CN114099632A

CN114099632A - 一种中药发酵物及其在制备治疗真菌感染皮肤病药物上的应用

Info

Publication number: CN114099632A
Application number: CN202111473006.7A
Authority: CN
Inventors: 彭梅; 杨小生; 杨娟; 李良群; 王瑜; 罗忠圣; 蔡用; 李立郎; 杨礼寿; 邓廷飞; 严艳芳; 高明; 潘雄; 曹家辅
Original assignee: Key Laboratory of Natural Product Chemistry of Guizhou Academy of Sciences
Current assignee: Guizhou Aquarium Drug Development Co.,Ltd.
Priority date: 2021-12-01
Filing date: 2021-12-01
Publication date: 2022-03-01
Anticipated expiration: 2041-12-01
Also published as: CN114099632B

Abstract

本发明公开了一种中药发酵物及其在制备治疗真菌感染皮肤病上的应用，按重量份数计，原料由大皂角13‑17份、珊瑚姜6‑10份、花椒5‑7份、苦参7‑11份、生姜5‑8份、白鲜皮4‑8份、蛇床子3‑6份、防风5‑8份、大蒜3‑5份组成。本发明为民族药配方，按照少数民族用药的配伍原则，配伍合理，所采用的中草药均为无毒副作用，可制成多种剂型，包括水剂、搽剂、散剂、软膏剂、凝胶剂、软膏剂、贴膏剂、涂抹剂、气雾剂或喷雾剂等，尤其是制成的喷雾剂便于吸收，对治疗真菌感染引起的皮肤病具有明显的效果，尤其针对足癣、手癣、股癣、体癣非常明显的效果，对蚊虫叮咬所致的瘙痒、红肿有抑制作用，对湿疹等有良好的治愈作用。

Description

一种中药发酵物及其在制备治疗真菌感染皮肤病药物上的应用

技术领域

本发明属于中药现代化领域，具体涉及一种中药发酵物及其在制备治疗真菌感染皮肤病药物上的应用。

背景技术

贵州得天独厚的环境和气候，使得贵州拥有许多丰富的药材资源，这些药材资源具有很强的地理区域和少数民族用药特色。苗、侗族、布依族药在民间用药中，更讲究药物配伍和鲜用，常用4-5味药材的小复方，利用外敷、擦洗等方式用来治疗跌打损伤、风湿、外伤出血、皮肤癣菌等疾病。

真菌感染性皮肤癣病，常见疾病如体癣、股癣、手癣、脚癣等，脚癣在生日生活中尤其常见。脚癣又称脚气病，常见症状为瘙痒、脱皮、起泡等现象。脚癣传染性极强，一般为接触性传染，成年人中有脚气病的占总人群的70-80％，多与人们生活环境和卫生程度有关，环境潮湿温热和高温的季节是脚癣菌感染和发病率高的原因。脚癣虽不危及人的生命，但瘙痒、脱皮等也会造成身体极度不适感，也给患者生活造成许多不便。目前，治疗脚癣的药西药有口服、静注和外用的，口服药一般用于深部真菌感染，如酮康唑、两性霉素B等，这两种药内服或静注对人体肝肾功能损伤较大，在不危及生命的情况下，一般采取外用。外用西药有三唑类、多烯类、棘白菌素类等，主要为抗生素和合成药，治疗效果好，见效快，但抗真菌药容易影响白细胞及肝功能，长期使用造成一过性GPT上升或白细胞下降，停药可愈，真菌也容易复发。中药治疗真菌抗菌谱广，毒副作用小，不易产生耐药性，还能调节机体的新陈代谢等特点，因而得到人们的重视。单味中草药的抗皮肤真菌作用，目前已发现多种具有抗真菌活性的药物并被广泛研究且已有相关产品上市，如足光散、珊瑚癣菌、狼毒软膏等，但这些单味中药产品中会加入有机或无机酸，如珊瑚癣净中加入水杨酸酸、醋酸；狼毒软膏中加入水杨酸；足光散中加入水杨酸、硼酸等，这些有机或无机酸具有一定的刺激性，对皮肤也有一定的损害，使用后易造成皮肤蜕皮，同时因为含有刺激性的酸，破损皮肤使用后会造成一定的疼痛，使得患者适应性降低，用药中断，难以达到疗效。本发明采用纯中药发酵，不添加化学药，无毒无刺激。

