KR20220041853A - 디히드로피리미딘 유도체 및 hbv 감염 또는 hbv-유도성 질환의 치료에 있어서의 이의 용도 - Google Patents

Abstract

HBV 감염 또는 HBV-유도성 질환, 더 구체적으로는 HBV 만성 감염 또는 HBV 만성 감염으로 인한 질환의 치료 또는 예방에 유용한 디히드로피리미딘 유도체, 및 이의 제약 또는 의료 용도가 본원에 제공된다.

Description

디히드로피리미딘 유도체 및 HBV 감염 또는 HBV-유도성 질환의 치료에 있어서의 이의 용도

만성 B형 간염 바이러스(HBV) 감염은 전 세계 인구의 5%를 넘는 인구(전 세계적으로 3억 5천만명이 넘는 사람, 및 미국에서 125만명이 넘는 개인)에서 발생하는 중대한 세계적 건강 문제이다.

예방용 HBV 백신의 이용 가능성에도 불구하고, 만성 HBV 감염의 부담은 개발 도상국의 대부분의 지역에서의 차선의 치료 옵션과 새로운 감염의 지속적인 감염률로 인해 계속해서 중대한 전 세계적 의료 문제가 되고 있다.

현행 치료법은 치유를 제공하지 않으며 단지 두 부류의 작용제(인터페론 알파 및 뉴클레오시드 유사체/바이러스 폴리머라아제의 억제제)에 한정되고; 약물 내성, 낮은 효능, 및 내용성 문제가 이들의 효과를 제한한다. 낮은 HBV 치유율은 적어도 부분적으로는, 바이러스 생성을 완전히 억제하는 것이 단일 항바이러스제에 의해서는 달성하기 어렵다는 사실에 기인한다. 그러나, HBV DNA의 지속적 억제는 간질환의 진행을 늦추고 간세포 암종의 예방을 돕는다. HBV-감염 환자에 대한 현행 치료법의 목표는 혈청중 HBV DNA를 낮은 수준 또는 검출불가능한 수준까지 감소시키고 궁극적으로는 간경변 및 간세포 암종의 발생을 감소시키거나 예방하는 것이다.

HBV 캡시드 단백질은 바이러스 생명 주기 동안 필수적인 기능을 한다. HBV 캡시드/코어 단백질은 세포간 통과 동안 바이러스 게놈을 보호하는 준안정성 바이러스 입자 또는 단백질 쉘을 형성하고, 또한 게놈 캡시드화, 게놈 복제, 및 비리온의 형태 형성 및 탈출을 포함하는 바이러스 복제 과정에서 중추적인 역할을 한다.

캡시드 구조는 또한 바이러스 진입 후 탈코팅을 허용하도록 환경 신호(environmental cue)에 반응한다.

이와 일관되게, 캡시드 조립 및 분해의 적절한 타이밍, 적절한 캡시드 안정성 및 코어 단백질 기능은 바이러스 감염성에 결정적인 것으로 밝혀졌다.

HBV 감염의 치료에서의 디히드로피리미딘 유도체에 대한 배경 참고문헌은 WO 2014/029193, CN103664899, CN103664925, 및 CN103664897을 포함한다.

바이러스 생성의 억제를 증가시킬 수 있고 HBV 감염을 치료, 개선, 또는 예방할 수 있는 치료제가 당업계에 필요하다. 이러한 치료제를 단독요법으로 또는 다른 HBV 치료 또는 보조 치료와 병용하여 HBV 감염 환자에게 투여하면, 바이러스 부담이 현저히 감소하고, 예후가 개선되고, 질환의 진행이 감소하고, 혈청전환율이 향상될 것이다.

일 양태에서, 하기 화학식 I의 화합물(이의 중수소화, 입체이성질체 또는 호변이성질체 형태를 포함함), 또는 이의 제약상 허용가능한 염 또는 용매화물이 제공된다:

[화학식 I]

[여기서, R¹, R² 및 R³은 각각 독립적으로 H, 할로, OH, 및 C_1-3알킬로 이루어진 군으로부터 선택되며;

R⁴는 티아졸릴, 이미다졸릴, 옥사졸릴 및 피리딜로 이루어진 군으로부터 선택되며, 이들 각각은 메틸 또는 할로로부터 각각 독립적으로 선택되는 하나 이상의 치환체로 선택적으로 치환될 수 있고;

R⁵는 C_1-4알킬이며;

R⁶ 및 R⁷은 각각 독립적으로 H 및 할로로 이루어진 군으로부터 선택되고;

R⁸ 및 R⁹는 각각 독립적으로 H 및 할로로 이루어진 군으로부터 선택되거나; 또는 R⁸ 및 R⁹는 이것들이 부착되어 있는 탄소 원자와 함께 C(=O)를 형성하며;

X는 CHR^10a, C(=O) 및 NR^10b로 이루어진 군으로부터 선택되고;

Y는 CHR^11a, C(=O) 및 NR^11b로 이루어진 군으로부터 선택되고;

Z는 CHR^12a, C(=O), NR^12b 및 O로 이루어진 군으로부터 선택되며; 여기서

R^10a, R^10b, R^11a R^11b, R^12a, 및 R^12b는 각각 독립적으로 H; -CN; -C_1-9알킬-COOR^x; -Cy-COOR^x; -C_1-6알킬-Cy-COOR^x; -Cy-C_1-6알킬-COOR^x; -C(=O)-C_1-6알킬-COOR^x; -Cy-OH; -C_1-6알킬-O-C_1-6알킬-COOR^x; -C(=O)-NR^aR^b; 및 -S(=O)₂-NR^c-C(=O)-C_1-6알킬로 이루어진 군으로부터 선택되고; 여기서,

각각의 경우, C_1-6알킬 및 C_1-9알킬은 각각 독립적으로 할로 및 히드록실로부터 선택되는 하나 이상의 치환체로 선택적으로 치환될 수 있고;

R^x는 H 및 -C_1-6알킬; 특히, H 및 -C_1-4알킬로부터 선택되고;

R^a, R^b 및 R^c는 각각 독립적으로 H 및 -C_1-4알킬로부터 선택되고;

Cy는 C_1-4알킬 치환체로 선택적으로 치환된 C_3-7시클로알킬을 나타내고;

단, CR⁸R⁹, Y 또는 Z 중 최대 2개는 C(=O)일 수 있고, 단, CR⁸R⁹ 및 X, 또는 X 및 Y, 또는 Y 및 Z가 동시에 C(=O)는 아님].

또 다른 양태에서, 화학식 I의 적어도 하나의 화합물, 또는 이의 제약상 허용가능한 염을 제약상 허용가능한 담체와 함께 포함하는 제약 조성물이 본원에 제공된다.

또 다른 양태에서, 적어도 하나의 개시된 화합물을 제약상 허용가능한 담체와 함께 포함하는 제약 조성물이 본원에 제공된다. 또 다른 양태에서, HBV 감염의 치료를 필요로 하는 개체에서 HBV 감염을 치료하는 방법이 본원에 제공되며, 본 방법은 치료적 유효량의 화학식 I의 화합물 또는 이의 제약상 허용가능한 염을 개체에게 투여하는 단계를 포함한다. 또 다른 양태에서, 의약으로 사용하기 위한 본원에 기술된 임의의 화합물 또는 본 발명의 제약 조성물이 본원에 제공된다. 추가의 양태에서, HBV 감염 또는 HBV-유도성 질환의 예방 또는 치료를 필요로 하는 포유동물에서의 HBV 감염 또는 HBV-유도성 질환의 예방 또는 치료에 사용하기 위한 본원에 기술된 임의의 화합물 또는 본 발명의 제약 조성물이 본원에 제공된다.

또 다른 양태에서, HBV 감염 또는 HBV-유도성 질환의 예방 또는 치료를 필요로 하는 포유동물에서 이의 예방 또는 치료에 동시에, 개별적으로, 또는 순차적으로 사용하기 위한 병용 제제로 제1 화합물 및 제2 화합물을 포함하는 제품으로서, 상기 제1 화합물은 상기 제2 화합물과 상이하고, 상기 제1 화합물은 본원에 기술된 바와 같은, 본 발명에 따른 화학식 I의 화합물 또는 제약 조성물이고, 상기 제2 화합물은 HBV 억제제인, 제품이 본원에 제공된다. 상기 제2 HBV 억제제는 다음으로부터 선택될 수 있다:

- HBV 복제 억제 활성을 갖는 사이토카인,

- 면역 체크포인트 조절 활성을 갖는 항체,

- HBV 캡시드 조립 억제 활성을 갖거나 TLR 작용제 활성을 갖는 치환된 피리미딘,

- 항레트로바이러스 뉴클레오시드 유사체, 및

- 이들의 조합.

또 다른 양태에서, HBV DNA-함유 입자 또는 HBV RNA-함유 입자의 형성 또는 존재의 억제 또는 감소를 필요로 하는 개체에서 HBV DNA-함유 입자 또는 HBV RNA-함유 입자의 형성 또는 존재를 억제하거나 감소시키는 방법이 본원에 제공되며, 본 방법은 치료적 유효량의 화학식 I의 화합물 또는 이의 제약상 허용가능한 염을 개체에게 투여하는 단계를 포함한다.

일 구현예에서, 본원에 제공된 방법들 중 임의의 방법은, HBV 폴리머라아제 억제제, 면역조절제, 인터페론, 바이러스 침입 억제제, 바이러스 성숙 억제제, 캡시드 조립 조절제, 역전사효소 억제제, 시클로필린/TNF 억제제, TLR-작용제, HBV 백신, 및 이들의 임의의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는 적어도 하나의 추가의 치료제를 개체에게 투여하는 단계를 추가로 포함할 수 있다.

또 다른 양태에서, 화학식 I의 화합물을 제조하는 방법으로서, 하기 단계를 포함하는 방법이 제공된다:

화학식 VI의 화합물:

[화학식 VI]

(여기서, R¹~R⁵는 화학식 I에서 정의된 바와 같고, LG는 예를 들어, 브로모와 같은 적합한 이탈기를 나타냄)을 화학식 VII의 화합물:

[화학식 VII]

(여기서, R⁶~R⁹는 화학식 I에 정의된 바와 같음)과

적합한 친핵성 치환 조건 하, 예를 들어, 적합한 염기, 예를 들어, 트리에탄올아민의 존재 하에서 반응시키는 단계.

설명

대상체에서의 HBV 감염의 치료 및 예방에 유용할 수 있는, 화합물, 예를 들어 화학식 I의 화합물, 또는 이의 제약상 허용가능한 염이 본원에 제공된다.

특정한 작용 기작에 구애됨이 없이, 이들 화합물은 HBV 복제 또는 감염성 입자의 생성에 필요한 HBV 조립 및 다른 HBV 코어 단백질의 기능을 조절 또는 방해하는 것으로 여겨지고/지거나 HBV 캡시드 조립을 방해하여 감염성 또는 복제 능력이 크게 감소된 빈 캡시드를 초래할 수 있다. 환언하면, 본원에 제공된 화합물은 캡시드 조립 조절제로서 작용할 수 있다.

예를 들어, 강력한 항바이러스 활성, 유리한 대사 특성, 조직 분포, 안전성 및 제약 프로파일과 같은 특성의 유리한 균형을 가지며 인간에서 사용하기에 적합한 HBV 항바이러스 활성을 갖는 화합물이 여전히 필요하다. 이에 따라, 본 발명의 목적은 이러한 문제 중 적어도 일부를 극복하는 화합물을 제공하는 것이다. 개시된 화합물은 정상적인 바이러스 캡시드 조립 또는 분해를 조절하거나(예를 들어, 가속화하거나, 지연시키거나, 억제하거나, 방해하거나 또는 감소시키거나), 캡시드에 결합하거나 또는 세포 폴리단백질 및 전구체의 대사를 변경시킬 수 있다. 캡시드 단백질이 성숙할 때 또는 바이러스 감염 동안 조절이 일어날 수 있다. 개시된 화합물은 감염된 세포 내에서의 HBV RNA 입자의 생성 또는 방출, 또는 HBV cccDNA의 활성 또는 특성의 조절 방법에 사용될 수 있다.

일 구현예에서, 본원에 기술된 화합물은 단독요법에 적합할 수 있고, 천연 또는 자연 HBV 주에 대해 그리고 현재 알려진 약물에 내성이 있는 HBV 주에 대해 효과적일 수 있다. 또 다른 구현예에서, 본원에 기술된 화합물은 병용 요법에 사용하기에 적합할 수 있다.

정의

본 발명을 설명하기 위해 사용된 다양한 용어의 정의가 아래에 열거되어 있다. 이들 정의는 특정한 경우에 달리 제한되지 않는 한, 개별적으로 또는 더 큰 그룹의 일부로서 본 명세서 및 청구범위 전체에 걸쳐 사용되는 용어에 적용된다.

달리 정의되지 않는 한, 본원에 사용된 모든 기술 용어 및 과학 용어는 일반적으로, 본 발명이 속하는 기술 분야의 당업자가 통상적으로 이해하는 것과 동일한 의미를 갖는다. 일반적으로, 본원에 사용된 명명법 및 세포 배양, 분자 유전학, 유기 화학, 및 펩티드 화학에서의 실험실 절차는 당업계에서 잘 알려져 있고 통상적으로 사용되는 것들이다.

본원에서 사용되는 바와 같이, 단수형 용어("a” 및 "an")는 하나 이상의(즉, 적어도 하나의) 이의 문법적 대상을 지칭한다. 예로서, "요소"는 하나의 요소 또는 하나보다 더 많은 요소를 의미한다. 더욱이, "포함하는"이라는 용어와, 다른 형태, 예컨대 "포함하고 있다", "포함하다", 및 "포함된"의 사용은 한정적인 것이 아니다.

본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "약"은 당업자에 의해 이해될 것이며, 그것이 사용되는 맥락에 따라 어느 정도 변할 것이다. 본원에서 사용되는 바와 같이, 양, 시간적 기간 등과 같은 측정가능한 값을 언급할 때, 용어 "약"은 명시된 값으로부터 ±20% 또는 ±10%(±5%, ±1% 및 ±0.1% 포함)의 변동을 포함함을 의미하며, 그 이유는 상기 변동이 본 개시 방법을 수행하기에 적절하기 때문이다.

본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "캡시드 조립 조절제"는 정상적인 캡시드 조립(예를 들어, 성숙 동안) 또는 정상적인 캡시드 분해(예를 들어, 감염 동안)를 방해하거나 가속화하거나 억제하거나 저해하거나 지연시키거나 감소시키거나 변경시키거나, 또는 캡시드 안정성을 교란하고 이에 의해 비정상적인 캡시드의 형태 및 기능을 유도하는 화합물을 지칭한다. 일 구현예에서, 캡시드 조립 조절제는 캡시드 조립 또는 분해를 가속화함으로써 비정상적인 캡시드 형태를 유도한다. 또 다른 구현예에서, 캡시드 조립 조절제는 주요 캡시드 조립 단백질(CA)과 상호작용(예를 들어, 활성 부위에서의 결합, 알로스테릭 부위에서의 결합, 폴딩의 변경 또는 저해 등)함으로써 캡시드의 조립 또는 분해를 방해한다. 또 다른 구현예에서, 캡시드 조립 조절제는 CA의 구조 또는 기능(예를 들어, CA의 조립 능력, 분해 능력, 기질에의 결합 능력, 적합한 형태로의 폴딩 등)의 교란을 야기하며, 이는 바이러스 감염성을 약화시키거나 바이러스에 치명적이다.

본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "치료” 또는 "치료하는"은, HBV 감염, HBV 감염의 증상 또는 HBV 감염이 발생할 가능성을 치유하거나, 고치거나, 경감시키거나, 완화하거나, 변경하거나, 해결하거나, 개선시키거나, 호전시키거나 영향을 줄 목적으로, 치료제, 즉 본 개시 화합물(단독으로 또는 또 다른 약제와 조합하여)을, HBV 감염, HBV 감염의 증상 또는 HBV 감염이 발생할 가능성이 있는 환자에게 적용하거나 투여하는 것으로 정의되거나, 환자로부터의 단리된 조직 또는 세포주에 (예를 들어, 진단 또는 생체 외 적용을 위하여) 치료제를 적용하거나 투여하는 것으로 정의된다. 이러한 치료는 약물유전체학 분야에서 얻은 지식에 기초하여 구체적으로 조정되거나 변형될 수 있다.

본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "예방하다” 또는 "예방"은 아무것도 발생하지 않은 경우 장애 또는 질환 발생이 없음, 또는 이미 장애 또는 질환의 발생이 있었던 경우 추가의 장애 또는 질환 발생이 없음을 의미한다. 또한 장애 또는 질환과 관련된 증상의 일부 또는 전부를 예방하는 능력이 고려된다.

본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "환자", "개체” 또는 "대상체"는 인간 또는 비-인간 포유동물을 지칭한다. 비-인간 포유동물은 예를 들어 가축 및 애완 동물, 예컨대 양, 소, 돼지, 개, 고양이 및 쥣과 포유동물을 포함한다. 바람직하게는, 환자, 대상체 또는 개체는 인간이다.

본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "유효량", "제약적 유효량” 및 "치료적 유효량"은 원하는 생물학적 결과를 제공하기에 충분하면서도 비독성인 에이전트의 양을 지칭한다. 그 결과는 질환의 징후, 증상 또는 원인의 감소 또는 경감, 또는 생물학적 시스템의 임의의 다른 원하는 변경일 수 있다. 임의의 개별적인 경우에 적절한 치료량은 일상적인 실험을 사용하여 당업자에 의해 결정될 수 있다.

본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "제약상 허용가능한"은 화합물의 생물학적 활성 또는 특성을 손상시키지 않고 상대적으로 비독성인 담체 또는 희석제와 같은 물질을 지칭하며, 즉 이 물질은 바람직하지 않은 생물학적 효과를 유발하지 않거나 이 물질을 함유하는 조성물의 임의의 성분과 유해한 방식으로 상호작용하지 않고서 개체에게 투여될 수 있다.

본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "제약상 허용가능한 염"은 본 개시 화합물의 유도체(여기서, 모 화합물은 기존의 산 또는 염기 모이어티를 그의 염 형태로 전환시킴으로써 변형됨)를 지칭한다. 제약상 허용가능한 염의 예는 아민과 같은 염기성 잔기의 광산 또는 유기 산 염; 카르복실산과 같은 산성 잔기의 알칼리 또는 유기 염 등을 포함하지만, 이에 한정되지 않는다. 본 발명의 제약상 허용가능한 염은 예를 들어 비독성 무기 또는 유기 산으로부터 형성된 모 화합물의 통상적인 비독성 염을 포함한다. 본 발명의 제약상 허용가능한 염은 통상적인 화학적 방법에 의해 염기성 또는 산성 모이어티를 함유하는 모 화합물로부터 합성될 수 있다. 일반적으로, 이러한 염은 이들 화합물의 유리 산 또는 염기 형태를 물 또는 유기 용매, 또는 이 둘의 혼합물에서 화학량론적 양의 적절한 염기 또는 산과 반응시킴으로써 제조될 수 있으며; 일반적으로 에테르, 에틸 아세테이트, 에탄올, 이소프로판올, 또는 아세토니트릴과 같은 비수성 매질이 바람직하다. 적합한 염의 목록은 문헌[Remington's Pharmaceutical Sciences, 18th ed., Mack Publishing Company, Easton, Pa., 1990, p. 1445] 및 문헌[Journal of Pharmaceutical Science, 66, 1-19 (1977)]에서 발견되는데, 이들 각각은 본원에 그 전체가 참고로 포함된다.

본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "조성물” 또는 "제약 조성물"은 본 발명 내에서 유용한 하나 이상의 화합물과 제약상 허용가능한 담체의 혼합물을 지칭한다. 제약 조성물은 환자 또는 대상체에게 화합물을 투여하는 것을 용이하게 한다. 정맥내, 경구, 에어로졸, 비경구, 안과, 폐 및 국소 투여를 포함하지만 이에 한정되지 않는, 화합물을 투여하는 다수의 기술이 당업계에 존재한다.

본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "제약상 허용가능한 담체"는 본 발명 내에서 유용한 화합물을 환자 내로 또는 환자에게 운반하거나 수송하여 상기 화합물이 그의 의도된 기능을 수행할 수 있게 하는 데 관여하는, 제약상 허용가능한 물질, 조성물 또는 담체, 예컨대 액체 또는 고체 충전제, 안정제, 분산제, 현탁제, 희석제, 부형제, 증점제, 용매 또는 캡슐화 물질을 의미한다. 전형적으로, 이러한 구축물은 하나의 기관, 또는 신체의 일부로부터 또 다른 기관, 또는 신체의 일부로 운반 또는 수송된다. 각각의 담체는 본 발명 내에서 유용한 화합물을 비롯한 제형의 다른 성분과 상용성이고 환자에게 해롭지 않다는 의미에서 "허용가능"해야 한다. 제약상 허용가능한 담체로서의 역할을 할 수 있는 물질의 일부 예는 다음을 포함한다: 당류, 예컨대 락토스, 글루코스 및 수크로스; 전분, 예컨대 옥수수 전분 및 감자 전분; 셀룰로오스 및 그의 유도체, 예컨대 소듐 카르복시메틸 셀룰로오스, 에틸 셀룰로오스 및 셀룰로오스 아세테이트; 분말형 트래거캔스; 맥아; 젤라틴; 활석; 부형제, 예컨대 코코아 버터 및 좌제 왁스; 오일, 예컨대 땅콩유, 면실유, 홍화유, 참기름, 올리브유, 옥수수유 및 대두유; 글리콜, 예컨대 프로필렌 글리콜; 폴리올, 예컨대 글리세린, 소르비톨, 만니톨 및 폴리에틸렌 글리콜; 에스테르, 예컨대 에틸 올레에이트 및 에틸 라우레이트; 한천; 완충제, 예컨대 수산화마그네슘 및 수산화알루미늄; 표면 활성제; 알긴산; 발열원이 없는 물; 등장 식염수; 링거액(Ringer’s solution); 에틸 알코올; 인산염 완충액; 및 제약 제형에 사용되는 다른 비독성 상용성 물질.

본원에서 사용되는 바와 같이, "제약상 허용가능한 담체"는 또한 본 발명 내에서 유용한 화합물의 활성과 양립가능하고 환자에게 생리학적으로 허용가능한 모든 코팅, 항균 및 항진균제 및 흡수 지연제 등을 포함한다. 보충적 활성 화합물이 또한 조성물 내에 혼입될 수 있다. "제약상 허용가능한 담체"는 본 발명 내에서 유용한 화합물의 제약상 허용가능한 염을 추가로 포함할 수 있다. 본 발명의 실시에 사용되는 제약 조성물에 포함될 수 있는 다른 추가 성분은 당업계에 공지되어 있고, 예를 들어 본원에 참고로 포함된 문헌[Remington's Pharmaceutical Sciences (Genaro, Ed., Mack Publishing Co., 1990, Easton, Pa)]에 기술되어 있다.

본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "알킬"은 그 자체로 또는 또 다른 치환체의 일부로서, 달리 언급되지 않는 한 지정된 탄소 원자수를 갖는 직쇄 또는 분지쇄 탄화수소를 의미한다(즉, C_1-3알킬은 1 내지 3개의 탄소 원자를 갖는 알킬을 의미하고, C_1-4알킬은 1 내지 4개의 탄소 원자를 갖는 알킬을 의미하고 직쇄 및 분지쇄를 포함하고, C_1-6알킬은 1 내지 6개의 탄소 원자를 갖는 알킬을 의미하고 직쇄 및 분지쇄를 포함하고, C₁-C₉알킬은 1 내지 9개의 탄소 원자를 갖는 알킬을 의미하고 직쇄 및 분지쇄를 포함한다). 예는 메틸, 에틸, 프로필, 이소프로필, 부틸, 이소부틸, tert-부틸을 포함한다. 알킬의 구현예는 C₁-C₉ 알킬, C₁-C₆ 알킬, C₁-C₄ 알킬을 포함하나, 이에 한정되지 않는다.

본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 “할로” 또는 “할로겐”은 단독으로 또는 또 다른 치환체의 일부로서, 달리 언급되지 않는 한 불소, 염소, 브롬, 또는 요오드 원자, 바람직하게는, 불소, 염소, 또는 브롬, 더 바람직하게는, 불소 또는 염소를 의미한다.

단독으로 또는 또 다른 기의 일부로서 본원에서 사용되는 "C_3-7시클로알킬"이라는 표기는 3 내지 7개의 탄소 원자를 갖는 포화, 환형 탄화수소, 예컨대 시클로프로필, 시클로부틸, 시클로펜틸, 시클로헥실 및 시클로헵틸을 정의한다. 특정 C_3-7시클로알킬 기는 시클로프로필, 시클로부틸, 시클로펜틸, 시클로헥실 및 시클로헵틸이다. 본원에서 사용되는 표기 "Cy"는 C_1-4알킬 치환체로 선택적으로 치환된, 본원에 정의된 C_3-7시클로알킬 기를 정의한다. Cy가 다른 기의 일부로 사용되는 경우, 표기는 안정적인 구조를 제공하는 모노- 또는 디-라디칼로 결합되는 포화 환형 탄화수소를 지칭하는 것으로 이해될 것이다.

용어 "치환된"이 본 발명에서 사용될 때마다, 달리 명시되지 않거나 문맥으로부터 명확하지 않은 한, 이것은 "치환된"을 사용하는 표현에서 명시된 원자 또는 라디칼 상의 1개 이상의 수소, 특히 1개 내지 3개의 수소, 바람직하게는 1개 또는 2개의 수소, 더 바람직하게는 1개의 수소가 명시된 기로부터 선택된 것으로 대체됨을 의미하며, 단, 정상 원자가는 초과되지 않고, 치환은 화학적으로 안정한 화합물, 즉, 반응 혼합물로부터의 유용한 정도의 순도로의 단리 및 치료제로의 제형화를 견디기에 충분히 강한 화합물을 생성한다.

