H)-二甲酸酯(2种立体异构体的混合物)
在0℃下，向(顺式)-1-叔丁基-3-乙基-4-(苄基(2-乙氧基-2-氧代乙基)氨基)哌啶-1,3-二甲酸酯I-4-4(17.0g，37.9mmol)在甲苯(100mL)中的溶液中添加叔丁醇钾(5.7g，50.8mmol)。将混合物在0℃下搅拌2小时后，将混合物用水(100mL)淬灭并用1.0M盐酸水溶液(50mL)酸化。将所得混合物用二氯甲烷(200mL)萃取两次。将合并的有机层用水(100mL)洗涤两次并用盐水(100mL)洗涤，经Na2SO4(固体)干燥并过滤。将滤液浓缩并通过硅胶柱色谱法(石油醚:乙酸乙酯＝10:1至5:1)纯化以给出呈无色油状物的标题化合物(5.0g，84％纯度，28％产率)。LC-MS(ESI)：RT＝1.78min，1.80min，C22H30N2O5的计算质量402.2，m/z实测值403.2[M+H]+。
中间体I-4-6：
(顺式)-叔丁基-1-苄基-3-氧代六氢-1H-吡咯并[3,2-c]吡啶-5(6H)-甲酸酯(2种立体异构体的混合物)
在100℃下，将(顺式)-5-叔丁基-3a-乙基-1-苄基-3-氧代六氢-1H-吡咯并[3,2-c]吡啶-3a,5(6H)-二甲酸酯I-4-5(5.0g，84％纯度，10.4mmol)在浓缩的盐酸水溶液(80mL)中的溶液搅拌过夜。在冷却降至0℃后，将混合物用饱和氢氧化钠水溶液碱化至pH约10。将所得水溶液用四氢呋喃(80mL)稀释并且然后添加二碳酸二叔丁酯(4.8g，22.0mmol)。在40℃下搅拌2小时后，将混合物在减压下浓缩。将残余物用水(30mL)和乙酸乙酯(50mL)稀释。将有机层分离，并且将水层用乙酸乙酯(50mL)萃取两次。将合并的有机层用水(20mL)洗涤两次并用盐水(20mL)洗涤，经Na2SO4(固体)干燥并过滤。将滤液浓缩并通过硅胶柱色谱法(石油醚:乙酸乙酯＝10:1至5:1)纯化以给出呈黄色油状物的标题化合物(2.5g，73％产率)。LC-MS(ESI)：RT＝1.75min，C19H26N2O3的计算质量330.2，m/z实测值331.1[M+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.34-7.29(m,5H),4.04(d,J＝13.2Hz,1H),3.70-3.46(m,4H),3.33-3.17(m,3H),2.73-2.89(m,1H),2.59-2.58(m,1H),1.83-1.79(m,2H),1.46(s,9H)。
中间体I-4-7：
(顺式)-叔丁基1-苄基-3,3-二氟六氢-1H-吡咯并[3,2-c]吡啶-5(6H)-甲酸酯(2种立体异构体的混合物)
在-78℃下，向(顺式)-叔丁基-1-苄基-3-氧代六氢-1H-吡咯并[3,2-c]吡啶-5(6H)-甲酸酯I-4-6(2.5g，7.57mmol)在二氯甲烷(120mL)中的溶液中添加二乙基氨基三氟化硫(6.1g，37.8mmol)。在-78℃下搅拌30分钟后，将混合物升温至室温并且在室温搅拌过夜。将混合物用水(50mL)稀释，用饱和碳酸氢钠水溶液(60mL)碱化，并且用乙酸乙酯(80mL)萃取两次。将合并的有机层用水(20mL)洗涤两次并用盐水(20mL)洗涤，经Na2SO4(固体)干燥并过滤。将滤液浓缩并通过硅胶柱色谱法(石油醚:乙酸乙酯＝10:1至5:1)纯化以给出呈黄色油状物的标题化合物(1.2g，45％产率)。LC-MS(ESI)：RT＝1.94min，C19H26F2N2O2的计算质量352.2，m/z实测值353.1[M+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.34-7.28(m,5H),4.04-3.88(m,2H),3.71-3.68(m,1H),3.47-3.20(m,4H),3.08-3.07(m,1H),2.76-2.65(m,1H),2.49-2.43(m,1H),1.88-1.84(m,1H),1.75-1.69(m,1H),1.47(s,9H)。
中间体I-4-8：
(顺式)-1-苄基-3,3-二氟八氢-1H-吡咯并[3,2-c]吡啶二盐酸盐(2种立体异构体的混合物)
在室温下，将(顺式)-叔丁基1-苄基-3,3-二氟六氢-1H-吡咯并[3,2-c]吡啶-5(6H)-甲酸酯I-4-7(1.2g，3.41mmol)在乙酸乙酯(10mL)中的4.5M盐酸盐中的溶液搅拌2小时并在减压下浓缩以给出呈白色固体的标题化合物(1.1g，85％纯度，84％产率)，将其不经进一步纯化而直接用于下一步。LC-MS(ESI)：RT＝1.46min，C14H18F2N2的计算质量252.1，m/z实测值253.0[M+H]+。
中间体I-4-9：
乙基3-((顺式)-1-苄基-3,3-二氟六氢-1H-吡咯并[3,2-c]吡啶-5(6H)-基)-2,2-二甲基-3-氧代丙酸酯(2种立体异构体的混合物)
在0℃下，向3-乙氧基-2,2-二甲基-3-氧代丙酸(90mg，0.562mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(4mL)中的溶液中添加2-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基脲鎓六氟磷酸盐(260mg，0.684mmol)和三乙胺(180mg，1.78mmol)。将混合物在室温下搅拌30分钟并且然后添加(顺式)-1-苄基-3,3-二氟八氢-1H-吡咯并[3,2-c]吡啶二盐酸盐I-4-8(150mg，85％纯度，0.369mmol)。在室温下搅拌过夜后，将混合物用水(20mL)和乙酸乙酯(30mL)稀释。将有机层分离，并且将水层用乙酸乙酯(30mL)萃取两次。将合并的有机层用水(20mL)洗涤两次并用盐水(20mL)洗涤，经Na2SO4(固体)干燥并过滤。将滤液浓缩并通过硅胶柱色谱法(石油醚:乙酸乙酯＝10:1至5:1)纯化以给出呈无色油状物的标题化合物(150mg，83％纯度，86％产率)。LC-MS(ESI)：RT＝1.847min，C21H28F2N2O3的计算质量394.2，m/z实测值395.2[M+H]+。
