CN106924279B - 蒺藜tts-12的应用、抑制须癣毛癣菌的中药凝胶剂及其制备方法 - Google Patents

蒺藜tts-12的应用、抑制须癣毛癣菌的中药凝胶剂及其制备方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了蒺藜TTS‑12的新应用、抑制须癣毛癣菌的中药凝胶剂及其制备方法。蒺藜TTS‑12具有抑制须癣毛癣菌的作用；本发明的以蒺藜TTS‑12作为单一主药的中药凝胶剂，其体外抗菌活性显著高于市面上联苯苄唑凝胶剂，体内豚鼠抗感染疗效与市面上盐酸特比萘芬乳膏相当，表现出良好的抗真菌感染作用；本发明的中药凝胶剂组分简单易得、成本低廉，涂布后舒适度好，易于清洗，更适合用于私密的感染部位，制备出的凝胶剂具备良好的体外释放效果并能达到良好的抗须癣毛癣菌的效果。

Description

蒺藜TTS-12的应用、抑制须癣毛癣菌的中药凝胶剂及其制备 方法
技术领域
本发明属于中药制剂领域，更具体地，涉及蒺藜TTS-12的新应用、抑制须癣毛癣菌的中药凝胶剂及其制备方法。
背景技术
须癣毛癣菌(Trichophyton mentagrophytes)，又称石膏样毛癣菌，是一种较常见及最易从人和动物分离出的皮肤癣菌之一，其不仅能引起体股癣、手足癣、甲癣、头癣等癣病，还能引起脓癣、脓肿和肉芽肿等深部感染。癣病极为顽固，常出现复发和再感染，现有药物难以达到根治的效果。
以体股癣为例，其治疗以西药为主，常用的西药抗菌药物有吡咯类、丙烯胺类等抗真菌药。体股癣临床用药以局部外用为主，市面上常见的外用制剂有硝酸益康唑乳膏、咪康唑乳膏、特比萘芬乳膏、酮康唑洗剂、水杨酸醇溶液等。随着西药抗真菌药物的广泛应用，真菌的耐药问题日益凸显，从中药中寻找高效低毒的抗菌成分成为解决耐药问题重要途径之一，而中药抗菌药物中常见复方制剂，单一成分的高效制剂少见。
目前，市面上抗真菌制剂多为乳膏，凝胶剂较为少见，凝胶剂具有良好的生物相容性、载药量大、对药物释放具有缓释作用、制备工艺简单且形状美观、易于涂布使用和局部给药后易吸收不污染衣物的特点。然而，抗真菌凝胶剂在制备的过程中存在许多困难，既要考虑保证凝胶剂的外观、稳定性达到标准，又要保证药物在凝胶这种基质中具有一个良好的释放效果。
蒺藜(Tribulus terrestris L)又名白蒺藜、屈人等，是一种中药材，入药能平肝明目，散风行血，已发现具有抗衰、强壮、降血糖、抑癌、保护心脑血管等作用。蒺藜TTS-12是从蒺藜全草中提取的螺甾烷型皂苷，已有研究发现，蒺藜TTS-12具有较强的抑制白念珠菌、新生隐球菌的作用，MIC值分别为1μg/mL和2μg/mL，然而，对同为真菌的申克氏孢子丝菌抑菌效果差，最低抑菌浓度均大于128μg/mL。因此，针对不同菌种的蒺藜TTS-12抑菌效果是不可预料的。
发明内容
本发明的目的在于提供蒺藜TTS-12的新应用、抑制须癣毛癣菌的中药凝胶剂及其制备方法。
本发明所采取的技术方案是：
蒺藜TTS-12在制备抑制须癣毛癣菌制剂中的应用。
一种抑制须癣毛癣菌的中药凝胶剂，由如下组分组成：蒺藜TTS-12、卡波姆940、甘油、 TTS-12潜溶剂、pH调节剂、防腐剂、水。
进一步的，一种抑制须癣毛癣菌的中药凝胶剂，按质量百分比计，由如下组分组成：蒺藜TTS-12 0.5％～1％、卡波姆940 0.5％～1.5％、甘油5％～15％、TTS-12潜溶剂29％～29.5％、 pH调节剂0.675％～2.025％、防腐剂0.02％～0.04％、余量为水。
作为上述配方的优选，按质量百分比计，由如下组分组成：蒺藜TTS-12 0.8％～1％、卡波姆940 0.5％～1％、甘油10％～15％、TTS-12潜溶剂29％～29.2％、pH调节剂0.675％～1.35％、防腐剂0.02％～0.04％、余量为水。
