CN115300576B

CN115300576B - 一种治疗脚气脚癣的复方中药纳米凝胶及其制备方法

Info

Publication number: CN115300576B
Application number: CN202210038190.0A
Authority: CN
Inventors: 何彬生; 周吉; 周文虎; 唐彤; 邴萍萍; 张涵泳; 许梦畅
Original assignee: Changsha Medical University
Current assignee: Changsha Medical University
Priority date: 2022-01-13
Filing date: 2022-01-13
Publication date: 2023-05-26
Anticipated expiration: 2042-01-13
Also published as: CN115300576A

Abstract

本发明提供一种治疗脚气脚癣的复方中药纳米凝胶及其制备方法，该复方中药纳米凝胶由纳米级复方中药在凝胶基质中分散得到，所述复方中药包括马醉木1‑10份、马齿苋1‑15份、蒲公英根5‑15份、白花蛇舌草1‑10份、麦冬1‑10份、甘草1‑10份。其制备方法通过将复方中药进行粉碎、醇提，再进行超声分散得到纳米级中药复方试剂，将纳米级中药复方试剂在凝胶基质中分散制得复方中药纳米凝胶。该复方中药纳米凝胶基于马醉木为君药，通过中药的配伍，既能利用马醉木对于真菌的良好抑制特性，通过各组分的协同配伍提升治疗效果，又能提升马醉木的生物安全性；同时本发明将该复方中药分散形成纳米凝胶，具备更好的生物相溶性和穿透性，在皮肤真菌抑制中具有广泛应用前景。

Description

一种治疗脚气脚癣的复方中药纳米凝胶及其制备方法

技术领域

本发明涉及中医药和纳米生物医药领域，具体涉及一种治疗脚气脚癣的复方中药纳米凝胶及其制备方法。

背景技术

目前，治疗脚气脚癣的西医的软膏等剂型，存在着一定的副作用，有的治疗不彻底，治愈率受到一定的影响，有的还存在易复发，反复的问题,甚至长期用药可能产生耐药性。而中医药治疗皮肤病的药物，工艺流程和治疗效果差异较大，有的只能治表，达不到治本和治愈的目的。很多传统的治疗脚气脚癣的中药的膏剂，使用时间长，见效慢，而治疗脚气脚癣的中药的液剂，使用起来不方便。

中药治疗疾病具有多方位、多靶点、不易产生耐药性等优势，已成为新药重要的研究方向。有毒中药的药性强烈，有些中药的毒性成分同时也是其生理活性成分，例如乌头碱、吴茱萸碱、蝎毒多肽等，其治疗活性作用与其毒性存在一定内在联系与转化关系，使用不当可造成严重的中毒反应，但若炮制得当、应用合理、剂量得当，亦可发挥良好的疾病治疗效果。例如，马醉木全株有毒，目前很少有报道将其用于人体内服或者外用，现在马醉木的主要的应用是榨取叶汁用作农作物的杀虫药，我们通过研究发现马醉木不仅具有杀虫作用，在真菌的生长抑制等方面也具有很高的生物活性，如何合理、安全地利用马醉木作为人体皮肤真菌的抑制原材料是一大难点。

发明内容

为解决上述技术问题，本发明提出了一种治疗脚气脚癣的复方中药纳米凝胶及其制备方法，其目的是构建一种基于马醉木为君药，通过其他中药的配伍，一方面减少马醉木的毒性，另一道方面通过协同其他中药来加强马醉木的治疗效果，配伍的中药原料通过一定的方式直接加工成纳米粒子，使用高分子化合材料制备纳米凝胶，提高药物的吸收效率。该复方中药纳米凝胶主要用于治疗由真菌引起的脚气脚癣皮肤病，具有良好的抑菌效果，生物安全性高、见效快、治愈率高。

为了实现上述目的，本发明首先提供了一种治疗脚气脚癣的复方中药纳米凝胶，所述复方中药纳米凝胶由纳米级复方中药在凝胶基质中分散得到，所述复方中药包括马醉木1-15份、马齿苋1-15份、蒲公英根5-10份、白花蛇舌草1-10份、麦冬1-10份、甘草1-10份。