中间体I-4-10：
3-((顺式)-1-苄基-3,3-二氟六氢-1H-吡咯并[3,2-c]吡啶-5(6H)-基)-2,2-二甲基-3-氧代丙酸(2种立体异构体的混合物)
在室温下，向乙基3-((顺式)-1-苄基-3,3-二氟六氢-1H-吡咯并[3,2-c]吡啶-5(6H)-基)-2,2-二甲基-3-氧代丙酸酯I-4-9(150mg，83％纯度，0.316mmol)在甲醇(2mL)和水(0.5mL)中的溶液中添加氢氧化钠(110mg，2.75mmol)。在50℃下搅拌4小时后，将混合物在减压下浓缩以除去挥发物。将残余物用水(15mL)稀释，用1M盐酸水溶液(5mL)酸化至pH4-5，并且然后用乙酸乙酯(20mL)萃取两次。将合并的有机层用水(15mL)洗涤两次并用盐水(15mL)洗涤，经Na2SO4(固体)干燥并过滤。将滤液在减压下浓缩以给出呈无色油状物的标题化合物(150mg，75％纯度，97％产率)。LC-MS(ESI)：RT＝1.27min，C19H24F2N2O3的计算质量366.2，m/z实测值367.1[M+H]+。
中间体I-4-11：
3-((顺式)-3,3-二氟六氢-1H-吡咯并[3,2-c]吡啶-5(6H)-基)-2,2-二甲基-3-氧代丙酸(2种立体异构体的混合物)
向3-((顺式)-1-苄基-3,3-二氟六氢-1H-吡咯并[3,2-c]吡啶-5(6H)-基)-2,2-二甲基-3-氧代丙酸I-4-10(120mg，75％纯度，0.246mmol)在异丙醇(4mL)中的溶液中添加乙酸钯(II)(110mg，0.49mmol)和活性炭(70mg，4.36mmol)。在50℃下在氢气囊下将混合物搅拌3小时。将催化剂滤出，并且将滤液浓缩以给出呈无色油状物的标题化合物(70mg，71％纯度，73％产率)。LC-MS(ESI)：RT＝0.27min，C12H18F2N2O3的计算质量276.1，m/z实测值277.0[M+H]+。
化合物I-4：
3-((顺式)-1-(((S)-5-(乙氧基羰基)-6-(3-氟-2-甲基苯基)-2-(噻唑-2-基)-3,6-二氢嘧啶-4-基)甲基)-3,3-二氟六氢-1H-吡咯并[3,2-c]吡啶-5(6H)-基)-2,2-二甲基-3-氧代丙酸(2种立体异构体的混合物)
在室温下在氢气气氛下，向3-((顺式)-3,3-二氟六氢-1H-吡咯并[3,2-c]吡啶-5(6H)-基)-2,2-二甲基-3-氧代丙酸I-4-11(70mg，0.159mmol，71％纯度)在二氯甲烷(4mL)中的溶液中添加三乙醇胺(250mg，1.68mmol)。将所得混合物在氮气气氛下在40℃下搅拌30分钟后，并且然后添加(S)-乙基6-(溴甲基)-4-(3-氟-2-甲基苯基)-2-(噻唑-2-基)-1,4-二氢嘧啶-5-甲酸酯VIa-1(90mg，95％纯度，0.195mmol)。在氮气气氛下在40℃下搅拌过夜后，将混合物在减压下浓缩以给出残余物，将该残余物溶解在乙酸乙酯(30mL)中。将所得溶液用水(15mL)洗涤两次。将合并的水层用乙酸乙酯(20mL)萃取两次。将合并的有机层用水(10mL)洗涤两次并用盐水(10mL)洗涤，经Na2SO4(固体)干燥并过滤。将滤液浓缩并通过C18柱(乙腈:水＝35％至55％)纯化以给出呈黄色固体的标题化合物(16.8mg，99.8％纯度，14％产率)。LC-MS(ESI)：RT＝3.937min，C30H34F3N5O5S的计算质量633.2，m/z实测值634.4[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.60(s,0.5H),9.46(s,0.5H),8.00(d,J＝1.6Hz,0.5H),7.95(d,J＝3.2Hz,0.5H),7.93(d,J＝3.2Hz,1H),7.21-7.17(m,1H),7.08-7.02(m,2H),5.90-5.87(m,0.8H),5.78-5.76(m,0.2H),4.25-4.12(m,2H),4.01-3.95(m,2H),3.72-3.64(m,0.6H),3.52-3.44(m,1.4H),3.29-3.12(m,5H),3.00-2.86(m,1H),2.45(s,2H),2.40(s,1H),1.99-1.64(m,2H),1.28-1.25(m,6H),1.09-1.03(m,3H)。
化合物I-5：3-((3aR*,7aR*)-1-(((S)-5-(乙氧基羰基)-6-(3-氟-2-甲基苯基)-2-(噻唑-2-基)-3,6-二氢嘧啶-4-基)甲基)-3,3-二氟-4-氧代六氢-1H-吡咯并[3,2-c]吡啶-5(6H)-基)-2,2-二甲基丙酸(单一立体异构体)
Figure BDA0003486886640000451
中间体I-5-1：
(顺式)-叔丁基3,3-二氟六氢-1H-吡咯并[3,2-c]吡啶-5(6H)-甲酸酯(2种立体异构体的混合物)