둘 이상의 치환체가 모이어티 상에 존재할 때, 달리 명시되거나 문맥으로부터 명확하지 않은 한, 이들은 동일한 원자 상의 수소를 대체할 수 있거나 모이어티 내에서 상이한 원자 상의 수소 원자를 대체할 수 있다.

본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 “...로부터 선택되다”(예를 들어, “R¹은 A, B 및 C로부터 선택된다”)는 용어 “...으로 이루어진 군으로부터 선택되다”(예를 들어, “R¹은 A, B 및 C로 이루어진 군으로부터 선택된다”)와 동등한 것으로 이해된다.

일 구현예에서, 본 발명은 본원에 정의된 바와 같은 화학식 I의 화합물에 관한 것이며, 여기서,

R¹, R² 및 R³은 각각 독립적으로 H, 할로, 및 C_1-3알킬로 이루어진 군으로부터 선택되며;

R⁴는 티아졸릴, 이미다졸릴, 옥사졸릴 및 피리딜로 이루어진 군으로부터 선택되며, 이들 각각은 메틸 또는 할로로부터 각각 독립적으로 선택되는 하나 이상의 치환체로 선택적으로 치환될 수 있고;

R⁵는 C_1-4알킬이며;

R⁶ 및 R⁷은 각각 독립적으로 H 및 할로로 이루어진 군으로부터 선택되고;

R⁸ 및 R⁹는 각각 독립적으로 H 및 할로로 이루어진 군으로부터 선택되거나; 또는 R⁸ 및 R⁹는 이것들이 부착되어 있는 탄소 원자와 함께 C(=O)를 형성하며;

X는 CHR^10a, C(=O) 및 NR^10b로 이루어진 군으로부터 선택되고;

Y는 CHR^11a, C(=O) 및 NR^11b로 이루어진 군으로부터 선택되고;

Z는 CHR^12a ₂, C(=O), NR^12b 및 O로 이루어진 군으로부터 선택되며; 여기서

R^10a, R^10b, R^11a R^11b, R^12a, 및 R^12b는 각각 독립적으로 H; -C_1-9알킬-COOR^x; -Cy-COOR^x; -C_1-6알킬-Cy-COOR^x; -C(=O)-C_1-6알킬-COOR^x; -Cy-OH; 및 -C_1-6알킬-O-C_1-6알킬-COOR^x로 이루어진 군으로부터 선택되고; 여기서,

각각의 경우, C_1-6알킬은 각각 독립적으로 할로 및 히드록실로부터 선택되는 하나 이상의 치환체로 선택적으로 치환될 수 있고;

R^x는 H 및 -C_1-6알킬; 특히, H 및 -C_1-4알킬로부터 선택되고;

Cy는 C_1-4알킬 치환체로 선택적으로 치환된 C_3-7시클로알킬을 나타낸다.

일 구현예에서, 본 발명은 본원에 정의된 바와 같은 화학식 I의 화합물에 관한 것이며, 여기서,

R¹, R² 및 R³은 각각 독립적으로 H, 할로, 및 C_1-3알킬로 이루어진 군으로부터 선택되며;

R⁴는 티아졸릴, 이미다졸릴, 및 옥사졸릴로 이루어진 군으로부터 선택되며, 이들 각각은 하나의 메틸 치환체로 선택적으로 치환될 수 있고;

R⁵는 C_1-4알킬이며;

R⁶ 및 R⁷은 각각 독립적으로 H 및 할로로 이루어진 군으로부터 선택되고;

R⁸ 및 R⁹는 각각 독립적으로 H 및 할로로 이루어진 군으로부터 선택되거나; 또는 R⁸ 및 R⁹는 이것들이 부착되어 있는 탄소 원자와 함께 C(=O)를 형성하며;

X는 CH₂, C(=O) 및 NR^10b로 이루어진 군으로부터 선택되고;

Y는 CH₂, C(=O) 및 NR^11b로 이루어진 군으로부터 선택되고;

Z는 CH₂, C(=O), NR^12b 및 O로 이루어진 군으로부터 선택되며; 여기서

R^10b, R^11b, 및 R^12b는 각각 독립적으로 H; -C_1-9알킬-COOR^x; -Cy-COOR^x; -C_1-6알킬-Cy-COOR^x; 및 -C(=O)-C_1-6알킬-COOR^x로 이루어진 군으로부터 선택되고; 여기서

Cy는 C_3-7시클로알킬을 나타낸다.

특정 구현예에서, R¹, R² 및 R³은 각각 독립적으로 H, 할로, OH, 및 메틸로 이루어진 군으로부터 선택되며, 나머지 변수는 본원에 정의된 바와 같다. 추가 구현예에서, R¹은 수소 또는 플루오로이고; R²는 수소 또는 플루오로이고; R³은 클로로 및 메틸로부터 선택되고; 나머지 변수는 본원에 정의된 바와 같다.

특정 구현예에서, R⁴는 각각 하나의 메틸 치환체로 선택적으로 치환될 수 있는 티아졸릴, 이미다졸릴, 옥사졸릴 및 피리딜로 이루어진 군으로부터 선택되고; 나머지 변수는 본원에 정의된 바와 같다. 추가 구현예에서, R⁴는 각각 하나의 메틸 치환체로 선택적으로 치환될 수 있는 티아졸릴, 이미다졸릴, 옥사졸릴로 이루어진 군으로부터 선택되고; 나머지 변수는 본원에 정의된 바와 같다. 추가 구현예에서, R⁴는 티아졸-2-일, 1-메틸-이미다졸-2-일 및 5-메틸-옥사졸-4-일, 더욱 특별하게는, 티아졸-2-일 및 5-메틸-옥사졸-4-일로 이루어진 군으로부터 선택되고; 나머지 변수는 본원에 정의된 바와 같다.

추가 구현예에서, R⁵는 메틸, 에틸 또는 이소프로필이고; 특히 R⁵는 메틸 또는 에틸이고; 나머지 변수는 본원에 정의된 바와 같다.

추가 구현예에서, R⁶ 및 R⁷은 각각 독립적으로 수소 및 플루오로로부터 선택되고; 나머지 변수는 본원에 정의된 바와 같다. 추가 구현예에서, R⁶ 및 R⁷은 각각 플루오로이고; 나머지 변수는 본원에 정의된 바와 같다.

추가 구현예에서, R⁸ 및 R⁹는 각각 독립적으로 수소 및 할로로부터 선택되거나; 또는 R⁸ 및 R⁹는 이것들이 부착되어 있는 탄소 원자와 함께 C(=O)를 형성하고; 나머지 변수는 본원에 정의된 바와 같다. 추가 구현예에서, R⁸ 및 R⁹는 둘 다 수소이거나; 또는 R⁸ 및 R⁹는 이것들이 부착되어 있는 탄소 원자와 함께 C(=O)를 형성하고; 나머지 변수는 본원에 정의된 바와 같다.

일 구현예에서, X는 CHR^10a, C(=O), 및 NR^10b으로 이루어진 군으로부터 선택되고; Y는 CHR^11a, C(=O), 및 NR^11b로 이루어진 군으로부터 선택되고;

Z는 CHR^12a, C(=O), NR^12b 및 O로 이루어진 군으로부터 선택되며; 여기서

R^10a, R^10b, R^11a R^11b, R^12a, 및 R^12b는 각각 독립적으로 H; -CN; -C_1-9알킬-COOH; -Cy-COOH; -C_1-6알킬-Cy-COOH; -Cy-C_1-6알킬-COOH; -C(=O)-C_1-6알킬-COOH; -Cy-OH; -C_1-6알킬-O-C_1-6알킬-COOH; -C(=O)-NR^aR^b; 및 -S(=O)₂-NR^c-C(=O)-C_1-6알킬로 이루어진 군으로부터 선택되고; 여기서, 각각의 경우, C_1-6알킬 및 C_1-9알킬은 각각 독립적으로 할로 및 히드록실로부터 선택되는 하나 이상의 치환체로 선택적으로 치환될 수 있고;

R^a, R^b 및 R^c는 각각 독립적으로 H 및 -C_1-4알킬로부터 선택되고;

Cy는 C_1-4알킬 치환체로 선택적으로 치환된 C_3-7시클로알킬을 나타내고; 나머지 변수는 본원에 정의된 바와 같다. 더욱 특별한 구현예에서, R^10a, R^11a 및 R^12a는 각각 H이다.

추가 구현예에서, X는 CH₂, C(=O) 및 NR^10b로 이루어진 군으로부터 선택되고; Y는 CH₂, C(=O) 및 NR^11b로 이루어진 군으로부터 선택되고; Z는 CH₂, C(=O), NR^12b 및 O로 이루어진 군으로부터 선택되며; 여기서

R^10b, R^11b 및 R^12b는 각각 독립적으로 다음으로 이루어진 군으로부터 선택되며;

-C_1-9알킬-COOH; -Cy-COOH; -C_1-6알킬-Cy-COOH; -C(=O)-C_1-6알킬-COOH; -Cy-OH; 및 -C_1-6알킬-O-C_1-6알킬-COOH; 여기서,

각각의 경우, C_1-6알킬은 각각 독립적으로 할로 및 히드록실로부터 선택되는 하나 이상의 치환체로 선택적으로 치환될 수 있고;

Cy는 C_1-4알킬 치환체로 선택적으로 치환된 C_3-7시클로알킬을 나타내고, 나머지 변수는 본원에 정의된 바와 같다.

추가 구현예에서, 화학식 I의 화합물은 하기 화학식 I-A 내지 I-C를 만족하는 화합물로부터 선택되고:

여기서,

R¹³ 및 R¹⁴는 각각 H이거나; 또는 R¹³ 및 R¹⁴는 이것들이 부착되어 있는 탄소 원자와 함께 C(=O)를 형성하며;

R¹⁵ 및 R¹⁶은, 존재할 경우, 각각 H이거나; 또는 R¹⁵ 및 R¹⁶은 이것들이 부착되어 있는 탄소 원자와 함께 C(=O)를 형성하며;

Z는, 존재할 경우, CH₂, NH 및 O로 이루어진 군으로부터 선택되고; 더욱 특별하게는 Z는 CH₂이고; 모든 나머지 변수는 본원에 정의된 바와 같다.

추가 구현예에서, 본 발명은 화학식 I-A, I-B 또는 I-C의 화합물에 관한 것으로, 여기서,

R¹, R² 및 R³은 각각 독립적으로 H, 할로, 및 C_1-3알킬로 이루어진 군으로부터 선택되며;

R⁴는 티아졸릴, 이미다졸릴, 옥사졸릴 및 피리딜로 이루어진 군으로부터 선택되며, 이들 각각은 하나의 메틸 치환체로 선택적으로 치환될 수 있고;

R⁵는 C_1-4알킬이며;

R⁶ 및 R⁷은 각각 독립적으로 H 및 할로로 이루어진 군으로부터 선택되고;

R⁸ 및 R⁹는 각각 H이거나; 또는 R⁸ 및 R⁹는 이것들이 부착되어 있는 탄소 원자와 함께 C(=O)를 형성하며;

R¹³ 및 R¹⁴는 각각 H이거나; 또는 R¹³ 및 R¹⁴는 이것들이 부착되어 있는 탄소 원자와 함께 C(=O)를 형성하며;

R¹⁵ 및 R¹⁶은, 존재할 경우, 각각 H이거나; 또는 R¹⁵ 및 R¹⁶은 이것들이 부착되어 있는 탄소 원자와 함께 C(=O)를 형성하며;

Z는, 존재할 경우, CH₂, NH 및 O로 이루어진 군으로부터 선택되고; 더욱 특별하게는 Z는 CH₂이고;

R^10b, R^11b 및 R^12b는 각각 독립적으로 -C_1-9알킬-COOH, -Cy-COOH, -Cy-OH, -C_1-6알킬-O-C_1-6알킬-COOH, 및 -C(=O)-C_1-6알킬-COOH로 이루어진 군으로부터 선택된다.

상기 구현예의 모든 조합이 명백히 포함된다.

본 발명에 따른 바람직한 화합물은 화합물 합성 섹션 및 표 1에 나타낸 화학식을 갖는 화합물 또는 이의 입체이성질체 또는 호변이성질체 형태인데, 이의 활성은 표 3에 제시되어 있다.

개시된 화합물은 하나 이상의 입체중심을 가질 수 있으며, 각각의 입체중심은 독립적으로 R 또는 S 배열로 존재할 수 있다. 화합물 자체가 단일 입체이성질체로서 단리되었고 거울상 이성질체/부분입체 이성질체로서 순수하다 할지라도, 입체중심에서 절대 입체화학이 결정되지 않은 경우 입체화학 배열은 표시된 중심에서 (*)로 지정될 수 있다.

일 구현예에서, 본원에 기재된 화합물은 광학 활성 또는 라세미 형태로 존재한다. 본원에 기재된 화합물은 본원에 기재된 치료적으로 유용한 특성을 갖는 라세미, 광학 활성, 위치이성질체, 및 입체이성질체 형태, 또는 이들의 조합을 포함하는 것으로 이해되어야 한다.

광학 활성 형태의 제조는, 비제한적인 예로서 재결정화 기술을 이용한 라세미 형태의 분할, 광학 활성 출발 물질로부터의 합성, 키랄 합성, 또는 키랄 고정상을 이용한 크로마토그래피 분리를 포함하는 적합한 방식으로 달성된다. 일 구현예에서, 하나 이상의 이성질체의 혼합물이 본원에 기술된 개시된 화합물로서 사용된다. 또 다른 구현예에서, 본원에 개시된 화합물은 하나 이상의 키랄 중심을 함유한다. 이들 화합물은 입체 선택적 합성, 거울상 선택적 합성 또는 거울상 이성질체 또는 부분입체 이성질체의 혼합물의 분리를 포함하는 임의의 수단에 의해 제조된다. 화합물 및 이의 이성질체의 분할은 비제한적인 예로서 화학 공정, 효소 공정, 분별 결정화, 증류 및 크로마토그래피를 포함하는 임의의 수단에 의해 달성된다.

화합물의 절대 R 또는 S 입체화학이 결정될 수 없는 경우, 이는 크로마토그래피 컬럼, 용리액 등에 의해 결정되는 특정 크로마토그래피 조건에서의 크로마토그래피 후 체류 시간에 의해 확인될 수 있다.

일 구현예에서, 개시된 화합물은 호변이성질체로서 존재할 수 있다. 모든 호변이성질체가 본원에 제시된 화합물의 범주 내에 포함된다.

본원에 기재된 화합물은 또한, 동일한 원자 번호를 갖지만 자연에서 일반적으로 발견되는 원자 질량 또는 질량수와는 다른 원자 질량 또는 질량수를 갖는 원자로 하나 이상의 원자가 대체된 동위원소-표지 화합물을 포함한다. 본원에 기재된 화합물에 포함되기에 적합한 동위원소의 예는 ²H, ³H, ¹¹C, ¹³C, ¹⁴C, ³⁶Cl, ¹⁸F, ¹²³I, ¹²⁵I, ¹³N, ¹⁵N, ¹⁵O, ¹⁷O, ¹⁸O, ³²P, 및 ³⁵S를 포함하나, 이에 한정되지 않는다. 일 구현예에서, 동위원소-표지 화합물은 약물 또는 기질 조직 분포 연구에 유용하다. 다른 구현예에서, 중수소와 같은 더 무거운 동위원소에 의한 치환은 더 큰 대사 안정성(예를 들어, 증가된 생체내 반감기 또는 감소된 투여량 요건)을 제공한다.

또 다른 구현예에서, 양전자 방출 동위원소(예컨대, ¹¹C, ¹⁸F, ¹⁵O, 및 ¹³N)에 의한 치환은 기질 수용체 점유율을 검사하기 위한 양전자 방출 단층촬영(PET) 연구에 유용하다. 동위원소-표지 화합물은 임의의 적합한 방법에 의해, 또는 비표지 시약을 사용하는 대신에 적절한 동위원소-표지 시약을 사용하는 공정에 의해 제조된다.

일 구현예에서, 본원에 기재된 화합물은 다른 수단(발색단 또는 형광성 모이어티, 생물발광 표지, 또는 화학발광 표지의 사용을 포함하나, 이에 한정되지 않음)에 의해 표지된다.

본원에 기재된 화합물, 및 상이한 치환체를 갖는 기타 관련 화합물은 본원에 기재된 기술 및 재료와, 당업자에게 알려진 기술을 이용하여 합성된다. 본원에 기재된 바와 같은 화합물의 제조를 위한 일반적인 방법은 본원에 제공된 바와 같은 화학식에서 확인되는 다양한 모이어티의 도입을 위해 적절한 시약 및 조건을 사용하여 변경된다.

본원에 개시된 화합물은 상업적 공급처로부터 입수가능한 화합물로부터 출발하여 임의의 적합한 절차를 사용하여 합성되거나, 본원에 기술된 절차를 사용하여 제조된다. 일반적인 합성 반응식은 아래 실시예에 제공되어 있다.

따라서, 화학식 I의 화합물을 제조하는 방법이 제공되며, 상기 방법은 하기 단계를 포함한다:

화학식 VI의 화합물:

[화학식 VI]

(여기서, R¹~R⁵는 화학식 I에서 정의된 바와 같고, LG는 예를 들어, 브로모와 같은 적합한 이탈기를 나타냄)을 화학식 VII의 화합물:

[화학식 VII]

(여기서, R⁶~R⁹는 화학식 I에 정의된 바와 같음)과

적합한 친핵성 치환 조건 하, 예를 들어, 적합한 염기, 예를 들어, 트리에탄올아민의 존재 하에서 반응시키는 단계.

방법 및 용도

HBV 감염의 치료를 필요로 하는 개체에서 이를 치료하는 방법으로서, 치료적 유효량의 개시된 화합물을 개체에게 투여하는 단계를 포함하는 방법이 본원에 제공된다.

HBV 감염의 퇴치를 필요로 하는 개체에서 이를 퇴치하는 방법으로서, 치료적 유효량의 개시된 화합물을 개체에게 투여하는 단계를 포함하는 방법이 또한 본원에 제공된다.

HBV 감염과 관련된 바이러스 수치(viral load)의 감소를 필요로 하는 개체에서 이를 감소시키는 방법으로서, 치료적 유효량의 개시된 화합물을 개체에게 투여하는 단계를 포함하는 방법이 본원에 제공된다.

또한, HBV 감염의 재발의 감소를 필요로 하는 개체에서 이를 감소시키는 방법으로서, 치료적 유효량의 개시된 화합물을 개체에게 투여하는 단계를 포함하는 방법이 본원에 제공된다.

HBV DNA-함유 입자 또는 HBV RNA-함유 입자의 형성 또는 존재의 억제 또는 감소를 필요로 하는 개체에서 이를 억제하거나 감소시키는 방법으로서, 치료적 유효량의 개시된 화합물을 개체에게 투여하는 단계를 포함하는 방법이 본원에 제공된다.

본 발명이 개체를 치료하는 방법에 관한 것으로 언급되는 경우, 이러한 방법은 특정 관할권에서 의학적 용도, 예를 들어, 개체를 치료하는 데 사용하기 위한 본 발명에 따른 화합물 또는 조성물; 또는 의약 제조, 특히 개체 치료를 위한 의약 제조를 위한, 본 발명에 따른 화합물 또는 조성물의 용도로 해석됨이 이해된다. 따라서, 예를 들어, 본 발명은 또한 HBV 감염의 예방 또는 치료에 사용하기 위한 본원에 개시된 바와 같은 화합물 또는 제약 조성물에 관한 것이다. 또한, HBV 감염과 관련된 바이러스 수치의 감소에 사용하기 위한, 본원에 개시된 바와 같은 화합물 또는 제약 조성물이 본원에 제공된다. 추가로, 개체에서 HBV 감염의 재발을 감소시키는 데 사용하기 위한, 본원에 개시된 바와 같은 화합물 또는 제약 조성물이 본원에 제공된다. 또한, 개체에서 HBV DNA-함유 입자 또는 HBV RNA-함유 입자의 형성 또는 존재의 억제 또는 감소에 사용하기 위한, 본원에 개시된 바와 같은 화합물 또는 제약 조성물이 제공된다.

특정 양태에서, 본원에 기재된 방법, 용도 및/또는 조성물은 시험관 내 또는 생체 내(예를 들어, 세포 내, 조직 내, 기관 내(예를 들어, 간 내), 유기체 내 등)에서 HBV-관련 입자의 형성 또는 존재를 억제하거나 감소시키는 데 효과적이다. HBV-관련 입자는 HBV DNA(즉, 선형 및/또는 공유결합 폐환형 DNA(cccDNA) 및/또는 HBV RNA(즉, 프리-게놈(pre-genomic) RNA 및/또는 서브-게놈(sub-genomic) RNA)를 포함할 수 있다. 따라서, HBV-관련 입자는 HBV DNA-함유 입자 또는 HBV RNA-함유 입자를 포함한다.

본원에서 사용되는 바와 같이, “HPV-관련 입자”는 감염성 HBV 비리온(즉, 데인(Dane) 입자) 및 비-감염성 HBV 서브바이러스 입자(subviral particle)(즉, HBV 필라멘트 및/또는 HBV 구체) 둘 다를 지칭한다. HBV 비리온은 표면 단백질을 포함하는 외피(outer envelope), 코어 단백질을 포함하는 뉴클레오캡시드, 적어도 하나의 폴리머라아제 단백질 및 HBV 게놈을 포함한다. HBV 필라멘트 및 HBV 구체는 HBV 표면 단백질을 포함하지만, 코어 단백질, 폴리머라아제 및 HBV 게놈이 결여되어 있다. HBV 필라멘트 및 HBV 구체는 집합적으로 표면 항원(HBsAg) 입자로도 공지되어 있다. HBV 구체는 중간 HBV 표면 단백질 및 작은 HBV 표면 단백질을 포함한다. HBV 필라멘트는 또한 중간 HBV 표면 단백질, 작은 HBV 표면 단백질 및 큰 HBV 표면 단백질을 포함한다.

HBV 서브바이러스 입자는 비미립자형 또는 분비형 HBeAg를 포함할 수 있는데, 이는 HBV의 활발한 복제에 대한 마커로서의 역할을 한다.

HBV 감염의 불리한 생리학적 영향의 감소를 필요로 하는 개체에서 이를 감소시키는 방법으로서, 치료적 유효량의 개시된 화합물을 개체에게 투여하는 단계를 포함하는 방법이 본원에 제공된다.

HBV 감염의 감소, 둔화, 또는 억제를 필요로 하는 개체에서 이를 감소시키거나, 둔화시키거나, 억제하는 방법으로서, 치료적 유효량의 개시된 화합물을 개체에게 투여하는 단계를 포함하는 방법이 또한 본원에 제공된다.

HBV 감염으로 의한 간 손상의 회복의 유도를 필요로 하는 개체에서 이를 유도하는 방법으로서, 치료적 유효량의 개시된 화합물을 개체에게 투여하는 단계를 포함하는 방법이 본원에 제공된다.

HBV 감염에 대한 장기간의 항바이러스 요법의 생리학적 영향의 감소를 필요로 하는 개체에서 이를 감소시키는 방법으로서, 치료적 유효량의 개시된 화합물을 개체에게 투여하는 단계를 포함하는 방법이 본원에 제공된다.

HBV 감염의 예방적 치료를 필요로 하는 잠복성 HBV 감염 개체에서 이를 예방적으로 치료하는 방법으로서, 치료적 유효량의 개시된 화합물을 개체에게 투여하는 단계를 포함하는 방법이 본원에 제공된다.

또한, 개체에서 HBV 감염의 생리학적 영향을 감소시키는 데 사용하기 위한, 본원에 개시된 바와 같은 화합물 또는 제약 조성물이 본원에 제공된다. 또한, 개체에서 HBV 감염의 감소, 둔화 또는 억제에 사용하기 위한, 본원에 개시된 바와 같은 화합물 또는 제약 조성물이 본원에 제공된다.

또한, 개체에서 HBV 감염으로부터의 간 손상의 회복을 유도하는 데 사용하기 위한, 본원에 개시된 바와 같은 화합물 또는 제약 조성물이 본원에 제공된다.

또한, 개체에서 HBV 감염에 대한 장기간 항바이러스 요법의 생리학적 영향을 감소시키는 데 사용하기 위한, 본원에 개시된 바와 같은 화합물 또는 제약 조성물이 본원에 제공된다. 추가로, 개체에서 HBV 감염의 예방적 처치에 사용하기 위한 본원에 개시된 바와 같은 화합물 또는 제약 조성물이 본원에 제공되며, 여기서, 개체는 잠복성 HBV 감염을 앓고 있다.

일 구현예에서, 개체는 다른 치료용 HBV 약물 부류(예를 들어, HBV 폴리머라아제 억제제, 인터페론, 바이러스 침입 억제제, 바이러스 성숙 억제제, 문헌에 기재된 캡시드 조립 조절제, 확실하거나 알려지지 않은 기작의 항바이러스 화합물 등, 또는 이들의 조합)에 불응성이다. 다른 구현예에서, 개시된 방법 또는 용도는 다른 치료용 HBV 약물 부류가 개체의 바이러스 수치를 감소시키는 정도에 비해 더 많이 또는 더 빠른 속도로 HBV 감염 개체의 바이러스 수치를 감소시킨다.