作为优选，所述凝胶基质包括普朗尼克、甘油和聚乙二醇。

基于一个总的发明构思，本发明还提供了一种所述治疗脚气脚癣的复方中药纳米凝胶的制备方法，包括以下步骤：

S1、将马醉木、马齿苋、蒲公英、白花蛇舌草、麦冬、甘草混合加入粉碎机进行粉碎；

S2、将步骤S1粉碎后的中药混合物、60％的醇类和聚乙烯吡咯烷酮按质量比1:6～10：0.01混合，浸泡，然后加热回流提取2～4次，收集中药提取液；

S3、将步骤S2制得的中药提取液与水按重量比为1:1～5混合超声2～4次，室温搅拌过夜,然后离心分离，所得固体为纳米级复方中药；

S4、将普朗尼克F127与蒸馏水混合搅拌均匀，低温静置过夜，得普朗尼克F127母液；

S5、将步骤S3制得的纳米级复方中药、步骤S4制得的普朗尼克F127母液、甘油和聚乙二醇按重量比1:0.8～1:0.1～0.2:0.002～0.01混合，低温静置24～48h，即得复方中药纳米凝胶。

作为优选，所述步骤S2中浸泡时间为0.5～1h，所述回流提取时间为每次1～1.5h。

作为优选，所述步骤S2中醇类为乙醇。

作为优选，所述步骤S3中超声时间为每次0.5～1h，所述离心时间为0.5～1h。

作为优选，所述步骤S4中普朗尼克F127与蒸馏水的质量比为1:1.5～4。

作为优选，所述步骤S4和步骤S5中低温静置温度为0～6℃。

与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：

1.本发明提供了一种复方中药组分，基于马醉木为君药，通过其他中药的配伍，一方面能够充分发挥马醉木对于皮肤真菌的高效抑制能力，其余配伍的中药协同进一步提高这种真菌的抑制特性，对于真菌引起的脚气脚癣皮肤病，具有良好的抑菌效果；另一方面，本发明优选出合适的中药材配伍，通过各组分中药材的合理配合，能够降低了马醉木对于人体的生物毒性，提高了马醉木应用于人体的生物安全性，也正是基于此，马醉木才能够实现在人体中的应用。

2、本发明利用中药进行皮肤真菌抑制，中药具有天然药物的特性，疗效确切，没有化学品可能存在的的诸多不良影响和副作用，而且中药不易形成耐药性，能够长期有效抑制真菌。

3、本发明通过将复方中药进行醇提，得到中药配方的有效浓缩成分，并将有效浓缩成分通过超声分散制成纳米中药试剂，纳米中药试剂具有更好的皮肤穿透能力，能深入皮肤，对皮肤深处的真菌也能进行很好的抑制，从而全面清除皮肤内外潜在的真菌，提高脚气脚藓的治疗效果，也能显著改善脚气脚藓容易复发的问题。

4、本发明将纳米中药试剂分散在凝胶基质中，能够提高中药试剂的生物相容性，形成的复方中药纳米凝胶在皮肤表面具有良好的粘附性，进一步增强了中药有效成分对于皮肤真菌的抑制，也利于中药纳米粒对皮肤的进一步穿透进行深层次的真菌抑制；同时，将纳米中药分散在凝胶基质中，可以方便地将纳米中药制成喷雾剂，更方便使用。

附图说明

为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。

图1为实验例1纳米级复方中药纳米粒粒径分布图；

图2为实验例1纳米级复方中药纳米粒电镜图(×20000)。

具体实施方式

为使本发明要解决的技术问题、技术方案和优点更加清楚，下面将结合附图及具体实施例进行详细描述。

以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。在不背离本发明精神和实质的情况下，对本发明方法、步骤或条件所作的修改或替换，均属于本发明的范围。

若未特别指明，实施例中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段；若未特别指明，实施例中所用试剂均为市售。