在40℃下在氢气气氛(气囊)下，向(顺式)-叔丁基1-苄基-3,3-二氟六氢-1H-吡咯并[3,2-c]吡啶-5(6H)-甲酸酯I-4-7(2.3g，85％纯度，5.55mmol)在异丙醇(60mL)中的混合物中添加乙酸钯(1.1g，4.90mmol)和活性炭(850mg，70.8mmol)并且然后将混合物搅拌2小时。将催化剂滤出并用甲醇/水(10/1，20mL)的溶液洗涤。将滤液在减压下浓缩以给出呈黄色油状物的标题化合物(1.5g，得自1HNMR的80％纯度，82％产率)。LC-MS(ESI)：RT＝1.44min，C12H20F2N2O2的计算质量262.1，m/z实测值263.1[M+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ4.06-3.73(m,1H),3.68-3.57(m,1H),3.54-3.47(m,1H),3.44-2.87(m,4H),2.53-2.33(m,1H),1.91-1.76(m,1H),1.73-1.59(m,1H),1.46(s,9H)。
中间体I-5-2：
(顺式)-1-苄基5-叔丁基3,3-二氟六氢-1H-吡咯并[3,2-c]吡啶-1,5(6H)-二甲酸酯(2种立体异构体的混合物)
在0℃下，向(顺式)-叔丁基3,3-二氟六氢-1H-吡咯并[3,2-c]吡啶-5(6H)-甲酸酯I-5-1(1.5g，80％纯度，4.58mmol)和三乙胺(1.4g，13.8mmol)在二氯甲烷(50mL)中的溶液中滴加在二氯甲烷(10mL)中的氯甲酸苄酯(1.1g，6.45mmol)。在室温下搅拌过夜后，将反应混合物在减压下浓缩以给出残余物。将残余物溶解在乙酸乙酯(150mL)和水(150mL)中。将有机层分离，并将水层用乙酸乙酯(150mL)萃取。将合并的有机层用盐水(150mL)洗涤两次，经Na2SO4(固体)干燥并过滤。将滤液浓缩并通过硅胶柱色谱法(石油醚:乙酸乙酯＝15:1至5:1)纯化以给出呈黄色油状物的标题化合物(1.25g，得自1H NMR的90％纯度，62％产率)。LC-MS(ESI)：RT＝1.75min，C20H26F2N2O4的计算质量396.2，m/z实测值341.1[MH-56]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.39-7.31(m,5H),5.18-5.11(m,2H),4.29-4.11(m,2H),3.97-3.68(m,3H),3.53-3.15(m,1H),3.06-2.36(m,2H),1.92-1.61(m,2H),1.45(s,9H)。
中间体I-5-3：
(顺式)-苄基3,3-二氟八氢-1H-吡咯并[3,2-c]吡啶-1-甲酸酯盐酸盐(2种立体异构体的混合物)
在室温下，将(顺式)-1-苄基5-叔丁基3,3-二氟六氢-1H-吡咯并[3,2-c]吡啶-1,5(6H)-二甲酸酯I-5-2(1.5g，98％纯度，3.71mmol)在乙酸乙酯(40mL)中的4M盐酸盐中的溶液搅拌2小时。将溶剂去除以给出呈黄色固体的标题化合物(1.28g，得自1H NMR的90％纯度，93％产率)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ10.15(s,1H),9.48-8.97(m,1H),7.40-7.33(m,5H),5.18-5.10(m,2H),4.28-4.16(m,1H),3.91-3.85(m,2H),3.49-3.23(m,3H),3.18-2.59(m,3H),2.43-2.24(m,1H)。
中间体I-5-4：
(顺式)-苄基3,3-二氟-5-(3-((4-甲氧基苄基)氧基)-2,2-二甲基-3-氧代丙基)八氢-1H-吡咯并[3,2-c]吡啶-1-甲酸酯(2种立体异构体的混合物)
向(顺式)-苄基3,3-二氟八氢-1H-吡咯并[3,2-c]吡啶-1-甲酸酯盐酸盐I-5-3(1.28g，90％纯度，3.46mmol)在二氯甲烷(30mL)中的混合物中添加三乙胺(2.2mL，15.8mmol)。将混合物在室温下搅拌0.5小时，并且然后添加4-甲氧基苄基2,2-二甲基-3-氧代丙酸酯I-1-3(1.72g，95％纯度，6.92mmol)、乙酸(1.9mL，33.2mmol)和在二氯甲烷(6.9mL，6.9mmol)中的1M氯三异丙氧基钛。将反应混合物在室温下再搅拌1小时，然后添加三乙酰氧基硼氢化钠(3.7g，17.5mmol)。在室温下搅拌过夜后，将反应混合物用饱和碳酸氢钠水溶液(100mL)淬灭并用二氯甲烷(100mL)萃取两次。将合并的有机层用盐水(200mL)洗涤两次，经Na2SO4(固体)干燥并过滤。将滤液浓缩并通过C18柱(乙腈:水(0.1％碳酸氢铵)＝20％至80％)纯化以给出呈黄色油状物的标题化合物(1.56g，得自1H NMR的90％纯度，79％产率)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.40-7.31(m,5H),7.29-2.27(m,2H),6.87(d,J＝8.4Hz,2H),5.17-5.09(m,2H),5.07-4.99(m,2H),3.98-3.86(m,1H),3.75-3.67(m,5H),2.72-2.51(m,2H),2.46(s,2H),2.43-2.20(m,3H),2.10-1.67(m,2H),1.15(s,6H)。
中间体I-5-5和I-5-6：
(顺式)-苄基3,3-二氟-5-(3-((4-甲氧基苄基)氧基)-2,2-二甲基-3-氧代丙基)-6-氧代八氢-1H-吡咯并[3,2-c]吡啶-1-甲酸酯(2种立体异构体的混合物)