일 구현예에서, 개시된 화합물 또는 이의 제약상 허용가능한 염의 투여는, HBV 감염의 예방적 처치를 필요로 하는 개체에서 이를 예방적으로 처치함에 있어서 유사한 결과를 달성하는 데 필요한 적어도 하나의 추가 치료제의 단독 투여에 비해 더 낮은 용량 또는 빈도로 적어도 하나의 추가 치료제를 투여하는 것을 허용한다.

일 구현예에서, 개시된 화합물 또는 이의 제약상 허용가능한 염의 투여는, HBV 폴리머라아제 억제제, 인터페론, 바이러스 침입 억제제, 바이러스 성숙 억제제, 특유의 캡시드 조립 조절제, 확실하거나 알려지지 않은 기작의 항바이러스 화합물, 및 이들의 임의의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는 화합물의 투여에 비해 더 많이 또는 더 빠른 속도로 개체의 바이러스 수치를 감소시킨다.

일 구현예에서, 개시된 방법 또는 용도는 HBV 감염 개체의 바이러스 수치를 감소시켜, 더 낮은 용량 또는 다양한 병용 치료요법이 사용되도록 할 수 있다.

일 구현예에서, 개시된 방법 또는 용도는 다른 HBV 약물 부류에 비해 바이러스 돌연변이 또는 바이러스 내성의 발생률을 낮추어, 장기간의 치료를 가능하게 하고 치료 요법 변경의 필요성을 최소화할 수 있다.

일 구현예에서, 본 발명의 화합물 또는 이의 제약상 허용가능한 염의 투여는, HBV 폴리머라아제 억제제, 인터페론, 바이러스 침입 억제제, 바이러스 성숙 억제제, 특유의 캡시드 조립 조절제, 확실하거나 알려지지 않은 기작의 항바이러스 화합물, 및 이들의 임의의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는 화합물의 투여보다 바이러스 돌연변이 또는 바이러스 내성의 발생률을 더 낮춘다.

일 구현예에서, 개시된 방법 또는 용도는 HBV 감염으로부터 HBV 비감염으로의, 또는 검출 가능한 HBV 바이러스 수치로부터 검출 불가능한 HBV 바이러스 수치로의 혈청전환율을 현재의 치료 요법의 혈청전환율보다 크게 증가시킨다. 본원에서 사용되는 바와 같이, "혈청전환”은 HBV 항체가 발생하여 검출 가능하게 되는 기간을 지칭한다.

일 구현예에서, 개시된 방법 또는 용도는 필요로 하는 개체에서 정상적인 건강을 증가시키거나 정상화시키거나 회복시키거나, 정상적인 건강의 완전한 회복을 유도하거나, 기대 수명을 회복시키거나, 바이러스 감염을 해소시킨다.

일 구현예에서, 개시된 방법 또는 용도는 HBV 감염 세포에서 방출되는 HBV RNA 입자를 제거하거나 그 수를 감소시켜, 개시된 화합물의 치료적 이점을 향상, 연장, 또는 증가시킨다.

일 구현예에서, 개시된 방법 또는 용도는 HBV 감염 개체로부터 HBV를 퇴치하여, 장기간의 치료 또는 평생 치료의 필요성을 제거하거나, 치료 기간을 단축시키거나, 다른 항바이러스제 투여량의 감소를 가능하게 한다.

다른 구현예에서, 개시된 방법 또는 용도는 대상체의 HBV 바이러스 수치를 모니터링하거나 검출하는 단계를 추가로 포함하며, 이 방법은 HBV 바이러스가 검출되지 않을 때까지를 포함하는 기간 동안 수행된다.

따라서, 일 구현예에서, HBV 감염의 치료를 필요로 하는 개체에서 이를 치료하는 방법으로서, 치료적 유효량의 화학식 I의 화합물 또는 이의 제약상 허용가능한 염을 개체에게 투여하는 단계를 포함하는 방법이 본원에 제공된다.

따라서, 일 구현예에서, HBV 감염의 치료를 필요로 하는 개체에서 이를 치료하는 방법으로서, 치료적 유효량의 화학식 I의 화합물 또는 이의 제약상 허용가능한 염을 개체에게 투여하는 단계를 포함하는 방법이 본원에 제공된다.

또 다른 구현예에서, HBV 감염의 치료를 필요로 하는 개체에서 HBV 감염을 치료하는 방법이 본원에 제공되며, 본 방법은 치료적 유효량의 표 1의 화합물 또는 이의 제약상 허용가능한 염을 개체에게 투여하는 단계를 포함한다.

본원에 제공된 임의의 방법의 구현예에서, 방법 또는 용도는 대상체의 HBV 바이러스 수치를 모니터링하는 단계를 추가로 포함할 수 있으며, 이 방법은 HBV 바이러스가 검출될 수 없게 되는 기간 동안 수행된다.

병용 요법

개시된 화합물은 HBV 감염의 치료에 유용한 하나 이상의 추가 화합물과 조합되어 유용할 수 있다. 이들 추가 화합물은 다른 개시된 화합물 및/또는 HBV 감염의 증상 또는 영향을 치료하거나, 예방하거나, 감소시키는 것으로 알려진 화합물을 포함할 수 있다. 이러한 화합물은 HBV 폴리머라아제 억제제, 인터페론, 바이러스 침입 억제제, 바이러스 성숙 억제제, 문헌에 기재된 캡시드 조립 조절제, 역전사효소 억제제, 면역조절제, TLR-작용제, 및 HBV 생명 주기에 영향을 미치거나 HBV 감염의 결과에 영향을 미치는 확실하거나 알려지지 않은 기작의 기타 제제를 포함하나, 이에 한정되지 않는다. 예를 들어, 추가 화합물은 HBV 병용 약물, HBV 백신, HBV DNA 폴리머라아제 억제제, 면역조절제, toll-유사 수용체(TLR) 조절제, 인터페론 알파 수용체 리간드, 히알루로니다아제 억제제, b형 간염 표면 항원(HBsAg) 억제제, 세포독성 T-림프구 관련 단백질 4(ipi4) 억제제, 시클로필린 억제제, HBV 바이러스 진입 억제제, 바이러스 mRNA를 표적화하는 안티센스 올리고뉴클레오티드, 짧은 간섭 RNA(siRNA) 및 ddRNAi 엔도뉴클레아제 조절제, 리보뉴클레오티드 리덕타아제 억제제, HBV E 항원 억제제, 공유적 폐쇄 원형 DNA(covalently closed circular DNA; cccDNA) 억제제, 파메소이드 X 수용체 작용제, HBV 항체, CCR2 케모카인 길항제, 티모신 작용제, 사이토카인, 핵단백질 조절제, 레틴산-유도성 유전자 1 시뮬레이터, NOD2 자극제, 포스파티딜이노시톨 3-키나아제(PI3K) 억제제, 인돌아민-2, 3-디옥시게나아제(IDO) 경로 억제제, PD-1 억제제, PD-L1 억제제, 재조합 티모신 알파-1, 브루톤 티로신 키나아제(BTK) 억제제, KDM 억제제, HBV 복제 억제제, 아르기나아제 억제제 및 다른 HBV 약물을 포함할 수 있다.

비제한적인 예에서, 개시된 화합물은 다음을 포함하는 군으로부터 선택되는 하나 이상의 약물(또는 이의 염)과 병용될 수 있다:

HBV 역전사효소 억제제 및 DNA 및 RNA 폴리머라아제 억제제.

일 구현예에서, 추가 치료제는 인터페론이다. 용어 "인터페론" 또는 "IFN"은 바이러스 복제 및 세포 증식을 억제하고 면역 반응을 조절하는 고도로 상동성인 종특이적 단백질의 계열의 임의의 구성원을 의미한다. 인간 인터페론은 다음의 3가지 부류로 분류된다: 유형 I, 유형 II, 및 유형 III. 개발되어 상업적으로 입수 가능한 인터페론의 재조합 형태는 본원에서 사용되는 용어 "인터페론"에 포함된다. 화학적으로 변형되거나 돌연변이된 인터페론과 같은 인터페론의 아형도 본원에서 사용되는 용어 "인터페론"에 포함된다.

따라서, 일 구현예에서, 화학식 I의 화합물은 인터페론과 조합하여 투여될 수 있다.

다른 구현예에서, 추가 치료제는 인터페론 부류에 속하는 생물작용제를 포함하는 면역 조절제 또는 면역 자극제의 요법제로부터 선택된다.

또한, 추가 치료제는 HBV 복제 또는 지속성에 필요한 다른 필수 바이러스 단백질(들) 또는 숙주 단백질의 기능을 방해하는 작용제를 포함하는 확실하거나 알려지지 않은 기작의 작용제일 수 있다.

다른 구현예에서, 추가 치료제는 바이러스의 침입 또는 성숙을 차단하거나 뉴클레오시드 또는 뉴클레오티드 또는 비-뉴클레오시드(뉴클레오티드) 폴리머라아제 억제제와 같이 HBV 폴리머라아제를 표적으로 하는 항바이러스제이다.

일 구현예에서, 추가 치료제는 자연적인 제한된 면역 반응을 유도하여 관련없는 바이러스에 대한 면역 반응을 유도하는 면역조절제이다. 즉, 면역조절제는 항원 제시 세포의 성숙, T세포의 증식, 및 사이토카인 방출에 영향을 미칠 수 있다(예를 들어, 특히 IL-12, IL-18, IFN-알파, -베타, 및 -감마 및 TNF-알파).

추가 구현예에서, 추가 치료제는 TLR 조절제 또는 TLR 작용제, 예컨대 TLR-7 작용제 또는 TLR-9 작용제이다.

본원에 제공된 임의의 방법에서, 방법은 적어도 하나의 HBV 백신, 뉴클레오시드 HBV 억제제, 인터페론, 또는 이들의 임의의 조합을 개체에게 투여하는 단계를 추가로 포함할 수 있다.

일 구현예에서, 본원에 기재된 방법은 뉴클레오티드/뉴클레오시드 유사체, 침입 억제제, 융합 억제제, 및 이들 또는 기타 항바이러스 기작의 임의의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는 적어도 하나의 추가 치료제를 투여하는 단계를 추가로 포함한다.

다른 양태에서, HBV 감염의 치료를 필요로 하는 개체에서 이를 치료하는 방법으로서, 치료적 유효량의 개시된 화합물을 단독으로 또는 역전사효소 억제제와 함께 개체에게 투여하여 투여하여 HBV 바이러스 수치를 감소시키는 단계; 및 치료적 유효량의 HBV 백신을 개체에게 추가로 투여하는 단계를 포함하는 방법이 본원에 제공된다.

다른 양태에서, HBV 감염의 치료를 필요로 하는 개체에서 이를 치료하는 방법으로서, 치료적 유효량의 개시된 화합물을 단독으로 또는 HBV 핵산을 표적으로 하는 안티센스 올리고뉴클레오티드 또는 RNA 간섭제와 함께 투여하여 HBV 바이러스 수치를 감소시키는 단계; 및 치료적 유효량의 HBV 백신을 개체에게 추가로 투여하는 단계를 포함하는 방법이 본원에 제공된다. 안티센스 올리고뉴클레오티드 또는 RNA 간섭제는 바이러스 게놈의 복제, 바이러스 RNA의 전사, 또는 바이러스 단백질의 번역을 억제하기에 충분한, 표적 HBV 핵산에 대한 상보성을 가지고 있다.

다른 구현예에서, 개시된 화합물과 적어도 하나의 추가 치료제는 공동으로 제형화된다. 또 다른 구현예에서, 개시된 화합물과 적어도 하나의 추가 치료제는 공동으로 투여된다.

본원에 기술된 임의의 병용 요법에 있어서, 상승 효과는 예를 들어 Sigmoid-E_max 방정식(문헌[Holford & Scheiner, 19981, Clin. Pharmacokinet. 6: 429-453]), 뢰베(Loewe) 가법성의 방정식(문헌[Loewe & Muischnek, 1926, Arch. Exp. Pathol Pharmacol. 114: 313-326]) 및 중간값-효과 방정식(문헌[Chou & Talalay, 1984, Adv. Enzyme Regul. 22: 27-55])과 같은 적합한 방법을 사용하여 계산될 수 있다. 상기 언급된 각각의 방정식을 실험 데이터에 적용하여 상응하는 그래프를 생성하여 약물 조합의 효과의 평가에 도움을 줄 수 있다. 상기 언급된 방정식과 관련된 상응하는 그래프는 각각 농도-효과 곡선(concentration-effect curve), 이소볼로그램 곡선(isobologram curve), 및 조합 지수 곡선(combination index curve)이다.

본원에 제공된 병용 요법제를 투여하는 방법들 중 임의의 방법의 일 구현예에서, 방법은 대상체의 HBV 바이러스 수치를 모니터링하거나 검출하는 단계를 추가로 포함할 수 있으며, 이 방법은 HBV 바이러스가 검출되지 않을 때까지를 포함하는 기간 동안 수행된다.

투여/투여량/제형

다른 양태에서, 적어도 하나의 개시된 화합물 또는 이의 제약상 허용되는 염을 제약상 허용되는 담체와 함께 포함하는 제약 조성물이 본원에 제공된다.

본 발명의 제약 조성물 중 활성 성분의 실제 투여량 수준은 환자에 대한 독성 없이 특정 환자, 조성물, 및 투여 방식에 대해 원하는 치료 반응을 달성하는 데 효과적인 활성 성분의 양이 얻어지도록 변화될 수 있다.

특히, 선택되는 투여량 수준은 사용된 특정 화합물의 활성, 투여 시간, 화합물의 배출 속도, 치료 지속 기간, 본 화합물과 병용되는 기타 약물, 화합물, 또는 물질, 치료받는 환자의 연령, 성별, 체중, 상태, 전반적 건강, 및 이전의 병력, 및 의학 분야에 잘 알려진 유사 요인을 비롯한 다양한 요인에 따라 달라질 것이다.

당업계의 통상의 지식을 가진 의사, 예를 들어 의료진 또는 수의사는 필요한 제약 조성물의 유효량을 쉽게 결정하고 처방할 수 있다. 예를 들어, 의사 또는 수의사는 원하는 치료 효과를 달성하기 위해 필요한 것보다 더 낮은 수준의 개시된 화합물이 투약되도록 제약 조성물의 투여를 시작하고, 원하는 효과가 달성될 때까지 투여량을 점진적으로 증가시킬 수 있다.

특정 구현예에서, 투여 용이성 및 투여량의 균일성을 위해 단위 제형(dosage unit form)으로 화합물을 제형화하는 것이 특히 유리하다. 본원에 사용된 단위 제형은 치료될 환자를 위한 단일 투여량으로 적합한 물리적으로 분리된 단위를 의미하며, 각각의 단위는 필요한 제약 비히클과 관련하여 원하는 치료 효과를 생성하도록 계산된 소정량의 개시된 화합물을 포함한다. 본 발명의 단위 제형은 (a) 개시된 화합물의 고유 특성 및 달성될 특정 치료 효과, 및 (b) 환자의 HBV 감염 치료를 위한 이러한 개시된 화합물의 배합/제형화 기술 분야에 내재된 한계에 좌우되고 이에 직접적으로 의존한다.

일 구현예에서, 본 발명의 조성물은 제약상 허용가능한 하나 이상의 부형제 또는 담체를 사용하여 제형화된다. 일 구현예에서, 본 발명의 제약 조성물은 치료적 유효량의 개시된 화합물 및 제약상 허용가능한 담체를 포함한다. 따라서, 본 발명을 설명하는 것은 적어도 하나의 제약상 허용가능한 담체를 치료적 유효량의 개시된 화합물과 혼합하는 단계를 포함하는 제약 조성물의 제조 방법이다.

일부 구현예에서, 개시된 화합물의 용량은 약 1 mg 내지 약 2,500 mg이다. 유사하게, 일부 구현예에서, 본원에 기재된 제2 화합물(즉, HBV 치료를 위한 또 다른 약물)의 용량은 약 1,000 mg 미만이다.

일 구현예에서, 본 발명은 치료적 유효량의 개시된 화합물을 단독으로 또는 제2 약제와 함께 담는 용기; 및 환자에서 HBV 감염의 하나 이상의 증상을 치료하거나, 예방하거나, 감소시키기 위한 화합물 사용 설명서를 포함하는 패키징된 제약 조성물에 관한 것이다.

본 발명의 임의의 조성물의 투여 경로는 경구, 비강, 직장, 질내, 비경구, 협측, 설하, 또는 국소 투여를 포함한다. 본 발명에 사용하기 위한 화합물은 임의의 적합한 경로, 예컨대 경구 또는 비경구, 예를 들어 경피, 경점막(예를 들어, 설하, 설측, (경)협측, (경)요도, 질(예를 들어, 경질 및 질주위), 비강(내), 및 (경)직장), 방광내, 폐내, 십이지장내, 위내, 척수강내, 피하, 근육내, 피내, 동맥내, 정맥내, 기관지내, 흡입, 및 국소 투여로 투여하기 위해 제형화될 수 있다.

적합한 조성물 및 투여 형태는, 예를 들어 정제, 캡슐, 캐플릿, 환제, 겔캡, 트로키, 분산액, 현탁액, 용액, 시럽, 과립, 비드, 경피 패치, 겔, 산제, 펠렛, 마그마, 로젠지, 크림, 페이스트, 플라스터, 로션, 디스크, 좌제, 비강 또는 경구 투여용 액체 스프레이, 흡입용 건조 분말 또는 에어로졸형 제형, 방광내 투여용 조성물 및 제형 등을 포함한다. 본 발명에 유용한 제형 및 조성물은 본원에 기재된 특정 제형 및 조성물에 한정되지 않음을 이해해야 한다.

경구용으로는, 정제, 당의정, 액체, 드롭, 좌제, 또는 캡슐, 캐플릿, 및 겔캡이 특히 적합하다. 경구용 조성물은 당업계에 공지된 임의의 방법에 따라 제조될 수 있으며, 이러한 조성물은 정제의 제조에 적합한 비활성, 무독성 제약 부형제들로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 작용제를 함유할 수 있다. 이러한 부형제는, 예를 들어 락토스와 같은 비활성 희석제; 옥수수 전분과 같은 과립 및 붕해제; 전분과 같은 결합제; 및 스테아르산마그네슘과 같은 활택제를 포함한다. 정제는 코팅되지 않을 수 있거나, 외형을 위해 또는 활성 성분의 방출을 지연시키기 위해 공지 기술에 의해 코팅될 수 있다. 경구용 제형은 활성 성분이 비활성 희석제와 혼합된 경질 젤라틴 캡슐로 제공될 수도 있다.

비경구 투여의 경우, 개시된 화합물은 주사 또는 주입용으로, 예를 들어 정맥내, 근육내, 또는 피하 주사 또는 주입용으로, 또는 볼루스 용량 또는 연속 주입 투여용으로 제형화될 수 있다. 선택적으로 현탁제, 안정화제, 또는 분산제와 같은 다른 제형화제를 함유하는, 유성 또는 수성 비히클 중의 현탁액, 용액, 또는 에멀젼이 사용될 수 있다.

당업자는 본원에 기재된 특정 절차, 구현예, 청구범위, 및 실시예에 대한 수많은 등가물을 단지 일상적인 실험을 사용하여 인식하거나 확인할 수 있을 것이다. 이러한 등가물은 본 발명의 범주 내에 있는 것으로 그리고 본원에 첨부된 청구범위에 포함되는 것으로 간주된다. 예를 들어, 당업계에서 인식되는 대안의 사용 및 단지 일상적인 실험의 사용에 의한, 반응 조건(반응 시간, 반응 크기/부피, 및 실험 시약, 예컨대 용매, 촉매, 압력, 대기 조건, 예를 들어 질소 분위기, 및 환원제/산화제를 포함하나, 이에 한정되지 않음)의 변형이 본 출원의 범주 내에 있음을 이해해야 한다.

본원에서 값 및 범위가 제공되는 모든 경우, 이러한 값 및 범위에 포함되는 모든 값 및 범위는 본 발명의 범주 내에 포함되는 의미로 이해되어야 한다. 또한, 이들 범위에 속하는 모든 값은 물론, 값 범위의 상한 또는 하한도 본 출원에서 고려된다.

다음의 실시예는 본 발명의 양태를 추가로 예시한다. 그러나, 실시예는 본원에 기재된 본 발명의 교시 또는 개시의 제한이 아니다.

일 구현예는 다음의 화학식을 충족시키는 화합물로 이루어진 군으로부터 선택되는 화합물에 관한 것이다:

실시예

실시예 1:

일반 반응식 1

화합물 I의 제조법이 위의 반응식 1에 제시되어 있다.

화합물 V를 염기, 예컨대 NaOAc의 존재 하에 알데히드 II, 아세토아세테이트 III 및 아미딘 IV의 축합에 의해 제조할 수 있다(방법 A). 화합물 VI(여기서, LG는 이탈기, 예컨대, 브로모를 나타냄)을 브롬화 시약, 예컨대 N-브로모숙신이미드를 사용하여 화합물 V로부터 제조할 수 있다. 염기, 예컨대 트리에탄올아민의 존재 하에 화합물 VI 및 화합물 VII을 커플링시켜 화합물 I을 수득한다. 대안적으로, 화합물 V를 키랄 분리하여 이의 단일 입체이성질체 화합물 Va 및 화합물 Vb를 제공할 수 있으며, 화합물 VIa를 N-브로모숙신이미드와 같은 브롬화 시약을 사용하여 화합물 Va로부터 제조하였다(방법 B). 염기, 예컨대 트리에탄올아민의 존재 하에 화합물 VIa 및 화합물 VII을 커플링시켜 화합물 Ia를 수득한다(방법 C).

방법 A:

에탄올과 같은 용매 중 일반 화학식 III의 케토에스테르(1 당량)의 용액에 일반 화학식 II의 알데히드(1 당량), 일반 화학식 IV의 카르복스아미딘 염산염(1 당량) 및 염기, 예컨대, 아세트산나트륨(1~1.2 당량)을 첨가하였다. 혼합물을 70~100℃까지 올리고, 질소 분위기 하에 6시간 내지 밤새 교반하였다. 실온까지 냉각시킨 후, 이를 농축 건조시켰다. 잔사를 디클로로메탄 또는 에틸 아세테이트로부터 추출하고, 물, 염수로 세척하고, 무수 Na₂SO₄로 건조시키고, 여과하였다. 여과액을 감압 하에 농축하여 잔사를 얻었고, 이를 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 일반 화학식 V의 디히드로피리미딘 생성물을 수득하였다. 적용 가능한 경우, 일반 화학식 V의 디히드로피리미딘 생성물의 입체이성질체를 단리하고 키랄 크로마토그래피를 사용하여 정제하여 일반 화학식 Va 및 일반 화학식 Vb의 디히드로피리미딘 생성물을 제공하였다.

방법 B:

사염화탄소와 같은 용매 중 일반 화학식 Va의 디히드로피리미딘(1 당량)의 용액에 N-브로모숙신이미드와 같은 브롬화제(0.9 내지 1.1 당량)를 실온 및 질소 분위기에서 첨가하였다. 혼합물을 60℃까지 올리고, 질소 분위기 하에 1시간 동안 교반하였다. 실온까지 냉각시킨 후, 이를 농축 건조시켰다. 잔사를 디클로로메탄 또는 에틸 아세테이트로부터 추출하고, 물, 염수로 세척하고, 무수 Na₂SO₄로 건조시키고, 여과하였다. 여과액을 감압 하에 농축하여 잔사를 제공하고, 이를 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 일반 화학식 VIa의 디히드로피리미딘 생성물을 수득하였다.

방법 C:

디클로로메탄과 같은 용매 중 일반 화학식 VII(1 당량)의 용액에 실온에서 트리에탄올아민과 같은 염기(10 당량)를 첨가하였다. 혼합물을 35℃에서 0.5시간 동안 교반한 다음, 디클로로메탄과 같은 용매 중 일반 화학식 VIa의 디히드로피리미딘(1 당량)의 용액을 질소 분위기에서 첨가하였다. 혼합물을 40℃까지 올리고, 질소 분위기 하에 2시간 동안 교반하였다. 0℃까지 냉각시킨 후, 반응 혼합물을 얼음물과 염산염 수용액(1.0 M)의 혼합물에 부었다. 생성된 혼합물을 디클로로메탄 또는 에틸 아세테이트로부터 추출하고, 물, 염수로 세척하고, 무수 Na₂SO₄로 건조시키고, 여과하였다. 여과액을 감압 하에 농축하여 잔사를 제공하고, 이를 C18 컬럼으로 정제하여 일반 화학식 I의 디히드로피리미딘 생성물을 수득하였다.

화학

본 발명의 화합물을 제조하기 위한 몇 가지 방법이 이하에 예시된다. 달리 지칭하지 않는 한, 모든 출발 물질은 상업적 공급자로부터 입수하였고 추가의 정제 없이 사용하였다.