发明内容

本发明的目的在于提供一种中药发酵物及其在制备治疗真菌感染皮肤病药物上的应用，该发酵物对真菌感染的皮肤病及蚊虫叮咬导致的红肿、瘙痒等皮肤病有明显的改善治疗效果，并且无毒无害无添加任何西药成分，且便于吸收。

为达到上述目的，本发明采取如下技术方案：

一种中药发酵物，按重量份数计，原料由大皂角13-17份、珊瑚姜6-10份、花椒5-7份、苦参7-11份、生姜5-8份、白鲜皮4-8份、蛇床子3-6份、防风5-8份、大蒜3-5份组成。

优选的前述的中药发酵物中，按重量份数计，原料由大皂角15份、珊瑚姜8份，花椒6份，苦参9份，生姜6份，白鲜皮6份，蛇床子6份，防风7份、大蒜5份组成。

所述发酵物应用在制备治疗真菌感染皮肤病药物制剂的剂型为水剂、搽剂、散剂、涂抹剂、软膏剂、凝胶剂、贴膏剂、气雾剂或喷雾剂。

所述发酵物应用在制备治疗真菌感染皮肤病药物制剂的喷雾剂的制备方法为：按照重量份数称取各种原料药材，混合，粉碎，利用无菌水作为发酵溶剂，加入药材总质量10-20％的白砂糖，再加入药材总质量3-8％高效酒曲发酵4-5天，待发酵液酒精含量达35-50％后，加入原药材总质量0.1-0.2％的醋酸杆菌继续发酵至21-28天，将发酵液灭活后过滤，将滤液浓缩至总液体积的1/2，加入90-95％的乙醇调至含乙醇浓度为35-50％即可，将稀释液用无菌微孔滤膜过滤，装入喷壶内即得。

所述发酵物应用在制备治疗真菌感染皮肤病药物制剂的喷雾剂的制备方法为：按照重量份数称取各种原料药材，混合，粉碎过20目筛，加入药材总质量8-16倍质量无菌蒸馏水，加入药材总质量10-15％的白砂糖，煮沸灭菌后冷却到37摄氏度，加入药材总质量3-8％的高效酒曲，密封后25-30摄氏度恒温坏境中发酵4-5天，使得发酵液的含酒精量为35-50％，再加入药材总质量0.1-0.2％的醋酸杆菌，密封发酵至21-28天，高温灭活，过滤，将滤液浓缩至原液的体积的1/2，加入90-95％的乙醇稀释至含乙醇浓度为35-50％左右，将稀释液用0.22μm无菌微孔滤膜过滤，装入喷壶既得。

前述的中药发酵物在制备治疗真菌感染的皮肤病或蚊虫叮咬皮肤病药物上的应用。

优选的，前述的应用中，所述的真菌感染皮肤病是手癣、足癣、股癣、体癣、头皮癣，所述的蚊虫叮咬皮肤病是蚊虫叮咬所致的红肿瘙痒等。

本发明的有益效果：

(1)本发明为民族药组合发酵配方，是从来自贵州黔北、黔西南洲苗、侗、水族药30余味单味中草药或食材中，通过体外抑菌活性实验模型筛选出活性比较好的10余味民族药进行配伍并发酵。

(2)本发明按照少数民族同胞用药的配伍原则，配伍合理，所采用的中草药均为无毒副作用，急性毒性试验表明，给予小鼠灌胃本发明配方喷雾剂0.5mL/20g(相当于人体给药1167倍)未见小鼠死亡，同时经实验验证，给予豚鼠按照本发明技术方案制备的发酵喷雾剂10天后基本愈合。

(3)本发明可制成多种剂型，包括水剂、凝胶剂、软膏剂、涂抹剂、搽剂、贴膏剂、气雾剂或喷雾剂等，尤其是制成的喷雾剂便于吸收，对治疗真菌感染皮肤病或蚊虫叮致咬皮肤病具有明显的效果，尤其针对真菌感染的手癣、脚癣、体癣具有非常明显的效果，对红色毛癣菌和石膏样小孢子菌引起的豚鼠炎症有抑制作用，对蚊虫叮咬、湿疹、皮肤瘙痒等皮肤病有良好的治愈作用。