作为上述配方的优选，按质量百分比计，由如下组分组成：蒺藜TTS-12 1％、卡波姆940 0.5％、甘油15％、TTS-12潜溶剂29％、pH调节剂0.675％、防腐剂0.03％、余量为水。
作为上述配方的优选，按质量百分比计，由如下组分组成：蒺藜TTS-12 0.8％、卡波姆 940 0.5％、甘油10％、TTS-12潜溶剂29.2％、pH调节剂0.675％、防腐剂0.03％、余量为水。
进一步的，所述TTS-12潜溶剂由70％乙醇和丙二醇按质量比(2～4)：(6～8)组成。
进一步的，所述pH调节剂为三乙醇胺、氢氧化钠、氢氧化钾、碳酸氢钾中的至少一种。
进一步的，所述防腐剂为羟苯乙酯、苯甲酸钠中的至少一种。
一种抑制须癣毛癣菌的中药凝胶剂的制备方法，包括如下步骤：
1)按配方量将卡波姆940均匀撒于水中，放置10～15h，充分溶胀后，得卡波姆溶液，备用；
2)将蒺藜TTS-12过110～130目筛，按配方量取筛下物与TTS-12潜溶剂混合，置于200～ 400W超声功率下，超声10～20min，分散均匀后，得药物分散液，备用；
3)按配方量，依次将甘油、药物分散液加入卡波姆溶液中，搅拌均匀，加入pH调节剂，调节PH至6.5～7.5，加入防腐剂，补加水，搅拌均匀，即得中药凝胶剂；
其中，抑制须癣毛癣菌的中药凝胶剂的组成如上所述。
本发明的有益效果是：
1)本发明的中药凝胶剂以蒺藜TTS-12作为单一主药，蒺藜TTS-12具有抑制须癣毛癣菌的作用；蒺藜TTS-12制备的中药凝胶剂体外抗菌活性显著高于市面上联苯苄唑凝胶剂，体内豚鼠抗感染疗效与市面上盐酸特比萘芬乳膏相当，表现出良好的抗真菌感染作用。
2)本发明的中药凝胶剂组分简单易得、成本低廉，涂布后舒适度好，易于清洗，更适合用于私密的感染部位，制备出的中药凝胶剂具备良好的体外释放效果并能达到良好的抗须癣毛癣菌的效果。
附图说明
图1：实验例2的五组中药凝胶剂的体外累计释放率；
图2：实验例4给药后各组豚鼠体癣症状评分情况，图中，*表示与模型组相比有显著性差异，**表示与模型组相比有极显著性差异；空白组1d、4d、8d评分均为0。
具体实施方式
以下通过实施例和实验例对本发明作进一步解释。
本发明的抑制须癣毛癣菌的中药凝胶剂，其主药为蒺藜TTS-12，下述配方中蒺藜TTS-12 为原料药，由第二军医大学药学院天然药化教研室提供。
实施例1、中药凝胶剂1
一种抑制须癣毛癣菌的中药凝胶剂，按质量百分比计，由如下组分组成：蒺藜TTS-12 0.8％、卡波姆940 1.5％、甘油15％、TTS-12潜溶剂29.2％、三乙醇胺2.025％、羟苯乙酯0.03％、余量为蒸馏水；其中，TTS-12潜溶剂由70％乙醇和丙二醇按质量比3：7组成。
实施例2、中药凝胶剂2
一种抑制须癣毛癣菌的中药凝胶剂，按质量百分比计，由如下组分组成：蒺藜TTS-12 1％、卡波姆940 1.5％、甘油5％、TTS-12潜溶剂29％、三乙醇胺2.025％、羟苯乙酯0.03％、余量为蒸馏水；其中，TTS-12潜溶剂由70％乙醇和丙二醇按质量比3：7组成。
实施例3、中药凝胶剂3
一种抑制须癣毛癣菌的中药凝胶剂，按质量百分比计，由如下组分组成：蒺藜TTS-12 0.5％、卡波姆940 1％、甘油15％、TTS-12潜溶剂29.5％、三乙醇胺1.35％、羟苯乙酯0.03％、余量为蒸馏水；其中，TTS-12潜溶剂由70％乙醇和丙二醇按质量比3：7组成。
实施例4、中药凝胶剂4
一种抑制须癣毛癣菌的中药凝胶剂，按质量百分比计，由如下组分组成：蒺藜TTS-12 1％、卡波姆940 1％、甘油10％、TTS-12潜溶剂29％、三乙醇胺1.35％、羟苯乙酯0.03％、余量为蒸馏水；其中，TTS-12潜溶剂由70％乙醇和丙二醇按质量比3：7组成。
实施例5、中药凝胶剂5