이하에서, ACN은 아세토니트릴을 의미하고, AcOH는 아세트산을 의미하고, Boc는 tert-부틸옥시카르보닐을 의미하고, Bn은 벤질을 의미하고, calcd.는 이론치를 의미하고, Cbz는 벤질옥시카르보닐을 의미하고, col.은 컬럼을 의미하고, conc.는 농축되었음을 의미하고, m-CPBA는 3-클로로퍼벤조산을 의미하고, DAST는 (디에틸아미노)황 트리플루오라이드를 의미하고, DCM은 디클로로메탄을 의미하고, DEA는 디에탄올아민을 의미하고, DIEA는 N,N-디이소프로필에틸아민을 의미하고, DMAP는 4-(디메틸아미노)피리딘을 의미하고, DMF는 디메틸포름아미드를 의미하고, DMP는 Dess-Martin 페리오디난을 의미하고, EA는 에틸 아세테이트를 의미하고, ee는 거울상이성질체 과잉을 의미하고, ESI는 전자분무 이온화를 의미하고, HATU는 2-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트를 의미하고, Hex는 헥산을 의미하고, HNMR은 ¹H NMR을 의미하고, HPLC는 고성능 액체 크로마토그래피를 의미하고, IPA는 이소프로필 알코올을 의미하고, LC-MS 또는 LCMS는 액체 크로마토그래피-질량 분석을 의미하고, LDA는 리튬 디이소프로필아미드를 의미하고, Ms는 메탄술포닐을 의미하고, PE는 석유 에테르를 의미하고, PMB는 4-메톡시벤질을 의미하고, prep.은 분취용을 의미하고, Prep-HPLC는 분취용 HPLC를 의미하고, R_T 또는 R_t는 체류 시간을 의미하고, _(s) 또는 (s)는 고체를 의미하고, sat.는 포화를 의미하고, TBAF는 테트라부틸암모늄 플루오라이드를 의미하고, TBS는 tert-부틸디메틸실릴을 의미하고, TEA는 트리에틸아민을 의미하고, THF는 테트라히드로퓨란을 의미하고, T 또는 Temp는 온도를 의미하고, TsCl은 4-톨루엔술포닐 클로라이드를 의미하고, t-BuOK는 칼륨 tert-부톡시드를 의미하고, W는 파장을 의미한다.

화합물 VIa-1: 에틸 (S)-6-(브로모메틸)-4-(3-플루오로-2-메틸페닐)-2-(티아졸-2-일)-1,4-디히드로피리미딘-5-카르복실레이트(단일 부분입체 이성질체)

중간체 V-1: 에틸 4-(3-플루오로-2-메틸페닐)-6-메틸-2-(티아졸-2-일)-1,4-디히드로피리미딘-5-카르복실레이트(2개의 입체이성질체의 혼합물)(방법 A로 예시):

메탄올(50 mL) 중 3-플루오로-2-메틸벤즈알데히드(4.00 g, 28.9 mmol), 에틸 아세토아세테이트(3.77 g, 28.9 mmol) 및 티아졸-2-카르복시이미드아미드 염산염(4.74 g, 28.9 mmol)의 용액에 실온에서 아세트산나트륨(2.37 g, 28.9 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 75℃에서 12시간 동안 교반하였다. 이것을 실온까지 냉각시키고, 에틸 아세테이트로 추출하고, 염수로 세척하고, Na₂SO₄로 건조시키고, 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(석유 에테르 : 에틸 아세테이트 = 10 : 1 ~ 1:1)로 정제하여 표제 화합물 V-1(6.00 g, 58%의 수율)을 황색 고형물로 제공하였다. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆) δ 9.86 (s, 0.8H), 9.52 (d, J = 2.8 Hz, 0.2H), 8.00 - 7.98 (m, 0.4H), 7.96 (d, J = 3.2 Hz, 0.8H), 7.88 (d, J = 2.8 Hz, 0.8H), 7.20 - 7.15 (m, 1.2H), 7.06 - 6.99 (m, 1.8H), 5.83 (s, 0.8H), 5.73 (d, J = 3.2 Hz, 0.2H), 3.99 - 3.93 (m, 2H), 2.48 (s, 2.4H), 2.45 (s, 1.2H), 2.44 (s, 1.2H), 2.41 (s, 0.3H), 2.40 (s, 0.3H), 2.37 (s. 0.6H), 1.08 - 1.02 (m, 3H).

에틸 4-(3-플루오로-2-메틸페닐)-6-메틸-2-(티아졸-2-일)-1,4-디히드로피리미딘-5-카르복실레이트 V-1의 라세미 혼합물(6.00 g, 16.7 mmol)을 키랄 분취용 HPLC(분리 조건: 컬럼: Chiralpak OJ-H 5 μm 20 * 250 mm; 이동상: Hex: EtOH : DEA = 90 : 10 : 0.3 (15 mL/분); 온도: 30℃; 파장: 214 nm)로 분리하여 화합물 Va-1(1.60 g, 27%의 수율, 100% ee) 및 Vb-1(1.70 g, 28%의 수율, 100% ee)을 황색 고형물로 수득하였다.

중간체 Va-1: 키랄 분석(컬럼: Chiralpak OJ-H 5 μm 4.6 * 250 mm; 이동상: Hex: EtOH : DEA = 85 : 15 : 0.2 (1.0 mL/분); 온도: 30℃; 파장: 230 nm, R_T = 7.251분). Va-1은 하기 화학 분해(chemical resolution)에 의하면 절대 S 입체화학으로 지정되었으며, 이는 보고된 데이터와 일치한다(문헌[J. Med. Chem.,　2017,　60　(8), pp 3352-3371]). 선광도: [a]_D ²⁰ - 24^o (c 0.10, MeOH).

중간체 Vb-1: 키랄 분석(컬럼: Chiralpak OJ-H 5 μm 4.6 * 250 mm; 이동상: Hex: EtOH : DEA = 85 : 15 : 0.2 (1.0 mL/분); 온도: 30℃; 파장: 230 nm, R_T = 9.072분). 선광도: [a]_D ²⁰ + 35^o (c 0.10, MeOH).

화합물 VIa-1: 에틸 (S)-6-(브로모메틸)-4-(3-플루오로-2-메틸페닐)-2-(티아졸-2-일)-1,4-디히드로피리미딘-5-카르복실레이트(단일 부분입체 이성질체)(방법 B로 예시):

사염화탄소(300 mL) 중 (S)-에틸 4-(3-플루오로-2-메틸페닐)-6-메틸-2-(티아졸-2-일)- 1,4-디히드로피리미딘-5-카르복실레이트 Va-1(10 g, 99%의 순도, 27.6 mmol)의 용액에 질소 분위기 하에 실온에서 N-브로모 숙신이미드(4.9 g, 27.5 mmol)를 첨가하였다.

60℃에서 밤새 교반한 후, 반응 혼합물을 농축하여 잔사를 제공하고, 이를 에틸 아세테이트(100 mL)에 희석하고, 물(50 mL)로 2회 세척한 후, 합한 수성 층을 에틸 아세테이트(50 mL)로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 물(20 mL)로 2회 세척하고, 염수(20 mL)로 세척하고, Na₂SO_4(s)로 건조시키고, 여과하였다. 여과액을 감압 하에 농축시켜 잔사를 수득하고, 이를 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(석유 에테르 : 에틸 아세테이트 = 10 : 1~5 : 1)로 정제하여 표제 화합물(6.5 g, NMR에 의하면 95%의 순도, 51%의 수율)을 황색 고형물로 제공하였다. LC-MS (ESI): RT = 1.84분, 질량: C₁₈H₁₇BrFN₃O₂S에 대한 이론치: 437.0, m/z 실측치: 440.0 [M+H]+. 1H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 8.22 (s, 0.5H), 7.82 (d, J = 3.2 Hz, 1H), 7.53 (s, 0.4H), 7.44 (s, 0.6H), 7.25 - 7.08 (m, 2.5H), 6.96 - 6.92 (s, 1H), 5.99 (s, 0.6H), 5.93 (s, 0.4H), 4.92 - 4.77 (m, 1.6H), 4.67 - 4.65 (m, 0.4H), 4.13 - 4.07 (m, 2H), 2.53 (s, 1.7H), 2.41 (s, 1.3H), 1.14 (t, J = 7.2 Hz, 3H). 선광도: [a]_D ²⁰ + 0.093°o (c 0.10, MeOH).

순차적 반응을 통해 아릴 알데히드(II), 케토에스테르(III) 및 카르복스아미딘(IV)과 혼입된 일반 화학식 Va/VIa의 디히드로피리미딘의 제조는 하기 표 1에 나타나 있다:

[표 1]

화합물 I-1:

3-((3a S* ,7a S* )-1-((( S )-5-(에톡시카르보닐)-6-(3-플루오로-2-메틸페닐)-2-(티아졸-2-일)-3,6-디히드로피리미딘-4-일)메틸)-3,3-디플루오로-7-옥소헥사히드로-1H-피롤로[2,3-c]피리딘-6(2H)-일)-2,2-디메틸프로판산(단일 부분입체 이성질체)

중간체 I-1-2:

4-메톡시벤질 3-히드록시-2,2-디메틸프로파노에이트

N,N-디메틸포름아미드(100 mL) 중 3-히드록시-2,2-디메틸-프로피온산 I-1-1(8.0 g, 67.7 mmol) 및 탄산칼륨(28.1 g, 203 mmol)의 용액에 0℃에서 4-메톡시벤질클로라이드(12.7 g, 81.1 mmol)를 첨가하였다. 0℃에서 1시간 및 실온에서 1시간 동안 교반한 후, 반응 혼합물을 물(300 mL)에 붓고, 에틸 아세테이트(100 mL)로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 물(100 mL)로 3회 세척하고, Na₂SO_4(s)로 건조시키고, 여과하였다. 여과액을 농축시키고, 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(석유 에테르 : 에틸 아세테이트 = 2 : 1)로 정제하여 표제 화합물(13 g, 81%의 수율)을 황색 오일로 제공하였다. ¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 7.29 - 7.26 (m, 2H), 6.90 - 6.86 (m, 2H), 5.07 (s, 2H), 3.80 (s, 3H), 3.55 (s, 2H), 1.19 (s, 6H).

중간체 I-1-3:

4-메톡시벤질 2,2-디메틸-3-옥소프로파노에이트

디클로로메탄(100 mL) 중 디메틸 설폭사이드(14.5 g, 186 mmol)의 용액에 -65℃에서 디클로로메탄(20 mL) 중 옥살릴 클로라이드(11.84 g, 93.2 mmol)의 용액을 첨가하였다. 혼합물을 -65℃에서 0.5시간 동안 교반하고, 그 후 4-메톡시벤질 3-히드록시-2,2-디메틸프로파노에이트 I-1-2(14.8 g, 62.1 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 -65℃에서 0.5시간 동안 교반하고, 그 후 트리에틸아민(37.68 g, 373 mmol)을 첨가하였다. -65℃에서 0.5시간 및 실온에서 0.5시간 동안 교반한 후, 반응 혼합물을 물(100 mL)에 붓고, 디클로로메탄(100 mL)으로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 물(100 mL) 및 염수(100 mL)로 세척하고, Na₂SO_4(s)로 건조시키고, 여과시켰다. 여과액을 농축시키고, 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(석유 에테르 : 에틸 아세테이트 = 10 : 1)로 정제하여 표제 화합물(12 g, 82%의 수율)을 황색 오일로 제공하였다. ¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 9.63 (s, 1H), 7.27 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 6.88 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 5.11 (s, 2H), 3.80 (s, 3H), 1.34 (s, 6H).

중간체 I-1-5:

tert -부틸 3-포르밀-1H-피롤로[2,3-c]피리딘-1-카르복실레이트

아세토니트릴(80 mL) 중 1H-피롤로[2,3-c]피리딘-3-카르발데히드 I-1-4(5 g, 34.2 mmol)의 용액에 디-tert-부틸 디카보네이트(9 g, 41.2 mmol) 및 4-디메틸아미노피리딘(100 mg, 0.819 mmol)을 질소 분위기 하에 0℃에서 첨가하였다. 30℃에서 2시간 동안 교반한 후, 반응 혼합물을 감압 하에 농축하여 잔사를 제공하였다. 잔사를 물(100 mL)로 희석하고, 에틸 아세테이트(60 mL)로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수(50 mL)로 세척하고, Na₂SO_4(s)로 건조시키고, 여과시켰다. 여과액을 농축하여 표제 화합물(8 g, 95%의 수율)을 황색 고형물로 제공하였고, 이를 추가 정제 없이 후속 단계에서 직접 사용하였다. LC-MS (ESI): R_T = 1.50분, 질량: C₁₃H₁₄N₂O₃에 대한 이론치 246.1, m/z 실측치 247.0 [M+H]⁺.

중간체 I-1-6:

tert -부틸 3-(히드록시메틸)-1H-피롤로[2,3-c]피리딘-1-카르복실레이트

메탄올(30 mL) 및 테트라히드로퓨란(90 mL) 중 tert-부틸 3-포르밀-1H-피롤로[2,3-c]피리딘-1-카르복실레이트 I-1-5(8 g, 32.5 mmol)의 용액에 0℃의 질소 분위기 하에 소듐 보로히드라이드(600 mg, 15.8 mmol)를 첨가하였다. 0℃에서 2시간 동안 교반한 후, 반응 혼합물을 물(200 mL)로 ??칭한 후, 1 M의 염산염 수용액(약 10 mL)으로 pH 약 7까지 산성화하였다. 유기 상을 분리하고 수성 층을 에틸 아세테이트(100 mL)로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수(200 mL)로 세척하고, Na₂SO_4(s)로 건조시키고, 여과시켰다. 여과액을 감압 하에 농축하여 표제 화합물(8 g, LC-MS에 의하면 98%의 순도, 97%의 수율)을 황색 고형물로 제공하였고, 이를 추가 정제 없이 다음 단계에서 직접 사용하였다. LC-MS (ESI): R_T = 1.32분, 질량: C₁₃H₁₆N₂O₃에 대한 이론치 248.1, m/z 실측치 249.0 [M+H]⁺.

중간체 I-1-7:

tert -부틸 3-(히드록시메틸)-2,3-디히드로-1H-피롤로[2,3-c]피리딘-1-카르복실레이트

에탄올(30 mL) 중 tert-부틸 3-(히드록시메틸)-1H-피롤로[2,3-c]피리딘-1- 카르복실레이트 I-1-6(1.2 g, 98%의 순도, 4.74 mmol)의 용액에 실온에서 목탄(300 mg) 상의 20% 수산화팔라듐을 첨가하였다. 수소 분위기(3 MPa) 하에 40℃에서 밤새 교반한 후, 혼합물을 여과하고, 농축시켜 표제 화합물(1.1 g, 93%의 수율)을 연황색 오일로 제공하고, 이를 후속 단계에서 추가 정제 없이 직접 사용하였다. LC-MS (ESI): R_T = 1.32분, 질량: C₁₃H₁₈N₂O₃에 대한 이론치 250.1, m/z 실측치 251.1 [M+H]⁺.

중간체 I-1-8:

( 시스 )- tert -부틸 3-(히드록시메틸)옥타히드로-1H-피롤로[2,3-c]피리딘-1-카르복실레이트(2개의 입체이성질체의 혼합물)

에탄올(20 mL) 및 아세트산(4 mL) 중 tert-부틸 3-(히드록시메틸)-2,3-디히드로-1H-피롤로[2,3-c] 피리딘-1-카르복실레이트 I-1-7(1.1 g, 4.40 mmol)의 용액에 실온에서 백금(IV) 산화물(400 mg)을 첨가하였다. 수소 분위기(3 MPa) 하에 40℃에서 밤새 교반한 후, 혼합물을 여과하고, 농축시켜 표제 화합물(1.1 g, ¹H NMR에 의하면 95%의 순도, 93%의 수율)을 연황색 오일로 수득하고, 이를 다음 단계에서 추가 정제 없이 직접 사용하였다. ¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 4.30 - 4.07 (m, 1H), 3.83 (s, 0.5H), 3.72 - 3.55 (m, 3H), 3.44 - 3.34 (m, 1H), 3.19 - 2.82 (m, 3.5H), 2.50 - 2.38 (m, 1.5H), 2.33 - 2.23 (m, 0.5H), 2.10 - 1.94 (m, 1H), 1.77 - 1.68 (m, 1H), 1.45 (s, 4.5H), 1.44 (s, 4.5H).

중간체 I-1-9:

( 시스 )-6-벤질 1- tert -부틸 3-(히드록시메틸)헥사히드로-1H-피롤로[2,3-c]피리딘-1,6(2H)-디카르복실레이트(2개의 입체이성질체의 혼합물)

포화 중탄산나트륨 수용액(6 mL) 및 테트라히드로퓨란(14 mL) 중 (시스)-tert-부틸 3-(히드록시메틸)옥타히드로-1H-피롤로[2,3-c] 피리딘-1-카르복실레이트 I-1-8(1.1 g, 95%의 순도, 4.08 mmol)의 용액에 0℃의 질소 분위기 하에 벤질 클로로포르메이트(850 mg, 4.98 mmol)를 적가하였다. 실온에서 하룻밤 교반한 후, 혼합물을 감압 하에 농축하고, 물(50 mL)로 희석하고, 에틸 아세테이트(60 mL)로 3회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수(100 mL)로 세척하고, Na₂SO_4(s)로 건조시키고, 여과시켰다. 여과액을 농축시키고, 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(석유 에테르 : 에틸 아세테이트 = 4 : 1)로 정제하여 표제 화합물(1.5 g, ¹H NMR에 의하면 95%의 순도, 90%의 수율)을 무색 오일로 제공하였다. LC-MS (ESI): R_T = 1.58분, 질량: C₂₁H₃₀N₂O₅에 대한 이론치 390.2, m/z 실측치 391.1 [M+H]⁺. ¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 7.34 - 7.28 (m, 5H), 5.14 - 5.04 (m, 2H), 4.32 - 4.18 (m, 1H), 3.96 - 3.56 (m, 5H), 3.24 - 2.80 (m, 3H), 2.44 - 2.33 (m, 1.5H), 2.26 - 2.18 (m, 0.5H), 1.90 - 1.70 (m, 1H), 1.54 - 1.35 (m, 10H).

중간체 I-1-10:

( 시스 )-6-벤질 1- tert -부틸 3-(요오도메틸)헥사히드로-1H-피롤로[2,3-c]피리딘-1,6(2H)-디카르복실레이트(2개의 입체이성질체의 혼합물)

톨루엔(15 mL) 중 트리페닐포스핀(300 mg, 1.14 mmol) 및 이미다졸(150 mg, 2.20 mmol)의 용액에 요오드(300 mg, 1.18 mmol)를 0℃에서 첨가하였다. 0℃에서 0.5시간 동안 교반한 후, 톨루엔(5 mL) 중 (시스)-6-벤질 1-tert-부틸 3-(히드록시 메틸)헥사히드로-1H-피롤로[2,3-c]피리딘-1,6(2H)-디카르복실레이트 I-1-9(400 mg, 95%의 순도, 0.973 mmol)의 용액을 적가하였다. 실온에서 하룻밤 교반한 후, 혼합물을 포화 아황산나트륨 수용액(20 mL)으로 ??칭하고, 유기 층을 분리하고, 수성 층을 에틸 아세테이트(30 mL)로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수(50 mL)로 세척하고, Na₂SO_4(s)로 건조시키고, 여과시켰다. 여과액을 농축시키고, 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(석유 에테르 : 에틸 아세테이트 = 15 : 1~8 : 1)로 정제하여 표제 화합물(500 mg, ¹H NMR에 의하면 95%의 순도, 98%의 수율)을 백색 고형물로 제공하였다. ¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 7.35 - 7.29 (m, 5H), 5.14 - 5.10 (m, 2H), 4.32 - 3.69 (m, 4H), 3.56 - 3.30 (m, 0.5H), 3.14 - 2.96 (m, 3.5H), 2.79 - 2.53 (m, 1H), 2.39 - 2.27 (m, 1H), 2.16 - 2.09 (m, 0.5H), 1.88 - 1.78 (m, 0.5H), 1.68 - 1.62 (m, 1H), 1.54 - 1.33 (m, 10H).

중간체 I-1-11:

( 시스 )-6-벤질 1- tert -부틸 3-메틸렌헥사히드로-1H-피롤로[2,3-c]피리딘-1,6(2H)-디카르복실레이트(2개의 입체이성질체의 혼합물)

테트라히드로퓨란(10 mL) 중 (시스)-6-벤질 1-tert-부틸 3-(요오도메틸)헥사히드로-1H-피롤로 [2,3-c]피리딘-1,6(2H)-디카르복실레이트 I-1-10(500 mg, 95%의 순도, 0.949 mmol)의 용액에 질소 분위기 하에 0℃에서 칼륨 tert-부톡사이드(150 mg, 1.34 mmol)를 첨가하였다. 0℃에서 2시간 동안 교반한 후, 혼합물을 물(50 mL)로 ??칭하고, 에틸 아세테이트(60 mL)로 3회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수(100 mL)로 세척하고, Na₂SO_4(s)로 건조시키고, 여과시켰다. 여과액을 농축시키고, 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(석유 에테르 : 에틸 아세테이트 = 4 : 1)로 정제하여 표제 화합물(390 mg, ¹H NMR에 의하면 90%의 순도, 99%의 수율)을 무색 오일로 제공하였다. LC-MS (ESI): R_T = 1.69분, 질량: C₂₁H₂₈N₂O₄에 대한 이론치 372.2, m/z 실측치 373.1 [M+H]⁺. ¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 7.38 - 7.30 (m, 5H), 5.17 - 5.07 (m, 3H), 4.97 (s, 1H), 4.23- 4.06 (m, 2H), 3.99 - 3.68 (m, 3H), 3.04 - 2.86 (m, 2.3H), 2.62 - 2.56 (m, 0.7H), 1.94 (s, 2H), 1.45 - 1.37 (m, 9H).

중간체 I-1-12:

( 시스 )-6-벤질 1- tert -부틸 3-옥소헥사히드로-1H-피롤로[2,3-c]피리딘-1,6(2H)-디카르복실레이트(2개의 입체이성질체의 혼합물)

디클로로메탄(30 mL) 중 (시스)-6-벤질 1-tert-부틸 3-메틸렌헥사히드로-1H-피롤로[2,3-c] 피리딘-1,6(2H)-디카르복실레이트 I-1-11(390 mg, 90%의 순도, 0.942 mmol)의 용액을 -78℃까지 냉각시키고, 오존으로 처리하였다. 용액이 파란색이 되면(약 30분), 반응 혼합물을 질소로 퍼지하고, 디메틸설판(2 mL)으로 처리한 다음, 실온까지 가온되도록 하였다. 실온에서 밤새 교반한 후, 반응 혼합물을 감압 하에 농축시켜 표제 화합물(350 mg, ¹H NMR에 의하면 90%의 순도, 89%의 수율)을 무색 오일로 제공하였다. ¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 7.38 - 7.30 (m, 5H), 5.22 - 5.05 (m, 2H), 4.55 - 4.36 (m, 1H), 4.21 - 3.92 (m, 2H), 3.83 - 3.59 (m, 2H), 3.21 - 2.73 (m, 3H), 2.25 - 2.21 (m, 1H), 1.89 - 1.76 (m, 1H), 1.46 (br s, 9H).

중간체 I-1-13:

( 시스 )-6-벤질 1- tert -부틸 3,3-디플루오로헥사히드로-1H-피롤로[2,3-c]피리딘-1,6(2H)-디카르복실레이트(2개의 입체이성질체의 혼합물)

디클로로메탄(35 mL) 중 (시스)-6-벤질 1-tert-부틸 3-옥소헥사히드로-1H-피롤로[2,3-c] 피리딘-1,6(2H)-디카르복실레이트 I-1-12(850 mg, 90%의 순도, 2.04 mmol)의 용액에 -78℃에서 디에틸아미노황 트리플루오라이드(1.5 mL, 11.2 mmol)를 첨가하였다. -78℃에서 1시간 동안 교반한 후, 혼합물을 실온까지 가온하고, 실온에서 밤새 교반하였다. 그 후, 혼합물을 포화 중탄산나트륨 수용액으로 pH 약 8까지 염기화한 후, 디클로로메탄(80 mL)으로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수(80 mL)로 세척하고, Na₂SO_4(s)로 건조시키고, 여과시켰다. 여과액을 농축시키고, 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(석유 에테르 : 에틸 아세테이트 = 20 : 1~15 : 1)로 정제하여 표제 화합물(600 mg, 97%의 순도, 72%의 수율)를 연황색 오일로 제공하였다. LC-MS (ESI): R_T = 1.82분, 질량: C₂₀H₂₆F₂N₂O₄에 대한 이론치 396.2, m/z 실측치 397.1 [M+H]⁺.

중간체 I-1-14:

( 시스 )- tert -부틸 3,3-디플루오로옥타히드로-1H-피롤로[2,3-c]피리딘-1-카르복실레이트(2개의 입체이성질체의 혼합물)

이소프로필 알코올(40 mL) 중 (시스)-6-벤질 1-tert-부틸 3,3-디플루오로헥사히드로-1H-피롤로[2,3-c] 피리딘-1,6(2H)-디카르복실레이트 I-1-13(2.4 g, 95%의 순도, 5.75 mmol)의 용액에 실온에서 목탄(300 mg) 상의 20% 수산화팔라듐을 첨가하였다. 수소 분위기(60 psi) 하에 40℃에서 밤새 교반한 후, 혼합물을 여과하고 농축하여 표제 화합물(1.4 g, LC-MS에 의하면 55%의 순도, 51%의 수율)을 연황색 오일로 제공하였다. LC-MS (ESI): R_T = 1.38분, 질량: C₁₂H₂₀F₂N₂O₂에 대한 이론치 262.1, m/z 실측치 263.1 [M+H]⁺.