附图说明

图1A为本发明配方对石膏样小孢子菌感染豚鼠皮肤的治疗作用；

图1B为本发明配方对红色毛癣菌感染豚鼠皮肤的治疗作用；

图2A为本发明配方对石膏样小孢子菌感染豚鼠皮肤的HE病理切片；

图2B为本发明配方对红色毛癣菌感染豚鼠皮肤的HE病理切片。

具体实施方式

实施例1

一种中药发酵物，按重量份数计，原料由大皂角13份、珊瑚姜6份、花椒5份、苦参7份、生姜5份、白鲜皮4份、蛇床子3份、防风5份、大蒜3份组成。

上述中药发酵物的成品制剂剂型为水剂，按照常规工艺即可制备。

实施例2

一种中药发酵物，按重量份数计，原料由大皂角15份、珊瑚姜8份、花椒6份、苦参6份、生姜7份、白鲜皮6份、蛇床子5份、防风7份、大蒜4份组成。

上述中药发酵物的成品制剂剂型为搽剂，按照常规工艺即可制备。

实施例3

一种中药发酵物，按重量份数计，原料由大皂角16份、珊瑚姜9份、花椒7份、苦参10份、生姜8份、白鲜皮7份、蛇床子6份、防风8份、大蒜5份组成。

上述中药发酵物的成品制剂剂型为散剂，按照常规工艺即可制备。

实施例4

一种中药发酵物，按重量份数计，原料由大皂角17份、珊瑚姜9份、花椒7份、苦参11份、生姜8份、白鲜皮8份、蛇床子6份、防风8份、大蒜5份组成。

上述中药发酵物的成品制剂剂型为涂抹剂，按照常规工艺即可制备。

实施例5

一种中药发酵物，按重量份数计，原料由大皂角16份、珊瑚姜10份、花椒7份、苦10份、生姜6份、白鲜皮6份、蛇床子4份、防风7份、大蒜5份组成。

上述中药发酵物的成品制剂剂型为软膏剂，发按照常规工艺即可制备。

实施例6

上述中药发酵物的成品制剂剂型为凝胶剂，按照常规工艺即可制备。

实施例7

一种中药发酵物，按重量份数计，原料由大皂角13份、珊瑚姜10份、花椒7份、苦参8份、生姜7份、白鲜皮8份、蛇床子6份、防风7份、大蒜5份组成。

上述中药发酵物的成品制剂剂型为贴膏剂，按照常规工艺即可制备。

实施例8

上述中药发酵物的成品制剂剂型为气雾剂，按照常规工艺即可制备。

实施例9

一种中药发酵物，按重量份数计，原料由大皂角13份、珊瑚姜6份、花椒5份、苦参7份、生姜5份、白鲜皮4份、蛇床子3份、防风7份、大蒜3份组成。

其制备方法如下：

按照重量份数称取各种原料药材，混合，粉碎，用纯化水作为发酵溶剂，加入白砂糖，煮沸灭菌后冷却至37摄氏度加入高效酒及醋酸杆菌发酵后，过滤，将滤液浓缩致，加入95％的乙醇稀释后，用无菌微孔滤膜过滤，装入喷壶内即得。

实施例10

一种中药发酵物，按重量份数计，原料由大皂角15份、珊瑚姜10份、花椒7份、苦参10份、生姜8份、白鲜皮6份、蛇床子5份、防风5份、大蒜5份组成。

上述中药发酵物的成品制剂剂型为喷雾剂，其制备方法如下：

按照重量份数称取各种原料药材，混合，粉碎过20目筛，加入药材总质量10倍质量的纯化水，加入药材总质量10％的白砂糖，煮沸30分钟灭菌后，冷却至37摄氏度，加入药材总质量3％的高效酒曲发酵至4天后，加入药材总质量0.1％的醋酸杆菌密封后发酵至21天，高温灭活后过滤，将滤液浓缩至原液体积的1/2，加入90％的乙醇稀释至含乙醇浓度为40％，将滤液过0.22μm无菌微孔滤膜，装入喷壶既得。

实施例11

一种中药发酵物，按重量份数计，原料由大皂角14份、珊瑚姜份、花椒6份、苦参11份、生姜5份、白鲜皮7份、蛇床子6份、防风5份、大蒜5份组成。

按照重量份数称取各种原料药材，混合，粉碎过20目筛，加入药材总质量13倍质量的纯化水，加入药材总质量20％的白砂糖，煮沸30分钟灭菌后，冷却至37摄氏度，加入药材总质量5％的高效酒曲发酵至5天后，加入药材质量0.1％的醋酸杆菌密封后发酵至25天，高温灭活后过滤，将滤液浓缩至原液体积的1/2，加入95％的乙醇稀释至含乙醇浓度为45％，将滤液过0.22μm无菌微孔滤膜，装入喷壶既得。