一种抑制须癣毛癣菌的中药凝胶剂，按质量百分比计，由如下组分组成：蒺藜TTS-12 0.8％、卡波姆940 1％、甘油5％、TTS-12潜溶剂29.2％、三乙醇胺1.35％、羟苯乙酯0.03％、余量为蒸馏水；其中，TTS-12潜溶剂由70％乙醇和丙二醇按质量比3：7组成。
实施例6、中药凝胶剂6
一种抑制须癣毛癣菌的中药凝胶剂，按质量百分比计，由如下组分组成：蒺藜TTS-12 1％、卡波姆940 0.5％、甘油15％、TTS-12潜溶剂29％、三乙醇胺0.675％、羟苯乙酯0.03％、余量为蒸馏水；其中，TTS-12潜溶剂由70％乙醇和丙二醇按质量比3：7组成。
实施例7、中药凝胶剂7
一种抑制须癣毛癣菌的中药凝胶剂，按质量百分比计，由如下组分组成：蒺藜TTS-12 0.5％、卡波姆940 0.5％、甘油5％、TTS-12潜溶剂29.5％、三乙醇胺0.675％、羟苯乙酯0.03％、余量为蒸馏水；其中，TTS-12潜溶剂由70％乙醇和丙二醇按质量比3：7组成。
实施例8、中药凝胶剂8
一种抑制须癣毛癣菌的中药凝胶剂，按质量百分比计，由如下组分组成：蒺藜TTS-12 0.5％、卡波姆940 1.5％、甘油10％、TTS-12潜溶剂29.5％、三乙醇胺2.025％、羟苯乙酯0.03％、余量为蒸馏水；其中，TTS-12潜溶剂由70％乙醇和丙二醇按质量比3：7组成。
实施例9、中药凝胶剂9
一种抑制须癣毛癣菌的中药凝胶剂，按质量百分比计，由如下组分组成：蒺藜TTS-12 0.8％、卡波姆940 0.5％、甘油10％、TTS-12潜溶剂29.2％、三乙醇胺0.675％、羟苯乙酯0.03％、余量为蒸馏水；其中，TTS-12潜溶剂由70％乙醇和丙二醇按质量比3：7组成。
实施例10、一种抑制须癣毛癣菌的中药凝胶剂的制备方法
实施例1～9所述组分的中药凝胶剂的制备方法，包括以下步骤：
1)按配方量将卡波姆940均匀撒于的蒸馏水中，放置12h，充分溶胀后，得卡波姆溶液，备用；
2)将蒺藜TTS-12过120目筛，按配方量取筛下物与TTS-12潜溶剂混合，置于300W超声功率下，超声15min，分散均匀后，得药物分散液，备用；
3)按配方量，依次将甘油、药物分散液加入卡波姆溶液中，搅拌均匀，加入三乙醇胺，调节PH至7.0，加入羟苯乙酯，补加蒸馏水，搅拌均匀，即得中药凝胶剂。
实验例1、中药凝胶剂外观及稳定性评价
对实施例1～9的9组中药凝胶剂进行外观及稳定性评分，评价指标、方法如下：
1)观察凝胶的外观、颜色、透明状况、涂布性能；
2)耐热、耐寒：取10g中药凝胶剂分别置于60℃干燥箱6h，-20℃冰箱24h，观察凝胶有无分层现象，外观颜色有无变化，同时考察涂布性能；
3)离心：取10g中药凝胶剂，4000r/min离心，每离心20min观察一次分层情况，共离心3 次。
表1、评分标准表
Figure BDA0001236063760000051
按评分标准表(如表1所示)对9组中药凝胶剂进行综合打分。
表2、9组中药凝胶剂综合评分
Figure BDA0001236063760000052
结果如表2所示，实施例1、2、5、8的配方制备的中药凝胶剂综合评分≤3分，属于不合格凝胶，优选出实施例3、4、6、7、9五组中药凝胶剂。
实验例2、中药凝胶剂释放效果评价
针对实验例1优选的五组中药凝胶剂，通过体外释放度测定作进一步优选，体外释放度测定方法如下：采用改进的Franz扩散池(体积8mL/扩散池扩散面积3.14cm2)进行实验，将玻璃纸固定于接收池和给药池之间，释放面积为3.14cm2。将每组中药凝胶剂各2.0g分别均匀涂布于给药池一侧。在接受池内加入接受液70％乙醇，置于透皮扩散仪中37℃定速搅拌，分别于0、2、4、6、10h取接收液1mL，同时向接受池中加入等量同温的70％乙醇；将所取接收液采用HPLC-ELSD法测定其药物质量浓度。