중간체 I-1-15:

( 시스 )- tert -부틸 3,3-디플루오로-6-(3-((4-메톡시벤질)옥시)-2,2-디메틸-3-옥소프로필)옥타히드로-1H-피롤로[2,3-c]피리딘-1-카르복실레이트(2개의 입체이성질체의 혼합물)

디클로로메탄(50 mL) 중 (시스)-tert-부틸 3,3-디플루오로옥타히드로-1H-피롤로[2,3-c] 피리딘-1-카르복실레이트 I-1-14(1.4 g, 55%의 순도, 2.94 mmol)의 용액에 아세트산(3 mL), 트리이소프로폭시티타늄(IV) 클로라이드(3.7 g, 14.2 mmol) 및 4-메톡시벤질 2,2-디메틸-3-옥소프로파노에이트 I-1-3(3.5 g, 90%의 순도, 13.3 mmol)을 실온에서 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 2시간 동안 질소 분위기 하에 교반하고, 그 후 소듐 트리아세톡시보로히드라이드(6 g, 28.3 mmol)를 첨가하였다. 질소 분위기 하에 실온에서 하룻밤 교반한 후, 반응 혼합물을 얼음물(100 mL)로 ??칭하고, 디클로로메탄(80 mL)으로 3회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수(150 mL)로 세척하고, Na₂SO_4(s)로 건조시키고, 여과시켰다. 여과액을 농축시키고, 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(석유 에테르 : 에틸 아세테이트 = 15 : 1~10 : 1)로 정제하여 표제 화합물(900 mg, ¹H NMR에 의하면 95%의 순도, 60%의 수율)을 연황색 오일로 제공하였다. LC-MS (ESI): R_T = 2.04분, 질량: C₂₅H₃₆F₂N₂O₅에 대한 이론치: 482.3, m/z 실측치: 483.4 [M+H]⁺. ¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 7.29 - 7.28 (m, 2H), 6.89 - 6.87 (m, 2H), 5.08 - 5.00 (m, 2H), 4.02 - 3.94 (m, 1H), 3.81 (s, 3H), 3.74 - 3.63 (m, 2H), 2.98 - 2.88 (m, 1H), 2.58 - 2.35 (m, 5.5H), 2.22 - 2.16 (m, 0.5H), 1.84 - 1.78 (m, 0.5H), 1.70 - 1.69 (m, 1.5H), 1.46 (s, 9H), 1.16 -1.13 (m, 6H).

중간체 I-1-16B (단일 부분입체 이성질체), I-1-16C (단일 부분입체 이성질체), 및 I-1-16A:

(3aR*,7aR*)-tert-부틸 3,3-디플루오로-6-(3-((4-메톡시벤질)옥시)-2,2-디메틸-3-옥소프로필)-7-옥소옥타히드로-1H-피롤로[2,3-c]피리딘-1-카르복실레이트(단일 부분입체 이성질체)

(3aS*,7aS*)-tert-부틸 3,3-디플루오로-6-(3-((4-메톡시벤질)옥시)-2,2-디메틸-3-옥소프로필)-7-옥소옥타히드로-1H-피롤로[2,3-c]피리딘-1-카르복실레이트(단일 부분입체 이성질체)

(시스)-tert-부틸 3,3-디플루오로-6-(3-((4-메톡시벤질)옥시)-2,2-디메틸-3-옥소프로필)-5-옥소옥타히드로-1H-피롤로[2,3-c]피리딘-1-카르복실레이트(2개의 입체이성질체의 혼합물)

퍼클로로메탄(15 mL) 및 물(15 mL) 중 (시스)-tert-부틸 3,3-디플루오로-6-(3-((4-메톡시벤질)옥시)-2,2-디메틸-3-옥소프로필)옥타히드로-1H-피롤로[2,3-c]피리딘-1-카르복실레이트 I-1-15(900 mg, 95%의 순도, 1.77 mmol)의 용액에 루테늄(III) 클로라이드 삼수화물(250 mg, 37%의 순도, 0.354 mmol) 및 과요오드산나트륨(1.9g, 8.88mmol)을 0℃, 질소 분위기 하에 첨가하였다. 20℃에서 2시간 동안 교반한 후, 혼합물을 물(50 mL)로 희석하고, 디클로로메탄(60 mL)으로 3회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수(100 mL)로 세척하고, Na₂SO_4(s)로 건조시키고, 여과시켰다. 여과액을 농축시키고, 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(석유 에테르 : 에틸 아세테이트 = 4 : 1)로 정제하여 4개 이성질체의 혼합물(370 mg, 97%의 순도, 41%의 수율)을 무색 오일로 제공하였다. LC-MS (ESI): R_T = 1.71분, 질량: C₂₅H₃₄F₂N₂O₆에 대한 이론치: 496.2, m/z 실측치: 497.4 [M+H]⁺.

4개 이성질체의 혼합물(370 mg, 0.723 mmol, 97%의 순도)을 키랄 분취용 HPLC(분리 조건: 컬럼: Chiralpak IB 5 μm 20 * 250 mm; 이동상: Hex: IPA = 60 : 40 (12 mL/분); 온도: 30℃; 파장: 214 nm)로 분리하여 I-1-16A(140 mg, ¹H NMR에 의하면 95%의 순도, 37%의 수율), I-1-16B(80 mg, ¹H NMR에 의하면 95%의 순도, 21%의 수율, 100% ee) 및 I-1-16C(80 mg, ¹H NMR에 의하면 95%의 순도, 21%의 수율, 97.6% ee)를 황색 고형물로 제공하였다.

중간체 I-1-16A: 키랄 분석(컬럼: Chiralpak IE 5 μm 4.6 * 250 mm; 이동상: Hex: IPA = 60 : 40 (1 mL/분); 온도: 30℃; 파장: 214 nm, R_T = 7.032분, 7.264분). ¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 7.33 - 7.28 (m, 2H), 6.89 - 6.87 (m, 2H), 5.10 - 5.01 (m, 2H), 4.26 - 4.11 (m, 1H), 3.92 - 3.75 (m, 4H), 3.69 - 3.36 (m, 4.7H), 3.26 - 3.20 (m, 0.3H), 2.92 - 2.83 (m, 1H), 2.61 - 2.55 (m, 1H), 2.49 - 2.43 (m, 1H), 1.50 - 1.47 (m, 9H), 1.19 (s, 6H).

중간체 I-1-16B: 키랄 분석(컬럼: Chiralpak IE 5 μm 4.6 * 250 mm; 이동상: Hex: IPA = 60 : 40 (1 mL/분); 온도: 30℃; 파장: 214 nm, R_T = 8.887분). ¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 7.31 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 6.89 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 5.11 - 5.03 (m, 2H), 4.49 - 4.30 (m, 1H), 3.98 - 3.89 (m, 0.5H), 3.81 - 3.72 (m, 5H), 3.63 - 3.49 (m, 1H), 3.34 - 3.22 (m, 0.5H), 3.15 - 2.95 (m, 3H), 1.88 - 1.79 (m, 1H), 1.73 - 1.66 (m, 1H), 1.46 (s, 9H), 1.20 (s, 3H), 1.17 (s, 3H).

중간체 I-1-16C: 키랄 분석(컬럼: Chiralpak IE 5 μm 4.6 * 250 mm; 이동상: Hex: IPA = 60 : 40 (1 mL/분); 온도: 30℃; 파장: 214 nm, R_T = 10.716분). ¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 7.31 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 6.89 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 5.11 - 5.03 (m, 2H), 4.49 - 4.30 (m, 1H), 4.03 - 3.90 (m, 0.5H), 3.81 - 3.72 (m, 5H), 3.64 - 3.45 (m, 1H), 3.34 - 3.20 (m, 0.5H), 3.15 - 2.95 (m, 3H), 1.88 - 1.79 (m, 1H), 1.73 - 1.66 (m, 1H), 1.46 (s, 9H), 1.20 (s, 3H), 1.17 (s, 3H).

중간체 I-1-17:

3-((3aS*,7aS*)-1-(tert-부톡시카르보닐)-3,3-디플루오로-7-옥소헥사히드로-1H-피롤로[2,3-c]피리딘-6(2H)-일)-2,2-디메틸프로판산(단일 부분입체 이성질체)

이소프로필 알코올(6 mL) 중 (3aS*,7aS*)-tert-부틸 3,3-디플루오로-6-(3-((4-메톡시벤질)옥시) -2,2-디메틸-3-옥소프로필)-7-옥소옥타히드로-1H-피롤로[2,3-c]피리딘-1-카르복실레이트 I-1-16C(80 mg, 95%의 순도, 0.153 mmol)의 용액에 실온에서 목탄(20 mg) 상의 20% 수산화팔라듐을 첨가하였다. 수소 분위기(15 psi) 하에 40℃에서 밤새 교반한 후, 혼합물을 여과하고 농축하여 표제 화합물(55 mg, 95%의 수율)을 연황색 오일로 제공하였다. LC-MS (ESI): R_T = 1.24분, 질량: C₁₇H₂₆F₂N₂O₅에 대한 이론치: 376.2, m/z 실측치: 375.1 [M-H]^-.

중간체 I-1-18:

3-((3aS*,7aS*)-3,3-디플루오로-7-옥소헥사히드로-1H-피롤로[2,3-c]피리딘-6(2H)-일)-2,2-디메틸프로판산(단일 부분입체 이성질체)

디옥산 중 4 M 염산(5 mL) 중 3-((3aS*,7aS*)-1-(tert-부톡시카르보닐)-3,3-디플루오로-7-옥소헥사히드로-1H-피롤로[2,3-c]피리딘-6(2H)-일)-2,2-디메틸프로판산 I-1-17(55 mg, 0.146 mmol)의 용액을 실온에서 3시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 농축하여 표제 화합물(45 mg, 98%의 수율)을 백색 고형물로 제공하였고, 이를 추가 정제 없이 다음 단계에서 직접 사용하였다. LC-MS (ESI): R_T = 0.29분, 질량: C₁₂H₁₈F₂N₂O₃에 대한 이론치: 276.1, m/z 실측치: 275.1 [M-H]^-.

화합물 I-1:

3-((3aS*,7aS*)-1-(((S)-5-(에톡시카르보닐)-6-(3-플루오로-2-메틸페닐)-2-(티아졸-2-일)-3,6-디히드로피리미딘-4-일)메틸)-3,3-디플루오로-7-옥소헥사히드로-1H-피롤로[2,3-c]피리딘-6(2H)-일)-2,2-디메틸프로판산(단일 부분입체 이성질체)(방법 C로 예시)

디클로로메탄(2 mL) 중 3-((3aS*,7aS*)-3,3-디플루오로-7-옥소헥사히드로-1H-피롤로[2,3-c] 피리딘-6(2H)-일)-2,2-디메틸프로판산 I-1-18(45 mg, 0.144 mol)의 용액에 실온에서 트리에탄올아민(100 mg, 0.67 mol)을 첨가하였다. 혼합물을 35℃에서 0.5시간 동안 교반한 다음, 디클로로메탄(1 mL) 중 (S)-에틸 6-(브로모메틸)-4-(3-플루오로-2-메틸페닐)-2-(티아졸-2-일)-1,4-디히드로 피리미딘-5-카르복실레이트 VIa-1(70 mg, 95% 순도, 0.152 mol)의 용액을 첨가하였다. 40℃에서 2시간 동안 교반한 후, 반응 혼합물을 0℃까지 냉각시키고, 얼음물(30 mL)과 1 M의 염산염 수용액(1.5 mL)의 혼합물에 부었다. 생성된 혼합물을 디클로로메탄(20 mL)으로 3회 추출하였다. 합한 유기 층을 물(50 mL)로 2회 세척하고, 염수(50 mL)로 세척하고, Na₂SO_4(s)로 건조시키고, 여과하였다. 여과액을 농축하고, C18 컬럼(아세토니트릴 : 물 = 5%~85%)으로 정제하여 표제 화합물(40 mg, 99.3%의 순도, 44%의 수율)을 황색 고형물로 제공하였다. LC-MS (ESI): R_T = 3.391분, 질량: C₃₀H₃₄F₃N₅O₅S에 대한 이론치 633.2, m/z 실측치: 634.3 [M+H]⁺. ¹H NMR (400 MHz, CDCl₃ + D₂O (one drop)) δ 7.84 (d, J = 3.2 Hz, 1H), 7.41 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 7.12 - 7.05 (m, 2H), 6.93 - 6.86 (m, 1H), 6.00 (s, 1H), 4.53 (d, J = 15.6 Hz, 1H), 4.38 (d, J = 15.2 Hz, 1H), 4.11 - 3.99 (m, 3H), 3.71 - 3.65 (m, 1H), 3.59 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 3.44 - 3.32 (m, 2H), 3.20 (d, J = 13.6 Hz, 1H), 3.02 - 2.91 (m, 1H), 2.88 - 2.80 (m, 1H), 2.53 (s, 3H), 2.19 - 2.10 (m, 1H), 1.95 - 1.87 (m, 1H), 1.31 (s, 3H), 1.30 (s, 3H), 1.12 (t, J = 6.8 Hz, 3H).

화합물 I-2:

3-((3a S* ,7a S* )-1-((( S )-5-(에톡시카르보닐)-6-(3-플루오로-2-메틸페닐)-2-(티아졸-2-일)-3,6-디히드로피리미딘-4-일)메틸)-3,3-디플루오로-5-옥소헥사히드로-1H-피롤로[2,3-c]피리딘-6(2H)-일)-2,2-디메틸프로판산(단일 부분입체 이성질체)

중간체 I-2-1:

3-(( 시스 )-1-(tert-부톡시카르보닐)-3,3-디플루오로-5-옥소헥사히드로-1H-피롤로[2,3-c]피리딘-6(2H)-일)-2,2-디메틸프로판산(2개의 입체이성질체의 혼합물)

이소프로필 알코올(8 mL) 중 (시스)-tert-부틸 3,3-디플루오로-6-(3-((4-메톡시벤질)옥시)-2,2-디메틸-3-옥소프로필)-5-옥소옥타히드로-1H-피롤로[2,3-c]피리딘-1-카르복실레이트 I-1-16A(140 mg, 95%의 순도, 0.268 mmol)의 용액에 목탄(20 mg) 상의 20% 수산화팔라듐을 실온에서 첨가하였다. 수소 분위기(15 psi) 하에 40℃에서 밤새 교반한 후, 혼합물을 여과하고 농축하여 표제 화합물(100 mg, 99.2%의 수율)을 연황색 오일로 제공하였다. LC-MS (ESI): R_T = 1.23분, 질량: C₁₇H₂₆F₂N₂O₅에 대한 이론치: 376.2, m/z 실측치: 375.2 [M-H]^-.

중간체 I-2-2:

3-(( 시스 )-3,3-디플루오로-5-옥소헥사히드로-1H-피롤로[2,3-c]피리딘-6(2H)-일)-2,2-디메틸프로판산 염산염(2개의 입체이성질체의 혼합물)

디옥산 중 4 M 염산(5 mL) 중 (시스)-1-(tert-부톡시카르보닐)-3,3-디플루오로-5-옥소헥사히드로-1H-피롤로[2,3-c]피리딘-6(2H)-일)-2,2-디메틸프로판산 I-2-1(100 mg, 0.266 mmol)의 용액을 실온에서 3시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 농축하여 표제 화합물(80 mg, 100%의 순도, 95%의 수율)을 백색 고형물로 제공하였고, 이를 추가 정제 없이 다음 단계에서 직접 사용하였다. LC-MS (ESI): R_T = 0.29분, 질량: C₁₂H₁₈F₂N₂O₃에 대한 이론치: 276.1, m/z 실측치: 275.1 [M-H]^-.

중간체 I-2-3:

3-(( 시스 )-1-((( S )-5-(에톡시카르보닐)-6-(3-플루오로-2-메틸페닐)-2-(티아졸-2-일)-3,6-디히드로피리미딘-4-일)메틸)-3,3-디플루오로-5-옥소헥사히드로-1H-피롤로[2,3-c]피리딘-6(2H)-일)-2,2-디메틸프로판산(2개의 입체이성질체의 혼합물)

화합물 I-2-2 및 VIa-1로부터 전환됨. 방법 C의 유사한 절차를 이용하여 표제 화합물을 황색 고형물로 합성하였다. LC-MS (ESI): R_T = 3.739분, 질량: C₃₀H₃₄F₃N₅O₅S에 대한 이론치: 633.2, m/z 실측치: 634.3 [M+H]⁺. ¹H NMR (400 MHz, CDCl₃ + D₂O (one drop)) δ 7.82 - 7.81 (m, 1H), 7.45 - 7.43 (m, 1H), 7.14 - 7.08 (m, 1H), 7.04 - 6.98 (m, 1H), 6.95 - 6.90 (m, 1H), 6.02 (s, 0.5H), 6.01 (s, 0.5H), 4.41 (d, J = 15.6 Hz, 0.5H), 4.29 (d, J = 14.4 Hz, 0.5H), 4.12 - 3.92 (m, 3H), 3.73 - 3.64 (m, 1H), 3.59 - 3.30 (m, 5H), 3.25 - 3.15 (m, 0.5H), 3.02 - 2.93 (m, 1.5H), 2.76 - 2.69 (m, 1H), 2.53 (s, 3H), 2.47 - 2.41 (m, 1H), 1.27 - 1.20 (m, 6H), 1.14 - 1.07 (m, 3H).

중간체 I-2-4:

( S )-에틸 6-((( 시스 )-6-(3-(알릴옥시)-2,2-디메틸-3-옥소프로필)-3,3-디플루오로-5-옥소옥타히드로-1H-피롤로[2,3-c]피리딘-1-일)메틸)-4-(3-플루오로-2-메틸페닐)-2-(티아졸-2-일)-1,4-디히드로피리미딘-5-카르복실레이트(2개의 입체이성질체의 혼합물)

N,N-디메틸포름아미드(2 mL) 중 3-((시스)-1-(((S)-5-(에톡시카르보닐)-6-(3-플루오로-2-메틸페닐)-2-(티아졸-2-일)-3,6-디히드로피리미딘-4-일)메틸)-3,3-디플루오로-5-옥소헥사히드로-1H-피롤로[2,3-c]피리딘-6(2H)-일)-2,2-디메틸프로판산 I-2-3(50 mg, 99.8%의 순도, 0.079 mmol) 및 브롬화알릴(10 mg, 0.083 mmol)의 용액에 탄산칼륨(20 mg, 0.145 mmol)을 0℃에서 첨가하였다. 0℃에서 4시간 동안 교반한 후, 혼합물을 여과하고, 감압 하에 농축시켜 잔사를 제공하고, 이를 C18 컬럼(아세토니트릴 : 물 = 5%~100%)으로 정제하여 표제 화합물(50 mg, 94%의 수율)을 황색 오일로 제공하였다. LC-MS (ESI): R_T = 1.81분, 질량: C₃₃H₃₈F₃N₅O₅S에 대한 이론치: 673.3, m/z 실측치: 674.1 [M+H]⁺.

중간체 I-2-4A 및 I-2-4B:

( S )-에틸 6-(((3a R* ,7a R* )-6-(3-(알릴옥시)-2,2-디메틸-3-옥소프로필)-3,3-디플루오로-5-옥소옥타히드로-1H-피롤로[2,3-c]피리딘-1-일)메틸)-4-(3-플루오로-2-메틸페닐)-2-(티아졸-2-일)-1,4-디히드로피리미딘-5-카르복실레이트(단일 부분입체 이성질체)

( S )-에틸 6-(((3a S* ,7a S* )-6-(3-(알릴옥시)-2,2-디메틸-3-옥소프로필)-3,3-디플루오로-5-옥소옥타히드로-1H-피롤로[2,3-c]피리딘-1-일)메틸)-4-(3-플루오로-2-메틸페닐)-2-(티아졸-2-일)-1,4-디히드로피리미딘-5-카르복실레이트(단일 부분입체 이성질체)

(S)-에틸 6-(((시스)-6-(3-(알릴옥시)-2,2-디메틸-3-옥소프로필)-3,3- 디플루오로-5-옥소옥타히드로-1H-피롤로[2,3-c]피리딘-1-일)메틸)-4-(3-플루오로-2-메틸페닐)-2-(티아졸-2-일)-1,4-디히드로피리미딘-5-카르복실레이트 I-2-4의 혼합물(50 mg, 0.074 mmol)을 키랄 분취용 HPLC(분리 조건: 컬럼: Chiralpak IC 5 μm 20 * 250 mm; 이동상: Hex: EtOH = 70 : 30 (18 mL/분); 온도: 30℃; 파장: 254 nm)로 분리하여 I-2-4A(20 mg, 40%의 수율, 100%의 입체순도) 및 I-2-4B(20 mg, 40%의 수율, 99.9%의 입체순도)를 황색 고형물로 제공하였다.

중간체 I-2-4A: LC-MS (ESI): R_T = 1.81분, 질량: C₃₃H₃₈F₃N₅O₅S에 대한 이론치: 673.3, m/z 실측치: 674.5 [M+H]⁺. 키랄 분석(컬럼: Chiralpak IC 5 μm 4.6 * 250 mm; 이동상: Hex: EtOH = 70 : 30 (1 mL/분); 온도: 30℃; 파장: 254 nm, R_T = 6.247분).

중간체 I-2-4B: LC-MS (ESI): R_T = 1.82분, 질량: C₃₃H₃₈F₃N₅O₅S에 대한 이론치: 673.3, m/z 실측치: 675.0 [M+H]⁺. 키랄 분석(컬럼: Chiralpak IC 5 μm 4.6 * 250 mm; 이동상: Hex: EtOH = 70 : 30 (1 mL/분); 온도: 30℃; 파장: 254 nm, R_T = 9.269분).

화합물 I-2:

3-((3a S* ,7a S* )-1-((( S )-5-(에톡시카르보닐)-6-(3-플루오로-2-메틸페닐)-2-(티아졸-2-일)-3,6-디히드로피리미딘-4-일)메틸)-3,3-디플루오로-5-옥소헥사히드로-1H-피롤로[2,3-c]피리딘-6(2H)-일)-2,2-디메틸프로판산(단일 부분입체 이성질체)

디클로로메탄(2 mL) 및 피롤리딘(0.2 mL) 중 (S)-에틸 6-(((3aS*,7aS*)-6-(3-(알릴옥시)-2,2-디메틸-3-옥소프로필) -3,3-디플루오로-5-옥소옥타히드로-1H-피롤로[2,3-c]피리딘-1-일)메틸)-4-(3-플루오로-2-메틸페닐)-2-(티아졸-2-일)-1,4-디히드로피리미딘-5-카르복실레이트 I-2-4B(20 mg, 0.030 mol)의 용액에 0℃에서 테트라키스(트리페닐포스핀)팔라듐(5 mg, 0.004 mmol)을 첨가하였다. 30℃에서 3시간 동안 교반한 후, 반응 혼합물을 물(20 mL)로 ??칭하고, 디클로로메탄(30 mL)으로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수(60 mL)로 세척하고, Na₂SO_4(s)로 건조시키고, 여과시켰다. 여과액을 농축하고, C18 컬럼(아세토니트릴 : 물 = 5%~100%)으로 정제하여 표제 화합물(10 mg, 99.9%의 순도, 53%의 수율)을 연황색 고형물로 제공하였다. LC-MS (ESI): R_T = 3.413분, 질량: C₃₀H₃₄F₃N₅O₅S에 대한 이론치: 633.2, m/z 실측치: 634.3 [M+H]⁺. ¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 9.26 (s, 1H), 7.82 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 7.48 - 7.42 (m, 1H), 7.13 - 7.08 (m, 1H), 7.05 - 7.03 (m, 1H), 6.95 - 6.91 (m, 1H), 6.01 (s, 1H), 4.48 - 4.44 (m, 1H), 4.08 - 3.99 (m, 2H), 3.97 - 3.92 (m, 1H), 3.74 - 3.70 (m, 1H), 3.61 (d, J = 13.6 Hz, 1H), 3.51 - 3.28 (m, 4H), 3.04 - 2.89 (m, 2H), 2.73 (dd, J = 16.8 Hz, 4.8 Hz, 1H), 2.52 (s, 3H), 2.41 (dd, J = 16.0 Hz, 9.2 Hz, 1H), 1.29 (s, 3H), 1.22 (s, 3H), 1.09 (t, J = 7.6 Hz, 3H).

화합물 I-3:

3-((3a S* ,7a S* )-1-((( S )-5-(에톡시카르보닐)-6-(3-플루오로-2-메틸페닐)-2-(티아졸-2-일)-3,6-디히드로피리미딘-4-일)메틸)-3,3-디플루오로헥사히드로-1H-피롤로[2,3-c]피리딘-6(2H)-일)-2,2-디메틸-3-옥소프로판산(단일 부분입체 이성질체)

중간체 I-3-2:

1- tert -부틸 4-에틸 3-(벤질아미노)-5,6-디히드로피리딘-1,4(2H)-디카르복실레이트

톨루엔(300 mL) 중 1-tert-부틸 4-에틸 3-옥소피페리딘-1,4-디카르복실레이트 I-3-1(15 g, 55.3 mmol) 및 벤질아민(7 mL, 64.1 mmol)의 용액에 p-톨루엔술폰산 일수화물(1 g, 5.26 mmol)을 실온에서 첨가하였다. 130℃에서 밤새 교반한 후, 반응 혼합물을 실온까지 냉각시키고, 감압 하에 농축하여 표제 화합물(22 g, 88%의 순도, 97%의 수율)을 갈색 고형물로 제공하였고, 이를 추가 정제 없이 다음 단계에서 직접 사용하였다. LC-MS (ESI): R_T = 1.94분, 질량: C₂₀H₂₈N₂O₄에 대한 이론치 360.2, m/z 실측치 361.1 [M+H]⁺.

중간체 I-3-3:

( 시스 )-1- tert -부틸 4-에틸 3-(벤질아미노)피페리딘-1,4-디카르복실레이트(2개의 입체이성질체의 혼합물)

아세토니트릴(300 mL) 및 아세트산(100 mL) 중 1-tert-부틸 4-에틸 3-(벤질아미노)-5,6-디히드로피리딘-1,4(2H)- 디카르복실레이트 I-3-2(28 g, 88%의 순도, 68.4 mmol)의 용액에 소듐 트리아세톡시히드로보레이트(40 g, 189 mmol)를 0℃에서 첨가하였다. 0℃에서 2시간 동안 교반한 후, 혼합물을 감압 하에 농축하여 잔사를 제공하고, 이를 5.0 M의 수산화나트륨 수용액(200 mL) 및 에틸 아세테이트(200 mL)로 희석하였다. 생성된 용액을 0℃에서 격렬하게 교반하면서 1.0 M의 수산화나트륨 수용액으로 pH 약 10까지 산성화하고 에틸 아세테이트(200 mL)로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 물(100 mL)로 2회 세척하고, 염수(100 mL)로 세척하고, Na₂SO_4(s)로 건조시키고, 여과하였다. 반응 혼합물을 감압 하에 농축하여 표제 화합물(28 g, 85%의 순도, 96%의 수율)을 황색 오일로 제공하였고, 이를 추가 정제 없이 후속 단계에서 직접 사용하였다. LC-MS (ESI): R_T = 1.81분, 질량: C₂₀H₃₀N₂O₄에 대한 이론치 362.2, m/z 실측치 363.2 [M+H]⁺.