实施例12

一种中药发酵物，按重量份数计，原料由大皂角15份、珊瑚姜9份、花椒8份、苦参9份、生姜8份、白鲜皮8份、蛇床子6份、防风5份、大蒜5份组成。

按照重量份数称取各种原料药材，混合，粉碎过20目筛，加入药材总质量16倍质量的纯化水，加入药材总质量15％的白砂糖，煮沸30分钟灭菌后，冷却至37摄氏度，加入药材总质量8％的高效酒曲发酵至5天后，再加入药材质量0.2％的醋酸杆菌密封后发酵至28天，高温灭活后过滤，将滤液浓缩至原液体积的1/2，加入95％的乙醇稀释至含乙醇浓度为50％，将滤液过0.22μm无菌微孔滤膜，装入喷壶既得。

为验证本发明中药发酵物的效果，发明人采用实施例12制备的中药发酵物的喷雾剂进行如下实验：

(1)本发明中药发酵物的喷雾剂对真菌的抑制活性

将本发明实施例12制备的中药发酵物的喷雾剂体外脚癣真菌红色毛癣菌及石膏样小孢子菌进行抑菌活性研究，将传代后的红色毛癣菌及石膏样小孢子菌原液(含活菌数10²⁰个/mL)，取50μ菌液加入到1mLSDA(沙氏液体培养基)中，再分别加入本品(含姜黄素0.9ml/100mL)10μL、20μL、30μL、40μL、50μL、60μL、70μL、80μL、100μL、150μL、200μL，结果发现本品对石膏样小孢子菌的最小抑菌浓度为30μL、对红色毛癣菌的最小抑菌浓度是60μL，折合姜黄素浓度分别为0.27μg/mL、0.54μg/mL。

(2)本发明配方喷剂发酵物的喷雾剂对真菌的菌丝体径向生长的影响

将配置好无菌PDA培养基14mL分别加入1mL本品低、中、高浓度药液，阳性对照加入1mL珊瑚癣净，空白组不加药液，将含药平板的中心用直径12mm的打孔器打孔，然后将制备好的菌块接种于打孔处，置于28摄氏度恒温培养箱中分别培养石膏样小孢子菌4天、红色毛癣菌7天，并用十字交叉法测量菌丝生长直径，结果见表1。

菌落径向生长(mm)＝菌落直径平均值-12

抑制菌丝径向生长百分率(％)＝(空白菌落直径-实验组菌落直径)/空白菌落菌落直径×100。

表1本发明对红色毛癣菌和小孢子菌径向直径及抑制率的影响

表1结果显示，加入不同浓度的本方后，对两种菌的抑制作用明显升高，中剂量的抑菌率达75％以上，对石膏样小孢子菌抑菌浓度大85％，高剂量的抑菌率达100％，两种菌在含药高剂量和阳性对照珊瑚癣净PDA中不生长，说明本发明对两株人体脚癣真菌有抑制生长作用。

(3)本发明配方对豚鼠体表真菌癣菌抑菌作用研究

将豚鼠60只豚鼠雌雄各半，体重300±50g，平均分为6组，分别为空白组、模型组、阳性对照组(珊瑚癣净组)、本方喷剂低、中、高三个剂量组，每组10只豚鼠、实验前将豚鼠脊柱两背部用8％硫化钠脱去两侧毛发，用无菌砂纸搓致表皮出现渗血状态后将石膏样小孢子菌和红色毛癣菌原菌液(含活菌数10²⁰个/mL)涂抹至豚鼠左右两侧，石膏样小孢子菌涂在左侧，红色毛癣菌涂在右侧，每次1mL菌液，连续涂抹5天，每日刮取接种处皮屑，用10％的氢氧化钾软化后，直到镜检观察到红色毛癣菌和石膏样小孢子菌的菌丝，即为造模成功。豚鼠感染模型构建成功后，每日涂抹发明低、中、高喷剂各1mL，阳性对照涂抹珊瑚癣净1mL，模型组涂抹1mL生理盐水，每天定时涂抹两次，给药后隔日刮取各组豚鼠接种处的皮屑镜检观察，并将刮取到的皮屑在PDA平板上培养，观察有无石膏样小孢子菌和红色毛癣菌生长。并每天观察豚鼠给药后皮肤变化，观察结果见表2。