结果如图1所示，五组中药凝胶剂均有较良好的体外累计释放率，其中各实施例凝胶剂释放率由高到低排序为：6＞4＞3＞7＞9。
实验例3、中药凝胶剂体外抗菌性评价
针对实验例1优选的五组中药凝胶剂，通过体外抗菌性评价作进一步优选，以琼脂扩散法测定实施例3、4、6、7、9的中药凝胶剂的抑菌圈直径，并与市面上常见的抗真菌制剂联苯苄唑凝胶进行比较，具体方法如下：
1)菌悬液的制备：将须癣毛癣菌培养于PDA培养基平板中，于28℃培养10d后，加入0.85％氯化钠溶液，用比浊仪调整菌液至0.5个麦氏浓度，备用；
2)凝胶剂的制备：以实施例3、4、6、7、9的中药凝胶剂为各试验组，并按各处方比例，去掉主药蒺藜TTS-12制备各空白凝胶，作为各组的空白对照组，联苯苄唑凝胶作为阳性对照组；
3)培养基平板的制备：在PDA培养基平板打出6mm的小孔，将孔内的琼脂挑去，以无菌棉签蘸取菌悬液后，将菌悬液均匀涂布于PDA培养基平板表面后，在孔内加入中药凝胶剂，使中药凝胶剂充分填满小孔，避免溢出孔外，将培养基置于28℃培养，第7d测定抑菌圈直径，每组平行操作重复3次。
表3、5组中药凝胶剂抑菌圈直径
Figure BDA0001236063760000061
注：*表示各实施例的中药凝胶剂与联苯苄唑凝胶相比，有显著性差异，**表示有极显著性差异。
结果如表3所示，与联苯苄唑凝胶相比，6号中药凝胶剂抑菌圈直径有极显著性差异，9、 4号中药凝胶剂抑菌圈直径有显著性差异，优选出实施例4、6、9号中药凝胶剂。
实验例4、中药凝胶剂对豚鼠感染须癣毛癣菌模型的作用
针对实施例3、6、9中主药蒺藜TTS-12的剂量，分为低、中、高三个剂量组，其中，低剂量组为实施例3的中药凝胶剂，中剂量组为实施例9的中药凝胶剂，高剂量组为实施例6的中药凝胶剂，对上述三组凝胶作用于豚鼠感染须癣毛癣菌模型进行评价，具体方法如下：
1)豚鼠感染须癣毛癣菌模型制备：取豚鼠56只，每只豚鼠后背部用剃毛刀剃毛(2.5cm× 2.5cm)，然后轻涂适量脱毛膏，5min后用灭菌水清理干净背部的毛并擦干，用手术刀刮伤皮肤至有针状血出现为止，随机取8只(雌雄各半)作为空白组，其余48只豚鼠用制备好的菌悬液涂抹于创面上0.4ml/d，空白组用无菌生理盐水涂抹于创面上0.4ml/d，每天观察并且重复染菌至第5天。
2)分组及给药：成功造模后，将豚鼠随机分为模型组、阴性对照组、阳性对照组及低、中、高剂量组；48小时内开始给药，每只豚鼠背部给于0.4ml/d无菌生理盐水或中药凝胶剂；空白组、模型组给予无菌生理盐水，阴性对照组给予空白凝胶、阳性对照组给予盐酸特比萘芬乳膏、低、中、高剂量组分别给予3、9、6实施例的中药凝胶剂，连续给药7d；
3)豚鼠背部体癣症状评价：开始给药后每天观察并对背部病变程度进行豚鼠背部体癣症状评分(评分标准参考表4)；
4)豚鼠皮肤真菌培养情况：给药7d后，第8天将豚鼠处死，用无菌生理盐水清洗背部皮肤，取病灶部位皮肤，每只豚鼠病灶处各取3块5×5mm皮肤，放入70％乙醇中浸泡2-3min，杀死杂菌，经无菌生理盐水洗净后接种于PDA培养基平板中，在28℃恒温培养箱中培养 7d后，观察真菌的生长情况。
表4、豚鼠背部体癣症状评分标准
Figure BDA0001236063760000071
豚鼠背部体癣症状评分情况如图2所示，与空白对照组比较，第1、4、8d模型组体癣症状评分显著增加，说明造模成功；与模型组比较，造模第1、4、8d，阴性对照组体癣症状评分差异无统计学意义，说明阴性对照组对模型无明显疗效；给药第1d，除空白对照组外，各组豚鼠体癣症状评分差异无统计学意义，说明分组均匀；给药第4d，与模型组相比，中剂量组、高剂量组能极显著性降低体癣症状评分，阳性对照组显著降低体癣症状评分；给药第8d，与模型组相比，低剂量组能显著降低体癣症状评分，中剂量组、高剂量组和阳性对照组能极显著性降低体癣症状评分，这说明低、中、高剂量组均有不同程度的降低体癣症状评分，其中高剂量组与阳性对照组相比效果相当；说明中药凝胶剂6和中药凝胶剂9有良好的治疗感染须癣毛癣菌的效果。