(顺式)-苄基3,3-二氟-5-(3-((4-甲氧基苄基)氧基)-2,2-二甲基-3-氧代丙基)-4-氧代八氢-1H-吡咯并[3,2-c]吡啶-1-甲酸酯(2种立体异构体的混合物)
向(顺式)-苄基3,3-二氟-5-(3-((4-甲氧基苄基)氧基)-2,2-二甲基-3-氧代丙基)八氢-1H-吡咯并[3,2-c]吡啶-1-甲酸酯I-5-4(1.55g，90％纯度，2.70mmol)在四氯化碳(40mL)和水(40mL)中的混合物中添加三氯化钌(900mg，37％纯度，1.61mmol)和高碘酸钠(3.12g，14.6mmol)。在室温下搅拌过夜后，将混合物过滤并用二氯甲烷(100mL)洗涤。将滤液用水(200mL)洗涤两次，经Na2SO4(固体)干燥并过滤。将滤液浓缩并通过硅胶柱色谱法(石油醚:乙酸乙酯＝10:1至2:1)纯化以给出呈黄色油状物的I-5-5和I-5-6的混合物(700mg，76％纯度，37％产率)。LC-MS(ESI)：RT＝1.801min，C28H32F2N2O6的计算质量530.2，m/z实测值531.2[M+H]+。
将I-5-5和I-5-6的混合物(700mg，76％纯度，1.00mmol)通过手性制备型HPLC(分离条件：柱：Chiralpak IE 5um 20*250mm；流动相：Hex:EtOH＝40:60，以10mL/min；温度：30℃；波长：214nm)分离以给出呈黄色油状物的I-5-5(154mg，得自1H NMR的90％纯度，26％产率)和I-5-6(355mg，得自1H NMR的90％纯度，60％产率)。
中间体I-5-5：手性分析(柱：Chiralpak IE 5μm 4.6*250nm；流动相：Hex:EtOH＝40:60，以1mL/min；温度：30℃；波长：230nm，RT＝9.187min)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.41-7.31(m,7H),6.88(d,J＝8.4Hz,2H),5.22-5.00(m,4H),4.62-4.38(m,1H),4.15-3.84(m,2H),3.80(s,3H),3.47-3.03(m,4H),2.84-2.51(m,3H),1.20(s,3H),1.16(s,3H)。
中间体I-5-6：手性分析(柱：Chiralpak IE 5μm 4.6*250nm；流动相：Hex:EtOH＝40:60，以1mL/min；温度：30℃；波长：230nm，RT＝11.960min，12.214min)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.43-7.28(m,7H),6.88(d,J＝6.8Hz,2H),5.21-5.02(m,4H),4.35-4.14(m,1H),3.84-3.56(m,7H),3.40-3.25(m,1H),3.11-2.93(m,2H),2.14-1.96(m,1H),1.70-1.62(m,1H),1.21(s,3H),1.19(s,3H)。
中间体I-5-6a和I-5-6b：
(3aR*,7aR*)-苄基3,3-二氟-5-(3-((4-甲氧基苄基)氧基)-2,2-二甲基-3-氧代丙基)-4-氧代八氢-1H-吡咯并[3,2-c]吡啶-1-甲酸酯(单一立体异构体)
(3aS*,7aS*)-苄基3,3-二氟-5-(3-((4-甲氧基苄基)氧基)-2,2-二甲基-3-氧代丙基)-4-氧代八氢-1H-吡咯并[3,2-c]吡啶-1-甲酸酯(单一立体异构体)
将(顺式)-苄基3,3-二氟-5-(3-((4-甲氧基苄基)氧基)-2,2-二甲基-3-氧代丙基)-4-氧代八氢-1H-吡咯并[3,2-c]吡啶-1-甲酸酯I-5-6(310mg，90％纯度，0.526mmol)通过手性制备型HPLC(分离条件：柱：Chiralpak IG 5um 20*250mm；流动相：MeOH:DCM＝80:20，以15mL/min；温度：30℃；波长：214nm)分离以给出呈黄色油状物的I-5-6a(148mg，得自1H NMR的90％纯度，48％产率)和I-5-6b(144mg，从1H NMR得到的90％纯度，46％产率)。
中间体I-5-6a：手性分析(柱：Chiralpak IG 5μm 4.6*250nm；流动相：MeOH:DCM＝80:20，以1mL/min；温度：30℃；波长：214nm，RT＝5.513min)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.40-7.34(m,5H),7.29(d,J＝7.6Hz,2H),6.87(d,J＝7.6Hz,2H),5.16-5.02(m,4H),4.30-4.18(m,1H),3.85-3.49(m,7H),3.38-3.25(m,1H),3.04-2.99(m,2H),2.14-1.96(m,1H),1.75-1.68(m,1H),1.21(s,3H),1.19(s,3H)。
中间体I-5-6b：手性分析(柱：Chiralpak IG 5μm 4.6*250nm；流动相：MeOH:DCM＝80:20，以1mL/min；温度：30℃；波长：214nm，RT＝7.038min)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.39-7.28(m,7H),6.87(d,J＝6.8Hz,2H),5.16-5.02(m,4H),4.34-4.14(m,1H),3.88-3.56(m,7H),3.40-3.23(m,1H),3.04-2.99(m,2H),2.04-1.91(m,1H),1.70-1.62(m,1H),1.21(s,3H),1.19(s,3H)。