表2本发明对用药后10天豚鼠皮肤变化评分结果

图1A为给药后5天和10天石膏样小孢子菌致皮屑情况，图1B为接种红色毛癣菌给药后5天和10天豚鼠恢复情况，图1可以看出给药5天石膏样小孢子菌及红色毛癣菌至豚鼠皮肤病模型组患处都有少量的红肿和大量的皮屑，阳性对照组在给药5天的时候有少量的脱皮，有皮屑；该配方低剂量组有少量的发红现象，也有少量皮屑，中、高剂量无发红现象，有少量皮屑。说明该配方对两种脚癣真菌所致的豚鼠皮肤病有缓解作用，10天后，模型组皮肤无发红，无结痂，但然有一定量皮屑，肉眼可见；阳性对照组有少量皮屑也有脱皮现象，给药组低剂量有少量皮屑，无结痂，无发红现象；中、高剂量组无皮屑，也无结痂及脱皮、发红现象。

图2A为本发明配方对石膏样小孢子菌感染豚鼠皮肤的HE病理切片图，图2B为本发明配方对红色毛癣菌感染豚鼠皮肤的HE病理切片图，图2结果可以看出空白组表层和真皮层之间结构分布均匀，无组织破坏现象；表层角质化程度正常，棘层厚度均匀，未见肥厚状，毛囊数量正常，无扩展和融合。模型组皮肤机组织及组织出现破坏现象，表层角质化过度，变薄且呈乳头状深入皮层，出现造状角化不全，棘层肥厚，颗粒层增厚，毛囊出现融合现象，皮脂腺增多。阳性对照出现轻微的炎症现象，表皮角质化程度正常，部分出现皂状角化不全，棘层轻度增厚，但比模型组薄，颗粒层厚度正常，毛囊无扩张和融合现象。给药组低剂量有少量炎症细胞，皮肤组织有轻微破损现象，但较模型组轻微，表皮层角质化程度轻度损伤，棘层相对空白组增厚；中高剂量组有较为少量的炎症细胞，比阳性对照少，其余组织与空白组比较无明显变化。说明本品对石膏样小孢子菌和红色毛癣菌造成的体内模型有显著的防御作用。

以上内容仅为本发明的较佳实施例，对于本领域的普通技术人员，依据本发明的思想，在具体实施方式及应用范围上均会有改变之处，本说明书内容不应理解为对本发明的限制。

Claims

1.一种中药发酵物，其特征在于，按重量份数计，原料由大皂角13-17份、珊瑚姜6-10份、花椒5-7份、苦参7-11份、生姜5-8份、白鲜皮4-8份、蛇床子3-6份、防风5-8份、大蒜3-5份组成。

2.根据权利要求1所述的中药发酵物，其特征在于，按重量份数计，原料由大皂角15份、珊瑚姜9份、花椒6份、苦参10份、生姜7份、白鲜皮8份、蛇床子5份、防风6份、大蒜4份组成。

3.根据权利要求1或2所述的中药发酵物，其特征在于，所述发酵物应用在制备治疗真菌感染皮肤病药物制剂的剂型为水剂、搽剂、散剂、涂抹剂、软膏剂、凝胶剂、贴膏剂、气雾剂或喷雾剂。

4.根据权利要求3所述的中药发酵物，其特征在于，所述喷雾剂的制备方法为：按照重量份数称取各种原料药材，混合，粉碎，利用无菌纯净水作为发酵溶剂，加入白砂糖、高效酒曲、醋酸杆菌发酵提取后灭活，取上清液浓缩，加乙醇稀释利用无菌微孔滤膜过滤后，装入喷壶内即得。

5.根据权利要求4所述的中药发酵物，其特征在于，所述喷雾剂的制备方法为：按照重量份数称取各种原料药材，混合，粉碎过20目筛，加入药材总质量8-16倍重量的纯净水，10-20％的白砂糖灭菌后冷却到37摄氏度，再加入3-8％的高效酒曲发酵至4-5天，使含酒精浓度为40-50％左右，加入原药材量0.1-0.2％的醋酸杆菌发酵至21-28天，高温灭活发酵液，过滤后将滤液浓缩至原液体积的1/2后，加入90-95％的乙醇稀释浓缩液至含酒精浓度为35-50％，将稀释液用0.22μm的无菌微孔滤膜过滤，装入喷壶内即得。

6.一种如权利要求1-5任一所述的中药发酵物的应用，所述的中药发酵物在制备治疗真菌感染的皮肤或蚊虫叮咬所致的皮肤病药物上的应用。

7.根据权利要求6所述的的中药发酵物的应用，其特征在于，所述的真菌感染皮肤病是脚癣、体癣、手癣、股癣、头皮屑，所述的蚊虫叮咬皮肤病是蚊虫叮咬所致的红肿瘙痒。