중간체 I-3-4:

( 시스 )-1- tert -부틸 4-에틸 3-(벤질(2-에톡시-2-옥소에틸)아미노)피페리딘-1,4-디카르복실레이트(2개의 입체이성질체의 혼합물)

아세토니트릴(400 mL) 중 (시스)-1-tert-부틸 4-에틸 3-(벤질아미노)피페리딘-1,4-디카르복실레이트 I-3-3(28 g, 85%의 순도, 65.7 mmol) 및 에틸 2-브로모아세테이트(32 g, 192 mmol)의 용액에 탄산칼륨(27 g, 195 mmol)을 0℃에서 첨가하였다. 90℃에서 밤새 교반한 후, 반응 혼합물을 실온까지 냉각시키고, 여과하였다. 여과액을 농축시키고, C18 컬럼(아세토니트릴 : 물 = 5%~100%)으로 정제하여 표제 화합물(10 g, ¹H NMR에 의하면 95%의 순도, 32%의 수율)을 황색 오일로 제공하였다. ¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 7.28 - 7.27 (m, 4H), 7.24 - 7.20 (m, 1H), 4.21 - 4.10 (m, 4H), 4.05 - 4.02 (m, 1H), 3.97 - 3.90 (m, 2H), 3.76 - 3.67 (m, 1H), 3.63 - 3.57 (m, 1H), 3.47 - 3.40 (m, 1H), 3.36 - 3.29 (m, 3H), 2.97 - 2.93 (m, 1H), 2.00 - 1.92 (m, 1H), 1.84 - 1.72 (m, 1H), 1.46 (s, 9H), 1.26 - 1.23 (m, 6H).

중간체 I-3-5:

6- tert -부틸 3a-에틸 1-벤질-3-옥소헥사히드로-1H-피롤로[2,3-c]피리딘-3a,6(2H)-디카르복실레이트(2개의 입체이성질체의 혼합물)

톨루엔(100 mL) 중 (시스)-1-tert-부틸 4-에틸 3-(벤질(2-에톡시-2-옥소에틸)아미노) 피페리딘-1,4-디카르복실레이트 I-3-4(10 g, 95%의 순도, 21.2 mmol)의 용액에 칼륨 tert-부톡사이드(3 g, 26.7 mmol)를 0℃에서 첨가하였다. 0℃에서 2시간 동안 교반한 후, 반응 혼합물을 물(100 mL)로 ??칭하고, 에틸 아세테이트(100 mL)로 3회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수(200 mL)로 세척하고, Na₂SO_4(s)로 건조시키고, 여과시켰다. 여과액을 농축시키고, 실리카 겔 컬럼(석유 에테르 : 에틸 아세테이트 = 20 : 1~3 : 1)으로 정제하여 표제 화합물(5.6 g, 94%의 순도, 62%의 수율)를 연황색 오일로 제공하였다. LC-MS (ESI): R_T = 1.77분, 1.81분, C₂₂H₃₀N₂O₅에 대한 질량 계산치 402.2, m/z 실측치 403.1 [M+H]⁺.

중간체 I-3-6:

( 시스 )-tert-부틸 1-벤질-3-옥소헥사히드로-1H-피롤로[2,3-c]피리딘-6(2H)-카르복실레이트(2개의 입체이성질체의 혼합물)

12 M의 염산염 수용액(10 mL) 중 6-tert-부틸 3a-에틸 1-벤질-3-옥소헥사히드로-1H-피롤로[2,3-c] 피리딘-3a,6(2H)-디카르복실레이트 I-3-5(680 mg, 78%의 순도, 1.32 mmol)의 용액에 실온에서. 100℃에서 밤새 교반한 후, 혼합물을 감압 하에 농축 건조시켜 잔사를 제공하였다. 디클로로메탄(20 mL) 중 잔사의 용액에 트리에틸아민(1.3 g, 12.8 mmol) 및 디-tert-부틸 디카보네이트(600 mg, 2.75 mmol)를 0℃에서 첨가하였다. 실온에서 2시간 동안 교반한 후, 혼합물을 농축시키고, 실리카 겔 컬럼(석유 에테르 : 에틸 아세테이트 = 20 : 1~3 : 1)으로 정제하여 표제 화합물(350 mg, ¹H NMR에 의하면 90%의 순도, 72%의 수율)을 연황색 오일로 제공하였다. LC-MS (ESI): R_T = 1.76분, 질량: C₁₉H₂₆N₂O₃에 대한 이론치 330.2, m/z 실측치 331.2 [M+H]⁺. ¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 7.31 - 7.20 (m, 5H), 4.23 (d, J = 13.2 Hz, 1H), 4.15 - 4.01 (m, 1H), 3.81 - 3.52 (m, 1H), 3.38 (d, J = 12.8 Hz, 1H), 3.32 (dd, J = 14.4 Hz, 3.2 Hz, 1H), 3.27 - 3.01 (m, 3H), 2.83 (d, J = 18.0 Hz, 1H), 2.56 - 2.51 (m, 1H), 1.97 - 1.88 (m, 1H), 1.75 - 1.67 (m, 1H), 1.53 - 1.45 (m, 9H).

중간체 I-3-7:

( 시스 )- tert -부틸 1-벤질-3,3-디플루오로헥사히드로-1H-피롤로[2,3-c]피리딘-6(2H)-카르복실레이트(2개의 입체이성질체의 혼합물)

디클로로메탄(70 mL) 중 (시스)-tert-부틸 1-벤질-3-옥소헥사히드로-1H-피롤로[2,3-c] 피리딘-6(2H)-카르복실레이트 I-3-6(2.6 g, 95%의 순도, 7.48 mmol)의 용액에 -78℃에서 디클로로메탄(5 mL) 중 디에틸아미노황 트리플루오라이드(5 mL, 37.8 mmol)의 용액을 첨가하였다. 실온에서 하룻밤 교반한 후, 반응 혼합물을 포화 중탄산나트륨 수용액(50 mL)으로 ??칭하고, 디클로로메탄(50 mL)으로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수(50 mL)로 세척하고, Na₂SO_4(s)로 건조시키고, 여과시켰다. 여과액을 농축시키고, 실리카 겔 크로마토그래피(석유 에테르 : 에틸 아세테이트 = 20 : 1~5 : 1)로 정제하여 표제 화합물(1.3 g, 77%의 순도, 38%의 수율)을 연황색 오일로 제공하였다. LC-MS (ESI): R_T = 1.93분, 질량: C₁₉H₂₆F₂N₂O₂에 대한 이론치: 352.2, m/z 실측치: 353.1 [M+H]⁺.

중간체 I-3-8:

( 시스 )-1-벤질-3,3-디플루오로옥타히드로-1H-피롤로[2,3-c]피리딘 염산염(2개의 입체이성질체의 혼합물)

에틸 아세테이트(10 mL) 중 4 M의 염산 중 (시스)-tert-부틸 1-벤질-3,3-디플루오로헥사히드로-1H-피롤로[2,3-c] 피리딘-6(2H)-카르복실레이트 I-3-7(1.2 g, 77%의 순도, 2.62 mmol)의 용액을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 혼합물을 농축시켜 표제 화합물(950 mg, ¹H NMR에 의하면 70%의 순도, 97%의 수율)을 백색 고형물로 제공하였다. LC-MS (ESI): R_T = 1.53분, 질량: C₁₄H₁₈F₂N₂에 대한 이론치: 252.1, m/z 실측치: 253.0 [M+H]⁺. ¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 10.9 (s, 1H), 9.71 (s, 1H), 7.72 - 7.71 (m, 2H), 7.43 - 7.39 (m, 3H), 5.22 - 5.05 (m, 1H), 4.70 - 4.59 (m, 1H), 4.51 - 4.21 (m, 3H), 3.84 - 3.72 (m, 1H), 3.63 - 3.52 (m, 2H), 3.44 - 3.32 (m, 2H), 2.36 - 2.25 (m, 1H), 2.20 - 2.12 (m, 1H).

중간체 I-3-9:

벤질 3-(( 시스 )-1-벤질-3,3-디플루오로헥사히드로-1H-피롤로[2,3-c]피리딘-6(2H)-일)-2,2-디메틸-3-옥소프로파노에이트(2개의 입체이성질체의 혼합물)

N,N-디메틸포름아미드(5 mL) 중 3-(벤질옥시)-2,2-디메틸-3-옥소프로판산(180 mg, 0.810 mmol)의 용액에 N,N-디이소프로필에틸아민(0.5 mL, 3.03 mmol) 및 2-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트(380 mg, 0.999 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 30시간 동안 교반한 후, 1-벤질-3,3-디플루오로옥타히드로-1H-피롤로[2,3-c]피리딘 염산염 I-3-8(300 mg, 70%의 순도, 0.727 mmol)을 첨가하였다. 실온에서 밤새 교반한 후, 혼합물을 물(20 mL)에 붓고, 에틸 아세테이트(20 mL)로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수(30 mL)로 세척하고, Na₂SO_4(s)로 건조시키고, 여과시켰다. 여과액을 농축시키고, 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(석유 에테르 : 에틸 아세테이트 = 10 : 1~5 : 1)로 정제하여 표제 화합물(250 mg, ¹H NMR에 의하면 80%의 순도, 60%의 수율)을 무색 오일로 제공하였다. LC-MS (ESI): R_T = 1.76분, 1.78분, 질량: C₂₆H₃₀F₂N₂O₃에 대한 이론치 456.2, m/z 실측치 457.2 [M+H]⁺. ¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 7.34 - 7.20 (m, 10H), 5.27 (d, J = 11.2 Hz, 1H), 5.08 (d, J = 12.4 Hz, 1H), 4.83 - 4.78 (m, 1H), 4.23 - 4.20 (m, 1H), 3.61 - 3.54 (m, 1H), 3.47 - 3.35 (m, 2H), 3.19 - 3.02 (m, 2H), 2.92 - 2.83 (m, 2H), 2.74 - 2.59 (m, 2H), 2.34 - 2.26 (m, 1H), 1.46 (s, 6H).

중간체 I-3-10:

3-(( 시스 )-3,3-디플루오로헥사히드로-1H-피롤로[2,3-c]피리딘-6(2H)-일)-2,2-디메틸-3-옥소프로판산(2개의 입체이성질체의 혼합물)

이소프로판올(3 mL) 중 벤질 3-((시스)-1-벤질-3,3-디플루오로헥사히드로-1H-피롤로[2,3-c] 피리딘-6(2H)-일)-2,2-디메틸-3-옥소프로파노에이트 I-3-9(160 mg, 80%의 순도, 1.58 mmol)의 용액에 활성탄(200 mg, 12.5 mmol) 및 팔라듐 디아세테이트(12 mg, 0.053 mmol)를 첨가하였다. 수소 분위기(벌룬) 하에 50℃에서 2시간 동안 교반한 후, 혼합물을 여과하고 여과액을 농축하여 표제 화합물(75 mg, 97%의 수율)을 백색 고형물로 제공하였다. LC-MS (ESI): R_T = 0.22분, 질량: C₁₂H₁₈F₂N₂O₃에 대한 이론치 276.1, m/z 실측치 277.0 [M+H]⁺.

화합물 I-3-11 및 I-3

3-((3a R* ,7a R* )-1-((( S )-5-(에톡시카르보닐)-6-(3-플루오로-2-메틸페닐)-2-(티아졸-2-일)-3,6-디히드로피리미딘-4-일)메틸)-3,3-디플루오로헥사히드로-1H-피롤로[2,3-c]피리딘-6(2H)-일)-2,2-디메틸-3-옥소프로판산(단일 부분입체 이성질체)

3-((3a S* ,7a S* )-1-((( S )-5-(에톡시카르보닐)-6-(3-플루오로-2-메틸페닐)-2-(티아졸-2-일)-3,6-디히드로피리미딘-4-일)메틸)-3,3-디플루오로헥사히드로-1H-피롤로[2,3-c]피리딘-6(2H)-일)-2,2-디메틸-3-옥소프로판산(단일 부분입체 이성질체)

디클로로메탄(2 mL) 중 3-((시스)-3,3-디플루오로헥사히드로-1H-피롤로[2,3-c]피리딘-6(2H)-일) -2,2-디메틸-3-옥소프로판산 I-3-10(75 mg, 0.24 mmol)의 용액에 트리에탄올아민(200 mg, 1.34 mmol)을 첨가하였다. 디클로로메탄(1 mL) 중 (S)-에틸 6-(브로모메틸)-4-(3-플루오로-2-메틸페닐)-2-(티아졸-2-일)-1,4-디히드로피리미딘-5-카르복실레이트 VIa-1(130 mg, 95%의 순도, 0.282 mmol)의 용액을 40℃에서 첨가하였다. 40℃에서 밤새 교반한 후, 혼합물을 농축시키고, 분취용 HPLC(컬럼: waters-3 X-bridge C18 (5 μm 19 * 150 mm), 이동상 A: 물(0.1% 중탄산암모늄), 이동상 B: 아세토니트릴, UV: 214 nm, 유량: 20 mL/분, 구배: 35~70% (%B))로 정제하여 I-3-11(30 mg, 97.9%의 순도, 16%의 수율) 및 I-3(35 mg, 99.3%의 순도, 19%의 수율)을 황색 고형물로 제공하였다.

화합물 I-3-11: LC-MS (ESI): R_T = 3.499분, 질량: C₃₀H₃₄F₃N₅O₅S에 대한 이론치: 633.2, m/z 실측치: 634.3 [M+H]⁺. ¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 7.89 (s, 1H), 7.48 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 7.15 - 7.10 (m, 1H), 6.98 - 6.91 (m, 2H), 5.98 (s, 1H), 4.39 (d, J = 13.2 Hz, 1H), 4.06 - 3.80 (m, 4H), 3.55 - 3.45 (m, 1H), 3.22 - 2.73 (m, 4H), 2.59 - 2.54 (m, 1H), 2.50 (s, 3H), 2.04 - 1.70 (m, 3H), 1.49 (s, 3H), 1.48 (s, 3H), 1.08 (t, J = 7.2 Hz, 3H).

화합물 I-3: LC-MS (ESI): R_T = 3.519분, 질량: C₃₀H₃₄F₃N₅O₅S에 대한 이론치: 633.2, m/z 실측치: 634.3 [M+H]⁺. ¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 8.53 (s, 1H), 7.93 (s, 1H), 7.48 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 7.17 - 7.12 (m, 1H), 7.05 - 7.03 (m, 1H), 6.94 - 6.90 (m, 1H), 6.01 (s, 1H), 4.97 - 4.85 (m, 1H), 4.87 (d, J = 14.8 Hz, 1H), 4.09 - 4.01 (m, 2H), 3.94 - 3.90 (m, 2H), 3.27 - 3.12 (m, 3H), 2.93 - 2.85 (m, 1H), 2.77 - 2.70 (m, 1H), 2.53 (s, 3H), 2.49 - 2.43 (m, 1H), 2.05 - 2.00 (m, 1H), 1.76 - 1.72 (m, 1H), 1.49 (s, 3H), 1.47 (s, 3H), 1.12 (t, J = 7.2 Hz, 3H).

화합물 I-4:

3-((시스)-1-(((S)-5-(에톡시카르보닐)-6-(3-플루오로-2-메틸페닐)-2-(티아졸-2-일)-3,6-디히드로피리미딘-4-일)메틸)-3,3-디플루오로헥사히드로-1H-피롤로[3,2-c]피리딘-5(6H)-일)-2,2-디메틸-3-옥소프로판산(2개의 입체이성질체의 혼합물)

중간체 I-4-2:

1- tert -부틸 3-에틸 4-(벤질아미노)-2,3-디히드로피리딘-1,3(6H)-디카르복실레이트

톨루엔(150 mL) 중 1-tert-부틸 3-에틸 4-옥소피페리딘-1,3-디카르복실레이트 I-4-1(15 g, 55.3 mmol) 및 벤질아민(6.0 g, 56.0 mmol)의 용액에 p-톨루엔술폰산 일수화물(150 mg, 0.79 mmol)을 실온에서 첨가하였다. 140℃에서 밤새 교반한 후, 혼합물을 감압 하에 농축시켜 표제 화합물(16.0 g, 91%의 순도, 73%의 수율)을 갈색 고형물로 제공하였다. ¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 9.22 (s, 1H), 7.35 - 7.32 (m, 2H), 7.27 - 7.24 (m, 3H), 4.39 (d, J = 6.4 Hz, 2H), 4.15 (q, J = 7.2 Hz, 2H), 4.10 (s, 2H), 3.47 (t, J = 5.6 Hz, 2H), 2.37 - 2.35 (m, 2H), 1.46 (s, 9H), 1.27 (t, J = 7.2 Hz, 3H).

중간체 I-4-3:

( 시스 )-1- tert -부틸 3-에틸 4-(벤질아미노)피페리딘-1,3-디카르복실레이트(2개의 입체이성질체의 혼합물)

아세토니트릴(80 mL) 및 아세트산(60 mL) 중 1-tert-부틸 3-에틸 4-(벤질아미노)-2,3-디히드로피리딘-1,3(6H)- 디카르복실레이트 I-4-2(16.0 g, 91%의 순도, 40.4 mmol)의 용액에 소듐 트리아세톡시보로히드라이드(32.0 g, 151 mmol)를 0℃에서 첨가하였다. 실온에서 5시간 동안 교반한 후, 혼합물을 감압 하에 농축하여 잔사를 제공하고, 이를 5.0 M의 수산화나트륨 수용액(200 mL) 및 에틸 아세테이트(200 mL)로 희석하였다. 생성된 용액을 0℃에서 격렬하게 교반하면서 1.0 M의 수성 수산화나트륨으로 pH 약 10까지 산성화하고 에틸 아세테이트(200 mL)로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 물(100 mL)로 2회 세척하고, 염수(100 mL)로 세척하고, Na₂SO_4(s)로 건조시키고, 여과하였다. 여과액을 감압 하에 농축시켜 표제 화합물(14.0 g, 96% 수율)을 무색 오일로서 제공하였다. LC-MS (ESI): RT = 1.78분, 질량: C₂₀H₃₀N₂O₄에 대한 이론치: 362.5, m/z 실측치: 363.2 [M+H]⁺. ¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 7.33 - 7.22 (m, 5H), 4.20 - 4.07 (m, 2H), 3.87 - 3.47 (m, 4H), 3.32 - 3.25 (m, 1H), 3.08 - 3.04 (m, 1H), 2.95 - 2.32 (m, 2H), 1.93 - 1.80 (m, 1H), 1.71 - 1.60 (m, 1H), 1.46 (s, 2H), 1.44 (s, 7H), 1.30 - 1.23 (m, 3H).

중간체 I-4-4:

( 시스 )-1- tert -부틸-3-에틸-4-(벤질(2-에톡시-2-옥소에틸)아미노)피페리딘-1,3-디카르복실레이트(2개의 입체이성질체의 혼합물)

아세토니트릴(250 mL) 중 (시스)-1-tert-부틸 3-에틸 4-(벤질아미노)피페리딘-1,3-디카르복실레이트 I-4-3(14.0 g, 38.6 mmol) 및 에틸 2-브로모아세테이트(14.0 g, 83.8 mmol)의 용액에 탄산칼륨(15.0 g, 108.5 mmol)을 실온에서 첨가하였다. 85℃에서 밤새 교반한 후, 혼합물을 감압 하에 농축시켜 잔사를 제공하고, 이를 물(150 mL) 및 에틸 아세테이트(200 mL)로 희석하였다. 유기 층을 분리하고 수성 층을 에틸 아세테이트(200 mL)로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 물(100 mL)로 2회 세척하고, 염수(100 mL)로 세척하고, Na₂SO_4(s)로 건조시키고, 여과하였다. 여과액을 농축시키고, 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(석유 에테르 : 에틸 아세테이트 = 10 : 1~5 : 1)로 정제하여 표제 화합물(17.0 g, 98%의 수율)을 무색 오일로 제공하였다. LC-MS (ESI): RT = 1.93분, 질량: C₂₄H₃₆N₂O₆에 대한 이론치: 448.3, m/z 실측치: 449.2 [M+H]⁺.

중간체 I-4-5:

( 시스 )-5- tert -부틸-3a-에틸-1-벤질-3-옥소헥사히드로-1H-피롤로[3,2-c]피리딘-3a,5(6H)-디카르복실레이트(2개의 입체이성질체의 혼합물)

톨루엔(100 mL) 중 (시스)-1-tert-부틸-3-에틸-4-(벤질(2-에톡시-2-옥소에틸)아미노) 피페리딘-1,3-디카르복실레이트 I-4-4(17.0 g, 37.9 mmol)의 용액에 칼륨 tert-부틸레이트(5.7 g, 50.8 mmol)를 0℃에서 첨가하였다. 혼합물을 0℃에서 2시간 동안 교반한 후, 혼합물을 물(100 mL)로 ??칭하고, 1.0 M의 염산염 수용액(50 mL)으로 산성화하였다. 생성된 혼합물을 디클로로메탄(200 mL)으로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 물(100 mL)로 2회 세척하고, 염수(100 mL)로 세척하고, Na₂SO_4(s)로 건조시키고, 여과하였다. 여과액을 농축시키고, 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(석유 에테르 : 에틸 아세테이트 = 10 : 1~5 : 1)로 정제하여 표제 화합물(5.0 g, 84%의 순도, 28%의 수율)을 무색 오일로 제공하였다. LC-MS (ESI): RT = 1.78분, 1.80분, 질량: C₂₂H₃₀N₂O₅에 대한 이론치: 402.2, m/z 실측치: 403.2 [M+H]⁺.

중간체 I-4-6:

( 시스 )- tert -부틸-1-벤질-3-옥소헥사히드로-1H-피롤로[3,2-c]피리딘-5(6H)-카르복실레이트(2개의 입체이성질체의 혼합물)

농축된 염산 수용액(80 mL) 중 (시스)-5-tert-부틸-3a-에틸-1-벤질-3-옥소헥사히드로-1H-피롤로 [3,2-c]피리딘-3a,5(6H)-디카르복실레이트 I-4-5(5.0 g, 84%의 순도, 10.4 mmol)의 용액을 100℃에서 밤새 교반하였다. 0℃까지 냉각시킨 후, 혼합물을 포화 수산화나트륨 수용액으로 pH 약 10까지 염기화하였다. 생성된 수용액을 테트라히드로퓨란(80 mL)으로 희석한 다음, 디-tert-부틸 디카보네이트(4.8 g, 22.0 mmol)를 첨가하였다. 40℃에서 2시간 동안 교반한 후, 혼합물을 감압 하에 농축하였다. 잔사를 물(30 mL) 및 에틸 아세테이트(50 mL)로 희석하였다. 유기 층을 분리하고 수성 층을 에틸 아세테이트(50 mL)로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 물(20 mL)로 2회 세척하고, 염수(20 mL)로 세척하고, Na₂SO_4(s)로 건조시키고, 여과하였다. 여과액을 농축시키고, 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(석유 에테르 : 에틸 아세테이트 = 10 : 1~5 : 1)로 정제하여 표제 화합물(2.5 g, 73%의 수율)을 황색 오일로 제공하였다. LC-MS (ESI): RT = 1.75분, 질량: C₁₉H₂₆N₂O₃에 대한 이론치: 330.2, m/z 실측치: 331.1 [M+H]⁺. ¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 7.34 - 7.29 (m, 5H), 4.04 (d, J = 13.2 Hz, 1H), 3.70 - 3.46 (m, 4H), 3.33 - 3.17 (m, 3H), 2.73 - 2.89 (m, 1H), 2.59 - 2.58 (m, 1H), 1.83 - 1.79 (m, 2H), 1.46 (s, 9H).

중간체 I-4-7:

( 시스 )- tert -부틸 1-벤질-3,3-디플루오로헥사히드로-1H-피롤로[3,2-c]피리딘-5(6H)-카르복실레이트(2개의 입체이성질체의 혼합물)

디클로로메탄(120 mL) 중 (시스)-tert-부틸-1-벤질-3-옥소헥사히드로-1H-피롤로[3,2-c] 피리딘-5(6H)-카르복실레이트 I-4-6(2.5 g, 7.57 mmol)의 용액에 -78℃에서 디에틸아미노황 트리플루오라이드(6.1 g, 37.8 mmol)를 첨가하였다. -78℃에서 30분 동안 교반한 후, 혼합물을 실온까지 가온하고, 실온에서 밤새 교반하였다. 혼합물을 물(50 mL)로 희석하고, 포화 중탄산나트륨 수용액(60 mL)으로 염기화하고, 에틸 아세테이트(80 mL)로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 물(20 mL)로 2회 세척하고, 염수(20 mL)로 세척하고, Na₂SO_4(s)로 건조시키고, 여과하였다. 여과액을 농축시키고, 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(석유 에테르 : 에틸 아세테이트 = 10 : 1~5 : 1)로 정제하여 표제 화합물(1.2 g, 45%의 수율)을 황색 오일로 제공하였다. LC-MS (ESI): R_T = 1.94분, 질량: C₁₉H₂₆F₂N₂O₂에 대한 이론치: 352.2, m/z 실측치: 353.1 [M+H]⁺. ¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 7.34 - 7.28 (m, 5H), 4.04 - 3.88 (m, 2H), 3.71 - 3.68 (m, 1H), 3.47 - 3.20 (m, 4H), 3.08 - 3.07 (m, 1H), 2.76 - 2.65 (m, 1H), 2.49 - 2.43 (m, 1H), 1.88 - 1.84 (m, 1H), 1.75 - 1.69 (m, 1H), 1.47 (s, 9H).