中间体I-5-7a：
3-((3aR*,7aR*)-3,3-二氟-4-氧代六氢-1H-吡咯并[3,2-c]吡啶-5(6H)-基)-2,2-二甲基丙酸(单一立体异构体)
在室温下，向(3aR*,7aR*)苄基3,3-二氟-5-(3-((4-甲氧基苄基)氧基)-2,2-二甲基-3-氧代丙基)-4-氧代八氢-1H-吡咯并[3,2-c]吡啶-1-甲酸酯I-5-6a(80mg，90％纯度，0.136mmol)在四氢呋喃(1.4mL)和异丙醇(1.4mL)中的溶液中添加20％氢氧化钯炭(100mg)。在50℃下在氢气气氛(15psi)下搅拌2小时后，将混合物冷却降至室温并过滤。将滤液浓缩以给出呈白色固体的标题化合物(41mg，得自1H NMR的90％纯度，98％产率)。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ4.11(br s,1H),3.72(d,J＝13.6Hz,1H),3.64-3.46(m,3H),3.25-3.06(m,2H),3.00-2.87(m,1H),2.08-1.95(m,1H),1.81-1.66(m,1H),1.08(s,3H),1.07(s,3H)。
化合物I-5：
3-((3aR*,7aR*)-1-(((S)-5-(乙氧基羰基)-6-(3-氟-2-甲基苯基)-2-(噻唑-2-基)-3,6-二氢嘧啶-4-基)甲基)-3,3-二氟-4-氧代六氢-1H-吡咯并[3,2-c]吡啶-5(6H)-基)-2,2-二甲基丙酸(单一立体异构体)
在40℃下，将3-((3aR*,7aR*)-3,3-二氟-4-氧代六氢-1H-吡咯并[3,2-c]吡啶-5(6H)-基)-2,2-二甲基丙酸I-5-7a(33mg，90％纯度，0.107mmol)和三乙醇胺(180mg，1.21mmol)在二氯甲烷(2mL)中的溶液搅拌30分钟并且然后添加(S)-乙基6-(溴甲基)-4-(3-氟-2-甲基苯基)-2-(噻唑-2-基)-1,4-二氢嘧啶-5-甲酸酯VIa-1(52mg，95％纯度，0.113mmol)。在40℃下搅拌16小时后，将混合物冷却降至室温并倒入水(10mL)中。将所得混合物用0.5M盐酸水溶液(2mL)酸化至pH约3并且然后用二氯甲烷(10mL)萃取三次。将合并的有机层用盐水(20mL)洗涤，经Na2SO4(固体)干燥并过滤。将滤液浓缩并通过制备型HPLC(柱：X-bridge C18；柱尺寸：(5um 19*150mm)；流动相A：水(+0.1％碳酸氢铵)，流动相B：乙腈，UV：254nm，流速：15mL/min，梯度：20％-70％(％B))纯化以给出呈黄色固体的标题化合物(18mg，96.8％纯度，26％产率)。LC-MS(ESI)：RT＝2.675min，C30H34F3N5O5S的计算质量633.2，m/z实测值634.3[M+H]+。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ7.95(d,J＝3.6Hz,1H),7.72(d,J＝2.8Hz,1H),7.18-7.10(m,2H),6.97-6.93(m,1H),6.00(s,1H),4.41-4.28(m,1H),4.12-4.04(m,4H),3.91-3.85(m,1H),3.60-3.48(m,3H),3.35-3.33(m,2H),3.07-2.86(m,1H),2.52(s,3H),2.14-2.01(m,1H),2.00-1.86(m,1H),1.29(s,3H),1.26(s,3H),1.13(t,J＝7.6Hz,3H)。
化合物I-6：3-((3aS*,7aR*)-1-(((S)-5-(乙氧基羰基)-6-(3-氟-2-甲基苯基)-2-(噻唑-2-基)-3,6-二氢嘧啶-4-基)甲基)-3,3-二氟六氢-1H-吡咯并[3,2-c]吡啶-5(6H)-基)-2,2-二甲基丙酸(单一立体异构体)
Figure BDA0003486886640000501
中间体I-6-1：
4-甲氧基苄基3-((顺式)-1-苄基-3,3-二氟六氢-1H-吡咯并[3,2-c]吡啶-5(6H)-基)-2,2-二甲基丙酸酯(2种立体异构体的混合物)
向(顺式)-1-苄基-3,3-二氟八氢-1H-吡咯并[3,2-c]吡啶二盐酸盐I-4-8(600mg，78％纯度，1.44mmol)在二氯甲烷(25mL)中的溶液中添加三乙胺(450mg，4.45mmol)。将反应在室温下搅拌0.5小时，并且然后添加4-甲氧基苄基2,2-二甲基-3-氧代丙酸酯I-1-3(1.0g，90％纯度，3.81mmol)、乙酸(0.5mL，8.74mmol)和在四氢呋喃中的1M氯三异丙氧基钛(3mL，3.00mmol)。将所得混合物在室温下搅拌再1小时，并且然后添加三乙酰氧基硼氢化钠(1.5g，7.08mmol)。在室温下搅拌过夜后，将反应混合物用饱和碳酸氢钠水溶液(100mL)淬灭并用二氯甲烷(100mL)萃取两次。将合并的有机层用盐水(200mL)洗涤两次，经Na2SO4(固体)干燥并过滤。将滤液浓缩并通过硅胶柱色谱法(石油醚:乙酸乙酯＝20:1至2:1)纯化以给出呈黄色固体的标题化合物(400mg，得自1H NMR的90％纯度，53％产率)。LC-MS(ESI)：RT＝2.08min，C27H34F2N2O3的计算质量472.3，m/z实测值473.2[M+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.33-7.22(m,7H),6.87(d,J＝8.4Hz,2H),5.08-5.01(m,2H),3.99(d,J＝13.6Hz,1H),3.79(s,3H),3.29-3.15(m,2H),2.88(br s,1H),2.65-2.46(m,5H),2.42-2.28(m,3H),1.74-1.64(m,2H),1.17(s,6H)。