实施例1

制备纳米级复方中药

将马醉木5份、马齿苋5份、蒲公英根7份、白花蛇舌草5份、麦冬5份、甘草2份混合加入粉碎机进行粉碎，将粉碎后的中药混合物、60％的乙醇和聚乙烯吡咯烷酮按质量比1:6-10：0.01混合，浸泡30min，然后加热回流提取3次，收集中药提取液；将中药提取液与水按重量比为1:2混合超声2次，每次1h，室温搅拌过夜，然后14000r/min离心45min，所得固体为纳米级复方中药。

实施例2

制备复方中药纳米凝胶

将马醉木5份、马齿苋5份、蒲公英根7份、白花蛇舌草5份、麦冬5份、甘草2份混合加入粉碎机进行粉碎，将粉碎后的中药混合物、60％的醇类和聚乙烯吡咯烷酮按质量比1:6-10：0.01混合，浸泡30min，然后加热回流提取3次，收集中药提取液；将中药提取液与水按重量比为1:2混合超声2次，室温搅拌过夜，然后14000r/min离心45min，所得固体为纳米级复方中药。

将普朗尼克F127与蒸馏水按质量比1:2混合搅拌均匀，0℃静置过夜，得普朗尼克F127母液；将上述制得的纳米级复方中药、普朗尼克F127母液、甘油和聚乙二醇按重量比1:1:0.2:0.01混合，0℃低温静置24h，即得复方中药纳米凝胶。

实验例1

纳米级复方中药粒子的表征

利用粒径分析仪对实施例1制得的纳米级复方中药粒子形成纳米粒的水合粒径进行监测。接着进行了透射电子显微镜(TEM)对纳米粒的检测，图像通过JEM-2100F场发射透射电子显微镜获得，工作电压为200kV，相应样品的元素面扫描是利用该透射电子显微镜附带的X射线能谱仪(EDS)获得。制样过程：样品超声均匀分散于乙醇溶液，滴于普通碳支持膜上，自然风干后观察。

实验结果如图1～图2所示，由图1可知粒径分析仪检测纳米级复方中药水合粒径进为153.7±24nm，符合实验用药；由图2可知透射电镜观察纳米级复方中药粒子为胶束形态，能够将药物包载在其中。

实验例2

皮肤急性毒性实验

将20只白兔随机分为4组，每组5只。实验条件为温度18～29℃，相对湿度40％～70％。先在白兔右侧背部脱毛50cm×50cm，24h后，A组在脱毛区涂抹复方中药溶液1mL(2g/kg)，B组在脱毛区涂抹复方中药2mL(4g/kg)，C组(对照组)在脱毛区涂抹基质1mL(2g/kg)，D组在脱毛区涂抹马醉木1mL(2g/kg)；涂药后均用胶布固定。涂药24h后用清水清除脱毛区的残留药物和基质，连续7d观察各组皮肤、毛发、口腔黏膜、饮食、眼睛及体质量变化，以及四肢活动和中枢神经系统有无中毒表现，有无死亡。如对完整皮肤无毒性反应，则在白兔左侧背部脱毛区造成擦伤，使皮肤出现密集出血点，并在擦伤部位涂药，其用药剂量及观察指标同上。

实验结果如表1所示：涂药后1周，4组白兔饮食、口腔黏膜、眼睛、皮肤毛发、四肢活动均无异常，无中枢神经系统异常表现及全身中毒反应，无死亡。A、B、C组兔子的体质量变化不大，D组兔子的体质量有所下降，但是与对照组相比，没有显著性差异，马醉木单独外用对于实验白兔具有轻微毒性。

表1 4组白兔用药前后体质量变化比较

注：A、B、C、D组用药前后比较，P均>0.05

实验例3

皮肤刺激实验

(1).急性皮肤刺激实验。

将15只豚鼠随机分为A组(小剂量组)、B组(大剂量组)、C组(空白对照组)各5只。实验前24h将豚鼠脊柱两侧去毛，不损伤表皮。实验时，分别在观察1组、观察2组左侧脱毛区涂抹复方中药溶液0.2mL(2g/kg)、0.4mL(4g/kg)，对照组涂基质0.2mL，涂药后均用胶布固定。涂药24h后用温水洗去脱毛区的残留药物和基质，于1、12、24、48h观察各组局部皮肤有无红斑、水肿、出血点等病变，并进行评分。评价方法:主要观察家兔的行为活动、皮肤、饮食、体质量和死亡情况。