중간체 I-4-8:

( 시스 )-1-벤질-3,3-디플루오로옥타히드로-1H-피롤로[3,2-c]피리딘 이염산염(2개의 입체이성질체의 혼합물)

에틸 아세테이트(10 mL) 중 4.5 M의 염산염 중 (시스)-tert-부틸 1-벤질-3,3-디플루오로헥사히드로-1H-피롤로[3,2-c]피리딘-5(6H)-카르복실레이트 I-4-7(1.2 g, 3.41 mmol)의 용액을 실온에서 2시간 동안 교반하고, 감압 하에 농축하여 표제 화합물(1.1 g, 85%의 순도, 84%의 수율)을 백색 고형물로 제공하였고, 이를 추가 정제 없이 다음 단계에서 직접 사용하였다. LC-MS (ESI): RT = 1.46분, 질량: C₁₄H₁₈F₂N₂에 대한 이론치: 252.1, m/z 실측치: 253.0 [M+H]⁺.

중간체 I-4-9:

에틸 3-(( 시스 )-1-벤질-3,3-디플루오로헥사히드로-1H-피롤로[3,2-c]피리딘-5(6H)-일)-2,2-디메틸-3-옥소프로파노에이트(2개의 입체이성질체의 혼합물)

N,N-디메틸포름아미드(4 mL) 중 3-에톡시-2,2-디메틸-3-옥소프로판산(90 mg, 0.562 mmol)의 용액에 2-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트(260 mg, 0.684 mmol) 및 트리에틸아민(180 mg, 1.78 mmol)을 0℃에서 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반한 후, (시스)-1-벤질-3,3-디플루오로옥타히드로-1H-피롤로[3,2-c]피리딘 이염산염 I-4-8(150 mg, 85%의 순도, 0.369 mmol)을 첨가하였다. 실온에서 하룻밤 교반한 후, 혼합물을 물(20 mL) 및 에틸 아세테이트(30 mL)로 희석하였다. 유기 층을 분리하고 수성 층을 에틸 아세테이트(30 mL)로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 물(20 mL)로 2회 세척하고, 염수(20 mL)로 세척하고, Na₂SO_4(s)로 건조시키고, 여과하였다. 여과액을 농축시키고, 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(석유 에테르 : 에틸 아세테이트 = 10 : 1~5 : 1)로 정제하여 표제 화합물(150 mg, 83%의 순도, 86%의 수율)을 무색 오일로 제공하였다. LC-MS (ESI): RT = 1.847분, 질량: C₂₁H₂₈F₂N₂O₃에 대한 이론치: 394.2, m/z 실측치: 395.2 [M+H]⁺.

중간체 I-4-10:

3-(( 시스 )-1-벤질-3,3-디플루오로헥사히드로-1H-피롤로[3,2-c]피리딘-5(6H)-일)-2,2-디메틸-3-옥소프로판산(2개의 입체이성질체의 혼합물)

메탄올(2 mL) 및 물(0.5 mL) 중 에틸 3-((시스)-1-벤질-3,3-디플루오로헥사히드로-1H-피롤로[3,2-c] 피리딘-5(6H)-일)-2,2-디메틸-3-옥소프로파노에이트 I-4-9(150 mg, 83%의 순도, 0.316 mmol)의 용액에 실온에서 수산화나트륨(110 mg, 2.75 mmol)을 첨가하였다. 50℃에서 4시간 동안 교반한 후, 혼합물을 감압 하에 농축하여 휘발성 물질을 제거하였다. 잔사를 물(15 mL)로 희석하고, 1 M의 염산염 수용액(5 mL)으로 pH 4~5까지 산성화한 후, 에틸 아세테이트(20 mL)로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 물(15 mL)로 2회 세척하고, 염수(15 mL)로 세척하고, Na₂SO_4(s)로 건조시키고, 여과하였다. 여과액을 감압 하에 농축하여 표제 화합물(150 mg, 75%의 순도, 97%의 수율)을 무색 오일로 제공하였다. LC-MS (ESI): RT = 1.27분, 질량: C₁₉H₂₄F₂N₂O₃에 대한 이론치: 366.2, m/z 실측치: 367.1 [M+H]⁺.

중간체 I-4-11:

3-(( 시스 )-3,3-디플루오로헥사히드로-1H-피롤로[3,2-c]피리딘-5(6H)-일)-2,2-디메틸-3-옥소프로판산(2개의 입체이성질체의 혼합물)

이소프로판올(4 mL) 중 3-((시스)-1-벤질-3,3-디플루오로헥사히드로-1H-피롤로[3,2-c]피리딘-5(6H)-일)-2,2-디메틸-3-옥소프로판산 I-4-10(120 mg, 75%의 순도, 0.246 mmol)의 용액에 팔라듐(II) 아세테이트(110 mg, 0.49 mmol) 및 활성탄(70 mg, 4.36 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 수소 벌룬 하에 50℃에서 3시간 동안 교반하였다. 촉매를 여과 제거하고, 여과액을 농축시켜 표제 화합물(70 mg, 71%의 순도, 73%의 수율)을 무색 오일로 제공하였다. LC-MS (ESI): RT = 0.27분, 질량: C₁₂H₁₈F₂N₂O₃에 대한 이론치: 276.1, m/z 실측치: 277.0 [M+H]⁺.

화합물 I-4:

3-(( 시스 )-1-((( S )-5-(에톡시카르보닐)-6-(3-플루오로-2-메틸페닐)-2-(티아졸-2-일)-3,6-디히드로피리미딘-4-일)메틸)-3,3-디플루오로헥사히드로-1H-피롤로[3,2-c]피리딘-5(6H)-일)-2,2-디메틸-3-옥소프로판산(2개의 입체이성질체의 혼합물)

디클로로메탄(4 mL) 중 3-((시스)-3,3-디플루오로헥사히드로-1H-피롤로[3,2-c]피리딘-5(6H)-일) -2,2-디메틸-3-옥소프로판산 I-4-11(70 mg, 0.159 mmol, 71%의 순도)의 용액에 실온에서 질소 분위기 하에 트리에탄올아민(250 mg, 1.68 mmol)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 질소 분위기 하에 40℃에서 30분 동안 교반한 다음, (S)-에틸 6-(브로모메틸)-4-(3-플루오로-2-메틸페닐)-2-(티아졸-2-일)-1,4-디히드로피리미딘-5-카르복실레이트 VIa-1(90 mg, 95%의 순도, 0.195 mmol)을 첨가하였다. 40℃에서 질소 분위기 하에 밤새 교반한 후, 혼합물을 감압 하에 농축시켜 잔사를 제공하고, 이를 에틸 아세테이트(30 mL)에 용해시켰다. 생성된 용액을 물(15 mL)로 2회 세척하였다. 합한 수성 층을 에틸 아세테이트(20 mL)로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 물(10 mL)로 2회 세척하고, 염수(10 mL)로 세척하고, Na₂SO_4(s)로 건조시키고, 여과하였다. 여과액을 농축하고, C18 컬럼(아세토니트릴 : 물 = 35%~55%)으로 정제하여 표제 화합물(16.8 mg, 99.8%의 순도, 14%의 수율)을 황색 고형물로 제공하였다. LC-MS (ESI): RT= 3.937분, 질량: C₃₀H₃₄F₃N₅O₅S에 대한 이론치 633.2, m/z 실측치 634.4 [M+H]⁺. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆) δ 9.60 (s, 0.5H), 9.46 (s, 0.5H), 8.00 (d, J = 1.6 Hz, 0.5H), 7.95 (d, J = 3.2 Hz, 0.5H), 7.93 (d, J = 3.2 Hz, 1H), 7.21 - 7.17 (m, 1H), 7.08 - 7.02 (m, 2H), 5.90 - 5.87 (m, 0.8H), 5.78 - 5.76 (m, 0.2H), 4.25 - 4.12 (m, 2H), 4.01 - 3.95 (m, 2H), 3.72 - 3.64 (m, 0.6H), 3.52 - 3.44 (m, 1.4H), 3.29 - 3.12 (m, 5H), 3.00 - 2.86 (m, 1H), 2.45 (s, 2H), 2.40 (s, 1H), 1.99 - 1.64 (m, 2H), 1.28 - 1.25 (m, 6H), 1.09 - 1.03 (m, 3H).

화합물 I-5: 3-((3a R *,7a R *)-1-((( S )-5-(에톡시카르보닐)-6-(3-플루오로-2-메틸페닐)-2-(티아졸-2-일)-3,6-디히드로피리미딘-4-일)메틸)-3,3-디플루오로-4-옥소헥사히드로-1 H -피롤로[3,2- c ]피리딘-5(6 H )-일)-2,2-디메틸프로판산(단일 부분입체 이성질체)

중간체 I-5-1:

( 시스 )- tert -부틸 3,3-디플루오로헥사히드로-1H-피롤로[3,2-c]피리딘-5(6H)-카르복실레이트(2개의 입체이성질체의 혼합물)

이소프로필 알코올(60 mL) 중 (시스)-tert-부틸 1-벤질-3,3-디플루오로헥사히드로-1H-피롤로[3,2-c] 피리딘-5(6H)-카르복실레이트 I-4-7(2.3 g, 85%의 순도, 5.55 mmol)의 혼합물에 팔라듐 아세테이트(1.1 g, 4.90 mmol) 및 활성탄(850 mg, 70.8 mmol)을 첨가한 다음, 혼합물을 수소 분위기(벌룬) 하에 40℃에서 2시간 동안 교반하였다. 촉매를 여과 제거하고, 메탄올/물(10/1, 20 mL)의 용액으로 세척하였다. 여과액을 감압 하에 농축시켜 표제 화합물(1.5 g, 1H NMR에 의하면 80%의 순도, 82%의 수율)을 황색 오일로 제공하였다. LC-MS (ESI): R_T = 1.44분, 질량: C₁₂H₂₀F₂N₂O₂에 대한 이론치 262.1, m/z 실측치 263.1 [M+H]⁺. 1H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 4.06 - 3.73 (m, 1H), 3.68 - 3.57 (m, 1H), 3.54 - 3.47 (m, 1H), 3.44 - 2.87 (m, 4H), 2.53 - 2.33 (m, 1H), 1.91 - 1.76 (m, 1H), 1.73 - 1.59 (m, 1H), 1.46 (s, 9H).

중간체 I-5-2:

( 시스 )-1-벤질 5- tert -부틸 3,3-디플루오로헥사히드로-1H-피롤로[3,2-c]피리딘-1,5(6H)-디카르복실레이트(2개의 입체이성질체의 혼합물)

디클로로메탄(50 mL) 중 (시스)-tert-부틸 3,3-디플루오로헥사히드로-1H-피롤로[3,2-c]피리딘-5(6H)-카르복실레이트 I-5-1(1.5 g, 80%의 순도, 4.58 mmol) 및 트리에틸아민(1.4 g, 13.8 mmol)의 용액에 디클로로메탄(10 mL) 중 벤질 클로로포르메이트(1.1 g, 6.45 mmol)를 0℃에서 적가하였다. 실온에서 밤새 교반한 후, 반응 혼합물을 감압 하에 농축 건조시켜 잔사를 제공하였다. 잔사를 에틸 아세테이트(150 mL) 및 물(150 mL)에 용해시켰다. 유기 층을 분리하고 수성 층을 에틸 아세테이트(150 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수(150 mL)로 2회 세척하고, Na₂SO_4(s)로 건조시키고, 여과시켰다. 여과액을 농축시키고, 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(석유 에테르 : 에틸 아세테이트 = 15 : 1~5 : 1)로 정제하여 표제 화합물(1.25 g, ¹H NMR에 의하면 90%의 순도, 62%의 수율)을 황색 오일로 제공하였다. LC-MS (ESI): R_T = 1.75분, 질량: C₂₀H₂₆F₂N₂O₂에 대한 이론치 396.2, m/z 실측치 341.1 [MH-56]⁺. ¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 7.39 - 7.31 (m, 5H), 5.18 - 5.11 (m, 2H), 4.29 - 4.11 (m, 2H), 3.97 - 3.68 (m, 3H), 3.53 - 3.15 (m, 1H), 3.06 - 2.36 (m, 2H), 1.92 - 1.61 (m, 2H), 1.45 (s, 9H).

중간체 I-5-3:

( 시스 )-벤질 3,3-디플루오로옥타히드로-1H-피롤로[3,2-c]피리딘-1-카르복실레이트 염산염(2개의 입체이성질체의 혼합물)

에틸 아세테이트(40 mL) 중 4 M의 염산염 중 (시스)-1-벤질 5-tert-부틸 3,3-디플루오로헥사히드로-1H-피롤로[3,2-c] 피리딘-1,5(6H)-디카르복실레이트 I-5-2(1.5 g, 98%의 순도, 3.71 mmol)의 용액을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 용매를 제거하여 표제 화합물(1.28 g, ¹H NMR에 의하면 90%의 순도, 93%의 수율)을 황색 고형물로 제공하였다. ¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 10.15 (s, 1H), 9.48 - 8.97 (m, 1H), 7.40 - 7.33 (m, 5H), 5.18 - 5.10 (m, 2H), 4.28 - 4.16 (m, 1H), 3.91 - 3.85 (m, 2H), 3.49 - 3.23 (m, 3H), 3.18 - 2.59 (m, 3H), 2.43 - 2.24 (m, 1H).

중간체 I-5-4:

( 시스 )-벤질 3,3-디플루오로-5-(3-((4-메톡시벤질)옥시)-2,2-디메틸-3-옥소프로필)옥타히드로-1H-피롤로[3,2-c]피리딘-1-카르복실레이트(2개의 입체이성질체의 혼합물)

디클로로메탄(30 mL) 중 (시스)-벤질 3,3-디플루오로옥타히드로-1H-피롤로[3,2-c]피리딘 -1-카르복실레이트 염산염 I-5-3(1.28 g, 90%의 순도, 3.46 mmol)의 혼합물에 트리에틸아민(2.2 mL, 15.8 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 0.5시간 동안 교반한 다음, 4-메톡시벤질 2,2-디메틸-3-옥소프로파노에이트 I-1-3(1.72 g, 95%의 순도, 6.92 mmol), 아세트산(1.9 mL, 33.2 mmol) 및 디클로로메탄 중 1 M의 클로로트리이소프로폭시티타늄(6.9 mL, 6.9 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 추가로 1시간 동안 교반한 후, 소듐 트리아세톡시보로히드라이드(3.7 g, 17.5 mmol)를 첨가하였다. 실온에서 하룻밤 교반한 후, 반응 혼합물을 포화 중탄산나트륨 수용액(100 mL)으로 ??칭하고, 디클로로메탄(100 mL)으로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수(200 mL)로 2회 세척하고, Na₂SO_4(s)로 건조시키고, 여과시켰다. 여과액을 농축시키고, C18 컬럼(아세토니트릴 : 물(0.1% 중탄산암모늄) = 20%~80%)으로 정제하여 표제 화합물(1.56 g, ¹H NMR에 의하면 90%의 순도, 79%의 수율)을 황색 오일로 제공하였다. ¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 7.40 - 7.31 (m, 5H), 7.29 - 2.27 (m, 2H), 6.87 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 5.17 - 5.09 (m, 2H), 5.07 - 4.99 (m, 2H), 3.98 - 3.86 (m, 1H), 3.75 - 3.67 (m, 5H), 2.72 - 2.51 (m, 2H), 2.46 (s, 2H), 2.43 - 2.20 (m, 3H), 2.10 - 1.67 (m, 2H), 1.15 (s, 6H).

중간체 I-5-5 및 I-5-6:

( 시스 )-벤질 3,3-디플루오로-5-(3-((4-메톡시벤질)옥시)-2,2-디메틸-3-옥소프로필)-6-옥소옥타히드로-1H-피롤로[3,2-c]피리딘-1-카르복실레이트(2개의 입체이성질체의 혼합물)

( 시스 )-벤질 3,3-디플루오로-5-(3-((4-메톡시벤질)옥시)-2,2-디메틸-3-옥소프로필)-4-옥소옥타히드로-1H-피롤로[3,2-c]피리딘-1-카르복실레이트(2개의 입체이성질체의 혼합물)

사염화탄소(40 mL) 및 물(40 mL) 중 (시스)-벤질 3,3-디플루오로-5-(3-((4-메톡시벤질)옥시)-2,2-디메틸 -3-옥소프로필)옥타히드로-1H-피롤로[3,2-c]피리딘-1-카르복실레이트 I-5-4(1.55 g, 90%의 순도, 2.70 mmol)의 혼합물에 루테늄 트리클로라이드(900 mg, 37%의 순도, 1.61 mmol) 및 과요오드산나트륨(3.12 g, 14.6 mmol)를 첨가하였다. 실온에서 밤새 교반한 후, 혼합물을 여과하고, 디클로로메탄(100 mL)으로 세척하였다. 여과액을 물(200 mL)로 2회 세척하고, Na₂SO_4(s)로 건조시키고, 여과하였다. 여과액을 농축시키고, 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(석유 에테르 : 에틸 아세테이트 = 10 : 1~2 : 1)로 정제하여 I-5-5 및 I-5-6의 혼합물(700 mg, 76%의 순도, 37%의 수율)을 황색 오일로 제공하였다. LC-MS (ESI): R_T = 1.801분, 질량: C₂₈H₃₂F₂N₂O₆에 대한 이론치 530.2, m/z 실측치 531.2 [M+H]⁺.

I-5-5 및 I-5-6의 혼합물(700 mg, 76%의 순도, 1.00 mmol)을 키랄 분취용 HPLC(분리 조건: 컬럼 Chiralpak IE 5 um 20 * 250 mm; 이동상: Hex: EtOH = 40 : 60 (10 mL/분); 온도: 30℃; 파장: 214 nm)로 분리하여 I-5-5(154 mg, ¹H NMR에 의하면 90%의 순도, 26%의 수율) 및 I-5-6(355 mg, ¹H NMR에 의하면 90%의 순도, 60%의 수율)를 황색 오일로 제공하였다.

중간체 I-5-5: 키랄 분석(컬럼: Chiralpak IE 5 μm 4.6 * 250 nm; 이동상: Hex: EtOH = 40 : 60 (1 mL/분); 온도: 30℃; 파장: 230 nm, R_T = 9.187분). ¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 7.41 - 7.31 (m, 7H), 6.88 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 5.22 - 5.00 (m, 4H), 4.62 - 4.38 (m, 1H), 4.15 - 3.84 (m, 2H), 3.80 (s, 3H), 3.47 - 3.03 (m, 4H), 2.84 - 2.51 (m, 3H), 1.20 (s, 3H), 1.16 (s, 3H).

중간체 I-5-6: 키랄 분석(컬럼: Chiralpak IE 5 μm 4.6 * 250 nm; 이동상: Hex: EtOH = 40 : 60 (1 mL/분); 온도: 30℃; 파장: 230 nm, R_T = 11.960분, 12.214분). ¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 7.43 - 7.28 (m, 7H), 6.88 (d, J = 6.8 Hz, 2H), 5.21 - 5.02 (m, 4H), 4.35 - 4.14 (m, 1H), 3.84 - 3.56 (m, 7H), 3.40 - 3.25 (m, 1H), 3.11 - 2.93 (m, 2H), 2.14 - 1.96 (m, 1H), 1.70 - 1.62 (m, 1H), 1.21 (s, 3H), 1.19 (s, 3H).

중간체 I-5-6a 및 I-5-6b:

(3a R *,7a R *)-벤질 3,3-디플루오로-5-(3-((4-메톡시벤질)옥시)-2,2-디메틸-3-옥소프로필)-4-옥소옥타히드로-1 H -피롤로[3,2- c ]피리딘-1-카르복실레이트(단일 부분입체 이성질체)

(3a S *,7a S *)-벤질 3,3-디플루오로-5-(3-((4-메톡시벤질)옥시)-2,2-디메틸-3-옥소프로필)-4-옥소옥타히드로-1 H -피롤로[3,2- c ]피리딘-1-카르복실레이트(단일 부분입체 이성질체)

(시스)-벤질 3,3-디플루오로-5-(3-((4-메톡시벤질)옥시)-2,2-디메틸-3-옥소프로필)-4-옥소옥타히드로-1H-피롤로[3,2-c]피리딘-1-카르복실레이트 I-5-6(310 mg, 90%의 순도, 0.526 mmol)을 키랄 분취용 HPLC(분리 조건: 컬럼 Chiralpak IG 5 um 20 * 250 mm; 이동상: MeOH : DCM = 80 : 20 (15 mL/분); 온도: 30℃; 파장: 214 nm)로 분리하여 I-5-6a(148 mg, ¹H NMR에 의하면 90%의 순도, 48%의 수율) 및 I-5-6b(144 mg, ¹H NMR에 의하면 90%의 순도, 46%의 수율)를 황색 오일로 제공하였다.

중간체 I-5-6a: 키랄 분석(컬럼: Chiralpak IG 5 μm 4.6 * 250 nm; 이동상: MeOH : DCM = 80 : 20 (1 mL/분); 온도: 30℃; 파장: 214 nm, R_T = 5.513분). ¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 7.40 - 7.34 (m, 5H), 7.29 (d, J = 7.6 Hz, 2H), 6.87 (d, J = 7.6 Hz, 2H), 5.16 - 5.02 (m, 4H), 4.30 - 4.18 (m, 1H), 3.85 - 3.49 (m, 7H), 3.38 - 3.25 (m, 1H), 3.04 - 2.99 (m, 2H), 2.14 - 1.96 (m, 1H), 1.75 - 1.68 (m, 1H), 1.21 (s, 3H), 1.19 (s, 3H).

중간체 I-5-6b: 키랄 분석(컬럼: Chiralpak IG 5 μm 4.6 * 250 nm; 이동상: MeOH : DCM = 80 : 20 (1 mL/분); 온도: 30℃; 파장: 214 nm, R_T = 7.038분). ¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 7.39 - 7.28 (m, 7H), 6.87 (d, J = 6.8 Hz, 2H), 5.16 - 5.02 (m, 4H), 4.34 - 4.14 (m, 1H), 3.88 - 3.56 (m, 7H), 3.40 - 3.23 (m, 1H), 3.04 - 2.99 (m, 2H), 2.04 - 1.91 (m, 1H), 1.70 - 1.62 (m, 1H), 1.21 (s, 3H), 1.19 (s, 3H).

중간체 I-5-7a:

3-((3a R *,7a R *)-3,3-디플루오로-4-옥소헥사히드로-1 H -피롤로[3,2- c ]피리딘-5(6 H )-일)-2,2-디메틸프로판산(단일 부분입체 이성질체)

테트라히드로퓨란(1.4 mL) 및 이소프로필 알코올(1.4 mL) 중 (3aR*,7aR*)-벤질 3,3-디플루오로-5-(3-((4-메톡시벤질)옥시)-2,2-디메틸-3-옥소프로필)-4-옥소옥타히드로-1H-피롤로[3,2-c]피리딘-1-카르복실레이트 I-5-6a(80 mg, 90%의 순도, 0.136 mmol)의 용액에 실온에서 목탄(100 mg) 상의 20% 수산화팔라듐을 첨가하였다. 수소 분위기(15 psi) 하에 50℃에서 2시간 동안 교반한 후, 혼합물을 실온까지 냉각시키고 여과하였다. 여과액을 농축시켜 표제 화합물(41 mg, ¹H NMR에 의하면 90%의 순도, 98%의 수율)을 백색 고형물로 제공하였다. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆) δ 4.11 (br s, 1H), 3.72 (d, J = 13.6 Hz, 1H), 3.64 - 3.46 (m, 3H), 3.25 - 3.06 (m, 2H), 3.00 - 2.87 (m, 1H), 2.08 - 1.95 (m, 1H), 1.81 - 1.66 (m, 1H), 1.08 (s, 3H), 1.07 (s, 3H).