中间体I-6-1a和I-6-1b：
4-甲氧基苄基3-((3aS*,7aR*)-1-苄基-3,3-二氟六氢-1H-吡咯并[3,2-c]吡啶-5(6H)-基)-2,2-二甲基丙酸酯(单一立体异构体)
4-甲氧基苄基3-((3aR*,7aS*)-1-苄基-3,3-二氟六氢-1H-吡咯并[3,2-c]吡啶-5(6H)-基)-2,2-二甲基丙酸酯(单一立体异构体)
将4-甲氧基苄基3-((顺式)-1-苄基-3,3-二氟六氢-1H-吡咯并[3,2-c]吡啶-5(6H)-基)-2,2-二甲基丙酸酯I-6-1(250mg，90％纯度，0.476mmol)的外消旋混合物通过手性制备型HPLC(分离条件：柱：Chiralpak IE 5um 20*250mm；流动相：Hex:EtOH＝98:2，以18mL/min；温度：30℃；波长；230nm)分离以给出呈黄色固体的I-6-1a(100mg，100％纯度，44％产率，94.7％ee)和I-6-1b(70mg，98％纯度，31％产率，98.9％ee)。
中间体I-6-1a：LC-MS(ESI)：RT＝2.19min，C27H34F2N2O3的计算质量472.2，m/z实测值473.2[M+H]+。手性分析(柱：Chiralpak IC 5μm 4.6*250mm；流动相：Hex:EtOH＝98:2，以1mL/min；温度：30℃；波长：230nm，RT＝6.477min)。
中间体I-6-1b：LC-MS(ESI)：RT＝2.19min，C27H34F2N2O3的计算质量472.2，m/z实测值473.2[M+H]+。手性分析(柱：Chiralpak IC 5μm 4.6*250mm；流动相：Hex:EtOH＝98:2，以1mL/min；温度：30℃；波长：230nm，RT＝7.253min)。
中间体I-6-2a：
3-((3aS*,7aR*)-3,3-二氟六氢-1H-吡咯并[3,2-c]吡啶-5(6H)-基)-2,2-二甲基丙酸(单一立体异构体)
向4-甲氧基苄基3-((3aS*,7aR*)-1-苄基-3,3-二氟六氢-1H-吡咯并[3,2-c]吡啶-5(6H)-基)-2,2-二甲基丙酸酯I-6-1a(100mg，100％纯度，0.212mmol)在异丙醇(5mL)中的混合物中添加乙酸钯(50mg，0.260mmol)和活性炭(24mg，2.00mmol)。将混合物在60℃下在氢气气氛(60psi)下搅拌过夜。将催化剂滤出并用甲醇/水(10/1，20mL)的溶液洗涤。将滤液在减压下浓缩以给出呈黄色油状物的标题化合物(42mg，得自1H NMR的90％纯度，68％产率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ3.28-3.17(m,4H),2.62-2.58(m,1H),2.46-2.44(m,3H),2.34-2.20(m,2H),1.75-1.66(m,1H),1.52-1.49(m,1H),1.06(s,3H),1.05(s,3H)。
化合物I-6：
3-((3aS*,7aR*)-1-(((S)-5-(乙氧基羰基)-6-(3-氟-2-甲基苯基)-2-(噻唑-2-基)-3,6-二氢嘧啶-4-基)甲基)-3,3-二氟六氢-1H-吡咯并[3,2-c]吡啶-5(6H)-基)-2,2-二甲基丁酸(单一立体异构体)
将3-((3aS*,7aR*)-3,3-二氟六氢-1H-吡咯并[3,2-c]吡啶-5(6H)-基)-2,2-二甲基丙酸I-6-2a(42mg，90％纯度，0.144mmol)和三乙醇胺(210mg，1.408mmol)在二氯甲烷(3mL)中的混合物在25℃下搅拌0.5小时并且然后添加(S)-乙基6-(溴甲基)-4-(3-氟-2-甲基苯基)-2-(噻唑-2-基)-1,4-二氢嘧啶-5-甲酸酯VIa-1(105mg，95％纯度，0.228mmol)。在40℃下搅拌8小时后，将反应混合物用二氯甲烷(5mL)稀释，用盐水(5mL)洗涤两次，经Na2SO4(固体)干燥并过滤。将滤液浓缩并通过C18柱(乙腈:水＝30％至95％)纯化以给出呈黄色固体的标题化合物(21mg，98％纯度，23％产率)。LC-MS(ESI)：RT＝3.683min，C30H36F3N5O4S的计算质量619.2，m/z实测值620.4[M+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ9.37(br s,1H),7.80(d,J＝3.2Hz,1H),7.47(d,J＝3.2Hz,1H),7.09-7.04(m,1H),6.96-6.89(m,2H),6.03(s,1H),4.32(d,J＝17.2Hz,1H),4.10-3.98(m,3H),3.60-3.49(m,1H),3.36-3.29(m,1H),3.12-3.06(m,1H),2.95-2.86(m,4H),2.79-2.73(m,1H),2.67(s,2H),2.54(s,3H),2.08-1.97(m,2H),1.29(s,3H),1.27(s,3H),1.11(t,J＝7.2Hz,3H)。
根据上文描述的合成程序、或类似的合成程序制备以下化合物：
表1.