实验结果如表2所示：用药1～48h，3组豚鼠局部皮肤均未出现红斑、水肿、出血点等病变，各时点皮肤急性刺激反应评分均为0分。

表2复方中药制剂外用对豚鼠皮肤的急性皮肤刺激实验(分)

(2).多次皮肤刺激实验

动物分组、受试皮肤准备及涂药方法同上，连续涂药7d，每天1次。停药后观察48h，记录各组局部皮肤红斑、水肿情况，观察涂药部位有无出血点、色素沉着、皮肤粗糙(或菲薄)等变化，并记录其发生时间及消退时间。评价方法:总分最高为8分。红斑:无红斑为0分；勉强可见为1分；明显可见为2分；中度到严重红斑为3分；紫色红斑并有焦痂形成为4分。水肿：无水肿为0分；勉强可见为1分；可见(边缘高出周围皮肤)为2分；皮肤水肿隆起约1mm，轮廓清楚为3分；皮肤水肿隆起＞1mm，轮廓不清楚为4分。

实验结果如表3所示：多次皮肤刺激结果停药后1～48h，3组豚鼠局部皮肤均未见幻斑、水肿、出血点、色素沉着、皮肤粗糙(或菲薄)等病变。各时点皮肤刺激反应评分均为0分。

表3复方中药制剂外用对豚鼠皮肤的多次皮肤刺激实验(分)

(3).破损皮肤刺激实验

动物分组、受试皮肤准备同上，在脱毛区造成局部擦伤，破损皮肤组豚鼠用消毒针头在脱毛区皮上划出“#”形擦痕，以轻度渗血为度，A～C组分别在脱毛区涂抹小剂量、大剂量复方中药溶液及基质各0.2mL，具体方法及结果观察同①。评价方法：根据皮肤刺激反应评分计算其平均分值，以判断皮肤刺激的强度：无刺激为0～0.49分；轻度刺激为0.50～2.99分；中度刺激为3.00～5.99；重度刺激为6.00～8.00分。

实验结果如表4所示：由表4可知在皮肤刺激实验中，破损皮肤各种不同剂量组与对照组组均未出现红斑及水肿，平均分值为零。说明复方中药溶液外用对豚鼠完整和破损皮肤的没有刺激性，安全性可靠。

表4复方中药溶液外用对豚鼠完整和破损皮肤刺激反应实验结果(分)

(4).皮肤过敏实验

动物分组豚鼠20只，雌雄各半，随机分为4组，即复方中药制剂小剂量组，复方中药制剂大剂量组，阳性对照组(1.0％2，4-二硝基氯代苯)和空白对照组(基质)，每组5只。取基质、1.0％2，4-二硝基氯代苯、复方中药制剂分别在空白对照组、阳性对照组及复方中药制剂组豚鼠左侧脱毛区涂抹，0.2mL/只，6h后用温水洗净药物。实验第7天和第14天，以同样方法各重复1次，共计3次。激发接触于末次给受试物致敏后14d，用同样方法分别将基质、1.0％2，4－二硝基氯代苯、复方中药制剂在动物背部右侧去毛区域，6h用温水洗净受试物，即刻观察。然后于激发接触给药24、48、72h后观察皮肤过敏反应情况。按相关文献评分并评价过敏强度。

实验结果如表5所示：由表5可知在皮肤过敏实验中，基质对照组和复方中药制剂组在处理后均未出现红斑及水肿,致敏率均为零；而阳性对照组激发给药6h后,有4只豚鼠在受试区有明显轻度红斑出现，无水肿，致敏率为40％；继续给药72h后6只豚鼠在受试区出现明显轻度红斑,4只存在重度红斑，反应平均值为3.4，致敏率为100％,表现出极度过敏性。

表5复方中药制剂外用对豚鼠皮肤的过敏反应实验结果(分)