화합물 I-5:

3-((3a R *,7a R *)-1-((( S )-5-(에톡시카르보닐)-6-(3-플루오로-2-메틸페닐)-2-(티아졸-2-일)-3,6-디히드로피리미딘-4-일)메틸)-3,3-디플루오로-4-옥소헥사히드로-1 H -피롤로[3,2- c ]피리딘-5(6 H )-일)-2,2-디메틸프로판산(단일 부분입체 이성질체)

디클로로메탄(2 mL) 중 3-((3aR*,7aR*)-3,3-디플루오로-4-옥소헥사히드로-1H-피롤로[3,2-c]피리딘-5(6H)-일)-2,2-디메틸프로판산 I-5-7a(33 mg, 90%의 순도, 0.107 mmol) 및 트리에탄올아민(180 mg, 1.21 mmol)의 용액을 40℃에서 30분 동안 교반한 다음, (S)-에틸 6-(브로모메틸)-4-(3-플루오로-2-메틸페닐)-2-(티아졸-2-일)-1,4-디히드로피리미딘-5-카르복실레이트 VIa-1(52 mg, 95%의 순도, 0.113 mmol)을 첨가하였다. 40℃에서 16시간 동안 교반한 후, 혼합물을 실온까지 냉각시키고, 물(10 mL)에 부었다. 생성된 혼합물을 0.5 M의 염산염 수용액(2 mL)으로 pH를 대략 3까지 산성화한 후, 디클로로메탄(10 mL)으로 3회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수(20 mL)로 세척하고, Na₂SO_4(s)로 건조시키고, 여과시켰다. 여과액을 농축시키고, 분취용 HPLC(컬럼: X-bridge C18; 컬럼 사이즈: (5 um 19 * 150 mm); 이동상 A: 물(+ 0.1% 중탄산암모늄) 이동상 B: 아세토니트릴, UV: 254 nm, 유량: 15 mL/분, 구배: 20 ~ 70% (%B))로 정제하여 표제 화합물(18 mg, 96.8%의 순도, 26%의 수율)을 황색 고형물로 제공하였다. LC-MS (ESI): R_T = 2.675분, 질량: C₃₀H₃₄F₃N₅O₅S에 대한 이론치: 633.2, m/z 실측치: 634.3 [M+H]⁺. ¹H NMR (400 MHz, CD₃OD) δ 7.95 (d, J = 3.6 Hz, 1H), 7.72 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 7.18 - 7.10 (m, 2H), 6.97 - 6.93 (m, 1H), 6.00 (s, 1H), 4.41 - 4.28 (m, 1H), 4.12 - 4.04 (m, 4H), 3.91 - 3.85 (m, 1H), 3.60 - 3.48 (m, 3H), 3.35 - 3.33 (m, 2H), 3.07 - 2.86 (m, 1H), 2.52 (s, 3H), 2.14 - 2.01 (m, 1H), 2.00 - 1.86 (m, 1H), 1.29 (s, 3H), 1.26 (s, 3H), 1.13 (t, J = 7.6 Hz, 3H).

화합물 I-6: 3-((3a S* ,7a R* )-1-((( S )-5-(에톡시카르보닐)-6-(3-플루오로-2-메틸페닐)-2-(티아졸-2-일)-3,6-디히드로피리미딘-4-일)메틸)-3,3-디플루오로헥사히드로-1H-피롤로[3,2-c]피리딘-5(6H)-일)-2,2-디메틸프로판산(단일 부분입체 이성질체)

중간체 I-6-1:

4-메톡시벤질 3-(( 시스 )-1-벤질-3,3-디플루오로헥사히드로-1H-피롤로[3,2-c]피리딘-5(6H)-일)-2,2-디메틸프로파노에이트(2개의 입체이성질체의 혼합물)

디클로로메탄(25 mL) 중 (시스)-1-벤질-3,3-디플루오로옥타히드로-1H-피롤로[3,2-c]피리딘 이염산염 I-4-8(600 mg, 78%의 순도, 1.44 mmol)의 용액에 트리에틸아민(450 mg, 4.45 mmol)을 첨가하였다. 반응물을 실온에서 0.5시간 동안 교반한 다음, 4-메톡시벤질 2,2-디메틸-3-옥소프로파노에이트 I-1-3(1.0 g, 90%의 순도, 3.81 mmol), 아세트산(0.5 mL, 8.74 mmol) 및 테트라히드로퓨란 중 1 M의 클로로트리이소프로폭시티타늄(3 mL, 3.00 mmol)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 추가로 1시간 동안 교반하고, 그 후 소듐 트리아세톡시보로히드라이드(1.5 g, 7.08 mmol)를 첨가하였다. 실온에서 하룻밤 교반한 후, 반응 혼합물을 포화 중탄산나트륨 수용액(100 mL)으로 ??칭하고, 디클로로메탄(100 mL)으로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수(200 mL)로 2회 세척하고, Na₂SO_4(s)로 건조시키고, 여과시켰다. 여과액을 농축시키고, 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(석유 에테르 : 에틸 아세테이트 = 20 : 1~2 : 1)로 정제하여 표제 화합물(400 mg, ¹H NMR에 의하면 90%의 순도, 53%의 수율)을 황색 고형물로 제공하였다. LC-MS (ESI): R_T = 2.08분, 질량: C₂₇H₃₄F₂N₂O₃에 대한 이론치 472.3, m/z 실측치 473.2 [M+H]⁺. ¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 7.33 - 7.22 (m, 7H), 6.87 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 5.08 - 5.01 (m, 2H), 3.99 (d, J = 13.6 Hz, 1H), 3.79 (s, 3H), 3.29 - 3.15 (m, 2H), 2.88 (br s, 1H), 2.65 - 2.46 (m, 5H), 2.42 - 2.28 (m, 3H), 1.74 - 1.64 (m, 2H), 1.17 (s, 6H).

중간체 I-6-1a 및 I-6-1b:

4-메톡시벤질 3-((3a S* ,7a R* )-1-벤질-3,3-디플루오로헥사히드로-1H-피롤로[3,2-c]피리딘-5(6H)-일)-2,2-디메틸프로파노에이트(단일 부분입체 이성질체)

4-메톡시벤질 3-((3a R* ,7a S* )-1-벤질-3,3-디플루오로헥사히드로-1H-피롤로[3,2-c]피리딘-5(6H)-일)-2,2-디메틸프로파노에이트(단일 부분입체 이성질체)

4-메톡시벤질 3-((시스)-1-벤질-3,3-디플루오로헥사히드로-1H- 피롤로[3,2-c]피리딘-5(6H)-일)-2,2-디메틸프로파노에이트 I-6-1의 라세미 혼합물(250 mg, 90%의 순도, 0.476 mmol)을 키랄 분취용 HPLC(분리 조건: 컬럼: Chiralpak IE 5 μm 20 * 250 mm; 이동상: Hex : EtOH = 98 : 2 (18 mL/분); 온도: 30 ^oC; 파장; 230 nm)로 분리하여 I-6-1a(100 mg, 100%의 순도, 44%의 수율, 94.7% ee) 및 I-6-1b(70 mg, 98%의 순도, 31%의 수율, 98.9 % ee)를 황색 고형물로 제공하였다.

중간체 I-6-1a: LC-MS (ESI): R_T = 2.19분, 질량: C₂₇H₃₄F₂N₂O₃에 대한 이론치 472.2, m/z 실측치 473.2 [M+H]⁺. 키랄 분석(컬럼: Chiralpak IC 5 μm 4.6 * 250 mm; 이동상: Hex : EtOH = 98 : 2 (1 mL/분); 온도: 30℃; 파장: 230 nm, R_T = 6.477분).

중간체 I-6-1b: LC-MS (ESI): R_T = 2.19분, 질량: C₂₇H₃₄F₂N₂O₃에 대한 이론치 472.2, m/z 실측치 473.2 [M+H]⁺. 키랄 분석(컬럼: Chiralpak IC 5 μm 4.6 * 250 mm; 이동상: Hex : EtOH = 98 : 2 (1 mL/분); 온도: 30℃; 파장: 230 nm, R_T = 7.253분).

중간체 I-6-2a:

3-((3a S* ,7a R* )-3,3-디플루오로헥사히드로-1H-피롤로[3,2-c]피리딘-5(6H)-일)-2,2-디메틸프로판산(단일 부분입체 이성질체)

이소프로필 알코올(5 mL) 중 4-메톡시벤질 3-((3aS*,7aR*)-1-벤질-3,3-디플루오로헥사히드로-1H-피롤로[3,2-c]피리딘-5(6H)-일)-2,2-디메틸프로파노에이트 I-6-1a(100 mg, 100%의 순도, 0.212 mmol)의 혼합물에 팔라듐 아세테이트(50 mg, 0.260 mmol) 및 활성탄(24 mg, 2.00 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 수소 분위기(60 psi)하에 60℃에서 밤새 교반하였다. 촉매를 여과 제거하고, 메탄올/물(10/1, 20 mL)의 용액으로 세척하였다. 여과액을 감압 하에 농축시켜 표제 화합물(42 mg, ¹H NMR에 의하면 90%의 순도, 68%의 수율)을 황색 오일로 제공하였다. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆) δ 3.28 - 3.17(m, 4H), 2.62 - 2.58 (m, 1H), 2.46 - 2.44 (m, 3H), 2.34 - 2.20 (m, 2H), 1.75 - 1.66 (m, 1H), 1.52 - 1.49 (m, 1H), 1.06 (s, 3H), 1.05 (s, 3H).

화합물 I-6:

3-((3a S* ,7a R* )-1-((( S )-5-(에톡시카르보닐)-6-(3-플루오로-2-메틸페닐)-2-(티아졸-2-일)-3,6-디히드로피리미딘-4-일)메틸)-3,3-디플루오로헥사히드로-1H-피롤로[3,2-c]피리딘-5(6H)-일)-2,2-디메틸프로판산(단일 부분입체 이성질체)

디클로로메탄(3 mL) 중 3-((3aS*,7aR*)-3,3-디플루오로헥사히드로-1H-피롤로 [3,2-c]피리딘-5(6H) -일)-2,2-디메틸프로판산 I-6-2a(42 mg, 90%의 순도, 0.144 mmol) 및 트리에탄올아민(210 mg, 1.408 mmol)의 혼합물을 25℃에서 0.5시간 동안 교반한 다음, (S)-에틸 6-(브로모메틸)-4-(3-플루오로-2-메틸페닐)-2-(티아졸-2-일)-1,4-디히드로피리미딘-5-카르복실레이트 VIa-1(105 mg, 95%의 순도, 0.228 mmol)을 첨가하였다. 40℃에서 8시간 동안 교반한 후, 반응 혼합물을 디클로로메탄(5 mL)으로 희석하고, 염수(5 mL)로 2회 세척하고, Na₂SO_4(s)로 건조시키고, 여과하였다. 여과액을 농축하고, C18 컬럼(아세토니트릴 : 물 = 30%~95%)으로 정제하여 표제 화합물(21 mg, 98%의 순도, 23%의 수율)을 황색 고형물로 제공하였다. LC-MS (ESI): R_T = 3.683분, 질량: C₃₀H₃₆F₃N₅O₄S에 대한 이론치 619.2, m/z 실측치 620.4 [M+H]⁺. ¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 9.37 (br s, 1H), 7.80 (d, J = 3.2 Hz, 1H), 7.47 (d, J = 3.2 Hz, 1H), 7.09 - 7.04 (m, 1H), 6.96 - 6.89 (m, 2H), 6.03 (s, 1H), 4.32 (d, J = 17.2 Hz, 1H), 4.10 - 3.98 (m, 3H), 3.60 - 3.49 (m, 1H), 3.36 - 3.29 (m, 1H), 3.12 - 3.06 (m, 1H), 2.95 - 2.86 (m, 4H), 2.79 - 2.73 (m, 1H), 2.67 (s, 2H), 2.54 (s, 3H), 2.08 - 1.97 (m, 2H), 1.29 (s, 3H), 1.27 (s, 3H), 1.11 (t, J = 7.2 Hz, 3H).

다음의 화합물을 위에 기재된 합성 절차 또는 유사한 합성 절차에 따라 제조하였다:

[표 1]

실시예 2: HepG2.2.15 세포에서의 항바이러스 분석

재료 및 장비

1) 세포주

HepG2.2.15(HepG2.2.15 세포주는 문헌[Sells, Chen, and Acs 1987 (Proc. Natl. Acad. Sci. USA 84: 1005-1009)]에 설명된 바와 같이 HepG2 세포주의 형질감염에 의해 생성될 수 있으며, HepG2 세포주는 번호 HB-8065™로 ATCC®로부터 입수가능함).

2) 시약

DMEM/F12(INVITROGEN-11330032)

FBS(GIBCO-10099-141)

디메틸 술폭사이드(DMSO)(SIGMA-D2650)

페니실린-스트렙토마이신 용액(HYCLONE-SV30010)

NEAA(INVITROGEN-1114050)

L-글루타민(INVITROGEN-25030081)

Geneticin 선별 항생제(G418, 500 mg/ml)(INVITROGEN-10131027)

트립시나제 분해 용액(INVITROGEN-25300062)

CCK8(BIOLOTE-35004)

QIAamp 96 DNA 혈액 키트(12)(QIAGEN-51162)

FastStart 범용 프로브 마스터 믹스(ROCHE-04914058001)

3) 소모품

96웰 세포 배양 플레이트(COSTAR- 3599)

Micro Amp 광학 96웰 반응 플레이트(APPLIED BIOSYSTEMS-4306737)

Micro Amp 광학 384웰 반응 플레이트(APPLIED BIOSYSTEMS)

4) 장비

플레이트 판독기(MOLECULAR DEVICES, SPECTRAMAX M2e)

원심분리기(BECKMAN, ALLEGRA-X15R)

실시간 PCR 시스템(APPLIED BIOSYSTEMS, QUANTSTUDIO 6)

실시간 PCR 시스템(APPLIED BIOSYSTEMS, 7900HT)

방법

1) 항-HBV 활성 및 세포독성의 결정

HepG2.2.15 세포를 96웰 플레이트 내에 2% FBS 배양 배지 중에, 각각 HBV 억제 활성 및 세포독성의 결정을 위하여 40,000개의 세포/웰 및 5,000개의 세포/웰의 밀도로 플레이팅하였다. 37℃, 5% CO2에서 하룻밤 인큐베이션한 후, 세포를 화합물 함유 배지로 6일 동안 처리하였으며, 이때 배지 및 화합물은 3일의 처리 후 교체하였다. 각각의 화합물은 삼중으로 8개의 상이한 농도로 1:3으로 연속 희석시켜 테스트하였다. 화합물의 최고 농도는 항-HBV 활성 분석의 경우 10 uM 또는 1 uM이고 세포독성 결정의 경우 100 uM였다.

세포 생존성을 CCK-8 분석에 의해 결정하였다. 6일의 화합물 처리 후, 20 μl의 CCK-8 시약을 세포독성 분석 플레이트의 각각의 웰에 첨가하였다. 세포 플레이트를 37℃, 5% CO2에서 2.5시간 동안 인큐베이션하였다. 기준으로서 450 nm 파장에서의 흡광도 및 630 nm 파장에서의 흡광도를 측정하였다.

화합물에 의해 유도된 HBV DNA 수준의 변화를 정량적 실시간 폴리머라아제 연쇄 반응(qPCR)으로 평가하였다. 간략하게는, 배양 배지 중 HBV DNA는 매뉴얼에 따라 QIAamp 96 DNA 블러드 키트를 사용하여 추출하고, 그 후 하기 표 1의 프라이머 및 프로브를 사용하여 실시간 PCR 분석에 의해 정량화하였다.

[표 2]

2) 데이터 분석

EC₅₀ 및 CC₅₀ 값을 GRAPHPAD PRISM 소프트웨어로 계산한다. DMSO 대조군의 CV%가 15% 미만이고 기준 화합물이 예상 활성 또는 세포독성을 나타내는 경우, 이 실험 배치의 데이터는 적격한 것으로 간주된다.

결과: 하기 표 3을 참조한다.

[표 3]

표 3에 제시된 효능 데이터와 같이, 이러한 모든 화합물은 HBV HepG2.2.15 세포에 대해 매우 강력한 시험관 내 활성을 나타내었다.

SEQUENCE LISTING <110> JANSSEN SCIENCES IRELAND UNLIMITED COMPANY J&J (CHINA) INVESTMENT CO., LTD <120> DIHYDROPYRIMIDINE DERIVATIVES AND USES THEREOF IN THE TREATMENT OF HBV INFECTION OR OF HBV-INDUCED DISEASES <130> JCN6006 <160> 3 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer <400> 1 gtgtctgcgg cgttttatca 20 <210> 2 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer <400> 2 gacaaacggg caacatacct t 21 <210> 3 <211> 28 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> probe <400> 3 cctctkcatc ctgctgctat gcctcatc 28

Claims (16)

1. 하기 화학식 I의 화합물(이의 중수소화, 입체이성질체 또는 호변이성질체 형태를 포함함), 또는 이의 제약상 허용가능한 염 또는 용매화물:
   [화학식 I]
   

   

   
   [여기서, R¹, R² 및 R³은 각각 독립적으로 H, 할로, OH, 및 C_1-3알킬로 이루어진 군으로부터 선택되며;
   R⁴는 티아졸릴, 이미다졸릴, 옥사졸릴 및 피리딜로 이루어진 군으로부터 선택되며, 이들 각각은 메틸 또는 할로로부터 각각 독립적으로 선택되는 하나 이상의 치환체로 선택적으로 치환될 수 있고;
   R⁵는 C_1-4알킬이며;
   R⁶ 및 R⁷은 각각 독립적으로 H 및 할로로 이루어진 군으로부터 선택되고;
   R⁸ 및 R⁹는 각각 독립적으로 H 및 할로로 이루어진 군으로부터 선택되거나; 또는 R⁸ 및 R⁹는 이것들이 부착되어 있는 탄소 원자와 함께 C(=O)를 형성하며;
   X는 CHR^10a, C(=O) 및 NR^10b로 이루어진 군으로부터 선택되고;
   Y는 CHR^11a, C(=O) 및 NR^11b로 이루어진 군으로부터 선택되고;
   Z는 CHR^12a, C(=O), NR^12b 및 O로 이루어진 군으로부터 선택되며; 여기서
   R^10a, R^10b, R^11a R^11b, R^12a, 및 R^12b는 각각 독립적으로 H; -CN; -C_1-9알킬-COOR^x; -Cy-COOR^x; -C_1-6알킬-Cy-COOR^x; -Cy-C_1-6알킬-COOR^x; -C(=O)-C_1-6알킬-COOR^x; -Cy-OH; -C_1-6알킬-O-C_1-6알킬-COOR^x; -C(=O)-NR^aR^b; 및 -S(=O)₂-NR^c-C(=O)-C_1-6알킬로 이루어진 군으로부터 선택되고; 여기서,
   각각의 경우, C_1-6알킬 및 C_1-9알킬은 각각 독립적으로 할로 및 히드록실로부터 선택되는 하나 이상의 치환체로 선택적으로 치환될 수 있고;
   R^x는 H 및 -C_1-6알킬로부터 선택되고;
   R^a, R^b 및 R^c는 각각 독립적으로 H 및 -C_1-4알킬로부터 선택되고;
   Cy는 C_1-4알킬 치환체로 선택적으로 치환된 C_3-7시클로알킬을 나타내고;
   단, CR⁸R⁹, Y 또는 Z 중 최대 2개는 C(=O)일 수 있고, 단, CR⁸R⁹ 및 X, 또는 X 및 Y, 또는 Y 및 Z가 동시에 C(=O)는 아님].
2. 제1항에 있어서,
   R¹, R² 및 R³은 각각 독립적으로 H, 할로, 및 C_1-3알킬로 이루어진 군으로부터 선택되며;
   R⁴는 티아졸릴, 이미다졸릴, 옥사졸릴 및 피리딜로 이루어진 군으로부터 선택되며, 이들 각각은 메틸 또는 할로로부터 각각 독립적으로 선택되는 하나 이상의 치환체로 선택적으로 치환될 수 있고;
   R⁵는 C_1-4알킬이며;
   R⁶ 및 R⁷은 각각 독립적으로 H 및 할로로 이루어진 군으로부터 선택되고;
   R⁸ 및 R⁹는 각각 독립적으로 H 및 할로로 이루어진 군으로부터 선택되거나; 또는 R⁸ 및 R⁹는 이것들이 부착되어 있는 탄소 원자와 함께 C(=O)를 형성하며;
   X는 CHR^10a, C(=O) 및 NR^10b로 이루어진 군으로부터 선택되고;
   Y는 CHR^11a, C(=O) 및 NR^11b로 이루어진 군으로부터 선택되고;
   Z는 CHR^12a ₂, C(=O), NR^12b 및 O로 이루어진 군으로부터 선택되며; 여기서
   R^10a, R^10b, R^11a R^11b, R^12a, 및 R^12b는 각각 독립적으로 H; -C_1-9알킬-COOR^x; -Cy-COOR^x; -C_1-6알킬-Cy-COOR^x; -C(=O)-C_1-6알킬-COOR^x; -Cy-OH; 및 -C_1-6알킬-O-C_1-6알킬-COOR^x로 이루어진 군으로부터 선택되고; 여기서,
   각각의 경우, C_1-6알킬은 각각 독립적으로 할로 및 히드록실로부터 선택되는 하나 이상의 치환체로 선택적으로 치환될 수 있고;
   R^x는 H 및 -C_1-6알킬; 특히, H 및 -C_1-4알킬로부터 선택되고;
   Cy는 C_1-4알킬 치환체로 선택적으로 치환된 C_3-7시클로알킬을 나타내는 것인 화합물.
3. 제1항 또는 제2항에 있어서,
   R¹, R² 및 R³은 각각 독립적으로 H, 할로, 및 C_1-3알킬로 이루어진 군으로부터 선택되며;
   R⁴는 티아졸릴, 이미다졸릴, 및 옥사졸릴로 이루어진 군으로부터 선택되며, 이들 각각은 하나의 메틸 치환체로 선택적으로 치환될 수 있고;
   R⁵는 C_1-4알킬이며;
   R⁶ 및 R⁷은 각각 독립적으로 H 및 할로로 이루어진 군으로부터 선택되고;
   R⁸ 및 R⁹는 각각 독립적으로 H 및 할로로 이루어진 군으로부터 선택되거나; 또는 R⁸ 및 R⁹는 이것들이 부착되어 있는 탄소 원자와 함께 C(=O)를 형성하며;
   X는 CH₂, C(=O) 및 NR^10b로 이루어진 군으로부터 선택되고;
   Y는 CH₂, C(=O) 및 NR^11b로 이루어진 군으로부터 선택되고;
   Z는 CH₂, C(=O), NR^12b 및 O로 이루어진 군으로부터 선택되며; 여기서
   R^10b, R^11b, 및 R^12b는 각각 독립적으로 H; -C_1-9알킬-COOR^x; -Cy-COOR^x; -C_1-6알킬-Cy-COOR^x; 및 -C(=O)-C_1-6알킬-COOR^x로 이루어진 군으로부터 선택되고; 여기서
   Cy는 C_3-7시클로알킬을 나타내는 것인 화합물.
4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서,
   R¹, R² 및 R³은 각각 독립적으로 H, 할로, OH 및 메틸로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 화합물.
5. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서,
   R⁴는 티아졸릴, 이미다졸릴, 옥사졸릴 및 피리딜로 이루어진 군으로부터 선택되며, 이들 각각은 하나의 메틸 치환체로 선택적으로 치환될 수 있는 것인 화합물.
6. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서,
   R⁵는 메틸, 에틸 또는 이소프로필인 화합물.
7. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서,
   R⁶ 및 R⁷은 각각 독립적으로 수소 및 플루오로로부터 선택되는 것인 화합물.
8. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서,
   X는 CH₂, C(=O) 및 NR^10b로 이루어진 군으로부터 선택되고; Y는 CH₂, C(=O) 및 NR^11b로 이루어진 군으로부터 선택되고; Z는 CH₂, C(=O), NR^12b 및 O로 이루어진 군으로부터 선택되며; 여기서
   R^10b, R^11b 및 R^12b는 각각 독립적으로 -C_1-9알킬-COOH; -Cy-COOH; -C_1-6알킬-Cy-COOH; -C(=O)-C_1-6알킬-COOH; -Cy-OH; 및 -C_1-6알킬-O-C_1-6알킬-COOH로 이루어진 군으로부터 선택되며; 여기서,
   각각의 경우, C_1-6알킬은 각각 독립적으로 할로 및 히드록실로부터 선택되는 하나 이상의 치환체로 선택적으로 치환될 수 있고;
   Cy는 C_1-4알킬 치환체로 선택적으로 치환된 C_3-7시클로알킬을 나타내고, 나머지 변수는 본원에 정의된 바와 같은 것인 화합물.
9. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 다음의 화합물로 이루어진 군으로부터 선택되는 화합물:
   

   
10. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항의 화합물을 포함하고 적어도 하나의 제약상 허용가능한 담체를 추가로 포함하는 제약 조성물.
11. 의약으로 사용하기 위한 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항의 화합물 또는 제10항의 제약 조성물.
12. HBV 감염 또는 HBV-유도성 질환의 예방 또는 치료를 필요로 하는 포유동물에서의 HBV 감염 또는 HBV-유도성 질환의 예방 또는 치료에 사용하기 위한 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항의 화합물 또는 제10항의 제약 조성물.
13. HBV 감염 또는 HBV-유도성 질환의 예방 또는 치료를 필요로 하는 포유동물에서의 HBV 감염 또는 HBV-유도성 질환의 예방 또는 치료에서의 동시 사용, 개별 사용 또는 순차적 사용을 위한 병용 제제로서 제1 화합물 및 제2 화합물을 포함하는 제품으로서, 상기 제1 화합물은 상기 제2 화합물과는 상이하고, 상기 제1 화합물은 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항의 화합물 또는 제10항의 제약 조성물인 제품.
14. 화학식 I의 화합물을 제조하는 방법으로서,
    화학식 VI의 화합물:
    [화학식 VI]
    

    

    
    (여기서, R¹~R⁵는 화학식 I에서 정의된 바와 같고, LG는 예를 들어, 브로모와 같은 적합한 이탈기를 나타냄)을 화학식 VII의 화합물:
    [화학식 VII]
    

    

    
    (여기서, R⁶~R⁹는 화학식 I에 정의된 바와 같음)과
    적합한 친핵성 치환 조건 하, 예를 들어, 적합한 염기, 예를 들어, 트리에탄올아민의 존재 하에서 반응시키는 단계를 포함하는 방법.
15. HBV 감염의 치료를 필요로 하는 개체에서 HBV 감염을 치료하는 방법으로서, 치료적 유효량의 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항의 화합물 또는 제10항의 제약 조성물을 개체에게 투여하는 단계를 포함하는 방법.
16. 제9항의 제약 조성물의 제조 방법으로서, 적어도 하나의 제약상 허용가능한 담체를 치료적 유효량의 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항의 화합물과 혼합하는 단계를 포함하는 방법.