Figure BDA0003486886640000521
实例2：HepG2.2.15细胞中的抗病毒测定
材料和设备
1)细胞系
HepG2.2.15(该HepG2.2.15细胞系可以通过转染HepG2细胞系产生，如Sells,Chen和Acs 1987(Proc.Natl.Acad.Sci.USA[美国国家科学院院刊]84:1005-1009)所述的，并且该HepG2细胞系可以从
Figure BDA0003486886640000531
在编号HB-8065TM下获得。
2)试剂
DMEM/F12(英杰公司(INVITROGEN)-11330032)
FBS(GIBCO公司-10099-141)
二甲亚砜(DMSO)(西格玛公司(SIGMA)-D2650)
青霉素-链霉素溶液(HYCLONE公司-SV30010)
NEAA(英杰公司-1114050)
L-谷氨酰胺(英杰公司-25030081)
遗传霉素选择性抗生素(G418，500mg/ml)(英杰公司-10131027)
胰蛋白酶消化液(英杰公司-25300062)
CCK8(BIOLOTE公司-35004)
QIAamp 96DNA血液试剂盒(12)(凯杰公司(QIAGEN)-51162)
FastStart通用探针Mast Mix(罗氏公司(ROCHE)-04914058001)
3)耗材
96孔细胞培养板(科斯塔公司(COSTAR)-3599)
Micro Amp Optical 96孔反应板(应用生物系统公司(APPLIED BIOSYSTEMS)-4306737)
Micro Amp Optical 384孔反应板(应用生物系统公司)
4)设备
读板器(分子设备公司(MOLECULAR DEVICES)，SPECTRAMAX M2e)
离心机(贝克曼公司(BECKMAN)，ALLEGRA-X15R)
实时PCR系统(应用生物系统公司，QUANTSTUDIO 6)
实时PCR系统(应用生物系统公司，7900HT)
方法
1)抗HBV活性和细胞毒性测定
将HepG2.2.15细胞以40,000个细胞/孔和5,000个细胞/孔的密度铺到96孔板中的2％FBS培养基中，分别用于HBV抑制剂活性和细胞毒性测定。在37℃、5％CO2下孵育过夜后，将细胞用含有化合物的培养基处理6天(处理3天后更新培养基和化合物)。将每种化合物在一式三份的8种不同浓度的1:3连续稀释液中进行测试。针对抗HBV活性测定，化合物的最高浓度是10uM或1uM，针对细胞毒性测定，其最高浓度是100uM。
通过CCK-8测定法来测定细胞活力。化合物处理6天后，将20μl CCK-8试剂添加至细胞毒性测定板中的每个孔中。将细胞培养板在37℃、5％CO2中孵育2.5h。测量450nm波长处的吸光度和630nm波长处的吸光度(后者为参考吸光度)。
通过定量实时聚合酶链式反应(qPCR)评估化合物诱导的HBV DNA水平的变化。简言之，根据手册使用QIAamp 96DNA血液试剂盒提取培养基中的HBV DNA，然后使用下表1中的引物和探针通过实时PCR测定来定量。
表2：
Figure BDA0003486886640000541
2)数据分析
通过GRAPHPAD PRISM软件计算EC50和CC50值。如果DMSO对照的CV％低于15％并且参考化合物显示预期的活性或细胞毒性，则认为此批实验的数据是合格的。
结果：参见下表3。
表3：
Figure BDA0003486886640000542
如表3所示的效能数据，所有这些化合物都显示出对HBV HepG2.2.15细胞的高效体外活性。
序列表
<110> 杨森科学爱尔兰无限公司
强生（中国）投资有限公司
<120> 二氢嘧啶衍生物及其在治疗HBV感染或HBV诱发疾病中的用途
<130> P2020TC1181
<150> PCT/CN2019/098571
<151> 2019-07-31
<160> 3
<170> PatentIn 3.5版
<210> 1
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 1
gtgtctgcgg cgttttatca 20
<210> 2
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 2
gacaaacggg caacatacct t 21
<210> 3
<211> 28
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 探针
<400> 3
cctctkcatc ctgctgctat gcctcatc 28

Claims (16)

1.一种具有式(I)的化合物
Figure FDA0003486886630000011
包括其氘化的、立体异构或互变异构形式，其中：
R1、R2和R3各自独立地选自由以下组成的组：H、卤代、OH和C1-3烷基；
R4选自由以下组成的组：噻唑基、咪唑基、噁唑基和吡啶基，其各自可以任选地被各自独立地选自甲基或卤代的一个或多个取代基取代；
R5是C1-4烷基；
R6和R7各自独立地选自由H和卤代组成的组；
R8和R9各自独立地选自由H和卤代组成的组；或者R8和R9连同它们所附接的碳原子一起形成C(＝O)；
X选自由以下组成的组：CHR10a、C(＝O)和NR10b；
Y选自由以下组成的组：CHR11a、C(＝O)和NR11b；
Z选自由以下组成的组：CHR12a、C(＝O)、NR12b和O；其中
R10a、R10b、R11a、R11b、R12a和R12b各自独立地选自由以下组成的组：H；-CN；-C1-9烷基-COORx；-Cy-COORx；-C1-6烷基-Cy-COORx；-Cy-C1-6烷基-COORx；-C(＝O)-C1-6烷基-COORx；-Cy-OH；-C1-6烷基-O-C1-6烷基-COORx；-C(＝O)-NRaRb；和-S(＝O)2-NRc-C(＝O)-C1-6烷基；其中