表5、豚鼠皮肤真菌培养阴性率
Figure BDA0001236063760000081
注：*表示与模型组相比有显著性差异，**表示与模型组相比有极显著性差异。
豚鼠皮肤真菌培养阴性率如表5所示，与模型组相比，高剂量组、中剂量组、阳性对照组皮肤真菌培养阴性率有显著性差异，两者皮肤真菌培养阴性率相当；说明中药凝胶剂6和中药凝胶剂9提高豚鼠皮肤抗真菌感染能力，尤其是须癣毛癣菌。

Claims (10)

1.蒺藜TTS-12在制备抑制须癣毛癣菌制剂中的应用。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述抑制须癣毛癣菌制剂为抑制须癣毛癣菌的中药凝胶剂，由如下组分组成：蒺藜TTS-12、卡波姆940、甘油、TTS-12潜溶剂、pH调节剂、防腐剂、水。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述中药凝胶剂按质量百分比计，由如下组分组成：蒺藜TTS-12 0.5％～1％、卡波姆940 0.5％～1.5％、甘油5％～15％、TTS-12潜溶剂29％～29.5％、pH调节剂0.675％～2.025％、防腐剂0.02％～0.04％、余量为水。
4.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述中药凝胶剂按质量百分比计，由如下组分组成：蒺藜TTS-12 0.8％～1％、卡波姆940 0.5％～1％、甘油10％～15％、TTS-12潜溶剂29％～29.2％、pH调节剂0.675％～1.35％、防腐剂0.02％～0.04％、余量为水。
5.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述中药凝胶剂按质量百分比计，由如下组分组成：蒺藜TTS-12 1％、卡波姆940 0.5％、甘油15％、TTS-12潜溶剂29％、pH调节剂0.675％、防腐剂0.03％、余量为水。
6.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述中药凝胶剂按质量百分比计，由如下组分组成：蒺藜TTS-12 0.8％、卡波姆940 0.5％、甘油10％、TTS-12潜溶剂29.2％、pH调节剂0.675％、防腐剂0.03％、余量为水。
7.根据权利要求2～6任一项所述的应用，其特征在于：所述TTS-12潜溶剂由70％乙醇和丙二醇按质量比(2～4)：(6～8)组成。
8.根据权利要求2～6任一项所述的应用，其特征在于：所述pH调节剂为三乙醇胺、氢氧化钠、氢氧化钾、碳酸氢钾中的至少一种。
9.根据权利要求2～6任一项所述的应用，其特征在于：所述防腐剂为羟苯乙酯、苯甲酸钠中的至少一种。
10.根据权利要求2～6任一项所述的应用，其特征在于，所述中药凝胶剂的制备方法，包括如下步骤：
1)按配方量将卡波姆940均匀撒于水中，放置10～15h，充分溶胀后，得卡波姆溶液，备用；
2)将蒺藜TTS-12过110～130目筛，按配方量取筛下物与TTS-12潜溶剂混合，置于200～400W超声功率下，超声10～20min，分散均匀后，得药物分散液，备用；
3)按配方量，依次将甘油、药物分散液加入卡波姆溶液中，搅拌均匀，加入pH调节剂，调节PH至6.5～7.5，加入防腐剂，补加水，搅拌均匀，即得中药凝胶剂。
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