实验例4

复方中药与单方中药对红色毛癣菌抑菌效果的影响

1、培基配制：沙保氏培养基按照说明书配制培基,高压灭菌稍冷却后乘热倒入平皿中冷却密封4℃保存。

2、实验菌株：红色毛癣菌标准菌株购于中国医学科学院皮肤病防治研究所菌种保藏中心。红色毛癣菌实验前要经过两次活化，然后接种到细菌培养皿中。

3、对美丽马醉木复方中药和单方中药进行分组，分成9组：对照组(生理盐水)、实验1组(实施例2制得的复方中药纳米凝胶)、实验2组(实施例1制得的纳米级复方中药)、马醉木组、马齿苋组、蒲公英根组、白花蛇舌草组、麦冬组、甘草组。

4、采用滤纸片扩散法检测7组中药配方对红色毛癣菌的抑菌效果。把新华1号定性滤纸用打孔器打成直径为6mm的圆形纸片，干热灭菌后将实验组浸泡对照组浸泡于不同配伍的溶液提取液中，对照组无菌生理盐水中，干燥后将其贴在涂好红色毛癣菌的固体平板上，并做好标记。

5、倒置于28℃生化培养箱培养7d后观察实验结果。

结果如表6所示：涂有红色毛癣菌的平板上贴上浸药滤纸片后，药物随着琼脂进行扩散，浓度逐渐降低，在药物的作用下，菌体在环内不能生长，呈现出一个围绕滤纸片的透明环，对照组、实验1组、实验2组、马醉木组、马齿苋组、蒲公英根组、白花蛇舌草组、麦冬组和甘草组的抑菌圈平均大小分别为：27.33、25.67、20.73、18.17、23.4、20.75、18.26和17.83毫米。可以看出实验1组和实验2组抑菌效果最好且他们之间没有显著性差异，他们比同浓度下的单一药物抑制率高，抑制作用强，说明本发明提供的纳米级复方中药和复方中药纳米凝胶比单方中药的治疗效果更好，可能是各成分之间有协同增效的作用。

表6复方中药与单方中药对红色毛癣菌抑菌效果的影响

实验例5

不同配比的复方中药对红色毛癣菌抑菌效果的影响

1、培基配制：沙保氏培养基(SDB)按照说明书配制培基,高压灭菌稍冷却后乘热倒入平皿中冷却密封4℃保存。

3、对马醉木、马齿苋、蒲公英根、白花蛇舌草、麦冬、甘草按照不同的重量份数进行配伍制得复方中药，分成5组：对照组(生理盐水)、实验1组(实施例1的中药配比制得)、实验2组(1:1:1:1:1:1)实验3组(3:2:1:1:1:1)、实验4组(4:3:2:1:1:1)，按照实施例1的制备流程制备出中药提取液。

4、采用滤纸片扩散法检测5组中药配方对红色毛癣菌的抑菌效果。把新华1号定性滤纸用打孔器打成直径为6mm的圆形纸片，干热灭菌后将实验组浸泡对照组浸泡于不同配伍的溶液提取液中，对照组无菌生理盐水中，干燥后将其贴在涂好红色毛癣菌的固体平板上，并做好标记。

5、倒置于28℃生化培养箱培养7d后观察实验结果。

结果表7所示：对照组、实验1组、实验2、实验3组和实验4组的抑菌圈平均大小分别为：0.00、27.73、21.6、20.17和23.26毫米从实验结果可以知道实验1组的抑菌效果最好，合适的各中药配伍比例能够使中药的疗效达到最好。

表7不同配比的复方中药对红色毛癣效果

实验例6

复方中药的组方成分对于药效的影响

2、实验菌株：红色毛癣菌标准菌株购于中国医学科学院皮肤病防治研究所菌种保藏中心。红色毛癣菌实验前要经过两次活化，然后接种到沙保氏培养基中，28℃生化培养箱培养。

3、对马醉木复方中药及缺一单方的复方中药进行分组，分成8组：对照组(生理盐水)、实验1组(实施例1制得的中药纳米制剂)、缺马醉木组、缺马齿苋组、缺蒲公英根组、缺白花蛇舌草组、缺麦冬组、缺甘草组。按照我们的制备流程制备出中药提取液。