在每种情况下，C1-6烷基和C1-9烷基可以任选地被各自独立地选自卤代和羟基的一个或多个取代基取代；
Rx选自H和-C1-6烷基；
Ra、Rb和Rc各自独立地选自H和-C1-4烷基；并且
Cy表示任选地被C1-4烷基取代基取代的C3-7环烷基；
条件是
CR8R9、Y或Z中高达两个可以是C(＝O)，条件是CR8R9和X、或X和Y、或Y和Z不同时是C(＝O)；
或其药学上可接受的盐或溶剂化物。
2.根据权利要求1所述的化合物，其中
R1、R2和R3各自独立地选自由以下组成的组：H、卤代和C1-3烷基；
R4选自由以下组成的组：噻唑基、咪唑基、噁唑基和吡啶基，其各自可以任选地被各自独立地选自甲基或卤代的一个或多个取代基取代；
R5是C1-4烷基；
R6和R7各自独立地选自由H和卤代组成的组；
R8和R9各自独立地选自由H和卤代组成的组；或者R8和R9连同它们所附接的碳原子一起形成C(＝O)；
X选自由以下组成的组：CHR10a、C(＝O)和NR10b；
Y选自由以下组成的组：CHR11a、C(＝O)和NR11b；
Z选自由以下组成的组：CHR12a 2、C(＝O)、NR12b和O；其中
R10a、R10b、R11a、R11b、R12a和R12b各自独立地选自由以下组成的组：H；-C1-9烷基-COORx；-Cy-COORx；-C1-6烷基-Cy-COORx；-C(＝O)-C1-6烷基-COORx；-Cy-OH；和-C1-6烷基-O-C1-6烷基-COORx；其中
在每种情况下，C1-6烷基可以任选地被各自独立地选自卤代和羟基的一个或多个取代基取代；
Rx选自H和-C1-6烷基；特别地，H和-C1-4烷基；并且
Cy表示任选地被C1-4烷基取代基取代的C3-7环烷基。
3.根据权利要求1或2所述的化合物，其中
R1、R2和R3各自独立地选自由以下组成的组：H、卤代和C1-3烷基；
R4选自由以下组成的组：噻唑基、咪唑基、和噁唑基，其各自可以任选地被一个甲基取代基取代；
R5是C1-4烷基；
R6和R7各自独立地选自由H和卤代组成的组；
R8和R9各自独立地选自由H和卤代组成的组；或者R8和R9连同它们所附接的碳原子一起形成C(＝O)；
X选自由以下组成的组：CH2、C(＝O)和NR10b；
Y选自由以下组成的组：CH2、C(＝O)和NR11b；
Z选自由以下组成的组：CH2、C(＝O)、NR12b和O；其中
R10b、R11b和R12b各自独立地选自由以下组成的组：H；-C1-9烷基-COORx；-Cy-COORx；-C1-6烷基-Cy-COORx；和-C(＝O)-C1-6烷基-COORx；其中
Cy表示C3-7环烷基。
4.根据权利要求1至3中任一项所述的化合物，其中
R1、R2和R3各自独立地选自由以下组成的组：H、卤代、OH、和甲基。
5.根据权利要求1至4中任一项所述的化合物，其中
R4选自由以下组成的组：噻唑基、咪唑基、噁唑基和吡啶基，其各自可以任选地被一个甲基取代基取代。
6.根据权利要求1至5中任一项所述的化合物，其中
R5是甲基、乙基或异丙基。
7.根据权利要求1至6中任一项所述的化合物，其中
R6和R7各自独立地选自氢和氟。
8.根据权利要求1至7中任一项所述的化合物，其中
X选自由以下组成的组：CH2、C(＝O)和NR10b；Y选自由以下组成的组：CH2、C(＝O)和NR11b；并且Z选自由以下组成的组：CH2、C(＝O)、NR12b和O；其中
R10b、R11b和R12b各自独立地选自由以下组成的组：-C1-9烷基-COOH；-Cy-COOH；-C1-6烷基-Cy-COOH；-C(＝O)-C1-6烷基-COOH；-Cy-OH；和-C1-6烷基-O-C1-6烷基-COOH；其中
在每种情况下，C1-6烷基可以任选地被各自独立地选自卤代和羟基的一个或多个取代基取代；并且
Cy表示任选地被C1-4烷基取代基取代的C3-7环烷基并且其余的变量是如本文所定义的。
9.根据权利要求1至8中任一项所述的化合物，其选自由以下化合物组成的组：
Figure FDA0003486886630000041
10.一种药物组合物，该药物组合物包含根据权利要求1至9中任一项所述的化合物并进一步包含至少一种药学上可接受的载体。
11.根据权利要求1至9中任一项所述的化合物或根据权利要求10所述的药物组合物，用作药物。
12.根据权利要求1至9中任一项所述的化合物或根据权利要求10所述的药物组合物，用于在有需要的哺乳动物的HBV感染或HBV诱发的疾病的预防或治疗中使用。
13.一种包含第一化合物和第二化合物的产品，该第一化合物和第二化合物作为组合制剂用于在有需要的哺乳动物的HBV感染或HBV诱发的疾病的预防或治疗中同时、分开或顺序使用，其中所述第一化合物不同于所述第二化合物，其中所述第一化合物是根据权利要求1至9中任一项所述的化合物或根据权利要求10所述的药物组合物。
14.一种用于产生具有式(I)的化合物的方法，该方法包括：
使具有式(VI)的化合物
Figure FDA0003486886630000051
其中R1-R5是如在式(I)中所定义的并且LG表示合适的离去基团(如例如溴)；与具有式(VII)的化合物
Figure FDA0003486886630000052
其中R6-R9是如在式(I)中所定义的；
在合适的亲核取代条件下(例如，在合适的碱如例如三乙醇胺的存在下)反应。
15.一种治疗有需要的个体的HBV感染的方法，该方法包括向该个体施用治疗有效量的根据权利要求1至9中任一项所述的化合物或根据权利要求10所述的药物组合物。
16.一种用于制备根据权利要求9所述的药物组合物的方法，该方法包括将至少一种药学上可接受的载体与治疗有效量的根据权利要求1至9中任一项所述的化合物混合。
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