5、倒置于28℃生化培养箱培养7d后观察实验结果。

结果如表8所示：对照组、实验1组、缺马醉木组、缺马齿苋组、缺蒲公英根组、缺白花蛇舌草组、缺麦冬组和缺甘草组抑菌圈平均大小分别为：0.00、26.43、11.93、19.33、16.86、23.6、22.3和22.78毫米。可以看出实验1组抑菌效果最好，说明本发明提供的中药组在疗效中都有重要的作用，缺少将影响药效的发挥。

表8复方中药的组方成分对于红色毛癣的药效效果影响

实验例7

抑制豚鼠皮肤真菌的感染作用

选择40只豚鼠双后足和背部左右两侧约3cm×3cm剃毛,用砂纸反复磨擦豚鼠去毛部位的皮肤,以皮肤有渗出液但不出血为准,用玻璃棒将制备的菌种混悬液涂擦在损伤皮肤上,每损伤部位接种1mL。室温保持30℃,10d后动物接种真菌处见皮肤出现红斑、红肿、皮疹、痂皮。将感染红色毛癣菌豚鼠随机分为4组,左右背部的皮肤分为2组，共计4组，每组10只，分别为实施例1制得的复方中药纳米制剂小剂量和大剂量，对照组(基质)，阳性对照组盐酸特比奈芬乳膏。每个损伤部位均匀涂布药液0.2mL,每日1次，共7d。对治疗前后皮肤感染症状进行评分,0分表示无皮肤损害,1分为点状红斑,2分为全范围红斑，3分为红肿，4分为超过范围的红斑、结痂。

造模10d后进行评分均为4分，造模成功，造模前后评分的差值。

实验结果如表9和表10所示：复方中药纳米制剂大剂量治疗豚鼠皮肤感染毛癣菌病7d，皮肤厚痂脱落，鳞屑减少，10d后皮肤炎症明显减轻，脓性分泌物消失，2周治愈。治疗第7天开始真菌直接镜检阳性率复方中药纳米制剂大剂量降低最明显。结果表明复方中药纳米制剂大剂量皮肤给药对豚鼠皮肤感染具有显著的治疗作用。

表9复方中药纳米制剂对豚鼠皮肤红色毛癣菌感染治疗作用

表10复方中药纳米制剂对豚鼠皮肤红色毛癣菌感染转阴率的影响

统计学方法采用SPSS16.0统计软件，计量资料以x±s表示，组间比较用t检验；计数资料用百分比表示，组间比较用χ2检验。P≤0.05为差异有统计学意义。

以上所述是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明所述原理的前提下，还可以作出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims

1.一种治疗脚气脚癣的复方中药纳米凝胶，其特征在于，所述复方中药纳米凝胶由纳米级复方中药在凝胶基质中分散得到，所述复方中药的中药原料为马醉木5份、马齿苋5份、蒲公英根7份、白花蛇舌草5份、麦冬5份、甘草2份；

所述的复方中药纳米凝胶的制备方法包括以下步骤：

S2、将步骤S1粉碎后的中药混合物、60％的醇类和聚乙烯吡咯烷酮按质量比1：6～10：0.01混合，浸泡，然后加热回流提取2～4次，收集中药提取液；

2.根据权利要求1所述的复方中药纳米凝胶，其特征在于，所述步骤S2中浸泡时间为0.5～1h，所述回流提取时间为每次1～1.5h。

3.根据权利要求1所述的复方中药纳米凝胶，其特征在于，所述步骤S2中醇类为乙醇。

4.根据权利要求1所述的复方中药纳米凝胶，其特征在于，所述步骤S3中超声时间为每次0.5～1h，所述离心时间为0.5～1h。

5.根据权利要求1所述的复方中药纳米凝胶，其特征在于，所述步骤S4中普朗尼克F127与蒸馏水的质量比为1:1.5～4。

6.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述步骤S4和步骤S5中低温静置温度为0～6℃。